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2021-01-31 21:01:06|
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起点商标网 专利名称：增环的二氢吡啶及其在制备药物制剂中的应用的制作方法
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本发明是有关新颖的增环的二氢吡啶乙酸衍生物，其制备方法及含有该化合物的药物组合物。
二氢异喹啉由EP-A 37 934中是已知的。其中说明化合物具有强心活性，且具有提高收缩力及影响血压的效果。并提出可改善组织中的血液循环，及改善对组织的氧供给。这种用途的可能性都以化合物的血管活性为基础。EP-A 251 194及EP-A 288 048说明以碳环和杂环增环的二氢吡啶具有保护心脏或脑部的活性，并且是完全新型的Ca-拮抗性化合物。WO 92/11010说明这种化合物可用作保护脑部制剂，用于治疗长期性炎症病程及抑制凝血与血小板凝聚中的应用。
本发明是有关新颖的碳环与杂环增环的二氢吡啶及该化合物的药物用途。新颖化合物具有有价值的治疗用途。该化合物可作为心脏保护制剂，脑保护制剂(尤其可治疗中风患者或有中风危险的患者)及可用于治疗慢性炎症病变(例如支气管性哮喘和关节炎)的制剂。此外，该化合物也可用作具有抗增殖效果的制剂，及作为治疗溃疡性结肠炎与节段性回肠炎(Crohn′s disease)的制剂。
本发明是有关通式I化合物或其与生理上可接受的酸或配合物所形成的盐类 式中A代表苯并基，吲哚并基或噻吩并基；其中，若A为苯并基时，m为2或3(以2优选，而二个R2则在6及7位置上)，取代基R2分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或二个相邻取代基R2可共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为吲哚并基或噻吩并基时，m为零；R1代表噻吩基，或如下式基团 其中R7，R8与R9分别可代表甲基，乙基，丙基，苯基或苄基，其中不超过2个取代基可同时代表苯基或苄基；R3与R4分别代表下列基团；(a)氢，(b)支链或直链的C3-6烯基，(c)支链或直链的C3-6炔基，或(d)支链或直链的C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，
二C1-4烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，CN，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，-NHCOCH3，-NHSO2CH3或CH3SO2O-，或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次]；或被二个未经取代的苯基取代；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基(其中该苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基、苄氧基、卤素(F、Cl、Br、I)，CF3、N3、(C1-4)烷基、金刚烷基、-SO2NH2、-NHCOCH3、-NHSO2CH3或CH3SO2O-或经桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次)、吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4及其所连接的氮原子共同代表吡咯烷基、哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基，未取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，氰基取代的苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基，(C1-4)烷苯基或如下式基团取代 式I化合物可形成式II互变异构体 互变异构体可按已知方法分离，例如通过柱层析法或选择性还原法(NaBH4或催化还原作用)。
式II化合物可呈顺式及/或反式型 如化合物的结构没有说明，则所示式I应包括结构式II。
本文所使用的定义中，自由基与基团可相同或不同，意即，如上述一个取代基在特定分子中出现多次时，则其定义可自由选自本文所提供的定义范围内。
烷基是指可取代的C1-6烷基及C1-4烷基基团，或指烷基基团时，则作为官能基部分如烷氧基或烷硫基。烷基基团包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，异丁基及叔丁基基团，及各种异构的戊基与己基基团，例如异戊基，新戊基，正戊基与正己基基团。
因此即使当烷基基团本身取代和/或本身是烷氧烷基，烷氧羰基，烷氧基，烷硫基，烷磺酰基，单烷氨基，烷甲基，烷硫甲基或二烷氨基的一部分时，或当烷基基团作为取代基与芳香杂环或碳环结合时，上述定义也适用。
卤素指氟，氯，溴及碘，以氟，氯及溴较佳，较少代表碘。
C3-6环烷基指环丙烷，环丁烷，环戊烷与环己烷。
C5-6环烯指例如环戊烯，环己烯，及环己二烯。
C3-6炔指异构性己炔，戊炔，丁炔，与丙炔，以炔丙基较佳。
C3-6烯指异构性己烯，戊烯，丁烯与丙烯，以烯丙基较佳。
本发明优选的是通式I化合物，其中A代表苯并基或噻吩并基；其中如A为苯并基时，m为2，R2位于6及7位置，且分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或两个相邻取代基R2共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为噻吩并基时，m为零；R1代表噻吩基或如下式基团 其中R7，R8与R9分别可代表甲基，乙基，丙基，苯基或苄基，其中不超过2个取代基可同时代表苯基或苄基；R3与R4分别代表下列含义；(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，或-NHCOCH3，或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次]；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基，氟代苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4及其所连接的氮原子共同代表吡咯烷基，哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要而被甲基，未取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基或下式基团取代 优选的，A代表增环的环系 其中R2如本文中所定。本发明的另一优选方面的化合物I，式中A为吲哚并基，且其他取代基如上所定义，较佳的NR3R4为吗啉基，或在NR3R4中的R3为氢，且R4为C1-4烷基，它可按上述定义而被取代。
式I中A为苯并基的化合物中，较佳化合物为式中m是2且二个R2分别代表甲氧基，羟基，苄氧基，甲基或氯，或共同代表-CH2O-，其中二个R2位于6及7位置，特别指，式中R2为甲氧基，羟基，苄氧基或甲基的化合物。并且尤其是指式中二个R2相同且代表羟基或甲氧基的化合物。
化合物I中，较佳化合物为式中R1为叔丁基的化合物。
其他较佳的式I化合物为式中NR3R4为下列的一种含义a)NR3R4中，R3为氢而R4为C1-6烷基；b)NR3R4中，R3为氢而R4是具有3至6个(3个较佳)碳原子的支链或直链炔基，c)NR3R4中，R3为氢而R4为具有1至4个(以1至3个较佳，尤指2个)碳原子的支链或直链烷基，该烷基是被下列基团所取代甲氧基，二甲氨基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，噻吩基，金刚烷基，吡啶基，N-苄基哌啶基，环己基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中该苯基(如仅含一个苯基时)或在苯氧基中的苯基可被甲氧基，乙氧基，苄氧基，卤素(特别指Cl，I)，CF3，甲基，叔丁基，-SO2NH2或桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基，氟苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；d)NR3R4中，R3与R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可如(c)中说明的苯基而被取代)，优选的是 e)R3和R4与其所连接的氮原子共同代表哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基，或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要而被甲基或苄基取代；特别是，式中NR3R4为下列含义之一时a)NR3R4中，R3为氢且R4为C2-6烷基；b)NR3R4中，R3为氢且R4为CH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为支链或直链C2-4烷基，其中烷基是被下列基团所取代甲氧基，二甲氨基，N-甲基吡咯烷基，噻吩基，金刚烷基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中该苯基(如只含一个苯基时)或苯氧基中所含的苯基可被甲氧基，乙氧基，N3，甲基，叔丁基或-SO2NH2取代一次，二次或三次；d)NR3R4中，R3与R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可被F取代)或特别是 e)R3和R4与其所连接的氮原子共同代表哌嗪基，N可被甲基或苄基取代。
特别优选的化合物I为其式中的NR3R4为下列含义之一的a)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，叔丁基或(CH2)1或2-C(CH3)3；b)NR3R4为NHCH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，丙基或被苯基取代的甲基丙基，该苯基可被甲基或甲氧基取代一次，二次或三次，或被叔丁基取代一次；d)NR3R4中，R3与R4相同，即 e)NR3R4为 尤其是，式中R3为氢或(C1-4)烷苯基且R4为(C1-4)烷苯基的化合物，其中该基团中最好含有C1-烷基，且苯基被卤素(以Cl或F较佳)，CF3，甲氧基或乙氧基取代一次，该取代基最好是在邻位。
式I化合物可按本身已知的方法制备，优选类似于德国专利申请P 37 18 570.5，EP 358 957，EP 37 934，EP 251 794及EP 288048中所述方法制备。
在缩合剂存在下，可由通式IV的丙二酸二酰胺进行环化而形成相应化合物， 式中R1，R2，R3，R4与m如上述定义，且Ar代表苯基，吲哚基或2-或3-噻吩基。
适用于该方法的缩合剂为强路易士酸如磷酰氯，五氯化磷，三氯化磷，五氧化磷，四氯化钛，三氟化硼，四氯化锡，及无机酸类如聚磷酸，硫酸，氟磺酸及氢氟酸，或缩合剂的混合物，如磷酰氯与五氯化磷的混合物，或五氧化磷与(C1-4)烷磺酸的混合物，例如含约10重量％的P2O5。
环化作用可在溶剂存在或不存在下进行。任何惰性溶剂均适用，只要其足以溶解反应物且具有足够高的沸点即可，例如苯，烷基苯(例如甲苯，二甲苯)，氯苯，氯仿，乙腈，及萘烷。优选的方法的具体实施例是，作为缩合剂使用磷酰氯和乙腈的混合物，或(C1-4)烷磺酸与五氧化磷的混合物，其中不添加溶剂。
优选的，环化作用是使用磷酰氯及/或乙腈进行，或在较困难情况下，使用五氧化磷与(C1-4)烷磺酸(以甲磺酸较佳)的混合物。该反应可在宽广温度范围内进行，最好加热至50℃到至高达反应混合物的沸点。
所需反应时间为2至15小之间，这按起始化合物IV而定。
该制法所需的3-硫代苯丙二酸可由商品取得。2-硫代苯丙二酸可按本身已知方法制备(例如2-硫代苯乙酸使用碳酸酯方法，或由2-硫代苯溴化物及丙二酸二乙酯制得)。
式I化合物为碱类，并且可按熟知的方式，使用无机或有机酸与盐及配位化合物形成剂而转化成任何所需的生理上可接受的加合物(盐)。
适用于成盐的酸类包括例如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，氢氟酸，硫酸，磷酸，硝酸，醋酸，丙酸，丁酸，己酸，戊酸，草酸，丙二酸，琥珀酸，马来酸，富马酸，乳酸，酒石酸，柠檬酸，苹果酸，苯甲酸，对羟基苯甲酸，邻苯二甲酸，肉桂酸，水杨酸，抗坏血酸，甲磺酸，等等。
化合物可按口服，非肠胃的或局部方式给药。所需的治疗剂量按病症及所用的给药方式而定，并可由实验决定。合适的剂型包括片剂，胶囊，栓剂，液剂，糖浆，乳剂，气溶胶或可匀散性的粉剂。片剂例如可通过将活性物质与己知赋形剂，例如惰性稀释剂如碳酸钙，磷酸钙或乳糖，崩解剂如玉米淀粉或藻酸，粘结剂如淀粉或明胶，润滑剂如硬脂酸镁或滑石，和/或可产生缓释作用的试剂如羧基聚亚甲基，羧甲基纤维素，纤维素乙酸酯酞酸酯或聚乙烯乙酸酯等混合而进行。片剂亦可包含多层。
包覆片剂可按类似方法生产，它是用通常用于包覆片剂的物质例如可力酮(collidone)或虫胶，阿拉伯胶，滑石，二氧化钛或糖，包覆按片剂相同方式所生产的芯而进行的。为了得到缓释作用或避免不相容性，芯也可包括多层。同样地，片剂亦可由多层组成，以达到缓释效果，其中可使用片剂所要求的赋形剂。
含有本发明活性物质或活性物质组合物的糖浆可另外包括甜味剂如；糖精，环己氨磺酸盐(cyclamate)，甘油或糖，及味觉改良剂，例如香料如香草精或橙提取物。此外也可包含悬浮辅剂或稠化剂如羧甲基纤维素钠，润湿剂，例如脂肪醇和环氧乙烷的缩合产物，或防腐剂如对羟基苯甲酸酯。
注射用溶液是按通常方式生产，例如添加防腐剂如对羟基苯甲酸酯或稳定剂如乙二胺四乙酸的碱金属盐，然后移至注射瓶或安瓿中。
制备含有一种或多种活性物质或活性物质组合物的胶囊时，例如可由活性物质与惰性载体如乳糖或山梨糖醇混给，并包裹在明胶囊中。
合适栓剂的制备，可通过与已预定的载体混合，如；中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物。
该化合物可经肠道及非肠胃给药。口服剂量建议为每剂0.1至500毫克活性物质，静脉注射给药时，为每剂0.05至150毫克。所需治疗剂量按病症及所采用的给药途径而定，且可由实验决定。
药物组合物适用于口服或非肠胃给药，也可局部给药。所用剂型的一般为片剂或包覆片剂，安瓿及糖浆。使用这种剂型的单一剂量为每75公斤体重1.0至200毫克之间，以20至50毫克较佳。通常每天给药1至3次的单一剂量。按病例的严重性而定。
下列实施例说明本发明实施例11.叔丁基丙二酸单乙基酯于室温下，以30分钟时间，在搅拌下滴加含7.6克KOH(浓度85％)的50毫升水溶液于由21.6克二乙基叔丁基丙二酸酯，50毫升乙醇及50毫升水所组成的混合物中。15小时后，真空蒸馏以除去乙醇。残留物冷却后，添加300毫升CH2Cl2。以冰冷却下用13.6克KHSO4的100毫升H2O溶液酸化，水相用CH2Cl2萃取数次。合并的有机相用水洗涤，经Na2SO4干燥，并于30℃槽温下真空蒸发。留下15.35克(＝理论值的81.7％)单乙基酯(亮黄色油)。2.叔丁基丙二酸单乙基酯-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-酰胺于室温下，在15.35克叔丁基丙二酸单乙基酯的200毫升无水CH2Cl2溶液中，分批搅拌添加15.88克N，N′-羰基二咪唑。30分钟后，添加14.8克2-(3，4-二甲氧苯基)乙胺。再经15小时后，真空蒸馏以去除溶剂。残留物与200毫升水混合，用2N HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机相，经Na2SO4干燥后。残留物与石油醚(40至60℃)研制，使之结晶。产量24.7克(理论值的86.2％)；m.p.68-70℃。3.叔丁基丙二酸-单-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]-酰胺使42克酯酰胺(上述)及180毫千1N NaOH回流加热2小时。冷却及过滤后，用醚萃取溶液，并添加50毫升4N HCl酸化。当溶液静置时，析出结晶。抽吸过滤，于40至50℃干燥。产量35.4克(理论值的91.3％)；m.p.103-104℃。4.叔丁基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-N′-(3，3-二苯基丙基)-二酰胺于室温下，将2.1克N，N′-羰基二咪唑加入到3.23克叔丁基丙二酸单酰胺(得自实施例3)的50毫升无水CH2Cl2溶液中。30分钟后，添加2.11克3，3-二苯基丙胺。15小时后，于室温下静置，蒸馏掉溶剂。残留物与水混合，用2N HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤，经Na2SO4干燥，及真空蒸发。残留物(4.9克≌理论值的95％)未再纯化即用于环化反应。5.(R，S)-(3，4-二氯-6，7-二甲氧异喹啉-1-基)-2-叔丁基-N-(3，3-二苯基丙基)乙酰胺使由5.15克叔丁基丙二酸二酰胺(得自实施例4)，1.9毫升POCl3及35毫升乙腈组成的混合物回流加热2小时。冷却后，倒入冰水中，用饱和碳酸钠溶液调节成碱性，并用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤，经Na2SO4干燥，及蒸发。残留物溶于丙酮中，用计算量的醚化的盐酸溶液转化成盐酸盐，并经研制而结晶。产量4.45克(理论值的83.6％)；m.p.147-148℃。
实施例23-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-酰胺 取15.1克(40毫摩尔)-3-噻吩基丙二酸单乙基酯-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-酰胺溶于150毫升甲醇和100毫升二噁烷中，在冰冷却和搅拌下，滴加42毫升(42毫摩尔)1N NaOH。室温下继续搅拌混合物2小时，真空蒸馏以除去有机溶剂，残留物分配在水和CH2Cl2之间。
在冷却和搅拌下，用10％柠檬酸酸化水相，并用CH2Cl2萃取。用水，饱和NaCl溶液洗涤，并在MgSO4上干燥后，真空蒸馏去除溶剂，得到12.7克残留物。由二氯甲烷/甲醇/醚中重结晶后，得到标题化合物11.7克(理论值的83.7％)。3-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]-N′-二苄基-二酰胺 于5℃搅拌下，在3.75克(11毫摩尔)3-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]酰胺的100毫升无水四氢呋喃溶液中，分批加入1,78(11毫摩尔)羰基二咪唑。反应混合物在室温下搅拌30分钟后，添加2.17克(11毫摩尔)二苄胺。于室温下搅拌16小时后，混合物浓缩，使残留物分配在酸乙酯和水之间。有机相依序用水，5％KHSO4溶液，饱和NaHCO3溶液，水及饱和NaCl溶液洗涤，经MgSO4干燥，真空蒸馏以除去溶剂混合物。残留物由少量醚中再结晶。产量5.1克(理论值的87.7％)标题化合物。(R，S)-(3，4-二氢-6，7-二甲氧异喹啉-1-基)-2-(3-噻吩基)-N，N-二苄基-乙酰胺 取5.1克(96毫摩尔)3-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]-N′-二苄基-二酰胺与4.41克(28.8毫摩尔)磷酰氯在50毫升乙腈(分析纯)中反应，混合物于N2大气下回流加热1小时。冷却后，添加150毫升乙酸乙酯，用饱和NaHCO3溶液中和，用水及饱和NaCl溶液洗涤，经MgSO4干燥，真空蒸馏去除溶剂。残留物溶于10毫升无水丙酮中，添加900毫克(10毫摩尔)草酸，添加约50毫升无水乙醚后，盐结晶析出。产量4.8克(理论值的83.3％)标题化合物，呈草酸盐形成；m.p.128-130℃。
下表中列出本发明化合物的实例。这些化合物可类似于上述方法制备。
表1 76 Fu(1.5)105Fu152 Fu(1.5) 230Cl 138 Fu(1.5) 112 Fu 98 Fu(1.5)
M.p.(℃)盐型 互变异构体结构 209 Cl 215 Cl 174 Fu 208 Fu232 Cl165 Cl 133 Fu(1.5)I
互变异构体盐型结构NH-(CH2)9-CH3147 Cl 210 Cl 223 Cl 209 ClI187 Fu(1.5)
M.p.(℃)互变异构体盐型结构102 Fu(1.5) 201 Fu212 Cl145 Fu(1.5) 145 Fu(1.5) 192 Fu(1.5) 158Fu(2)209 Cl 170 Cl 138 Cl 188 Cl
M.p(℃)互变异构体 盐型结构 222 Cl 144 Fu(1.5) 180 Fu(1.5) 210 Fu(1.5) 222 Cl
表2 盐型 M.p(℃) OX125-135(分解) BS 161-163 BS 118-120
盐型 M.p.(℃) BS128-130 BS185-187 OX128-130 OX 70-80(分解) BS165-167BS102-104 OX124-127
盐型 M.p.(℃)NH-(CH2)9-CH3OX121-122 OX 107-112 NH2OX121-140(分解)OX 不定形物 OX80-100(分解)
盐型 M.p.(℃) 表3 X盐型 M.p.(℃) BS不定形物OX草酸盐BS游离碱Decomp.分解本发明主题还涉及这类新颖化合物的用途。
这些化合物可用于治疗脑部的变性与坏死的疾病。亦可对患有这种疾病危险的患者进行预防处理。化合物的作用并不基于改善组织中的供血。因此这些化合物适用于作为癫痫和初老期痴呆症的新治疗法，特别可治疗患有中风或有中风危险的患者。
本发明另一主题是上述化合物在制备用于治疗慢性炎症病变，溃疡性结肠炎，和节段性回肠炎(Crohn′s disease)制剂和用于具抗增殖活性制剂中的用途。化合物的作用可由其抑制非选择性阳离子通道(UCC)而解释。
慢性支气管哮喘的病理生理学是基于炎症的病变，它通过活化炎症细胞而调节，(BARNES，1987；SEIFERT和SCHULTZ，1991)。
发炎细胞(例如嗜中性粒性白细胞及肥大细胞或永久细胞系HL-60细胞或敏化的即带有γ-球蛋白E的RBL细胞)的受体调节性活化与刺激性主动剂(例如内皮素(endothelin)，PAF，白三烯(leukotrienes)，趋化性的肽fMLP或对敏化肥大细胞的抗原)无关，而是通过非选择性阳离子通道(UCC)的阻断剂抑制(林克(RINK)，1990)。细胞外的钙则通过这些通道而进入细胞内，这对受体调节性细胞活化持久性是所需的(PUTNEY，1990)。如这种钙供应受到中断，结果将阻断炎症细胞的活化作用。
通常的二氢吡啶或苯烷基胺类的钙拮抗剂均不抑制UCC或炎症病变(WELLS等人，1986)。
细胞活化作用的测定或其受到UCC阻断剂的抑制作用的测定，是采用GRYNKLEWICZ等人(1985)所述的方法，由萤光测定法定量测定带有fura-2的细胞中，细胞质的钙离子浓度的动力学。该方法已证实为一种在本发明范围内检测UCC阻断剂的可靠筛选法。
所谓功能性赛希加金(THAPSIGARGIN)抑制作用已证实适合于具体表征非选择性阳离子通道的阻断剂。THAPSIGARGIN是一种由THA-STRUP等人描述的肿瘤促进剂(Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)，87，2466-2470，1990)，它选择性且不可逆性地抑制细胞内IP3-敏感性Ca2+-储存库的Ca2+-ATPase。结果则迅速消耗Ca2+-储存库。如J.PUTNEY所述(Calcium，11，611-624，1990)，这种储存库的消耗则成为生理上刺激细胞膜中非选择性阳离子通道的打开。结果使大量Na+与Ca2+流入细胞中。由于这些性质，Thapsigargin因此适用于作为间接刺激剂以不依赖激动剂与IP3而打开非选择性阳离子通道。
在本发明范围内，非选择性阳离子通道的Thapsigargin刺激作用已成功地作用于HL60细胞(人类白血病细胞)，海马与皮质神经元细胞及RBL细胞(老鼠嗜碱性淋巴瘤细胞)，因此证实在某些细胞系中有这种通道。
细胞质Ca2+浓度([Ca2+]1)在细胞增殖及肿瘤生长中起重要作用(其概要说明参见L.R.ZACHARSKI，Journal of Medicine 19145-177，1988)。尤其是，通过具有连续性肌醇三磷酸盐(IP3)-调节的受体活化作用而刺激Ca2+流入细胞中，这一点对致癌细胞增殖作用似乎具有关键重要性(U.KIKKAWA与Y.NISHIZUKA，Ann.Rev.Cell.Biol.，2149-178，1986)。这种机理在形成转移及“多重药物抗性”中也起一定作用(其概要说明参见上述L.R.ZACHARS-KI，J.MED.19145-177，1980)。
因而认为，作为非选择性阳离子通道(UCC)的间接刺激物的Th-apslgargin不仅使细胞中承载过量Ca2+，而且是一种高度有效的肿瘤促进剂(V.THASTRUP等人，Proceedings of the Natl.Acad.Sci.，(USA)872466-2470，1990)。通过UCC阻断Ca2+流入的结果使细胞内Ca离子浓度正常化，因此可抑制肿瘤生长等。
常用的钙拮抗剂并不抑制这种UCC。惊人地发现，根据本发明化合物抑制Ca流通过UCC而流入细胞。
如S.H.MURCH等人所示(Lancet 339381-385，15，1992年2月)指出，内皮素I在如溃疡性结肠炎及节段性回肠炎的炎症性肠部疾病中起重要的病理生理学作用。采用免疫组织化学法能确证，在患有节段性回肠炎的患者的粘膜下层区域及在患有溃疡性结肠炎的患者的结肠上的固有层区域与健康的正常人体相比具有显著且大幅度提高的内皮素I浓度。有认为局部分泌内皮素会导致严重血管痉挛，出现连续散布的缺血而产生小梗塞，这被视为上述疾病的真正原因。内皮素导致血管痉挛效果的原因是血管肌细胞的Ca2+太多。内皮素主要引发IP3调节细胞内释出Ca2+，随后大量横跨膜的Ca2+流经过二氢吡啶不敏感的通道而进入(M.S.Simonson等人，Clin.Invest.Med.，14；499-507，1991；T.Masakai，J.Cardiova-sc.Pharmacol 13Suppl. 5，S1-S4，1989；D.W.Hay，R.J.Pharmacol.100383-392，1990)。这种通道是非选择性阳离子通道，曾有报导说明其存在于大肠粘膜的细胞中(Chr.Siemer与H.Goegelin，Europ.J.Physiol.420319-328，1992)。
带fura-2的人类白血病细胞(HL 60细胞)受内皮素刺激的活化作用经证明是一种适合于检测功能性内皮素拮抗剂的筛选模式。根据G.GRYNKIEWICZ等人(J.Biol.Chem.260；3440-3450，1985)，可利用萤光光谱测定法追踪HL60细胞(悬浮液)的细胞质中细胞内Ca2+浓度，并定量，作为内皮素对细胞活化作用的测定值。添加0.1mM内皮素即可产生刺激作用，且利用本发明物质，随剂量变化而受抑制。
根据本发明物质的功能性内皮素拮抗作用是由非选择性阳离子通道的阻断作用来进行调节。
因此在RBL-hml细胞上检测功能性Thapsigargin拮抗作用也是一种适合于筛选功能性内皮素拮抗剂的方法。实验过程为了进行筛选，在没有Ca2+的培养基中，用0.1μM Thapsigar-gin刺激带fura-2的粘附性RBL-hml细胞。4分钟后，细胞外Ca2+恢复至1.5mM浓度，并利用fura-2-萤光记录因大量横跨膜的Ca2+通过非选择性阳离子通道进入而引起过度提高的细胞质Ca2+浓度。
这种Ca2+注入单独的并通过非选择性阳离子通道阻断剂而随剂量变化以抑制。不论通常的钙拮抗剂或刺激IP3-转换的激动剂的专一性阻断剂都不会抑制由赛希加金间接引起的横跨膜的Ca2+进入。本发明化合物的特性在于抑制UCC。
类似于KUDO与OGURA(1986)的用于神经元细胞所述的方法，以萤光法测定个别粘附性RBL-hml细胞的细胞质中的钙浓度。使用蔡司公司(ZEISS)制造的AXTOVERT 35萤光显微镜，配合由HAMAMATSU公司制造的图像系统，包括ICMS图像处理系统，具有控制组件的余光相机及图像加强器DVS 3000。
以赛希加金(0.1μM)刺激细胞活化作用后，连续记录细胞质Ca+浓度的动力学，以浓度/时间曲线表示。在有和没有10μM试验物质的存在下比较两种活化细胞培养物的曲线。在这些曲线下的面积(曲线下面积＝AUC)经过积分计算，并记录为细胞活化作用的测定值。采用下列公式计算受试的UCC-阻断剂的抑制效力 ％H＝受刺激的和受到10μM试验物质抑制的钙通过非选择性阳离子通道进入的抑制百分率。AUC抑制＝在刺激物加10μM抑制性试验物质的存在下记录的曲线下面积。AUC对照＝仅添加刺激物后所记录的曲线下面积。有关上述说明的参考文献BARNES P.J.，I.W. RODGER and N.C. THOMSONPathogenesis of asthma，in＂ASTHMA，basic mechanisms andclinical management＂ED by P.J. BARNES；ACADEMIC PRESS，LONDON，1988GRYNKIEWICZ G.，M.POENIE and R.Y. TSIENA new generation of Ca2+-indicators with greatly improvedfluorescence propertiesJ.BIOL.CHEM. 2603440-3450，1985HIDE，M.and M.A. BEAVENCalcium influx in a rat mast cell(RBL-2H3)lineJ.BIOL. CHEM.266 15221-15229，1991KUDO，Y. and A.OGURAGlutamate-induced increase in intracellular Ca2+-concentration in isolated hippocampal neuronesBR.J.PHARMACOL.89191-198；1986PUTNEY，J.W.，jr.Capacitative Calcium entry revisedCELL CALCIUM 11611-624，1990RINK，T.JReceptor-mediated calcium entryFEBS LETT. 268381-385，1990SEIFERT，R. and G. SCHULTZThe superoxide forming NADPH oxidase of phagocytesAnenzyme system regulated by multiple mechanismREV. PHYSIOL. BIOCHEM. PHARMACOL.，Vol.117，SPRINGER VERL.，1991WELLS，E.，C.G. JACKSON，S.T.HARPER，J.MANN and R.P.EAOYCharacterization of primate bronchoalveolar mast cellsII，inhibition of histamine，LTC4and PGF2arelease fromprimate bronchoalveolar mast cells and a comparison withrat peritoneal mast cellsJ.IMMUNOL.1373941-3945，1986.
测定结果表中列出RBL-hm 1细胞受到赛希加金(0.1μThapsigargin)刺激后，UCC的受抑制百分比。试验物质的标准浓度为10-5mol或10-6mol。
表4 盐型 ％H(10-5M) ％H(10-6M) Fu(1.5) 71.9 Fu 57.3 Fu(1.5) 71.2 Cl 66.4 Fu(1.5) 53.3 Fu 70.7 Fu(1.5)60.5
盐型 ％H(10-5M)％H(10-6M) Cl 64.6Cl 70.1Fu 77.2 Fu 75.7Cl 24.8 Cl 64.4 Fu(1.5)74.4
盐型％H(10-5M) ％H(10-6M)NH-(CH2)9-CH3Cl 69.7Cl 45.8Cl 80.8 Cl64.9 Fu(1.5) 66.8
盐型 ％H(10-5M) ％H(10-6M)Fu(1.5) 73.8 Fu 29.2 Cl 72.7 Fu(1.5)28.4 Fu(1.5)43.2 Fu(1.5)16.9 Fu(2) 35.7 Cl53.3 Cl100.0 60.3
盐型％H(10-5M) ％H(10-6M) Cl93.547.3 Cl99.063.7 Cl96.065.4 Fu(1.5)91.665.7Fu(1.5)65.8 Fu(1.5)51.1 Cl 61.0
表5 盐型 ％H(10-5M) OX 20.85 BS 59.94 BS37.83
盐型 ％H(10-5M) BS 36.41 BS 39.17 OX 90.9 OX 22.62 BS 14.6 BS 25.76 OX50.61NH-(CH2)9-CH3OX47.09
盐型 ％H(10-5M)OX 28.14 NH2OXOX 6.8 OX 52.26
表6 盐型 ％(10-5M) BS 27.01
利用下列试验法证实功能性消炎效果采用个别粘附于玻璃载片上的RBL-2H3-细胞(一种肥大细胞相关的肿瘤细胞系)。
按HIDE和BEAVEN(1991)所述方法进行RBL-2H3-细胞的培养与附着。为了敏化粘附性RBL-2H3-细胞，使细胞于室温下，与一种稀释1∶2000的对二硝基酚-牛血清白蛋白配合物(DNP-BSA-抗原)的市售γ-球蛋白E溶液商品培养2小时。然后洗涤细胞。添加0.1毫升DNP-BSA-溶液(10微克/毫升)时，即出现强力的免疫性细胞活化作用，该作用是受到细胞质的过量Ca2+而调节。类似于KUDO和OGURA(1984)用于神经元细胞所述方法，于个别粘附性RBL-2H3-细胞的细胞质中，以萤光法测定钙，该方法也说明于本说明书中。
在该试验中所用的对照物质为(10μM)色甘氨酯(chromogly-cate)，它对抗原诱发的细胞活化作用而产生约50％抑制作用。
本试验中，上述化合物呈现的％H值相当于上文所说明的数值。
各种不同人类肿瘤细胞系的微培养物研究中使用四唑鎓盐分析法以确定本发明物质的抗增殖效果，惊人地表示受试化合物比对照物质戊胺安(Verapamil)强5至100倍。
采用MOSMANN(J.IMMUNOL.METH.6555-63，1983)，DEN-IZOT等人(J.IMMUNOL.METH.89271-277，1986)及J.ELIASON(INT.J.CANCER.46113-117，1990)所述的的MTT试验法以测定试验物质的抗增殖效果。(MTT＝[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)2，5-二苯基-四唑鎓化溴]，由美国加州艾山冈多，康米肯公司(CH-EMICON INC.EI Sequndo，CA，USA)生产)。该指示剂仅在含有完整线粒体的活细胞中代谢而成蓝色甲(formazane)产物。我们试验中采用下列人类肿瘤细胞系A549(肺的线癌瘤)，A431(女阴表皮癌瘤)，PC 3(前列腺的腺癌瘤)，SK BR 3(乳房腺癌瘤)，HT29(CX1 1)(结肠的腺癌瘤)及K562(慢性脊髓白血病细胞)。
在微滴定板上进行试验。每一孔中含有100微升的细胞悬浮液(每毫升0.2×106个细胞)。所使用的培养基为含有10％经加热不活化的胎牛血清与50微克/毫升庆大霉素(gentamycin)的RPMI 1640。细胞悬浮液于37℃下，在饱和大气湿度的CO2(5％)/空气(95％)大气下，在有或没有各种浓度变化的抗增殖试验物质存在下培养0，24，48或72小时。试验物质溶于DMSO中(最终稀释度0.1％)。然后添加10微升MTT-溶液(3毫克/毫升)，3小时后添加100微升含0.08NHCI的异丙醇溶液。1小时后，于微盘读数机上读取570nm的吸光度(对照组波长630nm)。吸光度与活细胞数目呈直接比例关系。受试物质的半最大抑制浓度为1微克/毫升。
由分离出的血管制剂确认上述功能性内皮素或赛希加金拮抗剂的解除血管痉挛效果。利用电磁性流动测定法(设备由Hugo SachsElectronik MARCH供应)，在取自老鼠，经逆行灌流的自发性博动的兰根道夫(LANGENDORFF)心脏上持续定量冠状灌流量(coronaryperfusion)。此测定设备可用来记录血管痉挛的程度，持续时间与过程的型态，其准确度很高。如以浓度100nM的内皮素灌流时，冠状灌流量由11降至5毫升/分钟。利用根据本发明物质就可限制灌流。本发明化合物在有关赛希加金对带fura-2的RBL-hml-细胞的抑制作用或内皮素对带fura-2的HL60细胞的抑制效果上的效力与在兰根道夫制剂上检测到的试验物质的解除血管痉挛效果有显著相关性。由此得到的结论为，受试物质的解除血管痉挛的内皮素拮抗作用，可阻断非选择性阳离子通道。
药物制剂的实施例a)糖衣片剂一个糖衣片芯包含通式I活性物质 30.0毫克乳糖100.0毫克玉米淀粉75.0毫克明胶3.0毫克硬脂酸镁2.0毫克210.0毫克制法活性物质与乳糖及玉米淀粉混合，与10％明胶水溶液通过1毫米筛孔的筛而制成颗粒，于40℃干燥，再一次过筛。所得颗粒与硬脂酸镁混合，并压制。将这样制成的芯按一般方法，使用由糖，二氧化钛，滑石及阿拉伯胶组成的水性悬浮液进行包覆。完成的糖衣药片以蜂蜡作最后润饰。b)片剂通式I活性物质 30.0毫克乳糖 100.0毫克玉米淀粉 70.0毫克可溶性淀粉7.0毫克硬脂酸镁 3.0毫克210.0毫克制法将活性物质与硬脂酸镁用可溶性淀粉的水溶液制成颗粒，颗粒干燥，与乳糖及玉米淀粉均匀混合。混合物随后压成重210毫克的片剂。c)胶囊根据式I活性物质20.0毫克乳糖 230.0毫克玉米淀粉 40.0毫克滑石 10.0毫克300.0毫克制法取活性物质，乳糖及玉米淀粉先在混合机中合并，然后于研磨机中混合。混合物再送回混合机中，与滑石均匀混合，以机械灌装成硬明胶囊。d)片剂本发明活性物质40.0毫克乳糖 100.0毫克玉米淀粉 50.0毫克胶体硅石 2.0毫克硬脂酸镁 3.0毫克总量195.0毫克制法取活性物质与一部分赋形剂混合，并与可溶性淀粉的水溶液制成颗粒。颗粒干燥后，添加其余赋形剂，混合物压成片剂。e)糖衣片剂本发明活性物质 20.0毫克乳糖100.0毫克玉米淀粉65.0毫克胶体硅石2.0毫克可溶性淀粉 5.0毫克硬脂酸镁3.0毫克总量195.0毫克制法按实施例1所述，将活性物质与赋形剂压成片剂芯，然后按一般方法，用糖，滑石及阿拉伯胶包覆核心。f)栓剂本发明活性物质 50.0毫克乳糖250.0毫克栓剂基质，适量，加至1.7克制法将活性物质和乳糖共同混合，混合物均匀悬浮在熔化的栓剂基质中。悬浮液倒入冷却的模型中，形成重1.7克的栓剂。g)安瓿本发明活性物质 20.0毫克氯化钠 5.0毫克二次蒸馏水，适量，加至2.0毫升制法取活性物质与氯化钠溶于二次蒸馏水中，并与无菌条件下，将溶液移入安瓿中。h)安瓿本发明活性物质10.0毫克氯化钠7.0毫克二次蒸馏水，适量，加至1.0毫升i)滴剂本发明活性物质0.70克对羟基苯甲酸甲酯 0.07克对羟基苯甲酸丙酯 0.03克去离子水，适量，加至 100.0毫升制法取活性物质与防腐剂溶于去离子水中，溶液过滤，并移入100毫升小瓶中。
权利要求
1.一种新颖的通式I化合物或其与生理上可接受的酸或配合物所形成的盐类， 式中A代表苯并基，吲哚并基或噻吩并基；其中，如A为苯并基时，m为2或3(以2较佳，而两个R2则在6及7位置上)，取代基R2分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲酰醯氧基或甲磺酰胺基，或二个相邻取代基R2可共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为吲哚并基或噻吩并基时，m为零；R1代表噻吩基，或如下式基团 其中R7，R8与R9分别可代表甲基，乙基，丙基，苯基或苄基，其中不超过2个取代基可同时代表苯基或苄基；R3与R4分别代表下列基团；(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，CN，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，-NHCOCH3，-NHSO2CH3或CH3SO2O-，或桥连基-O-CH2-O-单取次，二取代或三取代]；或被二个未经取代的苯基取代；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基(其中该苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基、苄氧基、卤素(F、Cl、Br、I)，CF3、N3、(C1-4)烷基、金刚烷基、-SO2NH2、-NHCOCH3、-NHSO2CH3或CH3SO2O-或经桥连基-O-CH2-O-单取代，二取代或三取代)、吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4与所连接的氮原子共同代表吡咯烷基、哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可视需要被甲基，未经取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，经氰基取代的苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基，(C1-4)烷苯基或如下式基团取代
2.根据权利要求1的化合物或其与生理上可接受的酸或配合物所形成的盐类，其中R3和R4分别代表(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，-NHCOCH3，-NHSO2CH3或CH3SO2O-，或桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次]；或R3代表氢且R4代表环己基，苯基(其中该苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基、苄氧基、卤素(F、Cl、Br、I)，CF3、N3、(C1-4)烷基、金刚烷基、-SO2NH2、-NHCOCH3、-NHSO2CH3或CH3SO2O-或被桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次)；吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4与所连接的氮原子共同代表吡咯烷基，哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基，未经取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基，或下式基团取代
3.根据权利要求1或2的通式I化合物，其中A代表苯并基或噻吩并基；其中A为苯并基或噻吩并基；其中，如A为苯并基时，m为2，两个R2位于6及7位置，且分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或两个相邻取代基R2可共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为噻吩并基时，m为零；R1如权利要求1所定义；R3与R4分别代表下列基团；(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2或-NHCOCH3，或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次]；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基，氟苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4与所连接的氮原子共同代表吡咯烷基、哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基，未取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基或如下式基团取代
4.根据权利要求1或2的化合物I，其中A为吲哚并基，其他取代基如权利要求1所定义，优选的，NR3R4为吗啉基或在NR3R4中的R3为氢且R4为C1-4烷基，它可按权利要求1所定义而取代。
5.根据权利要求1，2或3的化合物I，其中A为苯并基或噻吩并基，如A为苯并基时，m为2，且两个R2分别代表甲氧基，羟基，苄氧基，甲基或氯，或共同代表-OCH2O-，两个R2位于6及7位置。
6.根据权利要求5的化合物I，其中R2为甲氧基，羟基，苄氧基或甲基。
7.根据权利要求5或6的化合物I，其中被R2取代的A基团为噻吩并基，6，7-二羟基苯并基，或优选为6，7-二甲氧基苯并基。
8.根据权利要求1至7中任一项的化合物I，其中R1为3-噻吩基。
9.根据权利要求1至7中任一项的化合物I，其中R1为叔丁基。
10.根据权利要求1至9中任一项的化合物I，其中NR3R4具有下列含义a)NR3R4中，R3为氢且R4为C1-6烷基；b)NR3R6中，R3为氢且R4为具有3至6个(3个较佳)碳原子的支链或直链炔基，c)NR3R4中，R3为氢且R4为具有1至4个(以1至3个较佳，尤指2个)碳原子的支链或直链烷基，该烷基是被下列基团取代甲氧基，二甲氨基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，噻吩基，金刚烷基，吡啶基，N-苄基哌啶基，环己基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中该苯基(如仅含一个苯基时)或含在苯氧基中的苯基可被甲氧基，乙氧基，苄氧基，卤素(特别指Cl，I)，CF3，N3，甲基，叔丁基，-SO2NH2或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次；或R3代表氢且R4代表环己基，苯基，氟苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；d)NR3R4中，R3与R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可如(c)中所说明的苯基被取代)，或代表 e)R3和R4与所连接的氮原子共同代表哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基，或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基或苄基取代。
11.根据权利要求10的化合物I，其中NR3R4具有下列含义之一a)NR3R4中，R3为氢且R4为C2-6烷基；b)NR3R4中，R3为氢且R4为CH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为支链或直链C2-4烷基，其中烷基是被下列基团取代甲氧基，二甲氨基，N-甲基吡咯烷基，噻吩基，金刚烷基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中如仅含一个苯基时的苯基或苯氧基中所含的苯基可被甲氧基，乙氧基，N3，甲基，叔丁基或-SO2NH2取代一次，二次或三次；d)NR3R4中，R3和R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可被F取代)或代表 e)R3和R4与所连接的氮原子共同代表哌嗪基，N被甲基或苄基取代。
12.根据权利要求10的化合物I，其中NR3R4具有下列一种含义a)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，叔丁基或(CH2)1或2-C(CH3)3；b)NR3R4为NHCH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，丙基或被苯基取代的甲基丙基，该苯基是被甲基或甲氧基取代一次，二次或三次，或被叔丁基取代一次；d)NR3R4中，R3和R4相同，即 e)NR3R4为
13.根据权利要求10的化合物I，其中R3为氢或(C1-4)烷苯基且R4为(C1-4)烷苯基，其中在该基团中最好含有甲基，且苯基被卤素，优选为Cl或F，CF3，甲氧基或乙氧基取代一次，该取代基最好呈邻位。
14.根据权利要求1至9中任一项的化合物I，其中R3为氢，且R4为a)被苯基取代的(C1-3)烷基，该苯基可被CF3，Cl，F，叔丁基或CH3取代；或b)2，2-二苯乙基或3，3-二苯丙基；或c)环己基。
15.一种制备权利要求1至14中任一项的化合物的方法，其特征在于，将通式IV丙二酸二酰胺，在缩合剂存在下进行环化，且必要时，转化成其盐 式中R1，R2，R3，R4与m如权利要求1至14中任一项所定义，且Ar代表苯基，吲哚基或2-或3-噻吩基。
16.一种药物制备，它包含权利要求1至14中任一项的化合物。
17.一种制备权利要求16的药物制剂的方法，其特征在于由权利要求1至14中任一项的化合物与熟知的盖伦赋形剂及/或载体加工而制成熟知的药物制剂形式。
18.根据权利要求1至14中任一项所定义的式I化合物在制备心脏保护剂，脑保护剂或治疗慢性炎症病变的制剂，具有抗增殖效果的制剂或治疗溃疡性结肠炎或节段性回肠炎的制剂中的用途。
全文摘要
本发明涉及通式I化合物含有该化合物的药物制剂以及其新颖的药物应用，式中，A代表苯并基，吲哚并基或噻吩并基；R
文档编号C07D409/14GK1138324SQ94194555
公开日1996年12月18日 申请日期1994年12月14日 优先权日1993年12月21日
发明者沃尔特·洛塞尔, 奥托·鲁斯, 迪特里希·阿恩特斯 申请人:贝林格尔·英格海姆公司
技术领域：
本发明是有关新颖的增环的二氢吡啶乙酸衍生物，其制备方法及含有该化合物的药物组合物。
二氢异喹啉由EP-A 37 934中是已知的。其中说明化合物具有强心活性，且具有提高收缩力及影响血压的效果。并提出可改善组织中的血液循环，及改善对组织的氧供给。这种用途的可能性都以化合物的血管活性为基础。EP-A 251 194及EP-A 288 048说明以碳环和杂环增环的二氢吡啶具有保护心脏或脑部的活性，并且是完全新型的Ca-拮抗性化合物。WO 92/11010说明这种化合物可用作保护脑部制剂，用于治疗长期性炎症病程及抑制凝血与血小板凝聚中的应用。
本发明是有关新颖的碳环与杂环增环的二氢吡啶及该化合物的药物用途。新颖化合物具有有价值的治疗用途。该化合物可作为心脏保护制剂，脑保护制剂(尤其可治疗中风患者或有中风危险的患者)及可用于治疗慢性炎症病变(例如支气管性哮喘和关节炎)的制剂。此外，该化合物也可用作具有抗增殖效果的制剂，及作为治疗溃疡性结肠炎与节段性回肠炎(Crohn′s disease)的制剂。
本发明是有关通式I化合物或其与生理上可接受的酸或配合物所形成的盐类 式中A代表苯并基，吲哚并基或噻吩并基；其中，若A为苯并基时，m为2或3(以2优选，而二个R2则在6及7位置上)，取代基R2分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或二个相邻取代基R2可共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为吲哚并基或噻吩并基时，m为零；R1代表噻吩基，或如下式基团 其中R7，R8与R9分别可代表甲基，乙基，丙基，苯基或苄基，其中不超过2个取代基可同时代表苯基或苄基；R3与R4分别代表下列基团；(a)氢，(b)支链或直链的C3-6烯基，(c)支链或直链的C3-6炔基，或(d)支链或直链的C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，
二C1-4烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，CN，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，-NHCOCH3，-NHSO2CH3或CH3SO2O-，或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次]；或被二个未经取代的苯基取代；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基(其中该苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基、苄氧基、卤素(F、Cl、Br、I)，CF3、N3、(C1-4)烷基、金刚烷基、-SO2NH2、-NHCOCH3、-NHSO2CH3或CH3SO2O-或经桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次)、吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4及其所连接的氮原子共同代表吡咯烷基、哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基，未取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，氰基取代的苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基，(C1-4)烷苯基或如下式基团取代 式I化合物可形成式II互变异构体 互变异构体可按已知方法分离，例如通过柱层析法或选择性还原法(NaBH4或催化还原作用)。
式II化合物可呈顺式及/或反式型 如化合物的结构没有说明，则所示式I应包括结构式II。
本文所使用的定义中，自由基与基团可相同或不同，意即，如上述一个取代基在特定分子中出现多次时，则其定义可自由选自本文所提供的定义范围内。
烷基是指可取代的C1-6烷基及C1-4烷基基团，或指烷基基团时，则作为官能基部分如烷氧基或烷硫基。烷基基团包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，异丁基及叔丁基基团，及各种异构的戊基与己基基团，例如异戊基，新戊基，正戊基与正己基基团。
因此即使当烷基基团本身取代和/或本身是烷氧烷基，烷氧羰基，烷氧基，烷硫基，烷磺酰基，单烷氨基，烷甲基，烷硫甲基或二烷氨基的一部分时，或当烷基基团作为取代基与芳香杂环或碳环结合时，上述定义也适用。
卤素指氟，氯，溴及碘，以氟，氯及溴较佳，较少代表碘。
C3-6环烷基指环丙烷，环丁烷，环戊烷与环己烷。
C5-6环烯指例如环戊烯，环己烯，及环己二烯。
C3-6炔指异构性己炔，戊炔，丁炔，与丙炔，以炔丙基较佳。
C3-6烯指异构性己烯，戊烯，丁烯与丙烯，以烯丙基较佳。
本发明优选的是通式I化合物，其中A代表苯并基或噻吩并基；其中如A为苯并基时，m为2，R2位于6及7位置，且分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或两个相邻取代基R2共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为噻吩并基时，m为零；R1代表噻吩基或如下式基团 其中R7，R8与R9分别可代表甲基，乙基，丙基，苯基或苄基，其中不超过2个取代基可同时代表苯基或苄基；R3与R4分别代表下列含义；(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，或-NHCOCH3，或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次]；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基，氟代苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4及其所连接的氮原子共同代表吡咯烷基，哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要而被甲基，未取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基或下式基团取代 优选的，A代表增环的环系 其中R2如本文中所定。本发明的另一优选方面的化合物I，式中A为吲哚并基，且其他取代基如上所定义，较佳的NR3R4为吗啉基，或在NR3R4中的R3为氢，且R4为C1-4烷基，它可按上述定义而被取代。
式I中A为苯并基的化合物中，较佳化合物为式中m是2且二个R2分别代表甲氧基，羟基，苄氧基，甲基或氯，或共同代表-CH2O-，其中二个R2位于6及7位置，特别指，式中R2为甲氧基，羟基，苄氧基或甲基的化合物。并且尤其是指式中二个R2相同且代表羟基或甲氧基的化合物。
化合物I中，较佳化合物为式中R1为叔丁基的化合物。
其他较佳的式I化合物为式中NR3R4为下列的一种含义a)NR3R4中，R3为氢而R4为C1-6烷基；b)NR3R4中，R3为氢而R4是具有3至6个(3个较佳)碳原子的支链或直链炔基，c)NR3R4中，R3为氢而R4为具有1至4个(以1至3个较佳，尤指2个)碳原子的支链或直链烷基，该烷基是被下列基团所取代甲氧基，二甲氨基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，噻吩基，金刚烷基，吡啶基，N-苄基哌啶基，环己基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中该苯基(如仅含一个苯基时)或在苯氧基中的苯基可被甲氧基，乙氧基，苄氧基，卤素(特别指Cl，I)，CF3，甲基，叔丁基，-SO2NH2或桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基，氟苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；d)NR3R4中，R3与R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可如(c)中说明的苯基而被取代)，优选的是 e)R3和R4与其所连接的氮原子共同代表哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基，或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要而被甲基或苄基取代；特别是，式中NR3R4为下列含义之一时a)NR3R4中，R3为氢且R4为C2-6烷基；b)NR3R4中，R3为氢且R4为CH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为支链或直链C2-4烷基，其中烷基是被下列基团所取代甲氧基，二甲氨基，N-甲基吡咯烷基，噻吩基，金刚烷基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中该苯基(如只含一个苯基时)或苯氧基中所含的苯基可被甲氧基，乙氧基，N3，甲基，叔丁基或-SO2NH2取代一次，二次或三次；d)NR3R4中，R3与R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可被F取代)或特别是 e)R3和R4与其所连接的氮原子共同代表哌嗪基，N可被甲基或苄基取代。
特别优选的化合物I为其式中的NR3R4为下列含义之一的a)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，叔丁基或(CH2)1或2-C(CH3)3；b)NR3R4为NHCH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，丙基或被苯基取代的甲基丙基，该苯基可被甲基或甲氧基取代一次，二次或三次，或被叔丁基取代一次；d)NR3R4中，R3与R4相同，即 e)NR3R4为 尤其是，式中R3为氢或(C1-4)烷苯基且R4为(C1-4)烷苯基的化合物，其中该基团中最好含有C1-烷基，且苯基被卤素(以Cl或F较佳)，CF3，甲氧基或乙氧基取代一次，该取代基最好是在邻位。
式I化合物可按本身已知的方法制备，优选类似于德国专利申请P 37 18 570.5，EP 358 957，EP 37 934，EP 251 794及EP 288048中所述方法制备。
在缩合剂存在下，可由通式IV的丙二酸二酰胺进行环化而形成相应化合物， 式中R1，R2，R3，R4与m如上述定义，且Ar代表苯基，吲哚基或2-或3-噻吩基。
适用于该方法的缩合剂为强路易士酸如磷酰氯，五氯化磷，三氯化磷，五氧化磷，四氯化钛，三氟化硼，四氯化锡，及无机酸类如聚磷酸，硫酸，氟磺酸及氢氟酸，或缩合剂的混合物，如磷酰氯与五氯化磷的混合物，或五氧化磷与(C1-4)烷磺酸的混合物，例如含约10重量％的P2O5。
环化作用可在溶剂存在或不存在下进行。任何惰性溶剂均适用，只要其足以溶解反应物且具有足够高的沸点即可，例如苯，烷基苯(例如甲苯，二甲苯)，氯苯，氯仿，乙腈，及萘烷。优选的方法的具体实施例是，作为缩合剂使用磷酰氯和乙腈的混合物，或(C1-4)烷磺酸与五氧化磷的混合物，其中不添加溶剂。
优选的，环化作用是使用磷酰氯及/或乙腈进行，或在较困难情况下，使用五氧化磷与(C1-4)烷磺酸(以甲磺酸较佳)的混合物。该反应可在宽广温度范围内进行，最好加热至50℃到至高达反应混合物的沸点。
所需反应时间为2至15小之间，这按起始化合物IV而定。
该制法所需的3-硫代苯丙二酸可由商品取得。2-硫代苯丙二酸可按本身已知方法制备(例如2-硫代苯乙酸使用碳酸酯方法，或由2-硫代苯溴化物及丙二酸二乙酯制得)。
式I化合物为碱类，并且可按熟知的方式，使用无机或有机酸与盐及配位化合物形成剂而转化成任何所需的生理上可接受的加合物(盐)。
适用于成盐的酸类包括例如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，氢氟酸，硫酸，磷酸，硝酸，醋酸，丙酸，丁酸，己酸，戊酸，草酸，丙二酸，琥珀酸，马来酸，富马酸，乳酸，酒石酸，柠檬酸，苹果酸，苯甲酸，对羟基苯甲酸，邻苯二甲酸，肉桂酸，水杨酸，抗坏血酸，甲磺酸，等等。
化合物可按口服，非肠胃的或局部方式给药。所需的治疗剂量按病症及所用的给药方式而定，并可由实验决定。合适的剂型包括片剂，胶囊，栓剂，液剂，糖浆，乳剂，气溶胶或可匀散性的粉剂。片剂例如可通过将活性物质与己知赋形剂，例如惰性稀释剂如碳酸钙，磷酸钙或乳糖，崩解剂如玉米淀粉或藻酸，粘结剂如淀粉或明胶，润滑剂如硬脂酸镁或滑石，和/或可产生缓释作用的试剂如羧基聚亚甲基，羧甲基纤维素，纤维素乙酸酯酞酸酯或聚乙烯乙酸酯等混合而进行。片剂亦可包含多层。
包覆片剂可按类似方法生产，它是用通常用于包覆片剂的物质例如可力酮(collidone)或虫胶，阿拉伯胶，滑石，二氧化钛或糖，包覆按片剂相同方式所生产的芯而进行的。为了得到缓释作用或避免不相容性，芯也可包括多层。同样地，片剂亦可由多层组成，以达到缓释效果，其中可使用片剂所要求的赋形剂。
含有本发明活性物质或活性物质组合物的糖浆可另外包括甜味剂如；糖精，环己氨磺酸盐(cyclamate)，甘油或糖，及味觉改良剂，例如香料如香草精或橙提取物。此外也可包含悬浮辅剂或稠化剂如羧甲基纤维素钠，润湿剂，例如脂肪醇和环氧乙烷的缩合产物，或防腐剂如对羟基苯甲酸酯。
注射用溶液是按通常方式生产，例如添加防腐剂如对羟基苯甲酸酯或稳定剂如乙二胺四乙酸的碱金属盐，然后移至注射瓶或安瓿中。
制备含有一种或多种活性物质或活性物质组合物的胶囊时，例如可由活性物质与惰性载体如乳糖或山梨糖醇混给，并包裹在明胶囊中。
合适栓剂的制备，可通过与已预定的载体混合，如；中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物。
该化合物可经肠道及非肠胃给药。口服剂量建议为每剂0.1至500毫克活性物质，静脉注射给药时，为每剂0.05至150毫克。所需治疗剂量按病症及所采用的给药途径而定，且可由实验决定。
药物组合物适用于口服或非肠胃给药，也可局部给药。所用剂型的一般为片剂或包覆片剂，安瓿及糖浆。使用这种剂型的单一剂量为每75公斤体重1.0至200毫克之间，以20至50毫克较佳。通常每天给药1至3次的单一剂量。按病例的严重性而定。
下列实施例说明本发明实施例11.叔丁基丙二酸单乙基酯于室温下，以30分钟时间，在搅拌下滴加含7.6克KOH(浓度85％)的50毫升水溶液于由21.6克二乙基叔丁基丙二酸酯，50毫升乙醇及50毫升水所组成的混合物中。15小时后，真空蒸馏以除去乙醇。残留物冷却后，添加300毫升CH2Cl2。以冰冷却下用13.6克KHSO4的100毫升H2O溶液酸化，水相用CH2Cl2萃取数次。合并的有机相用水洗涤，经Na2SO4干燥，并于30℃槽温下真空蒸发。留下15.35克(＝理论值的81.7％)单乙基酯(亮黄色油)。2.叔丁基丙二酸单乙基酯-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-酰胺于室温下，在15.35克叔丁基丙二酸单乙基酯的200毫升无水CH2Cl2溶液中，分批搅拌添加15.88克N，N′-羰基二咪唑。30分钟后，添加14.8克2-(3，4-二甲氧苯基)乙胺。再经15小时后，真空蒸馏以去除溶剂。残留物与200毫升水混合，用2N HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机相，经Na2SO4干燥后。残留物与石油醚(40至60℃)研制，使之结晶。产量24.7克(理论值的86.2％)；m.p.68-70℃。3.叔丁基丙二酸-单-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]-酰胺使42克酯酰胺(上述)及180毫千1N NaOH回流加热2小时。冷却及过滤后，用醚萃取溶液，并添加50毫升4N HCl酸化。当溶液静置时，析出结晶。抽吸过滤，于40至50℃干燥。产量35.4克(理论值的91.3％)；m.p.103-104℃。4.叔丁基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-N′-(3，3-二苯基丙基)-二酰胺于室温下，将2.1克N，N′-羰基二咪唑加入到3.23克叔丁基丙二酸单酰胺(得自实施例3)的50毫升无水CH2Cl2溶液中。30分钟后，添加2.11克3，3-二苯基丙胺。15小时后，于室温下静置，蒸馏掉溶剂。残留物与水混合，用2N HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤，经Na2SO4干燥，及真空蒸发。残留物(4.9克≌理论值的95％)未再纯化即用于环化反应。5.(R，S)-(3，4-二氯-6，7-二甲氧异喹啉-1-基)-2-叔丁基-N-(3，3-二苯基丙基)乙酰胺使由5.15克叔丁基丙二酸二酰胺(得自实施例4)，1.9毫升POCl3及35毫升乙腈组成的混合物回流加热2小时。冷却后，倒入冰水中，用饱和碳酸钠溶液调节成碱性，并用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤，经Na2SO4干燥，及蒸发。残留物溶于丙酮中，用计算量的醚化的盐酸溶液转化成盐酸盐，并经研制而结晶。产量4.45克(理论值的83.6％)；m.p.147-148℃。
实施例23-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-酰胺 取15.1克(40毫摩尔)-3-噻吩基丙二酸单乙基酯-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-酰胺溶于150毫升甲醇和100毫升二噁烷中，在冰冷却和搅拌下，滴加42毫升(42毫摩尔)1N NaOH。室温下继续搅拌混合物2小时，真空蒸馏以除去有机溶剂，残留物分配在水和CH2Cl2之间。
在冷却和搅拌下，用10％柠檬酸酸化水相，并用CH2Cl2萃取。用水，饱和NaCl溶液洗涤，并在MgSO4上干燥后，真空蒸馏去除溶剂，得到12.7克残留物。由二氯甲烷/甲醇/醚中重结晶后，得到标题化合物11.7克(理论值的83.7％)。3-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]-N′-二苄基-二酰胺 于5℃搅拌下，在3.75克(11毫摩尔)3-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]酰胺的100毫升无水四氢呋喃溶液中，分批加入1,78(11毫摩尔)羰基二咪唑。反应混合物在室温下搅拌30分钟后，添加2.17克(11毫摩尔)二苄胺。于室温下搅拌16小时后，混合物浓缩，使残留物分配在酸乙酯和水之间。有机相依序用水，5％KHSO4溶液，饱和NaHCO3溶液，水及饱和NaCl溶液洗涤，经MgSO4干燥，真空蒸馏以除去溶剂混合物。残留物由少量醚中再结晶。产量5.1克(理论值的87.7％)标题化合物。(R，S)-(3，4-二氢-6，7-二甲氧异喹啉-1-基)-2-(3-噻吩基)-N，N-二苄基-乙酰胺 取5.1克(96毫摩尔)3-噻吩基丙二酸-N-[2-(3，4-二甲氧苯基)-乙基]-N′-二苄基-二酰胺与4.41克(28.8毫摩尔)磷酰氯在50毫升乙腈(分析纯)中反应，混合物于N2大气下回流加热1小时。冷却后，添加150毫升乙酸乙酯，用饱和NaHCO3溶液中和，用水及饱和NaCl溶液洗涤，经MgSO4干燥，真空蒸馏去除溶剂。残留物溶于10毫升无水丙酮中，添加900毫克(10毫摩尔)草酸，添加约50毫升无水乙醚后，盐结晶析出。产量4.8克(理论值的83.3％)标题化合物，呈草酸盐形成；m.p.128-130℃。
下表中列出本发明化合物的实例。这些化合物可类似于上述方法制备。
表1 76 Fu(1.5)105Fu152 Fu(1.5) 230Cl 138 Fu(1.5) 112 Fu 98 Fu(1.5)
M.p.(℃)盐型 互变异构体结构 209 Cl 215 Cl 174 Fu 208 Fu232 Cl165 Cl 133 Fu(1.5)I
互变异构体盐型结构NH-(CH2)9-CH3147 Cl 210 Cl 223 Cl 209 ClI187 Fu(1.5)
M.p.(℃)互变异构体盐型结构102 Fu(1.5) 201 Fu212 Cl145 Fu(1.5) 145 Fu(1.5) 192 Fu(1.5) 158Fu(2)209 Cl 170 Cl 138 Cl 188 Cl
M.p(℃)互变异构体 盐型结构 222 Cl 144 Fu(1.5) 180 Fu(1.5) 210 Fu(1.5) 222 Cl
表2 盐型 M.p(℃) OX125-135(分解) BS 161-163 BS 118-120
盐型 M.p.(℃) BS128-130 BS185-187 OX128-130 OX 70-80(分解) BS165-167BS102-104 OX124-127
盐型 M.p.(℃)NH-(CH2)9-CH3OX121-122 OX 107-112 NH2OX121-140(分解)OX 不定形物 OX80-100(分解)
盐型 M.p.(℃) 表3 X盐型 M.p.(℃) BS不定形物OX草酸盐BS游离碱Decomp.分解本发明主题还涉及这类新颖化合物的用途。
这些化合物可用于治疗脑部的变性与坏死的疾病。亦可对患有这种疾病危险的患者进行预防处理。化合物的作用并不基于改善组织中的供血。因此这些化合物适用于作为癫痫和初老期痴呆症的新治疗法，特别可治疗患有中风或有中风危险的患者。
本发明另一主题是上述化合物在制备用于治疗慢性炎症病变，溃疡性结肠炎，和节段性回肠炎(Crohn′s disease)制剂和用于具抗增殖活性制剂中的用途。化合物的作用可由其抑制非选择性阳离子通道(UCC)而解释。
慢性支气管哮喘的病理生理学是基于炎症的病变，它通过活化炎症细胞而调节，(BARNES，1987；SEIFERT和SCHULTZ，1991)。
发炎细胞(例如嗜中性粒性白细胞及肥大细胞或永久细胞系HL-60细胞或敏化的即带有γ-球蛋白E的RBL细胞)的受体调节性活化与刺激性主动剂(例如内皮素(endothelin)，PAF，白三烯(leukotrienes)，趋化性的肽fMLP或对敏化肥大细胞的抗原)无关，而是通过非选择性阳离子通道(UCC)的阻断剂抑制(林克(RINK)，1990)。细胞外的钙则通过这些通道而进入细胞内，这对受体调节性细胞活化持久性是所需的(PUTNEY，1990)。如这种钙供应受到中断，结果将阻断炎症细胞的活化作用。
通常的二氢吡啶或苯烷基胺类的钙拮抗剂均不抑制UCC或炎症病变(WELLS等人，1986)。
细胞活化作用的测定或其受到UCC阻断剂的抑制作用的测定，是采用GRYNKLEWICZ等人(1985)所述的方法，由萤光测定法定量测定带有fura-2的细胞中，细胞质的钙离子浓度的动力学。该方法已证实为一种在本发明范围内检测UCC阻断剂的可靠筛选法。
所谓功能性赛希加金(THAPSIGARGIN)抑制作用已证实适合于具体表征非选择性阳离子通道的阻断剂。THAPSIGARGIN是一种由THA-STRUP等人描述的肿瘤促进剂(Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)，87，2466-2470，1990)，它选择性且不可逆性地抑制细胞内IP3-敏感性Ca2+-储存库的Ca2+-ATPase。结果则迅速消耗Ca2+-储存库。如J.PUTNEY所述(Calcium，11，611-624，1990)，这种储存库的消耗则成为生理上刺激细胞膜中非选择性阳离子通道的打开。结果使大量Na+与Ca2+流入细胞中。由于这些性质，Thapsigargin因此适用于作为间接刺激剂以不依赖激动剂与IP3而打开非选择性阳离子通道。
在本发明范围内，非选择性阳离子通道的Thapsigargin刺激作用已成功地作用于HL60细胞(人类白血病细胞)，海马与皮质神经元细胞及RBL细胞(老鼠嗜碱性淋巴瘤细胞)，因此证实在某些细胞系中有这种通道。
细胞质Ca2+浓度([Ca2+]1)在细胞增殖及肿瘤生长中起重要作用(其概要说明参见L.R.ZACHARSKI，Journal of Medicine 19145-177，1988)。尤其是，通过具有连续性肌醇三磷酸盐(IP3)-调节的受体活化作用而刺激Ca2+流入细胞中，这一点对致癌细胞增殖作用似乎具有关键重要性(U.KIKKAWA与Y.NISHIZUKA，Ann.Rev.Cell.Biol.，2149-178，1986)。这种机理在形成转移及“多重药物抗性”中也起一定作用(其概要说明参见上述L.R.ZACHARS-KI，J.MED.19145-177，1980)。
因而认为，作为非选择性阳离子通道(UCC)的间接刺激物的Th-apslgargin不仅使细胞中承载过量Ca2+，而且是一种高度有效的肿瘤促进剂(V.THASTRUP等人，Proceedings of the Natl.Acad.Sci.，(USA)872466-2470，1990)。通过UCC阻断Ca2+流入的结果使细胞内Ca离子浓度正常化，因此可抑制肿瘤生长等。
常用的钙拮抗剂并不抑制这种UCC。惊人地发现，根据本发明化合物抑制Ca流通过UCC而流入细胞。
如S.H.MURCH等人所示(Lancet 339381-385，15，1992年2月)指出，内皮素I在如溃疡性结肠炎及节段性回肠炎的炎症性肠部疾病中起重要的病理生理学作用。采用免疫组织化学法能确证，在患有节段性回肠炎的患者的粘膜下层区域及在患有溃疡性结肠炎的患者的结肠上的固有层区域与健康的正常人体相比具有显著且大幅度提高的内皮素I浓度。有认为局部分泌内皮素会导致严重血管痉挛，出现连续散布的缺血而产生小梗塞，这被视为上述疾病的真正原因。内皮素导致血管痉挛效果的原因是血管肌细胞的Ca2+太多。内皮素主要引发IP3调节细胞内释出Ca2+，随后大量横跨膜的Ca2+流经过二氢吡啶不敏感的通道而进入(M.S.Simonson等人，Clin.Invest.Med.，14；499-507，1991；T.Masakai，J.Cardiova-sc.Pharmacol 13Suppl. 5，S1-S4，1989；D.W.Hay，R.J.Pharmacol.100383-392，1990)。这种通道是非选择性阳离子通道，曾有报导说明其存在于大肠粘膜的细胞中(Chr.Siemer与H.Goegelin，Europ.J.Physiol.420319-328，1992)。
带fura-2的人类白血病细胞(HL 60细胞)受内皮素刺激的活化作用经证明是一种适合于检测功能性内皮素拮抗剂的筛选模式。根据G.GRYNKIEWICZ等人(J.Biol.Chem.260；3440-3450，1985)，可利用萤光光谱测定法追踪HL60细胞(悬浮液)的细胞质中细胞内Ca2+浓度，并定量，作为内皮素对细胞活化作用的测定值。添加0.1mM内皮素即可产生刺激作用，且利用本发明物质，随剂量变化而受抑制。
根据本发明物质的功能性内皮素拮抗作用是由非选择性阳离子通道的阻断作用来进行调节。
因此在RBL-hml细胞上检测功能性Thapsigargin拮抗作用也是一种适合于筛选功能性内皮素拮抗剂的方法。实验过程为了进行筛选，在没有Ca2+的培养基中，用0.1μM Thapsigar-gin刺激带fura-2的粘附性RBL-hml细胞。4分钟后，细胞外Ca2+恢复至1.5mM浓度，并利用fura-2-萤光记录因大量横跨膜的Ca2+通过非选择性阳离子通道进入而引起过度提高的细胞质Ca2+浓度。
这种Ca2+注入单独的并通过非选择性阳离子通道阻断剂而随剂量变化以抑制。不论通常的钙拮抗剂或刺激IP3-转换的激动剂的专一性阻断剂都不会抑制由赛希加金间接引起的横跨膜的Ca2+进入。本发明化合物的特性在于抑制UCC。
类似于KUDO与OGURA(1986)的用于神经元细胞所述的方法，以萤光法测定个别粘附性RBL-hml细胞的细胞质中的钙浓度。使用蔡司公司(ZEISS)制造的AXTOVERT 35萤光显微镜，配合由HAMAMATSU公司制造的图像系统，包括ICMS图像处理系统，具有控制组件的余光相机及图像加强器DVS 3000。
以赛希加金(0.1μM)刺激细胞活化作用后，连续记录细胞质Ca+浓度的动力学，以浓度/时间曲线表示。在有和没有10μM试验物质的存在下比较两种活化细胞培养物的曲线。在这些曲线下的面积(曲线下面积＝AUC)经过积分计算，并记录为细胞活化作用的测定值。采用下列公式计算受试的UCC-阻断剂的抑制效力 ％H＝受刺激的和受到10μM试验物质抑制的钙通过非选择性阳离子通道进入的抑制百分率。AUC抑制＝在刺激物加10μM抑制性试验物质的存在下记录的曲线下面积。AUC对照＝仅添加刺激物后所记录的曲线下面积。有关上述说明的参考文献BARNES P.J.，I.W. RODGER and N.C. THOMSONPathogenesis of asthma，in＂ASTHMA，basic mechanisms andclinical management＂ED by P.J. BARNES；ACADEMIC PRESS，LONDON，1988GRYNKIEWICZ G.，M.POENIE and R.Y. TSIENA new generation of Ca2+-indicators with greatly improvedfluorescence propertiesJ.BIOL.CHEM. 2603440-3450，1985HIDE，M.and M.A. BEAVENCalcium influx in a rat mast cell(RBL-2H3)lineJ.BIOL. CHEM.266 15221-15229，1991KUDO，Y. and A.OGURAGlutamate-induced increase in intracellular Ca2+-concentration in isolated hippocampal neuronesBR.J.PHARMACOL.89191-198；1986PUTNEY，J.W.，jr.Capacitative Calcium entry revisedCELL CALCIUM 11611-624，1990RINK，T.JReceptor-mediated calcium entryFEBS LETT. 268381-385，1990SEIFERT，R. and G. SCHULTZThe superoxide forming NADPH oxidase of phagocytesAnenzyme system regulated by multiple mechanismREV. PHYSIOL. BIOCHEM. PHARMACOL.，Vol.117，SPRINGER VERL.，1991WELLS，E.，C.G. JACKSON，S.T.HARPER，J.MANN and R.P.EAOYCharacterization of primate bronchoalveolar mast cellsII，inhibition of histamine，LTC4and PGF2arelease fromprimate bronchoalveolar mast cells and a comparison withrat peritoneal mast cellsJ.IMMUNOL.1373941-3945，1986.
测定结果表中列出RBL-hm 1细胞受到赛希加金(0.1μThapsigargin)刺激后，UCC的受抑制百分比。试验物质的标准浓度为10-5mol或10-6mol。
表4 盐型 ％H(10-5M) ％H(10-6M) Fu(1.5) 71.9 Fu 57.3 Fu(1.5) 71.2 Cl 66.4 Fu(1.5) 53.3 Fu 70.7 Fu(1.5)60.5
盐型 ％H(10-5M)％H(10-6M) Cl 64.6Cl 70.1Fu 77.2 Fu 75.7Cl 24.8 Cl 64.4 Fu(1.5)74.4
盐型％H(10-5M) ％H(10-6M)NH-(CH2)9-CH3Cl 69.7Cl 45.8Cl 80.8 Cl64.9 Fu(1.5) 66.8
盐型 ％H(10-5M) ％H(10-6M)Fu(1.5) 73.8 Fu 29.2 Cl 72.7 Fu(1.5)28.4 Fu(1.5)43.2 Fu(1.5)16.9 Fu(2) 35.7 Cl53.3 Cl100.0 60.3
盐型％H(10-5M) ％H(10-6M) Cl93.547.3 Cl99.063.7 Cl96.065.4 Fu(1.5)91.665.7Fu(1.5)65.8 Fu(1.5)51.1 Cl 61.0
表5 盐型 ％H(10-5M) OX 20.85 BS 59.94 BS37.83
盐型 ％H(10-5M) BS 36.41 BS 39.17 OX 90.9 OX 22.62 BS 14.6 BS 25.76 OX50.61NH-(CH2)9-CH3OX47.09
盐型 ％H(10-5M)OX 28.14 NH2OXOX 6.8 OX 52.26
表6 盐型 ％(10-5M) BS 27.01
利用下列试验法证实功能性消炎效果采用个别粘附于玻璃载片上的RBL-2H3-细胞(一种肥大细胞相关的肿瘤细胞系)。
按HIDE和BEAVEN(1991)所述方法进行RBL-2H3-细胞的培养与附着。为了敏化粘附性RBL-2H3-细胞，使细胞于室温下，与一种稀释1∶2000的对二硝基酚-牛血清白蛋白配合物(DNP-BSA-抗原)的市售γ-球蛋白E溶液商品培养2小时。然后洗涤细胞。添加0.1毫升DNP-BSA-溶液(10微克/毫升)时，即出现强力的免疫性细胞活化作用，该作用是受到细胞质的过量Ca2+而调节。类似于KUDO和OGURA(1984)用于神经元细胞所述方法，于个别粘附性RBL-2H3-细胞的细胞质中，以萤光法测定钙，该方法也说明于本说明书中。
在该试验中所用的对照物质为(10μM)色甘氨酯(chromogly-cate)，它对抗原诱发的细胞活化作用而产生约50％抑制作用。
本试验中，上述化合物呈现的％H值相当于上文所说明的数值。
各种不同人类肿瘤细胞系的微培养物研究中使用四唑鎓盐分析法以确定本发明物质的抗增殖效果，惊人地表示受试化合物比对照物质戊胺安(Verapamil)强5至100倍。
采用MOSMANN(J.IMMUNOL.METH.6555-63，1983)，DEN-IZOT等人(J.IMMUNOL.METH.89271-277，1986)及J.ELIASON(INT.J.CANCER.46113-117，1990)所述的的MTT试验法以测定试验物质的抗增殖效果。(MTT＝[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)2，5-二苯基-四唑鎓化溴]，由美国加州艾山冈多，康米肯公司(CH-EMICON INC.EI Sequndo，CA，USA)生产)。该指示剂仅在含有完整线粒体的活细胞中代谢而成蓝色甲(formazane)产物。我们试验中采用下列人类肿瘤细胞系A549(肺的线癌瘤)，A431(女阴表皮癌瘤)，PC 3(前列腺的腺癌瘤)，SK BR 3(乳房腺癌瘤)，HT29(CX1 1)(结肠的腺癌瘤)及K562(慢性脊髓白血病细胞)。
在微滴定板上进行试验。每一孔中含有100微升的细胞悬浮液(每毫升0.2×106个细胞)。所使用的培养基为含有10％经加热不活化的胎牛血清与50微克/毫升庆大霉素(gentamycin)的RPMI 1640。细胞悬浮液于37℃下，在饱和大气湿度的CO2(5％)/空气(95％)大气下，在有或没有各种浓度变化的抗增殖试验物质存在下培养0，24，48或72小时。试验物质溶于DMSO中(最终稀释度0.1％)。然后添加10微升MTT-溶液(3毫克/毫升)，3小时后添加100微升含0.08NHCI的异丙醇溶液。1小时后，于微盘读数机上读取570nm的吸光度(对照组波长630nm)。吸光度与活细胞数目呈直接比例关系。受试物质的半最大抑制浓度为1微克/毫升。
由分离出的血管制剂确认上述功能性内皮素或赛希加金拮抗剂的解除血管痉挛效果。利用电磁性流动测定法(设备由Hugo SachsElectronik MARCH供应)，在取自老鼠，经逆行灌流的自发性博动的兰根道夫(LANGENDORFF)心脏上持续定量冠状灌流量(coronaryperfusion)。此测定设备可用来记录血管痉挛的程度，持续时间与过程的型态，其准确度很高。如以浓度100nM的内皮素灌流时，冠状灌流量由11降至5毫升/分钟。利用根据本发明物质就可限制灌流。本发明化合物在有关赛希加金对带fura-2的RBL-hml-细胞的抑制作用或内皮素对带fura-2的HL60细胞的抑制效果上的效力与在兰根道夫制剂上检测到的试验物质的解除血管痉挛效果有显著相关性。由此得到的结论为，受试物质的解除血管痉挛的内皮素拮抗作用，可阻断非选择性阳离子通道。
药物制剂的实施例a)糖衣片剂一个糖衣片芯包含通式I活性物质 30.0毫克乳糖100.0毫克玉米淀粉75.0毫克明胶3.0毫克硬脂酸镁2.0毫克210.0毫克制法活性物质与乳糖及玉米淀粉混合，与10％明胶水溶液通过1毫米筛孔的筛而制成颗粒，于40℃干燥，再一次过筛。所得颗粒与硬脂酸镁混合，并压制。将这样制成的芯按一般方法，使用由糖，二氧化钛，滑石及阿拉伯胶组成的水性悬浮液进行包覆。完成的糖衣药片以蜂蜡作最后润饰。b)片剂通式I活性物质 30.0毫克乳糖 100.0毫克玉米淀粉 70.0毫克可溶性淀粉7.0毫克硬脂酸镁 3.0毫克210.0毫克制法将活性物质与硬脂酸镁用可溶性淀粉的水溶液制成颗粒，颗粒干燥，与乳糖及玉米淀粉均匀混合。混合物随后压成重210毫克的片剂。c)胶囊根据式I活性物质20.0毫克乳糖 230.0毫克玉米淀粉 40.0毫克滑石 10.0毫克300.0毫克制法取活性物质，乳糖及玉米淀粉先在混合机中合并，然后于研磨机中混合。混合物再送回混合机中，与滑石均匀混合，以机械灌装成硬明胶囊。d)片剂本发明活性物质40.0毫克乳糖 100.0毫克玉米淀粉 50.0毫克胶体硅石 2.0毫克硬脂酸镁 3.0毫克总量195.0毫克制法取活性物质与一部分赋形剂混合，并与可溶性淀粉的水溶液制成颗粒。颗粒干燥后，添加其余赋形剂，混合物压成片剂。e)糖衣片剂本发明活性物质 20.0毫克乳糖100.0毫克玉米淀粉65.0毫克胶体硅石2.0毫克可溶性淀粉 5.0毫克硬脂酸镁3.0毫克总量195.0毫克制法按实施例1所述，将活性物质与赋形剂压成片剂芯，然后按一般方法，用糖，滑石及阿拉伯胶包覆核心。f)栓剂本发明活性物质 50.0毫克乳糖250.0毫克栓剂基质，适量，加至1.7克制法将活性物质和乳糖共同混合，混合物均匀悬浮在熔化的栓剂基质中。悬浮液倒入冷却的模型中，形成重1.7克的栓剂。g)安瓿本发明活性物质 20.0毫克氯化钠 5.0毫克二次蒸馏水，适量，加至2.0毫升制法取活性物质与氯化钠溶于二次蒸馏水中，并与无菌条件下，将溶液移入安瓿中。h)安瓿本发明活性物质10.0毫克氯化钠7.0毫克二次蒸馏水，适量，加至1.0毫升i)滴剂本发明活性物质0.70克对羟基苯甲酸甲酯 0.07克对羟基苯甲酸丙酯 0.03克去离子水，适量，加至 100.0毫升制法取活性物质与防腐剂溶于去离子水中，溶液过滤，并移入100毫升小瓶中。
权利要求
1.一种新颖的通式I化合物或其与生理上可接受的酸或配合物所形成的盐类， 式中A代表苯并基，吲哚并基或噻吩并基；其中，如A为苯并基时，m为2或3(以2较佳，而两个R2则在6及7位置上)，取代基R2分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲酰醯氧基或甲磺酰胺基，或二个相邻取代基R2可共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为吲哚并基或噻吩并基时，m为零；R1代表噻吩基，或如下式基团 其中R7，R8与R9分别可代表甲基，乙基，丙基，苯基或苄基，其中不超过2个取代基可同时代表苯基或苄基；R3与R4分别代表下列基团；(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，CN，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，-NHCOCH3，-NHSO2CH3或CH3SO2O-，或桥连基-O-CH2-O-单取次，二取代或三取代]；或被二个未经取代的苯基取代；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基(其中该苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基、苄氧基、卤素(F、Cl、Br、I)，CF3、N3、(C1-4)烷基、金刚烷基、-SO2NH2、-NHCOCH3、-NHSO2CH3或CH3SO2O-或经桥连基-O-CH2-O-单取代，二取代或三取代)、吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4与所连接的氮原子共同代表吡咯烷基、哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可视需要被甲基，未经取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，经氰基取代的苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基，(C1-4)烷苯基或如下式基团取代
2.根据权利要求1的化合物或其与生理上可接受的酸或配合物所形成的盐类，其中R3和R4分别代表(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2，-NHCOCH3，-NHSO2CH3或CH3SO2O-，或桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次]；或R3代表氢且R4代表环己基，苯基(其中该苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基、苄氧基、卤素(F、Cl、Br、I)，CF3、N3、(C1-4)烷基、金刚烷基、-SO2NH2、-NHCOCH3、-NHSO2CH3或CH3SO2O-或被桥连基-O-CH2-O-取代一次，二次或三次)；吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4与所连接的氮原子共同代表吡咯烷基，哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基，未经取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基，或下式基团取代
3.根据权利要求1或2的通式I化合物，其中A代表苯并基或噻吩并基；其中A为苯并基或噻吩并基；其中，如A为苯并基时，m为2，两个R2位于6及7位置，且分别代表羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，(C1-4)烷基，甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或两个相邻取代基R2可共同代表-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；且如A为噻吩并基时，m为零；R1如权利要求1所定义；R3与R4分别代表下列基团；(a)氢，(b)支链或直链C3-6烯基，(c)支链或直链C3-6炔基，或(d)支链或直链C1-12烷基，其中烷基可被下列基团取代羟基，(C1-4)烷氧基，二(C1-4)烷氨基，呋喃基，吡啶基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，吲哚基，次氮基，噻吩基，金刚烷基，环己基，苯氧基，萘氧基或苯基[其中该苯基或苯氧基中所含的苯基可被羟基，(C1-4)烷氧基，苄氧基，卤素(F，Cl，Br，I)，CF3，N3，(C1-4)烷基，金刚烷基，-SO2NH2或-NHCOCH3，或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次]；或R3代表氢且R4代表环己基、苯基，氟苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；或R3和R4与所连接的氮原子共同代表吡咯烷基、哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基，未取代的苯基，单-或二(C1-4)烷氧苯基，嘧啶基，苯基(C1-4)烷基或如下式基团取代
4.根据权利要求1或2的化合物I，其中A为吲哚并基，其他取代基如权利要求1所定义，优选的，NR3R4为吗啉基或在NR3R4中的R3为氢且R4为C1-4烷基，它可按权利要求1所定义而取代。
5.根据权利要求1，2或3的化合物I，其中A为苯并基或噻吩并基，如A为苯并基时，m为2，且两个R2分别代表甲氧基，羟基，苄氧基，甲基或氯，或共同代表-OCH2O-，两个R2位于6及7位置。
6.根据权利要求5的化合物I，其中R2为甲氧基，羟基，苄氧基或甲基。
7.根据权利要求5或6的化合物I，其中被R2取代的A基团为噻吩并基，6，7-二羟基苯并基，或优选为6，7-二甲氧基苯并基。
8.根据权利要求1至7中任一项的化合物I，其中R1为3-噻吩基。
9.根据权利要求1至7中任一项的化合物I，其中R1为叔丁基。
10.根据权利要求1至9中任一项的化合物I，其中NR3R4具有下列含义a)NR3R4中，R3为氢且R4为C1-6烷基；b)NR3R6中，R3为氢且R4为具有3至6个(3个较佳)碳原子的支链或直链炔基，c)NR3R4中，R3为氢且R4为具有1至4个(以1至3个较佳，尤指2个)碳原子的支链或直链烷基，该烷基是被下列基团取代甲氧基，二甲氨基，吡咯烷基，N-甲基吡咯烷基，吗啉基，噻吩基，金刚烷基，吡啶基，N-苄基哌啶基，环己基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中该苯基(如仅含一个苯基时)或含在苯氧基中的苯基可被甲氧基，乙氧基，苄氧基，卤素(特别指Cl，I)，CF3，N3，甲基，叔丁基，-SO2NH2或桥连基-O-CH2-O取代一次，二次或三次；或R3代表氢且R4代表环己基，苯基，氟苯基，吡啶基或N-苄基哌啶基；d)NR3R4中，R3与R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可如(c)中所说明的苯基被取代)，或代表 e)R3和R4与所连接的氮原子共同代表哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基，或哌嗪基，其中哌嗪基环的N可按需要被甲基或苄基取代。
11.根据权利要求10的化合物I，其中NR3R4具有下列含义之一a)NR3R4中，R3为氢且R4为C2-6烷基；b)NR3R4中，R3为氢且R4为CH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为支链或直链C2-4烷基，其中烷基是被下列基团取代甲氧基，二甲氨基，N-甲基吡咯烷基，噻吩基，金刚烷基，苯氧基，萘氧基或1或2个苯基，其中如仅含一个苯基时的苯基或苯氧基中所含的苯基可被甲氧基，乙氧基，N3，甲基，叔丁基或-SO2NH2取代一次，二次或三次；d)NR3R4中，R3和R4分别代表甲基，乙基，(CH2)1-4苯基(其中苯基可被F取代)或代表 e)R3和R4与所连接的氮原子共同代表哌嗪基，N被甲基或苄基取代。
12.根据权利要求10的化合物I，其中NR3R4具有下列一种含义a)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，叔丁基或(CH2)1或2-C(CH3)3；b)NR3R4为NHCH2CCH；c)NR3R4中，R3为氢且R4为乙基，丙基或被苯基取代的甲基丙基，该苯基是被甲基或甲氧基取代一次，二次或三次，或被叔丁基取代一次；d)NR3R4中，R3和R4相同，即 e)NR3R4为
13.根据权利要求10的化合物I，其中R3为氢或(C1-4)烷苯基且R4为(C1-4)烷苯基，其中在该基团中最好含有甲基，且苯基被卤素，优选为Cl或F，CF3，甲氧基或乙氧基取代一次，该取代基最好呈邻位。
14.根据权利要求1至9中任一项的化合物I，其中R3为氢，且R4为a)被苯基取代的(C1-3)烷基，该苯基可被CF3，Cl，F，叔丁基或CH3取代；或b)2，2-二苯乙基或3，3-二苯丙基；或c)环己基。
15.一种制备权利要求1至14中任一项的化合物的方法，其特征在于，将通式IV丙二酸二酰胺，在缩合剂存在下进行环化，且必要时，转化成其盐 式中R1，R2，R3，R4与m如权利要求1至14中任一项所定义，且Ar代表苯基，吲哚基或2-或3-噻吩基。
16.一种药物制备，它包含权利要求1至14中任一项的化合物。
17.一种制备权利要求16的药物制剂的方法，其特征在于由权利要求1至14中任一项的化合物与熟知的盖伦赋形剂及/或载体加工而制成熟知的药物制剂形式。
18.根据权利要求1至14中任一项所定义的式I化合物在制备心脏保护剂，脑保护剂或治疗慢性炎症病变的制剂，具有抗增殖效果的制剂或治疗溃疡性结肠炎或节段性回肠炎的制剂中的用途。
全文摘要
本发明涉及通式I化合物含有该化合物的药物制剂以及其新颖的药物应用，式中，A代表苯并基，吲哚并基或噻吩并基；R
文档编号C07D409/14GK1138324SQ94194555
公开日1996年12月18日 申请日期1994年12月14日 优先权日1993年12月21日
发明者沃尔特·洛塞尔, 奥托·鲁斯, 迪特里希·阿恩特斯 申请人:贝林格尔·英格海姆公司
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