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2021-02-01 10:02:56|
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起点商标网 专利名称：哌嗪衍生物及其盐的制作方法
技术领域：
本发明涉及新哌嗪衍生物和其盐。
从以下现有技术文献中，即EP-A2-303250和美国专利5，021，419，已知一些化学结构式与本发明哌嗪衍生物的结构式相似的哌嗪衍生物。
本发明提供新的、现有技术文献中未知的哌嗪衍生物和其盐。所述哌嗪衍生物由下列通式(1)和(2)代表 式中R1为低级烷基;
R2为苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，或下式基团
(式中R5和R6相同或不同，各自为氢原子，苯并噻唑基，或在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基;另外，所述R5、R6和与其成键的相邻氮原子可与其它氮原子或氧原子一起或无其它氮原子或氧原子存在下形成5-6元饱和杂环基;所述杂环基可有苯基作为取代基，其中苯基的苯环上可有低级烷氧基作为取代基;)R3为氢原子、低级烷基或苯基-低级烷基;和R4为羟基、苯基-低级烷氧基或四氢吡喃氧基;和 其中R7为低级烷基，在苯环上可有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，低级烷硫基取代的低级烷基，苯基-低级烷氧基取代的低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰基取代的低级烷基，或羟基取代的低级烷基;
R8为氢原子;另外，R7和R8一起可形成亚丙基;及R9为羟基或苯基-低级烷氧基。
由通式(1)和(2)代表的本发明的哌嗪衍生物和它们的盐对豚鼠的巨噬细胞受激释放的过氧化物自由基(O2)有抑制作用，还在Masugi肾炎中具有抗蛋白尿活性。因此，通式(1)和(2)代表的哌嗪衍生物和其盐是预防和治疗上述过氧化物自由基引起的各种疾病的有用试剂，例如，自身免疫病(如类风湿性关节炎)、动脉硬化、心缺血病、暂时性脑缺血、肝功能不全及肾功能不全。它们还是在各种临床领域中预防和治疗肾炎的有用试剂。
除此以外，通式(1)和(2)的哌嗪衍生物和其盐对肾小球膜细胞的繁殖具有抑制作用，后者与肾炎的发展有密切关系;因此，它们是预防和治疗繁殖性肾炎的有用试剂。
在本说明书中，通式(1)和(2)中的取代基具体如下所述。
低级烷氧基可列举C1-6直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基等。
低级烷基可列举C1-6直链或支链烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基和己基等。
在苯环上可有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，可列举这样的苯基烷基，其中烷基片段为C1-6直链或支链烷基，而且苯环上可有1-3个选自羟基、苯基-C1-6直链或支链烷氧基、C1-6直链或支链烷基、C1-6直链或支链烷氧基和卤原子的取代基，如苄基、2-苯乙基、1-苯乙基、3-苯丙基、4-苯丁基、1，1-二甲基-2-苯乙基、5-苯基戊基、6-苯基己基、2-甲基-3-苯丙基、2-(3-甲氧苯基)乙基、1-(4-甲氧苯基)乙基、2-甲氧苄基、3-(2-乙氧苯基)丙基、4-(3-乙氧苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙氧苯基)乙基、5-(4-异丙氧基苯基)戊基、6-(4-己氧基苯基)己基、3，4-二甲氧基苄基、3，4，5-三甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，5-二甲氧基苄基、1-苯基-1-羟甲基、2-羟基-2-苯乙基、3-羟基-3-苯丙基、4-羟基-4-苯丁基、1，1-二甲基-2-羟基-2-苯乙基、5-羟基-5-苯基戊基、6-苯基-6-羟基-己基、2-甲基-3-苯基-3-羟基丙基、2-(4-甲氧苯基)-2-羟乙基、2-(3-乙氧苯基-2-羟乙基、4-羟基-4-(3，4-二甲氧苯基)丁基、3-甲氧苄基、4-甲氧苄基、2，4-二乙氧基苄基、2，3-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，6-二甲氧基苄基、4-苄氧基苄基、2-(3-苄氧基苯基)乙基、1-(2-苄氧基苯基)乙基、3-[2-(2-苯基乙氧基)苯基]丙基、4-[3-(3-苯基丙氧基)苯基]丁基、1，1-二甲基-2-[4-(4-苯基丁氧基)苯基]乙基、5-[2-(5-苯基戊氧基)苯基]戊基、6-[3-(6-苯基己氧基)苯基]己基、2-羟基苄基、4-羟基苄基、2-(3-羟基苯基)乙基、1-(4-羟苯基)乙基、3-(2-羟苯基)丙基、4-(3-羟苯基)丁基、5-(2-羟苯基)戊基、6-(3-羟苯基)己基、3，4-二羟基苄基、3，4，5-三羟基苄基、3，5-二甲氧基-4-苄氧基苄基、3，5-二甲氧基-4-羟基苄基、3，5-二叔丁氧基-4-苄氧基苄基、3，5-二叔丁氧基-4-羟基苄基、2-甲基苄基、2-(3-甲基苯基)乙基、1-(4-甲基苯基)乙基、3-(2-乙基苯基)丙基、4-(3-乙基苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙基苯基)乙基、5-(4-异丙基苯基)戊基、6-(4-己基苯基)己基、3，4-二甲基苄基、3，4，5-三甲基苄基、2，5-二甲基苄基、2-氯苄基、2-(3-氯苯基)乙基、2-氟苄基、1-(4-氯苯基)乙基、3-(2-氟苯基)丙基、4-(3-氟苯基)丁基、5-(4-氟苯基)戊基、1，1-二甲基-2-(2-溴苯基)乙基、6-(3-溴苯基)己基、4-溴苄基、2-(2-碘苯基)乙基、1-(3-碘苯基)乙基、3-(4-碘苯基)丙基、3，4-二氯苄基、3，5-二氯苄基、2，6-二氯苄基、2，3-二氯苄基、2，4-二氯苄基、3，4-二氟苄基、3，5-二溴苄基、3，4，5-三氟苄基、3，5-二氯-4-羟基苄基、3，5-二甲基-4-羟基苄基和2-甲氧基-3-氯苄基等。
低级烷氧羰基可列举C1-6直链或支链烷氧羰基，如甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、异丙氧羰基、丁氧羰基、叔丁氧羰基、戊氧羰基和己氧羰基等。
苯基-低级烷氧基可列举苯基-C1-6直链或支链烷氧基，如苄氧基、2-苯基乙氧基、1-苯基乙氧基、3-苯基丙氧基、4-苯基丁氧基、1，1-二甲基-2-苯基乙氧基、5-苯基戊氧基、6-苯基己氧基和2-甲基-3-苯基丙氧基等。
作为卤原子，可列举如氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
苯基低级烷基可列举苯基-C1-6直链或支链烷基，如苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、1，1-二甲基-2-苯基乙基、5-苯基戊基、6-苯基己基和2-甲基-3-苯基丙基等。
在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，可列举咪唑基取代的C1-6直链或支链烷基，在咪唑环上可带有的取代基为苯基-C1-6直链或支链烷基，如(4-咪唑基)甲基、2-(2-咪唑基)乙基、1-(4-咪唑基)乙基、3-(5-咪唑基)丙基、4-(2-咪唑基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-咪唑基)乙基、5-(5-咪唑基)戊基、6-(2-咪唑基)己基、2-甲基-3-(4-咪唑基)丙基、(1-苄基-4-咪唑基)甲基、2-[1-(2-苯乙基)-4-咪唑基]乙基、1-[5-(1-苯乙基)-2-咪唑基]乙基、3-[1-(3-苯丙基)-5-咪唑基]丙基、4-[4-(4-苯基丁基)-2-咪唑基]丁基、5-[2-(5-苯基戊基)-4-咪唑基]戊基和6-[1-(6-苯基己基)-4-咪唑基]己基等。
在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基，可列举这样的苯基-烷基，其中烷基片段为C1-6直链或支链烷基，苯环上可带有的1-3个取代基选自C1-6直链或支链烷氧基、苯基-C1-6直链或支链烷氧基、C1-6直链或支链烷基和羟基，如苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、1，1-二甲基-2-苯基乙基、5-苯基戊基、6-苯基己基、2-甲基-3-苯基丙基、2-甲氧基苄基、3-甲氧基苄基、4-甲氧基苄基、2-(3-甲氧苯基)乙基、1-(4-甲氧苯基)乙基、2-甲氧基苄基、3-(2-乙氧苯基)丙基、4-(3-乙氧基苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙氧基苯基)乙基、5-(4-异丙氧基苯基)戊基、6-(4-己氧基苯基)己基、3，4-二甲氧基苄基、3，4，5-三甲氧基苄基、2，5-二甲氧基苄基、2，4-二乙氧基苄基、2，3-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，6-二甲氧基苄基、4-苄氧基苄基、2-(3-苄氧基苯基)乙基、1-(2-苄氧基苯基)乙基、3-[2-(2-苯基乙氧基)苯基]丙基、4-[3-(3-苯基丙氧基)苯基]丁基、1，1-二甲基-2-[4-(4-苯基丁氧基)苯基]乙基、5-[2-(5-苯基戊氧基)苯基]戊基、6-[3-(6-苯基己氧基)苯基]己基、2-羟基苄基、2-(3-羟苯基)乙基、1-(4-羟苯基)乙基、3-(2-羟苯基)丙基、4-(3-羟苯基)丁基、5-(2-羟苯基)戊基、6-(3-羟苯基)己基、3，4-二羟基苄基、3，4，5-三羟基苄基、3，5-二甲氧基-4-苄氧基苄基、3，5-二甲氧基-4-羟基苄基、3，5-二叔丁氧基-4-羟基苄基、2-甲基苄基、2-(3-甲基苯基)乙基、1-(4-甲基苯基)乙基、3-(2-乙基苯基)丙基、4-(3-乙基苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙基苯基)乙基、5-(4-异丙基苯基)戊基、6-(4-己基苯基)己基、3，4-二甲基苄基、3，4，5-三甲基苄基、3，5-二叔丁基-4-羟基苄基和3，5-二叔丁基-4-苄氧基苄基等。
由R5、R6和与它们成键的相邻氮原子一起，及有或无其它氮原子或氧原子下形成的5-6元饱和杂环基，可列举哌嗪基、吡咯烷基、吗啉基和哌啶基等。
有苯基作为取代基的上述杂环基，其中苯基可有烷氧基作为取代基，可列举这样的苯基取代的上述杂环基，其中苯基在苯环上可有1-3个C1-6直链或支链烷氧基，如4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基、4-(2，4-二甲氧苯基)哌啶、3-(2，3，4-三甲氧基苯基)吗啉基、2-(3-甲氧基苯基)吡咯烷基、2-苯基哌啶基、2-(2-乙氧基苯基)哌嗪基、3-(3-丙氧基苯基)哌啶基、2-(4-丁氧基苯基)吗啉代基、3-(2-戊氧基苯基)吡咯烷基和3-(4-己氧基苯基)哌嗪基等。
在苯环上可带有低级烷氧基取代的苯基，可列举在苯环上可有1-3个C1-6直链或支链烷氧基的苯基，如苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2-乙氧基苯基、3-乙氧基苯基、4-乙氧基苯基、3-异丙氧基苯基、4-己氧基苯基、3，4-二甲氧基苯基、2，5-二甲氧基苯基和3，4，5-三甲氧基苯基等。
在苯环上可有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，可列举苯基-C1-6直链或支链烷基，在苯环上可含有1-3个选自羟基和苯基-C1-6直链或支链烷氧基的取代基，如2-羟基苄基、3-羟基苄基、4-羟基苄基、2-(3-羟苯基)乙基、1-(4-羟苯基)乙基、3-(2-羟苯基)丙基、4-(3-羟基苯基)丁基、5-(2-羟苯基)戊基、6-(3-羟苯基)己基、3，4-二羟基苄基、3，4，5-三羟基苄基、4-苄氧基苄基、2-(3-苄氧基苯基)乙基、1-(2-苄氧基苯基)乙基、3-[2-(2-苯基乙氧基)苯基]丙基、4-[3-(3-苯基丙氧基)苯基]丁基、1，1-二甲基-2-[4-(4-苯基丁氧基)苯基]乙基、5-[2-(5-苯基戊氧基)苯基]戊基和6-[3-(6-苯基己氧基)苯基]己基等。
低级烷硫基取代的低级烷基可列举C1-6直链或支链烷硫基取代的C1-6直链或支链烷基，如甲硫基甲基、2-(甲硫基)乙基、1-(乙硫基)乙基、3-(丙硫基)丙基、4-(正丁硫基)丁基、5-(戊硫基)戊基和6-(己硫基)己基等。
苯基低级烷氧基取代的低级烷基，可列举苯基-C1-6直链或支链烷氧基取代的C1-6直链或支链烷基，如苄氧基甲基、2-(2-苯基乙氧基)乙基、1-(1-苯基乙氧基)乙基、3-(3-苯基丙氧基)丙基、4-(4-苯基丁氧基)丁基、5-(5-苯基戊氧基)戊基、6-(6-苯基己氧基)己基、(2-甲基-3-苯基丙氧基)甲基和(1，1-二甲基-2-苯基乙氧基)甲基等。
低级烷氧羰基-低级烷基可列举C1-6直链或支链烷氧羰基-C1-6直链或支链烷基，如甲氧羰基甲基、3-甲氧羰基丙基、乙氧羰基甲基、4-乙氧羰基丁基、1-乙氧羰基乙基、1-甲氧羰基乙基、6-丙氧羰基己基、5-异丙氧羰基戊基、1，1-二甲基-2-丁氧羰基乙基、2-甲基-3-叔丁氧羰基丙基、2-戊氧羰基乙基和己氧羰基甲基等。
羟基取代的低级烷基可列举含1-3个羟基作为取代基的C1-6直链或支链烷基，如羟甲基、2-羟乙基、1-羟乙基、3-羟丙基、2，3-二羟基丙基、4-羟基丁基、1，1-二甲基-2-羟基乙基、5，5，4-三羟基戊基、5-羟基戊基、6-羟基己基、1-羟基异丙基、2-甲基-3-羟基丙基、2，3-二羟基乙基、3，4-二羟基丁基和5，6-二羟基己基等。
可用各种方法制备本发明的通式(1)和(2)代表的哌嗪衍生物。这些方法的优选实例如下所示。
反应式-1 (其中R1、R3、R4、R5和R6同上所定义)。
化合物(3)和(4)之间的反应按一般的酰胺键生成反应来进行。酰胺键形成反应可以用各种已知方法进行，例如(a)混合酸酐法，如包括羧酸(3)与卤代羧酸烷基酯反应，然后将生成的混合酸酐与胺(4)反应，(b)活性酯法，如包括将羧酸(3)转化为活性酯(如对硝基苯基酯、琥珀酰亚胺酯或苯并噻唑-1-基酯)，然后活性酯与胺(4)反应，(c)碳化二亚胺法，包括羧酸(3)和胺(4)在活化试剂如二环己基碳化二亚胺、N，N-羰基-二咪唑或类似物存在下缩合，及(d)其它方法。其它方法(d)包括，例如用脱水剂(如醋酸酐)将羧酸(3)转化为酸酐，然后酸酐与胺(4)反应的方法，和羧酸(3)与低级醇反应，然后生成的酯与胺(4)在高温高压下反应的方法。还可以使用包括用磷化合物如三苯膦、氯代磷酸二乙酯或类似物将羧酸(3)活化，然后生成物与胺(4)反应的方法。还可以使用包括用乙炔化合物如三甲基甲硅烷基乙氧基乙炔或类似物活化羧酸(3)，然后生成物与胺(4)反应的方法。
在混合酸酐法(a)中，所用混合酸酐可用一般的Schotten-Bauman反应制备。一般酸酐不经分离直接与胺(4)反应，从而生成了通式(1a)的化合物。Schotten-Baumnn反应在碱化合物存在下进行。碱化合物为一般用在Schotten-Baumnn反应中的化合物，例如包括有机碱如三乙胺、三甲胺、吡啶、二甲基苯胺、N-甲基吗啉、4-二甲氨基吡啶、1，5-二氮杂双环[4，3，0]壬烯-5(DBN)、1，8-二氮杂双环[5，4，0]十一烯-7(DBU)、1，4-二氮杂双环[2，2，2]辛烷(DABCO)及类似物，和无机碱如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠及类似物。反应在-20℃到100℃，优选0-50℃下进行约5分钟到10小时，优选约5分钟到2小时。生成的混合酸酐与胺(4)的反应在-20℃到150℃，优选在10-50℃下进行约5分钟到10小时，优选约5分钟到5小时。混合酸酐法(a)在有适当溶剂或混合溶剂存在下或无任何溶剂存在下进行。该溶剂可为一般用于混合酸酐法中的任何溶剂，例如卤代烃如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷等;芳香烃如苯、甲苯、二甲苯等;醚如乙醚、二噁烷、二异丙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;非质子极性溶剂如1，1，3，3-四甲基脲、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺和类似物。用于混合酸酐法(a)中的α-卤代羧酸烷基酯包括，例如氯代甲酸甲酯、溴代甲酸甲酯、氯代甲酸乙酯、溴代甲酸乙酯和氯代甲酸异丁酯。卤代羧酸烷基酯的用量一般为至少1mol，优选1-1.5mol/mol胺(4)。羧酸(3)的用量一般为每mol胺(4)至少1mol，优选约1-1.5mol。
活性酯法(b)，例如使用琥珀酰亚胺基酯时，在有或无碱化合物存在下、在对反应无不利影响的非质子极性溶剂中进行。可向此反应系统中加入缩合剂如二环己基碳化二亚胺、N，N-羰基二咪唑、1-乙基-3-(3'-二甲氨基丙基)碳化二亚胺等。对于碱化合物，可以使用用于Schotten-Baumann反应中的任何碱化合物。还可以使用羧酸碱金属盐如醋酸钠、苯甲酸钠、甲酸钠、醋酸钾、苯甲酸锂、醛酸铯等;碱金属卤化物如氟化钾、氟化铯等;等。溶剂的具体实例为卤代烃如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷等;芳烃如苯、甲苯、二甲苯等;醚如乙醚、二噁烷、四氢呋喃、二甲氧基乙烷等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;非质子极性溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺等;及其混合溶剂。反应在-0-200℃，优选在10-150℃下进行，在1小时到3.5天内完成。胺(4)与琥珀酰亚胺酯的适宜比例为每摩尔琥珀酰亚胺酯一般用至少1mol胺(4)，优选1-2mol/mol。
化合物(1a)还可通过羧酸(3)与胺(4)在磷化合物作为缩合剂存在下反应来获得，磷化合物如为三苯膦-2，2'-二吡啶基二硫化物、氯代磷酸二乙酯、二苯基氧膦基氯、苯基N-苯基磷酰胺氯化物、氰基磷酸二乙酯、二(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酸氯化物等。碱化合物可用广为人知的碱化合物，如用于Schotten-Baumann反应的碱化合物，氢氧化钠和氢氧化钾。溶剂可列举，如用于混合酸酐法(a)中的溶剂、吡啶、丙酮、乙腈及其中两种或多种溶剂的混合物。反应一般在约-20℃到150℃下，优选在约0-100℃下进行，一般在约5分钟到30小时内完成。对于缩合剂和羧酸(3)的适当用量，两者均为每mol胺(4)用至少1mol，优选约1-2mol。
化合物(1a)还可通过羧酸(3)与胺(4)在缩合剂存在下反应而制得。该反应在有或无催化剂存在下在适当溶剂中进行。溶剂可列举卤代烃(如二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿和四氯化碳)、乙腈和N，N-二甲基甲酰胺。催化剂可列举有机碱(如4-二甲氨基吡啶和4-哌啶子基吡啶)、盐(如对甲苯磺酸吡啶鎓盐)、樟脑磺酸和氧化汞(Ⅱ)。对于缩合剂可列举，如乙炔化合物如三甲基甲硅烷基乙氧基乙炔等。缩合剂的用量每mol胺(4)一般为1-10mol，优选2-6mol。羧酸(3)的用量每mol胺(4)一般为至少1mol，优选约1-2mol。该反应一般在约0-150℃下，优选在约室温到100℃下进行。一般在约1-10小时内完成。
作为起始物的化合物(3)例如可通过如下反式制备。
反应式-2
(其中R1同上所定义;R10a和R10b各自为低级烷基;R3a为低级烷基或苯基-低级烷基;R3b为苯基-低级烷基;R4a为四氢吡喃氧基;R4b为苯基-低级烷氧基;X为卤原子;R11为苯基-低级烷基;及R12为低级烷基或苯基-低级烷基)。
化合物(5)与化合物(6)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的反应条件下进行。化合物(7)转化为化合物(7a)的反应在与下述反应式-6中化合物(20)转化为化合物(21)的反应中相同的反应条件下进行。
化合物(7)或(7a)转化成化合物(8)的反应是这样进行的，先在酸存在下在适当溶剂中还原化合物(7)或(7a)，然后将还原产物环化。用于还原反应的溶剂可列举水、醋酸、低级醇(如甲醇、乙醇和异丙醇)和醚(如四氢呋喃、乙醚、二噁烷和二甘醇二甲醚)。酸可列举无机酸(如氢氯酸)和有机酸(如醋酸)。还原剂可列举氢化物还原剂如硼烷-三甲基胺、氰基硼氢化钠等。对于每摩尔化合物(7)或(7a)，氢化物还原剂的用量为至少1mol，优选1-2mol。反应一般在0-100℃下，优选在约0-70℃下进行，在约1-30小时内完成。
接下来的环化在适当溶剂中进行。该溶剂与用于羧酸(3)的卤化物与胺(4)的反应中的溶剂相同。反应一般在室温到200℃下，优选约50-150℃下进行，在约0.5-10小时内完成。
化合物(8)与化合物(11)的反应在酸存在下在适当溶剂中进行。溶剂可列举卤代烃如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳等;醚如乙醚、四氢呋喃、二噁烷、乙二醇单甲醚等;芳烃如苯、甲苯、二甲苯等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;酮如丙酮、甲乙酮等;极性溶剂如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺等;及它们的混合溶剂。酸可举出无机酸(如氢氯酸、硫酸和氢溴酸)和有机酸(如对甲苯磺酸)。对每摩尔化合物(8)，化合物(11)的适当用量一般为至少1mol，优选为1-2mol。反应一般在0-100℃下，优选在约0-70℃下进行，一般在约0.5-10小时内完成。
化合物(8)与化合物(9)的反应在碱化合物存在下在适当溶剂中进行。溶剂可列举水;低级醇如甲醇、乙醇、丙醇等;醚如乙醚、四氢呋喃、二噁烷、乙二醇单甲醚等;芳烃如苯、甲苯、二甲苯等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;酮如丙酮、甲乙酮等;极性溶剂如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺等;及它们的混合溶剂。碱化合物可列举无机碱如氢氧化钠、氢氧化钾碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢化钠等;碱金属如钠、钾等;碱金属醇化物如乙醇钠、甲醇钠等;有机碱如三乙胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基吗啉、4-甲氨基吡啶、DBN、DBU、DABCO等。对于每摩尔化合物(8)，化合物(9)的用量一般为至少1mol，优选1-5mol。反应一般在0.5-20小时内完成。
化合物(12)与(13)的反应在与化合物(8)与(9)的反应中相同的条件下进行。
(其中R1、R3、R4和R10a同上所定义)。
化合物(15)转化成化合物(3)的反应通过一般水解进行。具体讲，水解在酸如无机酸(如硫酸、盐酸或硝酸)、有机酸(如醋酸或芳香磺酸)等，或碱化合物(如碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钡等存在下，在溶剂中进行，其中溶剂如有水、醇(如甲醇、乙醇或异丙醇)、酮(如丙酮或甲乙酮)、醚(如二噁烷或乙二醇二甲醚)、醋酸或其混合溶剂。反应一般在约0-200℃下，优选在约室温到150℃下进行，一般在约0.5-15小时内完成。
其中R4和/或R4b为羟基的化合物(1)、(1a)和(10)可通过还原其中R4和/或R4b为苯基-低级烷氧基的化合物(1)、(1a)和(10)来制备。例如将原料化合物在催化剂存在下在适当溶剂中进行催化氢化。溶剂例如可列举水;醋酸;醇如甲醇、乙醇、异丙醇等;烃如己烷、环己烷等;醚如二噁烷、四氢呋喃、乙醚、乙二醇二甲醚等;酯如乙酸乙酯、乙酸甲酯等;非质子极性溶剂如二甲基甲酰胺等;及它们的混合溶剂。催化剂例如可列举钯、钯黑、钯碳、铂、氧化铂、铬酸铜和Raney镍。催化剂的适宜用量一般为起始原料重的约0.02-1倍。反应温度一般为约-20℃到100℃，优选约0-80℃;氢气压力一般为1-10大气压;反应一般在约0.5-20小时内完成。
其中R4和/或R4b为羟基的化合物(1)、(1a)和(10)可通过水解其中R4和/或R4b为四氢吡喃氧基的化合物(1)、(1a)和(10)来制备。此水解在酸存在下在适当溶剂中或不用任何溶剂来进行。可使用任何对反应无不利影响的溶剂，例如可例举水;卤代烃如二氯甲烷、氯仿等;低级醇如甲醇、乙醇、异丙醇等;酮如丙酮、甲乙酮等;醚如二噁烷、四氢呋喃、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚等;脂肪酸如甲酸、乙酸等;及它们的混合溶剂。酸可列举例如无机酸如氢氯酸、硫酸、氢溴酸等;和有机酸如甲酸、三氟乙酸、乙酸、芳磺酸等。对酸的用量没有特别限制、可在较宽范围内适当选择，但较好相对原料为等摩尔到大大过量，优选为约10-20mol/mol原料。反应一般在约0-200℃下，优选在约室温到150℃下进行有利，一般在约5分钟到5小时内完成。
反应式-4
(其中R1、R2、R3和R4同上所定义)。
化合物(16)转化成化合物(1)的反应在与反应式-1中化合物(3)与化合物(4)的反应中相同的条件下进行。
用作起始物的化合物(16)例如可用下述反应式所示方法制备。
反应式-5 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义;R12为氢原子、低级烷基或含低级烷基的甲硅烷基)。
化合物(17)与(18)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。
其中R12为低级烷基的化合物(19)转化为(16)的反应在与反应式-3中化合物(5)转化为(3)的反应中相同的条件下进行。另外，当R12为含低级烷基的甲硅烷基时，该反应在与R4为四氢吡喃氧基的化合物(1)转化为R4为羟基的化合物(1)的反应中相同的条件下进行。
反应式-6 (其中R1、R4、R5、R6、R10a和R10b同上所定义)。
化合物(5)与化合物(18)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。化合物(20)转化成化合物(21)的反应在与反应式-3中化合物(15)转化为化合物(3)的反应中相同的条件下进行。但在此反应中，对每摩尔化合物(20)碱化合物的用量优选为1mol。化合物(21)与(4)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。
反应式-7 (其中R1、R2、R3、R4和R10a同上所定义)。
化合物(17a)与化合物(6a)的反应在与反应式-2中化合物(5)与(6)的反应中相同的条件下进行。化合物(22)转化为化合物(23)的反应在与反应式-3中化合物(15)转化为化合物(3)的反应中相同的条件下进行。化合物(22)转化为化合物(1)的反应和化合物(23)转化为化合物(1)的反应都在反应式-2中化合物(7)转化为化合物(8)的反应中相同的条件下进行。
反应式-8 (其中R7、R8、R9和R10a同上所定义)。
化合物(24)与(25)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。化合物(26)转化为(2)的反应在与反应式-2中化合物(7)转化为(8)的反应中相同的条件下进行。
反应式-9
(其中R7、R8、R9和R10a同上所定义)。
化合物(27)与(25)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。化合物(28)转化为(29)的反应在与反应式-3中化合物(15)转化为化合物(3)的反应中相同的条件下进行。化合物(29)转化为(2)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。
还原R9为苯基-低级烷氧基的化合物(2)可制得R9为羟基的化合物(2)。该还原在与R4为苯基-低级烷氧基的化合物(1)的还原中相同的条件下进行。
其中R2、R5或R6为苯环上带有至少一个羟基取代基的苯基-低级烷基的化合物(1)，可通过还原其中R2、R5和R6为苯环上带有至少一个苯基-低级烷氧基的苯基-低级烷基的化合物(1)来制备。其中R7为在苯环上带有至少一个羟基取代基的苯基-低级烷基，或为羟基取代的低级烷基的化合物(2)，可通过还原其中R7为在苯环上带有至少一个苯基-低级烷氧基的苯基-低级烷基，或为苯基-低级烷氧基取代的低级烷基的化合物(2)来制备。在与R4为苯基-低级烷氧基的化合物(1)的还原中相同的条件下进行这些还原。
在式(1)和(2)代表的本发明化合物中，带有碱性基团的化合物可容易地与药理上可接受的酸反应制成酸加成盐。例如可举出下列酸无机酸如氢氯酸、硫酸、磷酸、氢溴酸等;和有机酸如草酸、醋酸、琥珀酸、丙二酸、甲磺酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸等。
在式(1)和(2)代表的本发明化合物中，具有酸性基团的化合物可容易地与药理上可接受的碱化合物反应制成盐。例如可举出如下碱化合物氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠、碳酸氢钾等。
上述反应式中得到的目标化合物可用常规方法容易地从反应系统中分离和纯化。例如分离方法有溶剂萃取、稀释、重结晶、柱层析和制备性薄层层析。
当然，本发明化合物包括光学异构体和立体异构体。
通式(1)和(2)的每种化合物一般以普通药物制剂形式使用。用常用稀释剂或赋形剂如填充剂、增量剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等制备药物制剂。根据治疗目的可制备各种形式的药物制剂，典型剂型包括片剂、丸剂、粉剂、溶液、悬液、乳剂、粒剂、胶囊、栓剂、针剂(如溶液或悬液)等。制备片剂时可使用本领域中已知的各种载体，例如赋形剂有乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、脲、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素、硅酸等;粘合剂有水、乙醇、丙醇、简单糖浆、葡萄糖溶液、明胶溶液、羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等;崩解剂如干淀粉、藻酸钠、琼脂粉、海带多糖分、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧亚乙基脱水山梨糖-脂肪酸酯、月桂基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、淀粉、乳糖等;崩解抑制剂如白糖、硬脂精、可可脂、氢化油等;吸收促进剂如季铵盐、月桂基硫酸钠等;湿润剂如甘油、淀粉等;吸附剂如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土、胶态硅酸等;及润滑剂如精制滑石、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇等。
根据需要，可将片剂制成普通包衣片剂形式，如糖包衣片剂、明胶包衣片剂、肠溶包衣片剂或膜包衣片剂，或呈双层片剂或多层片剂形式。在制备丸剂时可使用本领域中已知的各种载体，例如赋形剂有葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高岭土、滑石等;粘合剂如粉状阿拉伯树胶、粉状黄蓍胶、明胶、乙醇等;崩解剂有海带多糖、琼脂等。在制备栓剂时，可使用各种已知载体，例如聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇酯、明胶和半合成甘油酯。在制备针剂(溶液、乳液或悬液)时，将溶液和悬液灭菌，并最好使其与血液等渗。在制备溶液、乳液或悬液时，可使用常用于本领域的所有稀释剂，如水、乙醇，丙二醇，乙氧化的异硬脂醇、多氧基-异硬脂醇和聚氧亚乙基脱水山梨醇-脂肪酸酯。在此情形下，针剂可含有足量的氯化钠、葡萄糖或甘油以使该针剂等渗，另外还可以含有所有常用助溶剂、缓冲液、光滑剂等。根据需要，本药物制剂还可以含有着色剂、防腐剂、香料、香味剂、增甜剂和其它药物。
对药物制剂中通式(1)和(2)的化合物的含量没有特别限制，可在较宽范围内适当选择，但相对药物制剂的重量，其含量一般为1-70%(重量)，优选为1-30%(重量)。
对此药物制剂的给药方法没有特别限制。这取决于剂型、病人的年龄、性别和其它条件、病人的疾病状况等。例如，片剂、丸剂、溶液、悬液、乳液、粒剂或胶囊为口服给药。针剂可单独或与葡萄糖、氨基酸等一般辅助溶液混合静脉内给药，或根据需要通过肌内、真皮内、皮下或腹膜内单独给药。栓剂为直肠内给药。
根据给药方法、病人的年龄、性别和其它条件、病人的疾病状态等适当地选择药物制剂的剂量，但适宜剂量以活性成份即通式(1)和(2)的化合物的量而言，一般为约0.5-30mg/kg体重/天。在每单位给药剂型中活性成份的适宜含量为约10-1000mg。
以下参考制剂实施例、参考实施例、实施例和药理试验更具体地说明本发明。
制剂实施例1(3RS，6RS)-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮150.0g柠檬酸1.0g乳糖33.5g磷酸二钙70.0gPluronicF-68(BASF-WyandottCorp.，N.J.，U.S.A制造的聚乙二醇的商标)30.0g月桂基硫酸钠15.0g
聚乙烯吡咯烷酮15.0gCarbowax1500(UnionCarbideCorp.，N.Y.，U.S.A制造的聚乙二醇的商标)4.5gCarbowax6000(UnionCarbideCorp.，N.Y.，U.S.A制造的聚乙二醇的商标)45.0g玉米淀粉30.0g干月桂基硫酸钠3.0g干硬脂酸镁3.0g乙醇足量混合本发明化合物、柠檬酸、乳糖、磷酸二钙、PluronicF-68和月桂基硫酸钠。
将混合物筛过-NO.60的筛，将过筛物用含聚乙烯吡咯烷酮、Carbowax1500和Carbowax6000的乙醇溶液进行湿法制粒。根据需要加入乙醇，将生成物制成浆状块。向此块中加入玉米淀粉，继续混合直到形成大小均一的颗粒。将这些颗粒过-NO.10筛，将过筛后的颗粒置于一盘上，在炉中100℃干燥12-14小时。将干燥颗粒筛过-NO.16筛，向过筛后的颗粒中加入干月桂基硫酸钠和干硬脂酸镁。充分混合整个混合物，用压片机压缩成所希望的形式，得到的片剂作为包衣片剂的核心部分。
此核心部分用清漆处理，处理后的表面用滑石包衣以防止此表面吸收水分。形成的核部分的表面再用基本包衣物包衣。再用清漆包衣，制得口服片剂需要多次包衣。为了得到具有光滑表面的完全球形的最终片剂，包衣片剂再用基本包衣物和光滑剂包衣。形成的片剂用着色剂包衣片剂，直到表面具有所希望的颜色。包衣片剂干燥后，将其表面抛光，以制得具有均一光泽的片剂。
参考实施例1将240ml7N氢氯酸(乙醇溶液)滴加到240ml含18.46gN-(2-羟基亚氨基-4-甲基戊酰基)氨基丙二酸二乙酯和5.49g硼烷-三甲胺的乙醇溶液(用冰冷却)中。在室温下搅拌此混合物15小时。将反应混合物在室温下真空蒸馏以除去溶剂。用二氯甲烷溶解残余物。形成的溶液依次用饱和氯化钠水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，并且进行蒸馏以除去溶剂。将生成的黄色油状物质溶解在120ml甲苯中。将溶液回流1小时，再进行蒸馏除去溶剂。19.02g生成的橙色油状物用硅胶柱层析纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到2.94g橙色油状物3-乙氧基羰基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，1.20(1.4H，d，J＝7Hz)，1.21(0.6H，d，J＝7Hz)，1.60-1.85(2H，m)，1.85-2.05(1H，m)，4.01(1H，t，J＝6.5Hz)，4.16(2H，q，J＝7Hz)，4.65(0.7H，d，J＝3.5Hz)，4.82(0.3H，s)，8.56(0.7H，d，J＝8Hz)，8.60(0.3H，brs)，10.30(1H，brs)参考例2用冰冷却下，将7.60g碳酸钾和6.3ml苄基氯加到100ml含9.57g3-乙氧基羰基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮的无水N，N-二甲基甲酰胺溶液中。室温下搅拌混合物16小时。反应混合物用450ml乙酸乙酯稀释，然后用饱和氯化钠水溶液洗涤三次，再用无水硫酸镁干燥。将形成的溶液蒸馏除去溶剂。静置残余物。过滤收集生成的结晶，用甲醇洗涤，得到4.51g无色柱状结晶(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-乙氧羰基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.80(3H，d，J＝6.5Hz)，0.81(3H，d，J＝6.5Hz)，1.32(3H，t，J＝＝7Hz)，1.60-1.80(2H，m)，1.80-2.00(1H，m)，3.32，3.65(each 1H，d，J＝14Hz)，3.59(1H，dd，J＝6Hz，7Hz)，4.29(2H，q，J＝7Hz)，4.51，4.80(each 1H，d，J＝10.5Hz)，6.55-6.95(1H，br)，7.06(2H，d，J＝7Hz)，7.20-7.50(8H，m)
参考实施例3将5.3ml 1N氢氧化钠加到25ml含2.32g(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-乙氧羰基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮的乙醇溶液中。在室温下搅拌混合物1.5小时。用1N盐酸调节反应混合物到pH3。向其中加入80ml乙酸乙酯和80ml水以进行分配。有机层用无水硫酸镁干燥，然后室温下真空蒸馏以除去溶剂，得到2.17g浅黄色固体(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-羧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.70(3H，d，J＝6.5Hz)，0.71(3H，d，J＝6.5Hz)，1.50-1.65(2H，m)，1.65-1.85(1H，m)，3.07，3.53(each 1H，d，J＝13.5Hz)，3.43(1H，t，J＝6Hz)，4.34，4.58(each 1H，d，J＝10.5Hz)，6.94(2H，d，J＝6.5Hz)，7.10-7.45(9H，m)，8.87(1H，brs)用适当的起始物以参考实施例3中相同的方法得到了下述化合物。棕色油状物(3RS，6SR)-3-羧基-6-异丁基-3-甲基-1-(2-四氢呋喃氧基)哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.96(3H，d，J＝6Hz)，0.97(3H，d，J＝6Hz)，1.45-2.00(9H，m)，1.78(1.5H，s)，1.83(1.5H，s)，3.55-3.75(1H，m)，3.80-3.95(1H，m)，4.50-4.70(1H，m)，5.05-5.20(1H，m)，6.71(2H，brs)参考实施例4将0.45g水合对甲苯磺酸加到60ml含6.15g3-乙氧基羰基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮和4ml 3，4-二氢-2H-吡喃的无水二氯甲烷溶液中。室温下搅拌此混合物4小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸镁干燥。形成的混合物进行蒸馏以除去溶剂，得到9.67g橙色油状物3-乙氧羰基-6-异丁基-1-(2-四氢吡喃氧基)哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，，250 MHz)δppm0.97(3H，t，J＝7Hz)，0.98(3H，t，J＝7Hz)，1.33(3H，t，J＝7Hz)，1.45-1.95(9H，m)，3.55-3.70(1H，m)，3.80-3.95(1H，m)，4.20-4.40(2H，m)，4.5-4.60(1H，m)，4.65-4.80(1H，m)，5.15-5.22(1H，m)，6.72(1H，brs)参考实施例5
将1.04g 60%氢化钠加到100ml含9.67g3-乙氧羰基-6-异丁基-1-(2-四氢吡喃氧基)哌嗪-2，5-二酮的无水N，N-二甲基亚砜溶液(用冰冷却)中，并搅拌混合物10分钟。向其中加入3.5ml碘甲烷。室温下搅拌混合物5小时。反应混合物用冰冷却，倾入饱和氯化铵水溶液中。用乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和氯化钠水溶液洗三次，用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到8.53g棕色油状物(3RS，6SR)-3-乙氧羰基-6-异丁基-3-甲基-1-(2-四氢呋喃氧基)哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.98(3H，d，J＝6.5Hz)，0.99(3H，d，J＝6.5Hz)，1.26(1.5H，t，J＝7Hz)，1.31(1.5H，t，J＝7Hz)，1.45-1.90(9H，m)，1.71(1.5H，s)，1.75(1.5H，s)，3.60-3.70(1H，m)，3.85-3.95(1H，m)，4.25(2H，q，J＝7Hz)，4.50-4.60(1H，m)，5.00-5.20(1H，m)参考实施例6将14.86g二环己基碳化二亚胺加到200ml含17.07gN-苄氧亮氨酸和9.09gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时。过滤除去不溶物。向滤液中加入28.94g(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯。室温下搅拌混合物12小时。用1，000ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。用硅胶柱层析纯化残余物(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/6-1/4)，得到34.63g棕色油状物N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.75-0.95(6H，m)，1.22(1.6H，t，J＝7Hz)，1.26(0.4H，t，J＝7Hz)，1.30-1.50(1H，m)，1.39(14.4H，s)，1.40(3.6H，s)，1.50-1.70(1H，m)，3.01，3.10(each 1H，dd，J＝6Hz，14Hz)，3.35-3.55(1H，m)，4.05-4.25(2H，m)，4.43，4.53(each 0.2H，d，J＝12Hz)，4.61，4.71(each 0.8H，d，J＝12Hz)，4.75-4.95 91H，m)，5.10(0.2H，s)，5.12(0.8，s)，5.59(0.8H，d，J＝4.5Hz)，5.67(0.2H，d，J＝6Hz)，6.74(0.2H，d，J＝8.5Hz)，6.91(1.6H，s)，6.92(0.4H，s)，7.02(0.8H，d，J＝8.5Hz)，7.20-7.45(5H，m)参考实施例7用适当起始物以参考实施例6中相同的方法得到了下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(3'，5'-二甲氧基)酪氨酸乙酯，无色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85，0.87(each 2.4H，d，J＝6.5Hz)，0.86，0.91(each 0.6H，d，J＝6.5Hz)，1.15-1.50(5H，m)，1.50-1.65(1H，m)，3.00-3.20(2H，m)，3.49(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝8Hz)，3.82(6H，s)，4.10-4.30(2H，m)，4.46，4.56(eadch 0.2H，d，J＝12Hz)，4.63，4.72(each 0.8H，d，J＝12Hz)，4.91(1H，dt，J＝6Hz，J＝98Hz)，5.46(1H，brs)，6.35(1.6H，s)，6.38(0.4H，s)，6.92(0.2H，d，J＝8Hz)，7.02(0.8H，d，J＝8Hz)，7.15-7.50(5H，m)N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(3'，5'-二甲基)酪氨酸乙酯，黄色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85，0.87(each 0.6H，d，J＝6Hz)，0.86，0.89(each 2.4H，d，J＝7Hz)，1.27(3H，t，J＝7Hz)，1.20-1.45(2H，m)，1.55-1.70(1H，m)，2.15(1.2H，s)，2.17(4.8H，s)，2.90-3.15(2H，m)，3.40-3.55(1H，m)，4.10(2H，q，J＝7Hz)，4.64，4.74(each 1H，d，J＝12Hz)，4.86(1H，dt，J＝5.5Hz，J＝8Hz)，5.66(1H，brs)，6.73(1.6H，s)，6.76(0.4H，s)，6.81(0.2H，d，J＝9.5Hz)，7.00(0.8H，d，J＝8Hz)，7.20-7.45(5H，m)参考实施例8在氮气氛下，将13.2ml三乙胺和6ml氯化三甲基甲硅烷加到11.78g(2'，4'-二甲氧基)苯丙氨酸盐酸盐在无水二氯甲烷中的150ml悬液中。将混合物回流1.5小时。另外将9.28g二环己基碳化二亚胺加到10.68gN-苄氧基亮氨酸和5.18gN-羟基琥珀酰亚胺在无水二噁烷中的100ml溶液中。室温搅拌此混合物2小时。过滤除去生成的不溶物，室温下将滤液加入上述回流后的反应混合物中。搅拌形成的混合物12小时。用1，200ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用1N盐酸、氯化钠饱和水溶液、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，真空蒸馏除去溶剂，得到17.40g浅棕色玻璃样物质N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(2'，4'-二甲氧基)苯丙氨酸。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.82，0.85(each 1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.87，0.92(each 1.5H，d，J＝6.5Hz)，1.05-1.30(2H，m)，1.45-1.60(1H，m)，3.05-3.02(1H，m)，3.35-3.55(1H，m)，3.74(3H，s)，3.75(3H，s)，3.90-4.05(0.5H，m)，4.10-4.25(0.5H，m)，4.50-4.80(3H，m)，6.30-6.50(2H，m)，7.01(1H，d，J＝8Hz)，7.15-7.40(5H，m)用适当起始物以参考实施例8中的相同方法得到了下述参考实施例9的化合物。
参考实施例9将64ml 2N氢氧化钠溶液加到34.63gN-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯的乙醇溶液中。在室温下搅拌此混合物1.5小时。用浓盐酸调节其pH至1。向其中加入500ml水。混合物用乙酸乙酯萃取2次，萃取液用饱和氯化钠水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到32.83g棕色油状物N-(N-苄氧基亮氨酸)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.82(3H，d，J＝6.5Hz)，0.84(3H，d，J＝6.5Hz)，1.10-1.37(2H，m)，1.39(18H，s)，1.45-1.65(1H，m)，2.99(0.43H，dd，J＝7Hz，J＝14Hz)，3.16(0.43H，dd，J＝5.5Hz，J＝14Hz)，3.04-3.28(0.15H，m)，3.42(0.15H，dd，J＝6Hz，J＝8Hz)，3.51(0.85H，dd，J＝5Hz，J＝9Hz)，4.35，4.42(each 0.15H，d，J＝12Hz)，4.53，4.60(each 0.85H，d，J＝12Hz)，4.70-4.90(1H，m)，5.13(1H，brs)，6.94(2H，s)，6.96(1H，d，J＝9Hz)，7.15-7.45(5H，m)用适当起始物，利用参考实施例9中相同的方法制得了参考实施例8的化合物。
参考实施例10用适当的起始物用与参考例8和9中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'，5'-二甲氧基)酪氨酸，无色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.83(3H，d，J＝6Hz)，0.85(3H，d，J＝6Hz)，1.15-1.45(2H，m)，1.45-1.65(1H，m)，3.04(1H，dd，J＝6.5Hz，J＝14Hz)，3.16(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝14Hz)，3.52(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，3.79(3H，s)，3.80(3H，s)，4.40，4.48(each 0.2H，d，J＝12Hz)，4.75-5.00(1H，m)，6.39(1.6H，s)，6.42(0.4H，s)，6.10-6.90(2H，br)，6.98(0.2H，d，J＝7Hz)，7.08(0.8H，d，J＝7.5Hz)，7.15-7.40(5H，m)N-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'5'-二甲基)酪氨酸，白色固体1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.80(3H，d，J＝6.5Hz)，0.86(3H，d，J＝6.5Hz)，1.30-1.45(2H，m)，1.50-1.70(1H，m)，2.03(6H，s)，2.77(1H，dd，J-7.5Hz，J＝14Hz)，2.87(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝14Hz)，3.83(1H，t，J＝8Hz)，4.44(1H，dd，J＝5Hz，J＝8Hz)，4.80(2H，s)，76.70(2H，s)，7.20-7.40(5H，m)，8.45(1H，brs)(N-苄氧基-DL-色氨酰)-L-丝氨酸，棕色泡沫样物质1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm2.80-3.00(1H，m)，3.00-3.15(1H，m)，3.45-3.65(1H，m)，3.65-3.85(1H，m)，3.90-4.05(1H，m)，4.30-4.45(1H，m)，4.67，4.73(1H，d，J＝11Hz)，6.97(1H，t，J＝7.5Hz)，7.07(1H，t，J＝7Hz)，7.17(1H，d，J＝7Hz)，7.29(5H，s)，7.34(1H，d，J＝8Hz)，7.55(1H，d，J＝8Hz)，8.21(1H，d，J＝8Hz)，10.87(1H，brs)
参考实施例11将26.82g二环己基碳化二亚胺加到含34.47g(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸甲酯、18.87g2-羟亚氨基-4-甲基戊酸和14.96gN-羟基琥珀酰亚胺的1升无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物18小时，过滤，滤液进行蒸馏除去溶剂。用硅胶柱层析纯化残余物(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/2)，得到42.70g白色粉末N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸甲酯。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.90(6H，d，J＝6.5Hz)，1.90-2.11(1H，m)，2.52(2H，d，J＝7.5Hz)，3.02-3.18(2H，m)，3.74(3H，s)，3.81(6H，s)，3.82(3H，s)，4.91(1H，dt，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，6.32(2H，s)，7.17(1H，d，J＝8.5Hz)，7.83(1H，brs)参考实施例12用适当的起始物，用与参考例11中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯，白色粉末
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.90(6H，d，J＝6.5Hz)，1.21(3H，t，J＝7Hz)，1.28(18H，s)，1.80-2.15(1H，m)，2.52(2H，d，J＝7.5Hz)，3.00(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.07(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，4.00-4.23(2H，m)，4.82(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，5.10(1H，s)，6.89(2H，s)，7.15(1H，brd，J＝8.5Hz)，7.56(1H，brs)N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-2-苯丙氨酸甲酯，无色针晶，熔点71-73℃N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-O-苄基-L-酪氨酸甲酯，无色针晶，熔点108-110℃N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，5'-二氯)-L-酪氨酸乙酯，白色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.91(6H，d，J＝6.5Hz)，1.27(3H，t，J＝7Hz)，1.90-2.10(1H，m)，2.52(2H，d，J＝7.5Hz)，2.98(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.08(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，4.20，4.21(each 1H，q，J＝7Hz)，4.81(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，5.86(1H，s)，7.03(2H，s)，7.26(1H，d，J＝8Hz)，8.24(1H，brs)
N-苄基-N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-组氨酸甲酯，白色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.86(3H，d，J＝6.5Hz)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，1.88-2.10(1H，m)，2.49(2H，d，J＝7.5Hz)，3.09(1H，dd，J＝7.5Hz，J＝14.5Hz)，3.17(1H，dd，J＝6Hz，J＝14.5Hz)，3.62(3H，s)，4.87(1H，dt，J＝7Hz，J＝8Hz)，5.03(2H，s)，6.77(1H，s)，7.10-7.23(2H，m)，7.30-7.46(3H，m)，7.44(1H，s)，8.16(1H，d，J＝8.5Hz)，23.66(1H，brs)参考实施例13将180ml 1N氢氧化钠加到500ml含31.98gN-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸甲基的乙醇溶液中。室温搅拌混合物13小时。对反应混合物进行蒸馏除去乙醇。残余物用盐酸酸化，再用乙酸乙酯萃取。萃取液用氯化钠饱和水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到30.93g白色粉末N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(3H，d，J＝6.5Hz)，0.8(3H，d，J＝6.5Hz)，1.88-2.07(1H，m)，2.48(1H，dd，J＝12.5Hz，J＝19.5Hz)，2.50(1H，dd，J＝12.5Hz，J＝19.5Hz)，3.05(1H，dd，J＝7.5Hz，J＝14Hz)，3.20(1H，dd，J＝5Hz，J＝14Hz)，3.77(6H，s)，3.80(3H，s)，4.92(1H，dt，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，6.38(2H，s)，7.28(1H，d，J＝8.5Hz)参考实施例14用适当的起始物和与参考实施例13中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-苯丙氨酸，白色粉末，熔点120-122℃。
N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-O-苄基-L-酪氨酸，无色针晶，熔点147-148℃N-苄基-N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-组氨酸，白色粉末1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.82(6H，d，J＝6.5Hz)，1.80-2.00(1H，m)，2.36(2H，d，J＝7.5Hz)，2.94(1H，dd，J＝5Hz，J＝15Hz)，3.03(1H，dd，J＝7Hz，J＝15Hz)，4.56(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，5.19(2H，s)，7.03(1H，s)，7.20-7.30(2H，m)，7.30-7.45(3H，m)，7.95(1H，s)，8.22(1H，d，J＝8Hz)，11.81(1H，s)参考实施例15将22.90g二环己基碳化二亚胺加到300ml含26.39gN-苄氧基亮氨酸和13.35gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。在室温下搅拌混合物2小时，过滤反应混合物除去不溶物，得到一无色溶液。另外，将20ml三乙胺加到300ml含28.57g氨基丙二酸二乙酯盐酸盐的无水二噁烷悬浮液中。此混合物用超声波处理1小时。将上述无色溶液加入其中。室温下搅拌16小时，再在热浴温度100℃下搅拌3.5小时。蒸馏反应混合物以除去溶剂。将残余物溶解在1，000ml乙酸乙酯中。此溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到39.22gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙二酸二乙酯，黄色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，0.91(3H，d，J＝6.5Hz)，1.30(6H，t，J＝7Hz)，1.35-1.55(2H，m)，1.60-1.80(1H，m)，3.57(1H，dt，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，4.20-4.40(4H，m)，4.73，4.82(each 1H，d，J＝12Hz)，5.21(1H，d，J＝7Hz)，5.69(1H，d，J＝5Hz)，7.25-7.40(5H，m)，7.52(1H，d，J＝7Hz)
参考实施例16用冰冷却下，将90ml1N氢氧化钠加到180ml含35.28gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙二酸二乙酯的乙醇溶液中。冰冷却下用600ml水稀释此混合物，形成的混合物用乙醚洗涤(500ml×2)。水层用浓盐酸调pH至1，用冰冷的乙酸乙酯萃取(500ml×2)。萃取液用氯化钠饱和水溶液洗两次，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到28.72gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙甲二酸，白色固体。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.89(3H，d，J＝6Hz)，0.91(3H，d，J＝6Hz)，1.32(3H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.80(1H，m)，3.61(1H，dd，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，4.31(2H，q，J＝7Hz)，4.77，4.80(each 1H，d，J＝12Hz)，5.17(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.19(0.5H，d，J＝5Hz)，5.25(2H，brs)，7.25-7.45(5H，m)，7.71(1H，d，J＝6.5Hz)参考实施例17将1.03g二环己基碳化二亚胺加到30ml含1.83gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙二酸乙酯、0.58gN-羟基琥珀酰亚胺和1.3ml(3-甲氧苄基)胺的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时。过滤反应混合物除去不溶物，滤液用100ml乙酸乙酯稀释。形成的溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。生成的黄色油状物1.49g用硅胶柱层析纯化(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/2)，得到0.96gN-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3-甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯，无色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.87(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.88(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.90(1.5H，d，J＝6.5Hz)，1.26(1.5H，t，J＝7Hz)，1.27(1.5H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.75(1H，m)，3.56(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，3.78(3H，s)，4.15-4.35(2H，m)，4.35-4.55(2H，m)，4.70，4.76(each 0.5H，d，J＝12Hz)，4.72，4.78(each 0.5H，d，J＝12Hz)，5.13(0.5H，d，J＝7Hz)，5.14(0.5H，d，J＝7Hz)，6.75-7.00(4H，m)，7.21(1H，d，J＝7.5Hz)，7.30-7.50(5H，m)，7.62(0.5H，d，J＝7Hz)，7.75(0.5H，d，J＝7Hz)参考实施例18
用适当的起始物用参考实施例17中相同的方法，得到下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(2，4-二甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯，白色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.86(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.88(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.89(1.5H，d，J＝6.5Hz)，1.21(1.5H，t，J＝7Hz)，1.22(1.5H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.80(1H，m)，3.54(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，3.79(3H，s)，3.83(3H，s)，4.20(1H，q，J＝7Hz)，4.22(1H，q，J＝7Hz)，4.38(1H，d，J＝6Hz)，4.40(1H，d，J＝6Hz)，4.70，4.77(each 0.5H，d，J＝12Hz)，4.71，4.78(each 0.5H，d，J＝12Hz)，5.04(0.5H，d，J＝7Hz)，5.06(0.5H，d，J＝7Hz)，6.41(0.5H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.42(0.5H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.45(1H，d，J＝2.5Hz)，6.88(1H，brt，J＝8Hz)，7.14(1H，d，J＝8Hz)，7.25-7.45(5H，m)，7.59(0.5H，d，J＝7Hz)，7.72(0.5H，d，J＝7Hz)
N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯，棕色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，0.89(3H，d，J＝6.5Hz)，1.23(2H，J＝7Hz)，1.20-1.55(2H，m)，1.42(18H，s)，1.55-1.75(1H，m)，3.40-3.65(1H，m)，4.20-4.50(4H，m)，4.65-4.80(2H，m)，5.09(0.5H，d，J＝7Hz)，5.10(0.5H，d，J＝7Hz)，5.20(1H，s)，5.62-5.78(1H，br)，6.63(1H，brt，J＝5Hz)，7.05(2H，s)，7.30-7.45(5H，m)，7.58(0.5H，d，J＝7Hz)，7.78(0.5H，d，J＝7Hz)N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[4-(2-甲氧苯基)-1-哌嗪基羰基]甘氨酸乙酯，无色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝7Hz)，0.90(3H，d，J＝7Hz)，1.27(3H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.80(1H，m)，3.00-3.25(4H，m)，3.45-3.65(1H，m)，3.75-4.10(4H，m)，3.89(3H，s)，4.23(2H，q，J＝7Hz)，4.77(0.8H，dd，J＝12Hz，J＝19.5Hz)，4.78(1.2H，dd，J＝12Hz，J＝19.5Hz)，5.66(1H，d，J＝7.5Hz)，5.71(0.4H，d，J＝5Hz)，5.78(0.6H，d，J＝6.5Hz)，6.85-7.15(4H，m)，7.30-7.50(5H，m)，7.66(0.6H，d，J＝7.5Hz)，7.81(0.4H，d，J＝7.5Hz)参考实施例19用冰冷却下，将2.5ml1N氢氧化钠加到20ml含0.96gN-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3-甲氧苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯的乙醇溶液中。在室温下搅拌混合物4小时。用70ml水稀释反应混合物。形成的溶液用浓盐酸调pH为1，再用乙酸乙酯萃取。萃取液用氯化钠饱和水溶液洗2次，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到了1.03gN-(N-苄氧亮氨酸)-α-[N-(3-甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸，白色固体。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.84(3H，d，J＝6.5Hz)，0.89(3H，d，J＝6.5Hz)，1.25-1.50(2H，m)，1.50-1.70(1H，m)，3.50-3.70(1H，m)，3.78(3H，s)，4.10-4.22(0.8H，m)，4.35(1.2H，dd，J＝6Hz，J＝12Hz)，4.56(0.8H，s)，4.60(1.2H，s)，5.08-5.13(0.4H，m)，5.14-5.23(0.6H，m)，6.70-6.90(2H，m)，7.15-7.40(6H，m)，7.63(1H，brd，J＝6Hz)
参考实施例20用适当的起始物，用参考实施例19中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰)-2-[N-(2，4-二甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸，浅黄色油状物，1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.80-0.95(6H，m)，1.25-1.50(2H，m)，1.50-1.75(1H，m)，3.52(0.5H，d，J＝8Hz)，3.63(0.5H，dd，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，3.76(1.5H，s)，3.77(1.5H，s)，3.78(1.5H，s)，3.79(1.5H，s)，4.31(1H，d，J＝5.5Hz)，4.35(1H，d，J＝5.5Hz)，4.57，4.63(each 1H，d，J＝12.5Hz)，5.02(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.10(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.10-6.20(1H，br)，6.41(1H，dd，J＝1.5Hz，J＝8Hz)，6.42(1H，d，J＝1.5Hz)，7.10(0.5H，d，J＝8Hz)，7.12(0.5H，d，J＝8Hz)，7.20-7.40(5.5H，m)，7.52(0.5H，d，J＝6.5Hz)N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.80-0.95(6H，m)，1.30-1.50(2H，m)，1.41(18H，s)，1.55-1.70(1H，m)，3.90-4.05(1H，m)，4.25-4.40(2H，m)，4.45-4.60(2H，m)，5.08(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.13(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.20(1H，brs)，6.61(0.5H，brt，J＝6.5Hz)，6.95-7.10(2H，m)，7.14(0.5H，brt，J＝6.5Hz)，7.20-7.40(5H，m)，7.71(1H，brd，J＝8.5Hz)N-(N-苄氧基亮氨酸)-α-[4-(2-甲氧苯基)-1-哌嗪基羰基]甘氨酸，黄色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(3H，d，J＝6.5Hz)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，1.35-1.55(2H，m)，1.55＝1.75(1H，m)，2.95-3.25(4H，m)，3.60(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，3.75-3.90(4H，m)，3.86(3H，s)，4.71(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝2Hz)，4.78(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝12Hz)，5.59(0.5H，d，J＝7.5Hz)，5.63(0.5H，d，J＝12Hz)，5.59(0.5H，d，J＝7.5Hz)，5.63(0.5H，d，J＝7.5Hz)，5.69(2H，brs)，6.85-6.95(3H，m)，6.95-7.10(1H，m)，7.25-7.45(5H，m)，8.00(0.5H，d，J＝7.5Hz)，8.06(0.5H，d，J＝7.5Hz)参考实施例21用冰冷却下，将8.68g二环己基碳化二亚胺加到200ml含8.73g3-(3-吲哚基)-2-羟基亚氨基丙酸和4.83gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。在室温下搅拌混合物2小时。过滤反应混合物以除去不溶物，得到一棕色溶液。另外，将5.6ml三乙胺加到70ml含7.27gL-亮氨酸甲酯盐酸盐的无水二噁烷悬液中，室温搅拌此混合物2小时。向其中加入上述棕色溶液。搅拌混合物16小时。用700ml乙酸乙酯稀释反应混合物，形成的溶液用1N盐酸、氯化钠饱和水溶液和碳酸氢钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到13.81gN-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-亮氨酸甲酯，棕色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝6Hz)，0.89(3H，d，J＝6Hz)，1.45-1.75(3H，m)，3.70(3H，s)，4.08(2H，s)，4.65(1H，dt，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，6.96(1H，d，J＝2.5Hz)，7.09(1H，d，J＝7Hz)，7.15(1H，d，J＝7Hz)，7.26(1H，d，J＝7Hz)，7.28(1H，d，J＝7Hz)，7.78(1H，d，J＝7Hz)，7.93(1H，brs)，9.29(1H，s)参考实施例22用适当的起始物，用与参考实施例21中相同的方法，制得下列化合物。
N-[2-羟亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-苯丙氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm3.01(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.09(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.65(3H，s)，4.04，4.11(each1H，d，J＝14Hz)，4.87(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，6.85-7.00(2H，m)，7.04(1H，d，J＝2.5Hz)，7.05-7.25(6H，m)，7.30(1H，d，J＝7.5Hz)，7.78(1H，d，J＝7.5Hz)，8.00(1H，brs)，8.56(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-甲硫氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.75-2.05(1H，m)，1.98(3H，s)，2.05-2.20(1H，m)，2.40(2H，t，J＝7Hz)，3.70(3H，s)，4.08(2H，s)，4.74(1H，dt，J＝5.5Hz，8Hz)，7.02(1H，d，J＝2.5Hz)，7.08(1H，t，J＝8Hz)，7.15(1H，t，J＝8Hz)，7.26(1H，d，J＝8Hz)，7.37(1H，d，J＝8Hz)，7.78(1H，d，J＝8Hz)，8.03(1H，brs)，9.24(1H，brs)O-苄基-N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-丝氨酸甲酯，浅黄色泡沫样物质1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm3.60(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝9.5Hz)，3.68(3H，3.60(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝9.5Hz)，4.06(2H，brs)，4.36，4.45(each 1H，d，J＝12Hz)，4.76(1H，dt，J＝3.5Hz，8.5Hz)，6.99(1H，s)，7.05-7.35(7H，m)，7.63(1H，d，J＝8Hz)，7.78(1H，d，J＝7.5Hz)，7.90(1H，brs)，8.89(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]氨基丙二酸二乙酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.24(6H，t，J＝7Hz)，4.04(2H，s)，4.10-4.35(4H，m)，5.18(1H，d，J＝7Hz)，6.98(1H，d，J＝2.5Hz)，7.08(1H，t，J＝7Hz)，7.14(1H，t，J＝7Hz)，7.24(1H，d，J＝7Hz)，7.77(1H，d，J＝7Hz)，7.79(1H，d，J＝7Hz)，8.05(1H，brs)，9.30(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-天冬酰酸二乙酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.19(3H，t，J＝7Hz)，1.20(3H，t，J＝7Hz)，2.80(1H，dd，J＝5Hz，J＝17Hz)，2.99(1H，dd，J＝5Hz，J＝17Hz)，4.07(2H，s)，4.17(2H，q，J＝7Hz)，4.18(2H，q，J＝7Hz)，4.87(1H，dt，J＝5Hz，J＝8.5Hz)，7.07(1H，d，J＝2.5Hz)，7.12(1H，t，J＝7.5Hz)，7.15(1H，t，J＝7Hz)，7.28(1H，d，J＝7Hz)，7.67(1H，d，J＝8.5Hz)，7.79(1H，d，J＝7.5Hz)，8.03(1H，brs)，8.58(1H，s)O-苄基-N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-酪氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm2.92(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.02(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.62(3H，s)，4.10，4.13(each1H，s)，4.81(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，4.88(2H，s)，6.66，6.78(each 2H，d，J＝8.5Hz)，6.96(1H，d，J＝2Hz)，7.09(1H，t，J＝7.5Hz)，7.15(1H，t，J＝7.5Hz)，7.24(1H，d，J＝7Hz)，7.25-7.45(5H，m)，7.78(1H，d，J＝7Hz)，8.06(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-脯氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.30-1.55(0.5H，m)，1.55-1.95(3H，m)，1.95-2.10(0.5H，m)，3.20-3.45(2H，m)，3.67(3H，s)，4.00，4.13(each 0.7H，d，J＝14.5Hz)，4.18，4.23(each 0.3H，d，J＝8Hz)，4.40(0.7H，dd，J＝5.5Hz，8.5Hz)，4.49(0.3H，brd，J＝4.5Hz)，7.00-7.20(3H，m)，7.20-7.40(1H，m)，7.70(1H，d，J＝7Hz)，8.43(1H，brs)，9.47(1H，s)参考实施例23在冰冷却下，将1.24g二环己基碳化二亚胺加到30ml含1.77gN-苄氧基-DL-色氨酸和0.70gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时。过滤反应混合物以除去不溶物，从而得到一浅棕色溶液。另外，将0.8ml三乙胺加到20ml含0.89gL-丝氨酸甲酯盐酸盐的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时，向其中加入上述浅棕色溶液。形成的混合物在室温下搅拌66小时。用200ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用1N盐酸和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到2.07g(N-苄氧基-DL-色氨酰)-L-丝氨酸甲酯，棕色油状物。
1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm2.70-2.87(1H，m)，2.97(1H，dd，J＝6Hz，J＝14.5Hz)，3.45-3.80(2H，m)，3.60，3.61(each1.5H，s)，3.80-3.95(1H，m)，4.30-4.55(1H，m)，4.62(2H，s)，5.08(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝10.5Hz)，6.49(1H，d，J＝7Hz)，6.96(1H，t，J＝7.5Hz)，7.06(1H，t，J＝7.5Hz)，7.13(1H，s)，7.27(5H，s)，7.32(1H，d，J＝7.5Hz)，7.51(1H，d，J＝7.5Hz)，8.15，8.22(each 0.5H，d，J＝8Hz)，10.83(1H，brs)实施例1将1.09g二环己基碳化二亚胺加到含2.17g(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-羧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮和0.63gN-羟基琥珀酰亚胺的25ml无水二噁烷溶液中。在室温搅拌此混合物2小时。向其中加入0.80g2-氨基苯并噻唑。室温下搅拌此混合物23小时。用200ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。残余物用乙酸乙酯重结晶，得到2.77g(3RS，6SR)-3-(苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基-3-苄基-1-苄氧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，白色固体。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.75(3H，d，J＝6Hz)，0.76(3H，d，J＝6Hz)，1.50-1.85(3H，m)，3.26，3.64(each 1H，d，J＝13.5Hz)，3.51(1H，t，J＝6Hz)，4.49，4.81(each 1H，d，J＝10Hz)，6.95(1H，brs)，7.10-7.20(2H，m)，7.25-7.40(9H，m)，7.48(1H，t，J＝8Hz)，7.85(2H，t，J＝8Hz)用适当起始物，用实施例1中相同的方法制备了下述实施例27-29和31-39的化合物。
实施例2将0.80g10%钯-碳加到30ml含1.56g(3RS，6SR)-3-(苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基-3-苄基-1-苄氧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮的二噁烷溶液中。在氢气流中于室温下搅拌混合物4小时。过滤反应混合物除去催化剂。滤液进行蒸馏除去溶剂。生成的浅棕色油状物用二氯甲烷重结晶，得到0.56g(3RS，6SR)-3-(苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基-3-苄基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，白色固体，熔点222-225℃(分解)。
用适当的起始物和与实施例2中相同的方法，得到了下述实施例9-26，28-29，33，37-39，47-62及64-65的化合物。
实施例3将3.32g(3RS，6SR)-1-(2-四氢吡喃氧基)-6-异丁基-3-N-(3-甲氧基苄基)氨基甲酰基-3-甲基哌嗪-2，5-二酮溶解在20ml 1N氢氯酸(乙醇溶液)中。搅拌此溶液5分钟，再蒸馏除去溶剂。向残余物中加入30ml1N氢氧化钠水溶液。用二氯甲烷(30ml×2)和乙醚(30ml)洗涤此混合物，水层用浓盐酸调节pH为2-3，用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。萃取液用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，残余物用乙醚重结晶，得到1.26g(3RS，6SR)-1-羟基-6-异丁基-3-[N-(3-甲氧基苄基)]氨基甲酰基-3-甲基哌嗪-2，5-二酮，浅棕色固体，熔点151.5-153.5℃。
实施例4将13.21g二环己基碳化二亚胺加到含32.83gN-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸和7.71gN-羟基琥珀酰亚胺的500ml无水二噁烷溶液中。室温下搅拌3天，然后保持120℃计1.5小时。让反应混合物冷却。过滤除去不溶物，减压浓缩滤液至200ml。用1，000ml乙酸乙酯稀释浓缩液，形成的溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂。残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/2)，得到11.54g化合物(A)和5.42g化合物(B)。
化合物(A)(3RS，6RS)-1-苄氧基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮熔点198.5-200.5℃(分解)(从乙酸乙酯中重结晶)无色针状结晶化合物(B)(3RS，6SR)-1-苄氧基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮浅黄色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.86(3H，d，J＝6Hz)，0.88(3H，d，J＝6Hz)，1.43(18H，s)，1.60-1.95(3H，m)，2.74(1H，dd，J＝9.5Hz，J＝14Hz)，3.44(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝14Hz)，3.77(1H，t，J＝6Hz)，4.15(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝9.5Hz)，4.82，4.97(each 1H，d，J＝10.5Hz)，5.21(1H，s)，5.67(1H，brs)，7.01(2H，s)，7.37(5H，s)实施例5将0.41g二环己基碳化二亚胺加到含0.91gN-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3-甲氧苄基)]氨基甲酰基甘氨酸和0.23gN-羟基琥珀酰亚胺的20ml无水二噁烷溶液中。在室温下搅拌此混合物16小时。过滤反应混合物除去不溶物。用50ml乙酸乙酯稀释滤液。形成的溶液用1N盐酸和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到0.81g1-苄氧基-6-异丁基-3-[N-(3-甲氧基苄基)]氨基甲酰基哌嗪-2，5-二酮的顺反混合物。
浅棕色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.86(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.92(3H，d，J＝6Hz)，1.60-2.00(3H，m)，3.78(1.5H，s)，3.80(1.5H，s)，4.00(1H，t，J＝6Hz)，4.43(1H，d，J＝6Hz)，4.46(0.5H，d，J＝6Hz)，4.53(0.5H，d，J＝6Hz)，4.54(0.5H，s-like)，4.62(0.5H，d，J＝2.5Hz)，4.88，4.99(each 0.5H，d，J＝10.5Hz)，4.95，5.01(each 0.5H，d，J＝10.5Hz)，6.46(0.5H，brs)，6.90(0.5H，brs)，6.70-7.00(3H，m)，7.15-7.28(1H，m)，7.37(2.5H，s)，7.15-7.28(1H，m)，7.37(2.5H，s)，7.40(2.5H，s)，7.54(0.5H，brt，J＝6Hz)，8.53(0.5H，brt，J＝6Hz)实施例6
将7.00gN，N'-羰基二咪唑加到含17.40gN-(N-苄氧基亮氨酰)-(2'，4'-二甲氧基)苯丙氨酸的200ml无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物16小时。用1，000ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用10%柠檬酸、10%碳酸氢钠水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，真空蒸馏除去溶剂。将生成的黄色油状物进行硅胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/1-3/1)，得到3.79g黄色玻璃样化合物(C)和1.53g浅黄色固体化合物(D)化合物(C)(3RS，6RS)-1-苄氧基-3-(2，4-二甲氧苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.84(6H，d，J＝6.5Hz)，1.15-1.35(1H，m)，1.40-1.55(1H，m)，1.75-1.95(1H，m)，2.92(1H，dd，J＝8Hz，13.5Hz)，3.36(1H dd，J＝4.5Hz，13.5Hz)，3.78(3H，s)，3.80(3H，s)，3.88(1H，dd，J＝5.5Hz，8Hz)，4.20-4.35(1H，m)，4.94，5.02(each 1H，d，J＝10.5Hz)，5.65(1H，brs)，6.41(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.45(1H，d，J＝2.5Hz)，7.04(1H，d，J＝8Hz)，7.30-7.50(5H，m)
化合物(D)(3RS，6SR)-1-苄氧基-3-(2，4-二甲氧苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.86(3H，d，J＝6.5Hz)，0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，1.50-1.90(3H，m)，2.93(1H，dd，J＝7.5Hz，J＝14Hz)，3.51(1H，dd，J＝4Hz，J＝14Hz)，3.75(1H，t，J＝6Hz)，3.80(3H，s)，3.85(3H，s)，4.23(1H，dd，J＝4Hz，7.5Hz)，4.82，4.97(each 1H，d，J＝11Hz)，6.00(1H，brs)，76.47(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.50(1H，d，J＝2.5Hz)，7.15(1H，d，J＝8Hz)，7.25-7.40(5H，m)实施例7于室温下20分钟内，将150ml7N氢氯酸(乙醇溶液)滴加到含8.77gN-(2-羟基亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-苯丙氨酸和3.28g硼烷-三甲胺的150ml乙醇溶液中。搅拌混合物24小时，室温下真空蒸馏除去溶剂。用二氯甲烷溶解残余物。此溶液用氯化钠饱和水溶液和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。向残余物中加入100ml甲苯。回流混合物1小时，再蒸馏除去溶剂。生成的棕色油状物进行硅胶柱层析(洗脱液二氯甲烷/甲醇＝15/1)，得到1.77g化合物(E)和1.65g化合物(F)。
化合物(E)(3S，6S)-3-苄基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，浅橙色棱晶熔点152-153℃(从二氯甲烷中重结晶)化合物(F)(3S，6R)-3-苄基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，浅棕色针晶熔点203-204℃(从氯仿-乙醚中重结晶)实施例8在冰冷却下，将200ml7N氢氯酸(乙醇溶液)加到含13.81gN-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-亮氨酸甲酯和4.51g硼烷-三甲胺的200ml乙醇溶液中。室温下搅拌混合物16小时。反应混合物经蒸馏除去溶剂。残余物与150ml二氯甲烷和150ml碳酸氢钠饱和水溶液混合以进行分配。有机层用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。将残余物溶于100ml甲苯溶液中。回流1小时，蒸馏除去溶剂。生成的棕色油状物15.64g用硅胶柱层析纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇＝50/1-15/1)，得到1.28g顺式化合物(G)和1.30g反式化合物(H)。
化合物(G)(3S，6S)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-异丁基哌嗪-2，5-二酮浅橙色固体熔点146-148℃(分解)(从氯仿-正己烷中重结晶)化合物(H)(3S，6R)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-异丁基哌嗪-2，5-二酮浅橙固体熔点128-129.5℃(分解)用适当的起始物，用实施例4、5、6和7中的相同方法，得到了示于下列表1-13中的实施例9-45的化合物。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
表10
表11
表12
表13
实施例46将1.24g二环己基碳化二亚胺加到含2.04g(3RS，6SR)-3-羧基-6-异丁基-3-甲基-1-(2-四氢吡喃氧基)哌嗪-2，5-二酮和0.73gN-羟基琥珀酰亚胺的30ml无水二噁烷溶液中。室温下搅拌3小时。过滤反应混合物除去不溶物。向滤液中加入0.84ml3-甲氧基苄基胺。室温下搅拌此混合物19小时。用150ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到3.32g(3RS，6SR)-1-(2-四氢吡喃氧基)-6-异丁基-3-[N-(3-甲氧基苄基)]氨基甲酰基-3-甲基哌嗪-2，5-二酮，黄色油状物。
用适当起始物，用与实施例4、5、6和8中相同的方法，得到了下表14-19中所示实施例47-65的化合物。
表14
表15
表15(续)
表16
表16(续)
表17
表17(续)
表18
表19
以上所得化合物的部分NMR光谱数据示于下表20-25中表20
表21
表22
表23
表24
表25
药理试验-1对豚鼠的腹膜巨噬细胞受激释放过氧化物自由基(O-2)的抑制作用细豚鼠腹膜内注射15ml矿物油，注射96小时后，收集腹膜巨噬细胞。
按照T.Matsumoto，K.Takeshige和S.Minakami撰写的文章Biochemical and Biophysical Research Communication，Vol.88，NO.3，pp 974-979，(1979)中描述的步骤，用细胞色素C还原法测定过氧化物自由基(O-2)。
向1ml 80μM的细胞色素C溶液中加入腹膜巨噬细胞，使终浓度为2×106个细胞/ml，将每种本发明的试验化合物加入其中形成试验组样品。另一方面，用水代替本发明的试验化合物加入其中，形成对照组样品。将每个试验组样品和对照组样品在37℃预孵育1分钟。
作为过氧化物自由基(O-2)释放的刺激剂，向每个样品溶液和对照样品中加入FMLP(甲酰基甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸)，使FMLP的终浓度为10-7M，然后再将样品溶液孵育反应一分钟。
在550nm测定了试验组样品和对照组样品吸光度的差别(OD550)，通过计算实验组与对照组样品的OD550的比例，得到了50%抑制率浓度(IC50)。从试验中得到的IC50示于下表26中
表26 药理试验-2对大鼠神经细胞释放溶酶体酶的抑制作用给以大鼠10ml1%酪蛋白溶液(生理盐水溶液)16小时后，从腹腔采集神经细胞样品。
大鼠神经细胞释放溶酶体酶的反应，按照T.Matsumoto，K.Takeshige和S.Minakami的文章BiochemicalandBiophysicalResearchCommunication，Vol.88，NO.3，pp 974-979，(1979)中描述的方法测定。
将采集的神经细胞加到Hank's液中，使其浓度为5×105个细胞/ml，向其中加入本发明的哌嗪衍生物作为试验化合物，形成试样组样品。另一方面，用水代替本发明的哌嗪衍生物加入其中，形成对照组样品。每个试验组和对照组样品在37℃下预孵育1分钟。
作为刺激剂，向试验溶液中加入10-6M的FMIP(甲酰基甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸)和5μg/ml的细胞松弛素B溶液。如此得到的混合溶液孵育反应15分钟，然后2000rpm下离心10分钟。上清液(0.2ml)与溶解有0.2mM酚酞葡糖醛酸的0.5ml 0.1M乙酸缓冲溶液(pH 4.5)混合。形成的混合溶液在37℃下孵育反应5小时。反应后，向反应混合物中加入1N NaOH溶液，但其pH达8-9，在540nm处测定试验组和对照组样品的吸光度(OD540)。
通过计算试验组样品与对照组样品的OD540比值，得到了50%抑制浓度(IC50)的值。从试验中得到的IC50(×10-5g/ml)值示于下表27中。
表27
药理试验-3对大鼠腹腔神经细胞释放过氧化氢(H2O2)的抑制作用给SD-系大鼠腹腔注射1%酪蛋白溶液，注射16小时后，通过清洗腹腔得到神经细胞。将得到的神经细胞用Hank's液洗涤。
向由下列成分组成的反应混合物中NaN31mMNaCl140mMKCl5mMMgCl21mMCaCl21mM葡萄糖5.5mM酚红0.28mMHRP(马辣根过氧化物)8.5μ/mlHEPES[N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙磺酸]10mM(pH7.0)大鼠神经细胞 106个细胞/mlFMLP 2×10-6M加入试验化合物，然后整个混合物在37℃孵育1小时，再将混合物在2000rpm下离心分离10分钟。取1ml上清液，向其中加入10μl1NNaOH水溶液。然后用分光光度计在610nm测定上清液的吸光度(OD610)。
通过计算试验组样品与对照组样品的OD610之比，得到了试验化合物的IC50(50%抑制浓度)。结果示于下表28中。
表28 药理试验-4对大鼠被动Heymann肾炎中尿蛋白增加的抑制作用以SD-系雄性大鼠(7周龄，体重200-230g)作为实验动物。
按照如下所述的T.S.Edington等的方法，制备用于诱导大鼠被动Heymann肾炎的抗血清，[T.S.Edington，R.J.Glassok和F.J.DixonAutologousimmunecomplexnephritisinducedwithrenaltublerantigen.I.Identificationandisolationofthepathogeneticantigen.JournalofExperimentalMedicineVol.127，pp555-572(1968)]首先，从SD-大鼠中采集肾小管brush边缘的抗原(FXIA片段)样品。然后将抗原与Freund'完全佐剂混合，再用它敏化新西兰白兔。每2周进行3次敏化操作，自最后一次敏化2周后，从兔中采血。
根据体重将实验大鼠分成实验组，每组由7只鼠组成。
通过向实验大鼠的尾静注射上述抗血清，来诱导大鼠的Heymann肾炎。将每个试验化合物悬液在0.5%CMC(羧甲基纤维素)水溶液中，注射后第4天开始口服所述试验化合物悬液，每天一次，连续7天。从注射后第10天开始连续收集大鼠尿样，测定样品中尿蛋白的量。用下式计算试验化合物对产生尿蛋白的抑制率(%)抑制率(%)＝[(A-B)/(A)]×100其中A对照组中尿蛋白的量;
B试验组中尿蛋白的量(服用试验化合物的情况下)。
试验结果示于下表29中
表29 药理试验-5对肾小球膜细胞繁殖的抑制作用将SD-系大鼠的肾无菌切除取出，从中切出肾皮质。用筛分离肾小球。在RPMI1640培养基[含10%的FBS(胎牛血清)]中培养4周。这样得到的细胞用作肾小球膜细胞。
通过白细胞介素-1β掺入胸苷的实验按照Ganz的方法进行[Michael B.Ganz;Mary C.Perfetto和Walter F.BoronAmerican Journal of Physiology，Vol.259，F269-F278，(1990)]。将2×104个细胞/ml的肾小球膜细胞分散在一个48-孔板上(0.5ml/孔)，将这些细胞在RPMI培养基(含10%FBS)中培养3天。然后，将培养基换成另一种RPMI培养基，其中FBS的浓度由10%降到5%，再培养3天。再将RPMI培养基(含0.5% FBS)换成另一RPMI培养基，其中加入了试验化合物和1ng/ml的白细胞介素-1β。培养24小时。然后向培养基中加入1μCi/孔的3H-胸苷，再继续培养24小时。
用闪烁计数器测定掺入肾小球膜细胞中的3H-胸苷的量，比较试验组与对照组，按下式计算抑制率(%)抑制率(%)＝[(C-D)/(C-E)]×100其中C对照组中掺入3H-胸苷的量;
D加入试验化合物的组别中掺入3H-胸苷的量;
E不加白细胞介素-1β的组别中掺入3H-胸苷的量试验结果示于下表30中。
表30
权利要求
1.选自通式(1)和(2)代表的哌嗪衍生物的至少一种哌嗪衍生物或其盐 其中R1为低级烷基；R2为苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，或下式基团 (式中R5和R6相同或不同，各自为氢原子，苯并噻唑基，或在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基；另外，所述R5、R6和与其成键的相邻氮原子可与其它氮原子或氧原子一起或无其它氮原子或氧原子存在下形成5-6元饱和杂环基；所述杂环基可有苯基作为取代基，其中苯基的苯环上可有低级烷氧基作为取代基)；R3为氢原子、低级烷基或苯基-低级烷基；和R4为羟基、苯基-低级烷氧基或四氢吡喃氧基；和 其中R7为低级烷基，在苯环上可带有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，低级烷硫基取代的低级烷基，苯基-低级烷氧基取代的低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰基取代的低级烷基，或羟基取代的低级烷基；R8为氢原子；另外R7和R8一起可形成亚丙基；及R9为羟基或苯基-低级烷氧基。
2.权利要求1的哌嗪衍生物或其盐，其中哌嗪衍生物或其盐由通式(1)代表 其中R1为低级烷基;R2为苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，或下式基团 (式中R5和R6相同或不同，各自为氢原子，苯并噻唑基，或在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基;另外，所述R5、R6和与其成键的相邻氮原子可与其它氮原子或氧原子一起或无其它氮原子或氧原子存在下形成5-6元饱和杂环基;所述杂环基可有苯基作为取代基，其中苯基的苯环上可有低级烷氧基作为取代基);R3为氢原子、低级烷基或苯基-低级烷基;和R4为羟基、苯基-低级烷氧基或四氢吡喃氧基。
3.权利要求1的哌嗪衍生物，其中哌嗪衍生物由通式(2)代表 其中R7为低级烷基，在苯环上可有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，低级烷硫基取代的低级烷基，苯基-低级烷氧基取代的低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰基取代的低级烷基，或羟基取代的低级烷基;R8为氢原子;另外R7和R8一起可形成亚丙基;及R9为羟基或苯基-低级烷氧基。
4.权利要求2的哌嗪衍生物或其盐，其中R2为苯基-低级烷基，其中苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基。
5.权利要求2的哌嗪衍生物或其盐，其中R2为咪唑基取代的低级烷基，其中咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基。
6.权利要求2的哌嗪衍生物或其盐，其中R2为下式基团 (其中R5和R6同上所定义)。
7.权利要求4的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为卤原子。
8.权利要求4的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为低级烷基或苯基-低级烷基。
9.权利要求5的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为卤原子。
10.权利要求5的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为低级烷基或苯基-低级烷基。
11.权利要求6的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为卤原子。
12.权利要求6的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为低级烷基或苯基-低级烷基。
13.权利要求7-12之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R4为羟基。
14.权利要求7-12之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R4为苯基低级烷氧基或四氢吡喃氧基。
15.权利要求3的哌嗪衍生物或其盐，其中R7为低级烷氧羰基取代的低级烷基。
16.权利要求3的哌嗪衍生物或其盐，其中R7和R8结合形成亚丙基。
17.权利要求3的哌嗪衍生物或其盐，其中R7为低级烷基、在苯环上可带有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基、低级烷硫基取代的低级烷基、苯基-低级烷基取代的低级烷基、低级烷氧羰基、或羟基取代的低级烷基。
18.权利要求15-17之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R9为羟基。
19.权利要求15-17之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R9为苯基-低级烷氧基。
20.(3RS，6RS)-1-羟基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
21.(3RS，6SR)-1-羟基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
22.(3RS，6RS)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-乙氧羰基甲基哌嗪-2，5-二酮。
23.(3RS，6SR)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-乙氧羰基甲基哌嗪-2，5-二酮。
24.(3S，6R)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-乙氧羰基甲基哌嗪-2，5-二酮。
25.一种过氧化物自由基抑制剂，它含有权利要求1中要求的哌嗪衍生物或其盐作为活性成分。
26.权利要求25的过氧化物自由基抑制剂，其中活性试剂是权利要求2中的哌嗪衍生物或其盐。
27.权利要求25的过氧化物自由基抑制剂，其中活性试剂是权利要求3中的哌嗪衍生物或其盐。
28.一种预防和治疗由过氧化物自由基引起的疾病或症状的试剂，它含有权利要求1中所要求的哌嗪衍生物或其盐作为活性成分。
29.权利要求28的预防和治疗由过氧化物自由基引起的疾病或症状的试剂，其中活性成分是权利要求2中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
30.权利要求28的预防和治疗由过氧化物自由基引起的疾病或症状的试剂，其中活性成分是权利要求3中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
31.预防和治疗肾炎的试剂，它含有权利要求1中所要求的哌嗪衍生物或其盐作为活性成分。
32.权利要求31的预防和治疗肾炎的试剂，其中活性成分为权利要求2中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
33.权利要求31的预防和治疗肾炎的试剂，其中活性成分是权利要求3中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
34.式(1a)化合物的制备方法 (其中R1、R3、R4、R5和R6同上所定义)，其特征在于式(3)化合物与式(4)化合物反应 (其中R1、R3和R4同上所定义)， (其中R5和R6同上所定义)。
35.式(1)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义)，其特征在于由式(16)化合物转化成式(1)哌嗪衍生物 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义)。
36.式(1)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义)，其特征在于由式(22)或(23)的化合物转化成式(1)的哌嗪衍生物 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义;RA为氢原子或R10a，其中R10a为低级烷基)。
37.式(2)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R7、R8和R9同上所定义)，其特征在于由式(26)的化合物转化成式(2)的哌嗪衍生物 (其中R7、R8和R9同上所定义)。
38.式(2)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R7、R8和R9同上所定义)，其特征在于由式(29)的化合物转化成式(2)的哌嗪衍生物 (其中R7、R8和R9同上所定义)。
全文摘要
本发明提供具有抑制过氧化物自由基(O
文档编号C07D417/12GK1112364SQ9419049
公开日1995年11月22日 申请日期1994年7月1日 优先权日1993年7月13日
发明者利根齐, 森末政利, 田村克巳, 宫崎俊树, 中野善正 申请人:大塚制药株式会社
技术领域：
本发明涉及新哌嗪衍生物和其盐。
从以下现有技术文献中，即EP-A2-303250和美国专利5，021，419，已知一些化学结构式与本发明哌嗪衍生物的结构式相似的哌嗪衍生物。
本发明提供新的、现有技术文献中未知的哌嗪衍生物和其盐。所述哌嗪衍生物由下列通式(1)和(2)代表 式中R1为低级烷基;
R2为苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，或下式基团
(式中R5和R6相同或不同，各自为氢原子，苯并噻唑基，或在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基;另外，所述R5、R6和与其成键的相邻氮原子可与其它氮原子或氧原子一起或无其它氮原子或氧原子存在下形成5-6元饱和杂环基;所述杂环基可有苯基作为取代基，其中苯基的苯环上可有低级烷氧基作为取代基;)R3为氢原子、低级烷基或苯基-低级烷基;和R4为羟基、苯基-低级烷氧基或四氢吡喃氧基;和 其中R7为低级烷基，在苯环上可有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，低级烷硫基取代的低级烷基，苯基-低级烷氧基取代的低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰基取代的低级烷基，或羟基取代的低级烷基;
R8为氢原子;另外，R7和R8一起可形成亚丙基;及R9为羟基或苯基-低级烷氧基。
由通式(1)和(2)代表的本发明的哌嗪衍生物和它们的盐对豚鼠的巨噬细胞受激释放的过氧化物自由基(O2)有抑制作用，还在Masugi肾炎中具有抗蛋白尿活性。因此，通式(1)和(2)代表的哌嗪衍生物和其盐是预防和治疗上述过氧化物自由基引起的各种疾病的有用试剂，例如，自身免疫病(如类风湿性关节炎)、动脉硬化、心缺血病、暂时性脑缺血、肝功能不全及肾功能不全。它们还是在各种临床领域中预防和治疗肾炎的有用试剂。
除此以外，通式(1)和(2)的哌嗪衍生物和其盐对肾小球膜细胞的繁殖具有抑制作用，后者与肾炎的发展有密切关系;因此，它们是预防和治疗繁殖性肾炎的有用试剂。
在本说明书中，通式(1)和(2)中的取代基具体如下所述。
低级烷氧基可列举C1-6直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基等。
低级烷基可列举C1-6直链或支链烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基和己基等。
在苯环上可有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，可列举这样的苯基烷基，其中烷基片段为C1-6直链或支链烷基，而且苯环上可有1-3个选自羟基、苯基-C1-6直链或支链烷氧基、C1-6直链或支链烷基、C1-6直链或支链烷氧基和卤原子的取代基，如苄基、2-苯乙基、1-苯乙基、3-苯丙基、4-苯丁基、1，1-二甲基-2-苯乙基、5-苯基戊基、6-苯基己基、2-甲基-3-苯丙基、2-(3-甲氧苯基)乙基、1-(4-甲氧苯基)乙基、2-甲氧苄基、3-(2-乙氧苯基)丙基、4-(3-乙氧苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙氧苯基)乙基、5-(4-异丙氧基苯基)戊基、6-(4-己氧基苯基)己基、3，4-二甲氧基苄基、3，4，5-三甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，5-二甲氧基苄基、1-苯基-1-羟甲基、2-羟基-2-苯乙基、3-羟基-3-苯丙基、4-羟基-4-苯丁基、1，1-二甲基-2-羟基-2-苯乙基、5-羟基-5-苯基戊基、6-苯基-6-羟基-己基、2-甲基-3-苯基-3-羟基丙基、2-(4-甲氧苯基)-2-羟乙基、2-(3-乙氧苯基-2-羟乙基、4-羟基-4-(3，4-二甲氧苯基)丁基、3-甲氧苄基、4-甲氧苄基、2，4-二乙氧基苄基、2，3-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，6-二甲氧基苄基、4-苄氧基苄基、2-(3-苄氧基苯基)乙基、1-(2-苄氧基苯基)乙基、3-[2-(2-苯基乙氧基)苯基]丙基、4-[3-(3-苯基丙氧基)苯基]丁基、1，1-二甲基-2-[4-(4-苯基丁氧基)苯基]乙基、5-[2-(5-苯基戊氧基)苯基]戊基、6-[3-(6-苯基己氧基)苯基]己基、2-羟基苄基、4-羟基苄基、2-(3-羟基苯基)乙基、1-(4-羟苯基)乙基、3-(2-羟苯基)丙基、4-(3-羟苯基)丁基、5-(2-羟苯基)戊基、6-(3-羟苯基)己基、3，4-二羟基苄基、3，4，5-三羟基苄基、3，5-二甲氧基-4-苄氧基苄基、3，5-二甲氧基-4-羟基苄基、3，5-二叔丁氧基-4-苄氧基苄基、3，5-二叔丁氧基-4-羟基苄基、2-甲基苄基、2-(3-甲基苯基)乙基、1-(4-甲基苯基)乙基、3-(2-乙基苯基)丙基、4-(3-乙基苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙基苯基)乙基、5-(4-异丙基苯基)戊基、6-(4-己基苯基)己基、3，4-二甲基苄基、3，4，5-三甲基苄基、2，5-二甲基苄基、2-氯苄基、2-(3-氯苯基)乙基、2-氟苄基、1-(4-氯苯基)乙基、3-(2-氟苯基)丙基、4-(3-氟苯基)丁基、5-(4-氟苯基)戊基、1，1-二甲基-2-(2-溴苯基)乙基、6-(3-溴苯基)己基、4-溴苄基、2-(2-碘苯基)乙基、1-(3-碘苯基)乙基、3-(4-碘苯基)丙基、3，4-二氯苄基、3，5-二氯苄基、2，6-二氯苄基、2，3-二氯苄基、2，4-二氯苄基、3，4-二氟苄基、3，5-二溴苄基、3，4，5-三氟苄基、3，5-二氯-4-羟基苄基、3，5-二甲基-4-羟基苄基和2-甲氧基-3-氯苄基等。
低级烷氧羰基可列举C1-6直链或支链烷氧羰基，如甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、异丙氧羰基、丁氧羰基、叔丁氧羰基、戊氧羰基和己氧羰基等。
苯基-低级烷氧基可列举苯基-C1-6直链或支链烷氧基，如苄氧基、2-苯基乙氧基、1-苯基乙氧基、3-苯基丙氧基、4-苯基丁氧基、1，1-二甲基-2-苯基乙氧基、5-苯基戊氧基、6-苯基己氧基和2-甲基-3-苯基丙氧基等。
作为卤原子，可列举如氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
苯基低级烷基可列举苯基-C1-6直链或支链烷基，如苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、1，1-二甲基-2-苯基乙基、5-苯基戊基、6-苯基己基和2-甲基-3-苯基丙基等。
在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，可列举咪唑基取代的C1-6直链或支链烷基，在咪唑环上可带有的取代基为苯基-C1-6直链或支链烷基，如(4-咪唑基)甲基、2-(2-咪唑基)乙基、1-(4-咪唑基)乙基、3-(5-咪唑基)丙基、4-(2-咪唑基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-咪唑基)乙基、5-(5-咪唑基)戊基、6-(2-咪唑基)己基、2-甲基-3-(4-咪唑基)丙基、(1-苄基-4-咪唑基)甲基、2-[1-(2-苯乙基)-4-咪唑基]乙基、1-[5-(1-苯乙基)-2-咪唑基]乙基、3-[1-(3-苯丙基)-5-咪唑基]丙基、4-[4-(4-苯基丁基)-2-咪唑基]丁基、5-[2-(5-苯基戊基)-4-咪唑基]戊基和6-[1-(6-苯基己基)-4-咪唑基]己基等。
在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基，可列举这样的苯基-烷基，其中烷基片段为C1-6直链或支链烷基，苯环上可带有的1-3个取代基选自C1-6直链或支链烷氧基、苯基-C1-6直链或支链烷氧基、C1-6直链或支链烷基和羟基，如苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、1，1-二甲基-2-苯基乙基、5-苯基戊基、6-苯基己基、2-甲基-3-苯基丙基、2-甲氧基苄基、3-甲氧基苄基、4-甲氧基苄基、2-(3-甲氧苯基)乙基、1-(4-甲氧苯基)乙基、2-甲氧基苄基、3-(2-乙氧苯基)丙基、4-(3-乙氧基苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙氧基苯基)乙基、5-(4-异丙氧基苯基)戊基、6-(4-己氧基苯基)己基、3，4-二甲氧基苄基、3，4，5-三甲氧基苄基、2，5-二甲氧基苄基、2，4-二乙氧基苄基、2，3-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，6-二甲氧基苄基、4-苄氧基苄基、2-(3-苄氧基苯基)乙基、1-(2-苄氧基苯基)乙基、3-[2-(2-苯基乙氧基)苯基]丙基、4-[3-(3-苯基丙氧基)苯基]丁基、1，1-二甲基-2-[4-(4-苯基丁氧基)苯基]乙基、5-[2-(5-苯基戊氧基)苯基]戊基、6-[3-(6-苯基己氧基)苯基]己基、2-羟基苄基、2-(3-羟苯基)乙基、1-(4-羟苯基)乙基、3-(2-羟苯基)丙基、4-(3-羟苯基)丁基、5-(2-羟苯基)戊基、6-(3-羟苯基)己基、3，4-二羟基苄基、3，4，5-三羟基苄基、3，5-二甲氧基-4-苄氧基苄基、3，5-二甲氧基-4-羟基苄基、3，5-二叔丁氧基-4-羟基苄基、2-甲基苄基、2-(3-甲基苯基)乙基、1-(4-甲基苯基)乙基、3-(2-乙基苯基)丙基、4-(3-乙基苯基)丁基、1，1-二甲基-2-(4-乙基苯基)乙基、5-(4-异丙基苯基)戊基、6-(4-己基苯基)己基、3，4-二甲基苄基、3，4，5-三甲基苄基、3，5-二叔丁基-4-羟基苄基和3，5-二叔丁基-4-苄氧基苄基等。
由R5、R6和与它们成键的相邻氮原子一起，及有或无其它氮原子或氧原子下形成的5-6元饱和杂环基，可列举哌嗪基、吡咯烷基、吗啉基和哌啶基等。
有苯基作为取代基的上述杂环基，其中苯基可有烷氧基作为取代基，可列举这样的苯基取代的上述杂环基，其中苯基在苯环上可有1-3个C1-6直链或支链烷氧基，如4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基、4-(2，4-二甲氧苯基)哌啶、3-(2，3，4-三甲氧基苯基)吗啉基、2-(3-甲氧基苯基)吡咯烷基、2-苯基哌啶基、2-(2-乙氧基苯基)哌嗪基、3-(3-丙氧基苯基)哌啶基、2-(4-丁氧基苯基)吗啉代基、3-(2-戊氧基苯基)吡咯烷基和3-(4-己氧基苯基)哌嗪基等。
在苯环上可带有低级烷氧基取代的苯基，可列举在苯环上可有1-3个C1-6直链或支链烷氧基的苯基，如苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2-乙氧基苯基、3-乙氧基苯基、4-乙氧基苯基、3-异丙氧基苯基、4-己氧基苯基、3，4-二甲氧基苯基、2，5-二甲氧基苯基和3，4，5-三甲氧基苯基等。
在苯环上可有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，可列举苯基-C1-6直链或支链烷基，在苯环上可含有1-3个选自羟基和苯基-C1-6直链或支链烷氧基的取代基，如2-羟基苄基、3-羟基苄基、4-羟基苄基、2-(3-羟苯基)乙基、1-(4-羟苯基)乙基、3-(2-羟苯基)丙基、4-(3-羟基苯基)丁基、5-(2-羟苯基)戊基、6-(3-羟苯基)己基、3，4-二羟基苄基、3，4，5-三羟基苄基、4-苄氧基苄基、2-(3-苄氧基苯基)乙基、1-(2-苄氧基苯基)乙基、3-[2-(2-苯基乙氧基)苯基]丙基、4-[3-(3-苯基丙氧基)苯基]丁基、1，1-二甲基-2-[4-(4-苯基丁氧基)苯基]乙基、5-[2-(5-苯基戊氧基)苯基]戊基和6-[3-(6-苯基己氧基)苯基]己基等。
低级烷硫基取代的低级烷基可列举C1-6直链或支链烷硫基取代的C1-6直链或支链烷基，如甲硫基甲基、2-(甲硫基)乙基、1-(乙硫基)乙基、3-(丙硫基)丙基、4-(正丁硫基)丁基、5-(戊硫基)戊基和6-(己硫基)己基等。
苯基低级烷氧基取代的低级烷基，可列举苯基-C1-6直链或支链烷氧基取代的C1-6直链或支链烷基，如苄氧基甲基、2-(2-苯基乙氧基)乙基、1-(1-苯基乙氧基)乙基、3-(3-苯基丙氧基)丙基、4-(4-苯基丁氧基)丁基、5-(5-苯基戊氧基)戊基、6-(6-苯基己氧基)己基、(2-甲基-3-苯基丙氧基)甲基和(1，1-二甲基-2-苯基乙氧基)甲基等。
低级烷氧羰基-低级烷基可列举C1-6直链或支链烷氧羰基-C1-6直链或支链烷基，如甲氧羰基甲基、3-甲氧羰基丙基、乙氧羰基甲基、4-乙氧羰基丁基、1-乙氧羰基乙基、1-甲氧羰基乙基、6-丙氧羰基己基、5-异丙氧羰基戊基、1，1-二甲基-2-丁氧羰基乙基、2-甲基-3-叔丁氧羰基丙基、2-戊氧羰基乙基和己氧羰基甲基等。
羟基取代的低级烷基可列举含1-3个羟基作为取代基的C1-6直链或支链烷基，如羟甲基、2-羟乙基、1-羟乙基、3-羟丙基、2，3-二羟基丙基、4-羟基丁基、1，1-二甲基-2-羟基乙基、5，5，4-三羟基戊基、5-羟基戊基、6-羟基己基、1-羟基异丙基、2-甲基-3-羟基丙基、2，3-二羟基乙基、3，4-二羟基丁基和5，6-二羟基己基等。
可用各种方法制备本发明的通式(1)和(2)代表的哌嗪衍生物。这些方法的优选实例如下所示。
反应式-1 (其中R1、R3、R4、R5和R6同上所定义)。
化合物(3)和(4)之间的反应按一般的酰胺键生成反应来进行。酰胺键形成反应可以用各种已知方法进行，例如(a)混合酸酐法，如包括羧酸(3)与卤代羧酸烷基酯反应，然后将生成的混合酸酐与胺(4)反应，(b)活性酯法，如包括将羧酸(3)转化为活性酯(如对硝基苯基酯、琥珀酰亚胺酯或苯并噻唑-1-基酯)，然后活性酯与胺(4)反应，(c)碳化二亚胺法，包括羧酸(3)和胺(4)在活化试剂如二环己基碳化二亚胺、N，N-羰基-二咪唑或类似物存在下缩合，及(d)其它方法。其它方法(d)包括，例如用脱水剂(如醋酸酐)将羧酸(3)转化为酸酐，然后酸酐与胺(4)反应的方法，和羧酸(3)与低级醇反应，然后生成的酯与胺(4)在高温高压下反应的方法。还可以使用包括用磷化合物如三苯膦、氯代磷酸二乙酯或类似物将羧酸(3)活化，然后生成物与胺(4)反应的方法。还可以使用包括用乙炔化合物如三甲基甲硅烷基乙氧基乙炔或类似物活化羧酸(3)，然后生成物与胺(4)反应的方法。
在混合酸酐法(a)中，所用混合酸酐可用一般的Schotten-Bauman反应制备。一般酸酐不经分离直接与胺(4)反应，从而生成了通式(1a)的化合物。Schotten-Baumnn反应在碱化合物存在下进行。碱化合物为一般用在Schotten-Baumnn反应中的化合物，例如包括有机碱如三乙胺、三甲胺、吡啶、二甲基苯胺、N-甲基吗啉、4-二甲氨基吡啶、1，5-二氮杂双环[4，3，0]壬烯-5(DBN)、1，8-二氮杂双环[5，4，0]十一烯-7(DBU)、1，4-二氮杂双环[2，2，2]辛烷(DABCO)及类似物，和无机碱如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠及类似物。反应在-20℃到100℃，优选0-50℃下进行约5分钟到10小时，优选约5分钟到2小时。生成的混合酸酐与胺(4)的反应在-20℃到150℃，优选在10-50℃下进行约5分钟到10小时，优选约5分钟到5小时。混合酸酐法(a)在有适当溶剂或混合溶剂存在下或无任何溶剂存在下进行。该溶剂可为一般用于混合酸酐法中的任何溶剂，例如卤代烃如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷等;芳香烃如苯、甲苯、二甲苯等;醚如乙醚、二噁烷、二异丙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;非质子极性溶剂如1，1，3，3-四甲基脲、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺和类似物。用于混合酸酐法(a)中的α-卤代羧酸烷基酯包括，例如氯代甲酸甲酯、溴代甲酸甲酯、氯代甲酸乙酯、溴代甲酸乙酯和氯代甲酸异丁酯。卤代羧酸烷基酯的用量一般为至少1mol，优选1-1.5mol/mol胺(4)。羧酸(3)的用量一般为每mol胺(4)至少1mol，优选约1-1.5mol。
活性酯法(b)，例如使用琥珀酰亚胺基酯时，在有或无碱化合物存在下、在对反应无不利影响的非质子极性溶剂中进行。可向此反应系统中加入缩合剂如二环己基碳化二亚胺、N，N-羰基二咪唑、1-乙基-3-(3'-二甲氨基丙基)碳化二亚胺等。对于碱化合物，可以使用用于Schotten-Baumann反应中的任何碱化合物。还可以使用羧酸碱金属盐如醋酸钠、苯甲酸钠、甲酸钠、醋酸钾、苯甲酸锂、醛酸铯等;碱金属卤化物如氟化钾、氟化铯等;等。溶剂的具体实例为卤代烃如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷等;芳烃如苯、甲苯、二甲苯等;醚如乙醚、二噁烷、四氢呋喃、二甲氧基乙烷等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;非质子极性溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺等;及其混合溶剂。反应在-0-200℃，优选在10-150℃下进行，在1小时到3.5天内完成。胺(4)与琥珀酰亚胺酯的适宜比例为每摩尔琥珀酰亚胺酯一般用至少1mol胺(4)，优选1-2mol/mol。
化合物(1a)还可通过羧酸(3)与胺(4)在磷化合物作为缩合剂存在下反应来获得，磷化合物如为三苯膦-2，2'-二吡啶基二硫化物、氯代磷酸二乙酯、二苯基氧膦基氯、苯基N-苯基磷酰胺氯化物、氰基磷酸二乙酯、二(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酸氯化物等。碱化合物可用广为人知的碱化合物，如用于Schotten-Baumann反应的碱化合物，氢氧化钠和氢氧化钾。溶剂可列举，如用于混合酸酐法(a)中的溶剂、吡啶、丙酮、乙腈及其中两种或多种溶剂的混合物。反应一般在约-20℃到150℃下，优选在约0-100℃下进行，一般在约5分钟到30小时内完成。对于缩合剂和羧酸(3)的适当用量，两者均为每mol胺(4)用至少1mol，优选约1-2mol。
化合物(1a)还可通过羧酸(3)与胺(4)在缩合剂存在下反应而制得。该反应在有或无催化剂存在下在适当溶剂中进行。溶剂可列举卤代烃(如二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿和四氯化碳)、乙腈和N，N-二甲基甲酰胺。催化剂可列举有机碱(如4-二甲氨基吡啶和4-哌啶子基吡啶)、盐(如对甲苯磺酸吡啶鎓盐)、樟脑磺酸和氧化汞(Ⅱ)。对于缩合剂可列举，如乙炔化合物如三甲基甲硅烷基乙氧基乙炔等。缩合剂的用量每mol胺(4)一般为1-10mol，优选2-6mol。羧酸(3)的用量每mol胺(4)一般为至少1mol，优选约1-2mol。该反应一般在约0-150℃下，优选在约室温到100℃下进行。一般在约1-10小时内完成。
作为起始物的化合物(3)例如可通过如下反式制备。
反应式-2
(其中R1同上所定义;R10a和R10b各自为低级烷基;R3a为低级烷基或苯基-低级烷基;R3b为苯基-低级烷基;R4a为四氢吡喃氧基;R4b为苯基-低级烷氧基;X为卤原子;R11为苯基-低级烷基;及R12为低级烷基或苯基-低级烷基)。
化合物(5)与化合物(6)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的反应条件下进行。化合物(7)转化为化合物(7a)的反应在与下述反应式-6中化合物(20)转化为化合物(21)的反应中相同的反应条件下进行。
化合物(7)或(7a)转化成化合物(8)的反应是这样进行的，先在酸存在下在适当溶剂中还原化合物(7)或(7a)，然后将还原产物环化。用于还原反应的溶剂可列举水、醋酸、低级醇(如甲醇、乙醇和异丙醇)和醚(如四氢呋喃、乙醚、二噁烷和二甘醇二甲醚)。酸可列举无机酸(如氢氯酸)和有机酸(如醋酸)。还原剂可列举氢化物还原剂如硼烷-三甲基胺、氰基硼氢化钠等。对于每摩尔化合物(7)或(7a)，氢化物还原剂的用量为至少1mol，优选1-2mol。反应一般在0-100℃下，优选在约0-70℃下进行，在约1-30小时内完成。
接下来的环化在适当溶剂中进行。该溶剂与用于羧酸(3)的卤化物与胺(4)的反应中的溶剂相同。反应一般在室温到200℃下，优选约50-150℃下进行，在约0.5-10小时内完成。
化合物(8)与化合物(11)的反应在酸存在下在适当溶剂中进行。溶剂可列举卤代烃如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳等;醚如乙醚、四氢呋喃、二噁烷、乙二醇单甲醚等;芳烃如苯、甲苯、二甲苯等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;酮如丙酮、甲乙酮等;极性溶剂如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺等;及它们的混合溶剂。酸可举出无机酸(如氢氯酸、硫酸和氢溴酸)和有机酸(如对甲苯磺酸)。对每摩尔化合物(8)，化合物(11)的适当用量一般为至少1mol，优选为1-2mol。反应一般在0-100℃下，优选在约0-70℃下进行，一般在约0.5-10小时内完成。
化合物(8)与化合物(9)的反应在碱化合物存在下在适当溶剂中进行。溶剂可列举水;低级醇如甲醇、乙醇、丙醇等;醚如乙醚、四氢呋喃、二噁烷、乙二醇单甲醚等;芳烃如苯、甲苯、二甲苯等;酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯等;酮如丙酮、甲乙酮等;极性溶剂如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、六甲基磷酸三酰胺等;及它们的混合溶剂。碱化合物可列举无机碱如氢氧化钠、氢氧化钾碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢化钠等;碱金属如钠、钾等;碱金属醇化物如乙醇钠、甲醇钠等;有机碱如三乙胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基吗啉、4-甲氨基吡啶、DBN、DBU、DABCO等。对于每摩尔化合物(8)，化合物(9)的用量一般为至少1mol，优选1-5mol。反应一般在0.5-20小时内完成。
化合物(12)与(13)的反应在与化合物(8)与(9)的反应中相同的条件下进行。
(其中R1、R3、R4和R10a同上所定义)。
化合物(15)转化成化合物(3)的反应通过一般水解进行。具体讲，水解在酸如无机酸(如硫酸、盐酸或硝酸)、有机酸(如醋酸或芳香磺酸)等，或碱化合物(如碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钡等存在下，在溶剂中进行，其中溶剂如有水、醇(如甲醇、乙醇或异丙醇)、酮(如丙酮或甲乙酮)、醚(如二噁烷或乙二醇二甲醚)、醋酸或其混合溶剂。反应一般在约0-200℃下，优选在约室温到150℃下进行，一般在约0.5-15小时内完成。
其中R4和/或R4b为羟基的化合物(1)、(1a)和(10)可通过还原其中R4和/或R4b为苯基-低级烷氧基的化合物(1)、(1a)和(10)来制备。例如将原料化合物在催化剂存在下在适当溶剂中进行催化氢化。溶剂例如可列举水;醋酸;醇如甲醇、乙醇、异丙醇等;烃如己烷、环己烷等;醚如二噁烷、四氢呋喃、乙醚、乙二醇二甲醚等;酯如乙酸乙酯、乙酸甲酯等;非质子极性溶剂如二甲基甲酰胺等;及它们的混合溶剂。催化剂例如可列举钯、钯黑、钯碳、铂、氧化铂、铬酸铜和Raney镍。催化剂的适宜用量一般为起始原料重的约0.02-1倍。反应温度一般为约-20℃到100℃，优选约0-80℃;氢气压力一般为1-10大气压;反应一般在约0.5-20小时内完成。
其中R4和/或R4b为羟基的化合物(1)、(1a)和(10)可通过水解其中R4和/或R4b为四氢吡喃氧基的化合物(1)、(1a)和(10)来制备。此水解在酸存在下在适当溶剂中或不用任何溶剂来进行。可使用任何对反应无不利影响的溶剂，例如可例举水;卤代烃如二氯甲烷、氯仿等;低级醇如甲醇、乙醇、异丙醇等;酮如丙酮、甲乙酮等;醚如二噁烷、四氢呋喃、乙二醇单甲醚、乙二醇二甲醚等;脂肪酸如甲酸、乙酸等;及它们的混合溶剂。酸可列举例如无机酸如氢氯酸、硫酸、氢溴酸等;和有机酸如甲酸、三氟乙酸、乙酸、芳磺酸等。对酸的用量没有特别限制、可在较宽范围内适当选择，但较好相对原料为等摩尔到大大过量，优选为约10-20mol/mol原料。反应一般在约0-200℃下，优选在约室温到150℃下进行有利，一般在约5分钟到5小时内完成。
反应式-4
(其中R1、R2、R3和R4同上所定义)。
化合物(16)转化成化合物(1)的反应在与反应式-1中化合物(3)与化合物(4)的反应中相同的条件下进行。
用作起始物的化合物(16)例如可用下述反应式所示方法制备。
反应式-5 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义;R12为氢原子、低级烷基或含低级烷基的甲硅烷基)。
化合物(17)与(18)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。
其中R12为低级烷基的化合物(19)转化为(16)的反应在与反应式-3中化合物(5)转化为(3)的反应中相同的条件下进行。另外，当R12为含低级烷基的甲硅烷基时，该反应在与R4为四氢吡喃氧基的化合物(1)转化为R4为羟基的化合物(1)的反应中相同的条件下进行。
反应式-6 (其中R1、R4、R5、R6、R10a和R10b同上所定义)。
化合物(5)与化合物(18)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。化合物(20)转化成化合物(21)的反应在与反应式-3中化合物(15)转化为化合物(3)的反应中相同的条件下进行。但在此反应中，对每摩尔化合物(20)碱化合物的用量优选为1mol。化合物(21)与(4)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。
反应式-7 (其中R1、R2、R3、R4和R10a同上所定义)。
化合物(17a)与化合物(6a)的反应在与反应式-2中化合物(5)与(6)的反应中相同的条件下进行。化合物(22)转化为化合物(23)的反应在与反应式-3中化合物(15)转化为化合物(3)的反应中相同的条件下进行。化合物(22)转化为化合物(1)的反应和化合物(23)转化为化合物(1)的反应都在反应式-2中化合物(7)转化为化合物(8)的反应中相同的条件下进行。
反应式-8 (其中R7、R8、R9和R10a同上所定义)。
化合物(24)与(25)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。化合物(26)转化为(2)的反应在与反应式-2中化合物(7)转化为(8)的反应中相同的条件下进行。
反应式-9
(其中R7、R8、R9和R10a同上所定义)。
化合物(27)与(25)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。化合物(28)转化为(29)的反应在与反应式-3中化合物(15)转化为化合物(3)的反应中相同的条件下进行。化合物(29)转化为(2)的反应在与反应式-1中化合物(3)与(4)的反应中相同的条件下进行。
还原R9为苯基-低级烷氧基的化合物(2)可制得R9为羟基的化合物(2)。该还原在与R4为苯基-低级烷氧基的化合物(1)的还原中相同的条件下进行。
其中R2、R5或R6为苯环上带有至少一个羟基取代基的苯基-低级烷基的化合物(1)，可通过还原其中R2、R5和R6为苯环上带有至少一个苯基-低级烷氧基的苯基-低级烷基的化合物(1)来制备。其中R7为在苯环上带有至少一个羟基取代基的苯基-低级烷基，或为羟基取代的低级烷基的化合物(2)，可通过还原其中R7为在苯环上带有至少一个苯基-低级烷氧基的苯基-低级烷基，或为苯基-低级烷氧基取代的低级烷基的化合物(2)来制备。在与R4为苯基-低级烷氧基的化合物(1)的还原中相同的条件下进行这些还原。
在式(1)和(2)代表的本发明化合物中，带有碱性基团的化合物可容易地与药理上可接受的酸反应制成酸加成盐。例如可举出下列酸无机酸如氢氯酸、硫酸、磷酸、氢溴酸等;和有机酸如草酸、醋酸、琥珀酸、丙二酸、甲磺酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸等。
在式(1)和(2)代表的本发明化合物中，具有酸性基团的化合物可容易地与药理上可接受的碱化合物反应制成盐。例如可举出如下碱化合物氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠、碳酸氢钾等。
上述反应式中得到的目标化合物可用常规方法容易地从反应系统中分离和纯化。例如分离方法有溶剂萃取、稀释、重结晶、柱层析和制备性薄层层析。
当然，本发明化合物包括光学异构体和立体异构体。
通式(1)和(2)的每种化合物一般以普通药物制剂形式使用。用常用稀释剂或赋形剂如填充剂、增量剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等制备药物制剂。根据治疗目的可制备各种形式的药物制剂，典型剂型包括片剂、丸剂、粉剂、溶液、悬液、乳剂、粒剂、胶囊、栓剂、针剂(如溶液或悬液)等。制备片剂时可使用本领域中已知的各种载体，例如赋形剂有乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、脲、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素、硅酸等;粘合剂有水、乙醇、丙醇、简单糖浆、葡萄糖溶液、明胶溶液、羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等;崩解剂如干淀粉、藻酸钠、琼脂粉、海带多糖分、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧亚乙基脱水山梨糖-脂肪酸酯、月桂基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、淀粉、乳糖等;崩解抑制剂如白糖、硬脂精、可可脂、氢化油等;吸收促进剂如季铵盐、月桂基硫酸钠等;湿润剂如甘油、淀粉等;吸附剂如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土、胶态硅酸等;及润滑剂如精制滑石、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇等。
根据需要，可将片剂制成普通包衣片剂形式，如糖包衣片剂、明胶包衣片剂、肠溶包衣片剂或膜包衣片剂，或呈双层片剂或多层片剂形式。在制备丸剂时可使用本领域中已知的各种载体，例如赋形剂有葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高岭土、滑石等;粘合剂如粉状阿拉伯树胶、粉状黄蓍胶、明胶、乙醇等;崩解剂有海带多糖、琼脂等。在制备栓剂时，可使用各种已知载体，例如聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇酯、明胶和半合成甘油酯。在制备针剂(溶液、乳液或悬液)时，将溶液和悬液灭菌，并最好使其与血液等渗。在制备溶液、乳液或悬液时，可使用常用于本领域的所有稀释剂，如水、乙醇，丙二醇，乙氧化的异硬脂醇、多氧基-异硬脂醇和聚氧亚乙基脱水山梨醇-脂肪酸酯。在此情形下，针剂可含有足量的氯化钠、葡萄糖或甘油以使该针剂等渗，另外还可以含有所有常用助溶剂、缓冲液、光滑剂等。根据需要，本药物制剂还可以含有着色剂、防腐剂、香料、香味剂、增甜剂和其它药物。
对药物制剂中通式(1)和(2)的化合物的含量没有特别限制，可在较宽范围内适当选择，但相对药物制剂的重量，其含量一般为1-70%(重量)，优选为1-30%(重量)。
对此药物制剂的给药方法没有特别限制。这取决于剂型、病人的年龄、性别和其它条件、病人的疾病状况等。例如，片剂、丸剂、溶液、悬液、乳液、粒剂或胶囊为口服给药。针剂可单独或与葡萄糖、氨基酸等一般辅助溶液混合静脉内给药，或根据需要通过肌内、真皮内、皮下或腹膜内单独给药。栓剂为直肠内给药。
根据给药方法、病人的年龄、性别和其它条件、病人的疾病状态等适当地选择药物制剂的剂量，但适宜剂量以活性成份即通式(1)和(2)的化合物的量而言，一般为约0.5-30mg/kg体重/天。在每单位给药剂型中活性成份的适宜含量为约10-1000mg。
以下参考制剂实施例、参考实施例、实施例和药理试验更具体地说明本发明。
制剂实施例1(3RS，6RS)-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮150.0g柠檬酸1.0g乳糖33.5g磷酸二钙70.0gPluronicF-68(BASF-WyandottCorp.，N.J.，U.S.A制造的聚乙二醇的商标)30.0g月桂基硫酸钠15.0g
聚乙烯吡咯烷酮15.0gCarbowax1500(UnionCarbideCorp.，N.Y.，U.S.A制造的聚乙二醇的商标)4.5gCarbowax6000(UnionCarbideCorp.，N.Y.，U.S.A制造的聚乙二醇的商标)45.0g玉米淀粉30.0g干月桂基硫酸钠3.0g干硬脂酸镁3.0g乙醇足量混合本发明化合物、柠檬酸、乳糖、磷酸二钙、PluronicF-68和月桂基硫酸钠。
将混合物筛过-NO.60的筛，将过筛物用含聚乙烯吡咯烷酮、Carbowax1500和Carbowax6000的乙醇溶液进行湿法制粒。根据需要加入乙醇，将生成物制成浆状块。向此块中加入玉米淀粉，继续混合直到形成大小均一的颗粒。将这些颗粒过-NO.10筛，将过筛后的颗粒置于一盘上，在炉中100℃干燥12-14小时。将干燥颗粒筛过-NO.16筛，向过筛后的颗粒中加入干月桂基硫酸钠和干硬脂酸镁。充分混合整个混合物，用压片机压缩成所希望的形式，得到的片剂作为包衣片剂的核心部分。
此核心部分用清漆处理，处理后的表面用滑石包衣以防止此表面吸收水分。形成的核部分的表面再用基本包衣物包衣。再用清漆包衣，制得口服片剂需要多次包衣。为了得到具有光滑表面的完全球形的最终片剂，包衣片剂再用基本包衣物和光滑剂包衣。形成的片剂用着色剂包衣片剂，直到表面具有所希望的颜色。包衣片剂干燥后，将其表面抛光，以制得具有均一光泽的片剂。
参考实施例1将240ml7N氢氯酸(乙醇溶液)滴加到240ml含18.46gN-(2-羟基亚氨基-4-甲基戊酰基)氨基丙二酸二乙酯和5.49g硼烷-三甲胺的乙醇溶液(用冰冷却)中。在室温下搅拌此混合物15小时。将反应混合物在室温下真空蒸馏以除去溶剂。用二氯甲烷溶解残余物。形成的溶液依次用饱和氯化钠水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，并且进行蒸馏以除去溶剂。将生成的黄色油状物质溶解在120ml甲苯中。将溶液回流1小时，再进行蒸馏除去溶剂。19.02g生成的橙色油状物用硅胶柱层析纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到2.94g橙色油状物3-乙氧基羰基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，1.20(1.4H，d，J＝7Hz)，1.21(0.6H，d，J＝7Hz)，1.60-1.85(2H，m)，1.85-2.05(1H，m)，4.01(1H，t，J＝6.5Hz)，4.16(2H，q，J＝7Hz)，4.65(0.7H，d，J＝3.5Hz)，4.82(0.3H，s)，8.56(0.7H，d，J＝8Hz)，8.60(0.3H，brs)，10.30(1H，brs)参考例2用冰冷却下，将7.60g碳酸钾和6.3ml苄基氯加到100ml含9.57g3-乙氧基羰基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮的无水N，N-二甲基甲酰胺溶液中。室温下搅拌混合物16小时。反应混合物用450ml乙酸乙酯稀释，然后用饱和氯化钠水溶液洗涤三次，再用无水硫酸镁干燥。将形成的溶液蒸馏除去溶剂。静置残余物。过滤收集生成的结晶，用甲醇洗涤，得到4.51g无色柱状结晶(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-乙氧羰基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.80(3H，d，J＝6.5Hz)，0.81(3H，d，J＝6.5Hz)，1.32(3H，t，J＝＝7Hz)，1.60-1.80(2H，m)，1.80-2.00(1H，m)，3.32，3.65(each 1H，d，J＝14Hz)，3.59(1H，dd，J＝6Hz，7Hz)，4.29(2H，q，J＝7Hz)，4.51，4.80(each 1H，d，J＝10.5Hz)，6.55-6.95(1H，br)，7.06(2H，d，J＝7Hz)，7.20-7.50(8H，m)
参考实施例3将5.3ml 1N氢氧化钠加到25ml含2.32g(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-乙氧羰基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮的乙醇溶液中。在室温下搅拌混合物1.5小时。用1N盐酸调节反应混合物到pH3。向其中加入80ml乙酸乙酯和80ml水以进行分配。有机层用无水硫酸镁干燥，然后室温下真空蒸馏以除去溶剂，得到2.17g浅黄色固体(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-羧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.70(3H，d，J＝6.5Hz)，0.71(3H，d，J＝6.5Hz)，1.50-1.65(2H，m)，1.65-1.85(1H，m)，3.07，3.53(each 1H，d，J＝13.5Hz)，3.43(1H，t，J＝6Hz)，4.34，4.58(each 1H，d，J＝10.5Hz)，6.94(2H，d，J＝6.5Hz)，7.10-7.45(9H，m)，8.87(1H，brs)用适当的起始物以参考实施例3中相同的方法得到了下述化合物。棕色油状物(3RS，6SR)-3-羧基-6-异丁基-3-甲基-1-(2-四氢呋喃氧基)哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.96(3H，d，J＝6Hz)，0.97(3H，d，J＝6Hz)，1.45-2.00(9H，m)，1.78(1.5H，s)，1.83(1.5H，s)，3.55-3.75(1H，m)，3.80-3.95(1H，m)，4.50-4.70(1H，m)，5.05-5.20(1H，m)，6.71(2H，brs)参考实施例4将0.45g水合对甲苯磺酸加到60ml含6.15g3-乙氧基羰基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮和4ml 3，4-二氢-2H-吡喃的无水二氯甲烷溶液中。室温下搅拌此混合物4小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸镁干燥。形成的混合物进行蒸馏以除去溶剂，得到9.67g橙色油状物3-乙氧羰基-6-异丁基-1-(2-四氢吡喃氧基)哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，，250 MHz)δppm0.97(3H，t，J＝7Hz)，0.98(3H，t，J＝7Hz)，1.33(3H，t，J＝7Hz)，1.45-1.95(9H，m)，3.55-3.70(1H，m)，3.80-3.95(1H，m)，4.20-4.40(2H，m)，4.5-4.60(1H，m)，4.65-4.80(1H，m)，5.15-5.22(1H，m)，6.72(1H，brs)参考实施例5
将1.04g 60%氢化钠加到100ml含9.67g3-乙氧羰基-6-异丁基-1-(2-四氢吡喃氧基)哌嗪-2，5-二酮的无水N，N-二甲基亚砜溶液(用冰冷却)中，并搅拌混合物10分钟。向其中加入3.5ml碘甲烷。室温下搅拌混合物5小时。反应混合物用冰冷却，倾入饱和氯化铵水溶液中。用乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和氯化钠水溶液洗三次，用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到8.53g棕色油状物(3RS，6SR)-3-乙氧羰基-6-异丁基-3-甲基-1-(2-四氢呋喃氧基)哌嗪-2，5-二酮。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.98(3H，d，J＝6.5Hz)，0.99(3H，d，J＝6.5Hz)，1.26(1.5H，t，J＝7Hz)，1.31(1.5H，t，J＝7Hz)，1.45-1.90(9H，m)，1.71(1.5H，s)，1.75(1.5H，s)，3.60-3.70(1H，m)，3.85-3.95(1H，m)，4.25(2H，q，J＝7Hz)，4.50-4.60(1H，m)，5.00-5.20(1H，m)参考实施例6将14.86g二环己基碳化二亚胺加到200ml含17.07gN-苄氧亮氨酸和9.09gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时。过滤除去不溶物。向滤液中加入28.94g(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯。室温下搅拌混合物12小时。用1，000ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。用硅胶柱层析纯化残余物(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/6-1/4)，得到34.63g棕色油状物N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.75-0.95(6H，m)，1.22(1.6H，t，J＝7Hz)，1.26(0.4H，t，J＝7Hz)，1.30-1.50(1H，m)，1.39(14.4H，s)，1.40(3.6H，s)，1.50-1.70(1H，m)，3.01，3.10(each 1H，dd，J＝6Hz，14Hz)，3.35-3.55(1H，m)，4.05-4.25(2H，m)，4.43，4.53(each 0.2H，d，J＝12Hz)，4.61，4.71(each 0.8H，d，J＝12Hz)，4.75-4.95 91H，m)，5.10(0.2H，s)，5.12(0.8，s)，5.59(0.8H，d，J＝4.5Hz)，5.67(0.2H，d，J＝6Hz)，6.74(0.2H，d，J＝8.5Hz)，6.91(1.6H，s)，6.92(0.4H，s)，7.02(0.8H，d，J＝8.5Hz)，7.20-7.45(5H，m)参考实施例7用适当起始物以参考实施例6中相同的方法得到了下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(3'，5'-二甲氧基)酪氨酸乙酯，无色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85，0.87(each 2.4H，d，J＝6.5Hz)，0.86，0.91(each 0.6H，d，J＝6.5Hz)，1.15-1.50(5H，m)，1.50-1.65(1H，m)，3.00-3.20(2H，m)，3.49(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝8Hz)，3.82(6H，s)，4.10-4.30(2H，m)，4.46，4.56(eadch 0.2H，d，J＝12Hz)，4.63，4.72(each 0.8H，d，J＝12Hz)，4.91(1H，dt，J＝6Hz，J＝98Hz)，5.46(1H，brs)，6.35(1.6H，s)，6.38(0.4H，s)，6.92(0.2H，d，J＝8Hz)，7.02(0.8H，d，J＝8Hz)，7.15-7.50(5H，m)N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(3'，5'-二甲基)酪氨酸乙酯，黄色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85，0.87(each 0.6H，d，J＝6Hz)，0.86，0.89(each 2.4H，d，J＝7Hz)，1.27(3H，t，J＝7Hz)，1.20-1.45(2H，m)，1.55-1.70(1H，m)，2.15(1.2H，s)，2.17(4.8H，s)，2.90-3.15(2H，m)，3.40-3.55(1H，m)，4.10(2H，q，J＝7Hz)，4.64，4.74(each 1H，d，J＝12Hz)，4.86(1H，dt，J＝5.5Hz，J＝8Hz)，5.66(1H，brs)，6.73(1.6H，s)，6.76(0.4H，s)，6.81(0.2H，d，J＝9.5Hz)，7.00(0.8H，d，J＝8Hz)，7.20-7.45(5H，m)参考实施例8在氮气氛下，将13.2ml三乙胺和6ml氯化三甲基甲硅烷加到11.78g(2'，4'-二甲氧基)苯丙氨酸盐酸盐在无水二氯甲烷中的150ml悬液中。将混合物回流1.5小时。另外将9.28g二环己基碳化二亚胺加到10.68gN-苄氧基亮氨酸和5.18gN-羟基琥珀酰亚胺在无水二噁烷中的100ml溶液中。室温搅拌此混合物2小时。过滤除去生成的不溶物，室温下将滤液加入上述回流后的反应混合物中。搅拌形成的混合物12小时。用1，200ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用1N盐酸、氯化钠饱和水溶液、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，真空蒸馏除去溶剂，得到17.40g浅棕色玻璃样物质N-(N-苄氧基亮氨酰基)-(2'，4'-二甲氧基)苯丙氨酸。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.82，0.85(each 1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.87，0.92(each 1.5H，d，J＝6.5Hz)，1.05-1.30(2H，m)，1.45-1.60(1H，m)，3.05-3.02(1H，m)，3.35-3.55(1H，m)，3.74(3H，s)，3.75(3H，s)，3.90-4.05(0.5H，m)，4.10-4.25(0.5H，m)，4.50-4.80(3H，m)，6.30-6.50(2H，m)，7.01(1H，d，J＝8Hz)，7.15-7.40(5H，m)用适当起始物以参考实施例8中的相同方法得到了下述参考实施例9的化合物。
参考实施例9将64ml 2N氢氧化钠溶液加到34.63gN-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯的乙醇溶液中。在室温下搅拌此混合物1.5小时。用浓盐酸调节其pH至1。向其中加入500ml水。混合物用乙酸乙酯萃取2次，萃取液用饱和氯化钠水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到32.83g棕色油状物N-(N-苄氧基亮氨酸)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.82(3H，d，J＝6.5Hz)，0.84(3H，d，J＝6.5Hz)，1.10-1.37(2H，m)，1.39(18H，s)，1.45-1.65(1H，m)，2.99(0.43H，dd，J＝7Hz，J＝14Hz)，3.16(0.43H，dd，J＝5.5Hz，J＝14Hz)，3.04-3.28(0.15H，m)，3.42(0.15H，dd，J＝6Hz，J＝8Hz)，3.51(0.85H，dd，J＝5Hz，J＝9Hz)，4.35，4.42(each 0.15H，d，J＝12Hz)，4.53，4.60(each 0.85H，d，J＝12Hz)，4.70-4.90(1H，m)，5.13(1H，brs)，6.94(2H，s)，6.96(1H，d，J＝9Hz)，7.15-7.45(5H，m)用适当起始物，利用参考实施例9中相同的方法制得了参考实施例8的化合物。
参考实施例10用适当的起始物用与参考例8和9中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'，5'-二甲氧基)酪氨酸，无色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.83(3H，d，J＝6Hz)，0.85(3H，d，J＝6Hz)，1.15-1.45(2H，m)，1.45-1.65(1H，m)，3.04(1H，dd，J＝6.5Hz，J＝14Hz)，3.16(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝14Hz)，3.52(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，3.79(3H，s)，3.80(3H，s)，4.40，4.48(each 0.2H，d，J＝12Hz)，4.75-5.00(1H，m)，6.39(1.6H，s)，6.42(0.4H，s)，6.10-6.90(2H，br)，6.98(0.2H，d，J＝7Hz)，7.08(0.8H，d，J＝7.5Hz)，7.15-7.40(5H，m)N-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'5'-二甲基)酪氨酸，白色固体1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.80(3H，d，J＝6.5Hz)，0.86(3H，d，J＝6.5Hz)，1.30-1.45(2H，m)，1.50-1.70(1H，m)，2.03(6H，s)，2.77(1H，dd，J-7.5Hz，J＝14Hz)，2.87(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝14Hz)，3.83(1H，t，J＝8Hz)，4.44(1H，dd，J＝5Hz，J＝8Hz)，4.80(2H，s)，76.70(2H，s)，7.20-7.40(5H，m)，8.45(1H，brs)(N-苄氧基-DL-色氨酰)-L-丝氨酸，棕色泡沫样物质1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm2.80-3.00(1H，m)，3.00-3.15(1H，m)，3.45-3.65(1H，m)，3.65-3.85(1H，m)，3.90-4.05(1H，m)，4.30-4.45(1H，m)，4.67，4.73(1H，d，J＝11Hz)，6.97(1H，t，J＝7.5Hz)，7.07(1H，t，J＝7Hz)，7.17(1H，d，J＝7Hz)，7.29(5H，s)，7.34(1H，d，J＝8Hz)，7.55(1H，d，J＝8Hz)，8.21(1H，d，J＝8Hz)，10.87(1H，brs)
参考实施例11将26.82g二环己基碳化二亚胺加到含34.47g(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸甲酯、18.87g2-羟亚氨基-4-甲基戊酸和14.96gN-羟基琥珀酰亚胺的1升无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物18小时，过滤，滤液进行蒸馏除去溶剂。用硅胶柱层析纯化残余物(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/2)，得到42.70g白色粉末N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸甲酯。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.90(6H，d，J＝6.5Hz)，1.90-2.11(1H，m)，2.52(2H，d，J＝7.5Hz)，3.02-3.18(2H，m)，3.74(3H，s)，3.81(6H，s)，3.82(3H，s)，4.91(1H，dt，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，6.32(2H，s)，7.17(1H，d，J＝8.5Hz)，7.83(1H，brs)参考实施例12用适当的起始物，用与参考例11中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸乙酯，白色粉末
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.90(6H，d，J＝6.5Hz)，1.21(3H，t，J＝7Hz)，1.28(18H，s)，1.80-2.15(1H，m)，2.52(2H，d，J＝7.5Hz)，3.00(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.07(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，4.00-4.23(2H，m)，4.82(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，5.10(1H，s)，6.89(2H，s)，7.15(1H，brd，J＝8.5Hz)，7.56(1H，brs)N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-2-苯丙氨酸甲酯，无色针晶，熔点71-73℃N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-O-苄基-L-酪氨酸甲酯，无色针晶，熔点108-110℃N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，5'-二氯)-L-酪氨酸乙酯，白色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.91(6H，d，J＝6.5Hz)，1.27(3H，t，J＝7Hz)，1.90-2.10(1H，m)，2.52(2H，d，J＝7.5Hz)，2.98(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.08(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，4.20，4.21(each 1H，q，J＝7Hz)，4.81(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，5.86(1H，s)，7.03(2H，s)，7.26(1H，d，J＝8Hz)，8.24(1H，brs)
N-苄基-N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-组氨酸甲酯，白色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.86(3H，d，J＝6.5Hz)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，1.88-2.10(1H，m)，2.49(2H，d，J＝7.5Hz)，3.09(1H，dd，J＝7.5Hz，J＝14.5Hz)，3.17(1H，dd，J＝6Hz，J＝14.5Hz)，3.62(3H，s)，4.87(1H，dt，J＝7Hz，J＝8Hz)，5.03(2H，s)，6.77(1H，s)，7.10-7.23(2H，m)，7.30-7.46(3H，m)，7.44(1H，s)，8.16(1H，d，J＝8.5Hz)，23.66(1H，brs)参考实施例13将180ml 1N氢氧化钠加到500ml含31.98gN-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸甲基的乙醇溶液中。室温搅拌混合物13小时。对反应混合物进行蒸馏除去乙醇。残余物用盐酸酸化，再用乙酸乙酯萃取。萃取液用氯化钠饱和水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到30.93g白色粉末N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-(3'，4'，5'-三甲氧基)苯丙氨酸。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(3H，d，J＝6.5Hz)，0.8(3H，d，J＝6.5Hz)，1.88-2.07(1H，m)，2.48(1H，dd，J＝12.5Hz，J＝19.5Hz)，2.50(1H，dd，J＝12.5Hz，J＝19.5Hz)，3.05(1H，dd，J＝7.5Hz，J＝14Hz)，3.20(1H，dd，J＝5Hz，J＝14Hz)，3.77(6H，s)，3.80(3H，s)，4.92(1H，dt，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，6.38(2H，s)，7.28(1H，d，J＝8.5Hz)参考实施例14用适当的起始物和与参考实施例13中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-苯丙氨酸，白色粉末，熔点120-122℃。
N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-O-苄基-L-酪氨酸，无色针晶，熔点147-148℃N-苄基-N-(2-羟亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-组氨酸，白色粉末1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm0.82(6H，d，J＝6.5Hz)，1.80-2.00(1H，m)，2.36(2H，d，J＝7.5Hz)，2.94(1H，dd，J＝5Hz，J＝15Hz)，3.03(1H，dd，J＝7Hz，J＝15Hz)，4.56(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，5.19(2H，s)，7.03(1H，s)，7.20-7.30(2H，m)，7.30-7.45(3H，m)，7.95(1H，s)，8.22(1H，d，J＝8Hz)，11.81(1H，s)参考实施例15将22.90g二环己基碳化二亚胺加到300ml含26.39gN-苄氧基亮氨酸和13.35gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。在室温下搅拌混合物2小时，过滤反应混合物除去不溶物，得到一无色溶液。另外，将20ml三乙胺加到300ml含28.57g氨基丙二酸二乙酯盐酸盐的无水二噁烷悬浮液中。此混合物用超声波处理1小时。将上述无色溶液加入其中。室温下搅拌16小时，再在热浴温度100℃下搅拌3.5小时。蒸馏反应混合物以除去溶剂。将残余物溶解在1，000ml乙酸乙酯中。此溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到39.22gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙二酸二乙酯，黄色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，0.91(3H，d，J＝6.5Hz)，1.30(6H，t，J＝7Hz)，1.35-1.55(2H，m)，1.60-1.80(1H，m)，3.57(1H，dt，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，4.20-4.40(4H，m)，4.73，4.82(each 1H，d，J＝12Hz)，5.21(1H，d，J＝7Hz)，5.69(1H，d，J＝5Hz)，7.25-7.40(5H，m)，7.52(1H，d，J＝7Hz)
参考实施例16用冰冷却下，将90ml1N氢氧化钠加到180ml含35.28gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙二酸二乙酯的乙醇溶液中。冰冷却下用600ml水稀释此混合物，形成的混合物用乙醚洗涤(500ml×2)。水层用浓盐酸调pH至1，用冰冷的乙酸乙酯萃取(500ml×2)。萃取液用氯化钠饱和水溶液洗两次，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到28.72gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙甲二酸，白色固体。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.89(3H，d，J＝6Hz)，0.91(3H，d，J＝6Hz)，1.32(3H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.80(1H，m)，3.61(1H，dd，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，4.31(2H，q，J＝7Hz)，4.77，4.80(each 1H，d，J＝12Hz)，5.17(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.19(0.5H，d，J＝5Hz)，5.25(2H，brs)，7.25-7.45(5H，m)，7.71(1H，d，J＝6.5Hz)参考实施例17将1.03g二环己基碳化二亚胺加到30ml含1.83gN-(N-苄氧基亮氨酰)氨基丙二酸乙酯、0.58gN-羟基琥珀酰亚胺和1.3ml(3-甲氧苄基)胺的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时。过滤反应混合物除去不溶物，滤液用100ml乙酸乙酯稀释。形成的溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。生成的黄色油状物1.49g用硅胶柱层析纯化(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/2)，得到0.96gN-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3-甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯，无色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.87(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.88(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.90(1.5H，d，J＝6.5Hz)，1.26(1.5H，t，J＝7Hz)，1.27(1.5H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.75(1H，m)，3.56(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，3.78(3H，s)，4.15-4.35(2H，m)，4.35-4.55(2H，m)，4.70，4.76(each 0.5H，d，J＝12Hz)，4.72，4.78(each 0.5H，d，J＝12Hz)，5.13(0.5H，d，J＝7Hz)，5.14(0.5H，d，J＝7Hz)，6.75-7.00(4H，m)，7.21(1H，d，J＝7.5Hz)，7.30-7.50(5H，m)，7.62(0.5H，d，J＝7Hz)，7.75(0.5H，d，J＝7Hz)参考实施例18
用适当的起始物用参考实施例17中相同的方法，得到下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(2，4-二甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯，白色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.86(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.88(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.89(1.5H，d，J＝6.5Hz)，1.21(1.5H，t，J＝7Hz)，1.22(1.5H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.80(1H，m)，3.54(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，3.79(3H，s)，3.83(3H，s)，4.20(1H，q，J＝7Hz)，4.22(1H，q，J＝7Hz)，4.38(1H，d，J＝6Hz)，4.40(1H，d，J＝6Hz)，4.70，4.77(each 0.5H，d，J＝12Hz)，4.71，4.78(each 0.5H，d，J＝12Hz)，5.04(0.5H，d，J＝7Hz)，5.06(0.5H，d，J＝7Hz)，6.41(0.5H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.42(0.5H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.45(1H，d，J＝2.5Hz)，6.88(1H，brt，J＝8Hz)，7.14(1H，d，J＝8Hz)，7.25-7.45(5H，m)，7.59(0.5H，d，J＝7Hz)，7.72(0.5H，d，J＝7Hz)
N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯，棕色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，0.89(3H，d，J＝6.5Hz)，1.23(2H，J＝7Hz)，1.20-1.55(2H，m)，1.42(18H，s)，1.55-1.75(1H，m)，3.40-3.65(1H，m)，4.20-4.50(4H，m)，4.65-4.80(2H，m)，5.09(0.5H，d，J＝7Hz)，5.10(0.5H，d，J＝7Hz)，5.20(1H，s)，5.62-5.78(1H，br)，6.63(1H，brt，J＝5Hz)，7.05(2H，s)，7.30-7.45(5H，m)，7.58(0.5H，d，J＝7Hz)，7.78(0.5H，d，J＝7Hz)N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[4-(2-甲氧苯基)-1-哌嗪基羰基]甘氨酸乙酯，无色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝7Hz)，0.90(3H，d，J＝7Hz)，1.27(3H，t，J＝7Hz)，1.30-1.55(2H，m)，1.55-1.80(1H，m)，3.00-3.25(4H，m)，3.45-3.65(1H，m)，3.75-4.10(4H，m)，3.89(3H，s)，4.23(2H，q，J＝7Hz)，4.77(0.8H，dd，J＝12Hz，J＝19.5Hz)，4.78(1.2H，dd，J＝12Hz，J＝19.5Hz)，5.66(1H，d，J＝7.5Hz)，5.71(0.4H，d，J＝5Hz)，5.78(0.6H，d，J＝6.5Hz)，6.85-7.15(4H，m)，7.30-7.50(5H，m)，7.66(0.6H，d，J＝7.5Hz)，7.81(0.4H，d，J＝7.5Hz)参考实施例19用冰冷却下，将2.5ml1N氢氧化钠加到20ml含0.96gN-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3-甲氧苄基)氨基甲酰基]甘氨酸乙酯的乙醇溶液中。在室温下搅拌混合物4小时。用70ml水稀释反应混合物。形成的溶液用浓盐酸调pH为1，再用乙酸乙酯萃取。萃取液用氯化钠饱和水溶液洗2次，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到了1.03gN-(N-苄氧亮氨酸)-α-[N-(3-甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸，白色固体。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.84(3H，d，J＝6.5Hz)，0.89(3H，d，J＝6.5Hz)，1.25-1.50(2H，m)，1.50-1.70(1H，m)，3.50-3.70(1H，m)，3.78(3H，s)，4.10-4.22(0.8H，m)，4.35(1.2H，dd，J＝6Hz，J＝12Hz)，4.56(0.8H，s)，4.60(1.2H，s)，5.08-5.13(0.4H，m)，5.14-5.23(0.6H，m)，6.70-6.90(2H，m)，7.15-7.40(6H，m)，7.63(1H，brd，J＝6Hz)
参考实施例20用适当的起始物，用参考实施例19中相同的方法，得到了下列化合物。
N-(N-苄氧基亮氨酰)-2-[N-(2，4-二甲氧基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸，浅黄色油状物，1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.80-0.95(6H，m)，1.25-1.50(2H，m)，1.50-1.75(1H，m)，3.52(0.5H，d，J＝8Hz)，3.63(0.5H，dd，J＝6Hz，J＝8.5Hz)，3.76(1.5H，s)，3.77(1.5H，s)，3.78(1.5H，s)，3.79(1.5H，s)，4.31(1H，d，J＝5.5Hz)，4.35(1H，d，J＝5.5Hz)，4.57，4.63(each 1H，d，J＝12.5Hz)，5.02(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.10(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.10-6.20(1H，br)，6.41(1H，dd，J＝1.5Hz，J＝8Hz)，6.42(1H，d，J＝1.5Hz)，7.10(0.5H，d，J＝8Hz)，7.12(0.5H，d，J＝8Hz)，7.20-7.40(5.5H，m)，7.52(0.5H，d，J＝6.5Hz)N-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)氨基甲酰基]甘氨酸，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.80-0.95(6H，m)，1.30-1.50(2H，m)，1.41(18H，s)，1.55-1.70(1H，m)，3.90-4.05(1H，m)，4.25-4.40(2H，m)，4.45-4.60(2H，m)，5.08(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.13(0.5H，d，J＝6.5Hz)，5.20(1H，brs)，6.61(0.5H，brt，J＝6.5Hz)，6.95-7.10(2H，m)，7.14(0.5H，brt，J＝6.5Hz)，7.20-7.40(5H，m)，7.71(1H，brd，J＝8.5Hz)N-(N-苄氧基亮氨酸)-α-[4-(2-甲氧苯基)-1-哌嗪基羰基]甘氨酸，黄色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(3H，d，J＝6.5Hz)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，1.35-1.55(2H，m)，1.55＝1.75(1H，m)，2.95-3.25(4H，m)，3.60(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，3.75-3.90(4H，m)，3.86(3H，s)，4.71(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝2Hz)，4.78(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝12Hz)，5.59(0.5H，d，J＝7.5Hz)，5.63(0.5H，d，J＝12Hz)，5.59(0.5H，d，J＝7.5Hz)，5.63(0.5H，d，J＝7.5Hz)，5.69(2H，brs)，6.85-6.95(3H，m)，6.95-7.10(1H，m)，7.25-7.45(5H，m)，8.00(0.5H，d，J＝7.5Hz)，8.06(0.5H，d，J＝7.5Hz)参考实施例21用冰冷却下，将8.68g二环己基碳化二亚胺加到200ml含8.73g3-(3-吲哚基)-2-羟基亚氨基丙酸和4.83gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。在室温下搅拌混合物2小时。过滤反应混合物以除去不溶物，得到一棕色溶液。另外，将5.6ml三乙胺加到70ml含7.27gL-亮氨酸甲酯盐酸盐的无水二噁烷悬液中，室温搅拌此混合物2小时。向其中加入上述棕色溶液。搅拌混合物16小时。用700ml乙酸乙酯稀释反应混合物，形成的溶液用1N盐酸、氯化钠饱和水溶液和碳酸氢钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到13.81gN-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-亮氨酸甲酯，棕色油状物。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.87(3H，d，J＝6Hz)，0.89(3H，d，J＝6Hz)，1.45-1.75(3H，m)，3.70(3H，s)，4.08(2H，s)，4.65(1H，dt，J＝5.5Hz，J＝8.5Hz)，6.96(1H，d，J＝2.5Hz)，7.09(1H，d，J＝7Hz)，7.15(1H，d，J＝7Hz)，7.26(1H，d，J＝7Hz)，7.28(1H，d，J＝7Hz)，7.78(1H，d，J＝7Hz)，7.93(1H，brs)，9.29(1H，s)参考实施例22用适当的起始物，用与参考实施例21中相同的方法，制得下列化合物。
N-[2-羟亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-苯丙氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm3.01(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.09(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.65(3H，s)，4.04，4.11(each1H，d，J＝14Hz)，4.87(1H，dt，J＝6Hz，J＝8Hz)，6.85-7.00(2H，m)，7.04(1H，d，J＝2.5Hz)，7.05-7.25(6H，m)，7.30(1H，d，J＝7.5Hz)，7.78(1H，d，J＝7.5Hz)，8.00(1H，brs)，8.56(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-甲硫氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.75-2.05(1H，m)，1.98(3H，s)，2.05-2.20(1H，m)，2.40(2H，t，J＝7Hz)，3.70(3H，s)，4.08(2H，s)，4.74(1H，dt，J＝5.5Hz，8Hz)，7.02(1H，d，J＝2.5Hz)，7.08(1H，t，J＝8Hz)，7.15(1H，t，J＝8Hz)，7.26(1H，d，J＝8Hz)，7.37(1H，d，J＝8Hz)，7.78(1H，d，J＝8Hz)，8.03(1H，brs)，9.24(1H，brs)O-苄基-N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-丝氨酸甲酯，浅黄色泡沫样物质1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm3.60(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝9.5Hz)，3.68(3H，3.60(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝9.5Hz)，4.06(2H，brs)，4.36，4.45(each 1H，d，J＝12Hz)，4.76(1H，dt，J＝3.5Hz，8.5Hz)，6.99(1H，s)，7.05-7.35(7H，m)，7.63(1H，d，J＝8Hz)，7.78(1H，d，J＝7.5Hz)，7.90(1H，brs)，8.89(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]氨基丙二酸二乙酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.24(6H，t，J＝7Hz)，4.04(2H，s)，4.10-4.35(4H，m)，5.18(1H，d，J＝7Hz)，6.98(1H，d，J＝2.5Hz)，7.08(1H，t，J＝7Hz)，7.14(1H，t，J＝7Hz)，7.24(1H，d，J＝7Hz)，7.77(1H，d，J＝7Hz)，7.79(1H，d，J＝7Hz)，8.05(1H，brs)，9.30(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-天冬酰酸二乙酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.19(3H，t，J＝7Hz)，1.20(3H，t，J＝7Hz)，2.80(1H，dd，J＝5Hz，J＝17Hz)，2.99(1H，dd，J＝5Hz，J＝17Hz)，4.07(2H，s)，4.17(2H，q，J＝7Hz)，4.18(2H，q，J＝7Hz)，4.87(1H，dt，J＝5Hz，J＝8.5Hz)，7.07(1H，d，J＝2.5Hz)，7.12(1H，t，J＝7.5Hz)，7.15(1H，t，J＝7Hz)，7.28(1H，d，J＝7Hz)，7.67(1H，d，J＝8.5Hz)，7.79(1H，d，J＝7.5Hz)，8.03(1H，brs)，8.58(1H，s)O-苄基-N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-酪氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm2.92(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.02(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，3.62(3H，s)，4.10，4.13(each1H，s)，4.81(1H，dd，J＝6Hz，J＝14Hz)，4.88(2H，s)，6.66，6.78(each 2H，d，J＝8.5Hz)，6.96(1H，d，J＝2Hz)，7.09(1H，t，J＝7.5Hz)，7.15(1H，t，J＝7.5Hz)，7.24(1H，d，J＝7Hz)，7.25-7.45(5H，m)，7.78(1H，d，J＝7Hz)，8.06(1H，brs)N-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-脯氨酸甲酯，棕色油状物1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm1.30-1.55(0.5H，m)，1.55-1.95(3H，m)，1.95-2.10(0.5H，m)，3.20-3.45(2H，m)，3.67(3H，s)，4.00，4.13(each 0.7H，d，J＝14.5Hz)，4.18，4.23(each 0.3H，d，J＝8Hz)，4.40(0.7H，dd，J＝5.5Hz，8.5Hz)，4.49(0.3H，brd，J＝4.5Hz)，7.00-7.20(3H，m)，7.20-7.40(1H，m)，7.70(1H，d，J＝7Hz)，8.43(1H，brs)，9.47(1H，s)参考实施例23在冰冷却下，将1.24g二环己基碳化二亚胺加到30ml含1.77gN-苄氧基-DL-色氨酸和0.70gN-羟基琥珀酰亚胺的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时。过滤反应混合物以除去不溶物，从而得到一浅棕色溶液。另外，将0.8ml三乙胺加到20ml含0.89gL-丝氨酸甲酯盐酸盐的无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物2小时，向其中加入上述浅棕色溶液。形成的混合物在室温下搅拌66小时。用200ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用1N盐酸和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到2.07g(N-苄氧基-DL-色氨酰)-L-丝氨酸甲酯，棕色油状物。
1H-NMR(DMSO-d6，250 MHz)δppm2.70-2.87(1H，m)，2.97(1H，dd，J＝6Hz，J＝14.5Hz)，3.45-3.80(2H，m)，3.60，3.61(each1.5H，s)，3.80-3.95(1H，m)，4.30-4.55(1H，m)，4.62(2H，s)，5.08(1H，dd，J＝5.5Hz，J＝10.5Hz)，6.49(1H，d，J＝7Hz)，6.96(1H，t，J＝7.5Hz)，7.06(1H，t，J＝7.5Hz)，7.13(1H，s)，7.27(5H，s)，7.32(1H，d，J＝7.5Hz)，7.51(1H，d，J＝7.5Hz)，8.15，8.22(each 0.5H，d，J＝8Hz)，10.83(1H，brs)实施例1将1.09g二环己基碳化二亚胺加到含2.17g(3RS，6SR)-3-苄基-1-苄氧基-3-羧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮和0.63gN-羟基琥珀酰亚胺的25ml无水二噁烷溶液中。在室温搅拌此混合物2小时。向其中加入0.80g2-氨基苯并噻唑。室温下搅拌此混合物23小时。用200ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。残余物用乙酸乙酯重结晶，得到2.77g(3RS，6SR)-3-(苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基-3-苄基-1-苄氧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，白色固体。
1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.75(3H，d，J＝6Hz)，0.76(3H，d，J＝6Hz)，1.50-1.85(3H，m)，3.26，3.64(each 1H，d，J＝13.5Hz)，3.51(1H，t，J＝6Hz)，4.49，4.81(each 1H，d，J＝10Hz)，6.95(1H，brs)，7.10-7.20(2H，m)，7.25-7.40(9H，m)，7.48(1H，t，J＝8Hz)，7.85(2H，t，J＝8Hz)用适当起始物，用实施例1中相同的方法制备了下述实施例27-29和31-39的化合物。
实施例2将0.80g10%钯-碳加到30ml含1.56g(3RS，6SR)-3-(苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基-3-苄基-1-苄氧基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮的二噁烷溶液中。在氢气流中于室温下搅拌混合物4小时。过滤反应混合物除去催化剂。滤液进行蒸馏除去溶剂。生成的浅棕色油状物用二氯甲烷重结晶，得到0.56g(3RS，6SR)-3-(苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基-3-苄基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，白色固体，熔点222-225℃(分解)。
用适当的起始物和与实施例2中相同的方法，得到了下述实施例9-26，28-29，33，37-39，47-62及64-65的化合物。
实施例3将3.32g(3RS，6SR)-1-(2-四氢吡喃氧基)-6-异丁基-3-N-(3-甲氧基苄基)氨基甲酰基-3-甲基哌嗪-2，5-二酮溶解在20ml 1N氢氯酸(乙醇溶液)中。搅拌此溶液5分钟，再蒸馏除去溶剂。向残余物中加入30ml1N氢氧化钠水溶液。用二氯甲烷(30ml×2)和乙醚(30ml)洗涤此混合物，水层用浓盐酸调节pH为2-3，用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。萃取液用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，残余物用乙醚重结晶，得到1.26g(3RS，6SR)-1-羟基-6-异丁基-3-[N-(3-甲氧基苄基)]氨基甲酰基-3-甲基哌嗪-2，5-二酮，浅棕色固体，熔点151.5-153.5℃。
实施例4将13.21g二环己基碳化二亚胺加到含32.83gN-(N-苄氧基亮氨酰)-(3'，5'-二叔丁基)酪氨酸和7.71gN-羟基琥珀酰亚胺的500ml无水二噁烷溶液中。室温下搅拌3天，然后保持120℃计1.5小时。让反应混合物冷却。过滤除去不溶物，减压浓缩滤液至200ml。用1，000ml乙酸乙酯稀释浓缩液，形成的溶液用1N盐酸、碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂。残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/2)，得到11.54g化合物(A)和5.42g化合物(B)。
化合物(A)(3RS，6RS)-1-苄氧基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮熔点198.5-200.5℃(分解)(从乙酸乙酯中重结晶)无色针状结晶化合物(B)(3RS，6SR)-1-苄氧基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮浅黄色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.86(3H，d，J＝6Hz)，0.88(3H，d，J＝6Hz)，1.43(18H，s)，1.60-1.95(3H，m)，2.74(1H，dd，J＝9.5Hz，J＝14Hz)，3.44(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝14Hz)，3.77(1H，t，J＝6Hz)，4.15(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝9.5Hz)，4.82，4.97(each 1H，d，J＝10.5Hz)，5.21(1H，s)，5.67(1H，brs)，7.01(2H，s)，7.37(5H，s)实施例5将0.41g二环己基碳化二亚胺加到含0.91gN-(N-苄氧基亮氨酰)-α-[N-(3-甲氧苄基)]氨基甲酰基甘氨酸和0.23gN-羟基琥珀酰亚胺的20ml无水二噁烷溶液中。在室温下搅拌此混合物16小时。过滤反应混合物除去不溶物。用50ml乙酸乙酯稀释滤液。形成的溶液用1N盐酸和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到0.81g1-苄氧基-6-异丁基-3-[N-(3-甲氧基苄基)]氨基甲酰基哌嗪-2，5-二酮的顺反混合物。
浅棕色固体1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.85(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.86(1.5H，d，J＝6.5Hz)，0.92(3H，d，J＝6Hz)，1.60-2.00(3H，m)，3.78(1.5H，s)，3.80(1.5H，s)，4.00(1H，t，J＝6Hz)，4.43(1H，d，J＝6Hz)，4.46(0.5H，d，J＝6Hz)，4.53(0.5H，d，J＝6Hz)，4.54(0.5H，s-like)，4.62(0.5H，d，J＝2.5Hz)，4.88，4.99(each 0.5H，d，J＝10.5Hz)，4.95，5.01(each 0.5H，d，J＝10.5Hz)，6.46(0.5H，brs)，6.90(0.5H，brs)，6.70-7.00(3H，m)，7.15-7.28(1H，m)，7.37(2.5H，s)，7.15-7.28(1H，m)，7.37(2.5H，s)，7.40(2.5H，s)，7.54(0.5H，brt，J＝6Hz)，8.53(0.5H，brt，J＝6Hz)实施例6
将7.00gN，N'-羰基二咪唑加到含17.40gN-(N-苄氧基亮氨酰)-(2'，4'-二甲氧基)苯丙氨酸的200ml无水二噁烷溶液中。室温下搅拌混合物16小时。用1，000ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用10%柠檬酸、10%碳酸氢钠水溶液和氯化钠饱和水溶液依次洗涤，再用无水硫酸镁干燥，真空蒸馏除去溶剂。将生成的黄色油状物进行硅胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯/正己烷＝1/1-3/1)，得到3.79g黄色玻璃样化合物(C)和1.53g浅黄色固体化合物(D)化合物(C)(3RS，6RS)-1-苄氧基-3-(2，4-二甲氧苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.84(6H，d，J＝6.5Hz)，1.15-1.35(1H，m)，1.40-1.55(1H，m)，1.75-1.95(1H，m)，2.92(1H，dd，J＝8Hz，13.5Hz)，3.36(1H dd，J＝4.5Hz，13.5Hz)，3.78(3H，s)，3.80(3H，s)，3.88(1H，dd，J＝5.5Hz，8Hz)，4.20-4.35(1H，m)，4.94，5.02(each 1H，d，J＝10.5Hz)，5.65(1H，brs)，6.41(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.45(1H，d，J＝2.5Hz)，7.04(1H，d，J＝8Hz)，7.30-7.50(5H，m)
化合物(D)(3RS，6SR)-1-苄氧基-3-(2，4-二甲氧苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮1H-NMR(CDCl3，250 MHz)δppm0.86(3H，d，J＝6.5Hz)，0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，1.50-1.90(3H，m)，2.93(1H，dd，J＝7.5Hz，J＝14Hz)，3.51(1H，dd，J＝4Hz，J＝14Hz)，3.75(1H，t，J＝6Hz)，3.80(3H，s)，3.85(3H，s)，4.23(1H，dd，J＝4Hz，7.5Hz)，4.82，4.97(each 1H，d，J＝11Hz)，6.00(1H，brs)，76.47(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8Hz)，6.50(1H，d，J＝2.5Hz)，7.15(1H，d，J＝8Hz)，7.25-7.40(5H，m)实施例7于室温下20分钟内，将150ml7N氢氯酸(乙醇溶液)滴加到含8.77gN-(2-羟基亚氨基-4-甲基戊酰基)-L-苯丙氨酸和3.28g硼烷-三甲胺的150ml乙醇溶液中。搅拌混合物24小时，室温下真空蒸馏除去溶剂。用二氯甲烷溶解残余物。此溶液用氯化钠饱和水溶液和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。向残余物中加入100ml甲苯。回流混合物1小时，再蒸馏除去溶剂。生成的棕色油状物进行硅胶柱层析(洗脱液二氯甲烷/甲醇＝15/1)，得到1.77g化合物(E)和1.65g化合物(F)。
化合物(E)(3S，6S)-3-苄基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，浅橙色棱晶熔点152-153℃(从二氯甲烷中重结晶)化合物(F)(3S，6R)-3-苄基-1-羟基-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮，浅棕色针晶熔点203-204℃(从氯仿-乙醚中重结晶)实施例8在冰冷却下，将200ml7N氢氯酸(乙醇溶液)加到含13.81gN-[2-羟基亚氨基-3-(3-吲哚基)丙酰基]-L-亮氨酸甲酯和4.51g硼烷-三甲胺的200ml乙醇溶液中。室温下搅拌混合物16小时。反应混合物经蒸馏除去溶剂。残余物与150ml二氯甲烷和150ml碳酸氢钠饱和水溶液混合以进行分配。有机层用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂。将残余物溶于100ml甲苯溶液中。回流1小时，蒸馏除去溶剂。生成的棕色油状物15.64g用硅胶柱层析纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇＝50/1-15/1)，得到1.28g顺式化合物(G)和1.30g反式化合物(H)。
化合物(G)(3S，6S)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-异丁基哌嗪-2，5-二酮浅橙色固体熔点146-148℃(分解)(从氯仿-正己烷中重结晶)化合物(H)(3S，6R)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-异丁基哌嗪-2，5-二酮浅橙固体熔点128-129.5℃(分解)用适当的起始物，用实施例4、5、6和7中的相同方法，得到了示于下列表1-13中的实施例9-45的化合物。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
表10
表11
表12
表13
实施例46将1.24g二环己基碳化二亚胺加到含2.04g(3RS，6SR)-3-羧基-6-异丁基-3-甲基-1-(2-四氢吡喃氧基)哌嗪-2，5-二酮和0.73gN-羟基琥珀酰亚胺的30ml无水二噁烷溶液中。室温下搅拌3小时。过滤反应混合物除去不溶物。向滤液中加入0.84ml3-甲氧基苄基胺。室温下搅拌此混合物19小时。用150ml乙酸乙酯稀释反应混合物。形成的溶液用碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，再用无水硫酸镁干燥，蒸馏除去溶剂，得到3.32g(3RS，6SR)-1-(2-四氢吡喃氧基)-6-异丁基-3-[N-(3-甲氧基苄基)]氨基甲酰基-3-甲基哌嗪-2，5-二酮，黄色油状物。
用适当起始物，用与实施例4、5、6和8中相同的方法，得到了下表14-19中所示实施例47-65的化合物。
表14
表15
表15(续)
表16
表16(续)
表17
表17(续)
表18
表19
以上所得化合物的部分NMR光谱数据示于下表20-25中表20
表21
表22
表23
表24
表25
药理试验-1对豚鼠的腹膜巨噬细胞受激释放过氧化物自由基(O-2)的抑制作用细豚鼠腹膜内注射15ml矿物油，注射96小时后，收集腹膜巨噬细胞。
按照T.Matsumoto，K.Takeshige和S.Minakami撰写的文章Biochemical and Biophysical Research Communication，Vol.88，NO.3，pp 974-979，(1979)中描述的步骤，用细胞色素C还原法测定过氧化物自由基(O-2)。
向1ml 80μM的细胞色素C溶液中加入腹膜巨噬细胞，使终浓度为2×106个细胞/ml，将每种本发明的试验化合物加入其中形成试验组样品。另一方面，用水代替本发明的试验化合物加入其中，形成对照组样品。将每个试验组样品和对照组样品在37℃预孵育1分钟。
作为过氧化物自由基(O-2)释放的刺激剂，向每个样品溶液和对照样品中加入FMLP(甲酰基甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸)，使FMLP的终浓度为10-7M，然后再将样品溶液孵育反应一分钟。
在550nm测定了试验组样品和对照组样品吸光度的差别(OD550)，通过计算实验组与对照组样品的OD550的比例，得到了50%抑制率浓度(IC50)。从试验中得到的IC50示于下表26中
表26 药理试验-2对大鼠神经细胞释放溶酶体酶的抑制作用给以大鼠10ml1%酪蛋白溶液(生理盐水溶液)16小时后，从腹腔采集神经细胞样品。
大鼠神经细胞释放溶酶体酶的反应，按照T.Matsumoto，K.Takeshige和S.Minakami的文章BiochemicalandBiophysicalResearchCommunication，Vol.88，NO.3，pp 974-979，(1979)中描述的方法测定。
将采集的神经细胞加到Hank's液中，使其浓度为5×105个细胞/ml，向其中加入本发明的哌嗪衍生物作为试验化合物，形成试样组样品。另一方面，用水代替本发明的哌嗪衍生物加入其中，形成对照组样品。每个试验组和对照组样品在37℃下预孵育1分钟。
作为刺激剂，向试验溶液中加入10-6M的FMIP(甲酰基甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸)和5μg/ml的细胞松弛素B溶液。如此得到的混合溶液孵育反应15分钟，然后2000rpm下离心10分钟。上清液(0.2ml)与溶解有0.2mM酚酞葡糖醛酸的0.5ml 0.1M乙酸缓冲溶液(pH 4.5)混合。形成的混合溶液在37℃下孵育反应5小时。反应后，向反应混合物中加入1N NaOH溶液，但其pH达8-9，在540nm处测定试验组和对照组样品的吸光度(OD540)。
通过计算试验组样品与对照组样品的OD540比值，得到了50%抑制浓度(IC50)的值。从试验中得到的IC50(×10-5g/ml)值示于下表27中。
表27
药理试验-3对大鼠腹腔神经细胞释放过氧化氢(H2O2)的抑制作用给SD-系大鼠腹腔注射1%酪蛋白溶液，注射16小时后，通过清洗腹腔得到神经细胞。将得到的神经细胞用Hank's液洗涤。
向由下列成分组成的反应混合物中NaN31mMNaCl140mMKCl5mMMgCl21mMCaCl21mM葡萄糖5.5mM酚红0.28mMHRP(马辣根过氧化物)8.5μ/mlHEPES[N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙磺酸]10mM(pH7.0)大鼠神经细胞 106个细胞/mlFMLP 2×10-6M加入试验化合物，然后整个混合物在37℃孵育1小时，再将混合物在2000rpm下离心分离10分钟。取1ml上清液，向其中加入10μl1NNaOH水溶液。然后用分光光度计在610nm测定上清液的吸光度(OD610)。
通过计算试验组样品与对照组样品的OD610之比，得到了试验化合物的IC50(50%抑制浓度)。结果示于下表28中。
表28 药理试验-4对大鼠被动Heymann肾炎中尿蛋白增加的抑制作用以SD-系雄性大鼠(7周龄，体重200-230g)作为实验动物。
按照如下所述的T.S.Edington等的方法，制备用于诱导大鼠被动Heymann肾炎的抗血清，[T.S.Edington，R.J.Glassok和F.J.DixonAutologousimmunecomplexnephritisinducedwithrenaltublerantigen.I.Identificationandisolationofthepathogeneticantigen.JournalofExperimentalMedicineVol.127，pp555-572(1968)]首先，从SD-大鼠中采集肾小管brush边缘的抗原(FXIA片段)样品。然后将抗原与Freund'完全佐剂混合，再用它敏化新西兰白兔。每2周进行3次敏化操作，自最后一次敏化2周后，从兔中采血。
根据体重将实验大鼠分成实验组，每组由7只鼠组成。
通过向实验大鼠的尾静注射上述抗血清，来诱导大鼠的Heymann肾炎。将每个试验化合物悬液在0.5%CMC(羧甲基纤维素)水溶液中，注射后第4天开始口服所述试验化合物悬液，每天一次，连续7天。从注射后第10天开始连续收集大鼠尿样，测定样品中尿蛋白的量。用下式计算试验化合物对产生尿蛋白的抑制率(%)抑制率(%)＝[(A-B)/(A)]×100其中A对照组中尿蛋白的量;
B试验组中尿蛋白的量(服用试验化合物的情况下)。
试验结果示于下表29中
表29 药理试验-5对肾小球膜细胞繁殖的抑制作用将SD-系大鼠的肾无菌切除取出，从中切出肾皮质。用筛分离肾小球。在RPMI1640培养基[含10%的FBS(胎牛血清)]中培养4周。这样得到的细胞用作肾小球膜细胞。
通过白细胞介素-1β掺入胸苷的实验按照Ganz的方法进行[Michael B.Ganz;Mary C.Perfetto和Walter F.BoronAmerican Journal of Physiology，Vol.259，F269-F278，(1990)]。将2×104个细胞/ml的肾小球膜细胞分散在一个48-孔板上(0.5ml/孔)，将这些细胞在RPMI培养基(含10%FBS)中培养3天。然后，将培养基换成另一种RPMI培养基，其中FBS的浓度由10%降到5%，再培养3天。再将RPMI培养基(含0.5% FBS)换成另一RPMI培养基，其中加入了试验化合物和1ng/ml的白细胞介素-1β。培养24小时。然后向培养基中加入1μCi/孔的3H-胸苷，再继续培养24小时。
用闪烁计数器测定掺入肾小球膜细胞中的3H-胸苷的量，比较试验组与对照组，按下式计算抑制率(%)抑制率(%)＝[(C-D)/(C-E)]×100其中C对照组中掺入3H-胸苷的量;
D加入试验化合物的组别中掺入3H-胸苷的量;
E不加白细胞介素-1β的组别中掺入3H-胸苷的量试验结果示于下表30中。
表30
权利要求
1.选自通式(1)和(2)代表的哌嗪衍生物的至少一种哌嗪衍生物或其盐 其中R1为低级烷基；R2为苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，或下式基团 (式中R5和R6相同或不同，各自为氢原子，苯并噻唑基，或在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基；另外，所述R5、R6和与其成键的相邻氮原子可与其它氮原子或氧原子一起或无其它氮原子或氧原子存在下形成5-6元饱和杂环基；所述杂环基可有苯基作为取代基，其中苯基的苯环上可有低级烷氧基作为取代基)；R3为氢原子、低级烷基或苯基-低级烷基；和R4为羟基、苯基-低级烷氧基或四氢吡喃氧基；和 其中R7为低级烷基，在苯环上可带有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，低级烷硫基取代的低级烷基，苯基-低级烷氧基取代的低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰基取代的低级烷基，或羟基取代的低级烷基；R8为氢原子；另外R7和R8一起可形成亚丙基；及R9为羟基或苯基-低级烷氧基。
2.权利要求1的哌嗪衍生物或其盐，其中哌嗪衍生物或其盐由通式(1)代表 其中R1为低级烷基;R2为苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基-低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基的苯基-低级烷基，在咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基的咪唑基取代的低级烷基，或下式基团 (式中R5和R6相同或不同，各自为氢原子，苯并噻唑基，或在苯环上可带有1-3个选自低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷基和羟基的取代基的苯基-低级烷基;另外，所述R5、R6和与其成键的相邻氮原子可与其它氮原子或氧原子一起或无其它氮原子或氧原子存在下形成5-6元饱和杂环基;所述杂环基可有苯基作为取代基，其中苯基的苯环上可有低级烷氧基作为取代基);R3为氢原子、低级烷基或苯基-低级烷基;和R4为羟基、苯基-低级烷氧基或四氢吡喃氧基。
3.权利要求1的哌嗪衍生物，其中哌嗪衍生物由通式(2)代表 其中R7为低级烷基，在苯环上可有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基，低级烷硫基取代的低级烷基，苯基-低级烷氧基取代的低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰基取代的低级烷基，或羟基取代的低级烷基;R8为氢原子;另外R7和R8一起可形成亚丙基;及R9为羟基或苯基-低级烷氧基。
4.权利要求2的哌嗪衍生物或其盐，其中R2为苯基-低级烷基，其中苯环上可带有1-3个选自羟基、苯基低级烷氧基、低级烷基、低级烷氧基和卤原子的取代基。
5.权利要求2的哌嗪衍生物或其盐，其中R2为咪唑基取代的低级烷基，其中咪唑环上可带有苯基-低级烷基作为取代基。
6.权利要求2的哌嗪衍生物或其盐，其中R2为下式基团 (其中R5和R6同上所定义)。
7.权利要求4的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为卤原子。
8.权利要求4的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为低级烷基或苯基-低级烷基。
9.权利要求5的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为卤原子。
10.权利要求5的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为低级烷基或苯基-低级烷基。
11.权利要求6的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为卤原子。
12.权利要求6的哌嗪衍生物或其盐，其中R3为低级烷基或苯基-低级烷基。
13.权利要求7-12之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R4为羟基。
14.权利要求7-12之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R4为苯基低级烷氧基或四氢吡喃氧基。
15.权利要求3的哌嗪衍生物或其盐，其中R7为低级烷氧羰基取代的低级烷基。
16.权利要求3的哌嗪衍生物或其盐，其中R7和R8结合形成亚丙基。
17.权利要求3的哌嗪衍生物或其盐，其中R7为低级烷基、在苯环上可带有选自羟基和苯基-低级烷氧基的取代基的苯基-低级烷基、低级烷硫基取代的低级烷基、苯基-低级烷基取代的低级烷基、低级烷氧羰基、或羟基取代的低级烷基。
18.权利要求15-17之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R9为羟基。
19.权利要求15-17之一的哌嗪衍生物或其盐，其中R9为苯基-低级烷氧基。
20.(3RS，6RS)-1-羟基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
21.(3RS，6SR)-1-羟基-3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苄基)-6-异丁基哌嗪-2，5-二酮。
22.(3RS，6RS)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-乙氧羰基甲基哌嗪-2，5-二酮。
23.(3RS，6SR)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-乙氧羰基甲基哌嗪-2，5-二酮。
24.(3S，6R)-1-羟基-6-(3-吲哚基甲基)-3-乙氧羰基甲基哌嗪-2，5-二酮。
25.一种过氧化物自由基抑制剂，它含有权利要求1中要求的哌嗪衍生物或其盐作为活性成分。
26.权利要求25的过氧化物自由基抑制剂，其中活性试剂是权利要求2中的哌嗪衍生物或其盐。
27.权利要求25的过氧化物自由基抑制剂，其中活性试剂是权利要求3中的哌嗪衍生物或其盐。
28.一种预防和治疗由过氧化物自由基引起的疾病或症状的试剂，它含有权利要求1中所要求的哌嗪衍生物或其盐作为活性成分。
29.权利要求28的预防和治疗由过氧化物自由基引起的疾病或症状的试剂，其中活性成分是权利要求2中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
30.权利要求28的预防和治疗由过氧化物自由基引起的疾病或症状的试剂，其中活性成分是权利要求3中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
31.预防和治疗肾炎的试剂，它含有权利要求1中所要求的哌嗪衍生物或其盐作为活性成分。
32.权利要求31的预防和治疗肾炎的试剂，其中活性成分为权利要求2中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
33.权利要求31的预防和治疗肾炎的试剂，其中活性成分是权利要求3中所要求的哌嗪衍生物或其盐。
34.式(1a)化合物的制备方法 (其中R1、R3、R4、R5和R6同上所定义)，其特征在于式(3)化合物与式(4)化合物反应 (其中R1、R3和R4同上所定义)， (其中R5和R6同上所定义)。
35.式(1)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义)，其特征在于由式(16)化合物转化成式(1)哌嗪衍生物 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义)。
36.式(1)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义)，其特征在于由式(22)或(23)的化合物转化成式(1)的哌嗪衍生物 (其中R1、R2、R3和R4同上所定义;RA为氢原子或R10a，其中R10a为低级烷基)。
37.式(2)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R7、R8和R9同上所定义)，其特征在于由式(26)的化合物转化成式(2)的哌嗪衍生物 (其中R7、R8和R9同上所定义)。
38.式(2)的哌嗪衍生物的制备方法 (其中R7、R8和R9同上所定义)，其特征在于由式(29)的化合物转化成式(2)的哌嗪衍生物 (其中R7、R8和R9同上所定义)。
全文摘要
本发明提供具有抑制过氧化物自由基(O
文档编号C07D417/12GK1112364SQ9419049
公开日1995年11月22日 申请日期1994年7月1日 优先权日1993年7月13日
发明者利根齐, 森末政利, 田村克巳, 宫崎俊树, 中野善正 申请人:大塚制药株式会社
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