一种富勒烯发芽谷物及其制备方法和应用与流程
2021-01-07 10:01:25|389|起点商标网
本发明属于富勒烯应用领域,具体涉及一种富勒烯发芽谷物及制备方法和应用。
背景技术:
:富勒烯在抗肿瘤活性、抗菌性、抗氧化、提高免疫力、抗衰老等方面具有优异的生物活性,在药物载体、生物医药和农业生物工程方面具有宽阔应用前景。谷物作为重要的食品原料和添加剂,其功能性成分和生物活性物质对后续产品开发研究和精深加工有着重要的影响。目前未见有富勒烯对谷物发芽、功能活性成分的报道,也未见通过对在浸种阶段添加富勒烯,控制抗氧化关键酶改进对发芽谷物质量的研究。技术实现要素:本发明旨在提供一种能够提高发芽谷物营养价值的富勒烯发芽谷物及制备方法和应用,该富勒烯发芽谷物以谷物作为活性载体,在谷物浸泡和发芽阶段添加水溶性富勒烯,或提高发芽率、整齐度、发芽质量、生长速度,或促进酚类酶活力、优化改善谷物结构和属性,从而提高发芽谷物的附加值,并为生产厂家提供含有富勒烯的优质原料,产品质量稳定性和均一性高,安全可靠。为了实现上述发明目的,本发明提供了一种富勒烯发芽谷物的制备方法,其中,该方法包括以下步骤:s1、配制水溶性富勒烯水溶液:将水溶性富勒烯超声分散于水中,调节ph值至6-10,得到浓度为10-500μg/ml的水溶性富勒烯水溶液;s2、浸泡:将谷物进行浸泡,所述浸泡的温度为14-18℃,且所述浸泡工艺包括依次进行的湿浸4-8h、干浸14-18h、湿浸3-7h、干浸1-5h,在至少一个湿浸阶段采用水溶性富勒烯水溶液作为浸泡液,得到浸泡谷物;s3、发芽:将步骤s2所得浸泡谷物沥干,之后置于温度为16-20℃、湿度为85-95%的发麦箱中进行发芽,发芽过程中每隔0.5-1.5h喷淋水溶性富勒烯水溶液并翻动,单次喷淋时间为220-260s,发芽时间为96-120h,得到发芽谷物;s4、后处理:将步骤s3所得发芽谷物经烘干、冷却、粉碎之后,得到富勒烯发芽谷物。在本发明中,所述水溶性富勒烯水溶液的浓度为10-500μg/ml,例如,可以为10、20、30、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500μg/ml等,优选为10-100μg/ml。当浓度低于10μg/ml时,提高谷物营养成分的效果有限;当浓度超过500μg/ml时,水溶性富勒烯水溶液具有一定的酱紫色,对浅色发芽谷物具有一定的着色和附色影响,并且谷物发芽率、整齐度、生长速度也会受到抑制。所述水溶性富勒烯水溶液用于浸种和喷洒发芽谷物叶芽和根芽,需要满足的条件是,能使水溶性富勒烯在发芽谷物中进行累积,促进提高氨基酸、维生素等有效成分的溶出,可以混合有例如矿物质(微量元素、常量元素)、糖类、植物生长物质(植物生长素、植物生长调节剂)。所述水溶性富勒烯水溶液的ph值为6.0-10.0,谷物种子发芽适在弱酸性和中性环境,优选ph值为6.0-8.0。所述水溶性富勒烯粒径小,并且具有水溶性和生物相容性,能够渗透进入种子内部调节,在促进萌发进程、水分吸收和生物量积累(调节植物生长发育和提高生产效率)等方面具有广阔的应用潜力。采用发芽吸收法制备富勒烯麦芽,利用谷物发芽进行富勒烯富集和促进生物量积累,能够改进发芽后的谷物属性并提高营养价值。在一种优选实施方式中,所述水溶性富勒烯选自羧基化富勒烯、羧基化富勒烯和氨基化富勒烯中的至少一种;所述水溶性富勒烯的母体结构选自c60、c70、c76、c78、c84和内嵌结构富勒烯中的至少一种。在一种优选实施方式中,步骤s1中,所述超声分散的条件包括功率为100-300w,频率为10-30khz,温度为15-30℃,时间为30-60min。在一种优选实施方式中,步骤s2和步骤s3中,所述浸泡和发芽过程中水溶性富勒烯水溶液的用量使得每克发芽谷物中水溶性富勒烯的剂量质量百分比为1.47-35.2%id/g。在一种优选实施方式中,步骤s2中,所述谷物选自禾谷类、豆菽类和薯类中的至少一种。其中,所述禾谷类包括稻类(籼稻、粳稻、糥稻)、麦类(小麦、大麦、燕麦、黑麦、荞麦)、玉米、高粱、粟、黍、黄米等。所述豆菽类包括大豆、蚕豆、豌豆、绿豆、红小豆、芸豆等。所述薯类包括甘薯、马铃薯、山药、芋、木薯等。在一种优选实施方式中,步骤s2中,所述谷物在使用前经过精选完成分级,除去尘土、秸秆、铁这些杂质,除去破损粒、病粒、瘪粒、烂粒和其他异形粒,保留粒径≥2.5mm的饱满、大小均匀的颗粒,谷物纯度达到99.5%以上,之后用3-7%的次氯酸钠水溶液浸泡20-40min,捞出表面漂浮谷物,并用ddh2o清洗3-5遍。在一种优选实施方式中,步骤s4中,所述烘干包括依次进行的如下步骤:40℃±2℃/4h,45℃±2℃/10h,50℃±2℃/4h,60℃±2℃/2h,65℃±2℃/3h,72℃±2℃/2h,85℃±2/2h。所述发芽谷物至少在水溶性富勒烯中浸泡或喷洒发芽,通过放置在40℃以上温度环境下或使其干燥,或减少多余水分,停止麦芽生长反应和酶分解作用。本发明还提供了由上述方法制得的富勒烯发芽谷物。此外,本发明还提供了所述富勒烯发芽谷物作为食品原材料、保健品原材料、化妆品原材料或家畜饲料添加剂的应用。其中,所述食品原材料适用于酒类行业(啤酒麦芽),烘烤行业(烘焙原料、糕点、面包、饼干、方便食品),食品添加剂(品质改良剂、着色剂、甜味剂、营养强化剂、护色剂、食用香精),糖果(麦芽软糖、硬糖),休闲食品(谷物膨化类),调味品(麦芽根酱油、麦芽醋、汤料),饮料行业(麦芽茶、麦芽汁、固体冲剂类)等。所述保健品原材料包括膳食补充剂、营养调节剂、糖代谢改善剂、脂质代谢改善剂等,具有调节免疫能力,降血脂,降血糖,助消化作用,抗氧化作用,防衰老,对肝脏有保护作用。本发明的有益效果:采用本发明提供的方法获得的富勒烯发芽谷物能够促进有效成分的溶出和生物量的积累,其氨基酸、维生素、还原糖和膳食纤维的含量均高于未发芽和普通发芽谷物中各活性成分含量(是未发芽的谷物3倍左右,是淡水或去离子水或无菌水处理发芽谷物的1.5倍左右),具有更高的营养成分,改善谷物属性,增加有益功能性成分和营养成分的吸收,增强大麦的营养价值和保健效能,为后续用于下游相关产品的开发研究和精深加工提供了可能性,可作为富含富勒烯的发芽谷物原料使用。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例旨在用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。以下制备例、实施例和对比例中:苏麦由江苏沿海地区农业科学研究所盐城市农业科学院提供。制备例1:稳定同位素13c标记的水溶性富勒烯的制备方法(1)按照参考文献[1]和参考文献[2]公开的直流电弧放电法合成稳定同位素13c标记的富勒烯,具体过程如下:将稳定同位素13c粉(99%)和普通碳粉(98.5%)以一定比例混合,装入空心碳棒(长12.0cm,直径1.0cm)为阳极、光谱纯石墨棒为阴极的电弧放电炉中。电弧放电炉为直流电弧放电纳米材料合成反应炉(冷却方式为水冷)。放电前,将系统预抽真空至5pa,充入高纯惰性气体氩气200torr(1torr=1.33×102pa,下同),设置电流135a,先将阴阳极短路,对碳棒加热3min,以除去吸附在碳棒中的氧气或其他杂质。精确控制放电条件:充入高纯惰性气体氦气,维持135torr,两电极间距离约4mm,电流110a,有效电压27v。放电完毕后,冷却、扫灰、收集碳灰,二硫化碳回流10h,过滤,收集滤液,旋转蒸干,甲苯超声溶解。将溶液采用0.22m的微孔滤膜过滤,滤液进行高效液相色谱分离和纯化,按照色谱峰收集馏分进行质谱测定,获得纯度大于97.5%的稳定同位素13c标记的富勒烯(13c-c60),以稳定同位素质谱测定稳定同位素的标记量。(参考文献[1]:阮龙飞,常雪灵,孙宝云,等.,稳定同位素13c标记c60的制备及光谱性质[j].,科学通报,2014,059(010):905-912.;参考文献[2]:李红亮,汪称龙,杨胜韬,etal.稳定同位素13c标记富勒醇结构的探索[j].科学通报,2017(16):50-56.)。(2)采用tbah胺碱催化反应合成法制得具有良好水溶性的13c标记羟基化富勒烯(13c-c60-oh),具体地:在圆底烧瓶中加入10ml20mol/l的naoh溶液,在磁力搅拌下,滴加tbah溶液,同时滴加20ml含有80mg稳定同位素13c标记的富勒烯的甲苯溶液(4mg/ml),搅拌进行反应,静置分层,之后采取分液分离、过滤、水溶,再加入甲醇使之沉淀,反复3-4次,离心及真空干燥,制得干燥粉末。(3)通过红外(ir)和x射线光电子能谱(xps)进行表征可知,13c-c60-oh样品具有30-40个羟基修饰;13c-c60-oh的水溶液稳定超过3个月没有沉淀;(4)通过稳定同位素比例质谱仪(irms)测量13c-c60-oh的13c丰度为17.0712%,13c-c60-oh作为13c稳定同位素示踪剂,对植物中13c稳定羟基化富勒烯的生物分布特征进行定量分析。实施例1该实施例用于说明本发明提供的富勒烯麦芽的制备方法。s1、水溶性富勒烯溶液配制:将制备例1所得13c-c60-oh超声分散于水中,得到ph值为6-8且浓度为10μg/ml的13c-c60-oh水溶液;s2:浸泡:选择纯度高、品质优、颗粒整齐苏麦作为原料,所选苏麦籽粒饱满,经分级粒径≥2.5mm占85%以上,蛋白质含量10.0-14.0%,含水率9.0-12.0%,干粒重35-48%,三天发芽率≥95%,五天发芽率≥97%。所述苏麦在使用前经过精选完成分级,除去尘土、秸秆、铁这些杂质,除去破损粒、病粒、瘪粒、烂粒和其他异形粒,保留粒径≥2.5mm的饱满、大小均匀的颗粒,苏麦纯度达到99.5%以上。称取1kg精选苏麦,用5%的次氯酸钠浸泡30min,捞出表面浮麦,并用去离子水(ddh2o)清洗4遍。采用“浸水断水法”进行浸麦处理,浸麦用水ph值6.5-8.0,转速2600r/min,风量540(m3)/h。浸麦工艺如下:在16℃下,湿浸6h-干浸16h-湿浸5h-干浸3h,浸麦总时间为30h,其中,水浸11h,干浸19h,恒温摇匀浸麦度40-42%,露点率为50%,在最后一次湿浸阶段,加入浓度10μg/ml的13c-c60-oh水溶液进行浸麦,浸麦完毕后取出浸渍大麦进入发芽阶段。s3、发芽:将步骤s2制得浸渍大麦沥干后,置于温度18℃、湿度90%的发麦箱中进行发芽,发芽过程中定时喷淋和翻麦,发芽时间为100h,喷淋采用的溶液为浓度10μg/ml的13c-c60-oh水溶液,每隔1h喷淋一次,单次喷淋时间为250s,每隔24小时翻麦一次,得到绿麦芽;所述绿麦芽的水分含量50±1%,平均叶芽长度为麦粒长的3/5-4/5,发芽率达到97%以上。s4、后处理:从步骤s3制得的绿麦芽中分离出叶芽、麦粒和根芽,并分别置于烘干箱,按照以下工艺进行焙焦:40℃/4h,45℃/10h,50℃/4h,60℃/2h,65℃/3h,72℃/2h,85℃/2h,得到水分含量为5%以下的干燥大麦麦芽,冷却后粉碎,过100目筛,得到富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉。实施例2在实施例2中,除了将浸麦和发芽阶段中13c-c60-oh水溶液的浓度由10μg/ml调整为25μg/ml之外,其余条件与实施例1相同,得到富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉。实施例3在实施例3中,除了将浸麦和发芽阶段中13c-c60-oh水溶液的浓度由10μg/ml调整为50μg/ml之外,其余条件与实施例1相同,得到富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉。对比例1按照实施例1的方法制备富勒烯麦芽,不同的是,将13c-c60-oh水溶液采用相同量的去离子水ddh2o替代,其余条件与实施例1相同,得到参比叶芽粉、参比麦粒粉和参比根芽粉。测试例1水溶性富勒烯在麦芽中富集检测(1)采用ftir对水溶性富勒烯以及实施例1-3中所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉进行ir吸收光谱测试。具体地,取样品2mg左右放入酒精擦洗净的研钵中,再加入一定量的kbr(样品:kbr=1:100),接着用研磨棒将放入的样品研磨成均匀粉末,接着用配套模具压制成透明的薄片,按要求放入ftir仪的观察室中,设置好相关试验参数,用红外光谱仪做全波段扫描(范围4000~400cm-1)。结果表明,实施例1-3中所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉中均出现了水溶性富勒烯的独特红外特征峰(3224.58cm-1处为-oh、1592.69cm-1处为-c=c-、1361.53cm-1处为-oh和1081.11cm-1处为-c-o-),在ftir光谱中存在碳原子的拉伸和c-oh拉伸峰(1585-1640cm-1),这些独特的ir特征可以证明这些样品中水溶性富勒烯(富勒醇)的存在。(2)实施例1-3中所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉中稳定同位素含量委托国家第三局海洋研究所测定。具体地,采用irms准确测量麦芽各组分(根芽、叶芽和麦粒干粉)样品的13c丰度,样品中13c-水溶性富勒烯的总含量按照(wangc,zhangh,ruanl,etal.bioaccumulationof13c-fullerenolnanomaterialsinwheat[j].environmentalence.nano,2016,3.)中公开的方法计算,采用spss17.0统计分析软件对数据进行单因素方差分析(one-wayanova)、多重比较(1lsd)相关分析,数据以平均值±标准误表示,显著性水平ɑ=0.05,具体计算过程如下:δ为稳定同位素自然丰度,以千分差(‰,permill)为单位;13c/12c是指样品中13c与12c含量的比值;m干重/m湿重是干燥前后的组织重量比;ωc是碳占样品干重的质量百分比;ω13c(nm)是13c-富勒醇中13c的质量分数;ω13c-富勒醇是样品(根、茎和叶)中13c质量百分数;%id/g或%id为大麦中根、茎和叶中13c-富勒醇的含量;剂量为处理样品所采用的富勒醇的浓度,μg/ml。麦芽各组织中的水溶性富勒烯的累积量见表1-1。从表1-1的结果可以看出,样品中13c-水溶性富勒烯的含量表示为每克组织的剂量的质量百分比(%id/g),约为1.47-35.2%/g。表1-1麦芽各组分对13c-富勒醇的富集测试例2水溶性富勒烯对麦芽发芽过程中营养物质变化的影响将实施例1所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组1试样,将实施例2所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组2试样,将实施例3所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组3试样。将对比例1所得参比叶芽粉、参比麦粒粉和参比根芽粉混合得到对照组1试样。将未发芽的苏麦粉碎后得到对照组2试样。(1)按照以下方法对其中各营养物质进行测定:还原糖含量参照gb5009.7-2016试验方法测定;蛋白质含量参照gb5009.5-2016试验方法测定;维生素b3(烟酸)含量参照gb5009.89-2016试验方法测定;维生素e含量参照gb5009.82-2016试验方法测定;r-氨基酸(gaba)含量参照ny/t2890-2016试验方法测定;谷胱甘肽含量参照文献(刘千,陈黎,胡用军,等.麦胚谷胱甘肽提取与含量测定方法研究[j].中国粮油学报,2012,27(10):104-108.)试验方法测定;六磷酸肌醇(ip6)含量参照gb1886.237-2016试验方法测定;不可溶性膳食纤维(idf)含量参照gb5009.88-2016试验方法测定。最终所得数据采用spss19.0和excel进行分析(p<0.05,单因素方差分析(one-wayanova)),数据采用k-s正态性检验。所得结果见表2-1。表2-1营养成分影响表从表2-1的结果可以看出,与对照组相比,使用水溶性富勒烯对发芽谷物能够提高还原糖、蛋白质、维生素b3、维生素e、gaba、谷胱甘肽、ip6以及idf的含量。(2)对氨基酸含量变化及氨基酸营养价值评价未发芽大麦、发芽大麦和水溶性富勒烯处理发芽大麦必须氨基酸和非必须氨基酸含量分别见表2-2和表2-3。在必需氨基酸中,大麦各蛋白组分亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、异亮氨酸含量比较高,具有较高营养价值。表2-2必需氨基酸含量变化浓度未发芽ck10μg/ml25μg/ml50μg/ml苯丙氨酸0.580.630.650.680.64赖氨酸0.420.430.470.440.52亮氨酸0.740.800.830.900.83异亮氨酸0.380.430.470.450.46表2-3非必需氨基酸含量变化浓度未发芽ck10μg/ml25μg/ml50μg/ml天冬氨酸0.630.690.820.690.86甘氨酸0.440.470.500.470.50丙氨酸0.450.550.580.580.56组氨酸0.240.270.270.320.28精氨酸0.520.560.570.580.57测试例3富勒烯大麦芽中酶活力的测定将实施例1所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组1试样(记为ds1),将实施例2所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组2试样(记为ds2),将实施例3所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组3试样(记为ds3)。将对比例1所得参比叶芽粉、参比麦粒粉和参比根芽粉混合得到对照组1试样。不同试样中a-淀粉酶、β-淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶采用苏州科铭生物技术有限公司试剂盒进行检测,所得结果见表3-1。表3-1麦芽中酶活力测定项目a-淀粉酶(ku/g)β-淀粉酶(ku/g)纤维素酶(ku/g)蛋白酶(ku/g)对照组15.6784±0.21bc1.5678±0.41c3.8925±0.51c82.96±4.76c试验组1,ds17.1452±0.34b2.5697±0.55b4.4571±0.46b125.84±2.28b试验组2,ds28.1235±0.52a3.4586±0.53a5.4865±0.39a145.85±3.59a试验组3,ds36.1246±0.35b2.4537±0.35b4.7386±0.91b126.78±4.29b以上结果表明,试验组麦芽中酶活力比对照组麦芽显著提高,且随样品浓度呈先升高后下降的趋势,顺序:试验组2>试验组1>对照组。试验组2中a-淀粉酶、β-淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶的含量分别为对照组的1.43倍、2.21倍、1.41倍和1.76倍。说明水溶性富勒烯处理可以刺激麦芽体内4种酶活的增加(a-淀粉酶、β-淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶),而对照组酶活性增加较慢。实施例4使用富勒烯水溶液制备的发芽燕麦、发芽小麦、发芽黑豆、红豆和发芽黄豆在实施例4中,除了用燕麦、小麦、黑豆、红豆和大豆代替大麦,以及使用去离子水处理作为对照组之外,其余条件与实施例2是相同的,得到目标的发芽谷物(发芽燕麦、发芽小麦、发芽黑豆、发芽红豆和发芽大豆)。测试例4对发芽谷物中营养物质变化的影响检测在实施例4中分别用水溶性富勒烯溶液和去离子水ddh2o发芽后的发芽燕麦、发芽小麦、发芽黑豆、发芽红豆和发芽大豆的营养成分含量,其结果见表4-1。表4-1营养成分影响表实施例5富勒烯啤酒的制备将实施例1所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合后作为酿造原料制备全麦芽啤酒。委托厦门澳德酿科技有限公司进行精酿生产,小试产量200l,分两次进行(富勒烯组200l和对照组200l)。具体地,各将44kg粉碎好的酿造原料和48℃的水以料水质量比为1:4.5进行投料,投料完成后升温到56℃下保温30min,再升温到65℃下保温1h,之后升温到至72℃下保温10min,接着升温到78℃,终止糖化过程至碘检合格为止;之后往麦汁中添加酒花1g/l并煮沸60min,麦汁煮沸后,趁热过滤以去除沉淀,滤液反复过滤操作3次,制得麦芽汁:当麦芽汁温度自然降至15℃时,添加麦芽汁质量5%的啤酒酵母进行发酵,发酵温度控制在20-22℃,当麦芽汁中糖度降至4-5°bx时,将罐压升至0.15mpa进行密封厌氧发酵至麦芽汁中双乙酰值降至0.08mg/l以下,得到嫩啤酒;将嫩啤酒降温至0-5℃后,酵母聚集沉底,酒液澄清,贮藏1-3个月使得啤酒成熟,离心、过滤除去啤酒酵母和沉淀,灌装,杀菌得到富勒烯啤酒。测试例5富勒烯啤酒理化指标及感官品评的检测(1)理化指标:酒发酵结束后,对啤酒成品(试验组为实施例5制成的富勒烯啤酒,对照组为以普通麦芽制成的富勒烯啤酒)进行的理化指标进行检测,主要包括啤酒的色度、浊度、酒精度、总酸、双乙酰等指标,同时对啤酒成品中的大肠杆菌及细菌总数进行了检测,所得结果见表5-1。其中,啤酒中酒精度的检测方法如下:在20℃时,根据相同体积酒精水溶液与纯水的质量之比,求得相对密度,然后查表得出啤酒中酒精含量的百分比,即为啤酒酒精度。表5-1啤酒理化指标理化指标对照组试验组原浓(°p)11.011.2外浓(%,m/m)33真浓(%,m/m)2.42.4酒精度(%,v/v)4.24.3外观发酵度(%)71.8272.32实际发酵度(%)58.8359.25色度(ebc)60.5460.58粘度1.2971.301总酸(ml/100ml)1.421.43双乙酰(ppm)0.050.05苦味质(bu)1719二氧化碳(%)0.430.50泡持(秒)261273浊度(ebc)0.140.15ph值4.184.21大肠杆菌数(个/l)00细菌总数(个/ml)4038(2)感官品评从香味、口感、色泽、泡沫4个方面对实施例5所得富勒烯啤酒进行评分,其中,香味、口感各占40分,感官评分标准见表5-2。表5-2感官评分标准实施例5所得富勒烯啤酒的感官品评结果如下,评分见表5-3:香气:具有明显的麦芽香,柑橘类、柚子皮、果味和蜂蜜香味。口感:口感口味纯正,酒体浑厚、柔和,苦味协调,杀口;微微的甜味,淡淡的苦味,酒体浓稠,口感醇厚,类似国外黑啤酒的醇、酯类香。色泽:颜色棕黄,酒液清亮,酵母、颗粒分布均匀;泡沫:泡沫细腻、丰富、挂杯持久。表5-3啤酒感官评分尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。当前第1页1 2 3 
背景技术:
:富勒烯在抗肿瘤活性、抗菌性、抗氧化、提高免疫力、抗衰老等方面具有优异的生物活性,在药物载体、生物医药和农业生物工程方面具有宽阔应用前景。谷物作为重要的食品原料和添加剂,其功能性成分和生物活性物质对后续产品开发研究和精深加工有着重要的影响。目前未见有富勒烯对谷物发芽、功能活性成分的报道,也未见通过对在浸种阶段添加富勒烯,控制抗氧化关键酶改进对发芽谷物质量的研究。技术实现要素:本发明旨在提供一种能够提高发芽谷物营养价值的富勒烯发芽谷物及制备方法和应用,该富勒烯发芽谷物以谷物作为活性载体,在谷物浸泡和发芽阶段添加水溶性富勒烯,或提高发芽率、整齐度、发芽质量、生长速度,或促进酚类酶活力、优化改善谷物结构和属性,从而提高发芽谷物的附加值,并为生产厂家提供含有富勒烯的优质原料,产品质量稳定性和均一性高,安全可靠。为了实现上述发明目的,本发明提供了一种富勒烯发芽谷物的制备方法,其中,该方法包括以下步骤:s1、配制水溶性富勒烯水溶液:将水溶性富勒烯超声分散于水中,调节ph值至6-10,得到浓度为10-500μg/ml的水溶性富勒烯水溶液;s2、浸泡:将谷物进行浸泡,所述浸泡的温度为14-18℃,且所述浸泡工艺包括依次进行的湿浸4-8h、干浸14-18h、湿浸3-7h、干浸1-5h,在至少一个湿浸阶段采用水溶性富勒烯水溶液作为浸泡液,得到浸泡谷物;s3、发芽:将步骤s2所得浸泡谷物沥干,之后置于温度为16-20℃、湿度为85-95%的发麦箱中进行发芽,发芽过程中每隔0.5-1.5h喷淋水溶性富勒烯水溶液并翻动,单次喷淋时间为220-260s,发芽时间为96-120h,得到发芽谷物;s4、后处理:将步骤s3所得发芽谷物经烘干、冷却、粉碎之后,得到富勒烯发芽谷物。在本发明中,所述水溶性富勒烯水溶液的浓度为10-500μg/ml,例如,可以为10、20、30、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500μg/ml等,优选为10-100μg/ml。当浓度低于10μg/ml时,提高谷物营养成分的效果有限;当浓度超过500μg/ml时,水溶性富勒烯水溶液具有一定的酱紫色,对浅色发芽谷物具有一定的着色和附色影响,并且谷物发芽率、整齐度、生长速度也会受到抑制。所述水溶性富勒烯水溶液用于浸种和喷洒发芽谷物叶芽和根芽,需要满足的条件是,能使水溶性富勒烯在发芽谷物中进行累积,促进提高氨基酸、维生素等有效成分的溶出,可以混合有例如矿物质(微量元素、常量元素)、糖类、植物生长物质(植物生长素、植物生长调节剂)。所述水溶性富勒烯水溶液的ph值为6.0-10.0,谷物种子发芽适在弱酸性和中性环境,优选ph值为6.0-8.0。所述水溶性富勒烯粒径小,并且具有水溶性和生物相容性,能够渗透进入种子内部调节,在促进萌发进程、水分吸收和生物量积累(调节植物生长发育和提高生产效率)等方面具有广阔的应用潜力。采用发芽吸收法制备富勒烯麦芽,利用谷物发芽进行富勒烯富集和促进生物量积累,能够改进发芽后的谷物属性并提高营养价值。在一种优选实施方式中,所述水溶性富勒烯选自羧基化富勒烯、羧基化富勒烯和氨基化富勒烯中的至少一种;所述水溶性富勒烯的母体结构选自c60、c70、c76、c78、c84和内嵌结构富勒烯中的至少一种。在一种优选实施方式中,步骤s1中,所述超声分散的条件包括功率为100-300w,频率为10-30khz,温度为15-30℃,时间为30-60min。在一种优选实施方式中,步骤s2和步骤s3中,所述浸泡和发芽过程中水溶性富勒烯水溶液的用量使得每克发芽谷物中水溶性富勒烯的剂量质量百分比为1.47-35.2%id/g。在一种优选实施方式中,步骤s2中,所述谷物选自禾谷类、豆菽类和薯类中的至少一种。其中,所述禾谷类包括稻类(籼稻、粳稻、糥稻)、麦类(小麦、大麦、燕麦、黑麦、荞麦)、玉米、高粱、粟、黍、黄米等。所述豆菽类包括大豆、蚕豆、豌豆、绿豆、红小豆、芸豆等。所述薯类包括甘薯、马铃薯、山药、芋、木薯等。在一种优选实施方式中,步骤s2中,所述谷物在使用前经过精选完成分级,除去尘土、秸秆、铁这些杂质,除去破损粒、病粒、瘪粒、烂粒和其他异形粒,保留粒径≥2.5mm的饱满、大小均匀的颗粒,谷物纯度达到99.5%以上,之后用3-7%的次氯酸钠水溶液浸泡20-40min,捞出表面漂浮谷物,并用ddh2o清洗3-5遍。在一种优选实施方式中,步骤s4中,所述烘干包括依次进行的如下步骤:40℃±2℃/4h,45℃±2℃/10h,50℃±2℃/4h,60℃±2℃/2h,65℃±2℃/3h,72℃±2℃/2h,85℃±2/2h。所述发芽谷物至少在水溶性富勒烯中浸泡或喷洒发芽,通过放置在40℃以上温度环境下或使其干燥,或减少多余水分,停止麦芽生长反应和酶分解作用。本发明还提供了由上述方法制得的富勒烯发芽谷物。此外,本发明还提供了所述富勒烯发芽谷物作为食品原材料、保健品原材料、化妆品原材料或家畜饲料添加剂的应用。其中,所述食品原材料适用于酒类行业(啤酒麦芽),烘烤行业(烘焙原料、糕点、面包、饼干、方便食品),食品添加剂(品质改良剂、着色剂、甜味剂、营养强化剂、护色剂、食用香精),糖果(麦芽软糖、硬糖),休闲食品(谷物膨化类),调味品(麦芽根酱油、麦芽醋、汤料),饮料行业(麦芽茶、麦芽汁、固体冲剂类)等。所述保健品原材料包括膳食补充剂、营养调节剂、糖代谢改善剂、脂质代谢改善剂等,具有调节免疫能力,降血脂,降血糖,助消化作用,抗氧化作用,防衰老,对肝脏有保护作用。本发明的有益效果:采用本发明提供的方法获得的富勒烯发芽谷物能够促进有效成分的溶出和生物量的积累,其氨基酸、维生素、还原糖和膳食纤维的含量均高于未发芽和普通发芽谷物中各活性成分含量(是未发芽的谷物3倍左右,是淡水或去离子水或无菌水处理发芽谷物的1.5倍左右),具有更高的营养成分,改善谷物属性,增加有益功能性成分和营养成分的吸收,增强大麦的营养价值和保健效能,为后续用于下游相关产品的开发研究和精深加工提供了可能性,可作为富含富勒烯的发芽谷物原料使用。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例旨在用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。以下制备例、实施例和对比例中:苏麦由江苏沿海地区农业科学研究所盐城市农业科学院提供。制备例1:稳定同位素13c标记的水溶性富勒烯的制备方法(1)按照参考文献[1]和参考文献[2]公开的直流电弧放电法合成稳定同位素13c标记的富勒烯,具体过程如下:将稳定同位素13c粉(99%)和普通碳粉(98.5%)以一定比例混合,装入空心碳棒(长12.0cm,直径1.0cm)为阳极、光谱纯石墨棒为阴极的电弧放电炉中。电弧放电炉为直流电弧放电纳米材料合成反应炉(冷却方式为水冷)。放电前,将系统预抽真空至5pa,充入高纯惰性气体氩气200torr(1torr=1.33×102pa,下同),设置电流135a,先将阴阳极短路,对碳棒加热3min,以除去吸附在碳棒中的氧气或其他杂质。精确控制放电条件:充入高纯惰性气体氦气,维持135torr,两电极间距离约4mm,电流110a,有效电压27v。放电完毕后,冷却、扫灰、收集碳灰,二硫化碳回流10h,过滤,收集滤液,旋转蒸干,甲苯超声溶解。将溶液采用0.22m的微孔滤膜过滤,滤液进行高效液相色谱分离和纯化,按照色谱峰收集馏分进行质谱测定,获得纯度大于97.5%的稳定同位素13c标记的富勒烯(13c-c60),以稳定同位素质谱测定稳定同位素的标记量。(参考文献[1]:阮龙飞,常雪灵,孙宝云,等.,稳定同位素13c标记c60的制备及光谱性质[j].,科学通报,2014,059(010):905-912.;参考文献[2]:李红亮,汪称龙,杨胜韬,etal.稳定同位素13c标记富勒醇结构的探索[j].科学通报,2017(16):50-56.)。(2)采用tbah胺碱催化反应合成法制得具有良好水溶性的13c标记羟基化富勒烯(13c-c60-oh),具体地:在圆底烧瓶中加入10ml20mol/l的naoh溶液,在磁力搅拌下,滴加tbah溶液,同时滴加20ml含有80mg稳定同位素13c标记的富勒烯的甲苯溶液(4mg/ml),搅拌进行反应,静置分层,之后采取分液分离、过滤、水溶,再加入甲醇使之沉淀,反复3-4次,离心及真空干燥,制得干燥粉末。(3)通过红外(ir)和x射线光电子能谱(xps)进行表征可知,13c-c60-oh样品具有30-40个羟基修饰;13c-c60-oh的水溶液稳定超过3个月没有沉淀;(4)通过稳定同位素比例质谱仪(irms)测量13c-c60-oh的13c丰度为17.0712%,13c-c60-oh作为13c稳定同位素示踪剂,对植物中13c稳定羟基化富勒烯的生物分布特征进行定量分析。实施例1该实施例用于说明本发明提供的富勒烯麦芽的制备方法。s1、水溶性富勒烯溶液配制:将制备例1所得13c-c60-oh超声分散于水中,得到ph值为6-8且浓度为10μg/ml的13c-c60-oh水溶液;s2:浸泡:选择纯度高、品质优、颗粒整齐苏麦作为原料,所选苏麦籽粒饱满,经分级粒径≥2.5mm占85%以上,蛋白质含量10.0-14.0%,含水率9.0-12.0%,干粒重35-48%,三天发芽率≥95%,五天发芽率≥97%。所述苏麦在使用前经过精选完成分级,除去尘土、秸秆、铁这些杂质,除去破损粒、病粒、瘪粒、烂粒和其他异形粒,保留粒径≥2.5mm的饱满、大小均匀的颗粒,苏麦纯度达到99.5%以上。称取1kg精选苏麦,用5%的次氯酸钠浸泡30min,捞出表面浮麦,并用去离子水(ddh2o)清洗4遍。采用“浸水断水法”进行浸麦处理,浸麦用水ph值6.5-8.0,转速2600r/min,风量540(m3)/h。浸麦工艺如下:在16℃下,湿浸6h-干浸16h-湿浸5h-干浸3h,浸麦总时间为30h,其中,水浸11h,干浸19h,恒温摇匀浸麦度40-42%,露点率为50%,在最后一次湿浸阶段,加入浓度10μg/ml的13c-c60-oh水溶液进行浸麦,浸麦完毕后取出浸渍大麦进入发芽阶段。s3、发芽:将步骤s2制得浸渍大麦沥干后,置于温度18℃、湿度90%的发麦箱中进行发芽,发芽过程中定时喷淋和翻麦,发芽时间为100h,喷淋采用的溶液为浓度10μg/ml的13c-c60-oh水溶液,每隔1h喷淋一次,单次喷淋时间为250s,每隔24小时翻麦一次,得到绿麦芽;所述绿麦芽的水分含量50±1%,平均叶芽长度为麦粒长的3/5-4/5,发芽率达到97%以上。s4、后处理:从步骤s3制得的绿麦芽中分离出叶芽、麦粒和根芽,并分别置于烘干箱,按照以下工艺进行焙焦:40℃/4h,45℃/10h,50℃/4h,60℃/2h,65℃/3h,72℃/2h,85℃/2h,得到水分含量为5%以下的干燥大麦麦芽,冷却后粉碎,过100目筛,得到富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉。实施例2在实施例2中,除了将浸麦和发芽阶段中13c-c60-oh水溶液的浓度由10μg/ml调整为25μg/ml之外,其余条件与实施例1相同,得到富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉。实施例3在实施例3中,除了将浸麦和发芽阶段中13c-c60-oh水溶液的浓度由10μg/ml调整为50μg/ml之外,其余条件与实施例1相同,得到富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉。对比例1按照实施例1的方法制备富勒烯麦芽,不同的是,将13c-c60-oh水溶液采用相同量的去离子水ddh2o替代,其余条件与实施例1相同,得到参比叶芽粉、参比麦粒粉和参比根芽粉。测试例1水溶性富勒烯在麦芽中富集检测(1)采用ftir对水溶性富勒烯以及实施例1-3中所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉进行ir吸收光谱测试。具体地,取样品2mg左右放入酒精擦洗净的研钵中,再加入一定量的kbr(样品:kbr=1:100),接着用研磨棒将放入的样品研磨成均匀粉末,接着用配套模具压制成透明的薄片,按要求放入ftir仪的观察室中,设置好相关试验参数,用红外光谱仪做全波段扫描(范围4000~400cm-1)。结果表明,实施例1-3中所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉中均出现了水溶性富勒烯的独特红外特征峰(3224.58cm-1处为-oh、1592.69cm-1处为-c=c-、1361.53cm-1处为-oh和1081.11cm-1处为-c-o-),在ftir光谱中存在碳原子的拉伸和c-oh拉伸峰(1585-1640cm-1),这些独特的ir特征可以证明这些样品中水溶性富勒烯(富勒醇)的存在。(2)实施例1-3中所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉中稳定同位素含量委托国家第三局海洋研究所测定。具体地,采用irms准确测量麦芽各组分(根芽、叶芽和麦粒干粉)样品的13c丰度,样品中13c-水溶性富勒烯的总含量按照(wangc,zhangh,ruanl,etal.bioaccumulationof13c-fullerenolnanomaterialsinwheat[j].environmentalence.nano,2016,3.)中公开的方法计算,采用spss17.0统计分析软件对数据进行单因素方差分析(one-wayanova)、多重比较(1lsd)相关分析,数据以平均值±标准误表示,显著性水平ɑ=0.05,具体计算过程如下:δ为稳定同位素自然丰度,以千分差(‰,permill)为单位;13c/12c是指样品中13c与12c含量的比值;m干重/m湿重是干燥前后的组织重量比;ωc是碳占样品干重的质量百分比;ω13c(nm)是13c-富勒醇中13c的质量分数;ω13c-富勒醇是样品(根、茎和叶)中13c质量百分数;%id/g或%id为大麦中根、茎和叶中13c-富勒醇的含量;剂量为处理样品所采用的富勒醇的浓度,μg/ml。麦芽各组织中的水溶性富勒烯的累积量见表1-1。从表1-1的结果可以看出,样品中13c-水溶性富勒烯的含量表示为每克组织的剂量的质量百分比(%id/g),约为1.47-35.2%/g。表1-1麦芽各组分对13c-富勒醇的富集测试例2水溶性富勒烯对麦芽发芽过程中营养物质变化的影响将实施例1所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组1试样,将实施例2所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组2试样,将实施例3所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组3试样。将对比例1所得参比叶芽粉、参比麦粒粉和参比根芽粉混合得到对照组1试样。将未发芽的苏麦粉碎后得到对照组2试样。(1)按照以下方法对其中各营养物质进行测定:还原糖含量参照gb5009.7-2016试验方法测定;蛋白质含量参照gb5009.5-2016试验方法测定;维生素b3(烟酸)含量参照gb5009.89-2016试验方法测定;维生素e含量参照gb5009.82-2016试验方法测定;r-氨基酸(gaba)含量参照ny/t2890-2016试验方法测定;谷胱甘肽含量参照文献(刘千,陈黎,胡用军,等.麦胚谷胱甘肽提取与含量测定方法研究[j].中国粮油学报,2012,27(10):104-108.)试验方法测定;六磷酸肌醇(ip6)含量参照gb1886.237-2016试验方法测定;不可溶性膳食纤维(idf)含量参照gb5009.88-2016试验方法测定。最终所得数据采用spss19.0和excel进行分析(p<0.05,单因素方差分析(one-wayanova)),数据采用k-s正态性检验。所得结果见表2-1。表2-1营养成分影响表从表2-1的结果可以看出,与对照组相比,使用水溶性富勒烯对发芽谷物能够提高还原糖、蛋白质、维生素b3、维生素e、gaba、谷胱甘肽、ip6以及idf的含量。(2)对氨基酸含量变化及氨基酸营养价值评价未发芽大麦、发芽大麦和水溶性富勒烯处理发芽大麦必须氨基酸和非必须氨基酸含量分别见表2-2和表2-3。在必需氨基酸中,大麦各蛋白组分亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、异亮氨酸含量比较高,具有较高营养价值。表2-2必需氨基酸含量变化浓度未发芽ck10μg/ml25μg/ml50μg/ml苯丙氨酸0.580.630.650.680.64赖氨酸0.420.430.470.440.52亮氨酸0.740.800.830.900.83异亮氨酸0.380.430.470.450.46表2-3非必需氨基酸含量变化浓度未发芽ck10μg/ml25μg/ml50μg/ml天冬氨酸0.630.690.820.690.86甘氨酸0.440.470.500.470.50丙氨酸0.450.550.580.580.56组氨酸0.240.270.270.320.28精氨酸0.520.560.570.580.57测试例3富勒烯大麦芽中酶活力的测定将实施例1所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组1试样(记为ds1),将实施例2所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组2试样(记为ds2),将实施例3所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合得到试验组3试样(记为ds3)。将对比例1所得参比叶芽粉、参比麦粒粉和参比根芽粉混合得到对照组1试样。不同试样中a-淀粉酶、β-淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶采用苏州科铭生物技术有限公司试剂盒进行检测,所得结果见表3-1。表3-1麦芽中酶活力测定项目a-淀粉酶(ku/g)β-淀粉酶(ku/g)纤维素酶(ku/g)蛋白酶(ku/g)对照组15.6784±0.21bc1.5678±0.41c3.8925±0.51c82.96±4.76c试验组1,ds17.1452±0.34b2.5697±0.55b4.4571±0.46b125.84±2.28b试验组2,ds28.1235±0.52a3.4586±0.53a5.4865±0.39a145.85±3.59a试验组3,ds36.1246±0.35b2.4537±0.35b4.7386±0.91b126.78±4.29b以上结果表明,试验组麦芽中酶活力比对照组麦芽显著提高,且随样品浓度呈先升高后下降的趋势,顺序:试验组2>试验组1>对照组。试验组2中a-淀粉酶、β-淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶的含量分别为对照组的1.43倍、2.21倍、1.41倍和1.76倍。说明水溶性富勒烯处理可以刺激麦芽体内4种酶活的增加(a-淀粉酶、β-淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶),而对照组酶活性增加较慢。实施例4使用富勒烯水溶液制备的发芽燕麦、发芽小麦、发芽黑豆、红豆和发芽黄豆在实施例4中,除了用燕麦、小麦、黑豆、红豆和大豆代替大麦,以及使用去离子水处理作为对照组之外,其余条件与实施例2是相同的,得到目标的发芽谷物(发芽燕麦、发芽小麦、发芽黑豆、发芽红豆和发芽大豆)。测试例4对发芽谷物中营养物质变化的影响检测在实施例4中分别用水溶性富勒烯溶液和去离子水ddh2o发芽后的发芽燕麦、发芽小麦、发芽黑豆、发芽红豆和发芽大豆的营养成分含量,其结果见表4-1。表4-1营养成分影响表实施例5富勒烯啤酒的制备将实施例1所得富勒烯叶芽粉、富勒烯麦粒粉和富勒烯根芽粉混合后作为酿造原料制备全麦芽啤酒。委托厦门澳德酿科技有限公司进行精酿生产,小试产量200l,分两次进行(富勒烯组200l和对照组200l)。具体地,各将44kg粉碎好的酿造原料和48℃的水以料水质量比为1:4.5进行投料,投料完成后升温到56℃下保温30min,再升温到65℃下保温1h,之后升温到至72℃下保温10min,接着升温到78℃,终止糖化过程至碘检合格为止;之后往麦汁中添加酒花1g/l并煮沸60min,麦汁煮沸后,趁热过滤以去除沉淀,滤液反复过滤操作3次,制得麦芽汁:当麦芽汁温度自然降至15℃时,添加麦芽汁质量5%的啤酒酵母进行发酵,发酵温度控制在20-22℃,当麦芽汁中糖度降至4-5°bx时,将罐压升至0.15mpa进行密封厌氧发酵至麦芽汁中双乙酰值降至0.08mg/l以下,得到嫩啤酒;将嫩啤酒降温至0-5℃后,酵母聚集沉底,酒液澄清,贮藏1-3个月使得啤酒成熟,离心、过滤除去啤酒酵母和沉淀,灌装,杀菌得到富勒烯啤酒。测试例5富勒烯啤酒理化指标及感官品评的检测(1)理化指标:酒发酵结束后,对啤酒成品(试验组为实施例5制成的富勒烯啤酒,对照组为以普通麦芽制成的富勒烯啤酒)进行的理化指标进行检测,主要包括啤酒的色度、浊度、酒精度、总酸、双乙酰等指标,同时对啤酒成品中的大肠杆菌及细菌总数进行了检测,所得结果见表5-1。其中,啤酒中酒精度的检测方法如下:在20℃时,根据相同体积酒精水溶液与纯水的质量之比,求得相对密度,然后查表得出啤酒中酒精含量的百分比,即为啤酒酒精度。表5-1啤酒理化指标理化指标对照组试验组原浓(°p)11.011.2外浓(%,m/m)33真浓(%,m/m)2.42.4酒精度(%,v/v)4.24.3外观发酵度(%)71.8272.32实际发酵度(%)58.8359.25色度(ebc)60.5460.58粘度1.2971.301总酸(ml/100ml)1.421.43双乙酰(ppm)0.050.05苦味质(bu)1719二氧化碳(%)0.430.50泡持(秒)261273浊度(ebc)0.140.15ph值4.184.21大肠杆菌数(个/l)00细菌总数(个/ml)4038(2)感官品评从香味、口感、色泽、泡沫4个方面对实施例5所得富勒烯啤酒进行评分,其中,香味、口感各占40分,感官评分标准见表5-2。表5-2感官评分标准实施例5所得富勒烯啤酒的感官品评结果如下,评分见表5-3:香气:具有明显的麦芽香,柑橘类、柚子皮、果味和蜂蜜香味。口感:口感口味纯正,酒体浑厚、柔和,苦味协调,杀口;微微的甜味,淡淡的苦味,酒体浓稠,口感醇厚,类似国外黑啤酒的醇、酯类香。色泽:颜色棕黄,酒液清亮,酵母、颗粒分布均匀;泡沫:泡沫细腻、丰富、挂杯持久。表5-3啤酒感官评分尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。当前第1页1 2 3 
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