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您当前的位置： 一种制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法
2021-02-02 13:02:35|
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起点商标网 专利名称：一种制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法
技术领域：
本发明涉及用于α-L-岩藻糖苷水解酶底物的制备方法。
α-L-岩藻糖苷水解酶(α-L-fucohydrolase，AFU；EC 3.2.1.51)，是一种存在于生物体内的酸性水解酶。近年来的医学研究表明，血清α-L-岩藻糖苷酶在诊断肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)方面有重要价值。目前，用于α-L-岩藻糖苷水解酶测定的方法主要有(1)4-甲基伞形酮-α-L-岩藻糖苷(4Mu-α-L-Fuc)为底物的荧光法。(2)对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(PNP-α-L-Fuc)为底物的比色法。(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)为底物的荧光法。方法一检测灵敏度高，适用于微量生物样品(如活检组织、分离细胞、脊液和泪液等)以及极低AFU活性的样品的分。但此法需要凝胶过滤除去干扰物质及使用荧光分光光度计，使常规应用受到限制。后两者为临床上主要采用的方法，它系以岩藻糖苷为底物，在pH 5.0经AFU水解产生相应的酚(PNP或CNP)。此pH下在可见光区吸收并显色来判定α-L-岩藻糖苷水解酶的存在(PNP需经碱性缓冲液处理后显色)。
Koichi等于1992年(Jpn.Kokai Tokkyo koho Jp 06,179,690)首次公开了邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)的合成。我们发现其合成方法有许多弊端难重复、易制得β-构型、产品纯度不高。本发明报道了一种简便制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法(如图所示)。
下面结合实施例对本发明进行详细的说明。
旋光度在25℃用自动旋光仪测得。1HNMR用Bruker ARX-400在CDCl3中测。化学位移以Me4Si为内标，以ppm为单位表示。质谱用时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)测定。薄层色谱(TLC)由HF254硅胶板上用30％(v/v)的硫酸甲醇溶液活紫外检测器检测。柱色谱采用100-200目的硅胶，以乙酸乙酯-石油醚为淋洗液。
(1)乙基3，4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯-β-L-岩藻糖苷(2)的制备乙基1-巯-β-L-岩藻糖苷1(1.04克，5毫摩尔)溶在5毫升N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，在0℃下，依次加入咪唑(2.04克，30毫摩尔)和叔丁基二甲基氯硅烷(2.26克，15毫摩尔)。室温下搅拌30分钟后，加热至40℃，继续搅拌12小时。往反应体系中加50毫升水，用乙酸乙酯(3×50毫升)萃取；萃取液用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，用硅胶柱色谱纯化分离，淋洗液为25/1石油醚/乙酸乙酯，得到浆状物2(2.08克，78％)。旋光[α]D25+25(c2，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)0.09，0.14，0.17(4s，12H，(CH3)2Si)，0.92，0.94(2s，18H，(CH3)3CSi)，1.23(d，3H，J 6.4Hz，H-6)，1.28(t，3H，J 7.4Hz，CH3CH2S)，2.60-2.75(m，2H，CH3CH2S)，3.44(dd，1H，J 9.1，2.7Hz，H-3)，3.56(q，1H，J 6.4，13.1Hz，H-5)，3.64(t，1H，J 9.0Hz，H-2)，3.78(d，1H，J 2.7Hz，H-4)，4.22(d，1H，J 9.1Hz，H-1)。
(2)邻氯对硝基苯基3，4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-α-L-岩藻糖苷(3)的制备化合物2(2.0克，3.73毫摩尔)和邻氯对硝基苯酚(712毫克，4.1毫摩尔)混合，在油泵上减压抽干。在氮气氛围，-40℃下，此混合物溶于干燥的二氯甲烷(8毫升)，依次加入N-碘代琥珀酰亚胺(840毫克，3.73毫摩尔)，三甲基硅基三氟甲磺酸酯(13微升，0.075毫摩尔)。上述反应条件下，搅拌约20分钟，加入三乙胺中和反应至中性。减压蒸除溶剂，用硅胶柱色谱纯化分离，淋洗液为30/1石油醚/乙酸乙酯，得到浆状物3(1.57克，65％)。旋光[α]D25-131(c 0.5，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)0.02，0.11，0.12，0.17(4s，12H，(CH3)2Si)，0.85，0.96(2s，18H，(CH3)3CSi)，1.18(d，3H，J 6.5Hz，H-6)，3.92(br s，1H，H-4)，3.97(q，1H，J 6.5，13.1Hz，H-5)，4.11-4.13(m，2H，H-2，H-3)，5.52(d，1H，J 2.6Hz，H-1)，7.30(d，1H，J 9.2Hz，Ph)，8.13(dd，1H，J 9.2，2.7Hz，Ph)，8.30(d，1H，J 2.7Hz，Ph).
(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(4)的制备化合物3(1.0克，1.54毫摩尔)溶于2毫升吡啶和15毫升乙腈，在0℃下，加入15毫升氟化氢/吡啶混合溶液(70％，质量比)，搅拌1小时。然后，室温搅拌约20小时，反应完全。减压蒸除溶剂，用硅胶柱色谱纯化分离，淋洗液为纯乙酸乙酯，得到浆状物4(334毫克，67.8％)。旋光[α]D25-153(c1，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)1.31(d，3H，J 6.6Hz，H-6)，3.94(br s，1H，H-4)，4.01-4.10(m，3H，H-2，H-3，H-5)，5.71(d，1H，J 3.1Hz，H-1)，7.40(d，1H，J 9.2Hz，Ph)，8.18(dd，1H，J 9.2，2.7Hz，Ph)，8.32(d，1H，J 2.7Hz，Ph)；时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)计算值319.51[M]；测量值342.63[M+Na]。
权利要求
1.以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体，以三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)和N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)为催化剂，在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基α-L-岩藻糖苷的方法。特别是岩藻糖硫代苷为乙基3，4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯基-β-L-岩藻糖苷。
2.权力要求1中的催化剂也可为单质碘。
3.权力要求1中的溶剂也可为乙腈、硝基甲烷等。
4.权力要求1中的反应温度为-40℃-10℃。
全文摘要
本发明公开了以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体，以三甲基硅基三氟甲磺酸酯和N－碘代琥珀酰亚胺为催化剂、或以单质碘为催化剂，在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基－α－L－岩藻糖苷的方法。
文档编号C07H15/203GK1521177SQ0310255
公开日2004年8月18日 申请日期2003年2月11日 优先权日2003年2月11日
发明者杜宇国, 顾国锋 申请人:中国科学院生态环境研究中心
技术领域：
本发明涉及用于α-L-岩藻糖苷水解酶底物的制备方法。
α-L-岩藻糖苷水解酶(α-L-fucohydrolase，AFU；EC 3.2.1.51)，是一种存在于生物体内的酸性水解酶。近年来的医学研究表明，血清α-L-岩藻糖苷酶在诊断肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)方面有重要价值。目前，用于α-L-岩藻糖苷水解酶测定的方法主要有(1)4-甲基伞形酮-α-L-岩藻糖苷(4Mu-α-L-Fuc)为底物的荧光法。(2)对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(PNP-α-L-Fuc)为底物的比色法。(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)为底物的荧光法。方法一检测灵敏度高，适用于微量生物样品(如活检组织、分离细胞、脊液和泪液等)以及极低AFU活性的样品的分。但此法需要凝胶过滤除去干扰物质及使用荧光分光光度计，使常规应用受到限制。后两者为临床上主要采用的方法，它系以岩藻糖苷为底物，在pH 5.0经AFU水解产生相应的酚(PNP或CNP)。此pH下在可见光区吸收并显色来判定α-L-岩藻糖苷水解酶的存在(PNP需经碱性缓冲液处理后显色)。
Koichi等于1992年(Jpn.Kokai Tokkyo koho Jp 06,179,690)首次公开了邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)的合成。我们发现其合成方法有许多弊端难重复、易制得β-构型、产品纯度不高。本发明报道了一种简便制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法(如图所示)。
下面结合实施例对本发明进行详细的说明。
旋光度在25℃用自动旋光仪测得。1HNMR用Bruker ARX-400在CDCl3中测。化学位移以Me4Si为内标，以ppm为单位表示。质谱用时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)测定。薄层色谱(TLC)由HF254硅胶板上用30％(v/v)的硫酸甲醇溶液活紫外检测器检测。柱色谱采用100-200目的硅胶，以乙酸乙酯-石油醚为淋洗液。
(1)乙基3，4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯-β-L-岩藻糖苷(2)的制备乙基1-巯-β-L-岩藻糖苷1(1.04克，5毫摩尔)溶在5毫升N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，在0℃下，依次加入咪唑(2.04克，30毫摩尔)和叔丁基二甲基氯硅烷(2.26克，15毫摩尔)。室温下搅拌30分钟后，加热至40℃，继续搅拌12小时。往反应体系中加50毫升水，用乙酸乙酯(3×50毫升)萃取；萃取液用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，用硅胶柱色谱纯化分离，淋洗液为25/1石油醚/乙酸乙酯，得到浆状物2(2.08克，78％)。旋光[α]D25+25(c2，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)0.09，0.14，0.17(4s，12H，(CH3)2Si)，0.92，0.94(2s，18H，(CH3)3CSi)，1.23(d，3H，J 6.4Hz，H-6)，1.28(t，3H，J 7.4Hz，CH3CH2S)，2.60-2.75(m，2H，CH3CH2S)，3.44(dd，1H，J 9.1，2.7Hz，H-3)，3.56(q，1H，J 6.4，13.1Hz，H-5)，3.64(t，1H，J 9.0Hz，H-2)，3.78(d，1H，J 2.7Hz，H-4)，4.22(d，1H，J 9.1Hz，H-1)。
(2)邻氯对硝基苯基3，4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-α-L-岩藻糖苷(3)的制备化合物2(2.0克，3.73毫摩尔)和邻氯对硝基苯酚(712毫克，4.1毫摩尔)混合，在油泵上减压抽干。在氮气氛围，-40℃下，此混合物溶于干燥的二氯甲烷(8毫升)，依次加入N-碘代琥珀酰亚胺(840毫克，3.73毫摩尔)，三甲基硅基三氟甲磺酸酯(13微升，0.075毫摩尔)。上述反应条件下，搅拌约20分钟，加入三乙胺中和反应至中性。减压蒸除溶剂，用硅胶柱色谱纯化分离，淋洗液为30/1石油醚/乙酸乙酯，得到浆状物3(1.57克，65％)。旋光[α]D25-131(c 0.5，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)0.02，0.11，0.12，0.17(4s，12H，(CH3)2Si)，0.85，0.96(2s，18H，(CH3)3CSi)，1.18(d，3H，J 6.5Hz，H-6)，3.92(br s，1H，H-4)，3.97(q，1H，J 6.5，13.1Hz，H-5)，4.11-4.13(m，2H，H-2，H-3)，5.52(d，1H，J 2.6Hz，H-1)，7.30(d，1H，J 9.2Hz，Ph)，8.13(dd，1H，J 9.2，2.7Hz，Ph)，8.30(d，1H，J 2.7Hz，Ph).
(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(4)的制备化合物3(1.0克，1.54毫摩尔)溶于2毫升吡啶和15毫升乙腈，在0℃下，加入15毫升氟化氢/吡啶混合溶液(70％，质量比)，搅拌1小时。然后，室温搅拌约20小时，反应完全。减压蒸除溶剂，用硅胶柱色谱纯化分离，淋洗液为纯乙酸乙酯，得到浆状物4(334毫克，67.8％)。旋光[α]D25-153(c1，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)1.31(d，3H，J 6.6Hz，H-6)，3.94(br s，1H，H-4)，4.01-4.10(m，3H，H-2，H-3，H-5)，5.71(d，1H，J 3.1Hz，H-1)，7.40(d，1H，J 9.2Hz，Ph)，8.18(dd，1H，J 9.2，2.7Hz，Ph)，8.32(d，1H，J 2.7Hz，Ph)；时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)计算值319.51[M]；测量值342.63[M+Na]。
权利要求
1.以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体，以三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)和N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)为催化剂，在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基α-L-岩藻糖苷的方法。特别是岩藻糖硫代苷为乙基3，4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯基-β-L-岩藻糖苷。
2.权力要求1中的催化剂也可为单质碘。
3.权力要求1中的溶剂也可为乙腈、硝基甲烷等。
4.权力要求1中的反应温度为-40℃-10℃。
全文摘要
本发明公开了以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体，以三甲基硅基三氟甲磺酸酯和N－碘代琥珀酰亚胺为催化剂、或以单质碘为催化剂，在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基－α－L－岩藻糖苷的方法。
文档编号C07H15/203GK1521177SQ0310255
公开日2004年8月18日 申请日期2003年2月11日 优先权日2003年2月11日
发明者杜宇国, 顾国锋 申请人:中国科学院生态环境研究中心
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