一种抗氧化和降糖茶叶及其制备方法和应用与流程
技术领域:
本发明属于茶叶技术领域,具体涉及一种茶叶,更具体的,涉及一种具有抗氧化和降糖活性的茶叶,其制备方法和应用。
技术背景:
茶叶为世界三大无酒精饮料之一。通常所说的茶多指绿茶,是由山茶科(theaceae)山茶属(camellia)茶组(camelliasectionthea)植物茶(小叶茶)(camelliasinensis)及其变种大叶茶(c.sinensisvar.assamica)的新鲜芽及嫩枝叶经过杀青、揉捻、干燥等步骤加工而成。茶的本质特征是含有丰富的表儿茶素(ec)、表没食子儿茶素(egc)、没食子儿茶素没食子酸酯(gcg)等多酚类成分及咖啡因和茶碱等化学成分,这些物质赋予茶叶特殊的苦、涩和回甘等的口感特征;同时,此类化合物还具有抗氧化、抗菌及提神醒脑等多方面的药理活性。
茶叶中含有大量的咖啡因,其对中枢神经系统有兴奋作用,但过量摄入咖啡因不仅影响睡眠,且对心血管系统和消化系统均有影响。因此,在低龄、老龄及大多数咖啡因耐受性较低的饮茶爱好者中,低咖啡因或无咖啡因茶叶及其茶饮品已成为此类消费者的饮茶新趋势。迄今,虽已开发成功脱咖啡因的制茶工艺,但工艺复杂、成本昂贵且破坏了茶叶的外形特征,失去传统饮茶的冲泡乐趣。
山茶属茶组植物包括12种,6变种,除对传统茶及其变种(大叶茶)有系统的研究报道及深入的开发利用外,其它茶组植物资源的开发利用仍较为匮乏,故对这些茶组植物资源开展系统的化学及生物活性研究不仅完善了茶组植物的化学物质基础,也能从中发现新的茶饮植物资源,开发出独具特色的茶叶新产品。
迄今,以厚轴茶为原料加工制成的低咖啡因含量且具有抗氧化和降糖特征的茶叶及其产品的制备方法和应用尚未见报道。
技术实现要素:
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本发明旨在提供一种茶叶,该茶叶咖啡因含量较低,仅为≤0.12%,同时提供其制备方法和应用。
为了实现本发明的上述目的,本发明提供了如下的技术方案:
一种茶叶,以厚轴茶camelliacrassicolumnachang为原料,经杀青、揉捻、干燥制成,咖啡因含量≤0.12%,不含嘌呤类生物碱,富含茶多酚成分,含有7个黄酮苷,1个二氢查耳酮苷,2个黄烷三醇单体和1个二聚体,1个水解单宁,3个苯丙素,2个木脂素,7个简单酚类成分,2个生物碱。
一种茶叶,以厚轴茶camelliacrassicolumnachang的新鲜芽及嫩枝叶为原料,按制茶的规范工序,采摘厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶,瞬时加热杀青,手工或机械揉捻,炒干,得到厚轴茶制作的厚轴绿茶,咖啡因含量≤0.12%,不含嘌呤类生物碱,富含茶多酚成分,含有7个黄酮苷,1个二氢查耳酮苷,2个黄烷三醇单体和1个二聚体,1个水解单宁,3个苯丙素,2个木脂素,7个简单酚类成分,2个生物碱。
茶叶提取物,其由下述方法制备而得:以厚轴茶camelliacrassicolumnachang的新鲜芽及嫩枝叶为原料,经杀青、揉捻、干燥制成,或采摘厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶,瞬时加热杀青,手工或机械揉捻,炒干,得到厚轴茶制作的厚轴晒青毛茶或厚轴绿茶,厚轴晒青毛茶或厚轴绿茶粉碎,精密称取3.0g,加入90ml-100ml纯净水,沸水浴浸提45min,冷却,离心,上清液减压浓缩、冷冻干燥,得厚轴晒青毛茶提取物或厚轴绿茶提取物。
所述的茶叶及其提取物的制备方法,以厚轴茶camelliacrassicolumnachang的新鲜芽及嫩枝叶为原料,经杀青、揉捻、干燥制成,或采摘厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶,瞬时加热杀青,手工或机械揉捻,炒干,得到厚轴茶制作的厚轴晒青毛茶或厚轴绿茶,厚轴晒青毛茶或厚轴绿茶粉碎,精密称取3.0g,加入90ml-100ml纯净水,沸水浴浸提45min,冷却,离心,上清液减压浓缩、冷冻干燥,得厚轴晒青毛茶提取物或厚轴绿茶提取物。
所述的茶叶及其提取物在制备抗氧化和降糖生物活性产品中的应用。
所述的茶叶及其提取物在制备降糖剂、抗氧化剂、茶饮料、食品添加剂、护肤品、护发品、功能性保健食品、药品中的应用。
所述的茶叶及其提取物用作为降糖剂。
所述的茶叶及其提取物用作为抗氧化剂。
茶饮料,含有所述的茶叶及其提取物。
食品添加剂,含有所述的茶叶及其提取物。
护肤品或护发品,含有所述的茶叶及其提取物。
功能性保健食品,含有所述的茶叶及其提取物。
药品,含有所述的茶叶及其提取物。
本发明茶叶的制作方法具体为:采摘厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶,按制茶的常规工序,经过杀青、揉捻、干燥即可得到由茶树新资源厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶制作的茶叶。厚轴茶芽及嫩枝叶可以加工制作绿茶,也可以制成普洱茶、红茶、花茶等多种茶类。还可作为各种茶饮料的原料,例如:罐装茶饮料、瓶装茶饮料、袋泡茶、速溶茶等。上述技术方案中提供的原料,为山茶科茶组植物厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶。该植物分布于中国云南省东南部地区红河、元阳、金平、屏边、马关、麻栗坡、西畴、广南等县海拔1300-3300米的常绿阔叶林中。本发明使用的该植物原料可以是野生的,也可以是栽培的。
本发明的茶叶可用作为各种茶饮料和功能保健食品的原料;亦可作为食品添加剂用于食品工业;亦可作为特殊用途化妆品的原料用于各种护肤和护发的个人护理用品;亦可作为天然原料用于开发新型药物。
附图说明:
图1为本发明茶叶样品中所分离到的化学成分结构图;
图2为本发明的厚轴茶制作的晒青毛茶的hplc图谱,图2中峰的编号与图1中对应编号的化合物一致。
具体实施方式:
下面结合附图,先用本发明的试验例来证明本发明产品的活性和效果:
试验例1
本发明茶叶的化学成分分离鉴定及其抗氧化和降糖活性评价实验。
采摘厚轴茶camelliacrassicolumna的新鲜芽及嫩枝叶,按制茶的常规工序,经过杀青、揉捻、干燥即得晒青毛茶或绿茶。
按上述技术方案制作的茶叶,经系统的化学研究,结果分离鉴定到26个化合物,包括7个黄酮苷,1个二氢查耳酮苷,2个黄烷三醇单体和1个二聚体,1个水解单宁,3个苯丙素,2个木脂素,7个简单酚类成分,2个生物碱(图1)。
厚轴茶的化学成分研究:厚轴茶1.25kg粉碎,用60%的丙酮水溶液于常温下冷浸提取4次(7天/次),过滤,滤液减压浓缩去除有机溶剂,剩余水溶液依次进行乙酸乙酯和正丁醇萃取,分别将乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分减压浓缩,进而进行柱层析分离纯化。其中,水部分以大孔树脂hp-20ss柱层析,用水-甲醇(1:0-0:1)洗脱得3个部分(w1、w2、w3),反复使用mci-gelchp20p,sephadexlh-20,toyopearlhw-40f和rp-18等柱层析,用甲醇-水(1:0-0:1)溶剂梯度洗脱,得化合物4、5、9、11。正丁醇部分上mci-gelchp20pcc,用甲醇-水(1:0-0:1)溶剂梯度洗脱得3个部分(b1、b2、b3),重复采用mci-gelchp20p,sephadexlh-20,rp-18和toyopearlhw-40f柱层析,用甲醇-水(1:0-0:1)溶剂梯度洗脱,得化合物12、21、25、26。乙酸乙酯部分上sephadexlh-20用甲醇-水(1:0-0:1)溶剂梯度洗脱得4个部分(e1、e2、e3、e4),重复采用mci-gelchp20p,sephadexlh-20,rp-18和toyopearlhw-40f柱层析,用甲醇-水(1:0-0:1)溶剂梯度洗脱并结合制备液相色谱仪分离纯化得到化合物1、2、3、6、7、8、10、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26。通过多种波谱学方法解析以及与文献报道数据对比,所分离到的26个化合物分别鉴定为:kaempferol-3-o-β-d-glucopyranosyl-(1-3)-[α-l-rhamnopyranosyl-(1-6)]-(2-o-e-p-coumaroyl)-β-d-glucopyranoside(1),myricetin-3-o-β-d-glucopyranoside(2),quercetin-3-o-β-d-glucopyranoside(3),kaempferol-3-o-β-d-glucopyranoside(4),rutin(5),kaempferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside(6),quercetin-3-o-α-l-rhamnopyranoside(7),trilobatin(8),(-)-epicatechin(ec,9),(-)-epigallocatechin(egc,10),bis-8,8'-epicatechinylmethane(11),1,3-di-o-galloyl-β-d-glucopyranose(12),(7r,8s)-guaiacylglycerol(13),(7s,8r)-guaiacylglycerol(14),caffeicacid(15),dihydrodehydro-diconiferyalcohol(16),isolariciresinol(17),pyrogallol(18),p-hydroxybenzoicacid(19),3,4-dihydroxybenzoicacid(20),isotachioside(21),[1,1'-biphenyl]-3,3',4,4'-tetrol(22),gallicacid(23),methylgallate(24),caffeine(25),theobromine(26),如图1所示。
厚轴茶化学成分的抗氧化活性评价:采用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(dpph)自由基清除模型进行评价。以抗坏血酸(维生素c)为阳性对照,乙醇为空白对照。步骤1,精密称取待测物约1mg,溶于1ml乙醇中,将配制的1mg/ml的待测液逐步2倍稀释,配成10个浓度梯度的待测物溶液(样品浓度范围在2-1000μg/ml之间)。步骤2,将100μl不同浓度的待测物溶液和100μl的dpph乙醇溶液(100μm)加入96孔板中,空白对照组为100μl乙醇+100μldpph乙醇溶液。室温下避光放置15min。步骤3,用酶标仪测定反应液在517nm波长下的吸光度a。每个待测物重复实验3次。步骤4,dpph自由基清除能力按照公式:抑制率%=(ablankcontrol-asample)/ablankcontrol×100进行计算,并以sc50值(清除半数dpph自由基所需的样品浓度)反映供试品抗氧化能力的强弱情况,sc50值通过线性回归分析计算,结果如表1所示。
表1.厚轴茶化合物抗氧化活性结果
厚轴茶化学成分的降糖活性评价:采用α-葡萄糖苷酶抑制活性模型进行评价。
步骤1,配制0.1mol/l的磷酸缓冲液(ph6.8),将待测样品溶解于dmso。
步骤2,反应混合液(200μl)包括待测样品(终浓度1-50μm),磷酸缓冲液(ph6.8,0.1m),4-nitrophenylα-d-glucopyranoside(pnpg,1mm),α-glucosidase酶溶液(终浓度0.025u/ml)依次顺序加入96孔酶标板,充分混匀,设置3孔重复。同时设置dmso溶剂为空白对照和quercetin(终浓度2-10μm)为阳性对照。
步骤3,反应液于37℃孵育50min后,用酶标仪测定在405nm处的吸光值a。
步骤4,α-葡萄糖苷酶抑制活性的抑制率按照以下公式计算:抑制率(%)=(1-asample/ablankcontrol)×100;ic50值按reed&muench法进行测算。结果如表2所示。
表2.厚轴茶化合物的α-糖苷酶抑制活性结果
na:抑制率低,未进行ic50测定。
试验例2
步骤1,待测样品的制备:试验1所得厚轴茶样品粉碎,粉精密称取1.50g,置于100ml容量瓶中,用70%甲醇水溶液浸提12小时,间隔超声2次(15min/次),溶液过φ=0.45m的微孔滤膜,待测。
hplc分析方法:采用waters2695液相色谱仪,waters2996二极管阵列检测器,
lc-ms检测方法:采用apiqstarpulsarlc/tof液质联用仪。检测条件:固定相为agilentzorbaxsb-c18(4.6×150mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水溶液梯度洗脱(0-45min,4%-40%乙腈),流速1ml/min,进样量5μl,柱温30℃,100to1500amu全波长扫描,点喷雾电压4kv,毛细管温度400℃;毛细管电压35v。
试验例3
本发明茶叶水提物的抗氧化及降糖活性检测试验。
取试验例1制作的茶叶200g,置于沸水中煮沸2h(按茶叶:水重量比为1:30),冷却,过滤,将滤液减压浓缩后冷冻干燥,得50g冻干粉。
厚轴茶水提物抗氧化活性评价:采用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(dpph)自由基清除模型进行评价。以乙醇为空白对照(blankcontrol)。
步骤1,将厚轴晒青毛茶提取物溶解于乙醇中配制成6mg/ml的待测液,取100μl的厚轴晒青毛茶提取物乙醇液和100μl的dpph的乙醇溶液(100μm)加入96孔板中,空白对照组为100μl乙醇+100μldpph的乙醇溶液。室温下避光放置15min。
步骤2,用酶标仪(emaxprecisionmicroplatereader)测定反应液在517nm波长下的吸光度a。每个待测物重复实验3次,取平均值。
步骤3,dpph自由基清除能力按照公式:抑制率%=(ablankcontrol-asample)/ablankcontrol×100进行计算,结果得出厚轴晒青毛茶的dpph自由基清除率为62.3%。
降糖活性评价:采用α-葡萄糖苷酶抑制活性模型进行评价。步骤1,配制0.1mol/l的磷酸缓冲液(pbs,ph6.8),将待测厚轴晒青毛茶提取物溶解于dmso中,使其浓度为6mg/ml。步骤2,取96孔板,每孔加入10μl0.1u/ml的酶液(背景对照组加入等量的pbs),然后加入50μl的pbs溶液,再加入5μl浓度为6mg/ml的厚轴晒青毛茶提取物的dmso溶液(空白对照组加等量的dmso),恒温孵育15min。加入50μl的4-nitrophenylα-d-glucopyranoside(pnpg,1mm)溶液,于37℃恒温孵育反应30min。加入50μl浓度为1m的na2co3溶液终止反应,于405nm波长下测吸光值。计算抑制率i,i=[a0-(a1-a2)]/a0×100%,式中:a0为空白组吸光度值;a1为样品组吸光度值;a2为背景组吸光度值。结果显示厚轴晒青毛茶水提物的α-葡萄糖苷酶抑制率为43.2%。
试验例4
用厚轴茶的新鲜叶片制作茶叶,其制备步骤及试验如下。
采摘厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶,瞬时加热杀青,手工或机械揉捻,晒干、或烘干、或炒干,即得到厚轴茶制作的厚轴绿茶。
(1)用厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶制作的晒青毛茶,按常规渥堆工艺,可制作为厚轴熟茶。
(2)厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶按常规加工工艺,经萎凋、揉捻、发酵、干燥等工序,即可制作为厚轴红茶。
(3)用厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶制作的茶叶,经再加工工艺,可制作为袋泡茶、速溶茶等茶产品。
(4)用厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶制作的茶叶,可作为各种茶饮料和功能保健食品的原料;亦可作为食品添加剂用于食品工业;亦可作为特殊用途化妆品的原料用于各种护肤和护发等个人护理用品。亦可作为天然原料用于开发新型药物。
与现有技术相比,本发明具有下述优点:
(1)本发明提供的茶叶是以野生或人工栽培的厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶为原料,经杀青、揉捻、干燥等加工工艺制成。可以是绿茶,也可以加工为普洱茶、红茶、花茶等多种茶类。以厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶制成的茶叶,可作为优质茶饮料、功能保健食品、特殊用途化妆品、以及天然药物的原料,也可作为食品添加剂用于食品加工工业中,用途广泛。
(2)以厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶制作茶叶,制备方法简单,成本低廉,适合工业化生产,一般的茶叶加工厂均可采用,具有很高的实用性。
(3)以厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶制成的茶叶,以咖啡含量低(≤0.12)为特色。其茶多酚组成和含量与由通常的茶树(大叶茶和小叶茶)制成的茶叶相似,并具有显著的抗氧化和降糖作用。因此,本发明提供的茶树原料及由其制备的各种产品,具有很大的应用价值。
下面以本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容,但本发明的内容并不局限于此。
实施例1:
以厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶为原料制备晒青毛茶。
(1)按制茶的规范工序,采摘厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶,瞬时加热杀青,手工或机械揉捻,晒干,即得到厚轴茶制作的厚轴晒青毛茶。
(2)采用高效液相色谱法(hplc)和lc-ms技术检测厚轴晒青毛茶化学成分及主要成分的含量。
hplc分析方法:采用waters2695液相色谱仪,waters2996二极管阵列检测器,
lc-ms检测方法:采用apiqstarpulsarlc/tof液质联用仪。检测条件:固定相为agilentzorbaxsb-c18(4.6×150mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水溶液梯度洗脱(0-45min,4%-40%乙腈),流速1ml/min,进样量5μl,柱温30℃,100to1500amu全波长扫描,点喷雾电压4kv,毛细管温度400℃;毛细管电压35v。
实验材料的制备:厚轴茶晒青毛茶样品粉碎,精密称取1.50g,置于100ml容量瓶中,用70%甲醇水溶液浸提12小时,间隔超声2次(15min/次),溶液过φ=0.45m的微孔滤膜,待测。
样品测定:进样量:10μl。
通过lc-ms分子量及碎片峰的分析结果显示,厚轴茶晒青毛茶中含有kaempferol-3-o-β-d-glucopyranosyl-(1-3)-[α-l-rhamnopyranosyl-(1-6)]-(2-o-e-p-coumaroyl)-β-d-glucopyranoside(1),myricetin-3-o-β-d-glucopyranoside(2),quercetin-3-o-β-d-glucopyranoside(3),kaempferol-3-o-β-d-glucopyranoside(4),rutin(5),kaempferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside(6),quercetin-3-o-α-l-rhamnopyranoside(7),trilobatin(8),(-)-epicatechin(ec,9),(-)-epigallocatechin(egc,10),bis-8,8'-epicatechinylmethane(11),1,3-di-o-galloyl-β-d-glucopyranose(12),(7r,8s)-guaiacylglycerol(13),(7s,8r)-guaiacylglycerol(14),caffeicacid(15),dihydrodehydro-diconiferyalcohol(16),isolariciresinol(17),pyrogallol(18),p-hydroxybenzoicacid(19),3,4-dihydroxybenzoicacid(20),isotachioside(21)等化合物,没有检测到咖啡因及其它嘌呤类生物碱。其中ec和egc的含量分别为0.45%和0.39%。
(3)厚轴晒青毛茶的抗氧化及降糖活性评价。
厚轴晒青毛茶粉碎,精密称取3.0g,加入90ml纯净水,沸水浴浸提45min,冷却,离心,上清液减压浓缩、冷冻干燥,得厚轴晒青毛茶提取物。
抗氧化活性评价:采用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(dpph)自由基清除模型进行评价,以乙醇为空白对照(blankcontrol)。
步骤1,将厚轴晒青毛茶提取物溶解于乙醇中配制成6mg/ml的待测液,取100μl的厚轴晒青毛茶提取物乙醇液和100μl的dpph的乙醇溶液(100μm)加入96孔板中,空白对照组为100μl乙醇+100μldpph的乙醇溶液。室温下避光放置15min。
步骤2,用酶标仪(emaxprecisionmicroplatereader)测定反应液在517nm波长下的吸光度a。每个待测物重复实验3次,取平均值。
步骤3,dpph自由基清除能力按照公式:抑制率%=(ablankcontrol-asample)/ablankcontrol×100进行计算,结果得出厚轴晒青毛茶的dpph自由基清除率为61.7%。
降糖活性评价:采用α-葡萄糖苷酶抑制活性模型进行评价。步骤1,配制0.1mol/l的磷酸缓冲液(pbs,ph6.8),将待测厚轴晒青毛茶提取物溶解于dmso中,使其浓度为6mg/ml。步骤2,取96孔板,每孔加入10μl0.1u/ml的酶液(背景对照组加入等量的pbs),然后加入50μl的pbs溶液,再加入5μl浓度为6mg/ml的厚轴晒青毛茶提取物的dmso溶液(空白对照组加等量的dmso),恒温孵育15min。加入50μl的4-nitrophenylα-d-glucopyranoside(pnpg,1mm)溶液,于37℃恒温孵育反应30min。加入50μl浓度为1m的na2co3溶液终止反应,于405nm波长下测吸光值。计算抑制率i,i=[a0-(a1-a2)]/a0×100%,式中:a0为空白组吸光度值;a1为样品组吸光度值;a2为背景组吸光度值。结果显示厚轴晒青毛茶水提物的α-葡萄糖苷酶抑制率为43.2%,。
实施例2
以厚轴茶的新鲜芽及嫩枝叶为原料制备厚轴绿茶。
(1)按制茶的规范工序,采摘厚轴茶新鲜芽及嫩枝叶,瞬时加热杀青,手工或机械揉捻,炒干,即得到厚轴茶制作的厚轴绿茶。
(2)采用高效液相色谱法(hplc)和lc-ms技术检测茶叶化学成分及主要成分的含量。
hplc分析方法:采用waters2695液相色谱仪,waters2996二极管阵列检测器,
lc-ms检测方法:采用apiqstarpulsarlc/tof液质联用仪。检测条件:固定相为agilentzorbaxsb-c18(4.6×150mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水溶液梯度洗脱(0-45min,4%-40%乙腈),流速1ml/min,进样量5μl,柱温30℃,100to1500amu全波长扫描,点喷雾电压4kv,毛细管温度400℃;毛细管电压35v。
实验材料的制备:厚轴茶晒青毛茶样品粉碎,精密称取1.50g,置于100ml容量瓶中,用70%甲醇水溶液浸提12小时,间隔超声2次(15min/次),溶液过φ=0.45m的微孔滤膜,待测。
样品测定:进样量:10μl。
通过lc-ms分子量及碎片峰的分析结果显示,厚轴茶绿茶中含有kaempferol-3-o-β-d-glucopyranosyl-(1-3)-[α-l-rhamnopyranosyl-(1-6)]-(2-o-e-p-coumaroyl)-β-d-glucopyranoside(1),myricetin-3-o-β-d-glucopyranoside(2),quercetin-3-o-β-d-glucopyranoside(3),kaempferol-3-o-β-d-glucopyranoside(4),rutin(5),kaempferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside(6),quercetin-3-o-α-l-rhamnopyranoside(7),trilobatin(8),(-)-epicatechin(ec,9),(-)-epigallocatechin(egc,10),bis-8,8'-epicatechinylmethane(11),1,3-di-o-galloyl-β-d-glucopyranose(12),(7r,8s)-guaiacylglycerol(13),(7s,8r)-guaiacylglycerol(14),caffeicacid(15),dihydrodehydro-diconiferyalcohol(16),isolariciresinol(17),pyrogallol(18),p-hydroxybenzoicacid(19),3,4-dihydroxybenzoicacid(20),isotachioside(21)等化合物,没有检测到咖啡因及其它嘌呤类生物碱。其中ec和egc的含量分别为0.43%和0.41%。
(3)厚轴绿茶的抗氧化及降糖活性评价
厚轴晒青毛茶粉碎,精密称取3.0g,加入100ml纯净水,沸水浴浸提45min,冷却,离心,上清液减压浓缩、冷冻干燥,得厚轴绿茶提取物。
抗氧化活性评价:采用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(dpph)自由基清除活性模型进行评价。以乙醇为空白对照(blankcontrol)。
步骤1,将厚轴绿茶提取物溶解于乙醇中(提取物:乙醇为1:100),取100μl的厚轴绿茶提取物乙醇液和100μl的dpph的乙醇溶液(100μm)加入96孔板中,空白对照组为100μl乙醇+100μldpph的乙醇溶液。室温下避光放置15min。
步骤2,用酶标仪(emaxprecisionmicroplatereader)测定反应液在517nm波长下的吸光度a。每个待测物重复实验3次,取平均值。
步骤3,dpph自由基清除能力按照公式:抑制率%=(ablankcontrol-asample)/ablankcontrol×100进行计算,结果得出厚轴晒青毛茶的dpph自由基清除率为61.2%。
降糖活性评价:采用α-葡萄糖苷酶抑制活性模型进行评价。步骤1,配制0.1mol/l的磷酸缓冲液(pbs,ph6.8),将待测厚轴绿茶提取物溶解于dmso中,使其浓度为6mg/ml。步骤2,取96孔板,每孔加入10μl0.1u/ml的酶液(背景对照组加入等量的pbs),然后加入50μl的pbs溶液,再加入5μl浓度为6mg/ml的厚轴绿茶提取物的dmso溶液(空白对照组加等量的dmso),恒温孵育15min。加入50μl的4-nitrophenylα-d-glucopyranoside(pnpg,1mm)溶液,于37℃恒温孵育反应30min。加入50μl浓度为1m的na2co3溶液终止反应,于405nm波长下测吸光值。计算抑制率i,i=[a0-(a1-a2)]/a0×100%,式中:a0为空白组吸光度值;a1为样品组吸光度值;a2为背景组吸光度值。结果显示厚轴绿茶水提物的α-葡萄糖苷酶抑制率为40.7%。
实施例3
以厚轴茶叶为原料制备速溶茶珍。
厚轴茶提取物的制备:取实施例1中所得厚轴晒青毛茶5kg粉碎,加入10l蒸馏水,沸水浴中浸提50min,冷却、过滤,如此反复3次,集中收集滤液,喷雾干燥,得厚轴晒青毛茶提取物。
按常规速溶食品加工工艺制成厚轴速溶茶珍。
实施例4
以厚轴茶茶叶为原料制备护肤品。
以实施例3所得厚轴晒青毛茶提取物为原料,加入护肤品常用载体,按常规加工工艺制成化妆品。
实施例5
以厚轴茶茶叶为原料制备药品。
以实施例3所得厚轴晒青毛茶提取物为原料,加入药品常用载体,按常规加工工艺制成药品。
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