一种体外培育赤眼蜂的低温繁殖方法与流程

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种体外培育赤眼蜂的低温繁殖方法。

背景技术：

赤眼蜂trichogramma是重要的卵寄生性天敌昆虫，其资源丰富、分布广泛、应用面积大、防治害虫对象多，在粮食安全生产，无公害食品、有机食品生产中的害虫生物防治发挥着重要作用。赤眼蜂的接种扩繁是生物防治的关键，目前应用最为广泛的是利用柞蚕卵进行大量的室内繁殖，耗费大量人力、物力，在大量生产应用上受到时间、地域、运输等因素的限制，不仅生产成本高，还存在供应不足的难题。因此，通过开展一种体外培育赤眼蜂的低温繁殖方法，延长货架期和降低繁殖成本，具有重要意义。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种体外培育赤眼蜂的低温繁殖方法，该方法利用人工卵大量繁殖赤眼蜂时，可根据实际应用需要，选择不同的低温调整培育时间，延长货架期和降低繁殖成本。

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种体外培育赤眼蜂的低温繁殖方法，是将赤眼蜂寄生于人工卵中，于16～23℃下进行培育。

具体的，所述的体外培育赤眼蜂的低温繁殖方法，包括以下步骤：制作人工卵卡，将人工卵卡置于生物培养箱中，然后将赤眼蜂寄生于人工卵中，将接有赤眼蜂的卵卡置于16～23℃下进行培育至成虫羽化。

进一步的，所述的人工卵的卵液组成为：柞蚕蛹血淋巴3ml、海藻糖0.1g、鸡蛋(取蛋黄)2.5ml、10wt％脱脂奶1ml、ns盐溶液1ml和无菌水1.5ml。

所述的人工卵卡的制备步骤为：采用厚度为30μm的聚乙烯-聚丙烯复合薄膜，通过特制模具和温热的玻璃棒在大小为8×7cm的薄膜上按压出的半球形人工卵(直径2-3mm×高2-3mm)20粒，薄膜置于紫外光下照射30min进行灭菌。在无菌条件下每卵注入4μl赤眼蜂培养液，让半球形的凸面在外，用封口机把薄膜各边封严。制成卵卡后用软毛笔将10％聚乙烯醇水溶液涂布在卵卡表面以引诱赤眼蜂产卵。每种温度处理对应1张人工卵卡，每处理3次重复。

所述的将人工卵卡置于生物培养箱时的温度为26～28℃，空气相对湿度为70～80％，光周期为l:d＝16:8h；所述的将赤眼蜂寄生于人工卵中培育是在赤眼蜂寄生于人工卵中24h后，将接有赤眼蜂的卵卡置于温度为16～23℃、空气相对湿度为70～80％，光周期为l:d＝16:8h的生物培养箱中进行培育至成虫羽化。

所述的将赤眼蜂寄生于人工卵中是以蜂卵比为8:1的比例将赤眼蜂寄生于人工卵中。

与现有技术相比，本发明的优势在于：本发明提供的一种体外培育赤眼蜂的低温繁殖方法，是以松毛虫赤眼蜂(trichogrammadendrolimi)为对象，以人工卵作为寄主材料，将松毛虫赤眼蜂寄生于人工卵中，于16～23℃下进行培育至成虫羽化，结果显示，与将松毛虫赤眼蜂寄生于柞蚕卵的对照组比较，采用本发明方法培养获得的赤眼蜂比自然界(寄生柞蚕卵的松毛虫赤眼蜂)的延迟时间更长。本发明方法在不影响繁蜂质量和应用效果的基础上，更便于田间应用、延长货架期和减低成本。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1

1、实验材料

昆虫：松毛虫赤眼蜂(trichogrammadendrolimi)。

寄主：人工卵、柞蚕卵。

人工卵的卵液配方：柞蚕蛹血淋巴3ml、海藻糖0.1g、鸡蛋(取蛋黄)2.5ml、10wt％脱脂奶1ml、ns盐溶液1ml和无菌水1.5ml，将各成分混合均匀即为人工卵的卵液。

ns盐溶液即为生理盐水溶液(0.9％的氯化钠水溶液)。

2、实验方法：实验设置4个低温温度，23±1℃，20±1℃，16±1℃和13±1℃，对照温度为27±1℃。使用柞蚕卵卡和优选的赤眼蜂培养液制作人工卵卡。其中，(1)柞蚕卵卡制作方法：把20粒柞蚕卵贴在涂有白乳胶的牛皮纸上，制成柞蚕卵卡；每种温度处理对应1张柞蚕卵卡，每处理3次重复。(2)人工卵卡的制备步骤为：采用厚度为30μm的聚乙烯-聚丙烯复合薄膜，通过特制模具和温热的玻璃棒在大小为8×7cm的薄膜上按压出的半球形人工卵(直径2-3mm×高2-3mm)20粒，薄膜置于紫外光下照射30min进行灭菌；在无菌条件下每卵注入4μl赤眼蜂培养液，让半球形的凸面在外，用封口机把薄膜各边封严。制成卵卡后用软毛笔将10％聚乙烯醇水溶液涂布在卵卡表面以引诱松毛虫赤眼蜂产卵。每种温度处理对应1张人工卵卡，每处理3次重复。将卵卡置于温度为27±1℃，湿度为75％±5％rh，光周期为16:8h(l:d)的生物培养箱中，以蜂卵比为8:1的比例(即8头松毛虫赤眼蜂接于1粒寄生卵)让松毛虫赤眼蜂在人工卵和柞蚕卵上寄生，接蜂24小时后，把接有松毛虫赤眼蜂的卵卡分别置于5个设置温度下，在空气相对湿度为70～80％，光周期为l:d＝16:8h的生物培养箱中发育至成虫羽化。从化蛹率、羽化率、雌性比例和正常蜂量等生物学参数考察体外培育松毛虫赤眼蜂在不同低温下的繁殖质量。实验设置3个重复。

3、实验结果

表1是人工卵培育的松毛虫赤眼蜂在设置温度下的繁殖质量参数。如表1所示，与最适温度(27℃)相比，在13℃、16℃、20℃和23℃条件下，人工卵培育的松毛虫赤眼蜂，发育时间分别延长了21天、17天、8天和5天。16℃、20℃、23℃和27℃之间的化蛹率、羽化率、雌性比例和正常蜂量差异均不显著。而人工卵蜂在13℃条件下的发育质量低于其他试验温度。表明人工卵体外培育的赤眼蜂可以在16℃-23℃的低温下繁殖而不影响质量。

表1体外培育松毛虫赤眼蜂在不同温度下的繁殖情况

*同列均值±标准误后的相同大写字母表示差异不显著(tukey’stest:p>0.05).

表2是柞蚕卵培育的松毛虫赤眼蜂在设置温度下的繁殖质量参数。如表2所示，柞蚕卵繁殖的松毛虫赤眼蜂与人工卵繁殖的质量相当，但在13℃、16℃、20℃和23℃条件下，发育时间分别延长了20天、15天、6天和3天，比人工卵培育的延长时间短。由此可见，与将松毛虫赤眼蜂寄生于柞蚕卵的对照组比较，采用本发明方法培养获得的赤眼蜂比自然界(寄生柞蚕卵的松毛虫赤眼蜂)的延迟时间更长。因此，在利用人工卵大量繁殖赤眼蜂时，可根据实际应用需要，选择不同的低温调整培育时间，延长货架期和降低繁殖成本。

表2寄生柞蚕卵的松毛虫赤眼蜂在不同温度下的繁殖情况

*同列均值±标准误后的相同大写字母表示差异不显著(tukey’stest:p>0.05).

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

起点商标作为专业知识产权交易平台，可以帮助大家解决很多问题，如果大家想要了解更多知产交易信息请点击 【在线咨询】或添加微信 【19522093243】与客服一对一沟通，为大家解决相关问题。

此文章来源于网络,如有侵权,请联系删除