利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法与流程

2021-02-02 19:02:16|

446|

起点商标网

本申请属于油脂酶法脱胶技术领域，尤其涉及一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法。

背景技术：

植物毛油是指从植物油料中制取、没经过精炼加工的初级油。植物毛油杂质多、易氧化变质，不宜长期储存。其中，植物毛油胶质是指植物毛油中磷脂、蛋白质和其它配位化合物组成的混合物，主要成分为磷脂，具体可分为水化磷脂和非水化磷脂，因此油脂脱胶也常被称为“脱磷”。磷脂的存在会对植物毛油的精炼工序(工序为脱酸、脱色、脱臭)产生不利的影响，如在碱炼阶段，磷脂会与碱发生皂化反应而消耗部分碱液，影响碱炼效果；在脱色阶段，由于磷脂较强的极性，易被吸附剂吸附，若待脱色油中磷脂含量较大，其在吸附剂表面会形成一层吸附膜，致使吸附剂的吸附活性降低，从而对色素等物质的吸附能力下降；在脱色阶段，磷脂在高温下易分解为多环不挥发物残留在油脂中，从而影响脱臭油的稳定性。因此，磷脂的脱除是油脂精炼的首要工序，至关重要。

另外，脱胶油中的磷含量也是油脂进行物理精炼(工序为脱胶、脱色、脱臭)和化学精炼(工序为脱胶、脱酸、脱色、脱臭)的重要指标。物理精炼因不含碱炼工序，大大减少了化学试剂的耗用量和废水的排放；此外油脂中的一些活性物质如甾醇、生育酚、角鲨烯等也能避免因碱炼而大量损失，因此物理精炼在油脂精炼工艺中扮演重要角色。然而，油脂进行物理精炼的重要条件为脱胶油中磷含量低于10mg/kg,而传统的脱胶方法(水化和酸法脱胶)无法达到这一要求。

生物酶法是近年来发展起来的一种新型油脂精炼技术，已广泛应用于植物毛油脱胶中，其脱胶效率得到显著提高。然而游离磷脂酶存在价格昂贵、催化水解条件苛刻和不易回收等问题，阻碍酶法脱胶在油脂工业中的应用。近年来，磷脂酶的固定化应用于酶法脱胶中已成为研究热点，将磷脂酶固定于惰性载体上，不仅提高了酶的稳定性，而且使其易于回收，降低成本。然而，磷脂酶的固定化也会减小酶与磷脂底物的接触面积，增加酶解时间，从而影响脱胶效率。

技术实现要素：

本申请的目的在于提供一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，旨在解决现有的磷脂酶固定化脱胶会减小酶与磷脂底物的接触面积，增加酶解时间，从而影响脱胶效率的问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

本申请提供一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，所述方法包括：

将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理，使所述共固定剂、所述磷脂酶a1和磷脂酶c吸附到所述载体中，制得固定化磷脂复合酶；

将所述酸性缓冲液和植物毛油混合处理，得到混合液，在所述混合液中添加所述固定化磷脂复合酶，对所述植物毛油进行脱胶处理。

优选地，所述将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理，包括：

将所述载体与所述共固定剂混合，得到第一混合体系；在所述混合体系中加入所述酸性缓冲液混合处理，得到第二混合体系；在所述第二混合体系中加入磷脂酶a1和磷脂酶c并混合处理，得到所述共固定剂、所述磷脂酶a1和磷脂酶c吸附到所述载体的固定化磷脂复合酶。

优选地，所述载体为磁性载体，所述酸性缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，所述共固定剂选自表面活性剂。

优选地，所述磁性载体为fe3o4装载的介孔硅钠米粒子，

所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的浓度0.01～0.1mol/l，ph为4.5～5.5。

优选地，所述共固化剂选自聚乙二醇、吐温-80、明胶中的一种或多种形成的混合物。

优选地，所述将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理的步骤中，按照所述磷脂酶a1和所述磷脂酶c的质量比为1:0.5～2的比例，添加所述磷脂酶a1和所述磷脂酶c。

优选地，所述将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理的步骤中，按照酶活力1000～20000u/g载体的比例，添加所述载体、所述磷脂酶a1和所述磷脂酶c。

优选地，所述将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理，使所述共固定剂、所述磷脂酶a1和磷脂酶c吸附到所述载体中，制得固定化磷脂复合酶，包括：

将fe3o4装载的介孔硅钠米粒子与共固定剂按质量比为1:1～3的比例混合后，加入浓度为0.01～0.1mol/l、ph为4.5～5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，搅拌5～10min，得到混合溶液；

将质量比为1:0.5～2的磷脂酶a1和磷脂酶c，按照酶活力1000～20000u/g载体的比例加入到所述混合溶液中，在温度不超过15℃的条件下搅拌12～36h，进行磁分离后采用所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤，得到固定化磷脂复合酶。

优选地，所述在所述混合液中添加所述固定化磷脂复合酶的步骤中，按酶活力与所述植物毛油的比例为100～2000u/g的比例，在所述混合液中添加所述固定化磷脂复合酶。

优选地，所述在所述混合液中添加所述固定化磷脂复合酶，对所述植物毛油进行脱胶处理的步骤，包括：按酶活力与所述植物毛油的比例为100～2000u/g的比例，在所述混合液中添加所述固定化磷脂复合酶；在温度为40℃～80℃的条件下搅拌或震荡处理，使所述植物毛油发生酶解反应，对所述植物毛油进行脱胶。

本申请提供的植物毛油脱胶方法，将磷脂酶a1、磷脂酶c和共固定剂固定在载体上，在脱胶过程中，共固定剂能够降低油水界面张力，增加磷脂酶与植物毛油之间的接触面积，从而促进磷脂酶发挥脱胶作用。通过本申请提供的植物毛油脱胶方法，可以有效缩短脱胶处理时间，增加脱胶效率。具体的，将植物毛油脱胶处理至磷含量低于10mg/kg所需时间为5～30min。

具体实施方式

为了使本申请要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。

在本申请的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本申请的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

本申请实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本申请实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本申请实施例说明书公开的范围之内。具体地，本申请实施例说明书中所述的重量可以是μg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。

本申请实施例提供一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

s01.将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理，使共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c吸附到载体中，制得固定化磷脂复合酶。

该步骤中，磷脂酶a1和磷脂酶c是用于植物毛油脱胶的酶；载体用于承载磷脂酶a1和磷脂酶c，实现磷脂酶a1和磷脂酶c的固定化，从而提高磷脂复合酶的稳定性和可回收性；共固化剂用于能够降低磷脂复合酶和植物毛油之间的界面张力，增加磷脂复合酶与磷脂之间的接触面积，从而提高脱胶效率；酸性缓冲液用于提供合适的酸性环境和离子强度，以利于磷脂酶a1、磷脂酶c和共固定剂吸附到载体中。

本申请实施例中，通过将上述共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液与载体混合处理，使得共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c吸附到载体中，制得固定化磷脂复合酶。

在一些实施例中，将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理，包括：将载体与共固定剂混合，得到第一混合体系；在混合体系中加入酸性缓冲液混合处理，得到第二混合体系；在第二混合体系中加入磷脂酶a1和磷脂酶c并混合处理，得到共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c吸附到载体的固定化磷脂复合酶。在这种情况下，先将载体与共固定剂充分分散，不仅可以活化载体表面，便于磷脂酶的吸附，而且通过将两者先单独混合，可以提高共固定剂在载体中的分散均匀性；然后加入酸性缓冲液混合处理，为固定化提供良好的酸性环境和离子强度；最后加入磷脂酶a1和磷脂酶c混合处理，此时，共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c在酸性缓冲液中，通过混合处理吸附到载体中，实现共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c的共固定。此外，由于共固定剂与磷脂酶a1、磷脂酶c在酸性缓冲液添加前后分别添加，可以增加共固定剂在载体中的分散均匀性，磷脂酶a1、磷脂酶c的分散均匀性，并进一步增加共固定剂与磷脂酶a1、磷脂酶c的分散均匀性，从而使得共固定剂能够均匀的分散在磷脂酶a1、磷脂酶c的周围，稳定并有效地发挥增加磷脂复合酶与磷脂之间的接触面积的作用，从而提高脱胶效率。

在一些实施例中，在混合体系中加入酸性缓冲液混合处理的过程中，将酸性缓冲液加入混合体系中后，室温(一般为5℃～45℃)下搅拌5～10min，使得酸性缓冲液填充到载体的孔隙结构中，为磷脂酶a1、磷脂酶c和共固化剂的吸附提供良好的化学环境(酸性环境和离子强度)。在一些实施例中，在第二混合体系中加入磷脂酶a1和磷脂酶c并混合处理的过程中，在第二混合体系中加入磷脂酶a1和磷脂酶c后，在低温条件下搅拌处理使共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c充分接触，并吸附到载体中，得到固定化磷脂复合酶。其中，低温条件可以使得磷脂酶活力保持在较低水平。在一些实施例中，低温条件为低于15℃的条件。在一些实施例中，在低温条件下搅拌处理12～36h，使共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c充分接触，并固定在载体的孔隙中实现固定化。

在一些实施例中，将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理的步骤中，按照磷脂酶a1和磷脂酶c的质量比为1:0.5～2的比例，添加磷脂酶a1和磷脂酶c。两种酶对磷脂的水解位点不同，磷脂酶a1特定水解磷脂生成sn-1溶血磷脂，磷脂酶c特异性水解磷酸基与甘油基之间的磷氧键生成甘油二酯。磷脂酶a1和磷脂酶c按照上述比例添加，得到的固定化复合酶中两者固定化量不同，能够满足植物毛油脱胶处理中磷脂水解的需求。

在一些实施例中，将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理的步骤中，按照酶活力1000～20000u/g载体的比例，添加载体、磷脂酶a1和磷脂酶c。在这种情况下，载体中吸附有合适含量的磷脂酶a1和磷脂酶c，能在催化磷脂水解的过程中，有效提高催化效率和催化稳定性，并进一步借助共固化剂降低油水界面，提高酶催化效率，最终实现高效率的脱胶。

在一些实施例中，载体为磁性载体，酸性缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，共固定剂选自表面活性剂。其中，磁性载体赋予得到的固定化磷脂复合酶良好的磁性，一方面，在制备固定化磷脂复合酶的过程中，通过磁分离的方式将得到的固定化磷脂复合酶有效收集；另一方面，在将固定化磷脂复合酶进行植物毛油脱胶后，可以通过磁分离的方式将固定化磷脂复合酶进行回收和再利用，提高固定化磷脂复合酶的重复利用率。柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液能够提供良好的酸性环境和离子强度，促进磷脂酶和共固定剂的吸附。表面活性剂可以改善固定化载体的亲水亲油特性，降低表面张力，增加磷脂复合酶与植物毛油特别是植物毛油中的磷脂之间的接触面积，加速水解反应的进行。在此基础上，将表面活性剂、磷脂酶a1和磷脂酶c，借助柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液提供的化学环境，吸附到磁性载体中，不仅可以有效提高固定化磷脂复合酶对植物毛油的脱胶效率，缩短脱胶时间，而且可以提高固定化磷脂复合酶的可回收性。

在一些实施例中，磁性载体为fe3o4装载的介孔硅钠米粒子。fe3o4装载的介孔硅钠米粒子，微纳米颗粒孔径大，能同时吸附共固定剂和复合磷脂酶，并具有较高的装载率。此外，磁性载体为fe3o4装载的介孔硅钠米粒子得到的固定化磷脂复合酶，在将固定化磷脂复合酶进行植物毛油脱胶后，可以通过磁分离的方式将固定化磷脂复合酶进行回收和再利用，提高固定化磷脂复合酶的重复利用率。采用fe3o4装载的介孔硅钠米粒子作为载体的固定化磷脂复合酶，可重复使用25～35次，且酶活力仍保持在90％以上。

在一些实施例中，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的浓度0.01～0.1mol/l，ph为4.5～5.5。在这种情况下，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液能够为磷脂酶a1、磷脂酶c和表面活性剂吸附在fe3o4装载的介孔硅钠米粒子中提供合适的酸性环境和离子强度，以利于磷脂酶和共固定剂的吸附。

优选地，共固化剂选自聚乙二醇、吐温-80、明胶中的一种或多种形成的混合物。这些共固化剂可以改善固定化载体特别是fe3o4装载的介孔硅钠米粒子的亲水亲油特性，增加磷脂酶与植物毛油之间的接触面积，加速水解反应的进行。此外，上述共固化剂为食用级表面活性剂，采用上述共固化剂处理植物毛油后得到的产品具有很高的安全性，可以拓展植物毛油加工产品的应用领域，特别是满足这些加工产品在食品、药品等方面的安全性能。

在一些实施例中，在得到固定化磷脂复合酶之后，还包括采用酸性缓冲液对固定化磷脂复合酶进行洗涤，去除未被载体吸附的磷脂酶，收集固定化磷脂复合酶，并在低温条件系保存，如保存于4℃冰箱中。其中，洗涤固定化磷脂复合酶的酸性缓冲液与制备固定化磷脂复合酶所用的酸性缓冲液相同，在一些实施例中，酸性缓冲液为浓度为0.01～0.1mol/l、ph为4.5～5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

在一些实施例中，将载体与共固定剂、磷脂酶a1、磷脂酶c和酸性缓冲液混合处理，使共固定剂、磷脂酶a1和磷脂酶c吸附到载体中，制得固定化磷脂复合酶，包括：

将质量比为1:0.5～2的磷脂酶a1和磷脂酶c，按照酶活力1000～20000u/g载体的比例加入到混合溶液中，在温度不超过15℃的条件下搅拌12～36h，进行磁分离后采用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤，得到固定化磷脂复合酶。

s02.将酸性缓冲液和植物毛油混合处理，得到混合液，在混合液中添加固定化磷脂复合酶，对植物毛油进行脱胶处理。

该步骤中，先将酸性缓冲液和植物毛油混合处理，酸性缓冲液可以脱除植物毛油中的水化磷脂(植物毛油的磷酯分为水化磷酯和非水化磷脂)，非水化磷脂通过固定化磷脂复合酶脱除。在一些实施例中，酸性缓冲液为上文所述的浓度为0.01～0.1mol/l、ph为4.5～5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，该缓冲液提供的离子强度和ph有利于促进磷脂酶催化非水化磷脂的水解反应，提高酶活力。

本申请实施例中，植物毛油的类型没有严格限制，可以为山茶毛油、大豆毛油、米糠毛油、菜籽毛油及棕榈毛油等磷含量高于10mg/kg的植物毛油。

在一些实施例中，在混合液中添加固定化磷脂复合酶的步骤中，按酶活力与植物毛油的比例为100～2000u/g的比例，在混合液中添加固定化磷脂复合酶。在这种情况下，单位质量的植物毛油中含有合适含量的固定化磷脂复合酶，有利于酶解反应的进行。

在一些实施例中，在混合液中添加固定化磷脂复合酶，对植物毛油进行脱胶处理的步骤，包括：按酶活力与植物毛油的比例为100～2000u/g的比例，在混合液中添加固定化磷脂复合酶；在温度为40℃～80℃的条件下搅拌或震荡处理，使植物毛油中的磷脂充分发生酶解反应，对植物毛油进行脱胶。在一些实施例中，搅拌或震荡处理在速率为150～700r/min的条件下进行，以促进反应达到平衡。

在一些实施例中，待酶解反应结束后，将得到的混合酶解液置于500～5000r/min条件下离心1～10min，取上层油相，并向其中加入干燥剂无水硫酸钠除去油脂中少量的水分。示例性的，干燥剂可以为无水硫酸钠、无水硫酸镁，但不限于此。

在一些实施例中，采用浓度为0.01～0.1mol/l、ph为4.5～5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液对脱胶处理后的固定化磷脂复合酶进行清洗处理，晾干后重复使用。本申请提供的实施例中，固定化磷脂复合酶可重复使用25～35次，且酶活力仍保持在90％以上。

本申请实施例提供的植物毛油脱胶方法，将磷脂酶a1、磷脂酶c和共固定剂固定在载体上，在脱胶过程中，共固定剂能够降低油水界面张力，增加磷脂酶与植物毛油之间的接触面积，从而促进磷脂酶发挥脱胶作用。通过本申请实施例提供的植物毛油脱胶方法，可以有效缩短脱胶处理时间，增加脱胶效率。具体的，将植物毛油脱胶处理至磷含量低于10mg/kg所需时间为5～30min。

示例性的，本申请实施例提供一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，包括：

将质量比为1:0.5～2的磷脂酶a1和磷脂酶c，按照酶活力1000～20000u/g载体的比例加入到混合溶液中，在温度为4℃的条件下搅拌12～36h，进行磁分离后采用浓度为0.01～0.1mol/l、ph为4.5～5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤，得到固定化磷脂复合酶；

将浓度为0.01～0.1mol/l、ph为4.5～5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入植物毛油中，混合均匀后，再按酶活力与植物毛油为100～2000u/g油脂的比例加入上述步骤中得到的固定化磷脂复合酶，进行酶解反应。在40℃～80℃条件下，搅拌或振荡(150～700r/min)至反应达到平衡。酶解反应完毕后，将混合酶解液置于500～5000r/min条件下离心1～10min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，然后每隔1min测定油脂中的磷含量，并记录使磷含量降低至10mg/kg以下所需的酶解时间；

将离心得到的固定化磷脂复合酶经浓度为0.01～0.1mol/l、ph为4.5～5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤后可重复使用。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg(满足油脂物理精炼的要求)的油脂所需时间为5～30min，与已有的固定化磷酸酶脱胶方法相比，缩短了1～10h，且所用的固定化磷脂复合酶可重复使用25～35次，酶活力仍保持在90％以上。

下面结合具体实施例进行说明。

实施例1

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将fe3o4装载的介孔硅钠米粒子与聚乙二醇按质量比为1:1的比例混合后，加入浓度为0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，室温下搅拌5min后，将质量比为1:1的磷脂酶a1和磷脂酶c按酶活力7000u/g载体加入到上述混合溶液中，4℃下搅拌12h后，然后进行磁分离，接着用0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤得到固定化磷脂复合酶，晾干后保存于4℃冰箱中。

将5.0ml的0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g山茶毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(7000u/g)，在50℃条件下，振荡反应(150r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为15min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用30次时，酶活力仍保持在92％以上。

实施例2

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将fe3o4装载的介孔硅钠米粒子与吐温-80按质量比为1:2的比例混合后，加入浓度为0.05mol/l、ph为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，室温下搅拌5min后，将质量比为1:1.5的磷脂酶a1和磷脂酶c按酶活力10000u/g载体加入到上述混合溶液中，4℃下搅拌36h后，然后进行磁分离，接着用浓度为0.05mol/l、ph为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤得到固定化磷脂复合酶，晾干后保存于4℃冰箱中。

将5.0ml的浓度为0.05mol/l、ph为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g山茶毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(10000u/g)，在55℃条件下，振荡反应(300r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为8min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用30次时，酶活力仍保持在90％以上。

实施例3

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将fe3o4装载的介孔硅钠米粒子与明胶按质量比为1:3的比例混合后，加入浓度为0.1mol/l、ph为5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，室温下搅拌5min后，将质量比为1:2的磷脂酶a1和磷脂酶c按酶活力20000u/g载体加入到上述混合溶液中，4℃下搅拌24h后，然后进行磁分离，接着用0.1mol/l、ph为5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤得到固定化磷脂复合酶，晾干后保存于4℃冰箱中。

将5.0ml的浓度为0.1mol/l、ph为5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g山茶毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到固定化磷脂复合酶(20000u/g)，在60℃条件下，振荡反应(600r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为5min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用35次时，酶活力仍保持在90％以上。

实施例4

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将fe3o4装载的介孔硅钠米粒子与聚乙二醇按质量比为1:1的比例混合后，加入浓度为0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，室温下搅拌5min后，将质量比为1:0.5的磷脂酶a1和磷脂酶c按酶活力5000u/g载体加入到上述混合溶液中，4℃下搅拌12h后，然后进行磁分离，接着用浓度为0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤得到固定化磷脂复合酶，晾干后保存于4℃冰箱中；

将5.0ml的浓度为0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g大豆毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(5000u/g)，在45℃条件下，振荡反应(150r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为30min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用25次时，酶活力仍保持在90％以上。

实施例5

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将fe3o4装载的介孔硅钠米粒子与聚乙二醇按质量比为1:1的比例混合后，加入浓度为0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，室温下搅拌5min后，将质量比为1:1的磷脂酶a1和磷脂酶c按酶活力7000u/g载体加入到上述混合溶液中，4℃下搅拌12h后，然后进行磁分离，接着用浓度为0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗涤得到固定化磷脂复合酶，晾干后保存于4℃冰箱中。

将5.0ml的浓度为0.01mol/l、ph为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g大豆毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(7000u/g)，在55℃条件下，振荡反应(600r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为20min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用25次时，酶活力仍保持在90％以上。

实施例6

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将5.0ml的浓度为0.05mol/l、ph为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g大豆毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(10000u/g)，在55℃条件下，振荡反应(600r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为13min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用27次时，酶活力仍保持在90％以上。

实施例7

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将5.0ml的浓度为0.05mol/l、ph为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g米糠毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(10000u/g)，在55℃条件下，振荡反应(600r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为10min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用30次时，酶活力仍保持在90％以上。

实施例8

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将5.0ml的浓度为0.05mol/l、ph为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g菜籽毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(10000u/g)，在55℃条件下，振荡反应(600r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为18min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用29次时，酶活力仍保持在90％以上。

实施例9

一种利用固定化磷脂复合酶对植物毛油脱胶的方法，方法包括：

将5.0ml的浓度为0.05mol/l、ph为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入50g棕榈毛油中，混合均匀后，再加入1.5g上述得到的固定化磷脂复合酶(10000u/g)，在55℃条件下，振荡反应(600r/min)至反应达到平衡，酶解反应完毕后，将混合酶解液置于1000r/min条件下离心5min，取上层油相，并向其中加入无水硫酸钠除去油脂中少量的水分，测定处理后的油脂中的磷含量，并记录使山茶毛油中磷含量低于10mg/kg时所需的酶解时间。

经上述方法得到磷含量低于10mg/kg的山茶油所需的酶解时间为8min，且相同条件下，固定化磷脂复合酶重复使用32次时，酶活力仍保持在90％以上。

以上仅为本申请的较佳实施例而已，并不用以限制本申请，凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

起点商标作为专业知识产权交易平台，可以帮助大家解决很多问题，如果大家想要了解更多知产交易信息请点击【在线咨询】或添加微信【19522093243】与客服一对一沟通，为大家解决相关问题。