用于制备角蛋白液体敷料的组合物及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物医药
技术领域：
，具体涉及一种用于制备角蛋白液体敷料的组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：角蛋白作为一种无毒性天然生物材料，已经成功应用于组织修复，因其含有丰富半胱氨酸残基，具有自发组装和聚合的性质，可以制成各种类型的伤口敷料。作为人类的蛋白质来源，优异的生物相容性和良好的生物可降解性进一步拓宽了其在再生医学的应用。传统的人发角蛋白大多是采用化学或酶提取方法获得的提取物。因此其具有组分复杂和质量难控制的问题。人的头发不仅包含角蛋白，还包括丰富的角蛋白相关蛋白和中间丝蛋白等。重组表达是提高角蛋白纯度、质量的一种重要途径。液体敷料由于其具有保持伤口周围的局部湿润环境，良好的透气性，保护伤口免受微生物感染，防止伤口干燥，换药时简便舒适，有助于减轻伤口疼痛。液体敷料携带方便，使用简单，直接喷在患处就可达到治疗效果，减少细菌感染以及创口的疼痛感。所以目前液体敷料在市面上也受到很多消费者的亲睐。而目前市面上有一款3mcavilon的一款液体敷料，其是一种多聚溶液，形成一种应用于皮肤的薄膜，被分散成无细胞毒性，无刺激的溶液，并很快变干。该产品可以帮助完整或者受损的皮肤免受失禁的尿液/粪便，消化液，伤口排出物，粘液和损伤的刺激。主要作用还是保护皮肤免受污染和损伤。其主要成分为丙烯酸盐共聚物，六甲基二硅醚，聚乙基苯甲基硅氧烷和异辛烷。本发明液体敷料与上述液体敷料相比较，同样可以达到快速成膜的效果，同样可以起到对皮肤保护和隔离的效果。并且发明液体敷料中有添加药效成分，可以进一步促进皮肤的修复，肉芽的生长，加速伤口的愈合。其使用场景相较上述液体敷料也更为宽广一些，例如对因幼儿及老人的红屁股象限的缓解，一些急性创口的便捷处理，还有对于微创手术或者激光手术的术后恢复愈合等相关状况的修复都可以得到一定的促进作用。技术实现要素：本发明目的之一是得到用于制备成膜剂的组合物组分，该组合物可以制成具有一定药效的成膜剂。为了实现上述目的，本发明的技术方案为：用于制备成膜剂的组合物，所述组合物由复合成膜剂和角蛋白组成，所述复合成膜剂由聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、丙烯酸树脂类中多种组成；具体的，所述复合成膜剂由聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮组成；当然，所述角蛋白也可以替换为其他有药理作用能被皮肤和粘膜吸收的药效成分。进一步的，所述角蛋白与所述复合成膜剂的重量比为1：10-40。进一步的，所述聚乙烯醇和所述聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1-3:2-4。本发明目的之二是得到含有所述成膜剂组合物的液体敷料组合物，该液体敷料组合物可以制成具有一定药效的液体敷料。为了实现上述目的，本发明的技术方案为：所述液体敷料组合物，按照重量份计由以下组分组成：角蛋白：1-5重量份；聚乙烯醇:5-70重量份；聚乙烯吡咯烷酮:5-100重量份；保湿剂：5-50重量份；材料溶剂：10-100重量份；适量挥发性介质。进一步的，所述保湿剂为任意一种可以溶解进整个系统的保湿剂，如甘油、丙二醇、硅烷类；具体的，所述保湿剂为丙二醇；进一步的，所述材料溶剂为水、乙醇中的一种或两种；具体的，所述材料溶剂为水；具体的，所述挥发性介质为为水、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、异辛烷中的一种或多种；进一步的，所述挥发性介质为体积比为6-1:3的乙醇和乙酸乙酯；进一步的，所述液体敷料组合物按照重量份计由以下组分组成：角蛋白：2±0.2重量份；聚乙烯醇:10±1重量份；聚乙烯吡咯烷酮:30±3重量份；丙二醇：10±1重量份；水：20-50重量份；体积比为1：1的乙醇和乙酸乙酯：880-950重量份。具体的，所述液体敷料的ph为6-7；所述液体敷料的粘度为1600-2500pa.s。本发明本发明目的之三是提供用所述液体敷料组合物制备液体敷料的方法。为了实现上述目的，本发明的技术方案为：用所述的液体敷料组合物制备液体敷料的方法，其特征在于，将各组分充分混合，得所述液体敷料。具体的，所述方法包括以下步骤：a将配方量的所述聚乙烯醇、所述聚乙烯吡咯烷酮加配方量的水溶解，充分溶胀，充分混合，得复合成膜剂预处理料；b将配方量的所述角蛋白添加到步骤a所得的成膜剂预处理料中，充分混合，得含有角蛋白的成膜剂；c将配方量的所述保湿剂加入步骤b所得的含有角蛋白的成膜剂中，充分混合，得所述液体敷料。进一步的，在所述步骤c之后，加入所述乙醇和乙酸乙酯。本发明本发明目的之四是提供所述液体敷料的应用。为了实现上述目的，本发明的技术方案为：根据动物实验表明液体敷料能促进急性创面愈合；根据细胞划痕实验表明液体敷料能促进细胞的迁移。所以，所述液体敷料可以作为皮肤保护剂；具体的，所述液体敷料可以作为皮肤隔离剂、伤口愈合促进剂、肉芽生长促进剂。本发明的有益效果在于：1.本发明提供了用于制备角蛋白成膜剂的组合物的组分，对制备角蛋白成膜剂提供一种组分选择；2.本发明提供了包含成膜剂组合物的液体敷料组合物，对制备液体敷料提供一种组分选择；3.本发明了提供了用液体敷料组合物制备液体敷料的方法，该方法可用于药物的制备，制备简便，利于操作，便于生产；4.本发明提供了角蛋白液体敷料，该液体敷料可用于止血抗菌，促进创口愈合，防止伤口二次损伤等。附图说明图1为液体敷料对细胞迁移的影响图；图2为液体敷料对伤口闭合率影响的照片图；图3为液体敷料对伤口闭合率影响的曲线图。具体实施方式所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。实施例1重组人源角蛋白的制备：构建含重组角蛋白目的基因片段的重组质粒，将重组质粒转于大肠杆菌bl21(de3)。将转化的细菌以1：5000的比例接种于无菌lb-kana(50ug/ml)液体培养基中，170rpm，37℃培养过夜。当od值为0.8-1.0时温度降至25℃，170rpm，使用终浓度为1mm的iptg进行诱导。诱导8h后，4℃，8000rpm离心5min收菌。用细菌重量的5倍体积的buffera(50mmtrisph8.0,150mmnacl,5mmedta,20mmβ-巯基乙醇)重悬菌体细胞。1000bar均质破碎，4℃20000rpm离心1小时，弃上清。用沉淀重量的10倍体积buffera重悬沉淀，超声3min，10000rpm离心15min，弃上清。用沉淀重量的10倍体积bufferb(50mmtrisph8.0,150mmnacl,5mmedta,20mmβ-巯基乙醇,1murea,0.5％tritonx-100)重悬沉淀，超声3min，10000rpm离心15min，弃上清。用沉淀重量的10倍体积bufferc(50mmtrisph8.0,2.5mnacl,5mmedta,20mmβ-巯基乙醇)重悬沉淀，超声3min，10000rpm离心15min，弃上清。用沉淀重量的10倍体积buffera(50mmtrisph8.0,150mmnacl,5mmedta,20mmβ-巯基乙醇)重悬沉淀，超声3min，10000rpm离心15min，去上清。沉淀用纯净水洗涤2次后重悬，置于-80℃，冻干机冷冻干燥可得角蛋白水剂或粉末。对于角蛋白的制备方法也可参照其他现有技术。实施例2(一)辅料选择：1.成膜剂：成膜剂备选为聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、丙烯酸树脂类。经实验得，选择其中一种单用，其要么粘度过大要么无法成膜，故而选择两种材料合用；丙烯酸树脂类为脂溶性，不适用于原材料系统；羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠粘度过大，喷出形态不好，故而最终选择聚乙烯醇与聚乙烯吡咯烷酮组合使用；其中，聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮浓度过高会产生沉淀，浓度过低无法成膜。2.保湿剂：由于整个敷料中含有醇，故而选择丙二醇作为保湿剂，其可替换成任意一种可以溶解进整个系统的保湿剂。(二)溶剂系统选择：溶剂在水、乙醇、异丙醇、异辛烷、乙酸乙酯中进行选择，若单用水作为溶剂，成膜时间过慢，异辛烷为脂溶性不适用；故考虑乙醇或异丙醇的刺激性以及成膜性时间，以一定比例的乙醇或异丙醇、乙酸乙酯、水混合作为溶剂系统。实施例3角蛋白液体敷料的制备：根据表1各组分的重量份值进行液体敷料的配制。表1.各组分重量份值角蛋白聚乙烯醇聚乙烯吡咯烷酮丙二醇水乙醇乙酸乙酯115550100300500221030102045045032202051020010045701001050100100根据以上组分按如下步骤进行配制：a将配方量的聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮加配方量的水溶解，充分溶胀，充分混合，得复合成膜剂预处理料；b将配方量的角蛋白添加到步骤a所得的成膜剂预处理料中，充分混合，得含有角蛋白的成膜剂；c将配方量的丙二醇加入步骤b所得的含有角蛋白的成膜剂中，充分混合，得所述液体敷料。在所述步骤c之后，加入乙醇和乙酸乙酯得液体敷料。根据以上各组配比所得的液体敷料，均能在一定的时间内成膜，并且都具有药性。根据配比的不同可适用于不同的场景，例如配方1、2可选择制成喷剂形式使用，3、4可选择制成直涂敷料使用。实施例4细胞划痕实验(woundhealing)的原理:当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。实验步骤：将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后，完全培养基重悬成细胞悬液，计数；铺板细胞密度(12孔板，细胞铺板数为1.4*105cell/well)，以次日细胞达到90％汇合度为准。37℃、5％co2培养箱培养，培养体系为0.6ml。第二天使用200ul枪头垂直对准12孔板的下端中央部位，向上轻推形成划痕，划十字。使用pbs轻轻漂洗2-3遍，加入无血清培养基(使用无血清培养基是为了防止细胞增殖对划痕结果的影响)，0h拍照。设置不同样品组别处理细胞(液体敷料组、空白组)。37℃、5％co2培养箱培养，根据愈合程度选择合适时间(时间梯度设置为0h、24h、48h)用显微镜设备拍照。分析迁移面积：划痕数据分析。迁移面积＝xh的细胞面积-0h的细胞面积。实验结论：液体敷料能增加细胞迁移，如图1所示。实施例5动物模型建立：用注射器对sd大鼠注射三氯乙醛水合物进行麻醉；麻醉生效后，用剃毛刀剃去背部毛发，用眼科剪在背部建立上下两个1cm*1cm的全层皮肤创口；将大鼠分为空白对照组和液体敷料组，每组进行相应的伤口处理，术后的大鼠单笼饲养，每隔2天清创处理伤口并涂抹相应的敷料。术后愈合曲线的测定：术后每隔2天，乙醚麻醉大鼠，去除敷料，对创面及周围进行消毒，观察创面愈合情况，并进行拍照记录，之后重新涂抹相应敷料覆盖创面。照片用imagj进行分析，并绘制愈合曲线。实验结论：液体敷料能促进急性创面愈合，如附图2、附图3所示。实施例6液体敷料实际应用场景：1.日常护创：用于日常擦挂伤、切伤、运动伤等急性创口。如打篮球踢足球等出现的运动擦伤摔伤等伤口，随身可携带或者在就近药房购买该发明产品，可以为药膏，也可以为喷剂等。其携带方便，占用空间小，使用起来也简单方便。针对不同的创口使用不同的药品形式，如类似运动伤口的处理，可以选用喷剂的形式，直接进行喷涂，使用起来可以减少疼痛感，隔30秒左右会产生一层隔离膜，除了可以对伤口有止血初进愈合防止外界环境感觉，且还有消毒杀菌的效果；另外该发明制得的液体敷料成膜后具有一定的延展性，对于关节伤口的保护隔离较普通药物会有更好的效果。2.辅助愈合：提供激光治疗术后创面的愈合环境，抑制和缓解湿疹、皮炎等情况，减轻瘢痕形成的风险。如在美容院或者医院中进行了激光治疗手术或者微创手术一类的，本发明敷料可对术后创面进行保护，隔离环境感染，还能起到保护作用，促进创面修复愈合，而且本发明敷料质地透明，涂于面部也不会造成影响。本发明敷料对湿疹，皮炎等皮肤症状进行一定的缓解作用，因为本发明敷料具有一定的杀菌效果，对皮肤细胞生长具有促进作用，而且隔离性较好，可以阻绝一定性的重复感染。而且对于瘢痕的形成也是具有一定的缓解作用的。3.红屁股：在宝宝的皮肤上形成一层保护膜，将其与尿布、尿液隔离，并且具有保湿滋润作用，防止宝宝红屁股的产生；婴幼儿经常出现红屁股现象是因为其皮肤细嫩，皮肤经常与尿液粪便接触，以及经常的清洁处理等，出现红屁股现象说明其皮肤已经收到了一定的损伤。本发明敷料对该现象是有很好的改善效果的。喷涂该敷料后会形成一层保护膜，可以有效隔绝皮肤与粪便尿液的直接接触或长期接触所造成的损伤；对于对宝宝尿液等的清洁，该膜也可以进一步对宝宝皮肤进行保护，减少清洁时对皮肤造成的摩擦导致皮肤的损伤；而且，该敷料在进行保护的情况下具有一定的消毒作用，对于宝宝屁股周围经常与粪便尿液的接触，更容易滋生细菌的情况，可以得到较好的控制；并且本发明敷料对于皮肤修复具有促进作用，对红屁股现象可以得到进一步的缓解。另一方面对于老人的皮肤保护情况也同样可以根据以上作用来进行使用。4.慢性创口护理：针对糖尿病足、褥疮等难以愈合的慢性创口，在其肉芽增生期与上皮形成期加速新生肉芽及皮肤形成，促进伤口愈合。5.修复，愈合：用于抽血输液等易出血的医疗检测项目的预处理和快速处理；例如抽血前后喷于皮肤表面再进行抽血，可以有效减少出血情况。对于皮肤因为干燥等原因出现的皮肤起皮龟裂等状况，本发明可为创口提供保湿环境，且有效隔绝细菌感染造成进一步伤害，还能提供促进伤口愈合的作用最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。当前第1页1 2 3 

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