Hsp90抑制剂与喜树碱衍生物的偶联物及其制备方法与应用与流程

hsp90抑制剂与喜树碱衍生物的偶联物及其制备方法与应用
技术领域
[0001]
本发明涉及抗肿瘤药物化学领域，特别涉及一种hsp90抑制剂与喜树碱衍生物的偶联物及其制备方法与应用。


背景技术：

[0002]
近年来医疗技术迅猛发展，但是癌症依然是严重威胁人类生命和社会发展的重大疾病之一，而且其发病率仍然呈逐年上升的趋势，严重危害人类的健康。目前癌症的主要治疗手段是手术切除，传统放化疗，靶向治疗以及新型细胞疗法等。化疗仍然是临床肿瘤治疗的主要手段之一，其中细胞毒药物依然是化疗的一线药物。细胞毒药物通过抑制快速分化的肿瘤细胞而发挥作用。但是目前，抗肿瘤药物毒性高，生物相容性差，选择性差容易产生耐药，限制了其在临床上的应用。研究表明联合化疗能够在一定程度上克服肿瘤的耐药性，但是不同的药物由于性质不同，导致其在体内的作用方式和代谢方式不同，具有很多不可控因素，因此在临床的应用上也受到一定限制。选择性药物偶联物能够特异性识别肿瘤并实现药物在肿瘤部位富集，近年来成为肿瘤药物研究的热点。其中，热休克蛋白90(hsp90)抑制剂药物偶联物能够通过与细胞外hsp90(ehsp90)结合，实现药物在肿瘤的运输和累积，在临床上表现出良好的效果。
[0003]
hsp90是体内重要的共价伴侣蛋白，约占体内细胞蛋白总数的1-3％，是肿瘤治疗的重要靶点之一。hsp90作为热休克蛋白家族重要成员之一，其底物蛋白大多数是控制细胞分化生长的蛋白，包括肿瘤细胞转移的信号转导分子，如表皮生长因子受体2、bcr/abl融合基因、蛋白激酶b、c-raf、周期蛋白依赖性激酶4、缺氧诱导因子i、类固醇激素受体等。这些构象易变的底物蛋白的功能有赖于hsp90来维持。目前，临床上的hsp90抑制剂主要包括格尔德霉素，nvp-auy922，snx5422，sta9090和at13387，nvp-bep800，kw2478，xl888，pu-h71等，这些抑制剂在临床上都表现出了一定的肿瘤治疗效果，其中结构上比较具有代表性的为nvp-auy922和snx5422。
[0004]
nvp-auy922是一种有效的、新合成的间苯二酚异恶唑酰胺hsp90的小分子抑制剂，能够抑制hsp90α/β，ic50为13nm/21nm，对hsp90家族成员grp94和trap-1具有稍弱的作用效果，能够和小分子hsp90配体紧密结合。体外研究时nvp-auy922抑制多种人类肿瘤细胞系的增殖，gi50平均值为9nm。nvp-auy922作用于胃癌细胞时ic50值为2到40nm。nvp-auy922作用于beas-2b细胞ic50为28.49nm。使用nvp-auy922时不影响hsp90的表达，但是提高hsp70的表达。nvp-auy922增强hsp70与hsp90的结合能力。nvp-auy922造成p23与hsp复合体的分离。nvp-auy922能使hsp70结合到hsp90复合体。使用nvp-auy922，引起酪氨酸激酶受体如vegfr1，2，3和pdgfr-α的表达下降，akt和p-akt也下降。另外，nvp-auy922作用于nci-n87细胞，引起her2表达下降。nvp-auy922提高hsp90与目标蛋白的结合力，然后通过蛋白酶使蛋白降解。nvp-auy922可以改变多条信号通路而影响细胞生长。此外，使用蛋白酶抑制剂mg132，恢复由于使用nvp-auy922而降低的胸核苷酸合酶的重新表达。nvp-auy922提高cleaved caspase-3的表达，及导致hsc-2细胞凋亡。同时，在体内实验中，使用nvp-auy922
可引起强的抗癌反应，可抑制hsc-2移植瘤模型中p-akt和vegf的表达。在12种实验肿瘤中观察到5种肿瘤衰退。体重降低＜5％，且与hsp90相关的生物标签明显改变。bt474中，erbb2完全缺失，erα耗尽，且cdk4和磷酸化erk1/2降低。
[0005]
snx-2112为一种甲磺酸酯盐，是一种口服活性的hsp90抑制剂，kd为41nm，并诱导her-2降解，ic50为37μnm。pf 049113对a375细胞中的her2和p-erk稳定性有明显的影响，a375细胞中的p-s6蛋白的稳定性分别为5
±
1，11
±
3和61
±
22nm。pf 049 29 113在a375细胞中诱导hsp70，ic50为13
±
3nm。pf 049 29 113(0.5、1，2，5和10μm)以浓度依赖的方式降低细胞活力。此外，pf 049 29 113(1，3，5，7μm)与等量hdac抑制剂(pxd101、saha和tsa)协同作用，通过抑制atc细胞中pi3k/akt/mtor信号转导而诱导细胞死亡。在体内实验中，snx5422能有效地抑制ht-29人结肠癌异种移植模型的肿瘤生长，，显著抑制小鼠多发性骨髓瘤(mm)肿瘤生长和血管生成。
[0006]
at13387(onalespib)是一种有效的，选择性hsp90抑制剂，在a375细胞中ic50为18nm，具有长持续性抗肿瘤活性。at13387抑制多种激酶，包括cdk 1，cdk 2，cdk4，fgfr3，pkb-b，jak2，vegfr2，pdgfr-b，和aurora b。但是at13387浓度低于30μm时对实验激酶没有明显抑制效果。at13387有效抑制多种肿瘤细胞系(如mes-sa细胞系)增殖和存活。at13387作用于一组30个肿瘤细胞系，有效抑制细胞增殖，gi50值为13-260nm。at13387抑制非致瘤性前列腺上皮细胞系pnt2增殖，gi50值为480nm。在体内研究中，at13387按70mg/kg剂量每周处理两次，或者按90mg/kg剂量每周处理一次。鼠体重降低不超过20％。非治疗期延长，及抗癌活性，与at13387作用于突变egfr和其他生物标签的长期药效，及at13387对肿瘤的记忆有关。
[0007]
虽然hsp90抑制剂在临床上取得了一定的效果，但是由于仍具有一定的毒副作用，例如肝毒性和视觉神经毒性等，这些毒副作用很大程度上限制了该类药物在临床的应用。因此急需要一种新型的药物传递方法，来改善hsp90抑制剂在临床上的给药性质。
[0008]
7-乙基-10-羟基喜树碱(sn38)是一种喜树碱衍生物，是经典的拓扑异构酶i抑制剂。临床上，sn38能有效的诱导快速分化的肿瘤细胞的凋亡。然而，sn38在生理条件和药理条件下均表现出极低的溶解性，导致了其不能直接给药，直接限制了其在临床的广泛应用。近年来，为了改善sn38的水溶性和生物相容性，大量的sn38的药物传递系统被开发出来，例如：peg化的偶联物，脂质体，抗体偶联药物等。这些药物传递系统往往表现出比较差的肿瘤渗透性和较低的载药剂量，限制了其在临床的效果。开发一种能够改善sn38的给药性质同时实现sn38在肿瘤部位的累积的新策略尤为急切。


技术实现要素：

[0009]
本发明的目的是为了克服临床现有药物的缺陷而提出的一种hsp90抑制剂与喜树碱衍生物的偶联物及其制备方法与应用，利用hsp90抑制剂和喜树碱衍生物通过连接链进行偶联，主要是通过7-乙基-10-羟基喜树碱(sn38)的10位羟基的氨基甲酸酯键，20位羟基的氨基酸酯键连接，在连接链的选择上更加的广泛，在药物位置的修饰。该类偶联物能够改善7-乙基-10-羟基喜树碱(sn38)在体内的给药，实现了sn38在肿瘤的富集和缓慢释放，提高了sn38在体内的生物利用度，延长了药物作用的时间。
[0010]
实现本发明目的的具体技术方案是：
[0011]
一种hsp90抑制剂与喜树碱衍生物的偶联物，该偶联物通过连接链连接，具有式ia或ib、i c；iia或iib、iic；iiia或iiib、iii c；iva或ivb、iv c所示的结构：
[0012]
[0013][0014]
其中，式ia或ib、iia或iib、iiia或iiib、iva或ivb中，n＝2或1；所述hsp90抑制剂为nvp-auy922、snx-5422、at13387、nvp-bep800、kw2478、xl888或pu-h71；所述喜树碱衍生物为喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱或拓扑替康；所述连接链为氨基酸酯键、氨基甲酸酯键、碳酸酯键、异氰酸酯键或硫代异氰酸酯键。
[0015]
一种上述偶联物的制备方法，该方法制备反应过程如下式所示：
[0016][0017]
反应步骤包括：
[0018]
a)缩合反应：在缩合剂的作用下，化合物viii分别与化合物v、vi和化合物vii在有机溶剂中反应，生成化合物ia、ib和ic；所述化合物viii与化合物v、vi和化合物vii的摩尔比均为1∶1.2，化合物viii与缩合剂的摩尔比为1∶1.5，反应时间为3-4小时。
[0019]
步骤a)中，所述缩合剂为o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、n，n
′-
二异丙基碳二亚胺及1-羟基苯并三唑中的一种或者数种混合；所述有机溶剂为dmf、dcm、dmso及thf中的一种或数种混合。
[0020]
一种上述偶联物的制备方法，该方法制备反应过程如下式所示：
[0021][0022]
反应步骤包括：
[0023]
a)加氢反应：化合物ix在有机溶剂中在钯催化剂和氢气条件下，发生加氢反应生成化合物x；所述化合物ix与钯催化剂的质量比为1∶0.1，反应时间为4小时；
[0024]
b)缩合反应：在缩合剂的作用下，化合物x分别与化合物v、vi和化合物vii在有机溶剂中反应，生成化合物iia、iib和iic；所述化合物x与化合物v、vi和化合物vii的摩尔比均为1∶1.2，化合物x与缩合剂的摩尔比为1∶1.5，反应时间为3-4小时。
[0025]
步骤a)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇及异丙醇中的一种或数种混合；所述钯催化剂为10％钯碳、钯及氢氧化钯中的一种或者数种混合；步骤b)中，所述缩合剂为o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、n，n
′-
二异丙基碳二亚胺及1-羟基苯并三唑中的一种或者数种混合；所述有机溶剂为dmf、dcm，dmso及thf中的一种或数种混合。
[0026]
一种上述偶联物的制备方法，该方法制备反应过程如下式所示：
[0027][0028]
反应步骤包括：
[0029]
a)缩合反应：在缩合剂的作用下，化合物xi分别与化合物v、vi和化合物vii在有机溶剂中反应，生成化合物iiia、iiia和iiic；所述化合物xi和化合物v、vi和化合物vii的摩尔比均为1∶1.2，化合物xi与缩合剂的摩尔比为1∶1.5，反应时间为3-4小时。
[0030]
步骤a)中，所述缩合剂为o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、n，n
′-
二异丙基碳二亚胺及1-羟基苯并三唑中的一种或者数种混合；所述有机溶剂为dmf、dcm，dmso及thf中的一种或数种混合。
[0031]
一种上述偶联物的制备方法，该方法制备反应过程如下式所示：
[0032][0033]
反应步骤包括：
[0034]
a)缩合反应：在缩合剂的作用下，化合物xii分别与化合物v、vi和化合物vii在有机溶剂中反应，生成化合物via、vib和vic；所述化合物xii与化合物v、vi和化合物vii的摩尔比均为1∶1.2，化合物xii与缩合剂的摩尔比为1∶1.5，反应时间为3-4小时。
[0035]
步骤a)中，所述缩合剂为o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、n，n
′-
二异丙基碳二亚胺及1-羟基苯并三唑中的一种或者数种混合；所述有机溶剂为dmf、dcm，dmso及thf中的一种或数种混合。
[0036]
一种上述偶联物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0037]
本发明的偶联物，可以实现靶向性和活性药物在体内富集并发挥抗肿瘤作用。其中偶联物是指两种或者多种药物经过一定的结构修饰，并通过一定的连接方式连接而整体发挥药效的化合物，提供这种药物的目的是提高药物的靶向性，实现活性药物在体内富集，减小毒副作用等目的。
附图说明
[0038]
图1为化合物iia、iib和iic的细胞周期实验结果图；
[0039]
图2为化合物iia、iib和iic的蛋白免疫印迹实验图。
具体实施方式
[0040]
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，实施例不构成对本发明对限制。
[0041]
实施例1
[0042]
化合物ia-c的合成
[0043][0044]
化合物ia的制备
[0045]
将100mg(0.236mmol)化合物viii加入25ml圆底烧瓶山，溶于无水dcm(5ml)，向其中加入135mg(0.354mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，130μl(0.708mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入120mg(0.260mmol)化合物v，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂。粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物i a淡黄色固体85mg，收率42％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c
44
h
42
n7o9f3，[m+na]
+
：892.2894，found：892.2894.
[0046]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.94(s，1h)，8.02(d，j＝7.5hz，1h)，7.94(t，j＝6.9hz，1h)，7.80(d，j＝7.6hz，1h)，7.70(s，2h)，7.36(d，j＝1.5hz，1h)，7.33-7.32(m，1h)，7.32-7.29(m，1h)，7.14(t，j＝1.0hz，1h)，7.13(d，j＝1.6hz，1h)，7.11(dd，j＝7.5，1.6hz，1h)，5.17(t，j＝1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，3.92-3.74(m，2h)，3.56-3.39(m，2h)，3.38(s，2h)，3.09(dd，j＝12.5，8.0hz，2h)，2.79-2.69(m，2h)，2.67(d，j＝7.0hz，2h)，2.13-1.93(m，2h)，1.21(t，j＝8.0hz，3h)，1.15(s，3h)，1.09(s，3h)，1.06(t，j＝8.0hz，3h)。
[0047]
化合物i b的制备
[0048]
将100mg(0.236mmol)化合物viii加入25ml圆底烧瓶中，溶于无水dcm(5ml)，向其中加入135mg(0.354mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，130μl(0.708mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入116mg(0.260mmol)化合物vi，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂，粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物i b，淡黄色固体80mg，收率41％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c
43
h
40
n7o9f3，[m+na]
+
：878.2737，found：878.2749.
[0049]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.94(s，1h)，8.02(d，j＝7.5hz，1h)，7.80(d，j＝7.6hz，
1h)，7.70(s，2h)，7.58-7.46(m，1h)，7.39(t，j＝7.7hz，1h)，7.36(d，j＝1.5hz，1h)，7.32(dd，j＝7.5，1.5hz，1h)，7.14(t，j＝1.0hz，1h)，7.13(d，j＝1.6hz，1h)，7.11(dd，j＝7.5，1.6hz，1h)，5.17(t，j＝1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，3.98(s，1h)，3.96(s，1h)，3.92-3.78(m，2h)，3.38(s，2h)，3.09(ddq，j＝77.3，12.5，8.0hz，2h)，2.73(q，j＝17.9hz，2h)，2.12-1.93(m，2h)，1.21(t，j＝8.0hz，3h)，1.15(s，3h)，1.09(s，3h)，1.06(t，j＝8.0hz，3h)。
[0050]
化合物i c的合成
[0051]
将100mg(0.236mmol)化合物viii加入25ml圆底烧瓶中，溶于无水二氯甲烷(5ml)，向其中加入135mg(0.354mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，130μl(0.708mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入183mg(0.260mmol)化合物vii，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂，粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物i c淡黄色固体98mg，收率45％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c47h
48
n8o9f3，[m+h]
+
：925.3496，found：925.3468.
[0052]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.02(d，j＝7.5hz，1h)，7.96(d，j＝7.6hz，1h)，7.70(s，2h)，7.60(t，j＝8.5hz，1h)，7.43(d，j＝1.5hz，1h)，7.32(td，j＝7.3，1.5hz，2h)，7.21(t，j＝1.0hz，1h)，7.15(d，j＝10.1hz，1h)，7.13(d，j＝1.6hz，1h)，5.27(dd，j＝2.1，1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，4.77(s，1h)，3.88(dd，j＝12.4，8.5hz，1h)，3.82-3.78(m，2h)，3.77(d，j＝7.0hz，1h)，3.72-3.69(m，1h)，3.70-3.67(m，1h)，3.68-3.63(m，1h)，3.38(s，2h)，3.08(dd，j＝12.4，8.1hz，2h)，2.73(q，j＝17.9hz，2h)，1.97(dq，j＝12.3，8.0hz，1h)，1.83(qd，j＝7.1，2.9hz，4h)，1.79-1.74(m，1h)，1.22(t，j＝8.0hz，3h)，1.12(s，6h)，0.98(t，j＝8.0hz，3h)。
[0053]
实施例2
[0054]
化合物ii a-c的合成
[0055][0056]
化合物x的合成
[0057]
将2.0g(3.236mmol)化合物ix加入到100ml的双颈瓶中，溶于甲醇(30ml)，置换氮气，向其中加入(400mg)10％-钯碳，置换氮气再置换氢气，室温下搅拌反应4h。垫硅藻土抽
c
52
h
54
n6o
12
，[m+h]
+
：939.0350，found：939.0351.
[0066]
1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.87(s，1h)，7.96(d，j＝7.6hz，1h)，7.80(d，j＝11.0hz，1h)，7.58(dt，j＝7.6，1.0hz，2h)，7.43(d，j＝1.4hz，1h)，7.41(d，j＝0.6hz，1h)，7.38(d，j＝1.4hz，1h)，7.37(d，j＝1.2hz，1h)，7.31(dd，j＝7.5，1.5hz，1h)，7.21(t，j＝1.0hz，1h)，6.52(s，1h)，5.40-5.17(m，2h)，4.92(s，2h)，4.77(s，1h)，3.86(dp，j＝10.8，7.0hz，1h)，3.73(ddt，j＝43.2，12.4，7.1hz，4h)，3.63(s，1h)，3.61(d，j＝7.2hz，4h)，3.52(dt，j＝12.5，1.0hz，1h)，3.24-3.09(m，2h)，3.00(dq，j＝12.5，8.1hz，1h)，2.48(t，j＝7.1hz，4h)，2.01-1.94(m，1h)，1.90(q，j＝7.0hz，4h)，1.77(dq，j＝12.3，7.9hz，1h)，1.24(s，1h)，1.22(s，4h)，1.21(d，j＝1.5hz，4h)，0.98(t，j＝8.0hz，3h)。
[0067]
实施例3
[0068]
化合物iii a-c的合成
[0069][0070]
化合物iii a的制备
[0071]
将100mg(0.191 mmol)化合物xi加入25ml圆底烧瓶中，溶于无水dcm(5ml)，向其中加入109mg(0.287mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，106μl(0.573mmol)n，n-二异内基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入105mg(0.229mmol)化合物v，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂。粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物iiia淡黄色固体83mg，收率45％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c
53
h
57
n7o
11
，[m+h]
+
：968.4194，found：968.4192.
[0072]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.94(s，1h)，8.87(s，1h)，7.96(t，j＝7.7hz，1h)，7.83-7.77(m，2h)，7.58(dt，j＝7.6，1.0hz，2h)，7.41(d，j＝0.6hz，1h)，7.39-7.34(m，3h)，7.16-7.08(m，2h)，6.52(s，1h)，5.17(t，j＝1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，3.68(dt，j＝12.5，1.1hz，1h)，3.59(dt，j＝12.5，1.1hz，1h)，3.53-3.31(m，4h)，3.25-3.11(m，4h)，3.01(dq，j＝12.5，8.1hz，1h)，2.68(t，j＝7.1hz，2h)，2.63-2.56(m，3h)，2.56-2.50(m，5h)，2.12-2.01
(m，1h)，1.97(dt，j＝12.5，8.0hz，1h)，1.26-1.17(m，12h)，1.06(t，j＝8.0hz，3h)。
[0073]
化合物iii b的制备
[0074]
将100mg(0.191mmol)化合物xi加入25ml圆底烧瓶中，溶于无水dcm(5ml)，向其中加入109mg(0.287mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，106μl(0.573mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入102mg(0.229mmol)化合物vi，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂，粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物iii b，淡黄色固体74mg，收率41％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c
52
h
55
n7o
11
，[m+h]
+
：954.4038，found：954.4065.
[0075]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.94(s，1h)，8.87(s，1h)，7.96(t，j＝7.7hz，1h)，7.90(t，j＝7.9hz，1h)，7.80(d，j＝7.6hz，1h)，7.58(dt，j＝7.5，1.0hz，2h)，7.41(d，j＝0.6hz，1h)，7.39-7.34(m，3h)，7.16-7.08(m，2h)，6.52(s，1h)，5.17(t，j＝1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，3.97(d，j＝7.8hz，2h)，3.68(dt，j＝12.5，1.1hz，1h)，3.59(dt，j＝12.5，1.1hz，1h)，3.53-3.41(m，1h)，3.41-3.31(m，1h)，3.27-3.20(m，2h)，3.20-3.11(m，2h)，3.01(dq，j＝12.5，8.1hz，1h)，2.61-2.51(m，8h)，2.12-2.01(m，1h)，1.97(dt，j＝12.5，8.0hz，1h)，1.25(s，3h)，1.23-1.17(m，9h)，1.06(t，j＝8.0hz，3h)。
[0076]
化合物iiic的合成
[0077]
将100mg(0.236mmol)化合物xi加入25ml圆底烧瓶山，溶于无水二氯甲烷(5ml)，向其中加入109mg(0.287mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，106μl(0.573mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入161mg(0.229mmol)化合物vii，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂，粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物iiic淡黄色固体87mg，收率45％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c56h62n8o11，[m+h]
+
：1023.4616，found：1023.4584.
[0078]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.87(s，1h)，7.96(dt，j＝7.7，3.9hz，2h)，7.58(dt，j＝7.5，1.0hz，2h)，7.42(dd，j＝9.3，1.0hz，2h)，7.39-7.34(m，2h)，7.31(dd，j＝7.5，1.5hz，1h)，7.21(t，j＝1.0hz，1h)，7.10(d，j＝9.9hz，1h)，6.52(s，1h)，5.27(dd，j＝2.1，1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，4.77(s，1h)，3.79(dt，j＝12.4，7.1hz，2h)，3.74-3.62(m，4h)，3.59(dt，j＝12.5，1.1hz，1h)，3.52-3.41(m，1h)，3.41-3.31(m，1h)，3.25-3.10(m，4h)，3.00(dq，j＝12.5，8.1hz，1h)，2.61-2.51(m，8h)，1.97(dq，j＝12.3，8.0hz，1h)，1.91-1.80(m，4h)，1.80-1.71(m，1h)，1.27-1.19(m，12h)，0.98(t，j＝8.0hz，3h)。
[0079]
实施例4
[0080]
化合物iv a-c的合成
[0081][0082]
化合物iv a的制备
[0083]
将100mg(0.242mmol)化合物xii加入25ml圆底烧瓶中，溶于无水dcm(5ml)，向其中加入138mg(0.364mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，134μl(0.728mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入134mg(0.290mmol)化合物v，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂。粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物iv a淡黄色固体87mg，收率42％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c47h47n5o11，[m+h]
+
：858.3350，found：858.3375.
[0084]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.54(s，1h)，8.94(s，1h)，8.86(s，1h)，7.85(dd，j＝7.5，1.4hz，1h)，7.80(d，j＝7.6hz，1h)，7.72(t，j＝7.0hz，1h)，7.47-7.40(m，2h)，7.38-7.32(m，2h)，7.16-7.08(m，2h)，6.53(s，1h)，5.17(t，j＝1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，4.26(td，j＝7.1，1.2hz，2h)，3.52(dq，j＝12.3，7.1hz，1h)，3.43(dq，j＝12.5，7.1hz，1h)，3.22-3.11(m，4h)，3.01(dq，j＝12.5，8.1hz，1h)，2.68(t，j＝7.1hz，2h)，2.64-2.47(m，3h)，2.44-2.34(m，1h)，2.12-2.01(m，1h)，1.97(dt，j＝12.5，7.9hz，1h)，1.26(s，2h)，1.25-1.17(m，8h)，1.06(t，j＝8.0hz，3h)。
[0085]
化合物iv b的制备
[0086]
将100mg(0.242mmol)化合物xii加入25ml圆底烧瓶中，溶于无水dcm(5ml)，向其中加入138mg(0.364mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，134μl(0.728mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入129mg(0.290mmol)化合物vi，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂，粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物iv b，淡黄色固体81mg，收率41％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c46h45n5o11，[m+h]
+
：866.3013，found：866.3044.
[0087]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.54(s，1h)，8.94(s，1h)，8.86(s，1h)，7.89(t，j＝7.9hz，1h)，7.85(dd，j＝7.5，1.4hz，1h)，7.80(d，j＝7.6hz，1h)，7.47-7.40(m，2h)，7.38-7.32(m，2h)，7.16-7.08(m，2h)，6.53(s，1h)，5.17(t，j＝1.0hz，2h)，4.92(s，2h)，4.26(td，
j＝7.1，1.2hz，2h)，3.96(d，j＝7.9hz，2h)，3.22-3.11(m，4h)，3.01(dq，j＝12.5，8.1hz，1h)，2.64-2.54(m，1h)，2.54-2.45(m，2h)，2.44-2.35(m，1h)，2.12-2.01(m，1h)，1.97(dt，j＝12.5，7.9hz，1h)，1.26(s，2h)，1.25-1.17(m，8h)，1.06(t，j＝8.0hz，3h)。
[0088]
化合物iv c的合成
[0089]
将100mg(0.242mmol)化合物xii加入25ml圆底烧瓶中，溶于无水二氯甲烷(5ml)，向其中加入138mg(0.364mmol)o-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-n，n
″
，n
″-
四甲基脲六氟磷酸酯，134μl(0.728mmol)n，n-二异丙基乙胺，冰浴下搅拌0.5h后加入204mg(0.290mmol)化合物vii，室温下继续搅拌反应12h。二氯甲烷稀释(5ml)，水洗(10ml x 3)，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂，粗产物经硅胶柱层析(dcm∶meoh＝30∶1
→
15∶1)得化合物iv c淡黄色固体99mg，收率45％。m.p.大于200℃；hrms(esi)：m/z calcd for c50h52n6o11，[m+na]
+
：935.3592，found：935.3577.
[0090]1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.54(s，2h)，8.86(s，2h)，7.96(d，j＝7.6hz，2h)，7.85(dd，j＝7.5，1.5hz，2h)，7.47-7.40(m，6h)，7.36-7.28(m，4h)，7.21(t，j＝1.0hz，2h)，7.00(d，j＝9.9hz，2h)，6.53(s，2h)，5.27(dd，j＝2.1，1.0hz，4h)，4.92(s，4h)，4.77(s，2h)，4.26(t，j＝7.1hz，4h)，3.82-3.76(m，3h)，3.75(s，1h)，3.73-3.62(m，6h)，3.22-3.10(m，8h)，3.00(dq，j＝12.5，8.1hz，2h)，2.60-2.48(m，6h)，2.45-2.35(m，2h)，1.97(dq，j＝12.3，8.0hz，2h)，1.88(q，j＝7.1hz，8h)，1.77(dq，j＝12.3，7.9hz，2h)，1.25-1.19(m，18h)，0.98(t，j＝8.0hz，6h)。
[0091]
实施例5
[0092]
化合物iia、iib和iic的细胞周期实验
[0093]
为表明化合物对细胞周期的影响，用流式细胞仪测定了化合物对细胞周期的影响进行了测定。取对数生长期细胞，接种于六孔培养板，将化合物配制成一定浓度进行处理。24h后，收集细胞，经碘化丙啶(10微克/毫升)染色30min后应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。实验结果见图1；图中a为在a549细胞中作用24h的细胞周期实验结果图；图中b为在capan-1细胞中作用24h的细胞周期实验结果图；图中c为在hct116细胞中作用24h的细胞周期实验结果图；结果显示，sn38具有较强的诱导细胞分裂停留在s期的作用。三个化合物在三个细胞株上和auy922效果相近，均具有较强的阻断细胞周期的作用。说明三类化合物均保持了auy922和sn38的性质。
[0094]
实施例6
[0095]
化合物ii a、iib和iic的蛋白免疫印迹实验
[0096]
hsp90抑制剂对hsp90伴侣蛋白具有显著的抑制作用，同时，sn 38对于拓扑异构酶1具有显著的抑制作用。为了研究化合物在细胞水平对hsp90伴侣蛋白和top 1的抑制活性，进行了蛋白免疫印迹实验，选用auy922和sn38作为阳性对照，实验结果见图2；图中a为在a549细胞中的蛋白免疫印迹实验图；图中b为在capan-1细胞中的蛋白免疫印迹实验图；图中c为在hct116细胞中的蛋白免疫印迹实验图；结果显示，12h时，对a549，capan-1，hct116三种细胞来说，化合物对于hsp90伴侣蛋白和top 1均具有一定的抑制活性，说明化合物保持了hsp90抑制剂和sn 38的共同性质，也反应了两种物质的偶联在一定程度上并不会影响该类物质的性质。
[0097]
实施例7
[0098]
化合物ii a、iib和iic对a549，hct116，mia-paca-2和capan-1细胞株的增殖抑制活性实验
[0099]
为评价化合物对肿瘤细胞增殖能力的影响，采用磺酰罗丹明b蛋白染色法，选取a549、hct116、mia-paca-2、capan-1细胞株，作用72h后观察化合物对肿瘤细胞的增殖抑制率并计算ic
50
。
[0100]
表1为化合物i a、ib、ic、ii a、iib和iic对a549，hct116，mia-paca-2和capan-1细胞株的增殖抑制活性；
[0101]
表1
[0102][0103]
表1细胞实验结果表明，化合物均表现出了一定的抗肿瘤活性，和sn38前药伊立替康相比较好或相当。其中，化合物iia活性最好，化合物iib次之，化合物iic最低，与连接链的稳定性保持一致。化合物iia稳定性相对较低，细胞毒活性最高。以上实验结果说明，化合物ii a、iib和iic对a549，hct116，mia-paca-2和capan-1细胞株保持了较好的抗肿瘤活性。
[0104]
实施例8
[0105]
化合物iiia、iiib、iiic、iva、ivb和ivc对a549，bgc823，hct116，mia-paca-2，psn-1和t47d细胞株的增殖抑制活性实验
[0106]
为评价化合物对肿瘤细胞增殖能力的影响，采用磺酰罗丹明b蛋白染色法，选取a549，bgc823，hct116，mia-paca-2，psn-1和t47d细胞株，作用72h后观察化合物对肿瘤细胞的增殖抑制率并计算ic
50
。
[0107]
表2为化合物iii a、iiib、iii c和iv a-c对a549，bgc823，hct116，mia-paca-2，psn-1和t47d细胞株的增殖抑制活性；
[0108]
表2
[0109][0110]
表2细胞实验结果表明，化合物均表现出了一定的抗肿瘤活性。其中，化合物iiib、iiic、iva和ivb活性和adr相比较高。化合物iiic和iva在bgc823、mia-paca-2，psn-1和t47d四个细胞株上活性约为adr活性的10倍左右。在a549细胞株上约为adr的3倍；在hct116细胞上活性和adr相当。以上实验结果说明，化合物iiic和iva对a549，bgc823，hct116，mia-paca-2，psn-1和t47d细胞株保持了较好的抗肿瘤活性。

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