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2021-02-01 10:02:37|
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起点商标网 专利名称：用于治疗疼痛的羟苯基－哌嗪基－甲基－苯甲酰胺衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新化合物及其制备方法、应用以及包含所述新化合物的药用组合物。所述新化合物用于治疗、尤其是用于治疗疼痛。
背景和现有技术已确认δ受体在许多机体机能如循环系统和疼痛系统方面具有作用。因而δ受体配体具有用作止痛药物和/或抗高血压药物的潜在用途。还证实δ受体配体具有免疫调节活性。
目前充分鉴定了至少三种不同阿片样物质受体(μ、δ和κ)，三种阿片样物质受体都主要存在于包括人类在内的许多物种的中枢神经系统和外周神经系统。当在各种动物模型中激活一种或多种这些受体时，可观察到痛觉缺失。
目前可应用的选择性阿片样物质δ配体几乎无一例外地为天然肽，不适于经全身途径给药。一个非肽类δ-激动剂实例为SNC80(Bilsky E.J.等，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，273(1)，第359-366页(1995)。但是仍然需要选择性提高而副作用减少的选择性δ-激动剂。
因此，本发明要解决的问题是寻找与目前的μ激动剂相比，不仅止痛效果增强而且副作用减少以及提高全身性作用的新止痛药物。
已经鉴定和现有技术领域已有的止痛药物存在许多缺点，它们的药代动力学差，当全身途径给药时没有止痛作用。同时，有资料证明，现有技术中所述的优选δ激动剂化合物全身给药时表现出明显的惊厥作用。
现已发现，未专门公开但包括在WO 97/23466范围内的某些化合物表现出惊人的δ-激动剂性质而且体内效力增强。
发明简述本发明的新化合物由下式I表示 其中R1选自(ii)比啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 中的任一个，其中各R1杂芳环可任选并独立地被选自以下的1、2或3个取代基进一步取代直链和支链C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。杂芳环上的取代可发生在所述环系的任何位置。
本发明的一个优选实施方案为图I的化合物，其中R1如上定义，并且各R1苯环和R1杂芳环可独立地被甲基进一步取代。
本发明的一个更优选的实施方案为图I的化合物，其中R1为吡啶基、噻吩基或呋喃基。
式I化合物的单独对映体和盐(包括对映体的盐)也包括在本发明范围内。
将外消旋混合物分离为单独对映体在本技术领域内是普遍已知的，可以通过例如在适当的手性色谱柱上分离来实施。盐的分离在本技术领域内是普遍已知的，可以通过例如将式I的化合物在适当的溶剂中与所需的质子酸混合并用本技术领域的标准方法分离来进行。式I所示化合物的盐包括药学上可接受的盐和药学上不可接受的盐。
当杂芳环被取代时，优选的取代基选自CF3、甲基、碘、溴、氟和氯中的任何一个。
关键反应步骤方案1(参见下文)是通过使通式II (其中R为N-保护基团如Boc或CBz，P为O-保护基团如TBS或Me)的中间体化合物发生反应来进行的，首先将其N-脱保护，然后用i)通式R1-CH2-X的化合物和适当的碱，式中R1如上定义，X为卤素，优选为溴；或者ii)通式R1-CHO的化合物和适当的还原剂，式中R1如上定义，进行烷基化，在O-脱保护之后得到通式I的化合物。
用于上述标准烷基化步骤i)的适当的碱包括但不限于三乙胺和碳酸钾。
用于上述标准还原步骤ii)的适当的还原剂包括但不限于氰基硼氢化钠和三乙酰氧基硼氢化钠。
本发明的新化合物用于治疗、尤其是用于治疗各种痛症，例如慢性疼痛、神经病性疼痛、急性疼痛、癌痛、类风湿性关节炎性疼痛、偏头痛、内脏痛等。但所列未能尽述。
本发明化合物可用作免疫调节剂，尤其可用于自身免疫疾病(如关节炎)；皮肤移植、器官移植及类似的外科需要；胶原性疾病；各种变态反应；用作抗肿瘤药和抗病毒药。
本发明化合物可用于所述范例中存在或涉及阿片样物质受体退变或功能障碍的疾病。包括在诊断技术和成象如正电子成象术(PET)中应用同位素标记形式的本发明化合物。
本发明化合物可用于治疗腹泻、抑郁症、焦虑症、尿失禁、各种精神疾病、咳嗽、肺水肿、各种胃肠道疾病、脊柱损伤和药物成瘾(包括治疗酒精、尼古丁、阿片样物质和其它药物成瘾)以及交感神经系统疾病如高血压。
本发明化合物可用作在全身麻醉和监控麻醉护理时使用的止痛药物。常常联合使用不同性质的药物，以达到维持麻醉状态(例如记忆缺失、痛觉缺失、肌肉松弛和镇静)所需的平衡作用。联合用药包括吸入麻醉剂、安眠药、抗焦虑药、神经肌肉阻滞剂和阿片样物质。
应用任何上式I化合物生产治疗上述任何疾病的药物也属于本发明的范围。
本发明再一方面是治疗患有任何上述疾病的患者的治疗方法，其中对需要这种治疗的患者给予有效量的上式I的化合物。
本发明的再一方面是通式II的中间体， 其中R为N-脱保护基团如Boc或CBz，P为O-脱保护基团如TBS或Me。制备方法本发明的化合物可以通过下述方案I、II、III和IV中所述的任何一种来进行制备。类似的步骤描述在J.March，Advanced OrganicChemlstry，4thEditlon，John Wiley and Sons(1992)；Katritsky，A.R.，Lan，X.Chem.Soc.Rev，363-373页(1994)中，它们都通过使用被结合在此以作参考。
方案I R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案II R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案III R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案IV R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案1
方案1(续) 实施例1N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羟苯基)甲基]苯甲酰胺(化合物7)的制备(i)3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯甲醛(化合物2)的制备将3-羟基苯甲醛(10g，82mmol)溶解在含咪唑(12g，180mmol)和氯化叔丁基二甲基甲硅烷(13g，90mmol)的DMF(50mL)中，在25℃搅拌12小时。经含水后处理和硅胶层析得到化合物2(18g，93％)。
MS(EI)m/e 236，179，151。
(ii)4-[(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)(羟基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物4)的制备在氮气气氛下，将N，N-二乙基-4-碘代苯甲酰胺(3.0g，10mmol)溶解在THF(100mL)中并冷却至-78℃。在-65℃至-78℃、10分钟内滴加入n-BuLi(7.7mL，1.3M己烷溶液，10mmol)。将前述步骤中制得的化合物2(1.9g，8.0mmol)滴加溶解在THF(2mL)中。30分钟后加入NH4Cl(含水)。真空浓缩后，用EtOAc/水萃取，干燥(MgSO4)并蒸发有机相，通过硅胶层析纯化残余物，得到化合物4(2.0g，60％)。
1H NMR(CDCl3)δ0(s，6H)，0.80(s，9H)，0.9-1.2(m，6H)，2.6(s，1H)，3.0-3.5(m，4H)，5.59(s，1H)，6.55-7.25(m，8H)。
(iii)4-[(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)(1-哌嗪基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物5)的制备将前述步骤中制得的化合物4(2.0g，4.8mmol)溶解在无水CH2Cl2(50mL)中，并在0-25℃用SOCl2(0.38mL，5.2mmol)处理30分钟，真空蒸发溶剂。将残余物溶解在MeCN(50mL)中，并在80℃与哌嗪(1.6g，19mmol)反应12小时。经真空浓缩和硅胶层析得到化合物5(1.2g，52％)。
1H NMR(胺，CDCl3)δ＝1.0，1.1(2m，6H)，2.2-2.4(m，4H)，2.80(m，4H)，3.15，3.45(2m，4H)，4.10(s，1H)，6.58-7.38(m，8H)。
(iv)4-{(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氢基}苯基)[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物6)将2-呋喃基甲醇(如上述方案1所示制备的化合物3)(0.29mL，3.3mmol)溶解在含三乙胺(1.0mL，7.4mmol)的CH2Cl2(5mL)中。在0℃加入甲磺酰氯(0.26mL，3.4mmol)，将该溶液在0℃搅拌15分钟，然后加入前述步骤中制得的化合物5(0.81g，1.7mmol)。将反应物在25℃搅拌48小时，之后真空浓缩，并经硅胶层析，得到化合物6(0.40g，42％)。
(v) N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羟苯基)甲基]苯甲酰胺(化合物7)的制备将前述步骤中制得的化合物6用DMF/2N HCl(1∶2)在25℃处理1小时。浓缩并经反相层析，得到为二三氟乙酸盐形式的化合物7(0.26g，54％)。
MS(ES)448.24(MH+单种同位素峰)IR(2x TFA，NaCl)3232，1674，1599，1457，1288，1199，1134(cm-1)。
1H NMR(2x TFA，CDCl3)δ＝1.1，1.2(2m，6H)，2.5-3.6(m，13H)，4.21(s，2H)，4.28(s，1H)，6.44-7.50(m，11H)。实施例2N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(2-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物11)的制备由上述实施例1iii所制得的化合物5如实施例1iv和1v所述进行制备，经反相层析进行纯化并萃取(CH2Cl2/K2CO3(含水))后以碱的形式得到标题化合物11(28mg，31％)。
MS(ES)464.10(MH+单种同位素峰)
IR(2x TFA，NaCl)3393，3180，1672，1607，1457，1289，1199，1133(cm-1)。
1H NMR(2x HCl，CDCl3)8＝1.1，1.3(m，6H)，2.4-3.6(m，13H)，4.27(s，1H)，4.35(s，2H)，6.64-7.45(m，11H)。实施例3N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(3-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物9)的制备由上述实施例1iii所制得的化合物5如实施例1iv和1v所述进行制备，经反相层析进行纯化并萃取(CH2Cl2/K2CO3(含水))后以碱的形式得到标题化合物8(29mg，52％)。用HCl(含水)进行处理得到二盐酸盐。MS(ES)464.08(MH+单种同位素峰)IR(2x HCl，NaCl)3393，3180，1607，1457，1289(cm-1)。1H NMR(2x HCl，CDCl3)δ＝1.1，1.2(m，6H)，1.6-2.2(m，8H)，3.1-4.4(m，5H)，4.30(s，2H)，5.0(s，1H)，6.8-7.9(m，11H)。药用组合物本发明的新化合物可口服、肌内、皮下、局部、鼻内、腹膜内、胸腔内、静脉内、硬膜外、鞘内、脑室内给药及注射入关节给药。
优选给药途径为口服、静脉内或肌内给药。
当为具体患者确定最佳个体给药方案和剂量水平时，其剂量取决于给药途径、疾病严重性、患者的年龄和体重以及主治医师通常考虑的其它因素。
为了用本发明化合物制备药用组合物，药学上可接受的惰性载体既可为固体也可为液体。固体制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。
固体载体可以为能起稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂或片剂崩解剂作用的一种或多种物质；也可为包囊材料。
如果为粉剂，载体为磨成细粉的固体，它可与磨成细粉的活性成分混合。如果为片剂，活性成分与具有必要粘合性的载体按适当比例混合，并压制成需要的形状和规格。
为了制备栓剂组合物，首先熔解低熔点蜡如脂肪酸甘油酯和可可油的混合物，例如通过搅拌将活性成分分散于其中。然后将熔融的均匀混合物倾入常用规格模型中，使其冷却固化。
合适的载体有碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、乳糖、糖、果胶、糊精、淀粉、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。
盐包括但不限于药学上可接受的盐。在本发明发范围内的药学上可接受的盐的例子包括乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、glucaptate、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰阿散酸盐、己基间苯二酚盐、hydrabamine、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、溴代甲烷、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱、triethiodide、苯乍生、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、1，2-乙二胺、葡甲胺、普鲁卡因、铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌。在本发明范围内的药学上不可接受的盐的例子包括氢碘酸盐(hydroiodide)、高氯酸盐和四氟硼酸盐。优选的药学上可接受的盐为盐酸盐、硫酸盐和酒石酸氢盐。特别优选盐酸盐和硫酸盐。
术语组合物包括所述活性成分与作为载体的包囊材料的制剂，在包囊材料产生的包囊中活性成分(与或不与其它载体一起)被所述载体所包围，因此载体与活性成分缔合。同样，扁囊剂也包括在内。
片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂可用作适于口服给药的固体剂型。
液体组合物包括溶液、悬浮液和乳液。适于不经胃肠给药的液体制剂实例有所述活性化合物的无菌水溶液或水-丙二醇溶液。也可将液体组合物制成聚乙二醇水溶液。
通过将活性组分溶解于水中并按要求加入适当的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂，可制备口服给药的水溶液剂。通过将磨成细粉的活性组分和粘性原料如天然合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它药用制剂领域已知的悬浮剂分散于水中，可制备口服用药的水性悬浮液。
优选的药用组合物是单位剂型。单位剂型时，所述组合物分成含适量活性组分的单位剂量。所述单位剂型可为包装制剂，包装制剂包含个别数量的所述制剂，例如片剂、胶囊剂和用管形瓶或安瓿包装的粉剂。单位剂型也可为一粒胶囊剂、一粒扁囊剂或一片药物本身，或者它可为适当数量的任何这类包装形式。生物学评估体外模型细胞培养A. 37℃、5％CO2下，在含有无钙DMEM、10％FBS、5％BCS、0.1％Pluronic F-68和600μg/ml遗传霉素的摇瓶中，悬浮培养表达克隆的人μ、δ和κ受体和新霉素抗性的人293S细胞。
B.称量小鼠和大鼠脑并在冰冷却PBS(含有2.5mM EDTA，pH7.4)中冲洗。在冰冷却的裂解缓冲液(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，临用前加入苯基甲基磺酰氟，由在DMSO乙醇中的储液加至0.5MmM)中用polytron匀浆鼠脑15秒(小鼠)或30秒(大鼠)。膜制备沉淀细胞，将其重悬浮于裂解缓冲液中(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，临用前用0.1M PMSF的乙醇母液口入至0.1mM)，在冰上温育15分钟，然后用polytron匀化30秒。在4℃下以1000g(最大)旋转该悬浮液10分钟。将其上清液收集于冰上，重悬浮沉淀后如上旋转。将两次旋转所得的上清液混合，以46,000g(最大)旋转30分钟。将沉淀物重悬浮于冷Tris缓冲液(50mM Tris/Cl，pH7.0)中，再旋转。将最终的沉淀物重悬浮于膜缓冲液(50mM Tris、0.32M蔗糖、pH7.0)中。聚丙烯管中的等份物(1ml)冰冻于干冰/乙醇中并在使用前贮存于-70℃。用十二烷基硫酸钠通过改良Lowry测定法测定蛋白浓度。结合测定于37℃解冻膜，并冷却于冰上，通过25-号针头三次，稀释入结合缓冲液(50mM Tris、3mM MgCl2、1mg/ml BSA(Sigma A-7888)，pH7.4，稀释液经0.22m滤纸过滤后贮存于4℃，并向其中加入5μg/ml抑肽酶、10μM苯丁抑制素、10-μM diprotinA，无DTT)。将100μl的等份液加入冰冻的装有100μl适当放射性配体和100μl各种浓度的试验化合物的12×75mm聚丙烯管中。分别测定包含和不含10μM纳洛酮的总的(TB)和非特异性(NS)结合。将所述试管涡旋并于25℃温育60-75分钟，之后，通过GF/B滤纸(Whatman)(在0.1％聚环乙亚胺中预浸渍至少2小时)快速真空-过滤内容物，以约12ml/管的冰冷洗涤缓冲液(50mM Tris、pH7.0、3mM MgCl2)洗涤。将滤纸在包含6-7ml闪烁液的微管中浸渍至少12小时后，用β计数器测量保留在滤纸上的放射性(dpm)。如果所述测定在96-位深孔板中进行，过滤物过滤在96位PEI-浸渍的单滤纸(96-place PEI-soaked unifilters)上，用3×1ml洗涤缓冲液洗后，并于55℃烤箱中干燥2小时)。加入50μl MS-20闪烁液体/孔后，用TopCount(Packard)计数滤板。机能测定通过确定化合物受体络合物激活GPT和与受体偶联的G-蛋白的结合的程度来测定化合物的激动剂活性。在GTP结合测定中，将GTP[γ]35S与受测化合物和来自表达克隆的人阿片样物质受体的HEK-293S细胞的膜或来自经匀浆的大鼠和小鼠脑的膜结合。激动剂刺激这些膜中的GTP[γ]35S结合。由剂量反应曲线确定化合物的EC50和Emax值。通过δ拮抗剂naltrindole将剂量反应曲线右移，以检定激动剂活性是δ受体间介的。数据分析以TB-NS计算出特异性结合(SB)，存在各种测试化合物时的SB表示为对照SB的百分比。根据logit图或曲线拟合程序例如Ligand、GraphPad Prism、SigmaPlot或ReceporFit计算置换特异性结合放射性配体的配体IC50值和Hill系数(nH)。用Cheng-Prussoff方程计算Ki值。用至少三次置换曲线，反映测试配体的IC50、Ki和nH值的均值±S.E.M。生物数据列于下页的表1中。
表1生物数据 受体饱和实验用适当放射性配体(浓度为0.2-5倍于估计Kδ(如果所需放射配体量适宜的话，可高达10倍)对细胞膜进行结合试验，从而测定放射性配体Kδ值。特异性放射性配体结合表示为pmole/mg膜蛋白。根据单点模式(one-site model)由各个试验的特异性结合(B)放射性配体与nM游离(F)放射性配体的非线性拟合曲线获得具体实验的Kδ和B最大值。用Von Frey试验测定机械-异常性疼痛用Chaplan等(1994)所述的方法在08:00至16:00之间进行试验。将大鼠置于金属丝网底(可接触到其爪)之上的Plexiglas笼中，让其适应10-15分钟。试验区域为左后爪的足底中部，避开较不敏感的足垫部分。用一系列呈对数递增硬度(0.41、0.69、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51和15.14克；Stoelting，III，USA)的8 Von Frey毛发接触其爪。从网状底板的下面，垂直于足底表面使用Von Frey毛发，其用力足以使Von Frey毛发对爪产生轻微弯曲并保持约6-8秒。如爪急剧缩回则为阳性反应。毛发一移开立即退缩也认为是阳性反应。走动是不明确的反应，需要重复刺激。试验方案FCA处理组在手术后第一天对动物进行试验。用Dixon(1980)的上-下方法确定50％缩回阈值。用2.04g(处于毛发系列刺激中间)毛发开始试验。无论刺激强度是上升或下降，一直连续刺激。爪对最初选定的毛发刺激无回缩反应时，就逐渐增强刺激；若爪回缩，则选择更弱的刺激。应用这种方法计算最优阈值需要6个极为接近50％阈值的反应，当反应发生第一个变化时，例如阈值首次交叉，才开始计数这6个反应。如果阈值落在刺激范围之外，各指定15.14(正常敏感度)或0.41(最大异常性疼痛)。用常规(X＝未缩回；O＝缩回)对所得的阳性和阴性反应模式制表，有以下公式50％阈值(g)＝10(Xf+k)δ/10,000内推出50％缩回阈值，其中Xf＝最后使用的Von Frey毛发值(对数单位)；k＝阳性/阴性反应模式的表格数值(Chaplan等(1994))；而δ＝刺激的平均差值(对数单位)。此处δ＝0.224。
根据Chaplan等(1994)，将Von Frey阈值转化为最大可能作用的百分比(％MPE)。下列方程用于计算％MPE 试验物的给药在Von Frey试验前将试验物注射(皮下、腹膜内、静脉内或口服)给予大鼠，试验化合物给药与Von Frey试验时间间隔取决于所试验的化合物的性质。扭体试验对小鼠腹膜内给药时，乙酸会引起腹部收缩。然后呈现典型的机体伸展。用了止痛药后，则较少观察到所述运动，则该药选作潜在的良好侯选物。
只有出现下列情况才认为是完全典型的扭体反射所述动物未运动；后背略微降低；双爪足底表面可观察到。本试验证明本发明化合物在口服1-100μmol/kg后对扭体反应有显著抑制作用。(i)溶液制备乙酸(AcOH)将120μl乙酸加入19.88ml的蒸馏水中以得到最终体积为20ml、最终浓度为0.6％的AcOH。再将该溶液混合(涡旋)以备注射用。
化合物(药物)根据标准方法制备各化合物并溶解于最适当的载体中。(ii)溶液的给药在试验前20、30或40分钟(根据化合物的种类及其特性)，以10ml/kg(考虑平均小鼠体重)将所述化合物(药物)经口、腹膜内(i.p.)、皮下(s.c.)或静脉内(i.v.)给药。当所述化合物中枢性脑室内(i.c.v.)或鞘内(i.t.)给药时，给药量为5μl。
临试验前以10ml/Kg(考虑平均小鼠体重)AcOH在两侧腹膜内(i.p.)给药。(iii)试验观察所述动物(小鼠)20分钟，记录(扭体反射)发生次数，实验结束时进行数据汇编。将小鼠放置在带接触衬垫(bedding)的单个“鞋盒”状笼中。通常同时观察4只小鼠一只对照，三只给予药物。
权利要求
1.一种式I的化合物及其对映体和盐， 其中R1选自(ii)吡啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 中的任一个，其中各R1杂芳环可独立地被选自以下的1、2或3个取代基进一步取代直链和支链C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。
2.一种权利要求1的化合物，其中各R1杂芳环可独立地被选自以下的1、2或3个取代基进一步取代甲基、CF3、氯、氟、溴和碘。
3.一种权利要求1的化合物，其中各R1苯环和R1杂芳环可独立地被甲基进一步取代。
4.一种权利要求1的化合物，其中R1为吡啶基、噻吩基或呋喃基。
5.一种权利要求1或2的化合物，它选自N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羟苯基)甲基]苯甲酰胺；N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(2-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺；和N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(3-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基)苯甲酰胺中的任一种。
6.一种前述权利要求中任一项的化合物，它为其盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、二三氟乙酸盐或柠檬酸盐的形式。
7.一种制备式I化合物的方法，它包括下述反应，即使通式II的化合物发生反应， 其中R为N-保护基团，P为O-保护基团如TBS或Me，首先将其N-脱保护，然后用i)通式R1-CH2-X的化合物和适当的碱；其中R1如权利要求1的定义，X为卤素，或者ii)通式R1-CHO的化合物和适当的还原剂，其中R1如权利要求1的定义，进行烷基化，并在O-脱保护之后得到通式I的化合物。
8.一种用于治疗的权利要求1的化合物。
9.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗为疼痛治疗。
10.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗针对胃肠道疾病。
11.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗针对脊柱损伤。
12.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗针对交感神经系统疾病。
13.权利要求1的式I所示化合物用于制备治疗疼痛、胃肠道疾病或脊柱损伤的药物的应用。
14.一种药用组合物，它包含作为活性成分的权利要求1的式I所示化合物以及药理学和药学上可接受的载体。
15.一种治疗疼痛的方法，其中将有效量的权利要求1的式I所示化合物给予需要治疗疼痛的患者。
16.一种治疗胃肠道疾病的方法，其中将有效量的权利要求1的式I所示化合物给予患有所述胃肠道疾病的患者。
17.一种治疗脊柱损伤的方法，其中将有效量的权利要求1的式I所示化合物给予患有所述脊柱损伤的患者。
18.一种式II的化合物， 其中R为N-保护基如Boc或CBz，P为O-保护基如TBS或Me。
全文摘要
本申请公开并要求保护以下通式(I)化合物，其中R
文档编号C07D307/52GK1422266SQ01807719
公开日2003年6月4日 申请日期2001年3月30日 优先权日2000年4月4日
发明者W·布朗, N·普洛贝克, C·瓦尔波勒 申请人:阿斯特拉曾尼卡有限公司
技术领域：
本发明涉及新化合物及其制备方法、应用以及包含所述新化合物的药用组合物。所述新化合物用于治疗、尤其是用于治疗疼痛。
背景和现有技术已确认δ受体在许多机体机能如循环系统和疼痛系统方面具有作用。因而δ受体配体具有用作止痛药物和/或抗高血压药物的潜在用途。还证实δ受体配体具有免疫调节活性。
目前充分鉴定了至少三种不同阿片样物质受体(μ、δ和κ)，三种阿片样物质受体都主要存在于包括人类在内的许多物种的中枢神经系统和外周神经系统。当在各种动物模型中激活一种或多种这些受体时，可观察到痛觉缺失。
目前可应用的选择性阿片样物质δ配体几乎无一例外地为天然肽，不适于经全身途径给药。一个非肽类δ-激动剂实例为SNC80(Bilsky E.J.等，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，273(1)，第359-366页(1995)。但是仍然需要选择性提高而副作用减少的选择性δ-激动剂。
因此，本发明要解决的问题是寻找与目前的μ激动剂相比，不仅止痛效果增强而且副作用减少以及提高全身性作用的新止痛药物。
已经鉴定和现有技术领域已有的止痛药物存在许多缺点，它们的药代动力学差，当全身途径给药时没有止痛作用。同时，有资料证明，现有技术中所述的优选δ激动剂化合物全身给药时表现出明显的惊厥作用。
现已发现，未专门公开但包括在WO 97/23466范围内的某些化合物表现出惊人的δ-激动剂性质而且体内效力增强。
发明简述本发明的新化合物由下式I表示 其中R1选自(ii)比啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 中的任一个，其中各R1杂芳环可任选并独立地被选自以下的1、2或3个取代基进一步取代直链和支链C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。杂芳环上的取代可发生在所述环系的任何位置。
本发明的一个优选实施方案为图I的化合物，其中R1如上定义，并且各R1苯环和R1杂芳环可独立地被甲基进一步取代。
本发明的一个更优选的实施方案为图I的化合物，其中R1为吡啶基、噻吩基或呋喃基。
式I化合物的单独对映体和盐(包括对映体的盐)也包括在本发明范围内。
将外消旋混合物分离为单独对映体在本技术领域内是普遍已知的，可以通过例如在适当的手性色谱柱上分离来实施。盐的分离在本技术领域内是普遍已知的，可以通过例如将式I的化合物在适当的溶剂中与所需的质子酸混合并用本技术领域的标准方法分离来进行。式I所示化合物的盐包括药学上可接受的盐和药学上不可接受的盐。
当杂芳环被取代时，优选的取代基选自CF3、甲基、碘、溴、氟和氯中的任何一个。
关键反应步骤方案1(参见下文)是通过使通式II (其中R为N-保护基团如Boc或CBz，P为O-保护基团如TBS或Me)的中间体化合物发生反应来进行的，首先将其N-脱保护，然后用i)通式R1-CH2-X的化合物和适当的碱，式中R1如上定义，X为卤素，优选为溴；或者ii)通式R1-CHO的化合物和适当的还原剂，式中R1如上定义，进行烷基化，在O-脱保护之后得到通式I的化合物。
用于上述标准烷基化步骤i)的适当的碱包括但不限于三乙胺和碳酸钾。
用于上述标准还原步骤ii)的适当的还原剂包括但不限于氰基硼氢化钠和三乙酰氧基硼氢化钠。
本发明的新化合物用于治疗、尤其是用于治疗各种痛症，例如慢性疼痛、神经病性疼痛、急性疼痛、癌痛、类风湿性关节炎性疼痛、偏头痛、内脏痛等。但所列未能尽述。
本发明化合物可用作免疫调节剂，尤其可用于自身免疫疾病(如关节炎)；皮肤移植、器官移植及类似的外科需要；胶原性疾病；各种变态反应；用作抗肿瘤药和抗病毒药。
本发明化合物可用于所述范例中存在或涉及阿片样物质受体退变或功能障碍的疾病。包括在诊断技术和成象如正电子成象术(PET)中应用同位素标记形式的本发明化合物。
本发明化合物可用于治疗腹泻、抑郁症、焦虑症、尿失禁、各种精神疾病、咳嗽、肺水肿、各种胃肠道疾病、脊柱损伤和药物成瘾(包括治疗酒精、尼古丁、阿片样物质和其它药物成瘾)以及交感神经系统疾病如高血压。
本发明化合物可用作在全身麻醉和监控麻醉护理时使用的止痛药物。常常联合使用不同性质的药物，以达到维持麻醉状态(例如记忆缺失、痛觉缺失、肌肉松弛和镇静)所需的平衡作用。联合用药包括吸入麻醉剂、安眠药、抗焦虑药、神经肌肉阻滞剂和阿片样物质。
应用任何上式I化合物生产治疗上述任何疾病的药物也属于本发明的范围。
本发明再一方面是治疗患有任何上述疾病的患者的治疗方法，其中对需要这种治疗的患者给予有效量的上式I的化合物。
本发明的再一方面是通式II的中间体， 其中R为N-脱保护基团如Boc或CBz，P为O-脱保护基团如TBS或Me。制备方法本发明的化合物可以通过下述方案I、II、III和IV中所述的任何一种来进行制备。类似的步骤描述在J.March，Advanced OrganicChemlstry，4thEditlon，John Wiley and Sons(1992)；Katritsky，A.R.，Lan，X.Chem.Soc.Rev，363-373页(1994)中，它们都通过使用被结合在此以作参考。
方案I R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案II R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案III R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案IV R＝一个保护基团如Boc、CBzP＝一个保护基团如TBS或MeM＝Li、Mg、ZnX＝Br、IL＝Cl、Br、OMs、OTs、IR1＝如上述式(I)的定义方案1
方案1(续) 实施例1N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羟苯基)甲基]苯甲酰胺(化合物7)的制备(i)3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯甲醛(化合物2)的制备将3-羟基苯甲醛(10g，82mmol)溶解在含咪唑(12g，180mmol)和氯化叔丁基二甲基甲硅烷(13g，90mmol)的DMF(50mL)中，在25℃搅拌12小时。经含水后处理和硅胶层析得到化合物2(18g，93％)。
MS(EI)m/e 236，179，151。
(ii)4-[(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)(羟基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物4)的制备在氮气气氛下，将N，N-二乙基-4-碘代苯甲酰胺(3.0g，10mmol)溶解在THF(100mL)中并冷却至-78℃。在-65℃至-78℃、10分钟内滴加入n-BuLi(7.7mL，1.3M己烷溶液，10mmol)。将前述步骤中制得的化合物2(1.9g，8.0mmol)滴加溶解在THF(2mL)中。30分钟后加入NH4Cl(含水)。真空浓缩后，用EtOAc/水萃取，干燥(MgSO4)并蒸发有机相，通过硅胶层析纯化残余物，得到化合物4(2.0g，60％)。
1H NMR(CDCl3)δ0(s，6H)，0.80(s，9H)，0.9-1.2(m，6H)，2.6(s，1H)，3.0-3.5(m，4H)，5.59(s，1H)，6.55-7.25(m，8H)。
(iii)4-[(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)(1-哌嗪基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物5)的制备将前述步骤中制得的化合物4(2.0g，4.8mmol)溶解在无水CH2Cl2(50mL)中，并在0-25℃用SOCl2(0.38mL，5.2mmol)处理30分钟，真空蒸发溶剂。将残余物溶解在MeCN(50mL)中，并在80℃与哌嗪(1.6g，19mmol)反应12小时。经真空浓缩和硅胶层析得到化合物5(1.2g，52％)。
1H NMR(胺，CDCl3)δ＝1.0，1.1(2m，6H)，2.2-2.4(m，4H)，2.80(m，4H)，3.15，3.45(2m，4H)，4.10(s，1H)，6.58-7.38(m，8H)。
(iv)4-{(3-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氢基}苯基)[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺(化合物6)将2-呋喃基甲醇(如上述方案1所示制备的化合物3)(0.29mL，3.3mmol)溶解在含三乙胺(1.0mL，7.4mmol)的CH2Cl2(5mL)中。在0℃加入甲磺酰氯(0.26mL，3.4mmol)，将该溶液在0℃搅拌15分钟，然后加入前述步骤中制得的化合物5(0.81g，1.7mmol)。将反应物在25℃搅拌48小时，之后真空浓缩，并经硅胶层析，得到化合物6(0.40g，42％)。
(v) N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羟苯基)甲基]苯甲酰胺(化合物7)的制备将前述步骤中制得的化合物6用DMF/2N HCl(1∶2)在25℃处理1小时。浓缩并经反相层析，得到为二三氟乙酸盐形式的化合物7(0.26g，54％)。
MS(ES)448.24(MH+单种同位素峰)IR(2x TFA，NaCl)3232，1674，1599，1457，1288，1199，1134(cm-1)。
1H NMR(2x TFA，CDCl3)δ＝1.1，1.2(2m，6H)，2.5-3.6(m，13H)，4.21(s，2H)，4.28(s，1H)，6.44-7.50(m，11H)。实施例2N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(2-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物11)的制备由上述实施例1iii所制得的化合物5如实施例1iv和1v所述进行制备，经反相层析进行纯化并萃取(CH2Cl2/K2CO3(含水))后以碱的形式得到标题化合物11(28mg，31％)。
MS(ES)464.10(MH+单种同位素峰)
IR(2x TFA，NaCl)3393，3180，1672，1607，1457，1289，1199，1133(cm-1)。
1H NMR(2x HCl，CDCl3)8＝1.1，1.3(m，6H)，2.4-3.6(m，13H)，4.27(s，1H)，4.35(s，2H)，6.64-7.45(m，11H)。实施例3N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(3-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物9)的制备由上述实施例1iii所制得的化合物5如实施例1iv和1v所述进行制备，经反相层析进行纯化并萃取(CH2Cl2/K2CO3(含水))后以碱的形式得到标题化合物8(29mg，52％)。用HCl(含水)进行处理得到二盐酸盐。MS(ES)464.08(MH+单种同位素峰)IR(2x HCl，NaCl)3393，3180，1607，1457，1289(cm-1)。1H NMR(2x HCl，CDCl3)δ＝1.1，1.2(m，6H)，1.6-2.2(m，8H)，3.1-4.4(m，5H)，4.30(s，2H)，5.0(s，1H)，6.8-7.9(m，11H)。药用组合物本发明的新化合物可口服、肌内、皮下、局部、鼻内、腹膜内、胸腔内、静脉内、硬膜外、鞘内、脑室内给药及注射入关节给药。
优选给药途径为口服、静脉内或肌内给药。
当为具体患者确定最佳个体给药方案和剂量水平时，其剂量取决于给药途径、疾病严重性、患者的年龄和体重以及主治医师通常考虑的其它因素。
为了用本发明化合物制备药用组合物，药学上可接受的惰性载体既可为固体也可为液体。固体制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。
固体载体可以为能起稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂或片剂崩解剂作用的一种或多种物质；也可为包囊材料。
如果为粉剂，载体为磨成细粉的固体，它可与磨成细粉的活性成分混合。如果为片剂，活性成分与具有必要粘合性的载体按适当比例混合，并压制成需要的形状和规格。
为了制备栓剂组合物，首先熔解低熔点蜡如脂肪酸甘油酯和可可油的混合物，例如通过搅拌将活性成分分散于其中。然后将熔融的均匀混合物倾入常用规格模型中，使其冷却固化。
合适的载体有碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、乳糖、糖、果胶、糊精、淀粉、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。
盐包括但不限于药学上可接受的盐。在本发明发范围内的药学上可接受的盐的例子包括乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、glucaptate、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰阿散酸盐、己基间苯二酚盐、hydrabamine、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、溴代甲烷、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱、triethiodide、苯乍生、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、1，2-乙二胺、葡甲胺、普鲁卡因、铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌。在本发明范围内的药学上不可接受的盐的例子包括氢碘酸盐(hydroiodide)、高氯酸盐和四氟硼酸盐。优选的药学上可接受的盐为盐酸盐、硫酸盐和酒石酸氢盐。特别优选盐酸盐和硫酸盐。
术语组合物包括所述活性成分与作为载体的包囊材料的制剂，在包囊材料产生的包囊中活性成分(与或不与其它载体一起)被所述载体所包围，因此载体与活性成分缔合。同样，扁囊剂也包括在内。
片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂可用作适于口服给药的固体剂型。
液体组合物包括溶液、悬浮液和乳液。适于不经胃肠给药的液体制剂实例有所述活性化合物的无菌水溶液或水-丙二醇溶液。也可将液体组合物制成聚乙二醇水溶液。
通过将活性组分溶解于水中并按要求加入适当的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂，可制备口服给药的水溶液剂。通过将磨成细粉的活性组分和粘性原料如天然合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它药用制剂领域已知的悬浮剂分散于水中，可制备口服用药的水性悬浮液。
优选的药用组合物是单位剂型。单位剂型时，所述组合物分成含适量活性组分的单位剂量。所述单位剂型可为包装制剂，包装制剂包含个别数量的所述制剂，例如片剂、胶囊剂和用管形瓶或安瓿包装的粉剂。单位剂型也可为一粒胶囊剂、一粒扁囊剂或一片药物本身，或者它可为适当数量的任何这类包装形式。生物学评估体外模型细胞培养A. 37℃、5％CO2下，在含有无钙DMEM、10％FBS、5％BCS、0.1％Pluronic F-68和600μg/ml遗传霉素的摇瓶中，悬浮培养表达克隆的人μ、δ和κ受体和新霉素抗性的人293S细胞。
B.称量小鼠和大鼠脑并在冰冷却PBS(含有2.5mM EDTA，pH7.4)中冲洗。在冰冷却的裂解缓冲液(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，临用前加入苯基甲基磺酰氟，由在DMSO乙醇中的储液加至0.5MmM)中用polytron匀浆鼠脑15秒(小鼠)或30秒(大鼠)。膜制备沉淀细胞，将其重悬浮于裂解缓冲液中(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，临用前用0.1M PMSF的乙醇母液口入至0.1mM)，在冰上温育15分钟，然后用polytron匀化30秒。在4℃下以1000g(最大)旋转该悬浮液10分钟。将其上清液收集于冰上，重悬浮沉淀后如上旋转。将两次旋转所得的上清液混合，以46,000g(最大)旋转30分钟。将沉淀物重悬浮于冷Tris缓冲液(50mM Tris/Cl，pH7.0)中，再旋转。将最终的沉淀物重悬浮于膜缓冲液(50mM Tris、0.32M蔗糖、pH7.0)中。聚丙烯管中的等份物(1ml)冰冻于干冰/乙醇中并在使用前贮存于-70℃。用十二烷基硫酸钠通过改良Lowry测定法测定蛋白浓度。结合测定于37℃解冻膜，并冷却于冰上，通过25-号针头三次，稀释入结合缓冲液(50mM Tris、3mM MgCl2、1mg/ml BSA(Sigma A-7888)，pH7.4，稀释液经0.22m滤纸过滤后贮存于4℃，并向其中加入5μg/ml抑肽酶、10μM苯丁抑制素、10-μM diprotinA，无DTT)。将100μl的等份液加入冰冻的装有100μl适当放射性配体和100μl各种浓度的试验化合物的12×75mm聚丙烯管中。分别测定包含和不含10μM纳洛酮的总的(TB)和非特异性(NS)结合。将所述试管涡旋并于25℃温育60-75分钟，之后，通过GF/B滤纸(Whatman)(在0.1％聚环乙亚胺中预浸渍至少2小时)快速真空-过滤内容物，以约12ml/管的冰冷洗涤缓冲液(50mM Tris、pH7.0、3mM MgCl2)洗涤。将滤纸在包含6-7ml闪烁液的微管中浸渍至少12小时后，用β计数器测量保留在滤纸上的放射性(dpm)。如果所述测定在96-位深孔板中进行，过滤物过滤在96位PEI-浸渍的单滤纸(96-place PEI-soaked unifilters)上，用3×1ml洗涤缓冲液洗后，并于55℃烤箱中干燥2小时)。加入50μl MS-20闪烁液体/孔后，用TopCount(Packard)计数滤板。机能测定通过确定化合物受体络合物激活GPT和与受体偶联的G-蛋白的结合的程度来测定化合物的激动剂活性。在GTP结合测定中，将GTP[γ]35S与受测化合物和来自表达克隆的人阿片样物质受体的HEK-293S细胞的膜或来自经匀浆的大鼠和小鼠脑的膜结合。激动剂刺激这些膜中的GTP[γ]35S结合。由剂量反应曲线确定化合物的EC50和Emax值。通过δ拮抗剂naltrindole将剂量反应曲线右移，以检定激动剂活性是δ受体间介的。数据分析以TB-NS计算出特异性结合(SB)，存在各种测试化合物时的SB表示为对照SB的百分比。根据logit图或曲线拟合程序例如Ligand、GraphPad Prism、SigmaPlot或ReceporFit计算置换特异性结合放射性配体的配体IC50值和Hill系数(nH)。用Cheng-Prussoff方程计算Ki值。用至少三次置换曲线，反映测试配体的IC50、Ki和nH值的均值±S.E.M。生物数据列于下页的表1中。
表1生物数据 受体饱和实验用适当放射性配体(浓度为0.2-5倍于估计Kδ(如果所需放射配体量适宜的话，可高达10倍)对细胞膜进行结合试验，从而测定放射性配体Kδ值。特异性放射性配体结合表示为pmole/mg膜蛋白。根据单点模式(one-site model)由各个试验的特异性结合(B)放射性配体与nM游离(F)放射性配体的非线性拟合曲线获得具体实验的Kδ和B最大值。用Von Frey试验测定机械-异常性疼痛用Chaplan等(1994)所述的方法在08:00至16:00之间进行试验。将大鼠置于金属丝网底(可接触到其爪)之上的Plexiglas笼中，让其适应10-15分钟。试验区域为左后爪的足底中部，避开较不敏感的足垫部分。用一系列呈对数递增硬度(0.41、0.69、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51和15.14克；Stoelting，III，USA)的8 Von Frey毛发接触其爪。从网状底板的下面，垂直于足底表面使用Von Frey毛发，其用力足以使Von Frey毛发对爪产生轻微弯曲并保持约6-8秒。如爪急剧缩回则为阳性反应。毛发一移开立即退缩也认为是阳性反应。走动是不明确的反应，需要重复刺激。试验方案FCA处理组在手术后第一天对动物进行试验。用Dixon(1980)的上-下方法确定50％缩回阈值。用2.04g(处于毛发系列刺激中间)毛发开始试验。无论刺激强度是上升或下降，一直连续刺激。爪对最初选定的毛发刺激无回缩反应时，就逐渐增强刺激；若爪回缩，则选择更弱的刺激。应用这种方法计算最优阈值需要6个极为接近50％阈值的反应，当反应发生第一个变化时，例如阈值首次交叉，才开始计数这6个反应。如果阈值落在刺激范围之外，各指定15.14(正常敏感度)或0.41(最大异常性疼痛)。用常规(X＝未缩回；O＝缩回)对所得的阳性和阴性反应模式制表，有以下公式50％阈值(g)＝10(Xf+k)δ/10,000内推出50％缩回阈值，其中Xf＝最后使用的Von Frey毛发值(对数单位)；k＝阳性/阴性反应模式的表格数值(Chaplan等(1994))；而δ＝刺激的平均差值(对数单位)。此处δ＝0.224。
根据Chaplan等(1994)，将Von Frey阈值转化为最大可能作用的百分比(％MPE)。下列方程用于计算％MPE 试验物的给药在Von Frey试验前将试验物注射(皮下、腹膜内、静脉内或口服)给予大鼠，试验化合物给药与Von Frey试验时间间隔取决于所试验的化合物的性质。扭体试验对小鼠腹膜内给药时，乙酸会引起腹部收缩。然后呈现典型的机体伸展。用了止痛药后，则较少观察到所述运动，则该药选作潜在的良好侯选物。
只有出现下列情况才认为是完全典型的扭体反射所述动物未运动；后背略微降低；双爪足底表面可观察到。本试验证明本发明化合物在口服1-100μmol/kg后对扭体反应有显著抑制作用。(i)溶液制备乙酸(AcOH)将120μl乙酸加入19.88ml的蒸馏水中以得到最终体积为20ml、最终浓度为0.6％的AcOH。再将该溶液混合(涡旋)以备注射用。
化合物(药物)根据标准方法制备各化合物并溶解于最适当的载体中。(ii)溶液的给药在试验前20、30或40分钟(根据化合物的种类及其特性)，以10ml/kg(考虑平均小鼠体重)将所述化合物(药物)经口、腹膜内(i.p.)、皮下(s.c.)或静脉内(i.v.)给药。当所述化合物中枢性脑室内(i.c.v.)或鞘内(i.t.)给药时，给药量为5μl。
临试验前以10ml/Kg(考虑平均小鼠体重)AcOH在两侧腹膜内(i.p.)给药。(iii)试验观察所述动物(小鼠)20分钟，记录(扭体反射)发生次数，实验结束时进行数据汇编。将小鼠放置在带接触衬垫(bedding)的单个“鞋盒”状笼中。通常同时观察4只小鼠一只对照，三只给予药物。
权利要求
1.一种式I的化合物及其对映体和盐， 其中R1选自(ii)吡啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 中的任一个，其中各R1杂芳环可独立地被选自以下的1、2或3个取代基进一步取代直链和支链C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。
2.一种权利要求1的化合物，其中各R1杂芳环可独立地被选自以下的1、2或3个取代基进一步取代甲基、CF3、氯、氟、溴和碘。
3.一种权利要求1的化合物，其中各R1苯环和R1杂芳环可独立地被甲基进一步取代。
4.一种权利要求1的化合物，其中R1为吡啶基、噻吩基或呋喃基。
5.一种权利要求1或2的化合物，它选自N，N-二乙基-4-[[4-(2-呋喃基甲基)-1-哌嗪基](3-羟苯基)甲基]苯甲酰胺；N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(2-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰胺；和N，N-二乙基-4-{(3-羟苯基)[4-(3-噻吩基甲基)-1-哌嗪基]甲基)苯甲酰胺中的任一种。
6.一种前述权利要求中任一项的化合物，它为其盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、二三氟乙酸盐或柠檬酸盐的形式。
7.一种制备式I化合物的方法，它包括下述反应，即使通式II的化合物发生反应， 其中R为N-保护基团，P为O-保护基团如TBS或Me，首先将其N-脱保护，然后用i)通式R1-CH2-X的化合物和适当的碱；其中R1如权利要求1的定义，X为卤素，或者ii)通式R1-CHO的化合物和适当的还原剂，其中R1如权利要求1的定义，进行烷基化，并在O-脱保护之后得到通式I的化合物。
8.一种用于治疗的权利要求1的化合物。
9.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗为疼痛治疗。
10.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗针对胃肠道疾病。
11.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗针对脊柱损伤。
12.一种权利要求8的化合物，其中所述治疗针对交感神经系统疾病。
13.权利要求1的式I所示化合物用于制备治疗疼痛、胃肠道疾病或脊柱损伤的药物的应用。
14.一种药用组合物，它包含作为活性成分的权利要求1的式I所示化合物以及药理学和药学上可接受的载体。
15.一种治疗疼痛的方法，其中将有效量的权利要求1的式I所示化合物给予需要治疗疼痛的患者。
16.一种治疗胃肠道疾病的方法，其中将有效量的权利要求1的式I所示化合物给予患有所述胃肠道疾病的患者。
17.一种治疗脊柱损伤的方法，其中将有效量的权利要求1的式I所示化合物给予患有所述脊柱损伤的患者。
18.一种式II的化合物， 其中R为N-保护基如Boc或CBz，P为O-保护基如TBS或Me。
全文摘要
本申请公开并要求保护以下通式(I)化合物，其中R
文档编号C07D307/52GK1422266SQ01807719
公开日2003年6月4日 申请日期2001年3月30日 优先权日2000年4月4日
发明者W·布朗, N·普洛贝克, C·瓦尔波勒 申请人:阿斯特拉曾尼卡有限公司
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