一种女士型牦牛乳益生菌粉的制作方法

本发明属于固体饮料技术领域，具体涉及一种女士型牦牛乳益生菌粉及其制备方法。

背景技术：

蔓越莓是一种主产于北美地区的红色浆果，富含维生素c、多酚类等多种抗氧化物质，有研究显示，适量进食蔓越莓有增强免疫、预防泌尿系统感染、养颜美容、改善便秘、帮助排出体内毒素及多余脂肪的效果。此外，蔓越莓含有特殊化合物-浓缩单宁酸，除上述作用外，还有助于抑制幽门螺旋杆菌附着于肠胃内，对胃溃疡、胃癌发生有预防作用。

低聚果糖能明显改善肠道内微生物种群比例，它是肠内双歧杆菌的活化增殖因子，可减少和抑制肠内腐败物质的产生，抑制有害细菌的生长，调节肠道内平衡；促进微量元素铁、钙的吸收与利用，防止骨质疏松症；减少肝脏毒素，能在肠中生成抗癌的有机酸，有显著的防癌功能；此外，低聚果糖口味纯正，具有类似脂肪的香味和滑爽口感且低热能值，不会引起肥胖。

低聚木糖对病原菌有较强的吸附力，防止致病菌在肠道中集群，从而达到预防腹泻的目的。双歧杆菌利用低聚木糖，可产生大量的短链脂肪酸，刺激肠道蠕动，防止便秘发生，减少有毒代谢产物形成。此外，低聚木糖还可提高女性血清中多密度脂蛋白胆固醇占总胆固醇的比率，降低血压，增强机体免疫力。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种女士型牦牛乳益生菌粉及其制备方法，针对女性朋友特殊生理需求，赋予产品调节肠道菌群、增强免疫力和美容养颜等作用的同时，满足现代女性对食品感官的追求，也是女性朋友的营养佳品。

本发明所采用的技术方案是：

一种女士型牦牛乳益生菌粉，按下述质量百分比的原料制成：低聚果糖28~33％、低聚木糖25~30％、蔓越莓果粉18~22％、脱脂牦牛乳粉12~15%、复合益生菌7~10%；所述复合益生菌为：乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌yak008，其复配质量比例依次为2:1:1:1；乳双歧杆菌yak001，bifidobacteriumlactis，为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20001；副干酪乳杆菌yak013，lactobacillusparacasei，为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20005；植物乳杆菌yak006为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20003，鼠李糖乳杆菌yak008，lactobacillusrhamnosus，为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20004。

一种女士型牦牛乳益生菌粉的制备方法，包括以下步骤：

（1）脱包杀菌：除益生菌外，其余配料脱外包后，通过杀菌隧道进行杀菌处理；

（2）称量：按质量配比进行称量，原辅料水分活度控制在0.2以下；

（3）预混：将复合益生菌与脱脂牦牛乳粉投料于气动混合机中进行预混，混合压力0-3mpa，脉冲次数15-30次/分钟，混合时间120-600s；

（4）混合：将低聚果糖、低聚木糖、蔓越莓果粉和预混料全部投入气动干混机中进行混合，混合压力0-5mpa，脉冲次数15-30次/分钟，混合时间120-900s；

（5）包装：将混合好的牦牛乳益生菌粉按照3±0.15g/袋进行铝箔复合膜（pet/铝/聚乙烯复合膜）包装，残氧量＜5%，真空度-0.01-0mpa；

（6）检测：对产品进行质量检测，其含水量≤3.0%、有益菌活菌数≥250亿cfu/袋，无致病菌检出。

（7）入库：对检测合格的产品入库，其库房温湿度要求：温度≤25℃、相对湿度rh≤60%。

本发明的有益效果如下：

配方中添加的复合益生菌分离自甘南牦牛，其活菌数达到1000亿cfu/g，通过干混工艺制得的产品活菌数超过250亿cfu/袋，每袋（3g/袋）；添加的蔓越莓果粉由真空冷冻干燥工艺获得，其添加量≥18%，能提供维生素c、类黄酮等功能性成分，蔓越莓果粉与益生菌、益生元复配，协同作用，对帮助女性建立胃肠道微环境平衡，促进肠道内有益菌生长，抑制有害菌生长，防治女性泌尿系统感染，改善便秘，帮助排出体内毒素及多余脂肪具有良好作用，是女性朋友食用的天然佳品。且本发明产品低脂（≤3%）、高膳食纤维（≥6%），完全满足女性减肥需求。

具体实施方式：

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1：一种女士型牦牛乳益生菌粉，按质量百分比计包括：

低聚果糖33％、低聚木糖25％、蔓越莓果粉20%、脱脂牦牛乳粉15%、复合益生菌7%，所述复合益生菌为：乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌yak008，其复配质量比例依次为2:1:1:1。

实施例2：一种女士型牦牛乳益生菌粉，按质量百分比计包括：

低聚果糖30％、低聚木糖28％、蔓越莓果粉18%、脱脂牦牛乳粉14%、复合益生菌10%，所述复合益生菌为：乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌yak008，其复配质量比例依次为2:1:1:1。

实施例3：一种女士型牦牛乳益生菌粉，按质量百分比计包括：

低聚果糖28％、低聚木糖30％、蔓越莓果粉22%、脱脂牦牛乳粉12%、复合益生菌8%，所述复合益生菌为：乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌yak008，其复配质量比例依次为2:1:1:1。

实施例1-3中所述的乳双歧杆菌yak001，bifidobacteriumlactis，为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20001；副干酪乳杆菌yak013，lactobacillusparacasei，为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20005；植物乳杆菌yak006为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20003，鼠李糖乳杆菌yak008，lactobacillusrhamnosus，为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种，保藏号cgmccno.20004。

实施例1-3中所述蔓越莓果粉为冻干粉、产品活菌数≥250亿cfu/袋。

实施例1-3所述的一种女士型牦牛乳益生菌粉的制备工艺，在室内温度≤25℃、相对湿度rh≤40%的10万级洁净车间进行，包括以下步骤：

（1）脱包杀菌：除益生菌外，其余配料脱外包后，通过杀菌隧道进行杀菌处理；

（2）称量：按质量配比进行称量，原辅料水分活度控制在0.2以下；

（3）预混：将复合益生菌与脱脂牦牛乳粉投料于气动混合机中进行预混，混合压力0-3mpa，脉冲次数15-30次/分钟，混合时间120-600s；

（4）混合：将低聚果糖、低聚木糖、蔓越莓果粉和预混料全部投入气动干混机中进行混合，混合压力0-5mpa，脉冲次数15-30次/分钟，混合时间120-900s；

（5）包装：将混合好的牦牛乳益生菌粉按照3±0.15g/袋进行铝箔复合膜（pet/铝/聚乙烯复合膜）包装，残氧量＜5%，真空度-0.01-0mpa；

（6）检测：对产品进行质量检测，其含水量≤3.0%、有益菌活菌数≥250亿cfu/袋，无致病菌检出。

（7）入库：对检测合格的产品入库，其库房温湿度要求：温度≤25℃、相对湿度rh≤60%。。

本发明产品主要质量指标见表1：

表1产品质量指标

抑菌试验研究：

以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为指示菌，将指示菌的甘油菌分别接种在营养肉汤培养基中，过夜培养，传至二代后使用，用灭菌蒸馏水将菌液稀释至10⁵cfu/ml。

将乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌yak008的甘油菌接种在mrs培养基，厌氧培养24h，连续传至二到三代，用无菌生理盐水将活菌数调至10¹⁰cfu/ml，4000r/min离心取其上清液为抑菌试验发酵液，放于4℃冰箱备用。

取100μl指示菌悬浊液三组分别加入到检测平板上，用涂布法将菌液均匀涂抹于平板，15-20分钟后，用灭菌镊子将牛津杯放入培养基轻轻按压，分别在每杯中滴入150μl发酵后上清液（乳双歧杆菌yak001、鼠李糖乳杆菌yak008和2:1:1:1比例复合菌）后放入4℃冰箱，经24h扩散后去除培养基于37℃恒温培养24h。重复实验三次。培养完毕后测试抑菌环直径，根据数值大小判断抑菌能力。

表2抑菌环直径大小比对

由表2可以看出，乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌yak008复合益生菌的抑菌环直径较其他单一菌的大，说明复合益生菌的抑菌能力强于单一菌株。

应用效果评价：

受试对象：选具有便秘、排便不规律，面部长痘、气色差，不思饮食，或有阴道炎的女性20人，每日服用本发明益生菌粉一次，每次2袋（37℃以下温水冲服），坚持服用一个月，期间饮食规律，正常作息，禁用任何药物，考察该益生菌粉对女性便秘、长痘，食欲差以及阴道炎症的作用。

表3产品用户效果评价

通过上表3可知，本发明效果显著，对改善便秘、维持肠道健康，建立胃肠道微生态平衡具有很好地效果，此外，结合表3结果可以看出，该益生菌粉对改善食欲、辅助女性阴道炎治疗具有一定作用，适合女性需要。

上述实施例1-3中复合益生菌配比研究：

乳双歧杆菌yak001分离自牦牛消化道，又称为动物双岐杆菌，为革兰氏阳性、兼性厌氧乳杆菌属，其生长温度为38-40℃，起始生长ph值为6.5-7.0，在糖类代谢过程中产生醋酸及乳酸等酸性代谢产物，也会产生少量甲酸和琥珀酸，乳双歧杆菌通过胃肠道可以存活，能够改善肠道功能，防止腹泻，并能减少抗生素治疗的副作用，同时降低急性呼吸道感染的发病率；

副干酪乳杆菌yak013分离自牦牛肠道，为革兰氏阳性、兼性厌氧菌，生长温度为15-45℃，最适温度37℃，具有耐酸性，可耐至ph值2.5，并在十二指肠环境下一定浓度的胆汁中存活，对增强人体免疫力，维持肠道菌群平衡，促进消化具有积极作用，同时还有抑制肿瘤生长、增强体质、延缓衰老等功效。

植物乳杆菌yak006是乳酸菌的一种，分离自牦牛肠道，为革兰氏阳性、兼性厌氧菌，最适生长温度为30~35℃，在ph4.5-9.5中可生长，能利用果糖、葡萄糖、乳糖、木糖等产生酸性物质，植物乳杆菌具有一定的免疫调节、抑制致病菌、降低血清胆固醇含量、预防心血管疾病、维持肠道内菌群平衡、促进营养物质吸收、缓解乳糖不耐和抑制肿瘤细胞的形成等作用。

鼠李糖乳杆菌yak008属于乳杆菌属，分离自牦牛肠道，为革兰氏阳性、兼性厌氧菌，最适生长温度30-40℃，最适ph为5.5-6.2，初始生长ph为3.0-7.0，耐酸性强，不能利用乳糖，可以代谢单糖，其肠道黏着率高，定植能力强，具有促进细胞分裂，调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、排除毒素、预防龋齿、提高机体免疫力及抗癌等生理保健功能。

乳双歧杆菌yak001活菌数1500亿/g以上、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006、鼠李糖乳杆菌yak008活菌数1000亿/g以上，四种菌均属于乳杆菌属，其生长条件类似，可在同一生长环境中生长，因此，长期服用可改善女性胃肠道功能，排除毒素，抑制病原菌生长，提高机体免疫力。复合菌配比研究如下：

乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌008分别标记为001、013、006和008，用75%酒精棉花擦拭各菌种安瓿管上部，将安瓿管顶部烧热，用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管，分别将001、013、006和008接种于mrs培养基上，37℃厌氧培养48h。连续传代二至三代，用无菌生理盐水稀释至10¹⁰cfu/ml放于4℃冰箱备用。

取10个灭菌锥形瓶编号为0-9，依次放10ml灭菌的液体mrs培养基，分别接种活菌数为10¹⁰cfu/ml的001、013、006、008、001和013、001和006、001和008、006和013、006和008、013和008以终浓度1%接种于各锥形瓶中，于37℃厌氧培养24h，测od600下菌液吸光值。每个接种量做三次重复。

表4菌株间相互作用对菌株生长的影响

有表4可以看出，在同一环境下生长，乳双歧杆菌yak001od值最大，其次为副干酪乳杆菌yak013，植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌008od值接近，但菌株间复配后测得的od值较单一菌株大，相互之间没有产生拮抗作用，互不影响生长，其中乳双歧杆菌yak001与其他三种菌复配生长最好，植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌008复配生长效果也很显著。

将乳双歧杆菌yak001、副干酪乳杆菌yak013、植物乳杆菌yak006和鼠李糖乳杆菌008按照质量比2:1:1:1、2:2:1:1、2:3:1:1、3:2:1:1进行接种培养，研究低聚果糖、低聚木糖0.5%添加量下益生菌的生长情况。

表5益生菌配比研究

益生菌不同配比下，其配比2:1:1:1的生长效果最好，添加益生元后对益生菌的增殖具有显著影响，其配比2:1:1:1的增值效果也是最好的，由2.3×10⁸cfu/ml增殖到2.8×10⁸cfu/ml，尤其是低聚果糖较低聚木糖对益生菌的增殖更有效。

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