磷虾来源的几丁质产品及其制备方法与流程

背景技术：
：本发明涉及提供经纯化的几丁质组合物的技术，并且特别地，涉及从磷虾壳中获得高度经纯化的几丁质组合物。生物聚合物几丁质或聚(β-(1→4)-n-乙酰-d-葡萄糖胺)是一种重要的天然多糖。几丁质能被无数生物合成，是继纤维素之后最丰富的天然聚合物之一。在其天然状态下，几丁质以有序的结晶微纤维存在，其在节肢动物的外骨骼或真菌和酵母的细胞壁中形成结构成分。几丁质的主要商业来源是蟹壳和虾壳。在工业加工中，几丁质是通过酸处理溶解碳酸钙，然后用碱性溶液溶解蛋白质来提取的。通常，添加脱色步骤。由于初始材料的差异，这些处理必须适应几丁质来源，以生产几丁质产品，并且然后，在脱乙酰化之后，生产脱乙酰几丁质产品。几丁质缺乏溶解性是其加工、使用和表征中的一个主要问题。由于几丁质是一种天然聚合物，以及在体内具有生物相容性和生物可降解性，因此可用于生物医学和制药应用。实例包括药物释放和伤口敷料。此外，几丁质良好的成膜性能对于生物膜、人造皮肤和包装可能是有价值的。过去已经描述了对南极磷虾进行酶水解的方法。已经表明磷虾壳可以从磷虾的经水解基质中分离出来。然而，壳没有进一步加工。由于水分含量，产品在微生物学上不稳定并且价值低。通常，它们在生产后被丢弃。从经济和环境的角度来看，需要利用磷虾的所有部分。磷虾壳在过去也被脱脂并用于提取几丁质。从脱脂磷虾壳中获得的几丁质产品的产率为27.80±1.48％。这导致低的总产率和差的商业潜力。然而，到目前为止，几丁质的可再现特性一直难以获得。标准化产品的缺乏抑制了几丁质治疗应用(尤其是在生物医学和/或制药领域)的全部潜力。因此，仍然需要改进的方法以经济、快速和容易控制的工业加工从磷虾中分离几丁质，用于生产具有高纯度、高结晶指数，和高分子量的几丁质。技术实现要素：本发明提供了生产方法，通过所述方法，来自磷虾的几丁质组合物的性质是可再现的(reproducible)。例如，诸如分子量(链长)和乙酰化程度的性质是可再现的。这种可再现的生产方法使得几丁质组合物最终产品能够广泛用于制药和生物医学应用中。所述方法还使得能够生产保持几丁质天然状态的几丁质组合物。本发明的一个方面涉及生产几丁质组合物的方法，其中，磷虾几丁质的脱乙酰化和解聚被最小化，所述方法包括：a)将磷虾产品脱蛋白以提供经脱蛋白的磷虾产品；以及b)分离几丁质组合物，其中，几丁质组合物为至少约30％至约99％乙酰化的，并且其中，磷虾几丁质的平均分子量为约300kda至约800kda、约400kda至约700kda，或约400kda至约600kda。优选地，磷虾产品包括完整磷虾。所述方法可以优选进一步包括将磷虾产品脱矿物质以提供经脱矿物质的磷虾产品。脱矿物质步骤可以在脱蛋白步骤之前进行。几丁质组合物可以具有大于约80％、大于约85％，或大于约90％的结晶指数(ci)。磷虾几丁质的平均分子量可以为约400kda至约600kda。在一个优选的实施方案中，几丁质组合物的结晶指数(ci)为约85％至约95％，并且磷虾几丁质的平均分子量为约400kda至约600kda。在一个优选的实施方案中，几丁质组合物为至少90％同质的。本发明的另一方面涉及一种生物活性磷虾-几丁质组合物，所述组合物通过包括以下步骤的过程制备：a)将磷虾产品脱蛋白以提供经脱蛋白的磷虾产品；以及b)分离生物活性磷虾-几丁质组合物，其中，几丁质组合物为至少约95％乙酰化的，并且其中，几丁质组合物的平均分子量为约300kda至约800kda、约400kda至约700kda，或约400kda至约600kda。生物活性磷虾-几丁质组合物也可以通过额外的脱矿物质步骤制备，其中磷虾产品被脱矿物质以提供经脱矿物质的磷虾产品。在一个优选的实施方案中，生物活性磷虾-几丁质组合物的结晶指数(ci)大于约80％。本发明的另一个方面涉及生产几丁质组合物的方法，所述方法包括：a)磷虾产品的第一次酶水解，以生产经水解的磷虾；b)分离经水解的磷虾的固体部分；c)将固体部分化学脱蛋白和化学脱矿物质以生产几丁质组合物；以及d)提供几丁质组合物，其包括i)大于约85％的结晶指数；ii)大于约80％的纯度；和iii)约300kda至约700kda的平均分子量。在一个实施方案中，第一次酶水解包括与金属蛋白酶接触。在另一个实施方案中，第一次酶水解进一步包括与第一蛋白酶混合物接触。在一个优选的实施方案中，第一次酶水解包括与第一蛋白酶混合物接触；以及与第二蛋白酶混合物接触。在另一个优选实施方案中，所述方法包括第二次酶水解，其包括与第一蛋白酶混合物接触。第一次酶水解可以包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶，和碱性蛋白酶中的一种或更多种。第一蛋白酶混合物可以包括至少一种碱性蛋白酶；并且第二蛋白酶混合物可以包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶，和碱性蛋白酶。第一蛋白酶混合物可以包括经分解的甲壳类动物捕获物(crustaceancatch)的总重量的0.3-0.5％；并且第二蛋白酶混合物可以包括经分解的甲壳类动物捕获物总重量的0.03-0.05％。在一个优选的实施方案中，蛋白酶来自地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)。第一次酶水解可以包括与细胞壁降解酶接触。优选地，化学脱蛋白发生在脱矿物质之前。优选地，经水解的磷虾的固体部分包括约10％至约25％的脂质，和约35％至约55％的蛋白质。还优选地，经水解的磷虾的固体部分包括约13％至约18％的脂质，和约40％至约50％的蛋白质。化学脱蛋白可以包括将固体部分暴露于naoh。naoh可以具有约1m至约4m的摩尔浓度。化学脱蛋白可以在约80℃下进行。化学脱蛋白可以持续约1至约7天或约1至约4天。化学脱矿物质可以包括将固体部分暴露于hcl。hcl可以具有约1m的浓度。脱矿物质可以在约95℃发生。脱矿物质可以持续约30分钟。在任一过程步骤中，优选温度不超过60℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃，或100℃几丁质组合物的优选结晶指数(ci)大于约85％，大于约90％，或大于约95％。优选地，几丁质组合物的结晶指数(ci)为约85％至约95％。优选地，几丁质组合物包括小于5ppm、小于1ppm，和小于0.1ppm的痕量矿物质的总量。优选地，痕量矿物质的单独量(individualamount)包括小于5ppm、小于1ppm，和小于0.1ppm。痕量矿物质可包括铁、钙、磷、镁、钾、锌、镍、硒，和铜。优选地，几丁质组合物为至少90％，至少95％，或至少99％纯的。还优选地，几丁质组合物为至少90％同质的。本发明的另一方面涉及结晶指数大于80％；分子量小于700kda；并且纯度大于90％的几丁质组合物。优选地，几丁质组合物是磷虾几丁质组合物。几丁质组合物优选具有大于约85％、大于约90％，或大于约95％的结晶指数(ci)。优选地，几丁质组合物具有约85％至约95％的结晶指数(ci)。还优选地，几丁质组合物为至少90％，至少95％，或至少99％纯的。最优选地，几丁质组合物基本上不含杂质。杂质可能包括蛋白质、脂类、痕量矿物质，及其组合。“基本上不含”是指包含少于10％、少于5％，或少于1％的杂质。在一个优选的实施方案中，几丁质组合物包括小于5ppm、小于1ppm，和小于0.1ppm的痕量矿物质的总量。优选地，痕量矿物质的单独量包括小于5ppm、小于1ppm，和小于0.1ppm。痕量矿物质可包括铁、钙、磷、镁、钾、锌、镍、硒，和铜。在一个优选的实施方案中，几丁质组合物包括少于10％的蛋白质、少于5％的蛋白质、少于1％的蛋白质，或少于0.1％的蛋白质。在另一个优选的实施方案中，几丁质组合物包括少于10％的脂质、少于5％的脂质、少于1％的脂质，或少于0.1％的脂质。优选地，几丁质组合物包括约300kda至约800kda、约400kda至约700kda，或约400kda至约600kda的平均分子量。本发明的另一方面涉及一种几丁质组合物，其具有约80％至约90％的结晶指数；约400kda至约600kda的平均分子量；和约90％至约98％的纯度。附图说明图1是示出了从原材料(诸如磷虾产品)中分离几丁质组合物的步骤的流程图。第一步骤涉及第一次水解。第二步骤涉及磷虾壳制备。第三步骤涉及第二次水解。第四步骤涉及提取几丁质以生产几丁质组合物。具体实施方式在磷虾壳中发现的几丁质是与蛋白质形成的复杂网络(即多糖-蛋白质复合物)的成分(constituent)，痕量矿物质沉积在该网络上形成坚硬的壳。一方面，本发明提供了从来源自磷虾壳的几丁质中除去蛋白质和其它有害成分(例如氟化物)并保持几丁质天然结构(例如分子量和乙酰化程度)的方法。由于本发明的方法基本上保持了磷虾几丁质的天然状态，最终产品是可再现和可预测的。例如，诸如分子量(链长)和乙酰化程度的性质是可再现的。这种可再现的生产方法使得最终产品磷虾几丁质组合物能够用于通常需要标准化的制药/生物医学应用中。本发明还提供了测定磷虾中总的和可提取的几丁质；以及磷虾中几丁质和蛋白质结合的强度和性质的分析方法。一方面，本发明提供了从磷虾中提取几丁质的环境可持续方法，所述方法保留了最终产品中的分子特异性。在一个实施方案中，这样的方法可以在运输船(诸如，例如磷虾收获船)上进行。在整个说明书中，数量由范围，以及范围的上下边界来定义。每个下边界可以与每个上边界组合以定义一个范围。上下边界应该作为一个独立的元素。磷虾产品本发明可以使用任何种类的磷虾。优选的磷虾是南极磷虾(euphausiasuperba)。也考虑使用太平洋磷虾(euphausiapacifica)。磷虾也可以是完整磷虾、磷虾粉末(powder)，或磷虾粉(meal)。完整磷虾可以是新鲜的或预先冷冻的。然而，在60分钟内，更优选在30分钟内捕获的新鲜完整磷虾是优选的。磷虾粉末通过本领域已知的任何方法制成。在一个实施方案中，磷虾产品通过ep2334199b1中描述的方法生产。在一个实施方案中，磷虾产品通过将经分解的磷虾与第一蛋白酶混合物和第二蛋白酶混合物接触来生产。分解甲壳类动物捕获物甲壳类动物捕获物被分解(对于新捕获的磷虾，立即分解)，以形成经分解的甲壳类动物捕获物。分解涉及机械地将甲壳类动物捕获物分解成更小的块或更小的颗粒尺寸，以便更有利于后续的过程步骤。以下值可以以任何方式组合，以产生经分解的甲壳类动物捕获物的颗粒尺寸的最小值、最大值或范围：1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、20mm、21mm、22mm、23mm、24mm，和25mm。例如，经分解的甲壳类动物捕获物的颗粒尺寸可以为约1-25mm，更优选为约3-15mm，且最优选为约3-6mm。甲壳类动物捕获物可以使用任何常规方式分解，以实现特定范围的颗粒尺寸。例如，分解设备可以研磨、打浆、碾磨，和/或切碎甲壳类动物捕获物。分解设备的实例包括，但不限于，刀式粉碎机、搅拌机，和均质机。当甲壳类动物捕获物是新鲜的(例如在60分钟内捕获的磷虾)时，分解过程发生的温度约是捕获甲壳类动物捕获物的水的环境温度。因此，温度将为约-2℃至约+1℃，优选约0℃至约+6℃。水解第二步骤涉及将经分解的甲壳类动物捕获物与一种或更多种蛋白水解酶接触，以提供经水解的甲壳类动物捕获物。当经分解的甲壳类动物捕获物经历水解时，形成经水解的甲壳类动物捕获物。水解是一种可由生物试剂(诸如蛋白水解酶)引起或介导的化学反应或过程，由此天然蛋白质序列变得更短(即，例如，通过破坏氨基酸序列一级结构的肽键)以形成更小的肽和游离的氨基酸。经分解的甲壳类动物捕获物需要被水解，以便在死亡时从甲壳类动物捕获物中释放的消化酶(诸如脂肪酶和磷脂酶)可以被失活。如果这些消化酶在释放时没有失活，那么它们会破坏甲壳类动物捕获物中的磷脂和脂肪酸。为了使消化酶失活，在一定条件下将经分解的甲壳类动物捕获物与蛋白水解酶接触，形成经水解的甲壳类动物捕获物。蛋白水解酶被特别选择以靶向消化酶，并对磷虾中可以在下游利用的其他蛋白质的破坏最小，同时从经分解的甲壳类动物捕获物的外骨骼中分离出一些磷脂和肽。选择水解条件(诸如酶、温度、ph，和持续时间的选择)，以获得具有特定水解程度的部分经水解甲壳类动物捕获物。部分经水解的捕获物是优选的，这样消化酶可以失活而其他蛋白质可以分解成更小的肽和游离氨基酸。相比之下，完全经水解的甲壳类动物捕获物(这不是优选的)将意味着捕获物中的所有蛋白质将被分解成游离氨基酸。水解程度可以通过本领域已知的方法(诸如ph-stat、三硝基苯磺酸(tnbs)、邻苯二甲醛(opa)、三氯乙酸可溶性氮(sn-tca)，和甲醛滴定法)来测定。以下百分比可以组合以产生一个范围或者单独用作最小值或最大值，以指定水解程度：10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，和99％。例如，甲壳类动物捕获物中超过约30％的蛋白质被水解。更优选地，甲壳类动物捕获物中超过约40％的蛋白质被水解。在另一个实施方案中，水解度可以高达90％，以指定水解几乎完成。此外，部分经水解的蛋白质因其性质而增加了蛋白质的可消化性。例如，部分经水解蛋白质的胃蛋白酶消化率可以大致为约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％，或95％。最优选地，部分经水解蛋白质的胃蛋白酶消化率为约91％。提高的消化率意味着部分经水解的蛋白质对不能合成必需氨基酸的动物来说是有营养的。存在兴趣将部分经水解的蛋白质副产物用作水生物种和/或宠物的饲料添加剂。胃蛋白酶消化率可以通过体内标准操作或体外更新操作来测量。此前，研究人员将使用大鼠、公鸡和/或小鸡(chicken)受试者来测定体内胃蛋白酶消化率，以测量动物喂食包含蛋白质化合物时消化的蛋白量。将对动物粪便进行氮含量分析，这将提供产品中可消化蛋白质的量的指示。测定蛋白质消化率的更新方法可以在体外进行，通过向经水解蛋白质溶液中加入分光镜检查剂，使其与胺官能团或羧酸官能团反应，从而可以光学评估酶消化过程中释放的氨基酸量。此外，一种或更多种蛋白水解酶(proteolyticenzyme(s))、水解条件，和水解持续时间被特别选择以使消化酶失活，而基本不使磷虾中的任何蛋白质(包括消化酶和其他蛋白质(除消化酶之外的蛋白质))变性。当蛋白质失去其天然状态的四级、三级和/或二级结构时，就会发生变性。在另一个实施方案中，消化酶没有变性或者其他蛋白质没有变性。没有变性的部分经水解的蛋白质是优选的，因为已经发现它们以不可用于生物生长的形式保留大量的水，比以不可用于生物生长的形式保留较少的水的已经变性的蛋白质高至2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。保持水分的能力通过增加产品的流动性和可储存性来增加ppc的效用。因此，对于ppc或包含部分经水解的蛋白质的任何其它下游产品来说，能够在更长的时间保持大量的水而不促进生物生长是有利的。基本上不使其它蛋白质变性被定义为磷虾中其它蛋白质的变性为0％、小于l％、小于2％、小于3％、小于4％、小于5％、小于6％、小于7％、小于8％、小于9％、小于10％、小于20％、小于25％，或小于30％。水解优选发生在经分解的甲壳类动物捕获物与蛋白水解酶接触并孵育时。孵育的最佳温度是激活具体酶的温度，其有助于消化酶的水解，而不会使甲壳类动物捕获物中的其他蛋白质变性。所述温度可以在加工过程中通过本领域已知的任何方式来实现。优选地，将蛋白水解酶加入热水中并然后在搅拌下与经分解的甲壳类动物捕获物混合。或者，可以将蛋白水解酶加入水中并然后加热混合物，或者将酶、水和经分解的甲壳类动物捕获物混合在一起并然后加热。可以将以下百分比值组合起来，以产生接触步骤中基于经分解的捕获物的重量添加的水量的最小值、最大值或范围：35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％，和55％。例如，水的添加量最多为经分解的捕获物重量的约50％。在另一个实例中，基于经分解的捕获物的重量，添加约45％至约50％的水。可以将以下值组合起来，以产生经分解的甲壳类动物捕获物最佳水解(即孵育)的温度的最小值和最大值或范围：45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃、71℃、72℃、73℃、74℃，和75℃。例如，接触步骤包括在约45℃至约75℃的温度范围内孵育经分解的甲壳类动物捕获物。这些温度可适用于水的温度或水、酶和/或经分解的甲壳类动物捕获物的混合物的温度。例如，在与一种或更多种蛋白水解酶混合之前，可以将水加热到约60℃。在另一个实例中，一种或更多种酶可以在约45℃至约65℃下最佳地发挥作用。所用酶的量可由本领域普通技术人员确定，以足够使消化酶失活而基本不会使磷虾中的其它蛋白质变性，并从经分解的甲壳类动物捕获物的外骨骼中分离出一些磷脂和肽。例如，蛋白水解酶的用量可以小于经分解的甲壳类动物捕获物总重量的约0.1％。可以将以下值以任何方式组合，以产生蛋白水解酶的量占分解的甲壳类动物捕获物总重量的百分比的最小值和最大值的范围：0.3％、0.29％、0.28％、0.27％、0.26％、0.25％、0.24％、0.23％、0.22％、0.21％、0.2％、0.19％、0.18％、0.17％、0.16％、0.15％、0.14％、0.13％、0.12％、0.11％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％，和0.01％。在一个实施方案中，蛋白水解酶可以在步骤b)中以基于经分解的甲壳类动物捕获物的总重量的约0.01％至0.1％的量使用。溶液的ph可基于所用的具体一种或更多种蛋白水解酶进行调节，以确保水解最佳进行。水解步骤可能需要任何合理的时间来产生经水解的甲壳类动物捕获物。影响水解所需时间的因素包括混合物的温度和ph，以及反应是否在搅拌下进行和搅拌强度。例如，水解可能需要少于100分钟。可以将以下以分钟为单位的值以任何方式组合，以产生水解所需时间的最小值和最大值范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39，和40。例如，水解可能需要约15-18分钟，或者水解可能需要少于约45分钟。在另一个实施方案中，水解可能需要超过100分钟。可以将以下以分钟为单位的值以任何方式组合，以产生水解所需时间的最小值和最大值范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235，和240。例如，水解可能需要约100-180分钟，或者水解可能需要少于约180分钟。蛋白水解酶对本发明有用的蛋白水解酶是食品级酶，其通过沿着蛋白质主链水解肽键将大蛋白质分子切割成小分子。如本文所用，术语“蛋白水解酶”、“蛋白酶”，和“肽酶”可互换使用。如本文所用，术语“外肽酶”是指通过切割肽键除去肽或蛋白质末端氨基酸的水解酶。末端氨基酸是蛋白质或肽的氮末端或碳末端约10个氨基酸以内的氨基酸。如本文所用，术语“内肽酶”是指催化多肽或蛋白质中肽键断裂的酶。肽酶是指作用于肽键，且内肽酶是指这些都是内部的键(internalbonds)。蛋白水解酶包括但不限于酯酶，诸如羧酸酯水解酶、硫酯水解酶、磷酸单酯水解酶、磷酸酶、磷酸二酯水解酶、三磷酸单酯水解酶、硫酸酯水解酶、硫酸酯酶、二磷酸单酯酶，和磷酸三酯水解酶；糖基化酶，诸如糖苷酶，即水解氧-和硫-糖基化合物的酶和水解氮-糖基化合物的酶；作用于醚键(诸如水解硫醚和三烷基锍)的酶；肽酶包括外肽酶(诸如氨肽酶、二肽基肽酶和三肽基肽酶、羧肽酶(丝氨酸型羧肽酶、金属羧肽酶、半胱氨酸型羧肽酶)、二肽酶、ω肽酶和肽基二肽酶)，和内肽酶(诸如丝氨酸内肽酶、半胱氨酸内肽酶、天冬氨酸内肽酶、金属内肽酶(诸如来自abenzymes的7089，cas9001-92-7)，和苏氨酸内肽酶；水解单个亚类中卤化碳化合物的酶；作用于磷-氮键的酶；作用于硫-氮键的酶；水解碳-膦酰基的酶；作用于硫-硫键的酶；和作用于碳-硫键的酶。在一个实施方案中，可以使用蛋白酶混合物。合适的蛋白酶混合物包括一种或更多种酸性、中性，或碱性蛋白酶。酸性蛋白酶是蛋白质消化酶，在酸性条件下(例如ph2.0-5.0、2.0-3.0、2.0-4.0，或3.0-5.0)表现出最大的活性和稳定性，并在ph6.0以上时失活。酸性蛋白酶通常具有低等电点和低碱性氨基酸含量。中性蛋白酶在窄的ph范围(ph5至8)内具有活性，并且耐热性相对较低。中性蛋白酶包括半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶，和一些丝氨酸蛋白酶。碱性蛋白酶的特征在于它们在碱性条件下(例如至少ph9、至少ph10、至少ph11)的高活性。碱性蛋白酶的实例包括丝氨酸蛋白酶。它们具有广泛的底物特异性，包括酯酶和糖苷酶活性。丝氨酸蛋白酶的等电点一般为ph4至6。在高碱性ph下具有活性的丝氨酸碱性蛋白酶代表丝氨酸蛋白酶的最大亚群。在一个实施方案中，蛋白酶混合物包括来自地衣芽孢杆菌的蛋白酶。来自地衣芽孢杆菌的酸性、中性，和碱性蛋白酶是本领域已知的。参见，例如，yilmazeta1.,jenzymeinhibmedchem,2016,31(6):1241-1247；raoeta1.,microbiologyandmolecularbiologyreviews,1998,62(3):597-635；和jelloulieta1.,processbiochemistry,2011,46(6):1248-1256在一个实施方案中，蛋白酶混合物包括从曲霉(aspergillus)属生物体获得的食品级细胞壁降解酶。来自曲霉的细胞壁降解酶的实例包括淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶，和纤维素酶。具体的实例包括β-葡糖苷酶、内切葡聚糖酶、滤纸酶(filterpaperase)、多聚半乳糖醛酸酶，和果胶酸裂解酶。在一个实施方案中，本发明的方法包括添加具有至少一种碱性蛋白酶的第一蛋白酶混合物；和具有酸性蛋白酶、中性蛋白酶，和碱性蛋白酶中至少一种的第二蛋白酶混合物。第一蛋白酶混合物包括至少一种、至少两种、至少三种，或至少四种碱性蛋白酶。在一个实施方案中，一种或更多种碱性蛋白酶来自地衣芽孢杆菌。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物仅包括内切蛋白酶。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物包括一种碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物包括两种碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶和第二碱性蛋白酶总共是第一蛋白酶混合物中蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-80％，且第二碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-80％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-30％，且第二碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-10％，且第二碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶和第二碱性蛋白酶在第一蛋白酶混合物中等比例存在。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物包括三种碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶、第二碱性蛋白酶，和第三碱性蛋白酶总共是第一蛋白酶混合物中蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-80％，第二碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-80％，且第三碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-80％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-30％，第二碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-30％，且第三碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的50-98％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-10％，第二碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-30％，且第三碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的10-98％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶、第二碱性蛋白酶，和第三碱性蛋白酶在第一蛋白酶混合物中等比例存在。第二蛋白酶混合物包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶，和碱性蛋白酶中的至少一种。在一个实施方案中，酸性蛋白酶、中性蛋白酶，或碱性蛋白酶来自地衣芽孢杆菌。第二蛋白酶混合物的蛋白酶可以包括外切蛋白酶和内切蛋白酶。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括酸性蛋白酶和中性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和中性蛋白酶总共是第二蛋白酶混合物中蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括1-80％的酸性蛋白酶和1-80％的中性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-30％，且中性蛋白酶是蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-10％且中性蛋白酶是蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和中性蛋白酶在第二蛋白酶混合物中等比例存在。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括酸性蛋白酶和碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和碱性蛋白酶总共是第二蛋白酶混合物中蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括1-80％的酸性蛋白酶和1-80％的碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-30％，且碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-10％，且碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和碱性蛋白酶在第二蛋白酶混合物中等比例存在。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括中性蛋白酶和碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第一中性蛋白酶和碱性蛋白酶总共是第二蛋白酶混合物中蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括1-80％的中性蛋白酶和1-80％的碱性蛋白酶。在一个实施方案中，中性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-30％，且碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，中性蛋白酶是蛋白酶混合物的1-10％，且碱性蛋白酶是蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，中性蛋白酶和碱性蛋白酶在第二蛋白酶混合物中等比例存在。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶，和碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶总共是第二蛋白酶混合物中蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包含1-80％的酸性蛋白酶、1-80％的中性蛋白酶，和1-80％的碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包含1-10％的酸性蛋白酶、1-30％的中性蛋白酶，和60-98％的碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶、中性蛋白酶，和碱性蛋白酶在第二蛋白酶混合物中等比例存在。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物的碱性蛋白酶不在第二蛋白酶混合物中。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物/第二蛋白酶混合物的量为0.2-0.6％的第一蛋白酶混合物和0.02-0.06％的第二蛋白酶混合物。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物/第二蛋白酶混合物的量为0.3-0.5％的第一蛋白酶混合物和0.03-0.05％的第二蛋白酶混合物。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物的量为约0.4％，第二蛋白酶混合物的量为约0.04％。第一蛋白酶混合物的优选市售蛋白酶混合物包括endocut-02l(tailorfood/tailorzyme)。第二蛋白酶混合物的优选市售蛋白酶混合物包括exocut-bl(tailorfood/tailorzyme)。exocut-bl可以包括来自曲霉的细胞壁降解酶以代替一种或更多种蛋白酶，或除了一种或更多种蛋白酶之外可以包括来自曲霉的细胞壁降解酶。可以将以下值以任何方式组合，以产生exocut蛋白酶混合物的量占经分解的甲壳类动物捕获物总重量的百分比的最小值和最大值的范围：0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.25％，或0.5％。在一个实施方案中，endocut/exocut的量为0.2-0.6％的endocut蛋白酶混合物和0.02-0.06％的exocut蛋白酶混合物。在一个实施方案中，endocut/exocut的量为0.3-0.5％的endocut蛋白酶混合物和0.03-0.05％的exocut蛋白酶混合物。在一个实施方案中，endocut混合物的量为约0.4％，并且exocut混合物的量为约0.04％。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物和第二蛋白酶混合物同时加入到经分解的甲壳类动物捕获物中。在一个实施方案中，水解步骤包括在甲壳类动物捕获物与第二蛋白酶混合物接触之前，使甲壳类动物捕获物与第一蛋白酶混合物接触。在该实施方案中，可以将以下以分钟为单位的值以任何方式组合，以产生在第二蛋白酶混合物添加之前，用第一蛋白酶水解所需时间的最小值和最大值范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235，和240。例如，在加入第二蛋白酶混合物之前，用第一蛋白酶混合物将经分解的甲壳类动物捕获物水解1-10分钟。在一个实施方案中，水解步骤包括在甲壳类动物捕获物与第一蛋白酶混合物接触之前，使甲壳类动物捕获物与第二蛋白酶混合物接触。在该实施方案中，可以将以下以分钟为单位的值以任何方式组合，以产生在第一蛋白酶混合物添加之前，用第二蛋白酶水解所需时间的最小值和最大值范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235，和240。例如，在加入第一蛋白酶混合物之前，用第二蛋白酶混合物将经分解的甲壳类动物捕获物水解1-10分钟。在另一个实施方案中，使用包括几丁质酶和胶原酶的第二酶。该酶可以与第一酶或酶组合结合使用。在另一个实施方案中，用于水解的酶不包含外肽酶。接触步骤还可以包括使用有机溶剂。有用的有机溶剂的实例包括但不限于乙醇、丙酮，和乙酸乙酯。停止水解可以通过使一种或更多种酶失活来停止水解。一种或更多种酶可以以不同的方式(包括添加抑制剂、去除辅因子(例如通过透析去除关键离子)、通过热失活，和/或通过任何其他失活方式)失活。每种酶失活的条件可能不同，但通常包括提高溶液的ph和温度。例如，7089在ph值＞7.5和温度高于55℃开始失活。选择条件，使酶在不会使经分解的甲壳类动物捕获物中的蛋白质变性的温度下失活。以下温度可以以任何方式组合，以产生一种或更多种酶失活而不使甲壳类动物捕获物中的蛋白质变性的最小、最大或温度范围：85℃、86℃、87℃、88℃、89℃、90℃、91℃、92℃、93℃、94℃、95℃、96℃、97℃、98℃、99℃和100℃。例如，酶a可以在超过约90℃或优选在约92℃至约98℃的温度下失活。如上所述，水解在正确的时刻停止，以便甲壳类动物捕获物优选仅部分水解，以产生经水解的甲壳类动物捕获物，其中，蛋白质具有特定的水解程度。此外，本领域普通技术人员能够确定用特定酶水解的条件和持续时间以及产生一定百分比的甲壳类动物捕获物被水解的经水解甲壳类动物捕获物的条件。第二水解步骤几丁质可以用传统方法(诸如上述方法)从磷虾中提取。然而，已经发现脂质干扰该过程。在所测试的磷虾材料中，有大量的总脂质残留(它们的重量为原材料重量的16％)。它们显著影响提取过程。在脱蛋白阶段注意到皂化过程。经分析，已确定这是化学物质攻击蛋白质并释放与一些脂质反应生成磷脂复合物的磷时发生的交叉反应的结果。它们将迫使混合物形成一种凝胶(它实际上非常类似于凝胶)，因此迫使搅拌速率增加，而提取效率下降。该凝胶对温度非常敏感。它的粘度随着温度的升高而增加，到了某一点，我们可能会失去对捕获物的控制。当涉及到从磷虾材料中提取几丁质时，蛋白质是需要关注的关键因素。与虾或蟹壳相反，来自磷虾的几丁质与蛋白质结合似乎比与矿物质结合更强。一些脂质与这些蛋白质有很强的相关性。如果我们事先去除过多的脂质，就有可能去除部分几丁质/蛋白质复合物，这些复合物是磷虾的一个完整部分。如果脂质过多，则在提取过程中会形成凝胶。这种凝胶限制了我们操作提取的温度。它还会使加工反应器外的液/固分离过程显著复杂化，从而影响最终纯度。出人意料地发现，第二水解步骤提高了几丁质的产率并提高了结晶指数。在一个实施方案中，使用上述第一蛋白酶混合物对上述磷虾产品进行第二水解步骤。可以将以下值以任何方式组合，以产生第一蛋白酶混合物的量占用于几丁质提取的经加工的磷虾产品的总重量的百分比的最小值和最大值的范围：0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％，或0.5％。可以将以下值以任何方式组合，以产生endocut蛋白酶混合物的量占经分解的甲壳类动物捕获物总重量的百分比的最小值和最大值的范围：0.01％、0.l％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％，或1.5％。在该实施方案中，可以将以下以分钟为单位的值以任何方式组合，以产生第二水解步骤中水解所需时间的最小值和最大值范围：30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115，和120。例如，用第一蛋白酶混合物将经分解的甲壳类动物捕获物水解50-80分钟或55-65分钟。可以将下列值组合起来，以产生第二水解步骤(即孵育)的温度的最小值和最大值或范围：45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃、71℃、72℃、73℃、74℃，和75℃。例如，温度范围为约45℃至约75℃，约45℃至约60℃，或约50℃至约60℃。这些温度可应用于水的温度或用于提取的水、一种或更多种酶，和/或经加工的磷虾产品的混合物的温度。例如，在与一种或更多种蛋白水解酶混合之前，可以将水加热到约55℃或约60℃。在另一个实例中，一种或更多种酶可以在约50℃至约60℃下最佳地发挥作用。在一个实施方案中，将水以约1:1.5、0.07％至0.2％的第一蛋白酶混合物在约50℃-60℃的温度范围内加入到提取几丁质的经加工的磷虾产品中。分离几丁质组合物分离几丁质组合物包括脱蛋白步骤和脱矿物质步骤。保留磷虾几丁质天然结构的脱蛋白磷虾中的几丁质含量通常约为磷虾重量的12-16％。磷虾的脱蛋白包括破坏几丁质和蛋白质之间的化学键，从而使得蛋白质能够与几丁质分离。本发明提供了脱蛋白的方法，通过该方法磷虾几丁质的天然结构被基本上保留。磷虾几丁质的分子量(mw)约为250-350kda。磷虾几丁质为α型且结晶度高(约90％)。在一个方面，通过最小化或完全避免脱蛋白期间几丁质的脱乙酰化和解聚来保存天然磷虾几丁质结构。例如，至少约50％至约99％的几丁质被乙酰化。该范围的其它下边界的实例包括约55％、约60％、约65％、约70％，和约75％。该范围的其它上边界的实例包括约80％、约85％、约90％、约95％和约98％。例如，几丁质组合物的平均分子量为约300kda至约400kda，或约400kda至约600kda。该范围的其它下边界的实例包括约300kda、约325kda、约340kda、约350kda，和约375kda。该范围的其它上边界的实例包括约300kda、约325kda、约340kda、约350kda、约375kda、约380kda、约400kda、约500kda，和约800kda。在一个实施方案中，几丁质产品为至少80％、至少90％、至少95％，或至少99％同质的。举例来说，当几丁质产品的99％具有包括mw、脱乙酰度、纯度或结晶指数的特定特性(或特定特性的范围))时，几丁质产品为99％同质的。此外，在一些实施方案中，萜类(例如虾青素和角黄素)也包括在最终产品几丁质组合物中。天然结构和营养元素的这种保留使得能够生产可再现的几丁质组合物最终产物，这种再现性对于生物医学和制药应用是重要的。化学脱蛋白涉及用一种或更多种脱蛋白试剂处理磷虾，这些试剂包括但不限于naoh、na2co3、nahco3、koh、k2co3、ca(oh)2、na2so3、nahso3、cahso3、na3po4，和na2s。除了脱蛋白之外，使用化学试剂，特别是在浓度、温度和时间的较高端，导致几丁质部分脱乙酰和降低其分子量的生物聚合物的水解，即，从而破坏天然几丁质结构。然而，在本发明的一些实施方案中，在温和条件和/或低浓度下使用化学试剂的脱蛋白可以与另一种脱蛋白方法组合。例如，化学试剂的浓度不超过约0.5m，温度不超过约50℃，且处理持续时间不超过约1小时。例如，在25℃下0.3mnaoh溶液处理45分钟能够脱蛋白，同时最小化脱乙酰和解聚。在一个实施方案中，酶水解可以发生在先前冷冻的磷虾上以产生经水解的磷虾产品。将经水解的磷虾产品通过滗析器或沉降器以将壳(固相)与可溶性部分(液相)分离。然后可将壳干燥并用上面列出的碱之一进行化学脱蛋白。经水解的磷虾的固相或固体部分包括使用所述生成备的以下量的脂质、最小或最大量的脂质，或脂质范围：基于固体部分的总百分比的10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％，和25％。例如，经水解的磷虾的固体部分可包括约10％至约25％的脂质或约13％至约18％的脂质。经水解的磷虾的固相或固体部分包括使用所述值生成的以下量的蛋白质、最小或最大量的蛋白质，或蛋白质范围：基于固体部分的总百分比的35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％。45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％，和55％。例如，经水解的磷虾的固体部分包括约35％至约55％的蛋白质或约40％至约50％的蛋白质。例如，使用naoh进行化学脱蛋白时，其浓度、最小或最大浓度，或浓度范围为以下值：1m、2m、3m、4m或5m；其经升高的温度、经升高的温度最小值或最大值，或经升高的温度的范围为以下值：50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃，和100℃；其持续时间、持续时间最小时间段或最大时间段，或持续时间范围为以下值：6小时、12小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天，和10天。将磷虾脱矿物质在本发明的一些实施方案中，磷虾可以通过化学或生物方式脱矿物质以除去碳酸钙。将磷虾脱矿物质优选通过将磷虾暴露于酸处理来进行。脱矿物质剂的实例包括但不限于hcl、hno3、h2so4、ch3cooh，和hcooh。优选的脱矿物质剂是稀释的hcl。酸反应分解碳酸钙，以形成水溶性钙盐、水，和二氧化碳。磷虾中存在的其他矿物质反应类似，并在酸的存在下形成可溶性盐。通过过滤和水洗除去盐。脱矿物质过程的酸、浓度、持续时间和温度可由本领域普通技术人员确定。典型条件的一个实例是3.5％hcl在20℃下1.5小时，使磷虾脱矿物质。例如，脱矿物质酸可以是hcl，其浓度、最小浓度、最大浓度或浓度范围为以下值：0.1m、0.2m、0.3m、0.4m、0.5m、0.6m、0.7m、0.8m、0.9m、1m、1.1m、1.2m、1.3m、1.4m，和1.5m、2m、2.5m、3m、3.5m、4m、4.5m，和5m。脱矿物质的温度可以是以下值的经升高的温度、经升高的温度最小值或最大值，或范围：60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、105℃，和110℃。脱矿物质持续时间可以是以下值的持续时间、持续时间最小时间段、持续时间最大时间段，或持续时间范围：10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟，和60分钟。在一个实施方案中，脱矿物质条件包括0.5m-2.0mhcl，在80℃-100℃下20-45分钟。在一个实施方案中，脱矿物质步骤可以用1mhcl在90℃下发生30分钟。在一个实施方案中，外壳用1.7mhcl在环境温度下处理6小时，并然后用2.5mnaoh在75℃下处理1小时。色素可以用1％高锰酸钾分解。将经纯化的几丁质产品冻干。在一个实施方案中，最终的几丁质产品没有痕量矿物质。在另一个实施方案中，最终几丁质产品具有小于5ppm、4ppm、3ppm、2ppm、1ppm、0.9ppm、0.8ppm、0.7ppm、0.6ppm、0.5ppm、0.4ppm、0.3ppm、0.2ppm，或0.1ppm的痕量矿物质。痕量矿物质包括铁、钙、磷、镁、钾、锌、镍、硒，和铜。在一个实施方案中，脱矿物质在脱蛋白之前进行。通过在脱蛋白之前进行脱矿物质，与在脱矿物质之前进行脱蛋白相比，随后的几丁质组合物更纯、更短，并且损失最终几丁质质量更少。在一个实施方案中，脱蛋白在脱矿物质之前进行。脂质去除脂质去除步骤可以可选地用于“抛光”经分离的几丁质。可以使用任何去除脂质的方法，诸如用有机溶剂(诸如乙醇或甲醇)提取。乙醇或甲醇可以通过蒸发从提取物中去除。得到的经抛光几丁质是透明的白色。结晶指数结晶指数(ci)是指以结晶状态存在的材料比例。换句话说，ci是结晶度的定量指标。通常，几丁质及其低聚物的结晶度可以用x光衍射测量来评估。几丁质的峰值强度记录在4.5°至50°的散射范围内，扫描步长为0.02°，速度为4.0°分钟-1。ci通常通过如下所示使用最大强度110(i110)和无定形晕圈贡献的强度(iam)的方法来测量：ci＝((i110-iam)/i110)×100(7)结晶指数提供了关于几丁质及其衍生物中结晶部分的概念。可以调整几丁质产品的ci以获得更高的ci。例如，经合成样品的ci可能取决于酸/碱浓度。例如，使用中等碱浓度和低酸浓度可获得较高的结晶度。在另一个实例中，可以通过用浓hcl氧化分子的非晶区来增加ci。本发明的过程提供ci为至少80、85、90或95的磷虾几丁质，而不需要额外的结晶或再结晶步骤或过程。优选地，ci大于以下值，或者用以下值产生ci的范围：约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、92、93、94，或95。例如，ci大于约85、ci大于约90，或ci大于约95。在另一个实例中，ci为约85至约95。纯度最终几丁质产物的纯度至少为90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％，或99％纯的。优选地，几丁质组合物至少为90％，至少95％，或至少99％纯的。杂质可能包括蛋白质、脂类和矿物质。举例来说，根据所要求保护的发明的具有95％纯度的几丁质组合物是指该组合物包括95％几丁质和5％的蛋白质、脂质、矿物质及其组合。磷虾来源的几丁质组合物最终产品与其他海洋资源相比，使用磷虾壳生产最终产品具有优势，因为磷虾不含合成成分，诸如，例如抗生素。对于生物医学/制药应用，从几丁质中完全去除蛋白质非常重要，因为人类中有相当大的比例对贝类蛋白质过敏。与现有技术方法不同，本发明的脱蛋白方法基本上保留了磷虾几丁质的天然状态；因此，最终产品是可再现的和可预测的。例如，诸如分子量(链长)是乙酰化程度(da)的性质是可再现的。这种可再现的生产方法使得几丁质组合物最终产物能够用于通常需要标准化的制药/生物医学应用中。在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包括a)通过本发明的方法生产的磷虾来源的几丁质组合物和b)药物载体或赋形剂。如本领域技术人员所理解的，本发明的药物组合物本身可以配制成药物制剂，或与合适的药物载体(媒介物)或赋形剂一起配制。对于口服片剂，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉，并且通常加入润滑剂诸如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，有用的载体包括乳糖和玉米淀粉。载体和赋形剂的进一步实例包括乳、糖、某些类型的粘土、明胶、硬脂酸或其盐、硬脂酸钙、滑石、植物脂肪或油、树胶，和乙二醇。在一个实施方案中，本发明提供包括通过本发明的方法生产的磷虾来源的几丁质组合物的食品添加剂。在一个实施方案中，本发明提供包括通过本发明的方法生产的磷虾来源的几丁质组合物的生物医学器件(device)。此类器件的实例包括伤口敷料、生物膜、人工皮肤、包装，和疫苗佐剂。在一个实施方案中，本发明提供用于制备纳米晶体的几丁质。在一个实施方案中，本发明提供几丁质的脱色步骤。脱色可通过将几丁质在1％草酸中浸泡至少10分钟、至少20分钟，或至少30分钟而实现。在另一个实施方案中，浸泡最多进行45分钟、1小时、2小时、4小时，或24小时。脱色可在上述几丁质加工或分离的任何阶段进行。实施例实施例1将经冷冻的南极磷虾(euphausiasuperba)解冻并如wo2010/030193所述进行酶法水解。使用滗析器分离磷虾壳并分析内容物。结果在表1中示出。表1、磷虾壳的组分指标含量脂质16.2％蛋白质45.7％灰分21.4％几丁质13.7％水3.1％将壳干燥并用作几丁质提取加工的原材料。如下表2所示进行了四种不同的分离程序。表2、从磷虾壳中分离几丁质的过程样品id#第一次第二次11mnaoh,80℃,24h1mhcl,95℃,30min.22mnaoh,80℃,7天1mhcl,95℃,30min.34mnaoh,80℃,7天1mhcl,95℃,30min.41mhcl,95℃,30min.1mnaoh,80℃,24h结果样品id#％蛋白质％几丁质％脂质结晶指数产率1084.615.48221.52082.417.68213.03082.517.58418.9497.12.98515.6市售几丁质的结晶指数为约75％。最终的几丁质产品不含痕量矿物质，即矿物质含量少于1ppm。实施例2实施例2a-磷虾的水解根据ep2334199b1制备磷虾壳。获得40％的干物质并干燥壳。表3、经干燥壳的干物质组分脂质5.2％蛋白质21％几丁质18.3％灰分40.2％实施例2b-使用多种酶的磷虾的水解经冷冻的磷虾冷干，并分离壳。获得40％的干物质并干燥壳。酶法水解是使用食品级酶endocut和exocut(从tailorzymes获得)分别以约为0.4％和0.04％的水平联合进行的。温度55℃，并且反应时间约2小时。表4脂质23％蛋白质10.8％几丁质37.6％灰分19.2％实施例2c-双水解/再水解将来自实施例2b的材料加入水(1:1.5)和0.l％endocut，将混合物在55℃孵育1小时。表5、基于干物质脂质13.9％蛋白质22.1％几丁质44.8％灰分19.2％实施例2d-从来自实施例2a和2b的材料中提取几丁质。如上所述，使用化学脱矿物质和化学脱蛋白，从实施例2a和实施例2b中获得的磷虾壳中提取几丁质。表6、经提取几丁质的特性总结当前第1页1 2 3 

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