一种延长冻融精子存活时间的保存方法与流程

本发明涉及一种冻融精子的保存方法，具体涉及一种延长冻融精子存活时间的保存方法。
背景技术：
：种公畜繁殖性能在很大程度上决定了养殖企业的生产水平。自然繁殖过程中养殖企业需要饲养数量较大的种公畜以满足母畜配种的需求，极大地增加了企业的养殖成本。尽管精液常温保存可以提高种公畜的利用效率，减少公畜的饲养数量，一定程度上可以提高企业养殖效益。然而，鲜精常温保存时间短，并且鲜精对环境变化非常敏感，从而极大地限制了公畜精液利用效率。因此，精液超低温冷冻保存技术可使精液使用不受时间和地域的限制，能够进一步提高精液的利用效率。此外，2018年我国大范围爆发“非洲猪瘟”疫情，大部分饲养洋猪的企业损失巨大，部分地方猪也受到重创。在这种大背景下，在地方猪活体保种基础上对其遗传资源进行保护已势在必行。精液冷冻是一种重要的保存雄性动物遗传资源的生物保种技术，冷冻精液可以提高优秀个体的使用效率，提高优秀种公畜的使用年限，可以改变家畜配种方式，打破季节性限制，实现优秀种公畜跨地区长距离使用。同时还降低了保种成本，提高保种效率，甚至可以用于突发传染病爆发的储备供应。冷冻精液在实际应用过程中，鉴于母畜发情时间不确定性，所以解冻后精子常常不能及时进行人工输精，以致冻融精子需要在解冻液中保存一段时间。此外，冷冻精液在销售至小型养殖户时，鉴于其不具备冻精解冻的设备和技术，往往需要生产冻精的种公猪站先将冻精解冻后保存在解冻液中并运输至小型养殖户，这样就要求冻融精子在解冻液中保存一段时间。目前并没有相关的延长冻融精子存活时间的技术，但是，延长冻融精子活力保持时间，可以改变传统的冻精销售运输模式，将传统的液氮罐运输改为普通泡沫箱运输，大大降低运输成本，提高企业经济效益。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种延长冻融精子存活时间的保存方法，其可以保证冻融精子储存24小时依然可以保持刚解冻时的活力，完全可以满足母畜配种需求。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种延长冻融精子存活时间的保存方法，所述方法具体包括以下步骤：配制解冻液，利用解冻液将冷冻精子解冻，将解冻后的冷冻精液装入集精瓶中，排去集精瓶中多余空气后，将集精瓶置于装有17℃水的保温杯中，旋紧保温杯瓶盖即可进行保存。优选的，所述配制解冻液的具体方法包括以下步骤：(1)使用电子天平准确称取解冻液粉末，溶入纯水中，使用磁力搅拌器搅拌，使其充分溶解；(2)使用量筒将配制好的解冻液分装入集精瓶中；(3)旋紧集精瓶盖置于37℃水浴锅中预热。优选的，所述步骤(2)中，解冻液量以10倍稀释解冻后精液为准。优选的，将冷冻精子解冻的具体方法步骤如下：(1)使用长镊子将盛放冷冻精液的冻精细管提入50℃水浴锅中快速摆动15s；(2)将冻精细管提出水浴锅并擦干表面水分；(3)使用剪刀剪去冻精细管封口端；(4)将剪去封口端的冻精细管插入预热好的解冻液中，用剪刀剪去棉塞端，使冻精流入解冻液中，将集精瓶中的溶液缓慢摇匀。优选的，所述步骤(1)中，长镊子长度为25cm与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明可以保证冻融精子储存24小时依然可以保持刚解冻时的活力，完全可以满足母畜配种需求。从而延长冻融精子活力保持时间，改变了传统的冻精销售运输模式，将传统的液氮罐运输改为普通泡沫箱运输，大大降低运输成本，提高企业经济效益。附图说明图1是本发明实施例中不同温度保存的解冻后精子活力折线图；图2是本发明实施例中不同温度保存的解冻后精子活力柱状图。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本实施例中，采用以下试剂、设备。试剂：解冻液、纯水等。耗材：保温杯、液氮、minitube0.5ml冻精细管、100ml量筒、200ml烧杯、25cm长镊子、剪刀、细铁丝、100ml集精瓶、10μl移液器、白色枪头、猪仙子细胞计数板(6腔)、乳胶手套、水杯、一次性医用口罩、记号笔、毛巾等。设备：海尔电冰箱、电子天平(ar2140)、计时器、dj-1a大功率磁力搅拌器、2cm转子、50℃水浴锅(hh-2)、37℃水浴锅(hh-2)、猪仙子zxz-8001全自动精子分析仪、猪仙子17℃恒温箱、温度计等。本实施例具体操作方法如下：1.配制解冻液(1)使用电子天平准确称取解冻液粉末，溶入纯水中，使用磁力搅拌器搅拌，使其充分溶解；(2)使用量筒将配制好的解冻液分装入集精瓶中，解冻液量以10倍稀释解冻后精液为准；(3)分装好的解冻液旋紧集精瓶盖置于37℃水浴锅中预热。2.解冻①使用25cm长镊子将冷冻精液提入50℃水浴锅中快速摆动15s；②将50℃水浴锅中的冻精细管提出水浴锅并擦干表面水分；③使用剪刀剪去冻精细管封口端；④将剪去封口端的冻精细管插入预热好的解冻液中，用剪刀剪去棉塞端，使冻精流入解冻液中，缓慢摇匀。3.精子冻后活力检测(1)用10μl移液器吸取摇匀后的精液5μl滴加入猪仙子细胞计数板的腔室中；(2)使用猪仙子精子分析仪检测解冻后精液活力。4.保存运输(1)提前用海尔电冰箱预冷纯水，使用温度计调节温度至17℃；(2)将17℃纯水装入保温杯中，将解冻后活力合格的精液集精瓶放入保温杯中，水量以没过集精瓶中液面为准；(3)保温杯旋紧杯盖后使用大巴车或快递运输均可。5.存活时间比较取冷冻精液解冻后分别置于37℃水浴锅、17℃恒温箱、4℃冰箱中保存，于保存第4h、8h、16h、24h、48h取出于37℃水浴锅中复温5min后使用猪仙子精子分析仪检测活力。表1.不同温度保存的解冻后精子活力37℃17℃4℃0h精子活力0.9820.9820.9824h精子活力0.440.8440.8678h精子活力0.2010.8110.8516h精子活力0.1650.7930.73924h精子活力0.0480.8090.40248h精子活力0.0160.5870.161由表1和图1-2的结果表明，与37℃保存方法对比，17℃保存与4℃保存具有可运输时间长、运输后活力高的特点，17℃保存运输与4℃保存运输显著优于37℃保存运输；与4℃保存方法对比，17℃保存在第16小时后活力显著优于4℃，17℃保存48小时后活力依然高于0.5。所以，17℃保存或运输冻融精子是一种简单高效的延长冻融精子存活时间的方法。以上内容仅仅是对本发明结构所作的举例和说明，所属本
技术领域：
的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。当前第1页1 2 3 

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