一种冷成型水产育苗的饵料及其制备方法和应用与流程

本发明属于饵料技术领域，具体来说涉及一种冷成型水产育苗的饵料及其制备方法和应用。

背景技术：

以虾蟹为代表的经济类甲壳类动物，属于高经济附加值的物种。一直以来人们都在开发新型的甲壳动物育苗饲料，由于甲壳动物在孵化之后从无节幼体、溞状幼体、糠虾幼体、幼体等各个变态发育阶段对营养的需求都有其特殊性，例如甲壳动物不能够合成胆固醇、蜕皮激素、虾青素等功能性脂类物质；甲壳动物在幼年期对脂肪的利用率要高于对糖的利用率；甲壳动物在变态发育过程当中，有它特殊的营养需求，使用鱼类的人工配合开口饵料直接充当甲壳动物的开口饵料并没有起到良好的效果。

从20世纪70年代以来，大规模使用盐湖中卤虫休眠卵孵化出的幼苗(公开文献alvinseale(1933):thebrineshrimp(artemia)asasatisfactorylivefoodforfishes,transactionsoftheamericanfisheriessociety,63:1,129-130)，为鱼类动物和甲壳动物的育苗打开了新的大门。卤虫幼体由于营养丰富，富含卵黄蛋白，能够成为鱼类和虾蟹类的幼年时期的良好开口饵料，而且它能够提供不同种类的不饱和脂肪酸，日本研究者对不饱和脂肪酸在虾蟹类幼年时期的吸收做了详尽的研究，而卤虫能够提供虾蟹在幼年变态发育过程当中，对不饱和脂肪酸的高度需求。近年来，在对虾的育苗方面出现了很多问题，以wssv(对虾白斑病病毒)等一些对虾类病毒带来的影响最为严重。当时就已经发现，卤虫等小型甲壳类动物，休眠卵卵壳上或者幼苗身上会带有这种病毒。在wssv席卷养殖业浪潮中，南美白对虾幸存了下来，但是近年来，尤其是2010年以来，在对虾的养殖当中又出现了一些新型的疾病，且这种疾病的发病原因和发病途径还没有得到完全的确定，这种疾病的表现就是在对虾池塘养殖的过程当中，会出现大面积的成长停滞，使养殖户遭受巨大损失，长此以往导致养殖户对对虾养殖的信心大大降低，并寄希望于对虾的苗种质量。现在卤虫养殖条件使得卤虫都带病，卤虫带有病毒无法避免，而在对虾育苗阶段又必须使用卤虫，所以虾有带病的风险，这种带病风险会引起苗期成活率低(例如成活率由80％变为30％)和成体虾出现个头不长大严重的会引起全部死亡。在这样的前提下，具备能够给予对虾正常的营养需求，能够规避天然病源侵害并且能够运载药物等活性物质的新型甲壳动物育苗饲料亟待开发。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种饵料。

本发明的另一目的是提供上述饵料的制备方法。

本发明的另一目的是提供上述饵料作为甲壳动物饵料中的应用。

本发明的目的是通过下述技术方案予以实现的。

一种饵料，该饵料的m值为生蛋黄的m值的2倍及以上，其中，m值为经由sds-page方法电泳及染色后，刚进入浓缩胶但无法再向阳极进行泳动且可被考马斯亮蓝染色的蛋白的积分定量与该蛋白所在泳道的所有物质的积分定量总和的比值，所有物质为sds-page方法电泳及染色后，上层浓缩胶和下层分离胶能被考马斯亮蓝染色的物质。

在上述技术方案中，所述饵料包括：生蛋黄、甲壳素、与生蛋黄中蛋白质交联的戊二醛和甲壳素酶。

在上述技术方案中，所述生蛋黄为鸡蛋黄、鸭蛋黄、鹅蛋黄、鹌鹑蛋黄中的一种或几种的混合物。

在上述技术方案中，还包括：附加内容物，所述附加内容物包括：活细胞、脂肪、蛋白质、核酸、淀粉、维生素、动植物提取物、活性微量矿质元素、胆汁酸、牛磺酸、磷脂和酶中的一种或多种，按质量份数计，所述附加内容物与所述生蛋黄的比为(0.0001～20)：1。

在上述技术方案中，按质量份数计，所述生蛋黄、所述甲壳素和所述戊二醛的比为1：(0.5-2)：(0.0001～3.6)，按质量份数计，所述甲壳素酶与所述甲壳素的比大于0.001：1。

在上述技术方案中，所述生蛋黄、所述甲壳素和所述戊二醛的比为1：(0.5-2)：(0.01～0.5)，按质量份数计，所述甲壳素酶与所述甲壳素的比为(0.001～0.01)：1。

上述饵料的制备方法，包括：将甲壳素水溶液和生蛋黄混合均匀，加入戊二醛水溶液并搅拌3-30min，体系中甲壳素的浓度为10～100g/l、戊二醛的浓度为0.01～6g/l、生蛋黄的浓度为0.01～100g/l，静置0.1-5h以充分交联,收集固体，将固体放入甲壳素酶水溶液中静置5-60min，再收集，得到所述饵料。

在上述技术方案中，在加入戊二醛水溶液时同时加入附加内容物，所述附加内容物包括：活细胞、脂肪、蛋白质、核酸、淀粉、维生素、动植物提取物、活性微量矿质元素、胆汁酸、牛磺酸、磷脂和酶中的一种或多种，按质量份数计，所述附加内容物与所述生蛋黄的比为(0.0001～20)：1。

在上述技术方案中，所述搅拌的速度为50-1000rpm。

在上述技术方案中，所述收集采用带有筛网的离心管在离心机中离心，离心机的转速为700-1000rpm，离心时间为10-60min。

在上述技术方案中，所述甲壳素酶水溶液中甲壳素酶的浓度为0.001～2g/l。

在上述技术方案中，体系中甲壳素的浓度为10～70g/l、戊二醛的浓度为0.01～5g/l、生蛋黄的浓度为2～15g/l，所述甲壳素酶水溶液中甲壳素酶的浓度为0.1～1.5g/l。

上述饵料作为甲壳动物饵料中的应用。

在上述技术方案中，将能通过300目筛网且不能通过500目筛网的饵料作为第一饵料，将不能通过300目筛网的饵料作为第二饵料，所述第一饵料与所述第二饵料的重量比为1：(0.5-20)。

本发明的饵料的有益效果为：

1.本发明与虾片(电子商务平台购买，关键词为虾片饲料，70元每公斤)相比：

不坏水，营养高，投喂生合饵料虾苗成活率高

2.本发明与活体卤虫幼体(电子商务平台购买，卤虫卵，1200元每公斤)相比：

不带病原，无需孵化

3.本发明的饵料用于饲喂中国明对虾虾苗和凡纳滨对虾虾苗，虾苗状态较好，成活率大于百分之八十二。

附图说明

图1为实施例1所得第一饵料在目镜15×物镜4×显微镜下的图片；

图2为筛绢80目到300目收集到实施例2所得饵料在目镜15×物镜4×显微镜下的图片；

图3为实施例3所得第一饵料在目镜15×物镜10×显微镜下的图片；

图4为筛绢80目到300目收集到实施例4所得饵料在目镜15×物镜10×显微镜下的图片；

图5用于测定本发明生和饵料与原始材料的分子量区别的sds-page(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)凝胶(用考马亮蓝染色)，其中，1号泳道：实施例1得到的饵料；2号泳道：实施例2得到的饵料；3号泳道：新鲜液态的生蛋黄；4号泳道：溶于水的煮熟鸡蛋黄。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案。

液态的生蛋黄采用鲜鸡蛋，去掉蛋清，再搅拌均匀。

卤虫幼体来源：渤海湾卤虫卵孵化幼体

虾片的来源：微颗粒饵料卤虫虾片及其配制方法申请号：03138906.6。

实施例1

一种饵料，包括：液态的生蛋黄、甲壳素、与生蛋黄中蛋白质交联的戊二醛和甲壳素酶，按质量份数计，生蛋黄、甲壳素和戊二醛的比为1：0.5：0.01，按质量份数计，甲壳素酶与甲壳素的比为0.002。

上述饵料的制备方法，包括：室温20～25℃下，将甲壳素水溶液和生蛋黄混合均匀，加入戊二醛水溶液并于100rpm搅拌30min，体系中甲壳素的浓度为10g/l、戊二醛的浓度为0.1g/l、生蛋黄的浓度为10g/l，静置1h以充分交联,收集固体，将固体放入甲壳素酶水溶液中静置60min，再收集，得到饵料，其中，甲壳素酶水溶液中甲壳素酶的浓度为0.1g/l。收集采用带有500目筛网的离心管在离心机中离心，离心机的转速为700rpm，离心时间为40min。

过筛：将能通过300目筛网且不能通过500目筛网的饵料作为第一饵料，将不能通过300目筛网的饵料作为第二饵料，所述第一饵料与所述第二饵料的重量比为1：1.5。

如图1所示，将过筛后的饵料在显微镜下检验成型状态，发现形状呈现球形的和不规则形状，可以看出是被交联的状态，其大小适合虾苗的摄食。

将上述得到的饵料用于饲喂凡纳滨对虾虾苗。在仔虾期第4天p4检测，凡纳滨对虾虾苗肌肉透明、肠道连续、不沉底、反应灵敏，整体状态很好，成活率达百分之八十二即100万尾虾苗中成活82万尾虾苗，具体实施如下：

虾苗池规格4m×2.5m×2.2m，投放100万尾苗。虾苗经过无节幼体期1天(n)，溞状幼体期3天(溞状幼体期第1天z1-溞状幼体期第2天z2-溞状幼体期第3天z3)，糠虾幼体期2天(糠虾幼体期第1天m1-糠虾幼体期第2天m2)和仔虾期4天(仔虾期第1天p1-仔虾期第2天p2-仔虾期第3天p3-仔虾期第4天p4)。

饲喂方案:一天投喂4次，每天时间设定0:00、6:00、12:00、18:00。n-z1期投喂单胞藻藻液(电子商务平台购买，浓缩藻液，200元每公斤)，z2-p3期开始投喂饵料,p4期投喂虾片。n-z1期投喂单胞藻藻液，使养殖水体保证藻液浓度为1×10⁸cfu/ml(cfu，colony-formingunits,细胞克隆形成单位)，z2期每次投喂12克，z3期每次投喂17克，m1期每次投喂29克，m2期每次投喂33克，p1期每次投喂37克，p2期每次投喂41克，p3期每次投喂44克，p4期每次投喂48克。

对照组将饵料改投喂虾片，用量和次数等均相同，其他条件均与实验组相同。在仔虾期第4天p4检测，对照组的成活率为41％(剩余虾苗41万尾)。

实施例2

一种饵料，包括：液态的生蛋黄、甲壳素、与生蛋黄中蛋白质交联的戊二醛和甲壳素酶，按质量份数计，生蛋黄、甲壳素和戊二醛的比为1：2：0.25，按质量份数计，甲壳素酶与甲壳素的比为0.01。

上述饵料的制备方法，包括：室温20～25℃下，将甲壳素水溶液和生蛋黄混合均匀，加入戊二醛水溶液并于300rpm搅拌15min，体系中甲壳素的浓度为50g/l、戊二醛的浓度为3g/l、生蛋黄的浓度为2g/l，静置0.5h以充分交联,收集固体，将固体放入甲壳素酶水溶液中静置40min，再收集，得到饵料，其中，甲壳素酶水溶液中甲壳素酶的浓度为0.5g/l。收集采用带有500目筛网的离心管在离心机中离心，离心机的转速为1000rpm，离心时间为20min。

过筛：将能通过300目筛网且不能通过500目筛网的饵料作为第一饵料，将不能通过300目筛网的饵料作为第二饵料，所述第一饵料与所述第二饵料的重量比为1：5。

如图2所示，将过筛后的饵料在显微镜下检验成型状态，发现形状呈现球形的和不规则形状，可以看出是被交联的状态，其大小适合虾苗的摄食。

将上述得到的饵料用于饲喂中国明对虾虾苗。在仔虾期第4天p4检测，中国明对虾虾苗肌肉透明、肠道连续、不沉底、反应灵敏，整体状态很好，成活率达百分之八十二即2000尾虾苗中成活1640尾虾苗，具体实施如下：

2个虾苗池a和b，规格均为0.68m×0.48m×0.47m，各投放2000尾苗。虾苗(从n-p4一共10天)经过无节幼体期1天(n)，溞状幼体期3天(溞状幼体期第1天z1-溞状幼体期第2天z2-溞状幼体期第3天z3)，糠虾幼体期2天(糠虾幼体期第1天m1-糠虾幼体期第2天m2)和仔虾期4天(仔虾期第1天p1-仔虾期第2天p2-仔虾期第3天p3-仔虾期第4天p4)。

饲喂方案:藻类加卤虫饲喂5天，用本实施例所述饵料饲养14天，一共19天(其中包括n-p4：10天；p4后另饲喂9天)。p4期及之前一天投喂4次，每天时间设定0:00、6:00、12:00、18:00。n-z1期投喂单胞藻藻液，使养殖水体保证藻液浓度为1×10⁸cfu/ml(cfu，colony-formingunits,细胞克隆形成单位)，z2-m1期开始投喂卤虫幼体,每天4次，每次1克，m2-p4期实验组虾池a投喂本实施例所述饵料每次2克，对照组虾池b投喂虾片每次2克。p4期之后9天每天投喂本实施例所述饵料2次，每天时间设定8：00、20:00。虾池a投喂饵料，虾池b投喂虾片，每个虾池每次投喂量由5克逐天增至10克即p4期之后9天每天每次投喂量分别为5克、5.625克、6.25克、6.875克、7.5克、8.125克、8.75克、9.375克和10克。

实验结果：实验组虾苗成活率和个体均大于对照组。

1.实施例2实验开始前实验组和对照组均为2000尾虾苗，实验结束后实验组剩余虾苗1640尾，即成活率达82％；对照组剩余虾苗820尾，即成活率为41％。实验结束后实验组虾苗平均体长2厘米，对照组平均体长1.6厘米，实验组比对照组平均体长多0.4厘米。

2.实验组和对照组相比，投喂虾片的水时间稍长即可闻到臭水的味道，而投喂饵料的水没有味道。投喂饵料组氨氮等一些水质指标较虾片组更适合虾苗生存。

3.实验结束后实验组虾比对照组虾成活率高、体长可看出其营养高。

4.饵料制作方法是生蛋黄，清水以及小球藻等添加物，没有病原的带入；相对于卤虫，饵料制作省去了孵化的步骤。

5.投喂饵料实验组p3-p4，虾苗变形提前一天。

实施例3

一种饵料，包括：液态的生蛋黄、甲壳素、与生蛋黄中蛋白质交联的戊二醛、甲壳素酶和附加内容物，按质量份数计，生蛋黄、甲壳素和戊二醛的比为1：1：0.5，按质量份数计，甲壳素酶与甲壳素的比为0.005，按质量份数计，所述附加内容物与所述生蛋黄的比为1:1。附加内容物为小球藻粉(活细胞)。

上述饵料的制备方法，包括：室温20～25℃下，将甲壳素水溶液和生蛋黄混合均匀，加入戊二醛水溶液和附加内容物并于400rpm搅拌30min，体系中甲壳素的浓度为20g/l、戊二醛的浓度为4g/l、生蛋黄的浓度为4g/l，按质量份数计，体系中附加内容物与生蛋黄的比为1:1。静置1.5h以充分交联,收集固体，将固体放入甲壳素酶水溶液中静置60min，再收集，得到饵料，其中，甲壳素酶水溶液中甲壳素酶的浓度为1g/l。收集采用带有500目筛网的离心管在离心机中离心，离心机的转速为800rpm，离心时间为50min。

过筛：将能通过300目筛网且不能通过500目筛网的饵料作为第一饵料，将不能通过300目筛网的饵料作为第二饵料，所述第一饵料与所述第二饵料的重量比为1：10。

如图3所示，将过筛后的饵料在显微镜下检验成型状态，发现形状呈现球形的和不规则形状，可以看出是被交联的状态，其大小适合虾苗的摄食。用实施例3所得饵料投喂中国明对虾虾苗和凡纳滨对虾虾苗能获得与实施例1和2一致的技术效果。

实施例4

一种饵料，包括：液态的生蛋黄、甲壳素、与生蛋黄中蛋白质交联的戊二醛和甲壳素酶，按质量份数计，生蛋黄、甲壳素和戊二醛的比为1：0.8：0.21，按质量份数计，甲壳素酶与甲壳素的比为0.008。

上述饵料的制备方法，包括：室温20～25℃下，将甲壳素水溶液和生蛋黄混合均匀，加入戊二醛水溶液并于200rpm搅拌30min，体系中甲壳素的浓度为19g/l、戊二醛的浓度为2g/l、生蛋黄的浓度为3.3g/l，静置3h以充分交联,收集固体，将固体放入甲壳素酶水溶液中静置60min，再收集，得到饵料，其中，甲壳素酶水溶液中甲壳素酶的浓度为0.8g/l。收集采用带有500目筛网的离心管在离心机中离心，离心机的转速为900rpm，离心时间为60min。

过筛：将能通过300目筛网且不能通过500目筛网的饵料作为第一饵料，将不能通过300目筛网的饵料作为第二饵料，所述第一饵料与所述第二饵料的重量比为1：8。

如图4所示，将过筛后的饵料在显微镜下检验成型状态，发现形状呈现球形的和不规则形状，可以看出是被交联的状态，其大小适合虾苗的摄食。用实施例4所得饵料投喂中国明对虾虾苗和凡纳滨对虾虾苗能获得与实施例1和2一致的技术效果。

1.本发明使用戊二醛的作用和市面上的有本质不同(不同在于本发明不是用粘结剂和营养成分粘结，而是让戊二醛和营养成分直接交联)。

2.本发明制备饵料的条件是室温，市面上都是100℃高温导致内容活性物质失活。

3.本发明为采用生蛋黄在戊二醛的作用下交联形成大分子量物质。

图5为实施例1、2所得饵料，新鲜液态的生蛋黄以及溶于水的煮熟鸡蛋黄的sds-page(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)经考马斯亮蓝染色后电泳图，其中，1号泳道：实施例1得到的饵料；2号泳道：实施例2得到的饵料；3号泳道：新鲜液态的生蛋黄；4号泳道：溶于水的煮熟鸡蛋黄。每个泳道的上样量均相同。由图可以看出饵料的分子量出现了明显的不同。饵料和新鲜液态的生蛋黄以及溶于水的煮熟鸡蛋黄(清水将鸡蛋煮熟，去掉多余部分，只留着蛋黄用于测试)相比，后两者在胶块中部较为集中，所得饵料主要集中在胶块的底部即分子量较大，同时2号泳道的底部量多余1号泳道(制作2号泳道饵料的戊二醛水溶液浓度高于1号泳道)。如图5所示，箭头所指为经由sds-page方法电泳及染色后刚进入浓缩胶但无法再向阳极进行泳动且可被考马斯亮蓝染色的蛋白，箭头所指1，2，3和4深蓝色电泳条带与其各自所在泳道所有蓝色物质的积分定量总和(所有蓝色物质：sds-page方法电泳及染色后，上层浓缩胶和下层分离胶能被考马斯亮蓝染色的物质)的比值定义为m值，1号泳道～4号泳道所对应物质的m值分别依次为a，b，c和d。经gel-pro分析软件分析比对发现b>a>c>d，说明戊二醛水溶液能和生蛋黄交联且高浓度的戊二醛溶水液能增加生蛋黄的交联度。另外，经实践证明1号泳道和2号泳道所对应的饵料不坏水，3所对应的新鲜液态的生蛋黄和4所对应的溶于水的煮熟鸡蛋黄坏水。

如图5所示，测得b值是c值的6.11倍，a值是c值的4.02倍。

实施例3所得饵料的m值是c值的7.35倍，实施例4所得饵料的m值是c值的5.23倍。

本发明使用交联剂对蛋白类的饲料骨架成分进行交联，通过骨架结构的交联程度来调整造成内容物释放进程，在不同释放速度的实验当中，选择最为贴近对虾幼苗的肠道吸收过程，以期达到，重要的营养成分能够直接递送到虾苗的体内，满足其在不同时期，对营养的需求。

以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。

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