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2021-02-02 13:02:29|
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起点商标网 专利名称：新的可用作免疫抑制剂的碳环腺苷类似物的制作方法
这是1990年9月14日提交的申请(编号07/582，280)的部分继续申请。
本发明涉及某些可作为免疫抑制剂应用的碳环腺苷类似物。
免疫涉及到对体内存在的外源性抗原物质的识别和处理。通常抗原是以颗粒物质(如细胞，细菌等等)或大分子蛋白质或多糖分子的形式存在。抗原被免疫系统识别为“非己”物质，即与动物自身成份相比是不同的或外来的。潜在的抗原可能是多种物质，常为蛋白质，这些物质最常位于细胞的外表面。例如，潜在的抗原可在以下物质表面被发现，这些物质有花粉微粒，组织移植物，动物寄生虫，病毒和细菌。一旦抗原物质被免疫系统识别为“非己”，天然的(非特异性的)和/或获得性免疫反应可以被起动并被特异性免疫细胞，抗体和补体系统的作用所保持。在某些条件下，包括某些疾病状态，动物的免疫系统将自身成份识别为“非己”物质并起动对“自身”物质的免疫反应。
一种免疫反应可通过天然的或获得性的机制由免疫系统来实现，两种机制均有细胞介导和体液因素参与。免疫反应的天然机制涉及参与非特异免疫反应的那些机制，包括补体系统和类髓细胞本身，如巨噬细胞，肥大细胞和多形核白细胞(PMN)，参与对某些细菌，病毒，损伤组织和其它抗原的反应。这些天然机制提供了所谓天然免疫。免疫反应的获得性机制涉及淋巴细胞(T和B细胞)和抗体介导的那些机制，这种反应可选择性地针对数以千计的不同的“非己”物质而进行。这种获得性机制提供了所谓的获得性免疫，并导致特异性记忆和适应于动物自身环境的不断变化的反应类型。获得性免疫可以仅由淋巴细胞和抗体本身完成，或更常见由淋巴细胞和抗体与天然免疫机制的补体系统和类髓细胞的相互作用来完成，抗体提供了获得性免疫反应的体液因素，而T细胞提供了获得性免疫反应的细胞介导因素。
免疫反应的天然机制涉及巨噬细胞和多形核白细胞的吞噬作用，通过这一作用，外源性物质或抗原被上述细胞吞食并处理。此外，巨噬细胞可通过其细胞毒性作用杀伤某些外源细胞。补体系统由各种肽和酶组成，也参与天然免疫。它们能吸附于外源物质或抗原上，这样可以促进巨噬细胞和多形核白细胞的吞噬作用或促进细胞溶解或产生炎症反应。
免疫反应的获得性机制涉及由B淋巴细胞(或B细胞)分泌的抗体对特异性抗原的作用以及各种T淋巴细胞(或T细胞)对特异性抗原，对B细胞，对其它T细胞和对巨噬细胞的作用。
负责获得性免疫体液方面的抗体是血清球蛋白，它由B细胞分泌，对不同抗原具有广泛的特异性。抗体的分泌是对特异性抗原识别的反应。抗体可以结合并中和细菌毒素，能结合于病毒，细菌或其它“非己”细胞的表面，并因此促进多形核白细胞和巨噬细胞的吞噬作用。此外，抗体能活化补体系统，后者可进一步加强针对特异性抗原的免疫反应。
淋巴细胞是血液中的小细胞，它们通过血循环进入组织，再通过淋巴系统回到血中。有两种主要的淋巴细胞亚群叫做B细胞和T细胞。B细胞和T细胞均起源于相同的类淋巴干细胞，B细胞在骨髓分化，T细胞在胸腺分化。淋巴细胞拥有某些限制性受体，后者允许每个细胞针对特异性抗原反应，这为获得性免疫反应的特异性奠定了基础。此外，淋巴细胞寿命相对较长，在接受适当的信号后，具有克隆增殖的能力，这一特点为获得性免疫的记忆方面提供了基础。
B细胞是负责获得性免疫体液方面的淋巴细胞，作为对特异外源性抗原的识别反应，B细胞将分泌特异性抗体，后者可与特异性抗原结合。对于毒素，抗体可中和抗原，或对于其它抗原，抗体可以促进吞噬。抗体也参与激活补体系统，后者可以使针对入侵抗原的免疫反应进一步加强。
T细胞是负责获得性免疫细胞介导方面的淋巴细胞。有三种主要的T细胞类型，即细胞毒性T细胞，辅助性T细胞和抑制性T细胞。细胞毒性T细胞可探测和破坏感染了特异性病毒抗原的细胞。辅助性T细胞具有多种调节功能。当一种特异性病毒抗原被识别时，辅助性T细胞能促进或增强通过合适B细胞针对抗原的抗体反应，也能促进或增强通过巨噬细胞抗原的吞噬作用。抑制性T细胞具有抑制针对特殊抗原的免疫反应的作用。
细胞介导的免疫反应被T细胞通过各种调节信使化合物抑制和监视，这些化合物由类髓细胞和淋巴细胞分泌。通过分泌这些调节信使化合物，T细胞能调节其它免疫细胞，如B细胞，巨噬细胞，多形核白细胞和其它T细胞的增殖和活化。例如，当结合了外源性抗原后，巨噬细胞或其它抗原提呈细胞能分泌白细胞介素-1(IL-1)，后者可活化辅助性T细胞。T细胞又转过来分泌某些淋巴因子，包括白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素。这些细胞因子在细胞介导免疫反应中具有多种调节作用。淋巴因子是一个由T细胞(有时由B细胞)所产生之分子的大家族。它们包括IL-2，可促进T细胞克隆增殖;MAF或巨噬细胞活化因子，可增强许多巨噬功能，包括吞噬作用，细胞内的杀伤和分泌各种细胞毒性因子;NAF或中性粒细胞活化因子，可增强多形核白细胞的许多功能，包括吞噬，氧基团的产生，杀菌，增强趋化性和增加细胞因子的产生;MIF或巨噬细胞移动抑制因子，限制巨噬细胞的运动，使之集中在T细胞附近;γ-干扰素，由活化的T细胞产生，能对许多细胞产生广泛的作用，包括抑制病毒复制，诱导Ⅱ类组织相容性分子的表达，使细胞活化，以利于结合和呈递抗原，巨噬细胞的活化，细胞生长抑制，诱导许多类髓细胞系分化。
活化的巨噬细胞和多形核白细胞在细胞介导的获得性免疫过程中，能使免疫反应增强，其特征在于使反应性氧中间体的生成增加。这种使反应性氧中间体生成增加或呼吸作用突然增加被称为“待发”。某些淋巴因子如γ干扰素，能在巨噬细胞和多形核白细胞中，引起这种反应性氧中间体呼吸作用突然增加。因此，淋巴因子，如γ-干扰素，是由T细胞分泌，行使活化巨噬细胞和多形核白细胞的功能，结果使细胞介导的免疫反应增强。
免疫反应可以是速发的或迟发的反应类型。迟发型超敏反应是在抗原激发后24-48小时内在免疫反应患者体内出现的炎症反应。它主要是细胞介导的免疫反应的结果。而速发型超敏反应，如过敏性休克或局部过敏坏死反应(阿图斯反应)，是抗原激发后几分钟至几小时内在免疫反应患者体内出现的炎症反应，它主要是抗体介导的免疫反应的结果。
免疫系统特别是细胞介导的免疫，识别“自己”和“非己”抗原的能力，对于免疫系统特异性防御入侵微生物的功能是至关重要的。“非己”抗原是那些在体内经检测可与动物自身成份区别或为外源性的物质上的抗原;而“自己”抗原是那些在体内经检测不能与动物自身成份区别的抗原。尽管免疫反应主要是防御致病的外源性物质的，但它不能区分外源性物质是有利的还是有害的，对这两者它都进行破坏。
在某些情况下，如对于同种异体移植或在“移植物抗宿主”病中，抑制免疫反应将大大有助于防止对有利的外源组织和器官的排斥。同种异体组织和器官是来自相同物种但遗传学上不同成员的组织和器官。“移植物抗宿主”病发生在被移植的组织部位，例如移植的骨髓含有供体同种异体T细胞，其可引起对受体自身组织的免疫反应。虽然体液和细胞介导免疫反应在同种异体组织和器官的排斥反应中均起作用，但主要的影响机制是细胞介导的免疫反应。因此，免疫反应的抑制，特别是细胞介导免疫反应的抑制对于防止这种同种移植的组织和器官的排斥反应是有益的。例如，环孢霉素A是目前使用的治疗接受同种异体移植物患者和移植物抗宿主病的免疫抑制剂。
有时个体的免疫反应比入侵微生物或外源性物质对自身造成更严重的损伤和不适，如变态反应时，此时需要抑制免疫反应。
有时免疫机制对一个人自身的某些部分变为敏感，引起对这些部分的干扰甚至破坏。区别“自己”和“非己”的能力被损害，机体开始破坏自身，这样能导致自身免疫病，如类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病(此病为胰岛β细胞的自身免疫性破坏，胰岛负责分泌胰岛素)，某些溶血性贫血，风湿热，甲状腺炎，溃疡性结肠炎，重症肌无力，肾小球肾炎，变态反应性脑脊髓炎，病毒性肝炎后的持续性神经和肝脏破坏，多发性硬化和系统性红斑狼疮。某些类型的自身免疫系由于通常不暴露于淋巴细胞的部位的创伤所引起，如神经组织或眼的晶体。当这些部位的组织暴露于淋巴细胞时，它们的表面蛋白能做为抗原，激发抗体产生和细胞免疫反应，继之造成这些组织的破坏。其它的自身免疫病发生于机体暴露于与自身组织抗原性相似，即交叉反应的抗原之后。风湿热是这类病中的一个例子，引起该病的链球菌抗原与人心脏组织有交叉反应，抗体不能区分细菌抗原和心肌抗原，带有这些抗原的细胞均可以被破坏。在这些自身免疫病中，免疫系统的抑制将有益于减少或消除疾病的作用。某些这种自身免疫病，如胰岛素依赖性糖尿病，多发性硬化和类风湿关节炎的特征在于它们是细胞介导自身免疫反应的结果，而且可能系由于T细胞的作用[参看Sinha，et al.Science 248，1380(1990)]。其它的如重症肌无力和系统性红斑狼疮的特征在于它们是体液自身免疫反应的结果[Ⅰd]。
因此，免疫反应的抑制对治疗自身免疫病是有益的。更重要的是对于细胞介导免疫反应的抑制将有助于治疗因T细胞活化而导致的自身免疫病，这类病包括胰岛素依赖性糖尿病，多发性硬化和类风湿关节炎。对体液免疫反应的抑制将有益于治疗T细胞非依赖性自身免疫病，如重症肌无力和系统性红斑狼疮。
本发明提供了新的式(1)化合物、或其药物学上可接受的盐
式中，在环戊烷环上的羟基取代基是与双环取代基相关的顺式构型;Y3，Y7，Y8和Y9各自独立地为氮或CH基团;Q是氨基，卤素或氢，Z是氢，卤素或氨基。
本发明还提供了一种实现免疫抑制的方法，更确切地说，一种抑制获得性免疫的方法。当患者需要时，可给予有效免疫抑制剂量的式(1)化合物。
此外，本发明提供了一种含有有效免疫抑制剂量的式(1)化合物的药物组合物。该组合物以混合物形式或以与一种或多种药物学上可接受的载体或赋形剂相结合的其它形式存在。
这里使用的术语“卤素”指单价的碘，溴，氯或氟基团。术语“氮”指三价的氮基团，术语“CH基团”指次甲基基团。
这里使用的术语“药物学上可接受的盐”指式(1)化合物的酸加成盐，与形成盐之前相比化合物的毒性并未增加。药物学上可接受的盐的代表性实例是通过用相应的酸处理式(1)化合物制得的盐。这些酸是氢溴酸，盐酸，硫酸，磷酸，硝酸，甲，乙，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，乳酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，抗坏血酸，α-氧代戊二酸，谷氨酸，天冬氨酸，顺式丁烯二酸，羟基顺式丁烯二酸，丙酮酸，苯乙酸，苯甲酸，对氨基苯甲酸，氨茴酸，对羟基苯甲酸，邻羟基苯甲酸，对氨基邻羟基苯甲酸，甲磺酸，乙磺酸，羟乙磺酸，亚乙基二磺酸，卤苯磺酸，甲苯磺酸，萘磺酸和磺胺酸。盐酸盐作为式(1)化合物的药物学上可接受的盐是优选的。
应明确的是式(1)化合物的环戊烷环上的羟基取代基具有与双环取代基相关的顺式构型。此外，应明确式(1)的这些化合物可能以各种立体异构体的构型形式存在。当然，式(1)化合物包含和包括各自的立体异构体及其外消旋混合物。
制备式(1)化合物的总的合成步骤见合成路线A。其中，Y9是氮。
合成路线A
B＝保护基团，L＝离去基团。
在步骤a中，(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(2)的4-羟基反应部位被一个羟基保护基团(B)所保护，形成对应的4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(3)。使用的特定羟基保护基团可以是许多常用羟基保护基团之一，这些基团是已知的并且有文献可查。特定保护基团的选择和使用是本领域的技术人员熟知的。一般来说，保护基团的选择应以其能在后面的合成步骤中充分地保护羟基，并易于在不引起所需产物降解的条件下除去为原则。
合适的羟基保护基团的代表性实例是四氢吡喃基，甲氧甲基，叔丁基二甲基甲硅烷基，甲氧乙氧基-甲基，乙酸基等等。首选的化合物(2)的4-羟基部分的保护基团为2-四氢吡喃基团。当需要用2-四氢吡喃基在化合物(2)的4-羟基处进行保护时，(2)可与3，4-二氢-2H-吡喃在三氟乙酸存在下反应，生成相应的(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯。
在步骤b中，4-羟基被保护的-(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(3)中的1-乙酸基被水解，用适当的离去基团(L)衍生所得的1-羟基形成相应的2-环戊烯衍生物(4)。(3)的1-乙酸基首先用碱水解，如可使用溶于甲醇或乙醇的氢氧化钾，氢氧化钠或氢氧化铵。然后，用离去基团(L)对水解后衍生物的1-羟基进行衍生。所用的特定离去基团可以是已知的并且有文献可查的许多常用的离去基团之一。特定离去基团的选择和使用是本领域的技术人员熟知的。一般来说，离去基团的选择应以其能充分促进自身被一合适的核苷碱衍生物取代而获得一个构型稳定的产物为原则。合适的离去基团的代表性实例是triflate，对溴苯磺酰基，甲苯磺酰基，甲磺酰基等等。对于步骤b来说，首先的离去基团是甲磺酰基。
例如，当需要将4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(3)转变为相应的4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-2-环戊烯-4-醇时，(3)可被溶于乙醇的氢氧化钾水解，然后形成的游离乙醇可被分离出来，(3)通过在三乙胺存在下用甲磺酰氯处理转变为相应的4-羟基被保护的(1R，4R)-顺式-1-甲磺酰氧基-2-环戊烯-4-醇。
在步骤c中，1位上带有离去基团和4位上带有被保护羟基的2-环戊烯衍生物(4)，通过所需核苷碱(其中Y9是氮)取代得到相应的具有稳定构型的3-羟基被保护的碳环核苷类似物(5)。例如，当需要将4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-2-环戊烯-4-醇转变为相应的3-羟基被保护的(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-4-环戊烯-3-醇时，甲磺酰氧基衍生物可在氢化钠存在下用腺嘌呤处理。
在步骤d中，3-羟基被保护的碳环核苷类似物(5)按已知的和有文献可查的标准方法和技术脱去保护基，产生相应的碳环核苷类似物(6)。例如，当3-羟基被2-四氢吡喃所保护时，3-羟基的保护基团可通过酸(如盐酸)处理而被除去。
在步骤e中，碳环核苷类似物(6)通过催化氢化，如可在氧化铂存在下用氢处理转变为相应的碳环腺苷类似物(1a)。
Y9是氮的式(1)化合物可选择下述合成路线A的缩短路线来制备。(1S，4R)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇的4-羟基反应部位可用合成路线A步骤b中叙述的合适的离去基团(L)衍生。在替代合成路线中，首选的离去基团是甲磺酰基团。这样形成了1位上带有乙酸基，4位上带有离去基团(如甲磺酰基)的2-环戊烯衍生物。然后，用需要的核苷碱(其中Y9是氮)，按合成路线A步骤C描述的方法来取代，形成相应的3-羟基被保护的碳环核苷类似物(5)。以后，根据合成路线A步骤d和e制备式(1)化合物，其中Y9是氮。
下面的实例描述了如合成路线A所述的典型合成方法。这里的实例只是为了便于理解而做的说明，并未打算在任何方面限制本发明的范围。下面实例中用的术语具有所示意义“g”指克，“mmol”为毫摩尔，“ml”为毫升，“DMF”指二甲基甲酰胺，“℃”为摄氏温度，“mg”为毫克，“N”代表溶液的当量浓度，“psi”代表磅/每平方英寸，“THF”指四氢呋喃。
实例1(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐步骤a(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯搅拌下述溶液，在20ml二氯甲烷中，溶解(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(1克，7.0毫摩尔)，加3，4-二氢-2H-吡喃(0.6克，7.1毫摩尔)和5滴三氟乙酸。搅拌此混合液24小时。用50毫升二氯甲烷稀释混合液后，用饱和碳酸氢钠提取，然后用盐水提取。用硫酸钠干燥有机层，真空除去溶剂，生成标题化合物(1.58克)。
步骤b(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯将(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯(3.0克，13毫摩尔)溶于50毫升无水乙醇。向该溶液中加入氢氧化钾(0.8克，14毫摩尔)并搅拌混合液3小时。浓缩混合液后，过硅胶柱(10克)，用乙酸乙酯/己烷(1∶1)液洗脱。除去溶剂，生成(1R，4S)-顺式-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯-1-醇，为无色油状物(2.38克)。
将(1R，4S)-顺式-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯-1-醇(1.2克，6.6毫摩尔)溶于25毫升二氯甲烷，向此溶液中加甲磺酰氯(1.13克，9.9毫摩尔)和三乙胺(0.93克，9.2毫摩尔)。搅拌反应液45分钟，然后用水、盐水提取反应混合液，用硫酸钠干燥有机层。浓缩此溶液，生成标题化合物(1.62克，产率94%)，为黄色油状物。
步骤c(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-(2-四氢吡喃氧基)-4-环戊烯将氢化钠(80%，0.57克，19.8毫摩尔)在60℃时加入搅拌的溶于100毫升二甲基甲酰胺的腺嘌呤(2.67克，19.8毫摩尔)混悬液。60℃搅拌3小时后，加(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯(1.62克，6.2毫摩尔)并继续在60℃搅拌1小时。冷却反应混合物至室温并搅拌过夜。第二天，加热反应混合液至60℃，6小时，然后冷却至室温过夜。真空除去二甲基甲酰胺，在搅拌的二氯甲烷和水中浸溶残余物。除去有机层，用盐水提取，然后用硫酸钠干燥。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷。将溶液过硅胶柱(10克)，用二氯甲烷/乙醇(19∶1)液洗脱，生成标题化合物(500毫克，产率26.7%)。
步骤d(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-(2-四氢吡喃氧基)-4-环戊烯(0.5克，1.7毫摩尔)于50毫升蒸馏水和1.5毫升6当量盐酸中。在室温搅拌此混合液12小时，然后真空浓缩至干。将残余物浸溶于含足量氢氧化铵的乙醇溶液，加入等体积的二氯甲烷(氯化铵沉淀)。将混合液过硅胶柱(50克，70-230目)，用二氯甲烷/甲醇(4∶1)液洗脱，以每份40毫升的量回收标题化合物。合并含纯物质的各部分并浓缩至干。用乙醇溶解残余物并加足量的6当量盐酸调pH至1。浓缩溶液至干，生成标题化合物(230毫克，产率62%)。
步骤e(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐(230毫克，0.99毫摩尔)于25毫升甲醇和75毫升蒸馏水中，加氧化铂(Ⅳ)(50毫克)并在30磅/平方英寸氢存在下氢化混合物3.5小时。经硅藻土板过滤混合液并浓缩滤液至干。将产物溶于甲醇，溶液过20克硅胶柱，用二氯甲烷∶甲醇(9∶1)液洗脱。浓缩含产物的部分至干并溶于甲醇，用6当量盐酸调pH至1。将这种物质浓缩至干，生成标题化合物(210毫克，产率83%)。365＝+24.4℃(甲醇，1.0毫克/毫升)。
H1-NMR(DMSO/TMS)δ＝8.7(s，1H)，8.5(s，1H)，5.02(m，1H)，4.3(m，1H)，2.4-1.8(m，6H)。
以下化合物可采用与上面实例1中类似的方法制备，使用易获得的起始物质(1S，3R)-顺式-1-[9-(3-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(7-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-(9-嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9(8-氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(2-氨基嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(2，6-二氨基嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(2-氨基-6-氯嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐用于上述合成路线的起始物质，包括(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇，腺嘌呤，7-去氮杂腺嘌呤，嘌呤，8氮杂腺嘌呤，2-氨基嘌呤，2，6-二氨基嘌呤和2-氨基-6-氯嘌呤均容易获得或可按已知的和有文献可查的常规方法和技术制备。
制备Y8和Y9均为CH基团的式(1)化合物的总合成过程见合成路线B。
合成路线B
在步骤a中，2-环戊烯衍生物(4)与甲基甲基亚磺酰甲基硫中的钠离子反应，生成相应的1-取代衍生物(7)。
在步骤b中，(7)的钠离子与合适的嘧啶或吡啶衍生物反应，如5-氨基-4，6-二氯嘧啶，继之水解，生成相应的酮衍生物(8)。
在步骤c中，酮衍生物(8)通过与合适的Wittig试剂反应，如φ3P＝CH2OCH3[methoxymethyl triphenylphosphylidine chlo-ride]，在正丁基锂存在下转变为相应的烯醇酯(9)。
在步骤d中，烯醇酯(9)在酸(如盐酸)的存在下被环化，根据已知的并且有文献可查的标准技术除去3-羟基保护基团，生成6-取代碳环核苷类似物(10)。
在步骤e中，6-取代碳环核苷类似物用合成路线A，步骤e介绍的方法加以氢化，产物为6-取代核苷衍生物(16)。当前述6-取代碳环核苷类似物(10)在第6位携带一个氯时，根据已知的和有文献可查的标准技术，6-氯衍生物可转变为6-氨基或6-氢衍生物。
下面的实例介绍了按合成路线B进行的典型合成方法。这一实例仅是为了便于理解而做的说明，并未打算在任何方面限制本发明的范围。
实例2(1S，3R)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐步骤a(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[甲基(1-甲基亚磺酰基-1-甲基硫)]-2-环戊烯在0℃，将甲基甲基亚磺酰甲基硫(1.2当量)搅拌溶解于四氢呋喃溶液，加正丁基锂(1.2当量)并搅拌15分钟。在15分钟内，在0℃至25℃下，滴加(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-环戊烯(1当量)于四氢呋喃的溶液并搅拌几小时。用水稀释反应液，由乙酸乙酯或二氯甲烷提取，然后用水，盐水洗有机层，经硫酸钠干燥。再将溶液浓缩至干，生成标题化合物的粗产品。
步骤b(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[羰基(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])]-2-环戊烯在0℃，搅拌(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[甲基(1-甲基亚磺酰基-1-甲基硫)]-2-环戊烷(1当量)于四氢呋喃的溶液，加正丁基锂并继续搅拌15分钟。在15分钟内，滴加5-氨基-4，6-二氯嘧啶(1.1当量)于四氢呋喃的溶液并在室温下搅拌反应混合液24小时。用水稀释反应液，用乙酸乙酯或二氯甲烷提取，经水、盐水洗有机层，用硫酸钠干燥。将溶液浓缩至干，生成标题化合物的粗产品。用硅胶柱纯化标题化合物，洗脱液为乙酸乙酯/己烷。
步骤c(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[亚乙基-1-(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])-2-甲氧基]-2-环戊烯在0℃，搅拌methoxymethyl triphen ylphosphylidine chloride(1.2当量)于四氢呋喃的溶液，加入正丁基锂(1.2当量)后搅拌1小时。在15分钟内，0℃下加(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[羰基(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])]-2-环戊烷(1当量)于四氢呋喃的溶液并搅拌过夜。浓缩反应混合物至干，将残余物溶于二乙醚。冷却至0℃1小时，经过滤除去沉淀物物氯化锂和氧化三苯膦)。浓缩滤液，得到标题化合物粗品。用硅胶柱纯化标题化合物，洗脱液为乙酸乙酯/己烷。
步骤d(1R，3S)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐溶解(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[亚乙基-1-(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])-2-甲氧基]-2-环戊烯于甲醇水溶液和足量的6当量盐酸，室温搅拌4小时。用氢氧化铵中和产物，将反应混合液浓缩至干，生成(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[9-(6-氯-9-去氮杂嘌呤基)]-4-环戊烯。用硅胶柱纯化产物，洗脱液为二氯甲烷/乙醇。
将(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[9-(6-氯-9-去氮杂嘌呤基)]-4-环戊烯封入一个含甲醇和无水氨的密闭容器中24小时，需要时可加热。除去溶剂，将产物过Dowex 50WTM柱，用稀氢氧化铵洗脱。浓缩洗脱液至干，在水中浸溶，用6当量盐酸酸化，搅拌4小时。浓缩溶液至干，生成标题化合物。
步骤e(1S，3R)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐于乙醇/水(1∶1)液中并加入氧化铂。在充满氢(35磅/平方英寸)的帕尔氢化器中反应12小时。过滤除去催化剂，浓缩滤液至干，生成标题化合物。
制备Y9为CH基团而Y8为氮的式(1)化合物的总合成方法见合成路线C。
合成路线C
在步骤a中，按合成路线B描述的方法制备的酮衍生物(8)被转变为相应的肟衍生物，然后被环化为相应的8-氮杂-9-去氮杂-6-取代核苷衍生物(11)。这一转化是通过将肟与二乙基偶氮二羧化物(DEAD)和三苯膦反应而实现的。此外，(8)的3-羟基保护基团可根据已知的和有文献可查的标准技术除去。
在步骤b中，8-氮杂-9-去氮杂-6-取代核苷衍生物(11)通过使用合成路线A步骤e描述的氢化方法，被转变为相应的8-氮杂-9-去氮杂-6-取代-碳环腺嘌呤衍生物(1c)。当后者在第6位带有一个氯时，可根据已知的和有文献可查的标准技术，将6-氯衍生物转变为6-氨基或6-氢衍生物。
实例3(1S，3R)-顺式-1-[9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐步骤a(1R，3S)-顺式-1-(9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐向(1S，4S)-反式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[羰基(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])]-2-环戊烯(1当量)和盐酸羟胺(1.2当量)的无水乙醇溶液中加入氢氧化钠溶液(1.2当量)。2小时后加水，收集和干燥由此而形成的固体(肟中间产物)。溶解肟中间产物(1当量)于二氯甲烷，继之为DEAD(二乙基偶氮二羧化物)(1.2当量)和三苯膦(1.1当量)。让混合液反应2小时，生成(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(9-[8-氮杂-6-氯-9-去氮杂嘌呤基])-4-环戊烯。用水、盐水提取反应混合物。用硫酸钠干燥有机层，浓缩至干，加入乙醚沉淀氧化三苯膦。过滤除去沉淀，在硅胶柱上纯化产品，用乙酸乙酯/己烷液洗脱。
将(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(9-[8-氮杂-6-氯-9-去氮杂嘌呤基])-4-环戊烯封入含甲醇和无水氨的密闭容器中24小时，必要时加热。除去溶剂，将产品过Dowex 50WTM柱，用稀氢氧化铵液洗脱。将洗脱液浓缩至干，在水中浸溶，用6当量盐酸酸化，搅拌4小时。将溶液浓缩至干，得到标题化合物。
步骤b(1S，3R)-顺式-1-[9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-[9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐于乙醇/水(1∶1)中并加入氧化铂。在充满氢(35磅/平方英寸)的帕尔氢化器中反应12小时。过滤除去催化剂，浓缩滤液至干，生成标题化合物。
总之，当需要合成式(1)化合物的相应的(1R，3S)对映体时，应采用与上述相类似的方法。所不同的是中间产物(2)的4-羟基未接保护基团(以便在乙酸基水解后可在1位接离去基团)，而是在4位接了一合适的离去基团，保留1-乙酸基团或1位上其它合适的保护基团。
例如，制备Y9为氮的式(1)化合物相应的(1R，3S)对映体的总合成步骤见合成路线D。
合成路线D
L＝离去基团在步骤a中，(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(2)的4-羟基部分被一个合适的离去基团(L)采用合成路线A中描述的方法衍生，形成相应的2-环戊烯衍生物(4a)。合适的离去基团的代表性实例为triflate，对溴苯磺酰基，甲苯磺酰基，甲磺酰基等等。首选的离去基团是甲磺酰基。
在步骤b中，2-环戊烯衍生物(4a)在4位上带一离去基团，在1位有一乙酸基团，被需要的核苷碱(其中Y是氮)所取代，生成相应的保持原构型的1-乙酸基-碳环核苷类似物(5a)。这一反应可按合成路线A的取代反应进行。
在步骤c中，1-乙酸基碳环核苷类似物(5a)的1-乙酸基可根据已知的和文献中可查到的标准方法和技术除去，生成相应的不饱和碳环核苷类似物(6a)。例如，1-乙酸基可被碱，如碳酸钾处理除去。
在步骤d中，不饱和碳环核苷类似物(6a)按已知的和文献中可查到的标准方法进行氢化。生成相应的碳环核苷类似物(Ⅰd)。
下面的实例介绍了合成路线D描述的典型合成法。这一实例仅是为了便于理解而做的说明，并未打算从任何方面限制本发明的范围。
实例4(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烷盐酸盐步骤a(1S，4R)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-乙酸基-2-环戊烯溶解(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(1.42克，10.0毫摩尔)于40毫升二氯甲烷。向此溶液中加入甲磺酰氯(3.72克，30.0毫摩尔)和三乙胺(3.63克，30.0毫摩尔)并搅拌4.5小时。用水、盐水提取混合物。用硫酸钠干燥有机层，浓缩溶液，生成黄色油状标题化合物(2.09克，产率95%)，产物立即用于下一反应。
步骤b(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-乙酸基-4-环戊烯在60℃搅拌溶于50毫升二甲基甲酰胺的腺嘌呤(4.1克，30.0毫摩尔)混悬液，加入氢化钠(60%，1.0克，30.0毫摩尔)，60℃搅拌3小时后，向溶液中加入(1S，4R)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-乙酸基-2-环戊烯(2.09克，9.5毫摩尔)并在60℃继续搅拌16小时。真空除去二甲基甲酰胺，在搅拌着的二氯甲烷水溶液中浸溶残余物，除去有机层，用盐水提取，用硫酸钠干燥有机层。真空除去溶剂，残余物溶解于二氯甲烷中。溶液过硅胶柱(40克)，用氯仿/甲醇(9∶1)洗脱，生成标题化合物(1.07克)(产率33%)。
步骤c(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯溶解(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-乙酸基-4-环戊烯(0.5克，1.7毫摩尔)于25毫升甲醇中，然后加3毫升水和600毫克碳酸钾。室温下搅拌此混合液1小时。然后真空浓缩混合液至干。在乙醇中浸溶固体以沉淀碳酸钾，过滤混合液。加等量的二氯甲烷，将混合液过硅胶柱(50克，70-230目)，然后用二氯甲烷/甲醇(4∶1)洗脱。收集各部分(40毫升)，浓缩含纯物质的部分，干燥后生成标题化合物(257毫克，产率62%)。
步骤d(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烷盐酸盐溶解(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯(50毫克，0.2毫摩尔)于50毫升乙醇和15毫升蒸馏水中，再加50毫克氧化铂(Ⅳ)并在氢气(30磅/平方英寸)存在下氢化3.5小时。经硅藻土板过滤混合液，将滤液浓缩至干，生成标题化合物(41毫克，产率82%)。365＝-24℃(甲醇，0.29毫克/毫升)H1-NMR(DMSO/TMS)δ＝8.7(s，1H)，8.5(s，1H)，5.02(m，1H)，4.3(m，1H)，2.4-1.8(m，6H)。
本发明进一步提供了一种实现免疫抑制的方法，更确切地说，一种抑制获得性免疫，在患者需要时，可给予有效免疫抑制量的式(1)化合物。
这里使用的术语“患者”指患病的温血动物，如哺乳动物，如患自身免疫病或“移植物抗宿主”病，或被移植的同种异体组织或器官有被排斥的危险，应明确的是，人，大鼠和小鼠都包括在“患者”的范畴。
将式(1)化合物给予患者，在其体内引起免疫抑制作用，更确切地说，将式(1)化合物给患者后引起患者体内获得性免疫的抑制。换句话说，通过用式(1)化合物治疗患者，与未治疗患者相比，患者的获得性免疫反应被阻止或抑制了。
当患者患有自身免疫病，“移植物抗宿主”病或为了防止已移植的同种异体组织或器官被排斥时，需要用免疫抑制剂(如式(1)化合物)治疗。术语“自身免疫病”是指其中免疫反应在患者体内是针对他们自身成份的，引起不希望的和沉淀是极度衰弱性疾病的病症和状态。
患自身免疫病的患者，如患有类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病，某些溶血性贫血，风湿热，甲状腺炎，溃病性结肠炎，重症肌无力，肾小球肾炎，变态反应性脑脊髓炎，某些病毒性肝炎后的持续性神经和肝脏破坏，多发性硬化和系统性红斑狼疮均需要用免疫抑制剂如式(1)化合物治疗。类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病和多发性硬化的特征在于是细胞介导自身免疫反应的结果而且可能是由于T细胞的作用。重症肌无力和系统性红斑狼疮的特征在于是体液自身免疫反应的结果。因此，对患上述疾病的患者给予式(1)化合物治疗，将特别有助于防止疾病的进一步加重或恶化。对自身免疫病早期患者的治疗，如对类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病，多发性硬化，重症肌无力或系统性红斑狼疮的治疗在防止疾病进一步恶化为更严重的状态特别有效。例如，胰岛素依赖性糖尿病是一种自身免疫病，认为是由针对分泌胰岛素的胰岛的β细胞的自身免疫反应所引起。在胰岛β细胞完全破坏之前对患胰岛素依赖性糖尿病早期患者的治疗可预防和阻止分泌β-细胞的剩余胰岛的进一步破坏，因而可特别有效地防止疾病的进展。应明确的是，患其它自身免疫病早期患者的治疗也将特别有助于预防或阻止疾病状态进一步自然发展成更严重的状态。
已接受或即将接受同种异体组织或器官移植物，如接受同种异体肾，肝，心，皮肤，骨髓的患者，也是需要免疫抑制剂如式(1)化合物进行预防性治疗的患者。免疫抑制剂将防止受者的获得性免疫反应排斥供者的同种异体组织或器官。同样患“移植物抗宿主”病的患者也需要用免疫抑制剂如式(1)化合物进行治疗。免疫抑制剂将防止被移植的组织或器官的获得性免疫反应排斥受者的同种异体组织或器官。
基于标准的临床和实验室试验和技术，一名主治医师，作为在医学领域有技术专长的人，能很容易地确定患者是否要用象式(1)化合物那样的免疫抑制剂治疗。
式(1)化合物的有效免疫抑制剂量是在单独或多次给药时，能够导致一种免疫抑制作用，特别是获得性免疫反应抑制作用的药物剂量。免疫抑制作用指一种减慢、阻断、抑制、防止获得性免疫反应的进一步表达。
式(1)化合物的有效剂量可由主治医师利用已知的技术并观察在类似情况下的结果，很容易地确定。在确定有效剂量时，要考虑许多因素，包括哺乳动物的种类，大小，年龄，健康状况，患何种疾病，疾病的严重程度，患者个体的反应性，使用的特定化合物，给药的方式，所用制剂的生物利用率特点，选择的用药方案，并用的药物及其它情况，但不限于此。
式(1)化合物的有效免疫抑制剂量预计在每天每公斤体重0.1毫克至500毫克之间。最好能选在每天每公斤体重1毫克至50毫克之间。
在对患者进行治疗时，式(1)化合物可以在保持其生物利用率达有效量水平以上为前提采用任何药物剂型和给药方式。如给药可口服或非肠胃途径。例如，式(1)化合物可口服给药，可皮下，肌肉，静脉，皮面，鼻腔吸入，直肠等途径给药。口服给药一般是优选的。制药学领域的技术人员可根据所选化合物的具体特性，所治疗疾病的情况，疾病的分期和其它有关因素，选择适当的药物剂型和给药途径。
化合物可单独给药，或以与药学上可接受的载体或赋形剂结合的药物组合物的形式给药。赋形剂的比例和性质由所选化合物的溶解性和化学特性，给药途径的选择和标准药物的应用情况来确定。本发明化合物本身是有效成份，为了稳定，便于结晶，增加溶解性等目的，可以药物学上可接受的酸加成盐的形式配制和给药。
在另一实施方案中，本发明提供了含式(1)化合物的组合物，其以混合物或与一种或多种惰性载体，相结合的形式存在。这些组合物是有用的，例如，作为测定标准品，作为大批量生产的便利方法，或作为药物组合物。式(1)化合物可测定的量可通过本领域技术人员所熟知和掌握的标准检测方法和技术测定。式(1)化合物的可测定量一般约为组合物重量的0.001%到约75%。惰性载体可为任何不会降解或不会与式(1)化合物发生共价反应的物质。合适的惰性载体实例为水，水缓冲液如那些在高效液相色谱分析中通常使用的缓冲液，有机溶剂如乙腈，乙酸乙酯，己烷等等，和药物学上可接受的载体或赋形剂。
更确切地说，本发明提供了含有效免疫抑制量的式(1)化合物的药物组合物，其以混合物或与一种或多种药物学上可接受的载体或赋形剂相结合的形式存在。
药物组合物是按照药学领域已知的方法配制的。载体或赋形剂可以是可作为活性成份的媒介物或介质的固体，半固体或液体物质。合适的载体或赋形剂是本领域众所周知的。药物组合物应适合于口服和肠胃外使用，包括局部应用，可以采用片剂，胶囊，栓剂，溶液，混悬液等形式给药。
本发明化合物可口服给药，例如与惰性稀释剂或与可食用的载体一起，可将它们装进明胶胶囊或压成药片。为了口服给药，化合物中可掺入赋形剂。使用的剂型有片剂，锭剂，胶囊，酏剂，混悬剂，糖浆剂，糯米纸囊剂，口香糖剂等等。这些制剂应含至少4%的本发明化合物，即活性成份，但可根据特定的剂型改变含量，比较容易达到的是占单位重量的4%-70%之间，化合物在组合物中所含的量是以能获得适当剂量为准的。根据本发明优先选择的组合物和制剂被制备，以便每一口服剂量单位剂型含本发明化合物5.0至300毫克。
片剂，丸剂，胶囊剂，锭剂等也可含一或多种下面的佐剂∶粘合剂如微晶纤维素，黄蓍树胶或明胶，赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如藻酸，Primogel，玉米淀粉等，润滑剂如硬脂酸镁或Sterotex，滑移剂如胶态二氧化硅，甜味剂如蔗糖或糖精等可以加入，或增香剂如薄荷，水杨酸甲酯，或橙香剂。当药物剂型为胶囊时，除含上述类型物质之外它还可含一种液体载体，如聚乙二醇或脂肪油。其它药物剂型可含有其它各种物质，用以修饰药物单位的物理形式，如作为包衣。因此，片剂或丸剂可用糖，虫胶，或其它肠包衣剂包被。糖浆剂除可含本发明化合物外，可含蔗糖作为甜味剂和含某种防腐剂，染料和着色剂，香味剂。制备这些不同的组合物所使用的物质应是药物学上纯的，在使用的量上是非毒性的。
为了肠胃外治疗用药，包括局部给药，可将本发明化合物制成一种溶液或混悬液。这些制剂应含至少0.1%的本发明化合物，但含量可在它们重量的1%至约50%之间变化。本发明化合物在这种药物组合物中的量是以获得适当剂型为准。根据本发明优选的药物组合物和制剂被制备，以便肠胃外剂型单位剂量含5.0至100毫克本发明化合物。
溶液或悬浮液还包括一种或多种下面列出的佐剂无菌稀释剂如注射用水，生理盐水，固定油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶剂，抗菌剂如苄醇或羟苯甲酸甲酯，抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠，螯合剂如乙二胺四乙酸，缓冲液如乙酸盐，柠檬酸盐或磷酸盐，和调节肌肉的正常张力剂如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可封入安瓿，一次性注射器或多倍剂量的玻璃或塑料小瓶。
结构上相关的化合物的任何基团均具有特定的一般性用途，在其最终应用中，优选的某些基团和构型如下Y3是氮的式(1)化合物。Y7是氮的式(1)化合物。Y8是CH基团的式(1)化合物。Y9是氮的式(1)化合物。此外，还有Q是氨基而Z是氢的式(1)化合物。
下面的式(1)化合物是特别优选的(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐;
(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐。
下面的研究说明式(1)化合物的用途。这些研究仅为易于理解而做说明，并未打算从任何方面限制本发明的范围。这里使用的术语具有所示的意义“μM”代表微摩尔浓度，“Units”代表国际上接受的蛋白质测量单位，“S.D”代表标准差，“nmol”代表毫微摩尔，“ng”代表毫微克。
分离大鼠腹腔巨噬细胞在细胞培养基中培养，方法与Edwards所述基本相同[Science239，769(1988)]，巨噬细胞与有调理作用的酵母多糖(3毫克/毫升)(具有刺激微粒的作用)和重组大鼠γ干扰素(rrIFN-r)(1000Units/ml)(具有活化细胞的淋巴因子作用)一起，在各种浓度的(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷(0至1000μM)存在下温育。用超氧离子(O-2)测定法，测定巨噬细胞激活的程度，方法与Edwards等描述的一致[Science239，769(1988)]。研究结果表明(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯能有效地抑制大鼠巨噬细胞在体外的活化(IC50为2.5μM)。
对以大鼠炎症气囊模型法获得的大鼠多形核白细胞用25ng/囊重组人白细胞介素-1(γHuIL-1)激发，基本上根据Esser等的方法[Internat.J.Tissue Reactions Ⅺ，291(1989)]。多形核白细胞与作为刺激液的佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(200ng/ml)和作为刺激性淋巴因子的γγIFN-γ(1000 Units/ml)或作为刺激性细胞因子的γHuIL-1(500Units/ml)一起，在各种浓度的(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷(0至1000μM)的存在下温育。通过超氧离子(O-2)测定法测定巨噬细胞的激活程度，方法如Edwards等所述[Science239，769(1988)]。以上研究结果表明(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷可有效地抑制γγ-IFN-1对大鼠多形核白细胞在体外的激活(IC50为0.001μM)，并有效地抑制γHuIL-1对大鼠多形核白细胞在体外的激活(IC50为0.001μM)。
权利要求
1.制备下式化合物或其药物学上可接受的盐的方法
式中，在环戊烷环上的羟基取代基是与双环取代基相关的顺式构型，Y3，Y7，Y8和Y9各自独立地为氮或CH基团，Q是氨基，卤素或氢，Z是氢，卤素或氨基，该方法包括对相应的环戊烯基衍生物进行催化氢化。
2.权利要求1所述的方法，其中催化氢化是在氧化铂存在下进行的。
3.权利要求1所述的方法，其中所生产的化合物为(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷。
4.权利要求1所述的方法，其中所生产的化合物为(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷。
5.对于需要的患者使用有效的免疫抑制剂量的权利要求1化合物实现免疫抑制的方法。
6.对于需要的患者使用有效的免疫抑制剂量的权利要求1化合物实现获得性免疫抑制的方法。
7.根据权利要求6的方法，其中患者需要对同种异体移植物排斥反应进行治疗。
8.根据权利要求6的方法，其中患者需要对自身免疫病进行治疗。
9.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为胰岛素依赖性糖尿病。
10.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为多发性硬化。
11.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为类风湿关节炎。
12.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为重症肌无力。
13.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为系统性红斑狼疮。
14.一种含有可检测剂量的权利要求1化合物的药物组合物，其可为混合物形式，或是与惰性载体相结合的其他形式。
15.一种含有有效免疫剂量的权利要求1化合物的药物组合物，其可为混合物形式，或是与一种或多种药物学上可接受的载体或赋形剂相结合的其它形式。
全文摘要
本发明涉及式(1)的新的碳环腺嘌呤核苷化合物，或其药物学上可接受的盐以及它们作为免疫抑制剂的使用。式中，在环戊烷环上的羟基取代基是与双环取代基相关的顺式构型，Y
文档编号C07D473/34GK1059909SQ9110893
公开日1992年4月1日 申请日期1991年9月14日 优先权日1990年9月14日
发明者戴为·R·伯施盯, 卡尔·K·艾底华斯, 罗那德·E·艾瑟, 都格啦斯·L·科尔 申请人:马理昂默里尔多公司
这是1990年9月14日提交的申请(编号07/582，280)的部分继续申请。
本发明涉及某些可作为免疫抑制剂应用的碳环腺苷类似物。
免疫涉及到对体内存在的外源性抗原物质的识别和处理。通常抗原是以颗粒物质(如细胞，细菌等等)或大分子蛋白质或多糖分子的形式存在。抗原被免疫系统识别为“非己”物质，即与动物自身成份相比是不同的或外来的。潜在的抗原可能是多种物质，常为蛋白质，这些物质最常位于细胞的外表面。例如，潜在的抗原可在以下物质表面被发现，这些物质有花粉微粒，组织移植物，动物寄生虫，病毒和细菌。一旦抗原物质被免疫系统识别为“非己”，天然的(非特异性的)和/或获得性免疫反应可以被起动并被特异性免疫细胞，抗体和补体系统的作用所保持。在某些条件下，包括某些疾病状态，动物的免疫系统将自身成份识别为“非己”物质并起动对“自身”物质的免疫反应。
一种免疫反应可通过天然的或获得性的机制由免疫系统来实现，两种机制均有细胞介导和体液因素参与。免疫反应的天然机制涉及参与非特异免疫反应的那些机制，包括补体系统和类髓细胞本身，如巨噬细胞，肥大细胞和多形核白细胞(PMN)，参与对某些细菌，病毒，损伤组织和其它抗原的反应。这些天然机制提供了所谓天然免疫。免疫反应的获得性机制涉及淋巴细胞(T和B细胞)和抗体介导的那些机制，这种反应可选择性地针对数以千计的不同的“非己”物质而进行。这种获得性机制提供了所谓的获得性免疫，并导致特异性记忆和适应于动物自身环境的不断变化的反应类型。获得性免疫可以仅由淋巴细胞和抗体本身完成，或更常见由淋巴细胞和抗体与天然免疫机制的补体系统和类髓细胞的相互作用来完成，抗体提供了获得性免疫反应的体液因素，而T细胞提供了获得性免疫反应的细胞介导因素。
免疫反应的天然机制涉及巨噬细胞和多形核白细胞的吞噬作用，通过这一作用，外源性物质或抗原被上述细胞吞食并处理。此外，巨噬细胞可通过其细胞毒性作用杀伤某些外源细胞。补体系统由各种肽和酶组成，也参与天然免疫。它们能吸附于外源物质或抗原上，这样可以促进巨噬细胞和多形核白细胞的吞噬作用或促进细胞溶解或产生炎症反应。
免疫反应的获得性机制涉及由B淋巴细胞(或B细胞)分泌的抗体对特异性抗原的作用以及各种T淋巴细胞(或T细胞)对特异性抗原，对B细胞，对其它T细胞和对巨噬细胞的作用。
负责获得性免疫体液方面的抗体是血清球蛋白，它由B细胞分泌，对不同抗原具有广泛的特异性。抗体的分泌是对特异性抗原识别的反应。抗体可以结合并中和细菌毒素，能结合于病毒，细菌或其它“非己”细胞的表面，并因此促进多形核白细胞和巨噬细胞的吞噬作用。此外，抗体能活化补体系统，后者可进一步加强针对特异性抗原的免疫反应。
淋巴细胞是血液中的小细胞，它们通过血循环进入组织，再通过淋巴系统回到血中。有两种主要的淋巴细胞亚群叫做B细胞和T细胞。B细胞和T细胞均起源于相同的类淋巴干细胞，B细胞在骨髓分化，T细胞在胸腺分化。淋巴细胞拥有某些限制性受体，后者允许每个细胞针对特异性抗原反应，这为获得性免疫反应的特异性奠定了基础。此外，淋巴细胞寿命相对较长，在接受适当的信号后，具有克隆增殖的能力，这一特点为获得性免疫的记忆方面提供了基础。
B细胞是负责获得性免疫体液方面的淋巴细胞，作为对特异外源性抗原的识别反应，B细胞将分泌特异性抗体，后者可与特异性抗原结合。对于毒素，抗体可中和抗原，或对于其它抗原，抗体可以促进吞噬。抗体也参与激活补体系统，后者可以使针对入侵抗原的免疫反应进一步加强。
T细胞是负责获得性免疫细胞介导方面的淋巴细胞。有三种主要的T细胞类型，即细胞毒性T细胞，辅助性T细胞和抑制性T细胞。细胞毒性T细胞可探测和破坏感染了特异性病毒抗原的细胞。辅助性T细胞具有多种调节功能。当一种特异性病毒抗原被识别时，辅助性T细胞能促进或增强通过合适B细胞针对抗原的抗体反应，也能促进或增强通过巨噬细胞抗原的吞噬作用。抑制性T细胞具有抑制针对特殊抗原的免疫反应的作用。
细胞介导的免疫反应被T细胞通过各种调节信使化合物抑制和监视，这些化合物由类髓细胞和淋巴细胞分泌。通过分泌这些调节信使化合物，T细胞能调节其它免疫细胞，如B细胞，巨噬细胞，多形核白细胞和其它T细胞的增殖和活化。例如，当结合了外源性抗原后，巨噬细胞或其它抗原提呈细胞能分泌白细胞介素-1(IL-1)，后者可活化辅助性T细胞。T细胞又转过来分泌某些淋巴因子，包括白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素。这些细胞因子在细胞介导免疫反应中具有多种调节作用。淋巴因子是一个由T细胞(有时由B细胞)所产生之分子的大家族。它们包括IL-2，可促进T细胞克隆增殖;MAF或巨噬细胞活化因子，可增强许多巨噬功能，包括吞噬作用，细胞内的杀伤和分泌各种细胞毒性因子;NAF或中性粒细胞活化因子，可增强多形核白细胞的许多功能，包括吞噬，氧基团的产生，杀菌，增强趋化性和增加细胞因子的产生;MIF或巨噬细胞移动抑制因子，限制巨噬细胞的运动，使之集中在T细胞附近;γ-干扰素，由活化的T细胞产生，能对许多细胞产生广泛的作用，包括抑制病毒复制，诱导Ⅱ类组织相容性分子的表达，使细胞活化，以利于结合和呈递抗原，巨噬细胞的活化，细胞生长抑制，诱导许多类髓细胞系分化。
活化的巨噬细胞和多形核白细胞在细胞介导的获得性免疫过程中，能使免疫反应增强，其特征在于使反应性氧中间体的生成增加。这种使反应性氧中间体生成增加或呼吸作用突然增加被称为“待发”。某些淋巴因子如γ干扰素，能在巨噬细胞和多形核白细胞中，引起这种反应性氧中间体呼吸作用突然增加。因此，淋巴因子，如γ-干扰素，是由T细胞分泌，行使活化巨噬细胞和多形核白细胞的功能，结果使细胞介导的免疫反应增强。
免疫反应可以是速发的或迟发的反应类型。迟发型超敏反应是在抗原激发后24-48小时内在免疫反应患者体内出现的炎症反应。它主要是细胞介导的免疫反应的结果。而速发型超敏反应，如过敏性休克或局部过敏坏死反应(阿图斯反应)，是抗原激发后几分钟至几小时内在免疫反应患者体内出现的炎症反应，它主要是抗体介导的免疫反应的结果。
免疫系统特别是细胞介导的免疫，识别“自己”和“非己”抗原的能力，对于免疫系统特异性防御入侵微生物的功能是至关重要的。“非己”抗原是那些在体内经检测可与动物自身成份区别或为外源性的物质上的抗原;而“自己”抗原是那些在体内经检测不能与动物自身成份区别的抗原。尽管免疫反应主要是防御致病的外源性物质的，但它不能区分外源性物质是有利的还是有害的，对这两者它都进行破坏。
在某些情况下，如对于同种异体移植或在“移植物抗宿主”病中，抑制免疫反应将大大有助于防止对有利的外源组织和器官的排斥。同种异体组织和器官是来自相同物种但遗传学上不同成员的组织和器官。“移植物抗宿主”病发生在被移植的组织部位，例如移植的骨髓含有供体同种异体T细胞，其可引起对受体自身组织的免疫反应。虽然体液和细胞介导免疫反应在同种异体组织和器官的排斥反应中均起作用，但主要的影响机制是细胞介导的免疫反应。因此，免疫反应的抑制，特别是细胞介导免疫反应的抑制对于防止这种同种移植的组织和器官的排斥反应是有益的。例如，环孢霉素A是目前使用的治疗接受同种异体移植物患者和移植物抗宿主病的免疫抑制剂。
有时个体的免疫反应比入侵微生物或外源性物质对自身造成更严重的损伤和不适，如变态反应时，此时需要抑制免疫反应。
有时免疫机制对一个人自身的某些部分变为敏感，引起对这些部分的干扰甚至破坏。区别“自己”和“非己”的能力被损害，机体开始破坏自身，这样能导致自身免疫病，如类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病(此病为胰岛β细胞的自身免疫性破坏，胰岛负责分泌胰岛素)，某些溶血性贫血，风湿热，甲状腺炎，溃疡性结肠炎，重症肌无力，肾小球肾炎，变态反应性脑脊髓炎，病毒性肝炎后的持续性神经和肝脏破坏，多发性硬化和系统性红斑狼疮。某些类型的自身免疫系由于通常不暴露于淋巴细胞的部位的创伤所引起，如神经组织或眼的晶体。当这些部位的组织暴露于淋巴细胞时，它们的表面蛋白能做为抗原，激发抗体产生和细胞免疫反应，继之造成这些组织的破坏。其它的自身免疫病发生于机体暴露于与自身组织抗原性相似，即交叉反应的抗原之后。风湿热是这类病中的一个例子，引起该病的链球菌抗原与人心脏组织有交叉反应，抗体不能区分细菌抗原和心肌抗原，带有这些抗原的细胞均可以被破坏。在这些自身免疫病中，免疫系统的抑制将有益于减少或消除疾病的作用。某些这种自身免疫病，如胰岛素依赖性糖尿病，多发性硬化和类风湿关节炎的特征在于它们是细胞介导自身免疫反应的结果，而且可能系由于T细胞的作用[参看Sinha，et al.Science 248，1380(1990)]。其它的如重症肌无力和系统性红斑狼疮的特征在于它们是体液自身免疫反应的结果[Ⅰd]。
因此，免疫反应的抑制对治疗自身免疫病是有益的。更重要的是对于细胞介导免疫反应的抑制将有助于治疗因T细胞活化而导致的自身免疫病，这类病包括胰岛素依赖性糖尿病，多发性硬化和类风湿关节炎。对体液免疫反应的抑制将有益于治疗T细胞非依赖性自身免疫病，如重症肌无力和系统性红斑狼疮。
本发明提供了新的式(1)化合物、或其药物学上可接受的盐
式中，在环戊烷环上的羟基取代基是与双环取代基相关的顺式构型;Y3，Y7，Y8和Y9各自独立地为氮或CH基团;Q是氨基，卤素或氢，Z是氢，卤素或氨基。
本发明还提供了一种实现免疫抑制的方法，更确切地说，一种抑制获得性免疫的方法。当患者需要时，可给予有效免疫抑制剂量的式(1)化合物。
此外，本发明提供了一种含有有效免疫抑制剂量的式(1)化合物的药物组合物。该组合物以混合物形式或以与一种或多种药物学上可接受的载体或赋形剂相结合的其它形式存在。
这里使用的术语“卤素”指单价的碘，溴，氯或氟基团。术语“氮”指三价的氮基团，术语“CH基团”指次甲基基团。
这里使用的术语“药物学上可接受的盐”指式(1)化合物的酸加成盐，与形成盐之前相比化合物的毒性并未增加。药物学上可接受的盐的代表性实例是通过用相应的酸处理式(1)化合物制得的盐。这些酸是氢溴酸，盐酸，硫酸，磷酸，硝酸，甲，乙，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，乳酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，抗坏血酸，α-氧代戊二酸，谷氨酸，天冬氨酸，顺式丁烯二酸，羟基顺式丁烯二酸，丙酮酸，苯乙酸，苯甲酸，对氨基苯甲酸，氨茴酸，对羟基苯甲酸，邻羟基苯甲酸，对氨基邻羟基苯甲酸，甲磺酸，乙磺酸，羟乙磺酸，亚乙基二磺酸，卤苯磺酸，甲苯磺酸，萘磺酸和磺胺酸。盐酸盐作为式(1)化合物的药物学上可接受的盐是优选的。
应明确的是式(1)化合物的环戊烷环上的羟基取代基具有与双环取代基相关的顺式构型。此外，应明确式(1)的这些化合物可能以各种立体异构体的构型形式存在。当然，式(1)化合物包含和包括各自的立体异构体及其外消旋混合物。
制备式(1)化合物的总的合成步骤见合成路线A。其中，Y9是氮。
合成路线A
B＝保护基团，L＝离去基团。
在步骤a中，(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(2)的4-羟基反应部位被一个羟基保护基团(B)所保护，形成对应的4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(3)。使用的特定羟基保护基团可以是许多常用羟基保护基团之一，这些基团是已知的并且有文献可查。特定保护基团的选择和使用是本领域的技术人员熟知的。一般来说，保护基团的选择应以其能在后面的合成步骤中充分地保护羟基，并易于在不引起所需产物降解的条件下除去为原则。
合适的羟基保护基团的代表性实例是四氢吡喃基，甲氧甲基，叔丁基二甲基甲硅烷基，甲氧乙氧基-甲基，乙酸基等等。首选的化合物(2)的4-羟基部分的保护基团为2-四氢吡喃基团。当需要用2-四氢吡喃基在化合物(2)的4-羟基处进行保护时，(2)可与3，4-二氢-2H-吡喃在三氟乙酸存在下反应，生成相应的(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯。
在步骤b中，4-羟基被保护的-(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(3)中的1-乙酸基被水解，用适当的离去基团(L)衍生所得的1-羟基形成相应的2-环戊烯衍生物(4)。(3)的1-乙酸基首先用碱水解，如可使用溶于甲醇或乙醇的氢氧化钾，氢氧化钠或氢氧化铵。然后，用离去基团(L)对水解后衍生物的1-羟基进行衍生。所用的特定离去基团可以是已知的并且有文献可查的许多常用的离去基团之一。特定离去基团的选择和使用是本领域的技术人员熟知的。一般来说，离去基团的选择应以其能充分促进自身被一合适的核苷碱衍生物取代而获得一个构型稳定的产物为原则。合适的离去基团的代表性实例是triflate，对溴苯磺酰基，甲苯磺酰基，甲磺酰基等等。对于步骤b来说，首先的离去基团是甲磺酰基。
例如，当需要将4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(3)转变为相应的4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-2-环戊烯-4-醇时，(3)可被溶于乙醇的氢氧化钾水解，然后形成的游离乙醇可被分离出来，(3)通过在三乙胺存在下用甲磺酰氯处理转变为相应的4-羟基被保护的(1R，4R)-顺式-1-甲磺酰氧基-2-环戊烯-4-醇。
在步骤c中，1位上带有离去基团和4位上带有被保护羟基的2-环戊烯衍生物(4)，通过所需核苷碱(其中Y9是氮)取代得到相应的具有稳定构型的3-羟基被保护的碳环核苷类似物(5)。例如，当需要将4-羟基被保护的(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-2-环戊烯-4-醇转变为相应的3-羟基被保护的(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-4-环戊烯-3-醇时，甲磺酰氧基衍生物可在氢化钠存在下用腺嘌呤处理。
在步骤d中，3-羟基被保护的碳环核苷类似物(5)按已知的和有文献可查的标准方法和技术脱去保护基，产生相应的碳环核苷类似物(6)。例如，当3-羟基被2-四氢吡喃所保护时，3-羟基的保护基团可通过酸(如盐酸)处理而被除去。
在步骤e中，碳环核苷类似物(6)通过催化氢化，如可在氧化铂存在下用氢处理转变为相应的碳环腺苷类似物(1a)。
Y9是氮的式(1)化合物可选择下述合成路线A的缩短路线来制备。(1S，4R)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇的4-羟基反应部位可用合成路线A步骤b中叙述的合适的离去基团(L)衍生。在替代合成路线中，首选的离去基团是甲磺酰基团。这样形成了1位上带有乙酸基，4位上带有离去基团(如甲磺酰基)的2-环戊烯衍生物。然后，用需要的核苷碱(其中Y9是氮)，按合成路线A步骤C描述的方法来取代，形成相应的3-羟基被保护的碳环核苷类似物(5)。以后，根据合成路线A步骤d和e制备式(1)化合物，其中Y9是氮。
下面的实例描述了如合成路线A所述的典型合成方法。这里的实例只是为了便于理解而做的说明，并未打算在任何方面限制本发明的范围。下面实例中用的术语具有所示意义“g”指克，“mmol”为毫摩尔，“ml”为毫升，“DMF”指二甲基甲酰胺，“℃”为摄氏温度，“mg”为毫克，“N”代表溶液的当量浓度，“psi”代表磅/每平方英寸，“THF”指四氢呋喃。
实例1(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐步骤a(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯搅拌下述溶液，在20ml二氯甲烷中，溶解(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(1克，7.0毫摩尔)，加3，4-二氢-2H-吡喃(0.6克，7.1毫摩尔)和5滴三氟乙酸。搅拌此混合液24小时。用50毫升二氯甲烷稀释混合液后，用饱和碳酸氢钠提取，然后用盐水提取。用硫酸钠干燥有机层，真空除去溶剂，生成标题化合物(1.58克)。
步骤b(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯将(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯(3.0克，13毫摩尔)溶于50毫升无水乙醇。向该溶液中加入氢氧化钾(0.8克，14毫摩尔)并搅拌混合液3小时。浓缩混合液后，过硅胶柱(10克)，用乙酸乙酯/己烷(1∶1)液洗脱。除去溶剂，生成(1R，4S)-顺式-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯-1-醇，为无色油状物(2.38克)。
将(1R，4S)-顺式-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯-1-醇(1.2克，6.6毫摩尔)溶于25毫升二氯甲烷，向此溶液中加甲磺酰氯(1.13克，9.9毫摩尔)和三乙胺(0.93克，9.2毫摩尔)。搅拌反应液45分钟，然后用水、盐水提取反应混合液，用硫酸钠干燥有机层。浓缩此溶液，生成标题化合物(1.62克，产率94%)，为黄色油状物。
步骤c(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-(2-四氢吡喃氧基)-4-环戊烯将氢化钠(80%，0.57克，19.8毫摩尔)在60℃时加入搅拌的溶于100毫升二甲基甲酰胺的腺嘌呤(2.67克，19.8毫摩尔)混悬液。60℃搅拌3小时后，加(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-(2-四氢吡喃氧基)-2-环戊烯(1.62克，6.2毫摩尔)并继续在60℃搅拌1小时。冷却反应混合物至室温并搅拌过夜。第二天，加热反应混合液至60℃，6小时，然后冷却至室温过夜。真空除去二甲基甲酰胺，在搅拌的二氯甲烷和水中浸溶残余物。除去有机层，用盐水提取，然后用硫酸钠干燥。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷。将溶液过硅胶柱(10克)，用二氯甲烷/乙醇(19∶1)液洗脱，生成标题化合物(500毫克，产率26.7%)。
步骤d(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-(2-四氢吡喃氧基)-4-环戊烯(0.5克，1.7毫摩尔)于50毫升蒸馏水和1.5毫升6当量盐酸中。在室温搅拌此混合液12小时，然后真空浓缩至干。将残余物浸溶于含足量氢氧化铵的乙醇溶液，加入等体积的二氯甲烷(氯化铵沉淀)。将混合液过硅胶柱(50克，70-230目)，用二氯甲烷/甲醇(4∶1)液洗脱，以每份40毫升的量回收标题化合物。合并含纯物质的各部分并浓缩至干。用乙醇溶解残余物并加足量的6当量盐酸调pH至1。浓缩溶液至干，生成标题化合物(230毫克，产率62%)。
步骤e(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐(230毫克，0.99毫摩尔)于25毫升甲醇和75毫升蒸馏水中，加氧化铂(Ⅳ)(50毫克)并在30磅/平方英寸氢存在下氢化混合物3.5小时。经硅藻土板过滤混合液并浓缩滤液至干。将产物溶于甲醇，溶液过20克硅胶柱，用二氯甲烷∶甲醇(9∶1)液洗脱。浓缩含产物的部分至干并溶于甲醇，用6当量盐酸调pH至1。将这种物质浓缩至干，生成标题化合物(210毫克，产率83%)。365＝+24.4℃(甲醇，1.0毫克/毫升)。
H1-NMR(DMSO/TMS)δ＝8.7(s，1H)，8.5(s，1H)，5.02(m，1H)，4.3(m，1H)，2.4-1.8(m，6H)。
以下化合物可采用与上面实例1中类似的方法制备，使用易获得的起始物质(1S，3R)-顺式-1-[9-(3-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(7-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-(9-嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9(8-氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(2-氨基嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(2，6-二氨基嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐(1S，3R)-顺式-1-[9-(2-氨基-6-氯嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐用于上述合成路线的起始物质，包括(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇，腺嘌呤，7-去氮杂腺嘌呤，嘌呤，8氮杂腺嘌呤，2-氨基嘌呤，2，6-二氨基嘌呤和2-氨基-6-氯嘌呤均容易获得或可按已知的和有文献可查的常规方法和技术制备。
制备Y8和Y9均为CH基团的式(1)化合物的总合成过程见合成路线B。
合成路线B
在步骤a中，2-环戊烯衍生物(4)与甲基甲基亚磺酰甲基硫中的钠离子反应，生成相应的1-取代衍生物(7)。
在步骤b中，(7)的钠离子与合适的嘧啶或吡啶衍生物反应，如5-氨基-4，6-二氯嘧啶，继之水解，生成相应的酮衍生物(8)。
在步骤c中，酮衍生物(8)通过与合适的Wittig试剂反应，如φ3P＝CH2OCH3[methoxymethyl triphenylphosphylidine chlo-ride]，在正丁基锂存在下转变为相应的烯醇酯(9)。
在步骤d中，烯醇酯(9)在酸(如盐酸)的存在下被环化，根据已知的并且有文献可查的标准技术除去3-羟基保护基团，生成6-取代碳环核苷类似物(10)。
在步骤e中，6-取代碳环核苷类似物用合成路线A，步骤e介绍的方法加以氢化，产物为6-取代核苷衍生物(16)。当前述6-取代碳环核苷类似物(10)在第6位携带一个氯时，根据已知的和有文献可查的标准技术，6-氯衍生物可转变为6-氨基或6-氢衍生物。
下面的实例介绍了按合成路线B进行的典型合成方法。这一实例仅是为了便于理解而做的说明，并未打算在任何方面限制本发明的范围。
实例2(1S，3R)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐步骤a(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[甲基(1-甲基亚磺酰基-1-甲基硫)]-2-环戊烯在0℃，将甲基甲基亚磺酰甲基硫(1.2当量)搅拌溶解于四氢呋喃溶液，加正丁基锂(1.2当量)并搅拌15分钟。在15分钟内，在0℃至25℃下，滴加(1R，4S)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-环戊烯(1当量)于四氢呋喃的溶液并搅拌几小时。用水稀释反应液，由乙酸乙酯或二氯甲烷提取，然后用水，盐水洗有机层，经硫酸钠干燥。再将溶液浓缩至干，生成标题化合物的粗产品。
步骤b(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[羰基(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])]-2-环戊烯在0℃，搅拌(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[甲基(1-甲基亚磺酰基-1-甲基硫)]-2-环戊烷(1当量)于四氢呋喃的溶液，加正丁基锂并继续搅拌15分钟。在15分钟内，滴加5-氨基-4，6-二氯嘧啶(1.1当量)于四氢呋喃的溶液并在室温下搅拌反应混合液24小时。用水稀释反应液，用乙酸乙酯或二氯甲烷提取，经水、盐水洗有机层，用硫酸钠干燥。将溶液浓缩至干，生成标题化合物的粗产品。用硅胶柱纯化标题化合物，洗脱液为乙酸乙酯/己烷。
步骤c(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[亚乙基-1-(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])-2-甲氧基]-2-环戊烯在0℃，搅拌methoxymethyl triphen ylphosphylidine chloride(1.2当量)于四氢呋喃的溶液，加入正丁基锂(1.2当量)后搅拌1小时。在15分钟内，0℃下加(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[羰基(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])]-2-环戊烷(1当量)于四氢呋喃的溶液并搅拌过夜。浓缩反应混合物至干，将残余物溶于二乙醚。冷却至0℃1小时，经过滤除去沉淀物物氯化锂和氧化三苯膦)。浓缩滤液，得到标题化合物粗品。用硅胶柱纯化标题化合物，洗脱液为乙酸乙酯/己烷。
步骤d(1R，3S)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐溶解(1R，4S)-顺式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[亚乙基-1-(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])-2-甲氧基]-2-环戊烯于甲醇水溶液和足量的6当量盐酸，室温搅拌4小时。用氢氧化铵中和产物，将反应混合液浓缩至干，生成(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[9-(6-氯-9-去氮杂嘌呤基)]-4-环戊烯。用硅胶柱纯化产物，洗脱液为二氯甲烷/乙醇。
将(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[9-(6-氯-9-去氮杂嘌呤基)]-4-环戊烯封入一个含甲醇和无水氨的密闭容器中24小时，需要时可加热。除去溶剂，将产物过Dowex 50WTM柱，用稀氢氧化铵洗脱。浓缩洗脱液至干，在水中浸溶，用6当量盐酸酸化，搅拌4小时。浓缩溶液至干，生成标题化合物。
步骤e(1S，3R)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-[9-(9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐于乙醇/水(1∶1)液中并加入氧化铂。在充满氢(35磅/平方英寸)的帕尔氢化器中反应12小时。过滤除去催化剂，浓缩滤液至干，生成标题化合物。
制备Y9为CH基团而Y8为氮的式(1)化合物的总合成方法见合成路线C。
合成路线C
在步骤a中，按合成路线B描述的方法制备的酮衍生物(8)被转变为相应的肟衍生物，然后被环化为相应的8-氮杂-9-去氮杂-6-取代核苷衍生物(11)。这一转化是通过将肟与二乙基偶氮二羧化物(DEAD)和三苯膦反应而实现的。此外，(8)的3-羟基保护基团可根据已知的和有文献可查的标准技术除去。
在步骤b中，8-氮杂-9-去氮杂-6-取代核苷衍生物(11)通过使用合成路线A步骤e描述的氢化方法，被转变为相应的8-氮杂-9-去氮杂-6-取代-碳环腺嘌呤衍生物(1c)。当后者在第6位带有一个氯时，可根据已知的和有文献可查的标准技术，将6-氯衍生物转变为6-氨基或6-氢衍生物。
实例3(1S，3R)-顺式-1-[9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐步骤a(1R，3S)-顺式-1-(9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐向(1S，4S)-反式-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-[羰基(4-[5-氨基-6-氯嘧啶])]-2-环戊烯(1当量)和盐酸羟胺(1.2当量)的无水乙醇溶液中加入氢氧化钠溶液(1.2当量)。2小时后加水，收集和干燥由此而形成的固体(肟中间产物)。溶解肟中间产物(1当量)于二氯甲烷，继之为DEAD(二乙基偶氮二羧化物)(1.2当量)和三苯膦(1.1当量)。让混合液反应2小时，生成(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(9-[8-氮杂-6-氯-9-去氮杂嘌呤基])-4-环戊烯。用水、盐水提取反应混合物。用硫酸钠干燥有机层，浓缩至干，加入乙醚沉淀氧化三苯膦。过滤除去沉淀，在硅胶柱上纯化产品，用乙酸乙酯/己烷液洗脱。
将(1R，3S)-顺式-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(9-[8-氮杂-6-氯-9-去氮杂嘌呤基])-4-环戊烯封入含甲醇和无水氨的密闭容器中24小时，必要时加热。除去溶剂，将产品过Dowex 50WTM柱，用稀氢氧化铵液洗脱。将洗脱液浓缩至干，在水中浸溶，用6当量盐酸酸化，搅拌4小时。将溶液浓缩至干，得到标题化合物。
步骤b(1S，3R)-顺式-1-[9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基环戊烷盐酸盐溶解(1R，3S)-顺式-1-[9-(8-氮杂-9-去氮杂腺嘌呤基)]-3-羟基-4-环戊烯盐酸盐于乙醇/水(1∶1)中并加入氧化铂。在充满氢(35磅/平方英寸)的帕尔氢化器中反应12小时。过滤除去催化剂，浓缩滤液至干，生成标题化合物。
总之，当需要合成式(1)化合物的相应的(1R，3S)对映体时，应采用与上述相类似的方法。所不同的是中间产物(2)的4-羟基未接保护基团(以便在乙酸基水解后可在1位接离去基团)，而是在4位接了一合适的离去基团，保留1-乙酸基团或1位上其它合适的保护基团。
例如，制备Y9为氮的式(1)化合物相应的(1R，3S)对映体的总合成步骤见合成路线D。
合成路线D
L＝离去基团在步骤a中，(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(2)的4-羟基部分被一个合适的离去基团(L)采用合成路线A中描述的方法衍生，形成相应的2-环戊烯衍生物(4a)。合适的离去基团的代表性实例为triflate，对溴苯磺酰基，甲苯磺酰基，甲磺酰基等等。首选的离去基团是甲磺酰基。
在步骤b中，2-环戊烯衍生物(4a)在4位上带一离去基团，在1位有一乙酸基团，被需要的核苷碱(其中Y是氮)所取代，生成相应的保持原构型的1-乙酸基-碳环核苷类似物(5a)。这一反应可按合成路线A的取代反应进行。
在步骤c中，1-乙酸基碳环核苷类似物(5a)的1-乙酸基可根据已知的和文献中可查到的标准方法和技术除去，生成相应的不饱和碳环核苷类似物(6a)。例如，1-乙酸基可被碱，如碳酸钾处理除去。
在步骤d中，不饱和碳环核苷类似物(6a)按已知的和文献中可查到的标准方法进行氢化。生成相应的碳环核苷类似物(Ⅰd)。
下面的实例介绍了合成路线D描述的典型合成法。这一实例仅是为了便于理解而做的说明，并未打算从任何方面限制本发明的范围。
实例4(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烷盐酸盐步骤a(1S，4R)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-乙酸基-2-环戊烯溶解(1R，4S)-顺式-1-乙酸基-2-环戊烯-4-醇(1.42克，10.0毫摩尔)于40毫升二氯甲烷。向此溶液中加入甲磺酰氯(3.72克，30.0毫摩尔)和三乙胺(3.63克，30.0毫摩尔)并搅拌4.5小时。用水、盐水提取混合物。用硫酸钠干燥有机层，浓缩溶液，生成黄色油状标题化合物(2.09克，产率95%)，产物立即用于下一反应。
步骤b(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-乙酸基-4-环戊烯在60℃搅拌溶于50毫升二甲基甲酰胺的腺嘌呤(4.1克，30.0毫摩尔)混悬液，加入氢化钠(60%，1.0克，30.0毫摩尔)，60℃搅拌3小时后，向溶液中加入(1S，4R)-顺式-1-甲磺酰氧基-4-乙酸基-2-环戊烯(2.09克，9.5毫摩尔)并在60℃继续搅拌16小时。真空除去二甲基甲酰胺，在搅拌着的二氯甲烷水溶液中浸溶残余物，除去有机层，用盐水提取，用硫酸钠干燥有机层。真空除去溶剂，残余物溶解于二氯甲烷中。溶液过硅胶柱(40克)，用氯仿/甲醇(9∶1)洗脱，生成标题化合物(1.07克)(产率33%)。
步骤c(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯溶解(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-乙酸基-4-环戊烯(0.5克，1.7毫摩尔)于25毫升甲醇中，然后加3毫升水和600毫克碳酸钾。室温下搅拌此混合液1小时。然后真空浓缩混合液至干。在乙醇中浸溶固体以沉淀碳酸钾，过滤混合液。加等量的二氯甲烷，将混合液过硅胶柱(50克，70-230目)，然后用二氯甲烷/甲醇(4∶1)洗脱。收集各部分(40毫升)，浓缩含纯物质的部分，干燥后生成标题化合物(257毫克，产率62%)。
步骤d(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烷盐酸盐溶解(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯(50毫克，0.2毫摩尔)于50毫升乙醇和15毫升蒸馏水中，再加50毫克氧化铂(Ⅳ)并在氢气(30磅/平方英寸)存在下氢化3.5小时。经硅藻土板过滤混合液，将滤液浓缩至干，生成标题化合物(41毫克，产率82%)。365＝-24℃(甲醇，0.29毫克/毫升)H1-NMR(DMSO/TMS)δ＝8.7(s，1H)，8.5(s，1H)，5.02(m，1H)，4.3(m，1H)，2.4-1.8(m，6H)。
本发明进一步提供了一种实现免疫抑制的方法，更确切地说，一种抑制获得性免疫，在患者需要时，可给予有效免疫抑制量的式(1)化合物。
这里使用的术语“患者”指患病的温血动物，如哺乳动物，如患自身免疫病或“移植物抗宿主”病，或被移植的同种异体组织或器官有被排斥的危险，应明确的是，人，大鼠和小鼠都包括在“患者”的范畴。
将式(1)化合物给予患者，在其体内引起免疫抑制作用，更确切地说，将式(1)化合物给患者后引起患者体内获得性免疫的抑制。换句话说，通过用式(1)化合物治疗患者，与未治疗患者相比，患者的获得性免疫反应被阻止或抑制了。
当患者患有自身免疫病，“移植物抗宿主”病或为了防止已移植的同种异体组织或器官被排斥时，需要用免疫抑制剂(如式(1)化合物)治疗。术语“自身免疫病”是指其中免疫反应在患者体内是针对他们自身成份的，引起不希望的和沉淀是极度衰弱性疾病的病症和状态。
患自身免疫病的患者，如患有类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病，某些溶血性贫血，风湿热，甲状腺炎，溃病性结肠炎，重症肌无力，肾小球肾炎，变态反应性脑脊髓炎，某些病毒性肝炎后的持续性神经和肝脏破坏，多发性硬化和系统性红斑狼疮均需要用免疫抑制剂如式(1)化合物治疗。类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病和多发性硬化的特征在于是细胞介导自身免疫反应的结果而且可能是由于T细胞的作用。重症肌无力和系统性红斑狼疮的特征在于是体液自身免疫反应的结果。因此，对患上述疾病的患者给予式(1)化合物治疗，将特别有助于防止疾病的进一步加重或恶化。对自身免疫病早期患者的治疗，如对类风湿关节炎，胰岛素依赖性糖尿病，多发性硬化，重症肌无力或系统性红斑狼疮的治疗在防止疾病进一步恶化为更严重的状态特别有效。例如，胰岛素依赖性糖尿病是一种自身免疫病，认为是由针对分泌胰岛素的胰岛的β细胞的自身免疫反应所引起。在胰岛β细胞完全破坏之前对患胰岛素依赖性糖尿病早期患者的治疗可预防和阻止分泌β-细胞的剩余胰岛的进一步破坏，因而可特别有效地防止疾病的进展。应明确的是，患其它自身免疫病早期患者的治疗也将特别有助于预防或阻止疾病状态进一步自然发展成更严重的状态。
已接受或即将接受同种异体组织或器官移植物，如接受同种异体肾，肝，心，皮肤，骨髓的患者，也是需要免疫抑制剂如式(1)化合物进行预防性治疗的患者。免疫抑制剂将防止受者的获得性免疫反应排斥供者的同种异体组织或器官。同样患“移植物抗宿主”病的患者也需要用免疫抑制剂如式(1)化合物进行治疗。免疫抑制剂将防止被移植的组织或器官的获得性免疫反应排斥受者的同种异体组织或器官。
基于标准的临床和实验室试验和技术，一名主治医师，作为在医学领域有技术专长的人，能很容易地确定患者是否要用象式(1)化合物那样的免疫抑制剂治疗。
式(1)化合物的有效免疫抑制剂量是在单独或多次给药时，能够导致一种免疫抑制作用，特别是获得性免疫反应抑制作用的药物剂量。免疫抑制作用指一种减慢、阻断、抑制、防止获得性免疫反应的进一步表达。
式(1)化合物的有效剂量可由主治医师利用已知的技术并观察在类似情况下的结果，很容易地确定。在确定有效剂量时，要考虑许多因素，包括哺乳动物的种类，大小，年龄，健康状况，患何种疾病，疾病的严重程度，患者个体的反应性，使用的特定化合物，给药的方式，所用制剂的生物利用率特点，选择的用药方案，并用的药物及其它情况，但不限于此。
式(1)化合物的有效免疫抑制剂量预计在每天每公斤体重0.1毫克至500毫克之间。最好能选在每天每公斤体重1毫克至50毫克之间。
在对患者进行治疗时，式(1)化合物可以在保持其生物利用率达有效量水平以上为前提采用任何药物剂型和给药方式。如给药可口服或非肠胃途径。例如，式(1)化合物可口服给药，可皮下，肌肉，静脉，皮面，鼻腔吸入，直肠等途径给药。口服给药一般是优选的。制药学领域的技术人员可根据所选化合物的具体特性，所治疗疾病的情况，疾病的分期和其它有关因素，选择适当的药物剂型和给药途径。
化合物可单独给药，或以与药学上可接受的载体或赋形剂结合的药物组合物的形式给药。赋形剂的比例和性质由所选化合物的溶解性和化学特性，给药途径的选择和标准药物的应用情况来确定。本发明化合物本身是有效成份，为了稳定，便于结晶，增加溶解性等目的，可以药物学上可接受的酸加成盐的形式配制和给药。
在另一实施方案中，本发明提供了含式(1)化合物的组合物，其以混合物或与一种或多种惰性载体，相结合的形式存在。这些组合物是有用的，例如，作为测定标准品，作为大批量生产的便利方法，或作为药物组合物。式(1)化合物可测定的量可通过本领域技术人员所熟知和掌握的标准检测方法和技术测定。式(1)化合物的可测定量一般约为组合物重量的0.001%到约75%。惰性载体可为任何不会降解或不会与式(1)化合物发生共价反应的物质。合适的惰性载体实例为水，水缓冲液如那些在高效液相色谱分析中通常使用的缓冲液，有机溶剂如乙腈，乙酸乙酯，己烷等等，和药物学上可接受的载体或赋形剂。
更确切地说，本发明提供了含有效免疫抑制量的式(1)化合物的药物组合物，其以混合物或与一种或多种药物学上可接受的载体或赋形剂相结合的形式存在。
药物组合物是按照药学领域已知的方法配制的。载体或赋形剂可以是可作为活性成份的媒介物或介质的固体，半固体或液体物质。合适的载体或赋形剂是本领域众所周知的。药物组合物应适合于口服和肠胃外使用，包括局部应用，可以采用片剂，胶囊，栓剂，溶液，混悬液等形式给药。
本发明化合物可口服给药，例如与惰性稀释剂或与可食用的载体一起，可将它们装进明胶胶囊或压成药片。为了口服给药，化合物中可掺入赋形剂。使用的剂型有片剂，锭剂，胶囊，酏剂，混悬剂，糖浆剂，糯米纸囊剂，口香糖剂等等。这些制剂应含至少4%的本发明化合物，即活性成份，但可根据特定的剂型改变含量，比较容易达到的是占单位重量的4%-70%之间，化合物在组合物中所含的量是以能获得适当剂量为准的。根据本发明优先选择的组合物和制剂被制备，以便每一口服剂量单位剂型含本发明化合物5.0至300毫克。
片剂，丸剂，胶囊剂，锭剂等也可含一或多种下面的佐剂∶粘合剂如微晶纤维素，黄蓍树胶或明胶，赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如藻酸，Primogel，玉米淀粉等，润滑剂如硬脂酸镁或Sterotex，滑移剂如胶态二氧化硅，甜味剂如蔗糖或糖精等可以加入，或增香剂如薄荷，水杨酸甲酯，或橙香剂。当药物剂型为胶囊时，除含上述类型物质之外它还可含一种液体载体，如聚乙二醇或脂肪油。其它药物剂型可含有其它各种物质，用以修饰药物单位的物理形式，如作为包衣。因此，片剂或丸剂可用糖，虫胶，或其它肠包衣剂包被。糖浆剂除可含本发明化合物外，可含蔗糖作为甜味剂和含某种防腐剂，染料和着色剂，香味剂。制备这些不同的组合物所使用的物质应是药物学上纯的，在使用的量上是非毒性的。
为了肠胃外治疗用药，包括局部给药，可将本发明化合物制成一种溶液或混悬液。这些制剂应含至少0.1%的本发明化合物，但含量可在它们重量的1%至约50%之间变化。本发明化合物在这种药物组合物中的量是以获得适当剂型为准。根据本发明优选的药物组合物和制剂被制备，以便肠胃外剂型单位剂量含5.0至100毫克本发明化合物。
溶液或悬浮液还包括一种或多种下面列出的佐剂无菌稀释剂如注射用水，生理盐水，固定油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶剂，抗菌剂如苄醇或羟苯甲酸甲酯，抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠，螯合剂如乙二胺四乙酸，缓冲液如乙酸盐，柠檬酸盐或磷酸盐，和调节肌肉的正常张力剂如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可封入安瓿，一次性注射器或多倍剂量的玻璃或塑料小瓶。
结构上相关的化合物的任何基团均具有特定的一般性用途，在其最终应用中，优选的某些基团和构型如下Y3是氮的式(1)化合物。Y7是氮的式(1)化合物。Y8是CH基团的式(1)化合物。Y9是氮的式(1)化合物。此外，还有Q是氨基而Z是氢的式(1)化合物。
下面的式(1)化合物是特别优选的(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐;
(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷盐酸盐。
下面的研究说明式(1)化合物的用途。这些研究仅为易于理解而做说明，并未打算从任何方面限制本发明的范围。这里使用的术语具有所示的意义“μM”代表微摩尔浓度，“Units”代表国际上接受的蛋白质测量单位，“S.D”代表标准差，“nmol”代表毫微摩尔，“ng”代表毫微克。
分离大鼠腹腔巨噬细胞在细胞培养基中培养，方法与Edwards所述基本相同[Science239，769(1988)]，巨噬细胞与有调理作用的酵母多糖(3毫克/毫升)(具有刺激微粒的作用)和重组大鼠γ干扰素(rrIFN-r)(1000Units/ml)(具有活化细胞的淋巴因子作用)一起，在各种浓度的(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷(0至1000μM)存在下温育。用超氧离子(O-2)测定法，测定巨噬细胞激活的程度，方法与Edwards等描述的一致[Science239，769(1988)]。研究结果表明(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基-4-环戊烯能有效地抑制大鼠巨噬细胞在体外的活化(IC50为2.5μM)。
对以大鼠炎症气囊模型法获得的大鼠多形核白细胞用25ng/囊重组人白细胞介素-1(γHuIL-1)激发，基本上根据Esser等的方法[Internat.J.Tissue Reactions Ⅺ，291(1989)]。多形核白细胞与作为刺激液的佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(200ng/ml)和作为刺激性淋巴因子的γγIFN-γ(1000 Units/ml)或作为刺激性细胞因子的γHuIL-1(500Units/ml)一起，在各种浓度的(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷(0至1000μM)的存在下温育。通过超氧离子(O-2)测定法测定巨噬细胞的激活程度，方法如Edwards等所述[Science239，769(1988)]。以上研究结果表明(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷可有效地抑制γγ-IFN-1对大鼠多形核白细胞在体外的激活(IC50为0.001μM)，并有效地抑制γHuIL-1对大鼠多形核白细胞在体外的激活(IC50为0.001μM)。
权利要求
1.制备下式化合物或其药物学上可接受的盐的方法
式中，在环戊烷环上的羟基取代基是与双环取代基相关的顺式构型，Y3，Y7，Y8和Y9各自独立地为氮或CH基团，Q是氨基，卤素或氢，Z是氢，卤素或氨基，该方法包括对相应的环戊烯基衍生物进行催化氢化。
2.权利要求1所述的方法，其中催化氢化是在氧化铂存在下进行的。
3.权利要求1所述的方法，其中所生产的化合物为(1S，3R)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷。
4.权利要求1所述的方法，其中所生产的化合物为(1R，3S)-顺式-1-(9-腺嘌呤基)-3-羟基环戊烷。
5.对于需要的患者使用有效的免疫抑制剂量的权利要求1化合物实现免疫抑制的方法。
6.对于需要的患者使用有效的免疫抑制剂量的权利要求1化合物实现获得性免疫抑制的方法。
7.根据权利要求6的方法，其中患者需要对同种异体移植物排斥反应进行治疗。
8.根据权利要求6的方法，其中患者需要对自身免疫病进行治疗。
9.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为胰岛素依赖性糖尿病。
10.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为多发性硬化。
11.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为类风湿关节炎。
12.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为重症肌无力。
13.根据权利要求8的方法，其中自身免疫病为系统性红斑狼疮。
14.一种含有可检测剂量的权利要求1化合物的药物组合物，其可为混合物形式，或是与惰性载体相结合的其他形式。
15.一种含有有效免疫剂量的权利要求1化合物的药物组合物，其可为混合物形式，或是与一种或多种药物学上可接受的载体或赋形剂相结合的其它形式。
全文摘要
本发明涉及式(1)的新的碳环腺嘌呤核苷化合物，或其药物学上可接受的盐以及它们作为免疫抑制剂的使用。式中，在环戊烷环上的羟基取代基是与双环取代基相关的顺式构型，Y
文档编号C07D473/34GK1059909SQ9110893
公开日1992年4月1日 申请日期1991年9月14日 优先权日1990年9月14日
发明者戴为·R·伯施盯, 卡尔·K·艾底华斯, 罗那德·E·艾瑟, 都格啦斯·L·科尔 申请人:马理昂默里尔多公司
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