一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法与流程

本发明属于小黄鱼亲本筛选技术领域，具体涉及一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法。

背景技术：

小黄鱼（larimichthyspolyactis）隶属于鲈形目，石首鱼科，黄鱼属，是非常重要的经济鱼类，与大黄鱼、带鱼和曼氏无针乌贼并称为我国传统“四大海产”。自上世纪70年代以来，由于过度捕捞，环境污染，气候环境变化等原因，小黄鱼产量锐减，捕获的小黄鱼呈低龄化和小型化等的资源衰退现象。此种情形下，开展小黄鱼的人工繁殖和良种选育，推广小黄鱼的人工养殖成为必然趋势，小黄鱼的人工繁殖已于2015年取得成功，至2020年人工繁殖苗种数量突破200万尾，规模化繁殖技术日趋成熟，为小黄鱼的推广养殖奠定了重要基础。鱼类生长速度与养殖业者的经济收益密切相关，快长型新品种将带来巨大经济收益，因此，开展快长型小黄鱼的良种选育对于小黄鱼养殖业的发展具有重要意义。准确估计遗传参数和育种值是实施选育计划的基础，并直接影响动物选育目标性状的遗传进展和选育效果。常规的表型选择由于养殖过程中环境因素的影响准确性非常低，因此，本专利提供一种快长型小黄鱼新品系亲本准确选择技术方法。

技术实现要素：

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法。该方法以数量遗传学理论为基础，利用遗传育种方法，准确筛选能够获得快长型小黄鱼新品系繁殖亲本。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）收集4000尾以上小黄鱼，同一网箱中养殖至8月龄，随机取200尾，测其体质量，排序前30%体质量数值，以此方法为标准测定剩余小黄鱼，选留体质量在前30%的个体，作为一代亲本，投喂活沙蚕进行强化培育，调控水温保持在15-16℃，促进性腺发育；

（2）挑选性腺发育优良的雌雄亲本，按照1尾雄性亲本与1-2尾雌性亲本的交配方式，通过人工催产受精孵化，构建小黄鱼家系30个以上，受精卵发育至膜内仔鱼期转入培育桶中进行家系标准化培育，养至5月龄时，每桶随机取30尾测定各家系平均体质量，同时每个家系随机选取200尾个体，利用pit标记个体；

（3）完成pit标记后小黄鱼的恢复和暂养：标记结束后，养殖密度调整在150尾/m³及以下，换水80%后，添加聚维酮碘2ppm和盐酸土霉素5ppm，隔天恢复投喂饲料，上午饱食投喂后半小时换水80%并添加聚维酮碘2ppm和盐酸土霉素5ppm，下午饱食投喂后半小时换水80%并添加维生素c应激灵2ppm和底质改良剂em金露0.5ppm，以此方法连续7天后恢复正常养殖；

（4）将恢复后的小黄鱼个体混合养殖于45m³的室内水泥池中，养殖至13月龄，进行所有个体体内标记扫描并测定体质量，以家系标记时体质量均值为协变量，家系构建时间为固定效应，建立单性状动物模型，估计小黄鱼体质量遗传力，并预测个体育种值；

（5）将所有小黄鱼个体按照个体育种值从高到低排序，逐尾扫描个体pit标记，选留排名前30%的个体，进行强化培育，作为繁殖快长型小黄鱼新品系。

所述的一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法，其特征在于所述步骤（2）中人工催产受精孵化具体为：受精卵置于300l孵化桶中孵化，水温控制在15-18℃，海水盐度控制在26-28，充氧。

所述的一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法，其特征在于所述步骤（2）中家系标准化培育具体为：各家系单独养殖于2500l培育桶中，进行标准化培养，至2月龄时，进行第一次疏密分苗，每桶保留数量2000尾，3月龄时，第二次疏密分苗，每桶保留800尾，4月龄时，第三次疏密分苗，每桶保留400尾。

所述的一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法，其特征在于所述步骤（2）中pit标记方法为：将待标记个体放入浓度为0.1ppm丁香酚的海水中1min麻醉后，逐尾捞出，在肌肉中注射pit标记，针头从鱼体背部中部位置斜角15°插入表层肌肉，迅速注入标记后用红霉素软膏涂抹伤口，并涂抹液体创口贴使伤口彻底与外界隔绝，5分钟之内将麻醉的个体全部捞出打完标记并转入洁净海水中恢复。

所述的一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法，其特征在于所述步骤（4）中单性状动物模型公式为：yijk=μ+di+bj+ak+eijk，其中yijk表示第k个体的体质量，μ表示总体均值，di表示第i个家系构建时期的固定效应，bj表示第j个家系标记时体质量均值，作为协变量，ak表示加性遗传效应，即个体育种值，eijk表示残差效应。

所述的一种快长型小黄鱼新品系制备所需亲本的高效筛选方法，其特征在于所述个体育种值的预测方法为：采用reml法估计表型方差、加性方差和剩余方差组分，根据公式，计算体质量性状遗传力，以此为基础，采用blup方法预测个体育种值。

本发明可以显著提高优良亲本选择的准确性，为快速获得快长型小黄鱼新品系奠定基础。采用本发明方法，每个世代可获得5.38%的相对遗传进展。比较育种值选择和表型选择效果可以发现育种值选择准确性较表型选择提高了94.35%。

附图说明

图1为各家系体质量均质和存活率统计结果。

具体实施方式

实施例1：

（1）家系构建

人工养殖群体中收集4000尾左右小黄鱼，同一网箱中养殖至12月份（群体达到8月龄左右），随机取200尾，测量其体质量，排序确定排序前30%的体质量数值，以此为标准，测定剩余3800尾左右的小黄鱼，并选留体质量在前30%的个体，作为一代亲本，投喂活沙蚕进行亲本强化培育，调控水温保持在15℃，促进性腺发育。

（2）高成活率小黄鱼的pit标记

次年4月初，挑选性腺发育优良的雌雄亲本，按照1尾雄性亲本与1-2尾雌性亲本的交配方式，通过人工催产受精孵化，构建小黄鱼家系30个，受精卵发育至膜内仔鱼期转入2500l培育桶中进行家系标准化培育，养至5月龄时，每桶随机取30尾测定各家系平均体质量，同时每个家系随机选取200尾个体，利用pit标记个体。

人工催产授精：于上午10：00前催产，隔日早晨5：00开始检查亲本性腺发育情况，进行人工挤卵受精，受精卵置于300l孵化桶中孵化，水温控制在15-18℃，海水盐度控制在26以上，微充氧。

家系标准化培育：各家系单独养殖于2500l培育桶中，进行标准化养殖，2月龄时，进行第一次疏密分苗，每个桶中保留苗种数量2000尾，3月龄时，每桶保留苗种数量800尾，4月龄时，每桶保留苗种数量400尾。

小黄鱼麻醉剂配制：丁香酚油（河南渔水瑶生物科技有限公司）等体积溶于70%酒精中，随后与18℃海水搅拌均匀，配置成0.1ppm，充氧备用。

pit标记型号：长1.4直径8mm，配有配套针管注射器，标记及注射器无水乙醇浸泡消毒30min以上，晾干后再使用。

标记方式方法：待标记个体放入浓度为0.1ppm丁香酚的海水中1min后，开始逐尾捞出在肌肉中注射pit标记，针头从鱼体背部中部位置斜角15°插入表层肌肉，迅速注入标记后用红霉素软膏涂抹伤口，并涂抹液体创口贴使伤口彻底与外界隔绝，避免病菌感染伤口。5分钟之内需要将麻醉的个体全部捞出打完标记并转入洁净海水中恢复，避免深度麻醉导致死亡。

（3）完成pit标记后小黄鱼的恢复和暂养

标记结束后，养殖密度调整在150尾/m³及以下，换水80%，添加聚维酮碘（北大化学实验厂）2ppm和盐酸土霉素（北京阳光药业有限公司）5ppm。注射标记后第二天恢复投喂饲料，上午7：00投喂，所用饲料为天邦全熟化水产配合饲料（天邦饲料科技有限公司），颗粒直径3cm左右，进行饱食投喂，半小时后换水80%并添加聚维酮碘2ppm+盐酸土霉素5ppm，下午同样方式投喂，并于半小时后换水80%后，加维生素c应激灵（镇江益生堂水产生物有限公司）2ppm+底质改良剂em金露（青岛中仁动物药品有限公司）0.5ppm。如此操作连续7天后恢复正常养殖。

由于进行标记操作时，小黄鱼应激产生较多黏液，防止水体中粘液过多导致鱼体缺氧，标记后实验鱼养殖密度≤150尾/m³，同时进行流水处理，及时排除含有较多粘液的海水。

通过上述技术措施，小黄鱼入麻时间快、麻醉中的鱼体短期离水进行pit标记操作可保持低应激状态，麻醉后恢复时间短，麻醉及标记注射后存活率高。

（4）体质量测量和育种性能评估

将恢复后的小黄鱼个体混合养殖于45m³的室内水泥池中，养殖至13月龄，进行所有个体体内标记扫描并测定体质量，以家系标记时体质量均值为协变量，家系构建时间为固定效应，建立单性状动物模型，估计小黄鱼体质量遗传力，并预测个体育种值。

建立单性状动物模型：yijk=μ+di+bj+ak+eijk;其中，yijk表示第k个体的体质量；μ表示总体均值；di表示第i个家系构建时期的固定效应；bj表示第j个家系标记时体质量均值，作为协变量；ak表示加性遗传效应（个体育种值）；eijk表示残差效应。

采用reml法估计表型方差、加性方差和剩余方差组分，根据公式，计算体质量性状遗传力，以此为基础，采用blup方法预测个体育种值。

（5）快长型新品系制备所需亲本的识别和选出

所有个体育种值按照从高到低进行排序，通过逐尾扫描个体pit标记，选留排名前30%的个体（即为快长型新品系制备所需优良亲本），进行强化培育，用于繁殖快长型小黄鱼新品系。

实施例2：

同实施例1的方法进行试验，人工养殖群体中收集5200尾左右小黄鱼，同一网箱中养殖至12月份（群体达到8月龄左右），随机取200尾，测量其体质量，排序确定排序前30%的体质量数值，以此为标准，测定剩余5000尾的小黄鱼，并选留体质量在前30%的个体，最终获得小黄鱼数量为589尾，作为一代亲本，投喂活沙蚕进行亲本强化培育，调控水温保持在16℃，促进性腺发育。人工催产受精孵化，获得小黄鱼家系34个，所有家系单独养殖于2500l桶中，按照权力要求定期进行疏密分苗，5月龄时，抽样测定每个家系平均体质量，同时每个家系随机取200尾进行pit标记混合养殖，13月龄时扫描所有标记个体并测定体质量，体质量统计分析结果如表1所示，各家系成活率和体质量均值如图1所示。

表1小黄鱼11月龄体质量的描述性统计量

按照权利所述单性状动物分析模型进行方差组分估计，并计算体质量性状遗传力，结果如表2所示。可以得出小黄鱼体质量的遗传力为0.17。利用遗传力和加性方差计算体质量的遗传变异系数，以及30%留种率条件下每个世代取得的遗传进展，结果如表3所示，可以得知，采用该种选择方法，每个世代可获得5.38%的相对遗传进展。比较育种值选择和表型选择效果可以发现育种值选择准确性较表型选择提高了94.35%（表4）。

表2利用单性状动物模型估计的小黄鱼体质量方差组分

表3小黄鱼体质量的遗传变异系数与遗传进度

注：gcv为遗传变异系数；θ=1.159为30%留种率对应的选择强度；δg为预期遗传进度；δg’为相对遗传进度。

表4基于表型值和育种值的个体选择比较(按30%留种率)

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