抗VEGF抗体和PDGF/PDGFR抑制剂在制备治疗表达FGF2肿瘤的药物的应用的制作方法

本发明涉及医学药物技术领域，特别是涉及抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂在制备治疗表达fgf2肿瘤的药物的应用。

背景技术：

血管内皮生长因子(vegf)可在体内诱导血管新生。血管的发生过程对于肿瘤的生长和转移起着重要作用，由于vegf在血管发生中起着重要的调节作用，在肿瘤组织内、外都可以大量分泌vegf；并且vegf表达在大多数恶性肿瘤中上调。因此，将抗vegf抗体用于治疗肿瘤，甚至是恶性肿瘤具有重要意义。血小板源生生长因子(pdgf)活性的增强在癌症中具有重要意义，pdgf和pdgfr的过表达与一系列疾病密切相关，目前抑制pdgf和pdgfr成为治疗肿瘤疾病的药物靶点。但是，在实际临床过程中，抗vegf抗体以及pdgf/pdgfr抑制剂并不是对每一种表达vegf、pdgf或pdgfr的肿瘤都起到作用，有些肿瘤会对抗vegf抗体或pdgf/pdgfr抑制剂产生耐药性，因此限制了抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂的应用。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供了抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂在制备治疗表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的药物中的应用，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂联合使用，用于治疗表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的药物中，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂起到协同作用，有效提高治疗效果。

第一方面，本发明提供了抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂在制备治疗表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的药物中的应用。

在本发明中，成纤维细胞生长因子2(fgf2)在体内可以刺激内皮细胞的增值、迁移、分化和血管的生成，也可以自分泌和旁分泌的方式刺激多种肿瘤细胞的生长。在多种肿瘤组织中过度表达fgf2，如前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、黑色素瘤等。本申请人经过实验发现当肿瘤不表达fgf2时，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂单独使用时可以起到一定的治疗肿瘤的效果，并且两者的联合治疗并未发生协同作用；当肿瘤表达fgf2时，抗vegf抗体和/或pdgf/pdgfr抑制剂单独使用时无法起到治疗肿瘤的效果，即肿瘤对抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂的单独使用起到了耐药性，但是，当抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂联合使用时，发生协同作用，可以起到治疗肿瘤的效果。因此，本发明提供了抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂在制备治疗表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的药物中的应用，为进一步提高肿瘤的治疗效果提供了新的思路。

在本发明中，抗vegf抗体可以和pdgf抑制剂联用、或抗vegf抗体可以和pdgfr抑制剂联用、或抗vegf抗体可以和pdgf抑制剂、pdgfr抑制剂联用。

可选的，所述药物中所述抗vegf抗体和所述pdgf/pdgfr抑制剂的质量比为1：(0.1-10)。进一步的，所述药物中所述抗vegf抗体和所述pdgf/pdgfr抑制剂的质量比为1：(0.2-9)。具体的，所述药物中所述抗vegf抗体和所述pdgf/pdgfr抑制剂的质量比可以但不限于为1：0.1、1：0.5、1：1、1：5或1：7。

可选的，所述抗vegf抗体包括单链抗体的功能片段、双链抗体的功能片段、嵌合抗体的功能片段、人源化抗体的功能片段中的至少一种。即，所述抗vegf抗体可以但不限于包括单链抗体的功能片段或整个片段、双链抗体的功能片段或整个片段、嵌合抗体的功能片段或整个片段、人源化抗体的功能片段或整个片段。进一步的，所述抗vegf抗体包括贝伐珠单抗、阿柏西普、雷莫芦单抗及雷珠单抗中的至少一种。

可选的，所述pdgf/pdgfr抑制剂包括抗pdgf抗体、抗pdgfr-α抗体，抗pdgfr-β抗体和pdgfr激酶抑制剂中的至少一种。具体的，所述pdgf/pdgfr抑制剂可以但不限于为伊马替尼。

可选的，所述抗vegf抗体和所述pdgf/pdgfr抑制剂同时给药或不同时给药。

可选的，所述药物还包括其他具有或治疗肿瘤的活性成分。进一步的，所述药物包括化疗剂。更进一步的，所述化疗剂包括烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、抗肿瘤动植物成分药、抗肿瘤激素类和铂类化疗药物中的至少一种。具体的，所述烷化剂可以但不限于为环磷酰胺、马里兰、氨烯咪胺或二溴甘露醇；所述抗代谢药可以但不限于为甲氨碟呤、阿糖胞苷或氟尿嘧啶；所述抗肿瘤抗生素可以但不限于为多柔比星、柔红霉素、培洛霉素或表柔比星；所述抗肿瘤动植物成分药可以但不限于为伊立替康、三尖杉酯碱、紫杉醇或榄香烯；所述抗肿瘤激素类可以但不限于为阿他美坦、阿那曲唑、来曲唑或福美坦；所述铂类化疗药物可以但不限于为顺铂、卡铂、奈达铂、洛铂或奥沙利铂。

可选的，所述药物还包括药学上可接受的载体和/或辅料。

进一步的，所述载体包括溶剂、聚合物和脂质体中的一种或多种，但不限于此。进一步的，所述溶剂包括但不限于水、生理盐水，以及其他非水性溶剂。进一步的，所述聚合物包括聚赖氨酸、聚乙烯亚胺(支状和/或链状)及其改性物、聚酰胺-胺型树枝状高分子(pamam)及其衍生物、聚丙烯亚胺树枝状高分子(ppi)及其衍生物、壳聚糖、聚乳酸-羟基乙酸(plga)、聚乳酸、明胶、环糊精、海藻酸钠、白蛋白和血红蛋白中的一种或多种，但不限于此。进一步的，所述脂质体可以由阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇、磷脂(如豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂等)自组装而成，也可以由二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg)穿插于磷脂分子形成的磷脂层中形成。

在本发明中，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂可以分散或吸附在上述载体中而形成分散体系，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂可以分散或吸附在同一载体上，也可以分散或吸附在不同载体上。

进一步的，所述辅料包括稀释剂、赋形剂和稳定剂中的一种或多种。

在本发明中，所述稀释剂的主要作用为填充片剂的重量或体积从而便于压片。进一步的，所述稀释剂包括淀粉类、糖类、纤维素类和无机盐中的一种或多种。在本发明中，所述赋形剂是指在药物中的除了主要药物活性成以外的附加物。进一步的，所述赋形剂包括如片剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂，丸剂中的酒、醋、药汁等，半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分，液体制剂中的矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等。在本发明中，所述稳定剂的主要作用是为了稳定药物中的各个成分，所述稳定剂可以但不限于为防腐剂、抗氧剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂等。

可选的，所述药物包括汤剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服剂和颗粒剂中的一种或多种。所述药物的形式取决于在实际中的应用。

可选的，所述药物通过口服或注射的方式施用。进一步的，所述注射通过腹膜内注射、皮下注射、肌肉注射或静脉注射的方式施用。

可选的，所述抗vegf抗体每天用量为(0.3-15)mg/kg体重。进一步的，所述抗vegf抗体每天用量为(0.5-10)mg/kg体重。

可选的，所述pdgf/pdgfr抑制剂每天用量为(10-100)mg/kg体重。进一步的，所述pdgf/pdgfr抑制剂每天用量为(25-50)mg/kg体重。

可选的，所述肿瘤包括胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、鼻咽癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺癌、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、肾癌、食道癌、黑色素瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤和神经胶质瘤中的至少一种。

在本发明中，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂联合使用，用于制备治疗表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的药物中，可以有效提高治疗效果。

第二方面，本发明提供了一种药物组合物，用于制备治疗表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的药物中，包括抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂。

可选的，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或辅料。进一步的，所述载体包括溶剂、聚合物和脂质体中的一种或多种。进一步的，所述辅料包括稀释剂、赋形剂和稳定剂中的一种或多种。具体的载体和/或辅料的选择与第一方面相同，在此不再赘述。

可选的，所述药物组合物中所述抗vegf抗体和所述pdgf/pdgfr抑制剂的质量比为1：(0.1-10)。

可选的，所述抗vegf抗体包括单链抗体的功能片段、双链抗体的功能片段、嵌合抗体的功能片段、人源化抗体的功能片段中的至少一种。进一步的，所述抗vegf抗体包括贝伐珠单抗、阿柏西普、雷莫芦单抗及雷珠单抗中的至少一种。

可选的，所述药物组合物还包括其他具有或治疗肿瘤的活性成分。进一步的，所述药物包括化疗剂。更进一步的，所述化疗剂包括烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、抗肿瘤动植物成分药、抗肿瘤激素类和铂类化疗药物中的至少一种。

本发明提供的药物组合物可以用于制备治疗表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的药物中，以提高表达成纤维细胞生长因子2的肿瘤的治疗效果。

本发明实施例的优点将会在下面的说明书中部分阐明，一部分根据说明书是显而易见的，或者可以通过本发明实施例的实施而获知。

附图说明

图1为实施例1的小鼠肿瘤体积结果图，其中图1中(a)为植入t241肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体后肿瘤体积结果图，图1中(b)为植入t241肿瘤细胞的小鼠在使用伊马替尼后肿瘤体积结果图，图1中(c)为植入t241肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体和伊马替尼后肿瘤体积结果图，图1中(d)为植入具有fgf2的t241肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体后肿瘤体积结果图，图1中(e)为植入具有fgf2的t241肿瘤细胞的小鼠在使用伊马替尼后肿瘤体积结果图，图1中(f)为植入具有fgf2的t241肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体和伊马替尼后肿瘤体积结果图；

图2为实施例2的小鼠肿瘤体积结果图，其中图2中(a)为植入e0771肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体后肿瘤体积结果图，图2中(b)为植入e0771肿瘤细胞的小鼠在使用伊马替尼后肿瘤体积结果图，图2中(c)为植入e0771肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体和伊马替尼后肿瘤体积结果图，图2中(d)为植入具有fgf2的e0771肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体后肿瘤体积结果图，图2中(e)为植入具有fgf2的e0771肿瘤细胞的小鼠在使用伊马替尼后肿瘤体积结果图，图2中(f)为植入具有fgf2的e0771肿瘤细胞的小鼠在使用抗vegf抗体和伊马替尼后肿瘤体积结果图。

具体实施方式

以下所述是本发明实施例的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明实施例原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明实施例的保护范围。

实施例1

提供t241肿瘤细胞(无fgf2)和引入fgf2的t241肿瘤细胞。将细胞分别在含有100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素(目录号sv30010，hyclone)、2mml-谷氨酰胺(目录号sh30034.01，hyclone)的10％fbs-dmem(目录号sh30243.01，hyclone)培养基中进行培养。

本申请的动物实验使用6-8周龄的雄性c57bl/6小鼠，将小鼠维持在标准的动物饲养条件下，并且饲喂标准饮食。将混悬在30μl、pbs中的1×10⁶个t241肿瘤细胞，以及混悬在30μl、pbs中的1×10⁶个引入fgf2的t241肿瘤细胞，分别皮下植入到不同的c57bl/6小鼠中。每隔一天用卡尺测量肿瘤大小，并根据标准公式计算皮下移植的t241肿瘤体积。

当肿瘤达到一定大小后，将5mg/kg的兔抗小鼠单克隆vegf特异性中和抗体(货号bd0801，由先声制药公司(中国江苏南京)提供)作为本申请所用的抗vegf抗体，每周2次经腹膜内注射到两种小鼠中。将50mg/kg的伊马替尼作为本申请所用的pdgf/pdgfr抑制剂，每天1次经腹膜内注射到两种小鼠中。将5mg/kg的兔抗小鼠单克隆vegf特异性中和抗体，与50mg/kg的伊马替尼作为本申请所用的联合药物，每周2次及每天1次经腹膜内注射到两种小鼠中。同时，对剩下的肿瘤小鼠注射非免疫兔igg同种型(目录号10500c，invitrogen公司)作为对照组。一定时间后，对小鼠进行检查。结果如图1所示。

图1中(a)-(c)为移植有t241肿瘤细胞(无fgf2)的小鼠中肿瘤体积结果，(d)-(f)为移植有引入fgf2的t241肿瘤细胞的小鼠中肿瘤体积结果，其中，“抗vegf抗体”表示注射了兔抗小鼠单克隆vegf特异性中和抗体，“伊马替尼”表示注射了伊马替尼，“联合给药”表示注射兔抗小鼠单克隆vegf特异性中和抗体和伊马替尼，“对照”表示注射非免疫兔igg同种型。图1中(a)-(c)可以看出，在不表达fgf2的实体肿瘤中，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂单独使用时，可以有效抑制肿瘤的体积，联合给药和单独使用抗vegf抗体的效果差异不大。表明不表达fgf2的肿瘤没有对抗vegf抗体产生耐药，也没有对pdgf/pdgfr抑制剂产生耐药。图1中(d)-(f)可以看出，在具有fgf2的实体肿瘤中，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂单独使用时无法抑制肿瘤的体积，联合给药时则可以有效的抑制肿瘤的体积，优于单独使用的效果。表明表达fgf2的肿瘤对单独使用的抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂治疗产生耐药，而联合给药则可以避免耐药情况的产生，并可以更加显著地抑制肿瘤。

实施例2

提供e0771原位乳腺肿瘤细胞(无fgf2)和引入fgf2的e0771肿瘤细胞。本申请的动物实验使用6-8周龄的雄性c57bl/6小鼠，将小鼠维持在标准的动物饲养条件下，并且饲喂标准饮食。将混悬在30μl、pbs中的1×10⁶个e0771肿瘤细胞，以及混悬在30μl、pbs中的1×10⁶个引入fgf2的e0771肿瘤细胞，分别植入到c57bl/6小鼠的乳腺中。每隔一天用卡尺测量肿瘤大小，并根据标准公式计算e0771肿瘤体积。

当肿瘤达到一定大小后，按照实施例1相同的操作进行给药。一定时间后，对小鼠进行检查。结果如图2所示。图2中(a)-(c)为移植有e0771肿瘤细胞(无fgf2)的小鼠中肿瘤体积结果，(d)-(f)为移植有引入fgf2的e0771肿瘤细胞的小鼠中肿瘤体积结果，其中，“抗vegf抗体”表示注射了兔抗小鼠单克隆vegf特异性中和抗体，“伊马替尼”表示注射了伊马替尼，“联合给药”表示注射兔抗小鼠单克隆vegf特异性中和抗体和伊马替尼，“对照”表示注射非免疫兔igg同种型。图2中(a)-(c)可以看出，在不表达fgf2的实体肿瘤中，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂单独使用时，可以有效抑制肿瘤的体积，联合给药和单独使用抗vegf抗体的效果差异不大。表明不表达fgf2的肿瘤没有对抗vegf抗体产生耐药，也没有对pdgf/pdgfr抑制剂产生耐药。图2中(d)-(f)可以看出，在具有fgf2的实体肿瘤中，抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂单独使用时无法抑制肿瘤的体积，联合给药时则可以有效的抑制肿瘤的体积，优于单独使用的效果。表明表达fgf2的肿瘤对单独使用的抗vegf抗体和pdgf/pdgfr抑制剂治疗产生耐药，而联合给药则可以避免耐药情况的产生，并可以更加显著地抑制肿瘤。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

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