商标分类 
商标转让 
您当前的位置： 一种霍山石斛功能性饮料的制备方法与流程
2021-01-07 10:01:15|
449|
起点商标网 本发明涉及饮料食品及其加工
技术领域：
，具体涉及一种霍山石斛功能性饮料的制备方法。
背景技术：
：霍山石斛(dendrobiumhuoshanense)俗称米斛，是兰科石斛属的草本植物，国家一级保护植物，为中国特有，主产于大别山区的安徽省霍山县，大多生长在云雾缭绕的悬崖峭壁崖石缝隙间和参天古树上，生于山地林中树干上和山谷岩石上；其茎直立，肉质，不分枝，具3-7节，淡黄绿色，有时带淡紫红色斑点，干后淡黄色；叶革质，2-3枚互生于茎的上部，斜出，舌状长圆形；具1-2朵花，花淡黄绿色；花瓣卵状长圆形，先端钝，具5条脉；唇瓣近菱形，长和宽约相等。现有研究表明，霍山石斛含有多糖、石斛碱在内的多种生物碱、蛋白质及人体所需的20种氨基酸，经中国医学科学院药用植物研究所鉴定：多糖含量为18.974％，总生物碱含量为0.030％，具有生津益明、清热养阴、消炎止痛、清音明目功能及抗癌、防癌、抗衰老、抗辐射和增强免疫力等功效，尤其是石斛多糖具有极高的保健和医疗作用，其多糖成分与增强机体免疫机能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、降血糖等药理作用有着密切联系；霍山石斛中不仅具有丰富的多糖成分通过抗氧化作用或增强机体细胞免疫功能间接抗肿瘤作用，还具有直接的抗癌活性物质基础是其含有的菲类和联苄类化合物，对肿瘤细胞的细胞周期以及细胞周期蛋白表达有影响，使癌细胞的增殖受到抑制，药用价值极高。现有对石斛多糖的提取方法大都需要进行破壁，但包括剪切破壁和化学破壁在内的破壁方法过于强硬，容易破坏石斛原有的多糖结构，影响生物活性。技术实现要素：针对上述问题，本发明提供一种霍山石斛提取物的制备方法以及含有所述霍山石斛提取物的饮料。本发明的目的采用以下技术方案来实现：一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物。优选的，所述茅岩莓茶提取物的添加量为1-2份。优选的，所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得。优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶被吸附固定在空心载体上。进一步优选的，所述空心载体为二氧化硅包覆的两亲聚氨基酸共聚物，其制备方法为：s1、按质量份数，称取纤维素酶或果胶酶5-20份、海藻酸钠10-25份、去离子水100-250份，充分搅拌溶解得到混合溶液，将所述混合溶液滴加到质量浓度为1％～10％的可溶性钙盐溶液中，待滴加结束后，将形成的复合凝胶微球在所述可溶性钙盐溶液中继续浸泡至完全固化，滤出所述复合凝胶微球，洗涤后于70℃～90℃温度干燥2-6h；s2、按质量份数，称取亲水性氨基酸或疏水性氨基酸5份，加入四氢呋喃50份，充分搅拌溶解后于60-70℃下搅拌回流20-30min，加入碳酸三氯甲基酯5份，继续回流20-60min，再以氮气置换反应体系中空气，加入石油醚结晶，晶体以石油醚洗涤，得到n-酸酐化的亲水性氨基酸或疏水性氨基酸；s3、n-酸酐化的亲水性氨基酸和n-酸酐化的疏水性氨基酸以质量比2-3:1的比例混合，得到混合晶体，以氮气置换反应体系中空气，加入混合晶体50倍质量的硝基苯，加入混合晶体质量0.5％的三乙胺，搅拌反应24-48h，加入s1制备的复合凝胶微球，所述复合凝胶微球与混合晶体的质量比为3-7:1，继续搅拌反应24-36h，反应完成后，边搅拌边缓慢滴加乙醚，所述乙醚与所述硝基苯的质量比为1-2:1，滤出微球，分别以乙醚、乙醇洗涤，再分散在与所述硝基苯等量的70％的乙醇水溶液中，得到溶液a；s4、按体积比1：5混合正硅酸乙酯和无水乙醇，得到溶液b，边搅拌边缓慢滴加至所述溶液a中，所述溶液a与溶液b的滴加体积比为10:1，滴加完毕后滤出微球，分别以无水乙醇和蒸馏水洗涤；s5、配制溶液c，所述溶液c为氯化钠和盐酸的混合溶液，其中，氯化钠浓度为0.1-0.2mol/l，盐酸浓度为0.01-0.02mol/l，将s4制得的微球浸入溶液c，所述溶液c的量以能将形成的复合凝胶微球完全浸没为限，缓慢搅拌2-4h，滤出得到所述空心载体。优选的，所述亲水性氨基酸为谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或半胱氨酸，所述疏水性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸。优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶的吸附固定方法为：将所述空心载体用无水乙醇浸泡12h，再用去离子水洗涤，干燥后称取1份加入反应器中，加入10g/l的果胶酶或纤维素酶溶液，水浴45-50℃下保温，搅拌吸附4-6h后，滤出产物，缓冲溶液洗涤，冷藏备用。本发明的另一目的在于提供一种包括前述霍山石斛提取物的饮料。优选的，所述饮料具有如下的重量组分组成：水30-50份，霍山石斛提取物16-24份，葛根提取液6-10份，鸡蛋花提取液2-7份，人参花提取液2-7份，冰糖5-15份，柠檬酸0.5-1.5份，柠檬酸钠0.2-0.8份，抗坏血酸0.5-1份，海藻酸钠0.1-0.6份；其制备方法为：按比称取各配料，混合为调配液，将调配液在均质机中预热至55℃，调整压力至22mpa，均质处理10-20min，得到均质液，将均质液加热至80℃杀菌15min后快速进行灌装密封。本发明的有益效果为：本发明通过冷冻干燥的前处理，使得石斛细胞内水分发生膨胀，可以降低细胞壁的保护作用，减少破壁阻力；通过加入茅岩莓茶提取物辅助提取霍山石斛多糖，显著提高了提取多糖的生物活性，结合温和破壁的方法，减少提取方法对多糖的破坏，最大程度地保留霍山石斛的原始功效。具体实施方式结合以下实施例对本发明作进一步描述。本发明的实施例涉及一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物；石斛花是石斛的花朵，具有清热、解郁、养胃的功效，是既可作为药物又可作为食材的花卉原料，本发明将其与石斛茎一起提取，可以全面地保留石斛的保健功效，提高经济价值；水蒸汽熏蒸可以对原料进行消毒杀菌，同时活化植物细胞，有利于后续的提取；细胞壁是植物重要的特征性结构，包括中胶层、初生细胞壁和次生细胞壁，由多糖聚合物纤维素、半纤维素、果胶质以及苯丙烷类聚合物木质素构成，各成分相互作用交联形成网络结构，赋予细胞壁良好的机械强度，现有对石斛多糖的提取方法大都需要进行破壁，但包括剪切破壁和化学破壁在内的破壁方法过于强硬，容易破坏石斛原有的多糖结构，影响生物活性，本发明采用温和的破壁方法，可以减小提取过程对多糖生物活性的影响，其中，霍山石斛鲜条采用冷冻干燥，经过冷冻后的石斛细胞内水分发生膨胀，可以降低细胞壁的保护作用，减少破壁阻力；针对细胞壁组分，采用纤维素酶和果胶酶进行酶解，避免强硬的破壁方法；茅岩莓茶产于茅岩河两岸，属葡萄科藤本植物，现有研究表明，茅岩莓茶含有亮氨酸、异氨酸、蛋氨酸等人体必须的17种氨基酸和钾、钙、铁、锌、镁等14种微量元素，特别是富含多种活性黄酮及其衍生物，具有清热解毒、镇痛消肿、降脂降压、润喉止咳、调节提高人体免疫力的功效，对金黄葡萄球菌、甲、乙型链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌等也有很强的杀灭能力；茅岩莓茶味道独特，回味甘甜；以茅岩莓茶提取物与霍山石斛复配可以提高功效，调节风味，发明人注意到，加入茅岩莓茶提取物可以辅助提取霍山石斛多糖，并显著提高提取多糖的生物活性，最大程度地保留霍山石斛的原始功效，推测这可能与茅岩莓茶中富含的多种黄酮化合物及黄酮衍生物有关；所述茅岩莓茶提取物可按以下步骤制备得到：采用自然生长的茅岩莓茶，经干燥后采用水提取法或者乙醇提取法得到茅岩莓茶提取液，再经喷雾干燥法得到茅岩莓茶提取物；优选的，所述茅岩莓茶提取物的添加量为1-2份；优选的，所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得；上述提取方法可以减小提取过程对多糖生物活性的影响，但多糖提取率较低，为更进一步地充分保留霍山石斛的功效成分，本发明对提取滤渣进行二次提取，其中，以氯化胆碱为氢键受体和以山梨醇为氢键供体组成的混合物间可以形成强烈的氢键作用，具有类似离子液体的溶剂性质，对多种提取物具有良好的溶解性；优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶被吸附固定在空心载体上；进一步优选的，所述空心载体为二氧化硅包覆的两亲聚氨基酸共聚物，其制备方法为：s1、按质量份数，称取纤维素酶或果胶酶5-20份、海藻酸钠10-25份、去离子水100-250份，充分搅拌溶解得到混合溶液，将所述混合溶液滴加到质量浓度为1％～10％的可溶性钙盐溶液中，待滴加结束后，将形成的复合凝胶微球在所述可溶性钙盐溶液中继续浸泡至完全固化，滤出所述复合凝胶微球，洗涤后于70℃～90℃温度干燥2-6h；s2、按质量份数，称取亲水性氨基酸或疏水性氨基酸5份，加入四氢呋喃50份，充分搅拌溶解后于60-70℃下搅拌回流20-30min，加入碳酸三氯甲基酯5份，继续回流20-60min，再以氮气置换反应体系中空气，加入石油醚结晶，晶体以石油醚洗涤，得到n-酸酐化的亲水性氨基酸或疏水性氨基酸；s3、n-酸酐化的亲水性氨基酸和n-酸酐化的疏水性氨基酸以质量比2-3:1的比例混合，得到混合晶体，以氮气置换反应体系中空气，加入混合晶体50倍质量的硝基苯，加入混合晶体质量0.5％的三乙胺，搅拌反应24-48h，加入s1制备的复合凝胶微球，所述复合凝胶微球与混合晶体的质量比为3-7:1，继续搅拌反应24-36h，反应完成后，边搅拌边缓慢滴加乙醚，所述乙醚与所述硝基苯的质量比为1-2:1，滤出微球，分别以乙醚、乙醇洗涤，再分散在与所述硝基苯等量的70％的乙醇水溶液中，得到溶液a；s4、按体积比1：5混合正硅酸乙酯和无水乙醇，得到溶液b，边搅拌边缓慢滴加至所述溶液a中，所述溶液a与溶液b的滴加体积比为10:1，滴加完毕后滤出微球，分别以无水乙醇和蒸馏水洗涤；s5、配制溶液c，所述溶液c为氯化钠和盐酸的混合溶液，其中，氯化钠浓度为0.1-0.2mol/l，盐酸浓度为0.01-0.02mol/l，将s4制得的微球浸入溶液c，所述溶液c的量以能将形成的复合凝胶微球完全浸没为限，缓慢搅拌2-4h，滤出得到所述空心载体；优选的，所述亲水性氨基酸为谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或半胱氨酸，所述疏水性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸；优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶的吸附固定方法为：将所述空心载体用无水乙醇浸泡12h，再用去离子水洗涤，干燥后称取1份加入反应器中，加入10g/l的果胶酶或纤维素酶溶液，水浴45-50℃下保温，搅拌吸附4-6h后，滤出产物，缓冲溶液洗涤，冷藏备用；当前生物酶的工业应用都是直接加入到生产中，但是以这种方式添加的生物酶很难回收再利用；为了提高使用率、降低生产成本，出现了固定化酶技术；固定化酶技术是一种利用载体材料将酶束缚或限制于一定区域内，进行特有的催化反应，并可回收及重复利用的技术。目前，固定化酶的载体材料主要有以下几类：无机载体(如玻璃、硅凝胶、蒙脱土等)、磁性高分子微球(如聚苯乙烯磁性微球)、天然高分子载体(如海藻酸钠、壳聚糖和合成高分子载体(如聚丙烯酰胺、聚苯乙烯)等；以上述材料制备的固定化酶酶活力较低或机械稳定性不佳，本发明以两亲性的聚氨基酸共聚物为载体，基于氨基酸良好的生物相容性和两亲性聚氨基酸多的活性位点，提高了纤维素酶和果胶酶的负载效率，其中，利用海藻酸钠在二价金属离子溶液中的凝胶化作用，制备分散有纤维素酶或果胶酶的海藻酸盐凝胶微球，同时以其为造孔剂和导向剂，在表面引导生长具有两亲性的聚氨基酸共聚物，再通过凝胶化的逆过程除去凝胶微球，制得空心微球，而根据选择的不同酶种类(纤维素酶或果胶酶)，可以形成具有特异性酶种类亲和性的空心微球，提高负载率和负载活性，外层包覆的二氧化硅层可以提高空心微球的机械性能；所述空心载体具有较高的负载量和负载稳定性，其最大负载量可达0.24g/g，较常规载体负载量高10-18％，在酶活大于80％起始酶活下可重复使用8次以上。本发明的另一目的在于提供一种包括前述霍山石斛提取物的饮料；优选的，所述饮料具有如下的重量组分组成：水30-50份，霍山石斛提取物16-24份，葛根提取液6-10份，鸡蛋花提取液2-7份，人参花提取液2-7份，冰糖5-15份，柠檬酸0.5-1.5份，柠檬酸钠0.2-0.8份，抗坏血酸0.5-1份，海藻酸钠0.1-0.6份；其制备方法为：按比称取各配料，混合为调配液，将调配液在均质机中预热至55℃，调整压力至22mpa，均质处理10-20min，得到均质液，将均质液加热至80℃杀菌15min后快速进行灌装密封；本发明通过多种提取物的调配复合制得所述霍山石斛功能性饮料，具有清热祛火、降压降脂、提高免疫力、保肝护肝的功效，非常适宜经常熬夜、用脑、烟酒过度，体虚乏力的人群经常饮用，且风味独特，营养丰富，活性成分含量高，不含各种人工合成的食品添加剂及合成色素，符合大众绿色健康的消费需求。实施例1一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物1-2份，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物；所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得。实施例2一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物1-2份，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物；所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得；所述纤维素酶和所述果胶酶被吸附固定在空心载体上；所述空心载体为二氧化硅包覆的两亲聚氨基酸共聚物，其制备方法为：s1、按质量份数，称取纤维素酶或果胶酶5-20份、海藻酸钠10-25份、去离子水100-250份，充分搅拌溶解得到混合溶液，将所述混合溶液滴加到质量浓度为1％～10％的可溶性钙盐溶液中，待滴加结束后，将形成的复合凝胶微球在所述可溶性钙盐溶液中继续浸泡至完全固化，滤出所述复合凝胶微球，洗涤后于70℃～90℃温度干燥2-6h；s2、按质量份数，称取亲水性氨基酸或疏水性氨基酸5份，加入四氢呋喃50份，充分搅拌溶解后于60-70℃下搅拌回流20-30min，加入碳酸三氯甲基酯5份，继续回流20-60min，再以氮气置换反应体系中空气，加入石油醚结晶，晶体以石油醚洗涤，得到n-酸酐化的亲水性氨基酸或疏水性氨基酸；s3、n-酸酐化的亲水性氨基酸和n-酸酐化的疏水性氨基酸以质量比2-3:1的比例混合，得到混合晶体，以氮气置换反应体系中空气，加入混合晶体50倍质量的硝基苯，加入混合晶体质量0.5％的三乙胺，搅拌反应24-48h，加入s1制备的复合凝胶微球，所述复合凝胶微球与混合晶体的质量比为3-7:1，继续搅拌反应24-36h，反应完成后，边搅拌边缓慢滴加乙醚，所述乙醚与所述硝基苯的质量比为1-2:1，滤出微球，分别以乙醚、乙醇洗涤，再分散在与所述硝基苯等量的70％的乙醇水溶液中，得到溶液a；s4、按体积比1：5混合正硅酸乙酯和无水乙醇，得到溶液b，边搅拌边缓慢滴加至所述溶液a中，所述溶液a与溶液b的滴加体积比为10:1，滴加完毕后滤出微球，分别以无水乙醇和蒸馏水洗涤；s5、配制溶液c，所述溶液c为氯化钠和盐酸的混合溶液，其中，氯化钠浓度为0.1-0.2mol/l，盐酸浓度为0.01-0.02mol/l，将s4制得的微球浸入溶液c，所述溶液c的量以能将形成的复合凝胶微球完全浸没为限，缓慢搅拌2-4h，滤出得到所述空心载体；所述亲水性氨基酸为谷氨酸，所述疏水性氨基酸为亮氨酸；所述纤维素酶和所述果胶酶的吸附固定方法为：将所述空心载体用无水乙醇浸泡12h，再用去离子水洗涤，干燥后称取1份加入反应器中，加入10g/l的果胶酶或纤维素酶溶液，水浴45-50℃下保温，搅拌吸附4-6h后，滤出产物，缓冲溶液洗涤，冷藏备用。实施例3一种霍山石斛功能性饮料，其制备方法为：按比称取各配料，其重量组分组成为：水30-50份，霍山石斛提取物16-24份，葛根提取液6-10份，鸡蛋花提取液2-7份，人参花提取液2-7份，冰糖5-15份，柠檬酸0.5-1.5份，柠檬酸钠0.2-0.8份，抗坏血酸0.5-1份，海藻酸钠0.1-0.6份，将各配料混合为调配液，将调配液在均质机中预热至55℃，调整压力至22mpa，均质处理10-20min，得到均质液，将均质液加热至80℃杀菌15min后快速进行灌装密封。对比例一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理将所述浓缩液入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液。实验例1、霍山石斛提取物降血糖活性对比测试实施例1、对比例制备的第一提取液以及茅岩莓茶提取物的降血糖活性：km小鼠适应性喂养1周后，禁食12h，正常饮水，称取体重，腹腔注射1％四氧嘧啶300mg/kg，72h后尾静脉取血，测空腹血糖，选择血糖值大于15mmol/l的小鼠为糖尿病模型鼠；将模型鼠随机分为模型组、对比例组、实施例组、茅岩莓茶组和阳性对照组，以正常小鼠为正常组，每组10只，阳性对照组每天以20mg/kg的阿卡波糖溶液灌胃，实施例组和对比例组每天以200mg/kg(按多糖含量计)的第一提取液(分别由实施例1和对比例制备)灌胃，茅岩莓茶组以实施例组灌胃的茅岩莓茶提取物含量进行灌胃，模型组和正常组以等体积的生理盐水灌胃，正常饮食，每两周取小鼠尾静脉血，测定空腹血糖，实验周期为4周，检测结果如下：平均血糖值0周2周4周正常组5.2mmol/l5.2mmol/l5.2mmol/l模型组21.1mmol/l21.2mmol/l21.0mmol/l阳性对照组21.0mmol/l14.9mmol/l7.8mmol/l实施例组21.1mmol/l15.8mmol/l8.4mmol/l对比例组21.2mmol/l17.5mmol/l11.6mmol/l茅岩莓茶组21.0mmol/l19.4mmol/l17.7mmol/l2、品质评价(1)产品的评价指标主要为感官评价，通过专业人员分别对饮料的口感、香味、组织形态、色泽等进行评价，口感上，酸甜适中，口味柔和细腻无异味，具有淡的石斛香味，组织形态均匀一致，无沉淀，流动性好，色泽鲜亮，较均匀。(2)微生物指标参照gb4789.2—2016和gb4789.3—2016分别对饮料的菌落总数和大肠杆菌落的总数进行测定；饮料中菌落总数为14cfu/ml，满足gb/t4789.3—2016规定的菌落总数≤20cfu/ml，大肠菌群未检出，均符合国家卫生标准，同时致病菌未检出。最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。当前第1页1 2 3
技术领域：
，具体涉及一种霍山石斛功能性饮料的制备方法。
背景技术：
：霍山石斛(dendrobiumhuoshanense)俗称米斛，是兰科石斛属的草本植物，国家一级保护植物，为中国特有，主产于大别山区的安徽省霍山县，大多生长在云雾缭绕的悬崖峭壁崖石缝隙间和参天古树上，生于山地林中树干上和山谷岩石上；其茎直立，肉质，不分枝，具3-7节，淡黄绿色，有时带淡紫红色斑点，干后淡黄色；叶革质，2-3枚互生于茎的上部，斜出，舌状长圆形；具1-2朵花，花淡黄绿色；花瓣卵状长圆形，先端钝，具5条脉；唇瓣近菱形，长和宽约相等。现有研究表明，霍山石斛含有多糖、石斛碱在内的多种生物碱、蛋白质及人体所需的20种氨基酸，经中国医学科学院药用植物研究所鉴定：多糖含量为18.974％，总生物碱含量为0.030％，具有生津益明、清热养阴、消炎止痛、清音明目功能及抗癌、防癌、抗衰老、抗辐射和增强免疫力等功效，尤其是石斛多糖具有极高的保健和医疗作用，其多糖成分与增强机体免疫机能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、降血糖等药理作用有着密切联系；霍山石斛中不仅具有丰富的多糖成分通过抗氧化作用或增强机体细胞免疫功能间接抗肿瘤作用，还具有直接的抗癌活性物质基础是其含有的菲类和联苄类化合物，对肿瘤细胞的细胞周期以及细胞周期蛋白表达有影响，使癌细胞的增殖受到抑制，药用价值极高。现有对石斛多糖的提取方法大都需要进行破壁，但包括剪切破壁和化学破壁在内的破壁方法过于强硬，容易破坏石斛原有的多糖结构，影响生物活性。技术实现要素：针对上述问题，本发明提供一种霍山石斛提取物的制备方法以及含有所述霍山石斛提取物的饮料。本发明的目的采用以下技术方案来实现：一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物。优选的，所述茅岩莓茶提取物的添加量为1-2份。优选的，所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得。优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶被吸附固定在空心载体上。进一步优选的，所述空心载体为二氧化硅包覆的两亲聚氨基酸共聚物，其制备方法为：s1、按质量份数，称取纤维素酶或果胶酶5-20份、海藻酸钠10-25份、去离子水100-250份，充分搅拌溶解得到混合溶液，将所述混合溶液滴加到质量浓度为1％～10％的可溶性钙盐溶液中，待滴加结束后，将形成的复合凝胶微球在所述可溶性钙盐溶液中继续浸泡至完全固化，滤出所述复合凝胶微球，洗涤后于70℃～90℃温度干燥2-6h；s2、按质量份数，称取亲水性氨基酸或疏水性氨基酸5份，加入四氢呋喃50份，充分搅拌溶解后于60-70℃下搅拌回流20-30min，加入碳酸三氯甲基酯5份，继续回流20-60min，再以氮气置换反应体系中空气，加入石油醚结晶，晶体以石油醚洗涤，得到n-酸酐化的亲水性氨基酸或疏水性氨基酸；s3、n-酸酐化的亲水性氨基酸和n-酸酐化的疏水性氨基酸以质量比2-3:1的比例混合，得到混合晶体，以氮气置换反应体系中空气，加入混合晶体50倍质量的硝基苯，加入混合晶体质量0.5％的三乙胺，搅拌反应24-48h，加入s1制备的复合凝胶微球，所述复合凝胶微球与混合晶体的质量比为3-7:1，继续搅拌反应24-36h，反应完成后，边搅拌边缓慢滴加乙醚，所述乙醚与所述硝基苯的质量比为1-2:1，滤出微球，分别以乙醚、乙醇洗涤，再分散在与所述硝基苯等量的70％的乙醇水溶液中，得到溶液a；s4、按体积比1：5混合正硅酸乙酯和无水乙醇，得到溶液b，边搅拌边缓慢滴加至所述溶液a中，所述溶液a与溶液b的滴加体积比为10:1，滴加完毕后滤出微球，分别以无水乙醇和蒸馏水洗涤；s5、配制溶液c，所述溶液c为氯化钠和盐酸的混合溶液，其中，氯化钠浓度为0.1-0.2mol/l，盐酸浓度为0.01-0.02mol/l，将s4制得的微球浸入溶液c，所述溶液c的量以能将形成的复合凝胶微球完全浸没为限，缓慢搅拌2-4h，滤出得到所述空心载体。优选的，所述亲水性氨基酸为谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或半胱氨酸，所述疏水性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸。优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶的吸附固定方法为：将所述空心载体用无水乙醇浸泡12h，再用去离子水洗涤，干燥后称取1份加入反应器中，加入10g/l的果胶酶或纤维素酶溶液，水浴45-50℃下保温，搅拌吸附4-6h后，滤出产物，缓冲溶液洗涤，冷藏备用。本发明的另一目的在于提供一种包括前述霍山石斛提取物的饮料。优选的，所述饮料具有如下的重量组分组成：水30-50份，霍山石斛提取物16-24份，葛根提取液6-10份，鸡蛋花提取液2-7份，人参花提取液2-7份，冰糖5-15份，柠檬酸0.5-1.5份，柠檬酸钠0.2-0.8份，抗坏血酸0.5-1份，海藻酸钠0.1-0.6份；其制备方法为：按比称取各配料，混合为调配液，将调配液在均质机中预热至55℃，调整压力至22mpa，均质处理10-20min，得到均质液，将均质液加热至80℃杀菌15min后快速进行灌装密封。本发明的有益效果为：本发明通过冷冻干燥的前处理，使得石斛细胞内水分发生膨胀，可以降低细胞壁的保护作用，减少破壁阻力；通过加入茅岩莓茶提取物辅助提取霍山石斛多糖，显著提高了提取多糖的生物活性，结合温和破壁的方法，减少提取方法对多糖的破坏，最大程度地保留霍山石斛的原始功效。具体实施方式结合以下实施例对本发明作进一步描述。本发明的实施例涉及一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物；石斛花是石斛的花朵，具有清热、解郁、养胃的功效，是既可作为药物又可作为食材的花卉原料，本发明将其与石斛茎一起提取，可以全面地保留石斛的保健功效，提高经济价值；水蒸汽熏蒸可以对原料进行消毒杀菌，同时活化植物细胞，有利于后续的提取；细胞壁是植物重要的特征性结构，包括中胶层、初生细胞壁和次生细胞壁，由多糖聚合物纤维素、半纤维素、果胶质以及苯丙烷类聚合物木质素构成，各成分相互作用交联形成网络结构，赋予细胞壁良好的机械强度，现有对石斛多糖的提取方法大都需要进行破壁，但包括剪切破壁和化学破壁在内的破壁方法过于强硬，容易破坏石斛原有的多糖结构，影响生物活性，本发明采用温和的破壁方法，可以减小提取过程对多糖生物活性的影响，其中，霍山石斛鲜条采用冷冻干燥，经过冷冻后的石斛细胞内水分发生膨胀，可以降低细胞壁的保护作用，减少破壁阻力；针对细胞壁组分，采用纤维素酶和果胶酶进行酶解，避免强硬的破壁方法；茅岩莓茶产于茅岩河两岸，属葡萄科藤本植物，现有研究表明，茅岩莓茶含有亮氨酸、异氨酸、蛋氨酸等人体必须的17种氨基酸和钾、钙、铁、锌、镁等14种微量元素，特别是富含多种活性黄酮及其衍生物，具有清热解毒、镇痛消肿、降脂降压、润喉止咳、调节提高人体免疫力的功效，对金黄葡萄球菌、甲、乙型链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌等也有很强的杀灭能力；茅岩莓茶味道独特，回味甘甜；以茅岩莓茶提取物与霍山石斛复配可以提高功效，调节风味，发明人注意到，加入茅岩莓茶提取物可以辅助提取霍山石斛多糖，并显著提高提取多糖的生物活性，最大程度地保留霍山石斛的原始功效，推测这可能与茅岩莓茶中富含的多种黄酮化合物及黄酮衍生物有关；所述茅岩莓茶提取物可按以下步骤制备得到：采用自然生长的茅岩莓茶，经干燥后采用水提取法或者乙醇提取法得到茅岩莓茶提取液，再经喷雾干燥法得到茅岩莓茶提取物；优选的，所述茅岩莓茶提取物的添加量为1-2份；优选的，所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得；上述提取方法可以减小提取过程对多糖生物活性的影响，但多糖提取率较低，为更进一步地充分保留霍山石斛的功效成分，本发明对提取滤渣进行二次提取，其中，以氯化胆碱为氢键受体和以山梨醇为氢键供体组成的混合物间可以形成强烈的氢键作用，具有类似离子液体的溶剂性质，对多种提取物具有良好的溶解性；优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶被吸附固定在空心载体上；进一步优选的，所述空心载体为二氧化硅包覆的两亲聚氨基酸共聚物，其制备方法为：s1、按质量份数，称取纤维素酶或果胶酶5-20份、海藻酸钠10-25份、去离子水100-250份，充分搅拌溶解得到混合溶液，将所述混合溶液滴加到质量浓度为1％～10％的可溶性钙盐溶液中，待滴加结束后，将形成的复合凝胶微球在所述可溶性钙盐溶液中继续浸泡至完全固化，滤出所述复合凝胶微球，洗涤后于70℃～90℃温度干燥2-6h；s2、按质量份数，称取亲水性氨基酸或疏水性氨基酸5份，加入四氢呋喃50份，充分搅拌溶解后于60-70℃下搅拌回流20-30min，加入碳酸三氯甲基酯5份，继续回流20-60min，再以氮气置换反应体系中空气，加入石油醚结晶，晶体以石油醚洗涤，得到n-酸酐化的亲水性氨基酸或疏水性氨基酸；s3、n-酸酐化的亲水性氨基酸和n-酸酐化的疏水性氨基酸以质量比2-3:1的比例混合，得到混合晶体，以氮气置换反应体系中空气，加入混合晶体50倍质量的硝基苯，加入混合晶体质量0.5％的三乙胺，搅拌反应24-48h，加入s1制备的复合凝胶微球，所述复合凝胶微球与混合晶体的质量比为3-7:1，继续搅拌反应24-36h，反应完成后，边搅拌边缓慢滴加乙醚，所述乙醚与所述硝基苯的质量比为1-2:1，滤出微球，分别以乙醚、乙醇洗涤，再分散在与所述硝基苯等量的70％的乙醇水溶液中，得到溶液a；s4、按体积比1：5混合正硅酸乙酯和无水乙醇，得到溶液b，边搅拌边缓慢滴加至所述溶液a中，所述溶液a与溶液b的滴加体积比为10:1，滴加完毕后滤出微球，分别以无水乙醇和蒸馏水洗涤；s5、配制溶液c，所述溶液c为氯化钠和盐酸的混合溶液，其中，氯化钠浓度为0.1-0.2mol/l，盐酸浓度为0.01-0.02mol/l，将s4制得的微球浸入溶液c，所述溶液c的量以能将形成的复合凝胶微球完全浸没为限，缓慢搅拌2-4h，滤出得到所述空心载体；优选的，所述亲水性氨基酸为谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或半胱氨酸，所述疏水性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸；优选的，所述纤维素酶和所述果胶酶的吸附固定方法为：将所述空心载体用无水乙醇浸泡12h，再用去离子水洗涤，干燥后称取1份加入反应器中，加入10g/l的果胶酶或纤维素酶溶液，水浴45-50℃下保温，搅拌吸附4-6h后，滤出产物，缓冲溶液洗涤，冷藏备用；当前生物酶的工业应用都是直接加入到生产中，但是以这种方式添加的生物酶很难回收再利用；为了提高使用率、降低生产成本，出现了固定化酶技术；固定化酶技术是一种利用载体材料将酶束缚或限制于一定区域内，进行特有的催化反应，并可回收及重复利用的技术。目前，固定化酶的载体材料主要有以下几类：无机载体(如玻璃、硅凝胶、蒙脱土等)、磁性高分子微球(如聚苯乙烯磁性微球)、天然高分子载体(如海藻酸钠、壳聚糖和合成高分子载体(如聚丙烯酰胺、聚苯乙烯)等；以上述材料制备的固定化酶酶活力较低或机械稳定性不佳，本发明以两亲性的聚氨基酸共聚物为载体，基于氨基酸良好的生物相容性和两亲性聚氨基酸多的活性位点，提高了纤维素酶和果胶酶的负载效率，其中，利用海藻酸钠在二价金属离子溶液中的凝胶化作用，制备分散有纤维素酶或果胶酶的海藻酸盐凝胶微球，同时以其为造孔剂和导向剂，在表面引导生长具有两亲性的聚氨基酸共聚物，再通过凝胶化的逆过程除去凝胶微球，制得空心微球，而根据选择的不同酶种类(纤维素酶或果胶酶)，可以形成具有特异性酶种类亲和性的空心微球，提高负载率和负载活性，外层包覆的二氧化硅层可以提高空心微球的机械性能；所述空心载体具有较高的负载量和负载稳定性，其最大负载量可达0.24g/g，较常规载体负载量高10-18％，在酶活大于80％起始酶活下可重复使用8次以上。本发明的另一目的在于提供一种包括前述霍山石斛提取物的饮料；优选的，所述饮料具有如下的重量组分组成：水30-50份，霍山石斛提取物16-24份，葛根提取液6-10份，鸡蛋花提取液2-7份，人参花提取液2-7份，冰糖5-15份，柠檬酸0.5-1.5份，柠檬酸钠0.2-0.8份，抗坏血酸0.5-1份，海藻酸钠0.1-0.6份；其制备方法为：按比称取各配料，混合为调配液，将调配液在均质机中预热至55℃，调整压力至22mpa，均质处理10-20min，得到均质液，将均质液加热至80℃杀菌15min后快速进行灌装密封；本发明通过多种提取物的调配复合制得所述霍山石斛功能性饮料，具有清热祛火、降压降脂、提高免疫力、保肝护肝的功效，非常适宜经常熬夜、用脑、烟酒过度，体虚乏力的人群经常饮用，且风味独特，营养丰富，活性成分含量高，不含各种人工合成的食品添加剂及合成色素，符合大众绿色健康的消费需求。实施例1一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物1-2份，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物；所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得。实施例2一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，加入茅岩莓茶提取物1-2份，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理在所述浓缩液中再次加入茅岩莓茶提取物1-2份，入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液；s4、取s2分离得到的滤渣，加入提取溶剂进行二次提取，提取得到的提取液经透析后减压浓缩得到第二提取液；s5、将第一提取液与第二提取液混合，得到所述霍山石斛提取物；所述提取溶剂为氯化胆碱、山梨醇与水稀释的共熔溶剂，其制备方法为：将氯化胆碱和山梨醇进行真空干燥除水，真空干燥温度70℃，压力-0.07mpa，真空干燥时间48h，得到干燥原料，再按摩尔比例1：1称取氯化胆碱和山梨醇，搅拌混合均匀后密封，于80℃温度下搅拌反应至形成均一、透明的液体，待自然冷却至室温后，得到均一、透明的黏重液体，再与水按体积比1:1-3稀释制得；所述纤维素酶和所述果胶酶被吸附固定在空心载体上；所述空心载体为二氧化硅包覆的两亲聚氨基酸共聚物，其制备方法为：s1、按质量份数，称取纤维素酶或果胶酶5-20份、海藻酸钠10-25份、去离子水100-250份，充分搅拌溶解得到混合溶液，将所述混合溶液滴加到质量浓度为1％～10％的可溶性钙盐溶液中，待滴加结束后，将形成的复合凝胶微球在所述可溶性钙盐溶液中继续浸泡至完全固化，滤出所述复合凝胶微球，洗涤后于70℃～90℃温度干燥2-6h；s2、按质量份数，称取亲水性氨基酸或疏水性氨基酸5份，加入四氢呋喃50份，充分搅拌溶解后于60-70℃下搅拌回流20-30min，加入碳酸三氯甲基酯5份，继续回流20-60min，再以氮气置换反应体系中空气，加入石油醚结晶，晶体以石油醚洗涤，得到n-酸酐化的亲水性氨基酸或疏水性氨基酸；s3、n-酸酐化的亲水性氨基酸和n-酸酐化的疏水性氨基酸以质量比2-3:1的比例混合，得到混合晶体，以氮气置换反应体系中空气，加入混合晶体50倍质量的硝基苯，加入混合晶体质量0.5％的三乙胺，搅拌反应24-48h，加入s1制备的复合凝胶微球，所述复合凝胶微球与混合晶体的质量比为3-7:1，继续搅拌反应24-36h，反应完成后，边搅拌边缓慢滴加乙醚，所述乙醚与所述硝基苯的质量比为1-2:1，滤出微球，分别以乙醚、乙醇洗涤，再分散在与所述硝基苯等量的70％的乙醇水溶液中，得到溶液a；s4、按体积比1：5混合正硅酸乙酯和无水乙醇，得到溶液b，边搅拌边缓慢滴加至所述溶液a中，所述溶液a与溶液b的滴加体积比为10:1，滴加完毕后滤出微球，分别以无水乙醇和蒸馏水洗涤；s5、配制溶液c，所述溶液c为氯化钠和盐酸的混合溶液，其中，氯化钠浓度为0.1-0.2mol/l，盐酸浓度为0.01-0.02mol/l，将s4制得的微球浸入溶液c，所述溶液c的量以能将形成的复合凝胶微球完全浸没为限，缓慢搅拌2-4h，滤出得到所述空心载体；所述亲水性氨基酸为谷氨酸，所述疏水性氨基酸为亮氨酸；所述纤维素酶和所述果胶酶的吸附固定方法为：将所述空心载体用无水乙醇浸泡12h，再用去离子水洗涤，干燥后称取1份加入反应器中，加入10g/l的果胶酶或纤维素酶溶液，水浴45-50℃下保温，搅拌吸附4-6h后，滤出产物，缓冲溶液洗涤，冷藏备用。实施例3一种霍山石斛功能性饮料，其制备方法为：按比称取各配料，其重量组分组成为：水30-50份，霍山石斛提取物16-24份，葛根提取液6-10份，鸡蛋花提取液2-7份，人参花提取液2-7份，冰糖5-15份，柠檬酸0.5-1.5份，柠檬酸钠0.2-0.8份，抗坏血酸0.5-1份，海藻酸钠0.1-0.6份，将各配料混合为调配液，将调配液在均质机中预热至55℃，调整压力至22mpa，均质处理10-20min，得到均质液，将均质液加热至80℃杀菌15min后快速进行灌装密封。对比例一种霍山石斛提取物的制备方法，包括以下步骤：s1、前处理对采摘的霍山石斛和霍山石斛花进行挑选，清洗后用水蒸汽熏蒸10-20min，置于冷冻干燥机冷冻干燥48h后，粉碎过100目筛，得到冻干粉；s2、破壁提取按重量份数，称取所述冻干粉1份，加入15-20份软化水，加入每克干粉18-30u的纤维素酶和每克干粉10-14u的果胶酶，在50-55℃水浴条件下，搅拌提取2-4h，分离滤液和滤渣，滤液在50-55℃下减压浓缩，灭酶处理后得到浓缩液；s3、低温处理将所述浓缩液入低温管线处理，依次保持温度5℃10min、0℃10min，过滤除去不溶物，得到第一提取液。实验例1、霍山石斛提取物降血糖活性对比测试实施例1、对比例制备的第一提取液以及茅岩莓茶提取物的降血糖活性：km小鼠适应性喂养1周后，禁食12h，正常饮水，称取体重，腹腔注射1％四氧嘧啶300mg/kg，72h后尾静脉取血，测空腹血糖，选择血糖值大于15mmol/l的小鼠为糖尿病模型鼠；将模型鼠随机分为模型组、对比例组、实施例组、茅岩莓茶组和阳性对照组，以正常小鼠为正常组，每组10只，阳性对照组每天以20mg/kg的阿卡波糖溶液灌胃，实施例组和对比例组每天以200mg/kg(按多糖含量计)的第一提取液(分别由实施例1和对比例制备)灌胃，茅岩莓茶组以实施例组灌胃的茅岩莓茶提取物含量进行灌胃，模型组和正常组以等体积的生理盐水灌胃，正常饮食，每两周取小鼠尾静脉血，测定空腹血糖，实验周期为4周，检测结果如下：平均血糖值0周2周4周正常组5.2mmol/l5.2mmol/l5.2mmol/l模型组21.1mmol/l21.2mmol/l21.0mmol/l阳性对照组21.0mmol/l14.9mmol/l7.8mmol/l实施例组21.1mmol/l15.8mmol/l8.4mmol/l对比例组21.2mmol/l17.5mmol/l11.6mmol/l茅岩莓茶组21.0mmol/l19.4mmol/l17.7mmol/l2、品质评价(1)产品的评价指标主要为感官评价，通过专业人员分别对饮料的口感、香味、组织形态、色泽等进行评价，口感上，酸甜适中，口味柔和细腻无异味，具有淡的石斛香味，组织形态均匀一致，无沉淀，流动性好，色泽鲜亮，较均匀。(2)微生物指标参照gb4789.2—2016和gb4789.3—2016分别对饮料的菌落总数和大肠杆菌落的总数进行测定；饮料中菌落总数为14cfu/ml，满足gb/t4789.3—2016规定的菌落总数≤20cfu/ml，大肠菌群未检出，均符合国家卫生标准，同时致病菌未检出。最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。当前第1页1 2 3
起点商标作为专业知识产权交易平台，可以帮助大家解决很多问题，如果大家想要了解更多知产交易信息请点击 【在线咨询】或添加微信 【19522093243】
与客服一对一沟通，为大家解决相关问题。
此文章来源于网络,如有侵权,请联系删除
热门咨询
tips