一种去除177Lu溶液中内毒素的方法与流程

2021-01-08 12:01:20|

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本发明属于药用放射性同位素的制备技术领域，涉及一种不含内毒素的放射性核素¹⁷⁷lu的研究，具体涉及一种在制备¹⁷⁷lu的过程中去除¹⁷⁷lu溶液中内毒素的方法。

背景技术：

¹⁷⁷lu放射性核素可以用于生产¹⁷⁷lu标记的靶向药物，近年来，该类药物在多种肿瘤治疗中取得令人瞩目的效果。¹⁷⁷lu核素主要有两种：“有载体¹⁷⁷lu(直接法生产)”和“无载体¹⁷⁷lu(间接法生产)”。临床中主要使用无载体¹⁷⁷lu，特别是使用以单抗和多肽为载体的¹⁷⁷lu核素肿瘤治疗领域。有载体¹⁷⁷lu在临床中鲜有使用，但是有预测其可以在骨转移肿瘤阵痛药物具备较好的前景。

¹⁷⁷lu核素一般都用于生产注射用放射性药品，按照注射药品生产原料的一般质量要求，需要控制内毒素水平。控制内毒素水平可以在生产工艺过程中进行控制、也可以在生产结束后通过一些内毒素去除方法去除内毒素。生产¹⁷⁷lu的工艺复杂，涉及流程多(包括制靶、堆照、破靶、溶解、纯化、分装、封装等)，还要涉及高放射性操作的复杂屏蔽和通排风系统，需要保障整个生产流程都处于无菌环境中。即从目前工艺流程中想要保障¹⁷⁷lu溶液中的内毒素水平，从经济成本和技术要求上都非常不现实，故而将已经获得的¹⁷⁷lu溶液中的内毒素进行有效移除，是更为经济的方式。

用多孔材料对溶液中的内毒素进行吸附是以往常用的方法，但由于¹⁷⁷lu核素本身属于高价金属正离子，易被多孔材料吸附，故而常用的活性炭、分子筛、陶土、常规层析法等均无法使用，这就使得对于吸附材料的要求极高，对于内毒素的去除方法提出了更高的要求。高温干热法可能造成高放射性溶剂出现的泄露引起环境排放和辐射安全性问题。色谱法会使用组成较为复杂的洗脱流动相，在移除内毒素后还需要一系列工艺流程移除流动相引入的杂质。超滤膜需要高速离心机，对于高放射性溶液操作需要特殊的屏蔽场地，且超滤膜易吸附大量放射性正离子。¹⁷⁷lu离子在碱性条件下会被沉淀或形成胶体，故而不能使用碱浸泡法。仅有的可供选择的常规去除内毒素方式是通过酸浸泡，但是酸浸泡法一般用于容器表面的处理，本专利申请人在前期的研究中发现：酸浸泡法可以破坏一部分¹⁷⁷lu溶液中的内毒素，但是即使在需要较长的时间(>10h)后依然无法稳定可靠的达到目前市售的注射液生产用¹⁷⁷lu溶液内毒素要求(≤20eu/ml)，且外加的酸依然需要后续一系列工艺除去。因而，现有的方法均存在较明显的问题，目前亟待提供一种非常规的、专门针对¹⁷⁷lu溶液的内毒素去除方法，以解决现有技术中的难题。

技术实现要素：

本发明的目的就是为了解决上述技术问题，而提供一种去除¹⁷⁷lu溶液中内毒素的方法，以使得¹⁷⁷lu溶液的内毒素水平达到注射液生产原料的要求，并在实际生产中简单易行、操作可控、材料易得、占用热室面积小，且利用该方法处理后的¹⁷⁷lu产品中所需技术指标包括放化纯、金属杂质、比活度等关键指标均能很好符合医用¹⁷⁷lu的要求。

特别说明的是：本文中所述方法为“无载体¹⁷⁷lu”和“有载体¹⁷⁷lu”通用的去除内毒素方法，后文除特殊指定，否则不再区分。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种去除¹⁷⁷lu溶液中内毒素的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)根据起始¹⁷⁷lu溶液中的酸浓度和体积参数，向起始¹⁷⁷lu溶液中加入一定量的硝酸溶液，使得溶液中硝酸浓度大于1m；

(2)以0.1～2.0bv/min的流速将步骤(1)所得¹⁷⁷lu溶液注入到填装有dga树脂的树脂柱中进行淋洗；所述树脂柱中dga树脂的体积为0.2～2.0cm³，优选为0.4～1.0cm³；

(3)以0.1～2.0bv/min的流速向步骤(2)的树脂柱中注入无菌注射用水，直到指定体积后停止；

(4)以0.1～2.0bv/min的流速向步骤(3)的树脂柱中注入稀盐酸进行洗脱，所述稀盐酸的浓度为0.01～0.5m，优选为0.04～0.05m，洗脱后的流出液通过0.02μm滤膜过滤，收集滤液，直到指定体积停止，所得滤液即为“去除内毒素的¹⁷⁷lu溶液”。

本发明的上述方法采用的原理是利用dga树脂对¹⁷⁷lu在高浓度硝酸条件下的吸附、并通过无菌注射用水完全清洗和置换吸附的少量硝酸溶剂并移除内毒素、然后使用稀盐酸洗脱¹⁷⁷lu产品。经过处理后的¹⁷⁷lu产品中其他所需技术指标包括放化纯、金属杂质、比活度等关键指标均符合医用¹⁷⁷lu的要求。虽然现有的dga树脂已经用于某些放射性核素的研究，但本发明方法经过了大量的摸索研究，在现有技术未报道如何采用dga树脂对¹⁷⁷lu中的内毒素进行去除时，本发明提供了一种很好的能够采用dga树脂去除¹⁷⁷lu中内毒素的方法，其效果显著，而在发明人的摸索过程中，发现其他方法无法有效去除¹⁷⁷lu中的内毒素。

进一步的是，步骤(1)中所述起始¹⁷⁷lu溶液中的酸为盐酸或硝酸，酸的浓度和体积无限制。此处所述的酸的浓度和体积无限制，是指起始¹⁷⁷lu溶液中的酸浓度和体积可以为任意的参数，均可按照本发明的方法进行处理；当起始¹⁷⁷lu溶液中的硝酸浓度大于1m时，无需再加入硝酸溶液，直接进行后续的处理步骤即可。

进一步的是，步骤(1)中加入硝酸溶液后¹⁷⁷lu溶液中的硝酸溶液浓度为2～5m，加入硝酸溶液后¹⁷⁷lu溶液的总体积无限制，优选总体积为2～50ml。

进一步的是，步骤(1)中所述起始¹⁷⁷lu溶液为有载体¹⁷⁷lu或无载体¹⁷⁷lu，其总活度无限制；当起始¹⁷⁷lu溶液为有载体¹⁷⁷lu时，其中的¹⁷⁷lu和^natlu(稳定的lu核素)总化学含量不高于树脂柱填料的极限载样量。

进一步的是，步骤(1)中所述起始¹⁷⁷lu溶液为非无菌条件下生产的¹⁷⁷lu溶液，步骤(4)中所述稀盐酸经过无菌处理。

进一步的是，步骤(2)中所述dga树脂可以是指通过基底树脂负载dga类有机化合物获得的树脂。

进一步的是，所述dga类有机化合物包括todga或tehdga。其中的todga是指n,n,n′,n′-tetraoctyldiglycolamide，其中的tehdga是指n,n,n′,n′-tetrakis-2-ethylhexyldiglycolamide。

进一步的是，所述基底树脂包括不同材质的可以负载dga类有机化合物的树脂材料，包括但不限于硅胶材质、二氧化硅材质、丙烯酸类聚合物或苯乙烯聚合物。

作为优选的，所述步骤(2)、(3)、(4)中的流速均为0.3～1bv/min。

作为优选的，步骤(3)中所述无菌注射用水的指定体积为3～15bv，优选为6～9bv，步骤(4)中所述稀盐酸溶液的注入体积为2～15bv，优选为6～9bv。

本发明的有益效果如下：本发明方法提供了一种简单易行的移除¹⁷⁷lu溶液中内毒素的方法；经过本发明的方法处理后的¹⁷⁷lu产品中其他所需技术指标包括放化纯、金属杂质、比活度等关键指标均符合医用¹⁷⁷lu的要求，且全工艺流程¹⁷⁷lu的回收率高达92～99％。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体描述，有必要指出的是，以下实施例仅仅用于对本发明进行解释和说明，并不用于限定本发明。本领域技术人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

起始¹⁷⁷lu溶液：非无菌条件下生产的无载体¹⁷⁷lu溶液，总活度为1.61ci，体积1.6ml，溶剂为0.05mhcl。

dga树脂柱参数：树脂柱为石英材质，填充市售通用型dga树脂(triskem公司生产，组成为：丙烯酸类聚合物负载todga)0.4cm³，两端连接医用无菌pe蠕动泵管，蠕动泵管出口接0.02μm滤膜。进行工艺流程前已经置于a级洁净屏蔽箱经过紫外灭菌1h，并预先用25ml无菌注射用水冲洗。

步骤a：向盛有以上起始¹⁷⁷lu溶液的瓶中加入3.2ml3mhno3，混匀。

步骤b：以0.4ml/min流速将以上溶液注入dga树脂柱中，完全注入后停止。

步骤c：以0.4ml/min流速向以上树脂柱中注入无菌注射用水3ml。

步骤d：以0.4ml/min流速向以上树脂柱中注入0.05m盐酸溶液，洗脱液通过0.02μm滤膜过滤，以10ml西林瓶收集滤液，共计收集2ml。

步骤e：加胶塞和铝盖，压盖。测试活度为1.57ci。(回收率为97.5％)。

¹⁷⁷lu离子在生产过程中由于受到管路、树脂柱、滤膜等流路材料吸附，故而生产过程中会有一定活度损失(回收率在实际生产中一般为92～99％)。该损失为柱纯化生产过程中常规的损失，不影响产品本身的使用。下同。

经过测试，产品中内毒素(约)3.8eu/ml，符合注射液生产需求(<20eu/ml)。该测试结果表明：本发明方法能够很好移除非无菌条件下生产¹⁷⁷lu溶液中的内毒素。另外，一般情况下为了移除内毒素容易造成大量¹⁷⁷lu损失，这种情况是无法接受的，本发明方法在移除内毒的过程中还很好兼顾了¹⁷⁷lu的回收率，其回收率高达97.5％。

实施例2

起始¹⁷⁷lu溶液：非无菌条件下生产的无载体¹⁷⁷lu溶液，总活度为2.73ci，体积约45ml，溶剂为3.5mhno3。

dga树脂柱参数：树脂柱为石英材质，填充市售支链型dga树脂(triskem公司生产，组成为：丙烯酸类聚合物负载tehdga)0.4cm³，两端连接医用无菌pe蠕动泵管，蠕动泵管出口接0.02μm滤膜。进行工艺流程前已经置于a级洁净屏蔽箱经过紫外灭菌1h，并预先用25ml无菌注射用水冲洗，并用3.5m硝酸(5ml)平衡该树脂柱。

步骤a：以0.4ml/min流速将以上溶液注入dga树脂柱中，完全注入后停止。

步骤b：以0.4ml/min流速向以上树脂柱中注入无菌注射用水3ml。

步骤c：以0.4ml/min流速向以上树脂柱中注入0.05m盐酸溶液，洗脱液通过0.02μm滤膜过滤，以10ml西林瓶收集滤液，共计收集2.7ml。

步骤e：加胶塞和铝盖，压盖。测试活度为2.71ci。(回收率为99.3％)

经过测试，产品中内毒素(约)1.1eu/ml，符合注射液生产需求(<20eu/ml)。

实施例3

起始¹⁷⁷lu溶液：非无菌条件下生产的有载体¹⁷⁷lu溶液，总活度为2.18ci(原有靶件¹⁷⁶lu(76.4％富集靶件)为0.6mg)，体积1.5ml，溶剂为1mhcl。

dga树脂柱参数：树脂柱为石英材质，填充dga树脂(自制树脂，组成为：丙烯酸类聚合物负载tehdga)0.8cm³，两端连接医用无菌pe蠕动泵管，蠕动泵管出口接0.02μm滤膜。进行工艺流程前已经置于a级洁净屏蔽箱经过紫外灭菌1h，并预先用25ml无菌注射用水冲洗，并用2.0m硝酸(5ml)平衡该树脂柱。

步骤a：向盛有以上起始¹⁷⁷lu溶液的瓶中加入3.0ml2mhno3，混匀。

步骤b：以1.0ml/min流速将以上溶液注入dga树脂柱中，完全注入后停止。

步骤c：以0.5ml/min流速向以上树脂柱中注入无菌注射用水5ml。

步骤d：以0.5ml/min流速向以上树脂柱中注入0.04m盐酸溶液，洗脱液通过0.02μm滤膜过滤，以10ml西林瓶收集滤液，共计收集4.8ml。

步骤e：加胶塞和铝盖，压盖。测试活度为2.09ci(回收率为95.8％)。

经过测试，产品中内毒素(约)0.2eu/ml，符合注射液生产需求(≤20eu/ml)。

需要说明的是，在实施例1～3中，产品中内毒素水平有所差距，并不是因为本发明所述方法不稳定，主要原因有两个，一是因为原料液在非无菌条件下生产，每批次原料液的内毒素水平本身就有所不同；二是本发明方法处理后的产品中内毒素水平已经远低于限度(≤20eu/ml)，且加之放射性内毒素检验为稀释后检验，质检精度在较低的内毒素含量时无法精确。下同。

实施例4

起始¹⁷⁷lu溶液：非无菌条件下生产的无载体¹⁷⁷lu溶液，总活度为4.15ci，体积约40ml，溶剂为3.2mhno3，为与对比例中进行移除内毒素效果对比，额外加入细菌内毒素工作标准品(80eu/支，由中国食品药品检定研究院生产)3支。

dga树脂柱参数：树脂柱为石英材质，填充dga树脂(自制树脂，组成为：丙烯酸类聚合物负载tehdga)0.6cm³，两端连接医用无菌pe蠕动泵管，蠕动泵管出口接0.02μm滤膜。进行工艺流程前已经置于a级洁净屏蔽箱经过紫外灭菌1h，并预先用25ml无菌注射用水冲洗，并用3.2m硝酸(5ml)平衡该树脂柱。

步骤a：以0.5ml/min流速将以上起始¹⁷⁷lu溶液注入dga树脂柱中，完全注入后停止。

步骤b：以0.6ml/min流速向以上树脂柱中注入无菌注射用水5ml。

步骤c：以0.5ml/min流速向以上树脂柱中注入0.05m盐酸溶液，洗脱液通过0.02μm滤膜过滤，以10ml西林瓶收集滤液，共计收集4.0ml。

步骤d：加胶塞和铝盖，压盖。测试活度为4.10ci。(回收率为98.8％)

经过测试，产品中内毒素。(约)1.9eu/ml，符合注射液生产需求(<20eu/ml)。

对比例1

起始¹⁷⁷lu溶液：非无菌条件下生产的无载体¹⁷⁷lu溶液，总活度为1.35ci，体积约40ml，溶剂为3.2mhno3，，为与实施例4进行移除内毒素效果对比，额外加入细菌内毒素工作标准品(80eu/支，由中国食品药品检定研究院生产)3支。

dga树脂柱参数：树脂柱为石英材质，填充dga树脂(自制树脂，组成为：丙烯酸类聚合物负载tehdga)0.6cm³，进行工艺流程前已经置于a级洁净屏蔽箱经过紫外灭菌1h，并预先用25ml无菌注射用水冲洗，并用3.2m硝酸(5ml)平衡该树脂柱。

步骤a：以0.5ml/min流速将以上起始¹⁷⁷lu溶液注入dga树脂柱中，完全注入后停止。

步骤b：以0.5ml/min流速向以上树脂柱中注入无菌注射用水0.5ml(无菌注射用水量不足，导致内毒素未完全清洗)。

步骤c：以0.5ml/min流速向以上树脂柱中注入0.05m盐酸溶液，洗脱液通过0.02μm滤膜过滤，以10ml西林瓶收集滤液，共计收集3.8ml。

步骤d：加胶塞和铝盖，压盖。测试活度为1.30ci。(回收率为96.3％)