用于检测和/或鉴定表面上存在的至少一种靶微生物的方法与流程

[0001]
本发明涉及微生物监测领域。更具体地，本发明涉及用于检测和/或鉴定表面上存在的至少一种靶微生物的方法。


背景技术：

[0002]
微生物监测特别是工业和医院设置中的关键因素。在制药、化妆品和农业企业行业中，诊断学使得能够遵照国际标准和指导来生产安全产品。这些产品的制造需要非常严格的控制，以确保其微生物质量及其组成。这些微生物监测测试在从原料到成品的生产链自始至终进行，并且用于确认例如致病菌的不存在、无菌性(必须不存在微生物)、或共生菌(正常存在于人中，且通常为低浓度)不增殖超过一定阈值。生产环境(空气、水、表面)也通过诊断测试进行定期监测。法规要求某些产品例如注射药在其上市时必须是无菌的。这种无菌性的确保通过对原料、处于制造中的产品、生产环境和成品的测试来提供。这些控制措施的严苛是质量的保证：它确保了消费者的安全。
[0003]
已开发了用于监测空气、液体和表面的不同系统或装置。几家公司已开发了培养基，其确保直接从受污染表面收集的微生物生长，并且允许直接读取平板上的菌落数目。例如，可以提到的是类型的琼脂包被的膜或平板。在取下平板盖子后，通过对平板的底部施加手动压力不确定的时间段，使得琼脂培养基与待取样的表面尽可能最紧密地接触，来收集样品。称为培养基印迹(culture media imprinting)的这种方法的主要缺点在于：将有机材料引入敏感区域例如受控大气区域内，其可能是污染源。还可以观察到结果可重复性的缺乏，这主要是由于琼脂培养基和待测试表面之间的接触中的变动，所述变动是由于施加于平板的手动力中的差异，所述手动力从一个操作者到另一个、或者甚至由同一操作者在不同的取样操作过程中可能相当大地不同。
[0004]
用于监测表面的另一种方法是所谓的擦拭法，其基于通过摩擦表面的微生物脱离。这个动作可以用干的或湿的擦拭物或棉签来进行。湿擦拭是比干擦拭更有效的取样方法，湿擦拭的优越性通过由于水的存在而改善的基底/拭子接触来解释。然而，湿拭具有效率低的缺点，因为它需要通过拭子使细菌脱离基底，然后使细菌从拭子释放到液体内。就可重复性而言，使拭子标准化相当困难，所述拭子的制备将取决于处理者。
[0005]
不同取样方法的稳固性对微生物监测的灵敏度和可重复性具有明确影响。因此，实际需要提供用于收集样品的新方法。


技术实现要素：

[0006]
本发明预期解决上文提到的技术问题。
[0007]
因此，本发明的目的是提供用于在表面上对微生物进行取样的方法，用于其检测的目的，而无需将营养培养基带到取样场所。在具有受控大气的区域中，这个目的是更加有利的。
[0008]
本发明的另一个目的是提供具有良好回收率的微生物取样方法。
[0009]
本发明的另一个目的是提供质量控制监测所需的可重复的取样方法。
[0010]
这些目的尤其通过本发明来实现，所述发明涉及用于检测和/或鉴定表面上存在的至少一种靶微生物的方法，其包括下述步骤：
[0011]
a)在所述表面上沉积包含成膜水溶性合成聚合物的组合物，所述组合物为液体和/或粘稠组合物或泡沫组合物；
[0012]
b)使组合物干燥，以允许聚合物膜形成，
[0013]
c)从表面取下包含所述至少一种靶微生物的所述聚合物膜，
[0014]
d)用水性稀释剂溶解聚合物膜，以形成包含所述至少一种微生物的溶液，
[0015]
e)使用至少一种检测手段，来检测和/或鉴定溶液的全部或部分中的所述至少一种靶微生物。
[0016]
在一个优选实施方案中，水性稀释剂是培养基。
[0017]
优选地，水性稀释剂是半固体培养基，聚合物膜通过与半固体培养基接触而溶解。实际上，半固体培养基由大量的游离水组成，允许聚合物膜在接触时溶解。因此，形成的溶液是包含溶解的聚合物膜的半固体培养基。
[0018]
当所述组合物为液体和/或粘稠的时，本发明涉及用于检测和/或鉴定表面上存在的至少一种靶微生物的方法，其包括下述步骤：
[0019]
a)在所述表面上沉积包含成膜水溶性合成聚合物的液体和/或粘稠组合物，
[0020]
b)使所述组合物干燥，以允许聚合物膜形成，
[0021]
c)从表面取下包含所述至少一种靶微生物的所述聚合物膜，
[0022]
d)用水性稀释剂溶解聚合物膜，以形成包含所述至少一种微生物的溶液，
[0023]
e)使用至少一种检测手段，来检测和/或鉴定溶液的全部或部分中的所述至少一种靶微生物。
[0024]
因此，液体或粘稠组合物具有受控的质地，所述质地是足够液体和/或粘稠的，以施加于待测试的区域并形成均匀的膜，但还是足够浓稠的，以在测试区域上保留干燥时间并形成具有合适厚度的膜。
[0025]
它的液体和/或粘稠质地也允许其完全遵循它施加于其上的表面，无论该表面是光滑的还是粗糙的。公认的是某些表面，尤其是具有粗糙度的表面的微生物测试是特别困难的。
[0026]
在本申请的上下文中，液体和/或粘稠溶液意指在其自身重量下，在15-25℃的温度下流动的溶液。
[0027]
在一个优选实施方案中，该组合物是泡沫组合物。将聚合物溶液与co2混合以获得泡沫。泡沫的施加通过将气泡引入液体聚合物化合物内而生成物理效应。与以液体形式的聚合物施加相比，这允许惰性表面上的微生物的更好回收。这在粗糙表面如不锈钢表面上是特别有利的。取决于沉积的量，泡沫在沉积后几分钟内非常迅速地返回到液体和/或粘稠形式。
[0028]
在本发明的上下文中使用的聚合物具有允许获得所需特性的许多特点。根据本发明，“成膜聚合物”意指依靠自己或在辅助成膜剂的存在下，能够形成粘附至基底的连续膜的聚合物。形成的膜在惰性表面如玻璃、塑料、结晶聚苯乙烯、不锈钢上具有良好的粘附特性，并且具有良好的拉伸强度特性，以便从表面取下并转运。
[0029]
根据本发明的聚合物的作用是收集微生物用于检测目的。这种聚合物是生物相容的，对于微生物很少毒性或没有毒性。
[0030]
在从表面取下后，将聚合物膜溶解于水性稀释剂中，并且形成待分析的溶液。因此，根据本发明，该聚合物是水溶性聚合物。水溶性聚合物是众所周知的，并且通过综述“water soluble polymers for pharmaceutical application，kadajji and betageri，polymers，dec 2011”进行描述。
[0031]
它们在水相中的溶解度特别取决于重复的单体单元的化学性质和聚合物的重量。当然，它可以与它溶解于其中的溶液的ph或离子强度有关。
[0032]
根据本发明，该聚合物是合成均聚物或共聚物。优选地，根据本发明的水溶性合成聚合物选自聚乙烯、乙烯聚合物、聚丙烯酸、聚噁唑啉、其衍生物或这些聚合物的混合物。
[0033]
更优选地，根据本发明的水溶性聚合物选自聚环氧乙烷(peo)、聚乙二醇(peg)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙烯醇(pva或pvoh)、聚丙烯酸(paa)、聚丙烯酰胺、聚(2-羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(2-乙基-2-噁唑啉)。
[0034]
优选地，根据本发明的聚合物选自下述聚合物：
[0035]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为100 000至8 000 000g/mol的聚环氧乙烷
[0036]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为600至20 000g/mol的聚乙二醇
[0037]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为10 000至1 300 000g/mol的聚乙烯吡咯烷酮
[0038]-在2至60％(m/v)，优选5至50％(m/v)，甚至更优选15至35％(m/v)的浓度下，平均分子量为9 000至200 000g/mol的聚乙烯醇
[0039]-在1至2％(m/v)的浓度下，平均分子量为450 000至4 000 000g/mol的聚丙烯酸(paa)
[0040]-在2至20％(m/v)的浓度下，平均分子量为40 000至150 000g/mol的聚丙烯酰胺
[0041]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为30 000至50 000g/mol的聚(2-羟丙基甲基丙烯酰胺)
[0042]-在2至10％(m/v)的浓度下，平均分子量为5 000g/mol的聚(2-乙基-2-噁唑啉)
[0043]
该组合物根据本领域技术人员已知的方法进行制备。将聚合物溶解于稀释剂，通常为水中，然后通过传统方法例如过滤、高压灭菌、气体、照射，对组合物进行灭菌。
[0044]
优选地，根据本发明的组合物包含表面活性剂。在本发明的上下文中使用的表面活性剂具有允许获得所需特性的许多特点。例如，表面活性剂可溶于聚合物溶液中，并且改善膜从表面如塑料、结晶聚苯乙烯、玻璃、316l不锈钢的剥离特性。有利地，表面活性剂对聚合物膜的形成，特别是对干燥时间具有较弱的作用。表面活性剂还可以中和防腐剂对表面上存在的微生物的抑制作用。优选地，表面活性剂选自阴离子表面活性剂例如十二烷基硫酸钠、胆酸和二环己基磺基琥珀酸钠，阳离子表面活性剂例如苯扎氯铵，非离子表面活性剂例如二甘醇、聚山梨醇酯80和皂苷，两性离子表面活性剂例如3-(n,n-二甲基十四烷基铵)丙磺酸盐和3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵]-1-丙磺酸盐水合物。
[0045]
优选地，表面活性剂是聚山梨醇酯80。有利地，聚山梨醇酯80具有等于或小于5％，优选为0.5至1％的浓度。
[0046]
该组合物还可以包含其它添加剂，例如中和剂、还原剂、抗氧化剂，以便改善应激微生物的回收。也可以加入着色剂，以便更好地显现聚合物膜。
[0047]
为了改善组合物的成膜特性，可以有利地加入辅助成膜剂。此类辅助成膜剂可以选自本领域技术人员已知为能够达到所需功能的所有化合物，并且特别地选自成膜聚合物的增塑剂和聚结剂。
[0048]
该组合物伴随或不伴随施加器而沉积且铺展。例如，它可以通过移液进行沉积，然后使用无菌环进行铺展。当它是泡沫组合物时，将聚合物溶液置于含有气体(例如，co2、空气、氮)的装置中，以便通过在沉积过程中的混合而产生泡沫组合物。泡沫组合物在沉积后非常迅速地恢复为液体和/或粘稠组合物。
[0049]
然后使根据本发明的组合物干燥，以允许聚合物膜形成。所形成的膜的厚度例如大于40μm，优选为100μm至500μm，更优选为100至300μm。
[0050]
这个干燥阶段可以是物理和/或化学干燥，任选在催化剂的存在下。它可以在室温下、在户外或在气流下进行。取决于温度、空气湿度、沉积在表面上的组合物的尺度(大小、厚度)，使所述组合物最少干燥直至形成聚合物膜。干燥允许在组合物内形成网络，所述网络将捕获表面上存在的微生物。无论组合物是以泡沫形式还是以液体和/或粘稠形式沉积，干燥时间将是基本上相同的。
[0051]
根据本发明的聚合物膜是弱粘附的，允许其从表面取下而无破裂的风险，并且使所述表面相对不含聚合物膜残留物。一旦聚合物膜从表面取下，它就可以容易地从取样区域移至分析区域，而不破裂或撕裂。优选地，如通过hr2流变仪(ta instrument)测量的，聚合物膜具有大于100 000pa的弹性模量(g')。
[0052]
有利地，聚合物膜包含表面活性剂，其降低了将膜从其所粘附的基底取下所需的力。
[0053]
根据本发明，然后将其中捕获了微生物的聚合物膜溶解于水性稀释剂中，以形成待分析的溶液。因此，根据本发明的方法具有免去使微生物脱离样品基底的步骤，例如免去使微生物从拭子解吸的步骤的优点。因此，特别地优化了回收率，即所收集的微生物数量与表面上存在的数量之间的比率。通过使溶液和稀释剂振荡可以加速溶解步骤。
[0054]
本发明的另一个优点是将溶液直接用于检测微生物。在一个有利的实施方案中，水性稀释剂是当聚合物膜与其接触时，将溶解聚合物膜的培养基。因此，在这个优选实施方案中，溶液是包含待检测的微生物的培养基。
[0055]“培养基”意指包含微生物，且特别是所寻找的微生物的存活和/或生长所需的所有元素的培养基(例如缓冲蛋白胨水)。培养基可以含有可能的添加剂，例如：蛋白胨、一种或多种生长因子、碳水化合物、一种或多种选择剂、缓冲剂、一种或多种胶凝剂、一种或多种维生素等。这种培养基可以是即用型，即准备在管中、在瓶中或在培养皿上接种的液体或胶凝形式。表达“培养基”显然涵盖了浓缩培养基和肉汤。根据待检测的微生物的需求，可以使用不同的培养基。
[0056]
根据本发明的方法可以包括在检测步骤之前或在检测步骤期间，在足以允许所述至少一种微生物生长的温度和时间段下温育溶液的步骤。
[0057]
温育一般在范围为20至52℃的温度下进行预定的时间段，例如6小时至28天。
[0058]“检测手段”指使得能够直接或间接地检测和/或测量生物样品的一个或多个生物
学和/或物理化学参数的检测手段。
[0059]
微生物学中使用的经典检测手段由接种的固体、液体或半固体培养基组成。因此，在一个优选实施方案中，检测手段是聚合物膜已溶解于其中的培养基。
[0060]
因此，在一个优选实施方案中，该方法包括下述步骤：
[0061]
a)在所述表面上沉积包含成膜水溶性合成聚合物的液体和/或粘稠组合物，
[0062]
b)使所述组合物干燥，以允许聚合物膜形成，
[0063]
c)从表面取下包含所述至少一种靶微生物的所述聚合物膜，
[0064]
d)用培养基溶解聚合物膜，以形成包含所述至少一种微生物的溶液，
[0065]
e)使用至少一种检测手段，来检测和/或鉴定溶液的全部或部分中的所述至少一种靶微生物，所述检测手段是所述溶液。
[0066]
在该实施方案中，将水溶性聚合物膜溶解于包含液体或半固体培养基的水性稀释剂中。在其中将膜沉积在半固体培养基上的情况下，琼脂中含有的水使膜溶解，并且它从培养基的表面完全消失。然后，这种接种的培养基构成根据本发明的溶液。不需要回收微生物的过滤或分离步骤。培养基然后在通常的培养条件下温育。因此，检测和/或鉴定步骤直接从溶液中进行。在温育后，可以容易地计数分离的菌落，以便给出表面监测的定量结果。在这个特定实施方案中，培养基发挥水性稀释剂和检测手段的双重作用。
[0067]
因此，本发明涉及包括下述步骤的检测和/或鉴定方法：
[0068]
a)在所述表面上沉积包含成膜水溶性合成聚合物的液体和/或粘稠组合物，
[0069]
b)使所述组合物干燥，以允许聚合物膜形成，
[0070]
c)从表面取下包含所述至少一种靶微生物的所述聚合物膜，
[0071]
d)通过与培养基接触来溶解聚合物膜，
[0072]
e)检测和/或鉴定所述培养基中的所述至少一种靶微生物。
[0073]
优选地，培养基是半固体的。
[0074]
在另一个优选实施方案中，当组合物是泡沫组合物时，该方法包括下述步骤：
[0075]
a)在所述表面上沉积包含成膜水溶性合成聚合物的泡沫组合物，
[0076]
b)使所述组合物干燥，以允许聚合物膜形成，
[0077]
c)从表面取下包含所述至少一种靶微生物的所述聚合物膜，
[0078]
d)通过与培养基接触来溶解聚合物膜，
[0079]
e)检测和/或鉴定所述培养基中的所述至少一种靶微生物。
[0080]
优选地，培养基是半固体的。
[0081]
在另一个实施方案中，检测和/或鉴定步骤由通过比色法，例如技术的动态微生物检测方法组成。培养基中存在的微生物在其生长期过程中产生co2。产生的co2诱导培养基的ph中的下降。这种ph变化诱导置于每个瓶的底部处的传感器的比色转变，所述传感器包括浸有液体乳剂检测器(les)的硅酮。led在传感器上发出光束。光电二极管收集以反射率单位形式的由传感器反射的光强度。在一段时间内分析反射率单位。将聚合物膜溶解于生理溶液中，然后注入瓶(biom
é
rieux)内，用于自动动态读取。
[0082]
在另一个实施方案中，检测和/或鉴定步骤由生物化学比色法组成，所述生物化学比色法在专门设计并命名为的卡上微型化。将聚合物膜置于溶血管中，然后溶解。将管装载有卡。该系统管理每张卡的温育和读取，而无需任何其它干预。结果在装载
后2至18个小时内获得。
[0083]
在另一个实施方案中，检测和/或鉴定步骤由通过流式细胞术或固相细胞术的方法组成。这种方法由通过光学检测的个别细胞分析组成。
[0084]
在另一个实施方案中，检测和/或鉴定步骤由微生物计数方法组成，所述微生物计数方法基于最大可能数(mpn)技术如技术。这种方法由初始样品的系列稀释的分析组成。tempo技术在专门设计的卡上微型化这一测试。使聚合物膜与包含在瓶(biom
é
rieux)中的脱水培养基接触。在再水合和完全溶解后，将卡填充，然后在通过荧光自动读取之前进行温育。
[0085]
在另一个实施方案中，检测和/或鉴定步骤由用于通过pcr检测微生物的方法组成。在技术中，使聚合物膜与富集培养基接触。在富集后，使样品裂解并与pcr试剂接触。将平板置于仪器中，用于经由pcr技术检测。另一种适用的分子生物学技术可以是技术。
[0086]
在另一个实施方案中，免疫测定构成了用于检测测试的另一种技术。它们利用了所寻找的微生物的免疫原性特征。例如，可以提到的是检测手段。将聚合物膜沉积在富集培养基管中并温育。在富集后，将样品置于测试条(biom
é
rieux)中。
附图说明
[0087]
图1是曲线图，其在纵坐标上表示根据干燥时间(以小时计)，在干燥过程中液体和/或粘稠组合物的厚度(以μm计)中的减少。
[0088]
图2是纵坐标图，其表示根据干燥时间(以小时计)，以帕斯卡表示的液体和/或粘稠组合物的损耗模量(g”)和弹性模量(g')。
[0089]
图3是曲线图，其在纵坐标上表示根据与以％(m/v)表示的pvoh聚合物浓度，以mpa/秒表示的液体和/或粘稠组合物的粘度。
具体实施方式
[0090]
下述实施例允许本发明得到更好地理解。然而，这些实施例仅以举例说明的方式给出，并且在任何情况下均不应视为以任何方式限制所述发明的范围。
[0091]
实施例1a：液体和/或粘稠聚合物组合物的制备
[0092]
使用不同浓度的水溶性聚合物：2至50％m/v。使用不同浓度的表面活性剂：0至5％v/v或m/v。
[0093]
1)将水溶性聚合物在玻璃瓶中称重，并且用软化水稀释。
[0094]
2)将整体振荡并加热，以便使聚合物完全溶解于溶液中。
[0095]
3)如果存在表面活性剂，则通过移液(如果是液体)或称重(如果是固体)，将其加入溶液中。
[0096]
4)将组合物在液体循环中高压灭菌，伴随在120℃下的平台温度16分钟。
[0097]
5)将组合物贮存于室温下。
[0098]
实施例1b：泡沫聚合物组合物的制备
[0099]
泡沫组合物的制备仅通过其中添加气体的另外步骤(步骤6)而不同。
[0100]
1)将水溶性聚合物在玻璃瓶中称重，并且用软化水稀释。
[0101]
2)将整体振荡并加热，以便使聚合物完全溶解于溶液中。
[0102]
3)如果存在表面活性剂，则通过移液(如果是液体)或称重(如果是固体)，将其加入溶液中。
[0103]
4)将溶液在液体循环中高压灭菌，伴随在120℃下的平台温度16分钟。
[0104]
5)将组合物贮存于室温下。
[0105]
6)将组合物加入含有co2的装置中，以便通过在沉积过程中的混合来产生泡沫组合物。
[0106]
实施例2：水溶性聚合物家族的测试
[0107]
水溶性聚合物的不同家族就下述特性进行测试：
[0108]-聚合物在水中溶解并获得均相溶液
[0109]-通过干燥形成膜的能力
[0110]-膜从表面(结晶聚苯乙烯塑料、玻璃、316l不锈钢)的剥离
[0111]-膜与水性稀释剂接触时的水溶性
[0112]-脱离然后检测至少一种微生物
[0113]
聚合物根据下述方案进行制备：
[0114]
1)将聚合物在玻璃瓶中称重，并且用软化水稀释。
[0115]
2)将整体振荡并加热，以便使聚合物完全溶解于溶液中。
[0116]
3)通过移液以0.5％v/v的浓度将表面活性剂加入溶液中。
[0117]
4)将组合物贮存于室温下。
[0118]
已证实上述所有特性的水溶性合成聚合物优选为：
[0119]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为100 000至8 000 000g/mol的聚(环氧乙烷)(peo)(sigma aldrich；产品：181986、372781、372838)
[0120]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为600至20 000g/mol的聚(乙二醇)(peg)
[0121]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为10 000至1 300 000g/mol的聚(乙烯吡咯烷酮)(pvp)(sigma aldrich；产品：pvp10、pvp360、437190)
[0122]-在2至50％(m/v)的浓度下，平均分子量为9 000至200 000g/mol的聚(乙烯醇)(pva或pvoh)(sigma aldrich；产品：360627；merck millipore；产品：8.43866.1000、8.43867.1000)
[0123]-在1至2％(m/v)的浓度下，平均分子量为450 000至4 000 000g/mol的聚(丙烯酸)(paa)(sigma aldrich；产品：181285、306231)
[0124]-在2至20％(m/v)的浓度下，平均分子量为40 000至150 000g/mol的聚(丙烯酰胺)(sigma aldrich；产品：738743、749222)
[0125]-在2至30％(m/v)的浓度下，平均分子量为30 000至50 000g/mol的聚(2-羟丙基甲基丙烯酰胺)(sigma aldrich；产品：804746)
[0126]-在2至10％(m/v)的浓度下，平均分子量为5 000g/mol的聚(2-乙基-2-噁唑啉)(sigma aldrich；产品：773379)
[0127]
实施例3：表面活性剂家族的测试
[0128]
表面活性剂的不同家族就下述特性进行测试：
[0129]-表面活性剂在聚合物溶液中稀释并获得均相溶液
[0130]-对膜的内聚力、膜的水溶性、通过干燥的膜形成具有很少的负面影响或没有负面影响。
[0131]-促进膜从表面(结晶聚苯乙烯塑料、玻璃、316l不锈钢)的剥离
[0132]-脱离然后检测至少1种微生物
[0133]
含有表面活性剂的聚合物溶液根据下述方案进行制备：
[0134]
1)将聚合物在玻璃瓶中称重，并且用软化水稀释。
[0135]
2)将整体振荡并加热，以便使聚合物完全溶解于溶液中。
[0136]
3)将表面活性剂称重(如果为固体形式)或测量(如果为液体形式)，然后以0.5％m/v或0.5％v/v的浓度加入溶液中。
[0137]
4)将组合物贮存于室温下。
[0138]
已证实上述所有特性的表面活性剂家族优选为：
[0139]-阴离子表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠(sigma aldrich，产品l3771)、胆酸(sigma aldrich，产品c1129)和二环己基磺基琥珀酸钠(sigma aldrich，产品86141)
[0140]-阳离子表面活性剂，例如苯扎氯铵(sigma aldrich，产品12060)
[0141]-非离子表面活性剂，例如二甘醇(sigma aldrich，产品93171)、聚山梨醇酯80(acros organics；产品278630000)和皂苷(sigma aldrich，产品84510)
[0142]-两性离子表面活性剂，例如3-(n,n-二甲基十四烷基铵)丙磺酸盐(sigma aldrich，产品40772)和chaps、或3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵]-1-丙磺酸盐水合物(sigma aldrich，产品c9426)
[0143]
实施例4：聚合物干燥速度(基部25cm2)
[0144]
为了评估水溶性聚合物组合物在其下能够从液态和/或粘稠态变成以膜形式的固态的速率，在各种条件下进行测试。
[0145]
聚合物组合物30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0146]
将1ml溶液沉积在5cm
×
5cm(即25cm2)的316l不锈钢正方形表面上。将沉积物置于不同温度下的通风烘箱(30％通风度)或室温下的层流通风橱中。
[0147]
计时整个25cm2聚合物表面达到膜形式所需的时间。
[0148]
结果显示于下表中：
[0149]
干燥条件层流通风橱(rt)22.5℃烘箱32.5℃烘箱37℃烘箱平均干燥速度(以小时计)1.232.501.722.06标准差0.060.450.360.14
[0150]
结论：
[0151]
已显示水溶性聚合物的干燥速度更多取决于通风而不是温度(在通风橱中比在烘箱中通风更好)。
[0152]
干燥速度为1.5小时至3小时，证实了聚合物从粘稠状态变为固态的速度。
[0153]
实施例5：在干燥过程中根据本发明的组合物的流变学分析
[0154]
进行流变学分析，以便在物理上表征在干燥过程中聚合物溶液的行为。
[0155]
10％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80聚合物溶液和10％m/v pvoh+5％v/v聚山
梨醇酯80聚合物溶液根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0156]
流变学研究在dhr-2流变仪(ta instruments)上进行，所述dhr-2流变仪具有用于温度维持的下部平台(peltier)和覆盖有塑料“环状物(doughnut)”的上部平台。这种环状物形的覆盖允许凝胶沿着径向轴的缓慢和均匀的干燥，确保了在干燥过程中均匀的凝胶厚度。
[0157]
将大致1ml聚合物溶液沉积在流变仪的下部平台上，然后将上部平台缓慢降低与溶液接触，以获得500μm的初始间隙。实验在25℃的恒定温度下进行。
[0158]
上部平台的高度由流变仪控制，以便对样品施加恒定的零力，所述零力在凝胶的干燥过程中不变。因此，可以在一段时间内监测样品的高度(间隙)。
[0159]
图1是表示在干燥过程中，样品厚度(10％m/v pvoh+5％v/v聚山梨醇酯80聚合物溶液)中的减少的曲线图。
[0160]
上部平台还施加低振幅剪切振荡(应力振幅：γ＝0.1％和频率＝1hz)，以测量在干燥过程中样品的粘弹性特性。
[0161]
样品的粘弹性特性由粘稠模量或损耗模量(g”)和弹性模量或储能模量(g')反映。当弹性模量变得高于粘稠模量时，能够确定对应于胶凝点的临界pvoh浓度。
[0162]
图2是显示了在10％m/v pvoh+5％v/v聚山梨醇酯80聚合物溶液的干燥过程中，粘稠模量(g”)和弹性模量(g')中的变化的曲线图。
[0163]
在胶凝点，获得的临界pvoh浓度为10至20％m/v。
[0164]
在干燥结束时获得且表征聚合物膜的固体方面的弹性模量大于100 000pa。
[0165]
最终，根据图3中表示的pvoh聚合物浓度，计算包含聚合物的液体和/或粘稠组合物的粘度。这种粘度表征了以液体/粘稠形式的聚合物溶液。
[0166]
实施例6：膜剥离力
[0167]
为了在物理上表征膜对表面的粘附，在不同表面上进行膜剥离力测试。
[0168]
聚合物溶液根据实施例1制造，然后贮存于室温下。将1.5g溶液沉积在测量为6.5cm x 4cm(26cm2)的矩形表面上，然后在室温下干燥24小时。
[0169]
在膜干燥和形成后，在4cm的宽度上，从表面剥离约1cm的膜的初始区段。这个初始区段以约90
°
的角度，以6mm的距离插入system牵引台的夹具内。在50mm的距离上，剥离速度为50mm/分钟。剥离膜所需的平均力由牵引台计算，并且呈现于在下表中。
[0170][0171]
实施例7：膜拉伸力
[0172]
为了表征膜的抗撕裂性，进行拉伸力测试。
[0173]
聚合物溶液根据实施例1制造，然后贮存于室温下。将1g或3g溶液沉积在表面积为23cm2的圆形模板上，然后在室温下干燥24小时。在剥离膜后，在圆心中切割3cm
×
3cm的正
方形，以确保测试样品的均匀厚度。将切割的膜置于距离为10mm的拉力测试机的两个夹具之间。直至膜断裂，拉伸速度为10mm/分钟。选择的值是使膜破裂所需的最大力值，在拉伸曲线上通过明显的拐点(突降)可见。
[0174]
结果呈现于下表中：
[0175][0176]
实施例8：聚合物膜的溶解速率(基部25cm2)
[0177]
为了评估pvoh聚合物膜的水溶性特性，对于不同体积的软化水测量了膜的溶解速率。
[0178]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0179]
将1ml溶液沉积在5cm
×
5cm(即25cm2)的正方形聚苯乙烯晶体塑料表面上。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。
[0180]
在干燥后，使用无菌镊子，从塑料表面取下聚合物膜。然后将膜置于含有100、50、10或5ml软化水的瓶中。瓶通过手振荡或涡旋，以溶解膜。计时膜完全溶解所需的时间。
[0181]
结果显示于下表中：
[0182]
溶解体积(ml)10050105平均溶解速率(分钟)1.761.612.045.36标准差0.360.330.290.70
[0183]
结论：
[0184]
对于100ml至10ml的溶解体积，pvoh膜(1ml)的溶解速率显示为等同的；即，软化水的体积是沉积膜的体积的10至100倍。另一方面，对于5ml的较低溶解体积(即，沉积膜的体积的5倍)，溶解时间增加。
[0185]
最后，不管测试的溶解体积如何，pvoh膜的溶解都非常快，对于非常小的体积甚至小于10分钟。这证实了pvoh膜的极佳水溶性，其在溶解后不留下任何颗粒或残留物。
[0186]
实施例9：使用根据本发明以液体和/或粘稠形式的聚合物的微生物取样的优点
[0187]
将使用根据本发明以液体和/或粘稠形式的聚合物的微生物收集，与使用在与待收集的微生物接触之前首先干燥的聚合物的收集进行比较。
[0188]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0189]
微生物的干沉积物：
[0190]
将已知数量的金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)沉积在玻璃载玻片上
(rq≈0.5nm)。将bioball multishot 550cfu(biom
é
rieux；产品：56019)在500μl再水合流体(biom
é
rieux；产品：56021)中稀释，并且涡旋30秒。将50μl金黄色葡萄球菌溶液(约50cfu[菌落形成单位])沉积在玻璃载玻片上。使沉积物在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥30分钟。
[0191]
平行地，将50μl金黄色葡萄球菌溶液沉积在胰蛋白酶大豆琼脂(tsa)培养皿上(biom
é
rieux；产品：43011和43711)上。使这些对照平板在30-35℃下温育48小时。
[0192]
聚合物沉积：
[0193]
1)液体形式：通过移液将pvoh+聚山梨醇酯80聚合物溶液沉积到金黄色葡萄球菌微生物的干沉积物上，然后在必要时用无菌环铺展，以完全覆盖干沉积物。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。
[0194]
2)固体形式：通过移液将pvoh+聚山梨醇酯80聚合物溶液沉积到玻璃载玻片上，并且用无菌环铺展。使溶液在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。然后将获得的膜以500g的力在金黄色葡萄球菌的干沉积物上施加10秒。
[0195]
聚合物脱离和微生物检测：
[0196]
在干燥或直接施加后，使用无菌镊子，使聚合物膜脱离玻璃载玻片。然后将膜置于tsa培养皿上(biom
é
rieux；产品：43011和43811)。在几分钟后，膜由于培养皿中含有的水而完全溶解。使皿在30-35℃下温育48小时。
[0197]
微生物计数和分析：
[0198]
在温育48小时后，计数在对照皿和含有水溶解的聚合物膜的皿上存在的菌落。聚合物的回收率如下计算：
[0199]
回收率：(100
×
聚合物tsa计数)/(对照tsa计数)
[0200]
结果呈现于下表中：
[0201][0202]
结论：
[0203]
这些结果显示了，与已经以固体形式的膜的直接施加相比，以液体和/或粘稠形式施加水溶性聚合物溶液，然后干燥以获得膜，使得能够回收三倍的微生物。
[0204]
实施例10：使用根据本发明以泡沫形式的聚合物的微生物取样的优点
[0205]
将使用根据本发明以泡沫形式的聚合物的微生物收集，与在不锈钢表面上以液体/粘稠形式沉积的聚合物溶液(rq≈0.4μm)进行比较。
[0206]
微生物的干沉积物：
[0207]
将已知数量的金黄色葡萄球菌沉积在不锈钢表面上。将bioball multishot 550cfu(biom
é
rieux；产品：56019)在500μl再水合流体(biom
é
rieux；产品：56021)中稀释，并且涡旋30秒。将50μl金黄色葡萄球菌溶液(约50cfu[菌落形成单位])沉积在不锈钢表面上。使沉积物在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥30分钟。
[0208]
聚合物沉积：
[0209]
1)液体形式对照：根据实施例1a制造聚合物溶液10％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80。通过移液将这种溶液沉积在金黄色葡萄球菌微生物的干沉积物上，然后在必要时
用无菌环铺展，以便完全覆盖干沉积物。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。
[0210]
2)泡沫形式：根据实施例1b制造聚合物泡沫10％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80。将这种泡沫沉积在金黄色葡萄球菌微生物的干沉积物上。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，泡沫溶液变成液态，然后固化为膜。
[0211]
聚合物脱离和微生物检测：
[0212]
在干燥后，使用无菌镊子，使聚合物膜脱离不锈钢表面。然后将膜置于tsa培养皿上(biom
é
rieux；产品：43011和43811)。在几分钟后，膜由于培养皿中含有的水而完全溶解。使皿在30-35℃下温育48小时。
[0213]
微生物计数和分析：
[0214]
在温育48小时后，计数在表面和含有水溶解的聚合物膜的皿上存在的菌落。聚合物的回收率如下计算：
[0215]
回收率：(100
×
聚合物tsa计数)/(对照tsa计数)
[0216]
结果呈现于下表中：
[0217][0218]
结论：
[0219]
在粗糙表面如不锈钢表面上，与以液体形式的聚合物的施加相比，泡沫聚合物溶液的施加使得能够回收约2.5倍的微生物。
[0220]
实施例11：pvoh浓度对回收率的影响
[0221]
为了研究pvoh聚合物浓度对微生物回收率的影响，测试了一系列溶液：具有0.5％聚山梨醇酯80的10％至50％m/v pvoh。
[0222]
溶液根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0223]
微生物的干沉积物：
[0224]
将已知数量的金黄色葡萄球菌沉积在玻璃载玻片上。将bioball multishot 550cfu(biom
é
rieux；产品：56019)在500μl再水合流体(biom
é
rieux；产品：56021)中稀释，并且涡旋30秒。将50μl金黄色葡萄球菌溶液(约50cfu)沉积在玻璃载玻片上。使沉积物在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥30分钟。
[0225]
平行地，将50μl金黄色葡萄球菌溶液沉积在tsa培养皿上(biom
é
rieux；产品：43011和43711)上。使这些对照皿在30-35℃下温育48小时。
[0226]
聚合物沉积：
[0227]
通过移液将pvoh+聚山梨醇酯80聚合物溶液沉积到金黄色葡萄球菌微生物的干沉积物上，然后在必要时用无菌环铺展，以完全覆盖干沉积物。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。
[0228]
聚合物脱离和微生物检测：
[0229]
在干燥后，用无菌镊子，使聚合物膜脱离玻璃载玻片。然后将膜置于tsa培养皿上(biom
é
rieux；产品：43011和43811)。在几分钟后，膜由于培养皿中含有的水而完全溶解。使皿在30-35℃下温育48小时。
[0230]
微生物计数和分析：
[0231]
在温育48小时后，计数在对照皿和含有水溶解的聚合物膜的皿上存在的菌落。聚合物的回收率如下计算：
[0232]
回收率：(100
×
聚合物tsa计数)/(对照tsa计数)
[0233]
结果显示于下表中：
[0234][0235]
结论：
[0236]
已显示了聚合物溶液中的pvoh浓度并不显著影响金黄色葡萄球菌的回收率，除非高于35％m/v，在此时回收率趋于减少。在溶液中低于40％m/v pvoh，金黄色葡萄球菌的回收率为60％至80％。
[0237]
最后，这些回收率显示了膜中的微生物的非常良好的包裹，然后通过膜的非常良好的剥离，并且pvoh+聚山梨醇酯溶液没有毒性。
[0238]
实施例12：聚山梨醇酯80浓度对回收率的影响
[0239]
为了研究聚山梨醇酯80的浓度对微生物回收率的影响，根据实施例1制造了一系列溶液：具有30％m/v pvoh的0至5％v/v聚山梨醇酯80。
[0240]
使用与实施例11相同的方案测试溶液。
[0241]
结果显示于下表中：
[0242][0243]
结论：
[0244]
已显示了聚山梨醇酯80浓度影响微生物的回收率。在不存在聚山梨醇酯80的情况下，金黄色葡萄球菌的回收率强烈减少。0.5或1％聚山梨醇酯80的添加使得能够获得约70％的回收率，所述回收率在这个浓度之外减少。
[0245]
实施例13：在培养皿上的检测
[0246]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0247]
将聚合物溶液沉积在待取样的表面上，然后在干燥后，使用无菌镊子，从表面上取下膜(参见实施例11方案)。
[0248]
为了检测并计数存在于膜中，因此最初存在于表面上的微生物的数目，将膜沉积在固体培养基上。非常迅速地，琼脂中包含的水使膜溶解，并且它从培养基的表面完全消失。根据待检测的微生物的需求，可以使用不同的固体培养基。
[0249]
培养基然后在通常的培养条件下温育。在温育后，可以容易地计数分离的菌落，以便给出表面监测的定量结果。
[0250]
在tsa培养皿(biom
é
rieux，产品：43811)上的测试显示了，在24/48/72小时的菌落大小在直接接种物沉积物和取下水溶性聚合物后的沉积物之间是相等的。
[0251]
另外，用含有显色指示剂的培养基(chapman培养基；biom
é
rieux，产品：46671)、以及含有色原体的培养基(said培养基；biom
é
rieux，产品：419042)进行测试。结果显示了菌落的染色、培养基的染色、以及菌落的外观在直接接种物沉积物和取下水溶性聚合物后的沉积物之间是相等的。
[0252]
这些结果证实了水溶性聚合物与培养基上的生长方法的相容性。
[0253]
实施例14：通过快速方法的检测
[0254][0255]
技术是通过比色法的动态微生物检测方法。培养基中存在的微生物在其生长期过程中产生co2。产生的co2诱导培养基的ph中的下降。这种ph变化诱导置于每个瓶的底部处的传感器的比色转变，所述传感器包括浸有液体乳剂检测器(les)的硅酮。led在传感器上发出光束。光电二极管收集以反射率单位形式的由传感器反射的光强度。在一段时间内分析反射率单位。
[0256]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0257]
如实施例9中所述，将聚合物溶液沉积在先前装载有已知量的微生物金黄色葡萄球菌(大致50cfu)的表面上。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。在干燥后，使用无菌镊子，使聚合物膜脱离表面。然后将膜在2ml盐水溶液(biom
é
rieux，产品：33892)中稀释。在完全溶解后，通过注射器抽取溶液，然后注入sa瓶(biom
é
rieux，产品：259789)内。平行地，用相同已知数量的金黄色葡萄球菌菌株(大致50cfu)直接接种对照瓶。将瓶装载到自动化系统(biom
é
rieux；产品：411660)上，用于自动动态读取。
[0258]
结果显示了，在用菌株直接接种的对照瓶和用溶解的聚合物膜接种的瓶之间，相似的检测时间和生长曲线。这些结果证实了，水溶性聚合物与比色微生物检测方法的相容性。
[0259][0260]
tempo技术是通过分析初始样品的稀释系列，基于最大可能数(mpn)技术，用于计数微生物的方法。tempo技术在专门设计的面板上微型化这一测试。该系统由以下组成：
[0261]
·
制备站(filler)，以用样品和特异性培养基接种卡。培养基允许细菌或酵母/霉菌的快速生长，并且含有荧光指示剂。创新的卡集成了16
×
3微型化管mpn方法。
[0262]
·
自动读取站(reader)，以确定每张卡中的细菌浓度，并且因此确定初始样品中存在的微生物数目。
[0263]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0264]
如实施例9中所述，将聚合物溶液沉积在先前装载有已知量的微生物金黄色葡萄球菌(大致50cfu)的表面上。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。在干燥后，使用无菌镊子，使聚合物膜脱离表面。然后将膜置于tempo ctb瓶(biom
é
rieux，产品：416683)中。平行地，用相同已知数量的金黄色葡萄球菌菌株(大致
50cfu)直接接种对照瓶。通过添加4ml蒸馏水/瓶，使瓶中包含的培养基再水合，也允许聚合物膜溶解。
[0265]
在再水合和完全溶解后，在filler站上扫描ctb瓶和相应的ctb卡(biom
é
rieux，产品：416683)。将瓶和卡置于填充架上，置于制备站中，所述制备站将完全填充卡，然后切割吸管，且因此密封卡。
[0266]
使卡在30℃
±
1℃下温育24小时-28小时(细菌检测)。
[0267]
在温育后，将卡置于reader读取站中并自动读取。考虑到稀释因子，结果直接以cfu/ml展示。
[0268]
结果显示了，在用菌株直接接种的对照瓶和用溶解的聚合物膜接种的瓶之间，等价的细菌计数。这些结果证实了，水溶性聚合物与使用mpn方法的基于荧光的微生物检测方法的相容性。
[0269][0270][0271]
技术是通过实时pcr用于检测微生物的方法。在培养基中富集之后，微生物的dna通过机械裂解得到释放，然后使用fret探针和探针融合峰通过实时pcr进行检测，以确保测试的特异性。
[0272]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0273]
使不同的表面装载有微生物单核细胞增生性李斯特菌(listeria monocytogenes)，然后在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥30分钟，以获得干沉积物。然后将聚合物溶液沉积在微生物上，并且在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。在干燥后，用无菌镊子，将聚合物膜从表面取下，并且沉积在lpt富集培养基(biom
é
rieux，产品：410845)的管中。平行地，微生物的干沉积物用拭子(biom
é
rieux，产品：70.6016)进行取样，然后沉积在lpt富集培养基的管中。使管在37℃下温育18-24小时。
[0274]
在富集后，将20μl样品沉积在裂解管中(biom
é
rieux，裂解试剂盒，产品：414057)。将裂解管置于架上，并且用troemner涡旋以2200rpm振荡5分钟。
[0275]
用45μl重构缓冲液重构一瓶冻干试剂(biom
é
rieux，李斯特菌属物种试剂盒：产品：414059，单核细胞增生性李斯特菌试剂盒：产品：414058)。将空的pcr管置于架上，并且将5μl pcr试剂置于每个管中。然后将5μl裂解样品加入每个管中。对于每个试剂盒进行由5μl对照缓冲液组成的阴性对照。将管用塞子封闭，密封，然后将架离心。将平板置于gene up仪器中。
[0276]
在开始之前，将样品和相关的检测试剂盒输入gene up软件内。当pcr循环完成时，结果将自动解释。该软件解释每个样品的扩增和融合曲线数据，并且给出阳性、阴性或抑制结果。
[0277]
结果显示了，对于所有测试表面，在对照样品和用聚合物收集的样品之间的等价检测。另外，检测到所有内部pcr对照。
[0278]
这些结果证实了，聚合物与经由pcr技术的检测方法的相容性。特别地，聚合物并不抑制pcr反应。
[0279][0280]
实施例15：通过生物化学方法的检测
[0281]
技术是通过免疫测定，用于检测元素(激素、病毒、微生物等)的方法。原理由两个元素的相互作用组成：圆锥体(固相)，其内表面包被有抗原或抗体，以及测试条，其由几个孔组成，并且含有测试所需的确切数量的试剂。
[0282]
反应在圆锥体中在两个关键步骤中发生：
[0283]-免疫反应，捕获所需元素；
[0284]-酶促反应，揭示了通过elfa(酶联荧光测定)技术所寻找的元素的存在。
[0285]
整个操作是自动化的：从温育到洗涤到最终读取。对于每个参数优化温育时间和洗涤循环次数，以确保最佳性能。
[0286]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于室温下。
[0287]
使不同的表面装载有微生物单核细胞增生性李斯特菌，然后在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥30分钟，以获得干沉积物。然后将聚合物溶液沉积在微生物上，并且在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。在干燥后，用无菌镊子，将聚合物膜从表面取下，并且沉积在lpt富集培养基(biom
é
rieux，产品：410845)的管中。平行地，微生物的干沉积物用拭子(biom
é
rieux，产品：70.6016)进行取样，然后沉积在lpt富集培养基的管中。使管在30℃下温育22-30小时。
[0288]
在富集后，将500μl样品沉积在up李斯特菌测试条(biom
é
rieux，产品：30126)的样品孔中。将测试条在heat and go仪器上、在95-100℃下加热5分钟，并且静置冷却10分钟。
[0289]
作为阳性对照，通过将500μl标准s1沉积在up李斯特菌测试条(biom
é
rieux，产品：30126)的样品孔中，来制备两个标准s1。这些测试条不进行加热。
[0290]
将圆锥体和测试条置于仪器中，并且在开始测试之前，将样品和相关的检测参数输入软件内。结果在约62分钟内获得。
[0291]
结果显示了，对于所有测试表面，在对照样品和用聚合物收集的样品之间的等价阳性。这些结果证实了，水溶性聚合物与免疫测定方法的相容性。
[0292]
实施例16：通过生物化学方法(vitek 2)的鉴定
[0293]
2compact是微生物鉴定系统，其基于在专门设计的卡上的微型化的比色生物化学反应。从结果读取到记录的所有鉴定阶段都是自动化的。2compact包括广泛的鉴定数据库，其允许鉴定众多微生物。
[0294]
聚合物溶液30％m/v pvoh+0.5％v/v聚山梨醇酯80根据实施例1制造，然后贮存于
室温下。
[0295]
将聚合物溶液沉积在先前装载有微生物克氏库克菌(kocuria kristinae)的菌落的表面上。使整体在30％通风的烘箱中、在37℃下干燥1小时，允许聚合物溶液固化为膜。在干燥后，使用无菌镊子，使聚合物膜脱离表面。然后将膜置于溶血管中，然后通过加入3ml盐水溶液(biom
é
rieux；产品：21218)进行溶解。平行地，制备含有3ml盐水溶液的对照管，以获得0.5mcfarland的克氏库克菌菌株。将管在smart carrier station
tm
中装载有gp卡(biom
é
rieux；产品：21342)。一旦装载盒，该系统就管理每张卡的温育和读取，而无需任何进一步的干预。结果在装载后2至18个小时内获得。
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结果显示了，在用菌株直接接种的对照管和用溶解的聚合物膜接种的管之间的等价鉴定(“极佳鉴定”)。这些结果证实了，水溶性聚合物与比色生物化学鉴定方法的相容性。

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