一种制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法
2021-02-02 13:02:35|268|起点商标网
专利名称:一种制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法
技术领域:
本发明涉及用于α-L-岩藻糖苷水解酶底物的制备方法。
α-L-岩藻糖苷水解酶(α-L-fucohydrolase,AFU;EC 3.2.1.51),是一种存在于生物体内的酸性水解酶。近年来的医学研究表明,血清α-L-岩藻糖苷酶在诊断肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)方面有重要价值。目前,用于α-L-岩藻糖苷水解酶测定的方法主要有(1)4-甲基伞形酮-α-L-岩藻糖苷(4Mu-α-L-Fuc)为底物的荧光法。(2)对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(PNP-α-L-Fuc)为底物的比色法。(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)为底物的荧光法。方法一检测灵敏度高,适用于微量生物样品(如活检组织、分离细胞、脊液和泪液等)以及极低AFU活性的样品的分。但此法需要凝胶过滤除去干扰物质及使用荧光分光光度计,使常规应用受到限制。后两者为临床上主要采用的方法,它系以岩藻糖苷为底物,在pH 5.0经AFU水解产生相应的酚(PNP或CNP)。此pH下在可见光区吸收并显色来判定α-L-岩藻糖苷水解酶的存在(PNP需经碱性缓冲液处理后显色)。
Koichi等于1992年(Jpn.Kokai Tokkyo koho Jp 06,179,690)首次公开了邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)的合成。我们发现其合成方法有许多弊端难重复、易制得β-构型、产品纯度不高。本发明报道了一种简便制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法(如图所示)。
下面结合实施例对本发明进行详细的说明。
旋光度在25℃用自动旋光仪测得。1HNMR用Bruker ARX-400在CDCl3中测。化学位移以Me4Si为内标,以ppm为单位表示。质谱用时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)测定。薄层色谱(TLC)由HF254硅胶板上用30%(v/v)的硫酸甲醇溶液活紫外检测器检测。柱色谱采用100-200目的硅胶,以乙酸乙酯-石油醚为淋洗液。
(1)乙基3,4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯-β-L-岩藻糖苷(2)的制备乙基1-巯-β-L-岩藻糖苷1(1.04克,5毫摩尔)溶在5毫升N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,在0℃下,依次加入咪唑(2.04克,30毫摩尔)和叔丁基二甲基氯硅烷(2.26克,15毫摩尔)。室温下搅拌30分钟后,加热至40℃,继续搅拌12小时。往反应体系中加50毫升水,用乙酸乙酯(3×50毫升)萃取;萃取液用无水硫酸钠干燥,减压蒸除溶剂,用硅胶柱色谱纯化分离,淋洗液为25/1石油醚/乙酸乙酯,得到浆状物2(2.08克,78%)。旋光[α]D25+25(c2,CHCl3);核磁δH(CDCl3)0.09,0.14,0.17(4s,12H,(CH3)2Si),0.92,0.94(2s,18H,(CH3)3CSi),1.23(d,3H,J 6.4Hz,H-6),1.28(t,3H,J 7.4Hz,CH3CH2S),2.60-2.75(m,2H,CH3CH2S),3.44(dd,1H,J 9.1,2.7Hz,H-3),3.56(q,1H,J 6.4,13.1Hz,H-5),3.64(t,1H,J 9.0Hz,H-2),3.78(d,1H,J 2.7Hz,H-4),4.22(d,1H,J 9.1Hz,H-1)。
(2)邻氯对硝基苯基3,4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-α-L-岩藻糖苷(3)的制备化合物2(2.0克,3.73毫摩尔)和邻氯对硝基苯酚(712毫克,4.1毫摩尔)混合,在油泵上减压抽干。在氮气氛围,-40℃下,此混合物溶于干燥的二氯甲烷(8毫升),依次加入N-碘代琥珀酰亚胺(840毫克,3.73毫摩尔),三甲基硅基三氟甲磺酸酯(13微升,0.075毫摩尔)。上述反应条件下,搅拌约20分钟,加入三乙胺中和反应至中性。减压蒸除溶剂,用硅胶柱色谱纯化分离,淋洗液为30/1石油醚/乙酸乙酯,得到浆状物3(1.57克,65%)。旋光[α]D25-131(c 0.5,CHCl3);核磁δH(CDCl3)0.02,0.11,0.12,0.17(4s,12H,(CH3)2Si),0.85,0.96(2s,18H,(CH3)3CSi),1.18(d,3H,J 6.5Hz,H-6),3.92(br s,1H,H-4),3.97(q,1H,J 6.5,13.1Hz,H-5),4.11-4.13(m,2H,H-2,H-3),5.52(d,1H,J 2.6Hz,H-1),7.30(d,1H,J 9.2Hz,Ph),8.13(dd,1H,J 9.2,2.7Hz,Ph),8.30(d,1H,J 2.7Hz,Ph).
(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(4)的制备化合物3(1.0克,1.54毫摩尔)溶于2毫升吡啶和15毫升乙腈,在0℃下,加入15毫升氟化氢/吡啶混合溶液(70%,质量比),搅拌1小时。然后,室温搅拌约20小时,反应完全。减压蒸除溶剂,用硅胶柱色谱纯化分离,淋洗液为纯乙酸乙酯,得到浆状物4(334毫克,67.8%)。旋光[α]D25-153(c1,CHCl3);核磁δH(CDCl3)1.31(d,3H,J 6.6Hz,H-6),3.94(br s,1H,H-4),4.01-4.10(m,3H,H-2,H-3,H-5),5.71(d,1H,J 3.1Hz,H-1),7.40(d,1H,J 9.2Hz,Ph),8.18(dd,1H,J 9.2,2.7Hz,Ph),8.32(d,1H,J 2.7Hz,Ph);时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)计算值319.51[M];测量值342.63[M+Na]。
权利要求
1.以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体,以三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)和N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)为催化剂,在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基α-L-岩藻糖苷的方法。特别是岩藻糖硫代苷为乙基3,4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯基-β-L-岩藻糖苷。
2.权力要求1中的催化剂也可为单质碘。
3.权力要求1中的溶剂也可为乙腈、硝基甲烷等。
4.权力要求1中的反应温度为-40℃-10℃。
全文摘要
本发明公开了以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体,以三甲基硅基三氟甲磺酸酯和N-碘代琥珀酰亚胺为催化剂、或以单质碘为催化剂,在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法。
文档编号C07H15/203GK1521177SQ0310255
公开日2004年8月18日 申请日期2003年2月11日 优先权日2003年2月11日
发明者杜宇国, 顾国锋 申请人:中国科学院生态环境研究中心
技术领域:
本发明涉及用于α-L-岩藻糖苷水解酶底物的制备方法。
α-L-岩藻糖苷水解酶(α-L-fucohydrolase,AFU;EC 3.2.1.51),是一种存在于生物体内的酸性水解酶。近年来的医学研究表明,血清α-L-岩藻糖苷酶在诊断肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)方面有重要价值。目前,用于α-L-岩藻糖苷水解酶测定的方法主要有(1)4-甲基伞形酮-α-L-岩藻糖苷(4Mu-α-L-Fuc)为底物的荧光法。(2)对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(PNP-α-L-Fuc)为底物的比色法。(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)为底物的荧光法。方法一检测灵敏度高,适用于微量生物样品(如活检组织、分离细胞、脊液和泪液等)以及极低AFU活性的样品的分。但此法需要凝胶过滤除去干扰物质及使用荧光分光光度计,使常规应用受到限制。后两者为临床上主要采用的方法,它系以岩藻糖苷为底物,在pH 5.0经AFU水解产生相应的酚(PNP或CNP)。此pH下在可见光区吸收并显色来判定α-L-岩藻糖苷水解酶的存在(PNP需经碱性缓冲液处理后显色)。
Koichi等于1992年(Jpn.Kokai Tokkyo koho Jp 06,179,690)首次公开了邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)的合成。我们发现其合成方法有许多弊端难重复、易制得β-构型、产品纯度不高。本发明报道了一种简便制备高纯度邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法(如图所示)。
下面结合实施例对本发明进行详细的说明。
旋光度在25℃用自动旋光仪测得。1HNMR用Bruker ARX-400在CDCl3中测。化学位移以Me4Si为内标,以ppm为单位表示。质谱用时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)测定。薄层色谱(TLC)由HF254硅胶板上用30%(v/v)的硫酸甲醇溶液活紫外检测器检测。柱色谱采用100-200目的硅胶,以乙酸乙酯-石油醚为淋洗液。
(1)乙基3,4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯-β-L-岩藻糖苷(2)的制备乙基1-巯-β-L-岩藻糖苷1(1.04克,5毫摩尔)溶在5毫升N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,在0℃下,依次加入咪唑(2.04克,30毫摩尔)和叔丁基二甲基氯硅烷(2.26克,15毫摩尔)。室温下搅拌30分钟后,加热至40℃,继续搅拌12小时。往反应体系中加50毫升水,用乙酸乙酯(3×50毫升)萃取;萃取液用无水硫酸钠干燥,减压蒸除溶剂,用硅胶柱色谱纯化分离,淋洗液为25/1石油醚/乙酸乙酯,得到浆状物2(2.08克,78%)。旋光[α]D25+25(c2,CHCl3);核磁δH(CDCl3)0.09,0.14,0.17(4s,12H,(CH3)2Si),0.92,0.94(2s,18H,(CH3)3CSi),1.23(d,3H,J 6.4Hz,H-6),1.28(t,3H,J 7.4Hz,CH3CH2S),2.60-2.75(m,2H,CH3CH2S),3.44(dd,1H,J 9.1,2.7Hz,H-3),3.56(q,1H,J 6.4,13.1Hz,H-5),3.64(t,1H,J 9.0Hz,H-2),3.78(d,1H,J 2.7Hz,H-4),4.22(d,1H,J 9.1Hz,H-1)。
(2)邻氯对硝基苯基3,4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-α-L-岩藻糖苷(3)的制备化合物2(2.0克,3.73毫摩尔)和邻氯对硝基苯酚(712毫克,4.1毫摩尔)混合,在油泵上减压抽干。在氮气氛围,-40℃下,此混合物溶于干燥的二氯甲烷(8毫升),依次加入N-碘代琥珀酰亚胺(840毫克,3.73毫摩尔),三甲基硅基三氟甲磺酸酯(13微升,0.075毫摩尔)。上述反应条件下,搅拌约20分钟,加入三乙胺中和反应至中性。减压蒸除溶剂,用硅胶柱色谱纯化分离,淋洗液为30/1石油醚/乙酸乙酯,得到浆状物3(1.57克,65%)。旋光[α]D25-131(c 0.5,CHCl3);核磁δH(CDCl3)0.02,0.11,0.12,0.17(4s,12H,(CH3)2Si),0.85,0.96(2s,18H,(CH3)3CSi),1.18(d,3H,J 6.5Hz,H-6),3.92(br s,1H,H-4),3.97(q,1H,J 6.5,13.1Hz,H-5),4.11-4.13(m,2H,H-2,H-3),5.52(d,1H,J 2.6Hz,H-1),7.30(d,1H,J 9.2Hz,Ph),8.13(dd,1H,J 9.2,2.7Hz,Ph),8.30(d,1H,J 2.7Hz,Ph).
(3)邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(4)的制备化合物3(1.0克,1.54毫摩尔)溶于2毫升吡啶和15毫升乙腈,在0℃下,加入15毫升氟化氢/吡啶混合溶液(70%,质量比),搅拌1小时。然后,室温搅拌约20小时,反应完全。减压蒸除溶剂,用硅胶柱色谱纯化分离,淋洗液为纯乙酸乙酯,得到浆状物4(334毫克,67.8%)。旋光[α]D25-153(c1,CHCl3);核磁δH(CDCl3)1.31(d,3H,J 6.6Hz,H-6),3.94(br s,1H,H-4),4.01-4.10(m,3H,H-2,H-3,H-5),5.71(d,1H,J 3.1Hz,H-1),7.40(d,1H,J 9.2Hz,Ph),8.18(dd,1H,J 9.2,2.7Hz,Ph),8.32(d,1H,J 2.7Hz,Ph);时间飞行质谱(MALTI-TOF-MS)计算值319.51[M];测量值342.63[M+Na]。
权利要求
1.以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体,以三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)和N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)为催化剂,在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基α-L-岩藻糖苷的方法。特别是岩藻糖硫代苷为乙基3,4-二-氧-叔丁基二甲基硅烷基-1-巯基-β-L-岩藻糖苷。
2.权力要求1中的催化剂也可为单质碘。
3.权力要求1中的溶剂也可为乙腈、硝基甲烷等。
4.权力要求1中的反应温度为-40℃-10℃。
全文摘要
本发明公开了以硅烷基保护的岩藻糖硫代苷为供体,以三甲基硅基三氟甲磺酸酯和N-碘代琥珀酰亚胺为催化剂、或以单质碘为催化剂,在二氯甲烷中制备高纯度的邻氯对硝基苯基-α-L-岩藻糖苷的方法。
文档编号C07H15/203GK1521177SQ0310255
公开日2004年8月18日 申请日期2003年2月11日 优先权日2003年2月11日
发明者杜宇国, 顾国锋 申请人:中国科学院生态环境研究中心
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