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2021-01-31 17:01:43|
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起点商标网 专利名称：氧代吡啶基喹喔啉衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及对中枢神经元谷氨酸受体特别是NMDA受体和AMPA受体具有拮抗作用的氧代吡啶基喹喔啉衍生物。
氨基酸如L-谷氨酸和L-天冬氨酸是激活中枢神经系统(CNS)中的神经元必不可少的神经递质，然而在神经元周围这些兴奋性氨基酸的过分累积被认为会诱导神经元的过度兴奋，从而引起神经疾病如帕金森神经机能障碍、老年性痴呆、亨廷顿舞蹈病和癫痫，以及局部缺血之后产生的精神迟钝和少动症、缺氧症、低血糖或头和脊髓创伤(参见Mc Geer等人，Nature，263，517-519(1976)；Simon等人，Science，226，850-852(1984)；Wieloch，Science，230，681-683(1985)；Faden等人，Science，244，798-800(1989)；Turski等人，Nature，349，414-418(1991))。
已知上述兴奋性氨基酸通过神经元上的谷氨酸受体作用于CNS.因此，竞争性地抑制兴奋性氨基酸与这些受体结合的化合物被认为可有效地用作上述疾病和病症的治疗剂如抗癫痫剂、局部缺血脑病预防剂、和抗帕金森神经机能障碍剂。日本公开专利号6-25294，6-239747和6-228112(Yamanouchi Pharmaceutical CO.，Ltd).Wo93/8173(SCHERING)、EP5725852A1(BASF)等报道了谷氨酸受体产生的重要作用。
谷氨酸受体分为两类，即离子通道型和代谢型。根据其对于激动剂结合的选择性，离子通道型又可分为三类，称为N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、2-氨基-3-(3-羟基-5-甲基异噁唑-4-基)丙酸(AMPA)受体和红藻氨酸受体。
NMDA受体可被激动剂如NMDA和鹅膏蕈氨酸选择性地激活。NMDA受体的过度兴奋使大量钙离子流入神经元。这被认为是神经元死亡的原因之一。到目前为止。已知D-2-氨基-5-磷酸戊酸酯(D-AP5)和3-[2-羧基哌嗪-4-基]丙基-1-磷酸酯(CPP)等可作为选择性结合NMDA受体的拮抗剂。
AMPA受体可被激动剂如AMPA、谷氨酸和使君子氨酸选择性地激活。已经研制出各种喹喔啉衍生物作为AMPA受体的拮抗剂。这些衍生物的实例包括6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(DNQX)(Ferrosan)，6-氰基-7-硝基喹喔啉-2，3-二酮(CNQX)，2，3-二羟基-6-硝基-7-氨磺酰基苯并(f)喹喔啉(NBQX)(Ferrosan)和6-咪唑基-7-硝基喹喔啉-2，3-(1H，4H)-二酮(YM900)(YamanouchiPharmaceutical Co.，Ltd)。一些衍生物已被报道在Honore等人，Science，241，701-703(1988)； Sheardown等人，Eur，J.pharmacol.，174，197-204(1989)，PCT公开号W092-07847(1992.5.14公开)以及日本公开专利号63-83074，63-258466，1-153680，2-48578，2-221263和2-221264中。
NMDA受体具有通过甘氨酸结合的变构象部位以及识别上述激动剂的部位。已知甘氨酸结合变构象部位可显著地提高NMDA受体的作用。最近几年，可与甘氨酸结合部位结合并使NMDA受体产生变构作用的拮抗剂或调节剂的开发引起了普遍的关注。甘氨酸结合部位的拮抗剂的实例包括5，7-二氯犬尿烯酸HA966(Eur.J.Pharmacol.，151，161-163(1988))。
已经证实上述DNQX和CNQX对NMDA受体的甘氨酸结合部位以及对AMPA受体具有拮抗作用(Birch等人，Eur.J.Pharmacol.，156，177-180(1988)；Drejer等人，Neurosci.Lett.，98，333-338(1989)；Sheardown等人，Science，247，571-574(1990))。也已知二氧代四氢喹啉对甘氨酸结合部位和AMPA受体二者均具有拮抗作用。通常，这些化合物对NMDA受体和AMPA受体之一具有有效的拮抗作用，而不能同时对两种受体具有有效活性(Larsen等人，EXCITATORY AMINO ACID RECEPTORS，第11章，ELLIS HORWOOD出版(1992))。因为这些化合物难以传入脑中所以它们不能作为中枢神经素投入实际使用。
通过保护神经元免于由兴奋性氨基酸引起的死亡或变性而用作上述疾病和病症有效治疗剂的化合物作为拮抗剂需要对NMDA受体和AMPA受体二者均具有有效的作用(Mosinger等人，Exp.Neurol.，113，10-17(1991))。因此要求化合物对NMDA受体和AMPA受体二者均具有显著的拮抗活性。
本发明提供了下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基；R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
在本发明的一个实施方案中，式I中的R1和R3独立地为氢或硝基；R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；n为0-4的整数。
在本发明的另一实施方案中，式I中的R1和R3各自为氢；R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基；R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素和硝基的取代基；n为0-4的整数。
在本发明的另一实施方案中，式I中的n为0。
在本发明的另一实施方案中，式I中的R1、R3和R4独立地为氢；R2为硝基。
本发明的药物组合物包括下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成份 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基； R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
在本发明的一个实施方案中，上述药物组合物用于竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋。
在本发明的另一实施方案中，上述药物组合物对谷氨酸受体具有拮抗活性。
在本发明的另一实施方案中，上述药物组合物用于治疗由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋而造成的神经疾病。
在本发明的另一实施方案中，神经疾病是至少一种选自帕金森神经机能障碍、老年性痴呆、亨廷顿舞蹈病和癫痫。
根据本发明的另一方面，竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋的方法包括体内施用治疗有效量的上述化合物。
因此，本文描述的发明可能具有下列优点(1)提供了对存在于CNS中的NMDA受体的甘氨酸结合部位和AMPA受体具有显著拮抗活性的喹喔啉衍生物；(2)提供了用于竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元过度兴奋的药物组合物；(3)提供了对谷氨酸受体具有拮抗活性的药物组合物；(4)提供了治疗神经疾病的药物组合物，该神经病是由局部缺血或缺氧症诱导的过份兴奋性氨基酸引起神经元过度兴奋所造成的；(5)提供了竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元过度兴奋的方法。
在阅读和理解下面详细描述之后，本发明的这些优点和其他优点对于本领域技术人员将会是显而易见的。
本发明的发明人发现下列氧代吡啶基喹喔啉衍生物对存在于CNS中的NMDA受体的甘氨酸结合部位和AMPA受体都具有拮抗作用。因此，氧代吡啶基喹喔啉衍生物可有效地用于由兴奋性氨基酸引起的神经元过度兴奋造成的上述疾病和病症。
本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物用下式I表示 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基；R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基； R3为氢、硝基或卤素； R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基； R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基；n为0-4的整数(即n＝0、1、2、3或4)。
在本发明的式I中，可被取代的氧代吡啶基可以被引入喹喔啉的6位或7位，特别是就其结构而言，该化合物是新的且具有重要的药理性质。
卤素的实例包括氯、氟、溴和碘。三卤代甲基的实例包括三氟甲基。在本发明书中，低级烷基是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基。低级烷基的实例包括甲基、乙基、丁基和异丙基。低级环烷基是指具有3-6个碳原子的环烷基。低级环烷基的实例包括环丙基和环丁基。
R4表示的取代的低级烷基或环烷基的取代基的实例包括卤素、氨基和羧基。
优选地，R1和R3独立地为氢或硝基；较优选地，R1和R3各自为氢。优选地，R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；较优选地，R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基；最优选地，R2为硝基。优选地，R4为氢或低级烷基；较优选地，R4为氢。优选地，R1、R3和R4各自为氢。
优选地，R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；该优选地，R5为独立地选自卤素和硝基的取代基。
上述n可为0-4的整数。当n为0时，氧代吡啶基上不存在任何R5。另外，上述n可为1、2、3或4的整数，因此，本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物的氧代吡啶基上的(R5)n可为各种取代基的组合，且可存在于选自2位、3位、5位和6位的任一位置。(R5)n的实例包括下列组合当n为4时R5各自为卤素；n为2时，R5各自为卤素且R5存在于3位和5位； n为1时，R5为卤素且存在于3位；n为1时，R5为低级烷基且存在于2位； n为1时，R5为硝基且存在于3位。优选n为0。
在本发明优选的氧代吡啶基喹喔啉衍生物中，R1和R3独立地为氢或硝基；R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R4为氢或低级烷基； R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；n为0-4的整数。
在本发明的较优选的氧代吡啶基喹喔啉衍生物中，R1和R3各自为氢；R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基；R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素和硝基的取代基； n为0-4的整数。在本发明的更优选的氧代吡啶基喹喔啉衍生物中，R1、R3和R4各自独立地为氢；R2为硝基；n为0。
表1列出了本发明化合物的代表性实例。
表<
<p>本发明还包括化合物I的药学上可接受的盐。这些盐的实例包括化合物I与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸形成的盐；化合物I与有机酸如乙酸、酒石酸、富马酸和磺酸形成的盐；化合物I与无机碱如氢氧化钠和氢氧化钾形成的盐；或化合物I与有机碱如三(羟甲基)氨基甲烷和胆碱形成的盐。
取决于化合物I所含有的取代基的同一性，化合物I可以立体异构体和互变异构体形式存在。另外，本发明的化合物I或其盐可以水合物如一水合物和二水合物形式存在。这些水合物也包括在本发明的范围之中。
本发明的化合物可以用下列反应式表示的合成方法1或2制备。
(1)合成方法1 其中X代表卤素；R1、R2、R3、R4和(R5)n定义与式I中的定义相同。
根据该方法，卤代喹喔啉化合物II与4-羟基吡啶化合物III反应。该反应一般在有机溶剂如二甲亚砜、二甲基甲酰胺、乙腈、丙酮和四氢呋喃中，优选在大约80至180℃的温度下进行。为了促进反应可加入各种碱。优选的碱的实例包括氢氧化钠、氢氧化钾和碳酸钾。
(2)合成方法2 其中R1、R2、R3和(R5)n的定义与式I中的定义相同。
根据本方法，氧代吡啶基邻苯二胺衍生物IV与等摩尔或过摩尔量的草酸在室温或高于室温下反应。在该反应中可使用草酸的反应衍生物代替草酸。优选衍生物的实例包括盐、酯、水合物、酐和酰基氯。该反应一般在含水或醇溶剂中进行。为了促进反应可加入各种酸。优选的酸的实例为盐酸。由该反应制得的化合物I′相当于其中R4为氢的本发明式I化合物。
本发明的化合物也可通过将新的取代基引入上述法制得的化合物中或用合适的取代基取代该化合物来制备。例如，通过硝化其中R2为氢的本发明化合物I-1可制得其中R2为硝基的本发明化合物I-2，正如下面反应式所示 其中R1、R3、R4和(R5)n定义与式I中的定义相同。
硝化反应可通过用硝酸或硝酸的一种盐在硫酸或乙酐-乙酸的酸性条件下处理其中R2为氢的本发明化合物I-1来进行。另外，硝化反应可通过将化合物I-1在有机溶剂如四氢噻吩砜中与四氟硼酸硝鎓一起加热来进行。
另外，正如下面反应式所示，通过用氯代磺酸或其盐处理化合物I-3从而引入氯代磺酰基，接着在上述类似的酸性条件下进一步用氨或铵盐处理所得化合物从而引入R2的氨磺酰基，制得本发明化合物。 使用用3H标记的甘氨酸或AMPA进行竞争试验可测定本发明化合物与这些受体结合的能力。另外，用大鼠实验可确证本发明化合物对神经疾病具有保护作用。
用下面描述的体外竞争试验可测定本发明化合与NMDA受体的甘氨酸结合部位结合的能力。
用缓冲液均化大鼠大脑皮质，然后反复离心，再悬浮于缓冲液中制备膜试样。膜试样与含有[3H]甘氨酸和本发明化合物的溶液混合，并在预定时间内培养。然后通过稀释终止混合物的反应，并用滤纸过滤。用液体闪烁计数器测定滤纸的放射性。用1mM非放射性甘氨酸测定非特异性结合计算出IC50。
用下面竞争试验测定本发明化合物对AMPA受体的结合能力。
用缓冲液均化大鼠大脑皮质，然后反复离心，再悬浮于缓冲液中制备膜试样。膜试样与含有[3H]AMPA和本发明化合物的溶液混合，并在预定的时间内培养。然后通过稀释终止混合物的反应，并用滤纸过滤。用液体闪烁计数器测定滤纸的放射性。用1mM非放射性谷氨酸测定非特异性结合计算出IC50。
含有本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物的组合物可用作由兴奋性氨基酸与NMDA受体特别是与甘氨酸结合部位和与AMPA受体结合引起的神经疾病的有效治疗剂。这些组合物可口服或非口服给药于受治疗者。适合于非口服给药的药物组合物形式为注射液或悬浮液，优选水溶液；适合于口服给药的药物组合物形式为片剂和胶囊剂。这些组合物可含有各种浓度的本发明化合物。组合物还可含有药学上可接受的有机或无机赋形剂如盐水、醇类、蓖麻油、明胶、乳糖、淀粉和滑石粉。另外，如果需要的话，组合物还可含有各种辅助物质如润滑剂、稳定剂和乳化剂。
作为治疗剂本发明组合物的剂量依据受治疗者的年龄、体重、病状、治疗效果、给药方法、治疗时间等而变化。本发明组合物可口服或肠胃外特别是静脉内给药于人。对于成年人，按式1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物计量，组合物一般的口服给药剂量为大约1至1000mg/天，优选10至500mg/天，或肠胃外给药剂量为大约1至500mg/天，可按一次至几次分剂量给药或连续给药。
下面将通过具体实施例详细描述本发明。应当注意的是本发明不受下列实施例的限制。
在实施例中，NMR表示核磁共振谱、IR表示红外光谱。
参考实施例1-6表示本发明实施例中用作起始原料的化合物的制备实施例。
参考实施例1 2-硝基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺首先将8.628g 5-氯-2-硝基苯胺、7.161g4-羟基吡啶和4.892g粉状氢氧化钾加到60ml无水二甲亚砜中。然后将所得混合物在氮气氛130℃下搅拌3小时。接着将200ml冰水加到反应混合物中，用4N盐酸中和。将所得溶液搅拌30分钟得到沉淀。滤出沉淀并用水洗涤。将沉淀进行硅胶柱色谱纯化，收集含20％甲醇的二氯甲烷洗脱的馏分。合并收集的馏分并蒸发。将残余物在甲醇中重结晶得到11.868g黄橙色晶体的2-硝基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺。熔点298-303℃元素分析 C11H9N3O3·1/5H2O)计算值C，56.27；H，4.03；N，17.90(％)测定值C，56.21；H，4.01；N，17.79(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.26(2H，d，J＝7.8Hz)，6.81(1H，dd，J＝9.4，2.8Hz)，7.08(1H，d，J＝2.8Hz)，7.61(2H，br.s)，7.99(2H，d，J＝7.8Hz)，8.12(1H，d，J＝9.4Hz).4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将5.5159 2-硝基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺加到含有7.975g铁粉、20ml水和78ml乙醇的悬浮液中，接着加入2ml 2N盐酸。将所得混合物加热回流6小时。然后将1.092g铁粉和2ml 2N盐酸加到混合物中。接着将所得混合物再回流1小时。反应后，用硅藻土热过滤反应混合物，并用温热的乙醇充分洗涤硅藻土上的残余物。合并母液和洗涤液并浓缩至干。然后将所得的残余物进行硅胶柱色谱纯化，收集用含5％甲醇的氯仿洗脱的馏分。合并收集的馏分并蒸发。用异丙醇-甲醇(1∶1)重结晶残余物得到4.137g橙色晶体的4-(4-氯代-4H-吡啶-l-基)-1，2-苯二胺。熔点257-259.5℃元素分析 C11H11N3O)计算值: C，65.66；H，5.51；N，20.88(％)测定值C，65.51；H，5.58；N，20.63(％)H1-NMR(d6-DMSO)64.76(2H，br.s)，4.85(2H，br.s)，6.15(2H，d，J＝7.6Hz)，6.46(1H，dd，J＝8.2，2.4Hz)，6.57(2H，m)，7.75(2H，d，J＝7.6Hz).
参考实施例2 2-硝基-4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺按照参考实施例1的同样方法，首先将3.811g 2-硝基-4-氟-5-氯苯胺、2.473g 4-羟基吡啶和1.827g粉状氢氧化钾在氮气氛中在130℃下反应3小时，得到1.125g 2-硝基-4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺。熔点＞305℃(分解)元素分析( C11H8N3O3F)计算值atedC，53.02；H，3.24；N，16.86；F，7.62(％)测定值C，52.63；H，3.46；N，16.64；F，7.44(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.27(2H，d，J＝7.8Hz)，7.18(1H，d，JFH＝7.0Hz)，7.57(2H，br.s)，7.87(2H，d，J＝7.8Hz)，8.07(1H，d，JFH＝11.2Hz).
4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将1.065g 2-硝基-4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺通过加热溶于45ml二甲基甲酰胺中，在大气压下用195mg 10％钯/炭催化剂还原。反应后，用硅藻土过滤反应混合物除去催化剂，将所得母液浓缩至于。然后将所得残余物用30g硅胶进行柱色谱纯化，收集用二氯甲烷-甲醇(20∶1)溶液洗脱的馏分。合并收集的馏分并蒸发。用乙醇重结晶残余物得到802mg 4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺。熔点227-229.5℃元素分析(C11H10N3OF)计算值C，60.27；H，4.60；N，19.17；F，8.67(％)测定值C，60.38；H，4.76；N，19.01；F，8.62(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.24(2H，d，J＝7.8Hz)，6.50(1H，d，JFH＝12.6Hz)，6.58(1H，d，JFH＝7.8Hz)，7.70(2H，d，J＝7.8Hz).
参考实施例3 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺首先将含有14.3g 3，4-二氯-6-硝基苯胺、9.01g 4-羟基吡啶、5.87g 86％氢氧化钾和70ml二甲亚砜的混合物在油浴中于130℃加热3.5小时，冷却。在混合物中加入冰水，滤出沉淀的结晶，然后把16.9g产品粗结晶加到含100g硅胶的柱上，用含10％甲醇的氯仿洗脱。洗脱液合并和蒸发，过滤残余物得到9.78g 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺的粗结晶(熔点288-291℃(分解))。之后将300mg粗结晶用甲醇重结晶得到268mg 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺晶体。
熔点290-293℃(分解)元素分析( C11H8N3O3Cl)计算值C，49.73；H，3.04；N，15.82；Cl，13.35(％)测定值C，49.52；H，3.20；N，15.66；Cl，13.08(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.22(2H，dd，J＝6Hz，J＝2Hz)，7.19(1H，s)，7.73(2H，br.s)，7.78(2H，dd，J＝6Hz，J＝2Hz)，8.23(1H，s).
4-氯-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将含有3.0g 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺、3.78g铁粉、10ml水、90ml乙醇和1.15ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流3小时，然后在混合物中加入135ml乙醇，用Hyflo Super-Cel(商标名称)过滤不溶物，去除溶剂。把粗结晶用含30g硅胶的柱处理，用含20％甲醇的氯仿洗脱，合并和蒸发洗脱液。残余物用甲醇/异丙醇重结晶得到2.04g 4-氯-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺。
熔点260-261°(分解)元素分析(C11H10N3OCl)计算值latedC，56.06；H，4.28；N，17.83；Cl，15.05(％)测定值C，56.05；H，4.30；N，17.75；Cl，15.17(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ4.97(2H，s)，5.12(2H，s)，6.12(2H，d，J＝8Hz)，6.58(1H，s)，6.64(1H，s)，7.57(2H，d，J＝8Hz).参考实施例4 4-氰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺首先将含有1.0g 3-氯-4-氰基-6-硝基苯胺、507mg 4-羟基吡啶、330mg 86％的氢氧化钾和5ml二甲亚砜的混合物在油浴中于110℃加热3小时。按参考实施例3的相同方法进行后续步骤得到836mg 4-氰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺晶体。
熔点354-357℃(分解)元素分析(C12H5N4O3)计算值C，56.25；H，3.15；N，21.87(％)测定值C，56.25；H，3.27；N，21.83(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.28(2H，d，J＝8Hz)，7.13(1H，s)，7.92(2H，d，J＝8Hz)，8.24(2H，br.s)，8.68(1H，s).
4-氰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将含有490mg 4-氰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺、642mg铁粉、4ml水、16ml乙醇和0.2ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热1小时。随后的步骤按参考实施例3相同的方法进行得到粗晶体，然后把405mg粗晶体用甲醇/异丙醇重结晶得到274mg4-氰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺。
熔点321-323℃(分解)元素分析( C12H10N4O)计算值C，63.70；H，4.46；N，24.77(％)测定值C，63.57；H，4.59；N，24.41(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ5.21(2H，s)，5.90(2H，s)，6.17(2H，d，J＝8Hz)，6.59(1H，s)，6.82(1H，s)，7.73(2H，d，J＝8Hz).
参考实施例5 4-二甲基氨磺酰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺先把含有3.0g 3-氯-4-二甲基氨磺酰基-6-硝基苯胺、1.39g 4-羟基吡啶、0.91g 86％氢氧化钾和20ml二甲亚砜的混合物在油浴中于130℃加热1.5小时，随后的步骤按参考实施例3相同的方法进行得到1.675g 4-二甲基氨磺酰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺。
熔点344-347℃(分解)元素分析( C13H14N4O5S)计算值C，46.15；H，4.17；N，16.56；S，9.48(％)测定值C，46.11；H，4.22；N，16.36；S，9.37(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ2.56(6H，s)，6.16(2H，d，J＝8Hz)，7.09(1H，s)，7.71(2H，d，J＝8Hz)，8.25(2H，br.s)，8.51(1H，s).
4-二甲基氨磺酰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺先把含有1.50g 4-二甲基氨磺酰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺、1.49g铁粉、9ml水、36ml乙醇和0.45ml 2N盐酸的混合物在油浴中回流加热45分钟。随后的步骤按参考实施例3相同的方法进行得到粗结晶，把粗晶体用甲醇/异丙醇重结晶得到1.30g 4-二甲基氨磺酰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺晶体。
熔点334-336℃(分解)元素分析( C13H16N4O3S)计算值C，50.63；H，5.23；N，18.17；S，10.40(％)测定值C，50.43；H，5.28；N，18.16；S，10.58(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ2.51(6H，s)，5.21(2H，s)，5.90(2H，s)，6.17(2H，d，J＝8Hz)，6.59(1H，s)，6.82(1H，s)，7.73(2H，d，J＝8Hz).
参考实施例6 4-氨基-5-硝基-2-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-三氟甲苯先把含有2.40g 4-氨基-2-氯-5-硝基三氟甲苯、2.0g 4-羟基吡啶、684mg 86％氢氧化钾和15ml二甲亚砜的混合物在油浴中于70℃加热2小时，冷却混合物并向其中加入冰水。滤出沉淀的粗结晶并用甲醇/乙醇乙酯重结晶给出2.69g 4-氨基-5-硝基-2-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-三氟甲苯晶体。
熔点274-275℃元素分析( C12H8N3O3F3)计算值tedC，48.17；H，2.70；N，14.04；F，19.05(％)测定值C，48.12；H，2.78；N，13.98；F，19.11(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.19(2H，d，J＝8Hz)，7.17(1H，s)，7.74(2H，d，J＝8Hz)，8.17(2H，br.s)，8.38(1H，s).
4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-5-三氟甲基-1，2-苯二胺首先把含有2.56g 4-氨基-5-硝基-2-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)三氟甲苯，2.87g铁粉、14.4ml水、57.6ml乙醇和0.86ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流45分钟，按参考实施例3同样的方法进行后续步骤得到1.73g 4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-5-三氟甲基-1，2-苯二胺。
熔点264-266℃(分解)元素分析(C12H10N3OF3)计算值C，53.53；H，3.74；N，15.61；F，21.17(％)测定值C，53.55；H，3.87；N，15.52；F，21.30(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ5.23(2H，br.s)，5.53(2H，br.s)，7.57(2H，d，J＝8Hz)，6.09(2H，d，J＝8Hz)，6.54(1H，s)，6.86(1H，s).
实施例1 6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先将9.007g 7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、7.611g 4-羟基吡啶和5.219g粉状氢氧化钾加入120ml无水二甲亚砜中，混合物在氮气氛中于130℃搅拌2小时。然后，在反应混合物中加入50ml冰水和30ml 4N盐酸，以使混合物呈弱酸性(PH3-4)。滤出形成的黄色沉淀并用水洗涤，使沉淀物在560ml水和56ml浓氨水的混合物中加热溶解。在得到的混合物中加入1g活性炭，搅拌、过滤，滤液用浓盐酸中和，用冰冷却。然后将沉淀的晶体滤出并依次用水、甲醇和乙醇洗涤，干燥所得晶体得到7.56g6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮(下文中缩写为Ia)。
熔点＞300℃元素分析( C13H8N4O5)计算值C，52.01；H，2.69；N，18.66(％)测定值C，51.83；H，2.89；N，18.69(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.22(2H，d，J＝7.4Hz)，7.21(1H，s)，7.78(2H，d，J＝7.4Hz)，8.00(1H，s)IR(石腊)3080，2920，2580，1730，1695，1635，1595cm-1.
化合物Ia的硫酸盐熔点＞300℃元素分析(C13H8N4O5·1/2H2SO4·H2O)计算值C，42.51；H，3.02；N，15.25；S，4.36(％)测定值C，42.27；H，3.10；N，15.65；S，4.36(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.81(2H，d，J＝7.6Hz)，7.33(1H，s)，8.05(1H，s)，8.30(2H，d，J＝7.4Hz).
化合物Ia的胆碱盐制备如下先把2.70g(9.0mmol)6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮加入30ml丙酮并搅拌，然后把2.25ml(10.0mmol，1.1当量)50％胆碱氢氧化物水溶液加入到混合物中，搅拌。把混合物静置1.5小时，滤出形成的沉淀并用丙酮洗涤。把得到的橙红色沉淀加热溶解于200ml乙醇，溶液用活性炭处理，过滤。将滤液浓缩至原始体积的四分之三，使之冷却，滤出沉淀的晶体，得到3.58g胆碱盐的结晶，产率88.9％。
熔点230-233℃元素分析( C13H7N4O5·C5H14NO·2.5H2O)计算值tedC，48.21；H，5.84；N，15.62；H2O，10.04(％)测定值C，48.40；H，5.80；N，15.86；H2O，10.20(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ3.11(9H，s)，3.41(2H，t，J＝4.6Hz)，3.85(2H，m)，6.14(2H，d，J＝7.4Hz)，6.87(1H，s)，7.71(2H，d，J＝7.8Hz)，7.82(1H，s).
实施例2 6-硝基-7-(3-氯-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把267mg7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、171mg 3-氯-4-羟基吡啶和92mg粉状氢氧化钾加入3ml干燥二甲亚砜中，使混合物在氮气氛中于130℃反应80分钟。然后在反应混合物中加入冰水和4N盐酸调整pH值至大约为2。滤出得到的黄色沉淀物并将其用水洗涤，沉淀物用二甲基甲酰胺和水的混合物重结晶得到376mg黄白色的6-硝基-7-(3-氯-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 (C13H7N4O5Cl.C3H7NO.H2O)计算值tedC，45.13；H，3.79；N，16.45；Cl，8.33(％)测定值C，45.14；H，3.46；N，16.33；Cl，8.57(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.38(1H，d，J＝7.8Hz)，7.27(1H，s)，7.86(1H，dd，J＝7.8，2.4Hz)，8.02(1H，s)，8.42(1H，d，J＝2.4Hz)，12.43(2H，br.s).
实施例3 6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把677mg 7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、840mg 4-羟基-3-硝基吡啶和403mg粉状氢氧化钾加入到6ml干燥二甲亚砜中，使混合物在氮气氛中于130℃反应2小时。按实施例2同样的方法进行后续步骤，得到的沉淀物用二甲基甲酰胺(dimethylformaldehyde)和水的混合物重结晶，得到672mg 6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮的红色晶体。
熔点＞300℃元素分析(C13H7N5O7)计算值C，45.23；H，2.04；N，20.29(％)测定值C，45.25；H，2.82；N，20.20(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.62(1H，d，J＝7.8Hz)，7.40(1H，s)，7.96(1H，dd，J＝7.8，2.0Hz)，8.06(1H，s)，9.11(1H，d，J＝2.0Hz).
实施例4 6-硝基-7-(3，5-二氯-4-(氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把1.129g7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、1.648g3，5-二氯-4-羟基吡啶和672mg粉状氢氧化钾加入10ml无水二甲亚砜中，使混合物在氮气氛中于130℃反应3小时，按实施例2同样的方法进行后续步骤。把得到的沉淀物在二甲基甲酰胺中加热溶解，用活性炭脱色并过滤。加入等量的水，把溶液静置过夜得到1.473g6-硝基-7-(3，5-二氯-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析(C13H6N4O5Cl2·1/2H2O)计算值C，41.29；H，1.87；N，14.82；Cl，18.75(％)测定值C，41.47；H，1.84；N，15.08；Cl，19.01(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ7.39(1H，s)，8.06(1H，s)，8.55(2H，s).
实施例5 6-氟-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，把4.266g 4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺和1.927g草酸加入48ml 4N盐酸中，将混合物加热回流2.5小时。反应完以后，将沉淀的晶体滤出，用水洗涤并且干燥给出3.920g6-氟-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析(C13H8N3O3F·0.2H2O)计算值C，56.40；H，3.06；N，15.18；F，6.86(％)测定值C，56.21；H，3.19；N，15.24；F，6.93(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.23(2H，d，J＝7.8Hz)，7.13(1H，d，JFH＝16Hz)，7.17(1H，d，JFH＝12.6Hz)，7.80(1H，d，J＝6.4Hz)，12.09(1H，br.s)，12.15(1H，br.s).
实施例6 6-氯-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把含有1.93g 4-氯-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺、2.21g草酸和40ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流2小时。冷却混合物，滤出得到的晶体给出2.1g 6-氯-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮晶体(熔点＞400℃)。然后，将500mg粗晶体用二甲基甲酰胺和水重结晶得到299mg 6-氯-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点420-445℃(分解)元素分析( C13H8N3O3Cl·1/4H2O)计算值C，53.07； H，2.91；N，14.28；Cl，12.05(％)测定值C，53.09；H，2.83；N，14.24； Cl，12.36(％)H1-NMR(D2O-HNO3)δ7.46(2H，d，J＝8Hz)，7.57(1H，s)，7.59(1H，s)，8.57(2H，d，J＝8Hz).
实施例7 6-氰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把246mg 4-氰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺、294mg草酸和5ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热2小时，冷却混合物，滤出沉淀的晶体。然后把这样得到的284mg粗结晶用2N盐酸再重结晶得到201mg 6-氰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点410-415℃(分解)元素分析( C14H8N4O3·3/4H2O)计算值tedC，57.23；H，3.26；N，19.07(％)测定值C，57.54；H，3.33；N，19.10；(％)H1-NMR(D2O-HNO3)δ7.50(2H，d，J＝8Hz)，7.68(1H，s)，7.88(1H，s)，8.72(2H，d，J＝8Hz).
实施例8 6-二甲基氨磺酰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把含有500mg 4-二甲基氨磺酰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺、438mg草酸和10ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流3小时，冷却混合物并用氨水调至碱性，滤出沉淀的晶体。然后把得到的534mg粗晶体再用二甲基甲酰胺和水重结晶，得到201mg 6-二甲基氨磺酰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点400-405℃(分解)元素分析 ( C15H14N4O5S.1/4H2O)计算值C，49.11；H，3.98；N，15.27；S，8.74(％)测定值C，49.22；H，4.10；N，15.37；S，8.72(％)H1-NMR(D2O-HNO3)δ2.17(6H，s)，6.91(2H，d，J＝7Hz)，7.13(1H，s)，7.37(1H，s)，8.10(2H，d，J＝7Hz).
实施例9 6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把1.244g 7-氟-6-硝基-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、952mg 4-羟基吡啶和711mg粉状氢氧化钾加入10ml干燥的二甲亚砜中，将混合物在氮气氛中于130℃搅拌3.5小时。然后在反应混合物中加入50ml水，加入4N盐酸使之呈酸性(PH2-3)以产生黄色沉淀。把沉淀物滤出并用二甲基甲酰胺重结晶得到1.08g6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 (C16H14N4O5·0.2H2O)计算值C，55.56；H，4.20；N，16.20(％)测定值C，55.63；H，4.29；N，16.37(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ0.94(3H，t，J＝7.2Hz)，1.65(2H，m)，4.10(2H，m)，6.21(2H，d，J＝7.6Hz)，7.77(2H，d，J＝7.6Hz)，7.86(1H，s)，8.02(1H，s).
实施例10 6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，按与实施例9相同的方法使无水二甲亚砜中的803mg 7-氟-6-硝基-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、700mg3-硝基-4-羟基吡啶和365mg氢氧化钾于130℃反应4.5小时，得到1.059g6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-(正丙基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 (C16H13N5O7·0.3H2O)计算值C，48.94；H，3.49；N，17.83(％)测定值C，49.02；H，3.68；N，17.92(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ0.94(3H，t，J＝7.4Hz)，1.66(2H，m)，4.06(2H，m)，6.64(1H，d，J＝7.8Hz)，7.98(1H，m)，8.00(1H，s)，8.10(1H，s)，9.12(1H，d，J＝1.8Hz)，12.46(1H，br.s).
实施例11 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把4.849g 4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺和2.402g草酸加入60ml 4N盐酸中，混合物在氮气氛中加热回流2.5小时，待混合物冷却后，滤出沉淀的晶体并用二甲基甲酰胺重结晶给出4.786g 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析al-analysis(analyzed as C13H9N3O3)计算值tedC，61.18；H，3.55；N，16.46(％)测定值C，60.94；H，3.62；N，16.37(％).
6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，在冰冷却下把510mg 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮加入到5ml浓硫酸中并使之溶解，然后在生成的溶液中加入253mg硝酸钾，混合物边搅拌边在60℃加热3小时。然后，在混合物中加入20ml冰水，并用4N氢氧化钠溶液调节溶液的PH值至5，滤出沉淀的黄色晶体。把得到的晶体滤出并干燥给出426mg 6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮熔点＞300℃H1-NMR(d6-DMSO)δ6.20(2H，d，J＝7.8Hz)，7.20(1H，s)，7.76(2H，d，J＝7.8Hz)，7.99(1H，s).
1H-NMR和HPLC证实化合物6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮和实施1得到的化合物Ia是同一种物质。
实施例12 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-7-三氟甲基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，将含有300mg 4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-5-三氟甲基-1，2-苯二胺、301mg草酸和6ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流7小时，冷却混合物，滤出沉淀的晶体。然后把得到的粗制晶体用二甲基甲酰胺和水的混合物重结晶得到216mg 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-7-三氟甲基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点410-420℃元素分析al-analysis(analyzed-as C14H8N3O3F3·1/4H2O)计算值tedC，51.31；H，2.61；N，12.82；F，17.39(％)测定值C，51.36；H，2.87；N，13.04；F，17.11(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.18(2H，d，J＝8Hz)，7.22(1H，s)，7.55(1H，s)，7.70(2H，d，J＝8Hz)，12.33(2H，br)实施例13 6-硝基-7-(3-氟-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，将127mg 7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、96mg 3-氟-4-羟基吡啶和55mg粉状氢氧化钾加入12ml二甲亚砜中，混合物在氮气氛中于130℃搅拌3小时。然后，在反应混合物中加入冰水，并用2N盐酸中和，滤出和洗涤得到的沉淀物。把沉淀物溶于3ml 1N氢氧化钠，溶液用活性炭处理，过滤，滤液用浓盐酸中和，滤出并干燥沉淀的晶体得到147mg 6-硝基-7-(3-氟-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 ( C13H7N4O5F·0.3H2O)计算值C，48.25；H，2.37；N，17.31；F，5.87(％)测定值C，48.09；H，2.61；N，17.49；F，6.27(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.46(1H，dd，J＝9.0，7.4Hz)，7.28(1H，s)，7.85(1H，dd，J＝7.6，2.0Hz)，8.08(1H，s)，8.37(1H，dd，J＝7.8，2.0Hz).
试验实施例16-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮(Ia)对NMDA受体的甘氨酸结合部位的竞争性结合试验首先，把Slc-Wistar大鼠(体重为250-300g)的大脑皮质在20倍体积的5mM Tris(三羟甲基氨基甲烷)乙酸盐缓冲液(含1mM EGTA、0.1mM PMSF和0.01％肝菌肽，PH7.4)中均化，上述大脑皮质以50,000xg的速度离心30分钟并且再悬浮于缓冲液中，将此步骤重复4次，最终的悬浮液贮存于-80℃。把冷冻的悬浮液在室温下融化，用0.08％Triton X-100溶液在2℃培养10分钟，然后把得到的悬浮液洗涤二次并悬浮于50mM Tris-乙酸盐缓冲溶液(PH7.4)得到膜样品。把膜样品与100nM[3H]甘氨酸和实施例1得到的化合物Ia的一系列不同浓度的溶液混合，将该混合物于0℃下培养10分钟。将每种混合物稀释，用Whatman GF/C滤纸过滤以终止反应，用液体闪烁计数器测量留存于滤纸上的3H的放射性。非特异性结合试验用1mM无放射性甘氨酸进行以测定IC50值。测定化合物Ia的IC50值，用上文所述相同的方法以YM900(WO92/07847实施例15的化合物)作为对照测定。结果列于表2。
表2
a)使用[3H]甘氨酸。
化合物Ia显示出的拮抗效果大的是YM900的10倍。
试验实施例26-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮(Ia)对AMPA受体的竞争性结合试验首先，将Slc-Wistar大鼠(体重250-300g)的大脑皮质在10倍体积的30mM Tris乙酸盐缓冲溶液(含有2.5mM CaCl2，PH7.1)中均化，将上述大脑皮质以30,000xg的速度离心15分钟，并再悬浮于缓冲溶液中，将此步骤重复3次，最终的悬浮液贮存于-80℃。把冷冻的悬浮液在室温下融化并悬浮于30mM Tris-乙酸盐缓冲液(含2.5mM CaCl2和100mM KSCN，PH7.1)中得到膜样品。把上述膜样品与30nM[3H]AMPA以及一系列不同浓度的化合物Ia溶液混合，将这些混合物于0℃培养30分钟。把各个混合物稀释并用WhatmanGF/C滤纸过滤以终止反应，用液体闪烁计数器测量留于滤纸上的3H放射性。非特异性结合试验用1mM无放射性谷氨酸进行以测定IC50值。化合物Ia的IC50值是以YM900为对照，用上述同样的方法测定的。结果列于表3。
表3
a)使用[3H]AMPA
本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物是新化合物，对中枢神经元的NMDA受体和AMPA受体显示出显著的拮抗作用。本发明化合物对由兴奋性氨基酸引起的神经系统疾病是有效的治疗剂，因为它们能抑制兴奋性氨基酸与NMDA受体或AMPA受体的结合。
很显然，会有各种其它的改进形式，这对本领域熟练技术人员而言是很容易作到的，这些并没有离开本发明的范围和其精髓。因此，不能把要求保护的权利要求的范围限制在这里所公布的说明书，而应对权利要求有宽范围的解释。
权利要求
1.下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基；R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
2.根据权利要求1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1和R3独立地为氢或硝基；R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R4为氢或低级烷基； R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；n为0-4的整数。
3.根据权利要求1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1和R3各自为氢；R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基； R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素和硝基的取代基；n为0-4的整数。
4.根据权利要求1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中n为0。
5.根据权利要求4的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1、R3和R4各自为氢；R2为硝基。
6.一种药物组合物，它包括下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成份 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基，R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
7.根据权利要求6的药物组合物，该组合物用于竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋。
8.根据权利要求6的药物组合物，该组合物对谷氨酸受体具有拮抗活性。
9.根据权利要求6的药物组合物，该组合物用于治疗由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋而造成的神经疾病。
10.根据权利要求9的药物组合物，其中神经疾病是至少一种选自帕金森神经机能障碍、老年性痴呆、亨廷顿舞蹈病和癫痫。
11.一种竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋的方法，包括体内施用治疗有效量的权利要求1的化合物。
全文摘要
下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐式I中的各基团的定义参见说明书。这些衍生物可作为对NMDA受体和AMPA受体二者的拮抗剂，因此它们可作为由结合受体的兴奋性氨基酸引起的神经疾病的有效治疗剂。
文档编号C07D401/04GK1123792SQ9510515
公开日1996年6月5日 申请日期1995年4月8日 优先权日1994年4月8日
发明者高田进, 长命信雄, 足立诚, 永业正美, 川崎和夫 申请人:盐野义制药株式会社
技术领域：
本发明涉及对中枢神经元谷氨酸受体特别是NMDA受体和AMPA受体具有拮抗作用的氧代吡啶基喹喔啉衍生物。
氨基酸如L-谷氨酸和L-天冬氨酸是激活中枢神经系统(CNS)中的神经元必不可少的神经递质，然而在神经元周围这些兴奋性氨基酸的过分累积被认为会诱导神经元的过度兴奋，从而引起神经疾病如帕金森神经机能障碍、老年性痴呆、亨廷顿舞蹈病和癫痫，以及局部缺血之后产生的精神迟钝和少动症、缺氧症、低血糖或头和脊髓创伤(参见Mc Geer等人，Nature，263，517-519(1976)；Simon等人，Science，226，850-852(1984)；Wieloch，Science，230，681-683(1985)；Faden等人，Science，244，798-800(1989)；Turski等人，Nature，349，414-418(1991))。
已知上述兴奋性氨基酸通过神经元上的谷氨酸受体作用于CNS.因此，竞争性地抑制兴奋性氨基酸与这些受体结合的化合物被认为可有效地用作上述疾病和病症的治疗剂如抗癫痫剂、局部缺血脑病预防剂、和抗帕金森神经机能障碍剂。日本公开专利号6-25294，6-239747和6-228112(Yamanouchi Pharmaceutical CO.，Ltd).Wo93/8173(SCHERING)、EP5725852A1(BASF)等报道了谷氨酸受体产生的重要作用。
谷氨酸受体分为两类，即离子通道型和代谢型。根据其对于激动剂结合的选择性，离子通道型又可分为三类，称为N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、2-氨基-3-(3-羟基-5-甲基异噁唑-4-基)丙酸(AMPA)受体和红藻氨酸受体。
NMDA受体可被激动剂如NMDA和鹅膏蕈氨酸选择性地激活。NMDA受体的过度兴奋使大量钙离子流入神经元。这被认为是神经元死亡的原因之一。到目前为止。已知D-2-氨基-5-磷酸戊酸酯(D-AP5)和3-[2-羧基哌嗪-4-基]丙基-1-磷酸酯(CPP)等可作为选择性结合NMDA受体的拮抗剂。
AMPA受体可被激动剂如AMPA、谷氨酸和使君子氨酸选择性地激活。已经研制出各种喹喔啉衍生物作为AMPA受体的拮抗剂。这些衍生物的实例包括6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(DNQX)(Ferrosan)，6-氰基-7-硝基喹喔啉-2，3-二酮(CNQX)，2，3-二羟基-6-硝基-7-氨磺酰基苯并(f)喹喔啉(NBQX)(Ferrosan)和6-咪唑基-7-硝基喹喔啉-2，3-(1H，4H)-二酮(YM900)(YamanouchiPharmaceutical Co.，Ltd)。一些衍生物已被报道在Honore等人，Science，241，701-703(1988)； Sheardown等人，Eur，J.pharmacol.，174，197-204(1989)，PCT公开号W092-07847(1992.5.14公开)以及日本公开专利号63-83074，63-258466，1-153680，2-48578，2-221263和2-221264中。
NMDA受体具有通过甘氨酸结合的变构象部位以及识别上述激动剂的部位。已知甘氨酸结合变构象部位可显著地提高NMDA受体的作用。最近几年，可与甘氨酸结合部位结合并使NMDA受体产生变构作用的拮抗剂或调节剂的开发引起了普遍的关注。甘氨酸结合部位的拮抗剂的实例包括5，7-二氯犬尿烯酸HA966(Eur.J.Pharmacol.，151，161-163(1988))。
已经证实上述DNQX和CNQX对NMDA受体的甘氨酸结合部位以及对AMPA受体具有拮抗作用(Birch等人，Eur.J.Pharmacol.，156，177-180(1988)；Drejer等人，Neurosci.Lett.，98，333-338(1989)；Sheardown等人，Science，247，571-574(1990))。也已知二氧代四氢喹啉对甘氨酸结合部位和AMPA受体二者均具有拮抗作用。通常，这些化合物对NMDA受体和AMPA受体之一具有有效的拮抗作用，而不能同时对两种受体具有有效活性(Larsen等人，EXCITATORY AMINO ACID RECEPTORS，第11章，ELLIS HORWOOD出版(1992))。因为这些化合物难以传入脑中所以它们不能作为中枢神经素投入实际使用。
通过保护神经元免于由兴奋性氨基酸引起的死亡或变性而用作上述疾病和病症有效治疗剂的化合物作为拮抗剂需要对NMDA受体和AMPA受体二者均具有有效的作用(Mosinger等人，Exp.Neurol.，113，10-17(1991))。因此要求化合物对NMDA受体和AMPA受体二者均具有显著的拮抗活性。
本发明提供了下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基；R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
在本发明的一个实施方案中，式I中的R1和R3独立地为氢或硝基；R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；n为0-4的整数。
在本发明的另一实施方案中，式I中的R1和R3各自为氢；R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基；R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素和硝基的取代基；n为0-4的整数。
在本发明的另一实施方案中，式I中的n为0。
在本发明的另一实施方案中，式I中的R1、R3和R4独立地为氢；R2为硝基。
本发明的药物组合物包括下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成份 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基； R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
在本发明的一个实施方案中，上述药物组合物用于竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋。
在本发明的另一实施方案中，上述药物组合物对谷氨酸受体具有拮抗活性。
在本发明的另一实施方案中，上述药物组合物用于治疗由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋而造成的神经疾病。
在本发明的另一实施方案中，神经疾病是至少一种选自帕金森神经机能障碍、老年性痴呆、亨廷顿舞蹈病和癫痫。
根据本发明的另一方面，竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋的方法包括体内施用治疗有效量的上述化合物。
因此，本文描述的发明可能具有下列优点(1)提供了对存在于CNS中的NMDA受体的甘氨酸结合部位和AMPA受体具有显著拮抗活性的喹喔啉衍生物；(2)提供了用于竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元过度兴奋的药物组合物；(3)提供了对谷氨酸受体具有拮抗活性的药物组合物；(4)提供了治疗神经疾病的药物组合物，该神经病是由局部缺血或缺氧症诱导的过份兴奋性氨基酸引起神经元过度兴奋所造成的；(5)提供了竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元过度兴奋的方法。
在阅读和理解下面详细描述之后，本发明的这些优点和其他优点对于本领域技术人员将会是显而易见的。
本发明的发明人发现下列氧代吡啶基喹喔啉衍生物对存在于CNS中的NMDA受体的甘氨酸结合部位和AMPA受体都具有拮抗作用。因此，氧代吡啶基喹喔啉衍生物可有效地用于由兴奋性氨基酸引起的神经元过度兴奋造成的上述疾病和病症。
本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物用下式I表示 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基；R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基； R3为氢、硝基或卤素； R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基； R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基；n为0-4的整数(即n＝0、1、2、3或4)。
在本发明的式I中，可被取代的氧代吡啶基可以被引入喹喔啉的6位或7位，特别是就其结构而言，该化合物是新的且具有重要的药理性质。
卤素的实例包括氯、氟、溴和碘。三卤代甲基的实例包括三氟甲基。在本发明书中，低级烷基是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基。低级烷基的实例包括甲基、乙基、丁基和异丙基。低级环烷基是指具有3-6个碳原子的环烷基。低级环烷基的实例包括环丙基和环丁基。
R4表示的取代的低级烷基或环烷基的取代基的实例包括卤素、氨基和羧基。
优选地，R1和R3独立地为氢或硝基；较优选地，R1和R3各自为氢。优选地，R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；较优选地，R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基；最优选地，R2为硝基。优选地，R4为氢或低级烷基；较优选地，R4为氢。优选地，R1、R3和R4各自为氢。
优选地，R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；该优选地，R5为独立地选自卤素和硝基的取代基。
上述n可为0-4的整数。当n为0时，氧代吡啶基上不存在任何R5。另外，上述n可为1、2、3或4的整数，因此，本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物的氧代吡啶基上的(R5)n可为各种取代基的组合，且可存在于选自2位、3位、5位和6位的任一位置。(R5)n的实例包括下列组合当n为4时R5各自为卤素；n为2时，R5各自为卤素且R5存在于3位和5位； n为1时，R5为卤素且存在于3位；n为1时，R5为低级烷基且存在于2位； n为1时，R5为硝基且存在于3位。优选n为0。
在本发明优选的氧代吡啶基喹喔啉衍生物中，R1和R3独立地为氢或硝基；R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R4为氢或低级烷基； R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；n为0-4的整数。
在本发明的较优选的氧代吡啶基喹喔啉衍生物中，R1和R3各自为氢；R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基；R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素和硝基的取代基； n为0-4的整数。在本发明的更优选的氧代吡啶基喹喔啉衍生物中，R1、R3和R4各自独立地为氢；R2为硝基；n为0。
表1列出了本发明化合物的代表性实例。
表<
<p>本发明还包括化合物I的药学上可接受的盐。这些盐的实例包括化合物I与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸形成的盐；化合物I与有机酸如乙酸、酒石酸、富马酸和磺酸形成的盐；化合物I与无机碱如氢氧化钠和氢氧化钾形成的盐；或化合物I与有机碱如三(羟甲基)氨基甲烷和胆碱形成的盐。
取决于化合物I所含有的取代基的同一性，化合物I可以立体异构体和互变异构体形式存在。另外，本发明的化合物I或其盐可以水合物如一水合物和二水合物形式存在。这些水合物也包括在本发明的范围之中。
本发明的化合物可以用下列反应式表示的合成方法1或2制备。
(1)合成方法1 其中X代表卤素；R1、R2、R3、R4和(R5)n定义与式I中的定义相同。
根据该方法，卤代喹喔啉化合物II与4-羟基吡啶化合物III反应。该反应一般在有机溶剂如二甲亚砜、二甲基甲酰胺、乙腈、丙酮和四氢呋喃中，优选在大约80至180℃的温度下进行。为了促进反应可加入各种碱。优选的碱的实例包括氢氧化钠、氢氧化钾和碳酸钾。
(2)合成方法2 其中R1、R2、R3和(R5)n的定义与式I中的定义相同。
根据本方法，氧代吡啶基邻苯二胺衍生物IV与等摩尔或过摩尔量的草酸在室温或高于室温下反应。在该反应中可使用草酸的反应衍生物代替草酸。优选衍生物的实例包括盐、酯、水合物、酐和酰基氯。该反应一般在含水或醇溶剂中进行。为了促进反应可加入各种酸。优选的酸的实例为盐酸。由该反应制得的化合物I′相当于其中R4为氢的本发明式I化合物。
本发明的化合物也可通过将新的取代基引入上述法制得的化合物中或用合适的取代基取代该化合物来制备。例如，通过硝化其中R2为氢的本发明化合物I-1可制得其中R2为硝基的本发明化合物I-2，正如下面反应式所示 其中R1、R3、R4和(R5)n定义与式I中的定义相同。
硝化反应可通过用硝酸或硝酸的一种盐在硫酸或乙酐-乙酸的酸性条件下处理其中R2为氢的本发明化合物I-1来进行。另外，硝化反应可通过将化合物I-1在有机溶剂如四氢噻吩砜中与四氟硼酸硝鎓一起加热来进行。
另外，正如下面反应式所示，通过用氯代磺酸或其盐处理化合物I-3从而引入氯代磺酰基，接着在上述类似的酸性条件下进一步用氨或铵盐处理所得化合物从而引入R2的氨磺酰基，制得本发明化合物。 使用用3H标记的甘氨酸或AMPA进行竞争试验可测定本发明化合物与这些受体结合的能力。另外，用大鼠实验可确证本发明化合物对神经疾病具有保护作用。
用下面描述的体外竞争试验可测定本发明化合与NMDA受体的甘氨酸结合部位结合的能力。
用缓冲液均化大鼠大脑皮质，然后反复离心，再悬浮于缓冲液中制备膜试样。膜试样与含有[3H]甘氨酸和本发明化合物的溶液混合，并在预定时间内培养。然后通过稀释终止混合物的反应，并用滤纸过滤。用液体闪烁计数器测定滤纸的放射性。用1mM非放射性甘氨酸测定非特异性结合计算出IC50。
用下面竞争试验测定本发明化合物对AMPA受体的结合能力。
用缓冲液均化大鼠大脑皮质，然后反复离心，再悬浮于缓冲液中制备膜试样。膜试样与含有[3H]AMPA和本发明化合物的溶液混合，并在预定的时间内培养。然后通过稀释终止混合物的反应，并用滤纸过滤。用液体闪烁计数器测定滤纸的放射性。用1mM非放射性谷氨酸测定非特异性结合计算出IC50。
含有本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物的组合物可用作由兴奋性氨基酸与NMDA受体特别是与甘氨酸结合部位和与AMPA受体结合引起的神经疾病的有效治疗剂。这些组合物可口服或非口服给药于受治疗者。适合于非口服给药的药物组合物形式为注射液或悬浮液，优选水溶液；适合于口服给药的药物组合物形式为片剂和胶囊剂。这些组合物可含有各种浓度的本发明化合物。组合物还可含有药学上可接受的有机或无机赋形剂如盐水、醇类、蓖麻油、明胶、乳糖、淀粉和滑石粉。另外，如果需要的话，组合物还可含有各种辅助物质如润滑剂、稳定剂和乳化剂。
作为治疗剂本发明组合物的剂量依据受治疗者的年龄、体重、病状、治疗效果、给药方法、治疗时间等而变化。本发明组合物可口服或肠胃外特别是静脉内给药于人。对于成年人，按式1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物计量，组合物一般的口服给药剂量为大约1至1000mg/天，优选10至500mg/天，或肠胃外给药剂量为大约1至500mg/天，可按一次至几次分剂量给药或连续给药。
下面将通过具体实施例详细描述本发明。应当注意的是本发明不受下列实施例的限制。
在实施例中，NMR表示核磁共振谱、IR表示红外光谱。
参考实施例1-6表示本发明实施例中用作起始原料的化合物的制备实施例。
参考实施例1 2-硝基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺首先将8.628g 5-氯-2-硝基苯胺、7.161g4-羟基吡啶和4.892g粉状氢氧化钾加到60ml无水二甲亚砜中。然后将所得混合物在氮气氛130℃下搅拌3小时。接着将200ml冰水加到反应混合物中，用4N盐酸中和。将所得溶液搅拌30分钟得到沉淀。滤出沉淀并用水洗涤。将沉淀进行硅胶柱色谱纯化，收集含20％甲醇的二氯甲烷洗脱的馏分。合并收集的馏分并蒸发。将残余物在甲醇中重结晶得到11.868g黄橙色晶体的2-硝基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺。熔点298-303℃元素分析 C11H9N3O3·1/5H2O)计算值C，56.27；H，4.03；N，17.90(％)测定值C，56.21；H，4.01；N，17.79(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.26(2H，d，J＝7.8Hz)，6.81(1H，dd，J＝9.4，2.8Hz)，7.08(1H，d，J＝2.8Hz)，7.61(2H，br.s)，7.99(2H，d，J＝7.8Hz)，8.12(1H，d，J＝9.4Hz).4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将5.5159 2-硝基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺加到含有7.975g铁粉、20ml水和78ml乙醇的悬浮液中，接着加入2ml 2N盐酸。将所得混合物加热回流6小时。然后将1.092g铁粉和2ml 2N盐酸加到混合物中。接着将所得混合物再回流1小时。反应后，用硅藻土热过滤反应混合物，并用温热的乙醇充分洗涤硅藻土上的残余物。合并母液和洗涤液并浓缩至干。然后将所得的残余物进行硅胶柱色谱纯化，收集用含5％甲醇的氯仿洗脱的馏分。合并收集的馏分并蒸发。用异丙醇-甲醇(1∶1)重结晶残余物得到4.137g橙色晶体的4-(4-氯代-4H-吡啶-l-基)-1，2-苯二胺。熔点257-259.5℃元素分析 C11H11N3O)计算值: C，65.66；H，5.51；N，20.88(％)测定值C，65.51；H，5.58；N，20.63(％)H1-NMR(d6-DMSO)64.76(2H，br.s)，4.85(2H，br.s)，6.15(2H，d，J＝7.6Hz)，6.46(1H，dd，J＝8.2，2.4Hz)，6.57(2H，m)，7.75(2H，d，J＝7.6Hz).
参考实施例2 2-硝基-4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺按照参考实施例1的同样方法，首先将3.811g 2-硝基-4-氟-5-氯苯胺、2.473g 4-羟基吡啶和1.827g粉状氢氧化钾在氮气氛中在130℃下反应3小时，得到1.125g 2-硝基-4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺。熔点＞305℃(分解)元素分析( C11H8N3O3F)计算值atedC，53.02；H，3.24；N，16.86；F，7.62(％)测定值C，52.63；H，3.46；N，16.64；F，7.44(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.27(2H，d，J＝7.8Hz)，7.18(1H，d，JFH＝7.0Hz)，7.57(2H，br.s)，7.87(2H，d，J＝7.8Hz)，8.07(1H，d，JFH＝11.2Hz).
4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将1.065g 2-硝基-4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)苯胺通过加热溶于45ml二甲基甲酰胺中，在大气压下用195mg 10％钯/炭催化剂还原。反应后，用硅藻土过滤反应混合物除去催化剂，将所得母液浓缩至于。然后将所得残余物用30g硅胶进行柱色谱纯化，收集用二氯甲烷-甲醇(20∶1)溶液洗脱的馏分。合并收集的馏分并蒸发。用乙醇重结晶残余物得到802mg 4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺。熔点227-229.5℃元素分析(C11H10N3OF)计算值C，60.27；H，4.60；N，19.17；F，8.67(％)测定值C，60.38；H，4.76；N，19.01；F，8.62(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.24(2H，d，J＝7.8Hz)，6.50(1H，d，JFH＝12.6Hz)，6.58(1H，d，JFH＝7.8Hz)，7.70(2H，d，J＝7.8Hz).
参考实施例3 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺首先将含有14.3g 3，4-二氯-6-硝基苯胺、9.01g 4-羟基吡啶、5.87g 86％氢氧化钾和70ml二甲亚砜的混合物在油浴中于130℃加热3.5小时，冷却。在混合物中加入冰水，滤出沉淀的结晶，然后把16.9g产品粗结晶加到含100g硅胶的柱上，用含10％甲醇的氯仿洗脱。洗脱液合并和蒸发，过滤残余物得到9.78g 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺的粗结晶(熔点288-291℃(分解))。之后将300mg粗结晶用甲醇重结晶得到268mg 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺晶体。
熔点290-293℃(分解)元素分析( C11H8N3O3Cl)计算值C，49.73；H，3.04；N，15.82；Cl，13.35(％)测定值C，49.52；H，3.20；N，15.66；Cl，13.08(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.22(2H，dd，J＝6Hz，J＝2Hz)，7.19(1H，s)，7.73(2H，br.s)，7.78(2H，dd，J＝6Hz，J＝2Hz)，8.23(1H，s).
4-氯-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将含有3.0g 4-氯-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺、3.78g铁粉、10ml水、90ml乙醇和1.15ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流3小时，然后在混合物中加入135ml乙醇，用Hyflo Super-Cel(商标名称)过滤不溶物，去除溶剂。把粗结晶用含30g硅胶的柱处理，用含20％甲醇的氯仿洗脱，合并和蒸发洗脱液。残余物用甲醇/异丙醇重结晶得到2.04g 4-氯-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺。
熔点260-261°(分解)元素分析(C11H10N3OCl)计算值latedC，56.06；H，4.28；N，17.83；Cl，15.05(％)测定值C，56.05；H，4.30；N，17.75；Cl，15.17(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ4.97(2H，s)，5.12(2H，s)，6.12(2H，d，J＝8Hz)，6.58(1H，s)，6.64(1H，s)，7.57(2H，d，J＝8Hz).参考实施例4 4-氰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺首先将含有1.0g 3-氯-4-氰基-6-硝基苯胺、507mg 4-羟基吡啶、330mg 86％的氢氧化钾和5ml二甲亚砜的混合物在油浴中于110℃加热3小时。按参考实施例3的相同方法进行后续步骤得到836mg 4-氰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺晶体。
熔点354-357℃(分解)元素分析(C12H5N4O3)计算值C，56.25；H，3.15；N，21.87(％)测定值C，56.25；H，3.27；N，21.83(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.28(2H，d，J＝8Hz)，7.13(1H，s)，7.92(2H，d，J＝8Hz)，8.24(2H，br.s)，8.68(1H，s).
4-氰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺首先将含有490mg 4-氰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺、642mg铁粉、4ml水、16ml乙醇和0.2ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热1小时。随后的步骤按参考实施例3相同的方法进行得到粗晶体，然后把405mg粗晶体用甲醇/异丙醇重结晶得到274mg4-氰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺。
熔点321-323℃(分解)元素分析( C12H10N4O)计算值C，63.70；H，4.46；N，24.77(％)测定值C，63.57；H，4.59；N，24.41(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ5.21(2H，s)，5.90(2H，s)，6.17(2H，d，J＝8Hz)，6.59(1H，s)，6.82(1H，s)，7.73(2H，d，J＝8Hz).
参考实施例5 4-二甲基氨磺酰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺先把含有3.0g 3-氯-4-二甲基氨磺酰基-6-硝基苯胺、1.39g 4-羟基吡啶、0.91g 86％氢氧化钾和20ml二甲亚砜的混合物在油浴中于130℃加热1.5小时，随后的步骤按参考实施例3相同的方法进行得到1.675g 4-二甲基氨磺酰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺。
熔点344-347℃(分解)元素分析( C13H14N4O5S)计算值C，46.15；H，4.17；N，16.56；S，9.48(％)测定值C，46.11；H，4.22；N，16.36；S，9.37(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ2.56(6H，s)，6.16(2H，d，J＝8Hz)，7.09(1H，s)，7.71(2H，d，J＝8Hz)，8.25(2H，br.s)，8.51(1H，s).
4-二甲基氨磺酰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺先把含有1.50g 4-二甲基氨磺酰基-3-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-6-硝基苯胺、1.49g铁粉、9ml水、36ml乙醇和0.45ml 2N盐酸的混合物在油浴中回流加热45分钟。随后的步骤按参考实施例3相同的方法进行得到粗结晶，把粗晶体用甲醇/异丙醇重结晶得到1.30g 4-二甲基氨磺酰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺晶体。
熔点334-336℃(分解)元素分析( C13H16N4O3S)计算值C，50.63；H，5.23；N，18.17；S，10.40(％)测定值C，50.43；H，5.28；N，18.16；S，10.58(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ2.51(6H，s)，5.21(2H，s)，5.90(2H，s)，6.17(2H，d，J＝8Hz)，6.59(1H，s)，6.82(1H，s)，7.73(2H，d，J＝8Hz).
参考实施例6 4-氨基-5-硝基-2-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-三氟甲苯先把含有2.40g 4-氨基-2-氯-5-硝基三氟甲苯、2.0g 4-羟基吡啶、684mg 86％氢氧化钾和15ml二甲亚砜的混合物在油浴中于70℃加热2小时，冷却混合物并向其中加入冰水。滤出沉淀的粗结晶并用甲醇/乙醇乙酯重结晶给出2.69g 4-氨基-5-硝基-2-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-三氟甲苯晶体。
熔点274-275℃元素分析( C12H8N3O3F3)计算值tedC，48.17；H，2.70；N，14.04；F，19.05(％)测定值C，48.12；H，2.78；N，13.98；F，19.11(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.19(2H，d，J＝8Hz)，7.17(1H，s)，7.74(2H，d，J＝8Hz)，8.17(2H，br.s)，8.38(1H，s).
4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-5-三氟甲基-1，2-苯二胺首先把含有2.56g 4-氨基-5-硝基-2-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)三氟甲苯，2.87g铁粉、14.4ml水、57.6ml乙醇和0.86ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流45分钟，按参考实施例3同样的方法进行后续步骤得到1.73g 4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-5-三氟甲基-1，2-苯二胺。
熔点264-266℃(分解)元素分析(C12H10N3OF3)计算值C，53.53；H，3.74；N，15.61；F，21.17(％)测定值C，53.55；H，3.87；N，15.52；F，21.30(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ5.23(2H，br.s)，5.53(2H，br.s)，7.57(2H，d，J＝8Hz)，6.09(2H，d，J＝8Hz)，6.54(1H，s)，6.86(1H，s).
实施例1 6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先将9.007g 7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、7.611g 4-羟基吡啶和5.219g粉状氢氧化钾加入120ml无水二甲亚砜中，混合物在氮气氛中于130℃搅拌2小时。然后，在反应混合物中加入50ml冰水和30ml 4N盐酸，以使混合物呈弱酸性(PH3-4)。滤出形成的黄色沉淀并用水洗涤，使沉淀物在560ml水和56ml浓氨水的混合物中加热溶解。在得到的混合物中加入1g活性炭，搅拌、过滤，滤液用浓盐酸中和，用冰冷却。然后将沉淀的晶体滤出并依次用水、甲醇和乙醇洗涤，干燥所得晶体得到7.56g6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮(下文中缩写为Ia)。
熔点＞300℃元素分析( C13H8N4O5)计算值C，52.01；H，2.69；N，18.66(％)测定值C，51.83；H，2.89；N，18.69(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.22(2H，d，J＝7.4Hz)，7.21(1H，s)，7.78(2H，d，J＝7.4Hz)，8.00(1H，s)IR(石腊)3080，2920，2580，1730，1695，1635，1595cm-1.
化合物Ia的硫酸盐熔点＞300℃元素分析(C13H8N4O5·1/2H2SO4·H2O)计算值C，42.51；H，3.02；N，15.25；S，4.36(％)测定值C，42.27；H，3.10；N，15.65；S，4.36(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.81(2H，d，J＝7.6Hz)，7.33(1H，s)，8.05(1H，s)，8.30(2H，d，J＝7.4Hz).
化合物Ia的胆碱盐制备如下先把2.70g(9.0mmol)6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮加入30ml丙酮并搅拌，然后把2.25ml(10.0mmol，1.1当量)50％胆碱氢氧化物水溶液加入到混合物中，搅拌。把混合物静置1.5小时，滤出形成的沉淀并用丙酮洗涤。把得到的橙红色沉淀加热溶解于200ml乙醇，溶液用活性炭处理，过滤。将滤液浓缩至原始体积的四分之三，使之冷却，滤出沉淀的晶体，得到3.58g胆碱盐的结晶，产率88.9％。
熔点230-233℃元素分析( C13H7N4O5·C5H14NO·2.5H2O)计算值tedC，48.21；H，5.84；N，15.62；H2O，10.04(％)测定值C，48.40；H，5.80；N，15.86；H2O，10.20(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ3.11(9H，s)，3.41(2H，t，J＝4.6Hz)，3.85(2H，m)，6.14(2H，d，J＝7.4Hz)，6.87(1H，s)，7.71(2H，d，J＝7.8Hz)，7.82(1H，s).
实施例2 6-硝基-7-(3-氯-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把267mg7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、171mg 3-氯-4-羟基吡啶和92mg粉状氢氧化钾加入3ml干燥二甲亚砜中，使混合物在氮气氛中于130℃反应80分钟。然后在反应混合物中加入冰水和4N盐酸调整pH值至大约为2。滤出得到的黄色沉淀物并将其用水洗涤，沉淀物用二甲基甲酰胺和水的混合物重结晶得到376mg黄白色的6-硝基-7-(3-氯-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 (C13H7N4O5Cl.C3H7NO.H2O)计算值tedC，45.13；H，3.79；N，16.45；Cl，8.33(％)测定值C，45.14；H，3.46；N，16.33；Cl，8.57(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.38(1H，d，J＝7.8Hz)，7.27(1H，s)，7.86(1H，dd，J＝7.8，2.4Hz)，8.02(1H，s)，8.42(1H，d，J＝2.4Hz)，12.43(2H，br.s).
实施例3 6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把677mg 7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、840mg 4-羟基-3-硝基吡啶和403mg粉状氢氧化钾加入到6ml干燥二甲亚砜中，使混合物在氮气氛中于130℃反应2小时。按实施例2同样的方法进行后续步骤，得到的沉淀物用二甲基甲酰胺(dimethylformaldehyde)和水的混合物重结晶，得到672mg 6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮的红色晶体。
熔点＞300℃元素分析(C13H7N5O7)计算值C，45.23；H，2.04；N，20.29(％)测定值C，45.25；H，2.82；N，20.20(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.62(1H，d，J＝7.8Hz)，7.40(1H，s)，7.96(1H，dd，J＝7.8，2.0Hz)，8.06(1H，s)，9.11(1H，d，J＝2.0Hz).
实施例4 6-硝基-7-(3，5-二氯-4-(氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把1.129g7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、1.648g3，5-二氯-4-羟基吡啶和672mg粉状氢氧化钾加入10ml无水二甲亚砜中，使混合物在氮气氛中于130℃反应3小时，按实施例2同样的方法进行后续步骤。把得到的沉淀物在二甲基甲酰胺中加热溶解，用活性炭脱色并过滤。加入等量的水，把溶液静置过夜得到1.473g6-硝基-7-(3，5-二氯-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析(C13H6N4O5Cl2·1/2H2O)计算值C，41.29；H，1.87；N，14.82；Cl，18.75(％)测定值C，41.47；H，1.84；N，15.08；Cl，19.01(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ7.39(1H，s)，8.06(1H，s)，8.55(2H，s).
实施例5 6-氟-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，把4.266g 4-氟-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺和1.927g草酸加入48ml 4N盐酸中，将混合物加热回流2.5小时。反应完以后，将沉淀的晶体滤出，用水洗涤并且干燥给出3.920g6-氟-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析(C13H8N3O3F·0.2H2O)计算值C，56.40；H，3.06；N，15.18；F，6.86(％)测定值C，56.21；H，3.19；N，15.24；F，6.93(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.23(2H，d，J＝7.8Hz)，7.13(1H，d，JFH＝16Hz)，7.17(1H，d，JFH＝12.6Hz)，7.80(1H，d，J＝6.4Hz)，12.09(1H，br.s)，12.15(1H，br.s).
实施例6 6-氯-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把含有1.93g 4-氯-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺、2.21g草酸和40ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流2小时。冷却混合物，滤出得到的晶体给出2.1g 6-氯-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮晶体(熔点＞400℃)。然后，将500mg粗晶体用二甲基甲酰胺和水重结晶得到299mg 6-氯-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点420-445℃(分解)元素分析( C13H8N3O3Cl·1/4H2O)计算值C，53.07； H，2.91；N，14.28；Cl，12.05(％)测定值C，53.09；H，2.83；N，14.24； Cl，12.36(％)H1-NMR(D2O-HNO3)δ7.46(2H，d，J＝8Hz)，7.57(1H，s)，7.59(1H，s)，8.57(2H，d，J＝8Hz).
实施例7 6-氰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把246mg 4-氰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺、294mg草酸和5ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热2小时，冷却混合物，滤出沉淀的晶体。然后把这样得到的284mg粗结晶用2N盐酸再重结晶得到201mg 6-氰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点410-415℃(分解)元素分析( C14H8N4O3·3/4H2O)计算值tedC，57.23；H，3.26；N，19.07(％)测定值C，57.54；H，3.33；N，19.10；(％)H1-NMR(D2O-HNO3)δ7.50(2H，d，J＝8Hz)，7.68(1H，s)，7.88(1H，s)，8.72(2H，d，J＝8Hz).
实施例8 6-二甲基氨磺酰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先把含有500mg 4-二甲基氨磺酰基-5-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺、438mg草酸和10ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流3小时，冷却混合物并用氨水调至碱性，滤出沉淀的晶体。然后把得到的534mg粗晶体再用二甲基甲酰胺和水重结晶，得到201mg 6-二甲基氨磺酰基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点400-405℃(分解)元素分析 ( C15H14N4O5S.1/4H2O)计算值C，49.11；H，3.98；N，15.27；S，8.74(％)测定值C，49.22；H，4.10；N，15.37；S，8.72(％)H1-NMR(D2O-HNO3)δ2.17(6H，s)，6.91(2H，d，J＝7Hz)，7.13(1H，s)，7.37(1H，s)，8.10(2H，d，J＝7Hz).
实施例9 6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把1.244g 7-氟-6-硝基-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、952mg 4-羟基吡啶和711mg粉状氢氧化钾加入10ml干燥的二甲亚砜中，将混合物在氮气氛中于130℃搅拌3.5小时。然后在反应混合物中加入50ml水，加入4N盐酸使之呈酸性(PH2-3)以产生黄色沉淀。把沉淀物滤出并用二甲基甲酰胺重结晶得到1.08g6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 (C16H14N4O5·0.2H2O)计算值C，55.56；H，4.20；N，16.20(％)测定值C，55.63；H，4.29；N，16.37(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ0.94(3H，t，J＝7.2Hz)，1.65(2H，m)，4.10(2H，m)，6.21(2H，d，J＝7.6Hz)，7.77(2H，d，J＝7.6Hz)，7.86(1H，s)，8.02(1H，s).
实施例10 6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，按与实施例9相同的方法使无水二甲亚砜中的803mg 7-氟-6-硝基-1-正丙基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、700mg3-硝基-4-羟基吡啶和365mg氢氧化钾于130℃反应4.5小时，得到1.059g6-硝基-7-(3-硝基-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1-(正丙基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 (C16H13N5O7·0.3H2O)计算值C，48.94；H，3.49；N，17.83(％)测定值C，49.02；H，3.68；N，17.92(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ0.94(3H，t，J＝7.4Hz)，1.66(2H，m)，4.06(2H，m)，6.64(1H，d，J＝7.8Hz)，7.98(1H，m)，8.00(1H，s)，8.10(1H，s)，9.12(1H，d，J＝1.8Hz)，12.46(1H，br.s).
实施例11 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮先把4.849g 4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，2-苯二胺和2.402g草酸加入60ml 4N盐酸中，混合物在氮气氛中加热回流2.5小时，待混合物冷却后，滤出沉淀的晶体并用二甲基甲酰胺重结晶给出4.786g 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析al-analysis(analyzed as C13H9N3O3)计算值tedC，61.18；H，3.55；N，16.46(％)测定值C，60.94；H，3.62；N，16.37(％).
6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，在冰冷却下把510mg 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮加入到5ml浓硫酸中并使之溶解，然后在生成的溶液中加入253mg硝酸钾，混合物边搅拌边在60℃加热3小时。然后，在混合物中加入20ml冰水，并用4N氢氧化钠溶液调节溶液的PH值至5，滤出沉淀的黄色晶体。把得到的晶体滤出并干燥给出426mg 6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮熔点＞300℃H1-NMR(d6-DMSO)δ6.20(2H，d，J＝7.8Hz)，7.20(1H，s)，7.76(2H，d，J＝7.8Hz)，7.99(1H，s).
1H-NMR和HPLC证实化合物6-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮和实施1得到的化合物Ia是同一种物质。
实施例12 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-7-三氟甲基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，将含有300mg 4-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-5-三氟甲基-1，2-苯二胺、301mg草酸和6ml 2N盐酸的混合物在油浴中加热回流7小时，冷却混合物，滤出沉淀的晶体。然后把得到的粗制晶体用二甲基甲酰胺和水的混合物重结晶得到216mg 6-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-7-三氟甲基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点410-420℃元素分析al-analysis(analyzed-as C14H8N3O3F3·1/4H2O)计算值tedC，51.31；H，2.61；N，12.82；F，17.39(％)测定值C，51.36；H，2.87；N，13.04；F，17.11(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.18(2H，d，J＝8Hz)，7.22(1H，s)，7.55(1H，s)，7.70(2H，d，J＝8Hz)，12.33(2H，br)实施例13 6-硝基-7-(3-氟-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮首先，将127mg 7-氟-6-硝基-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、96mg 3-氟-4-羟基吡啶和55mg粉状氢氧化钾加入12ml二甲亚砜中，混合物在氮气氛中于130℃搅拌3小时。然后，在反应混合物中加入冰水，并用2N盐酸中和，滤出和洗涤得到的沉淀物。把沉淀物溶于3ml 1N氢氧化钠，溶液用活性炭处理，过滤，滤液用浓盐酸中和，滤出并干燥沉淀的晶体得到147mg 6-硝基-7-(3-氟-4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮。
熔点＞300℃元素分析 ( C13H7N4O5F·0.3H2O)计算值C，48.25；H，2.37；N，17.31；F，5.87(％)测定值C，48.09；H，2.61；N，17.49；F，6.27(％)H1-NMR(d6-DMSO)δ6.46(1H，dd，J＝9.0，7.4Hz)，7.28(1H，s)，7.85(1H，dd，J＝7.6，2.0Hz)，8.08(1H，s)，8.37(1H，dd，J＝7.8，2.0Hz).
试验实施例16-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮(Ia)对NMDA受体的甘氨酸结合部位的竞争性结合试验首先，把Slc-Wistar大鼠(体重为250-300g)的大脑皮质在20倍体积的5mM Tris(三羟甲基氨基甲烷)乙酸盐缓冲液(含1mM EGTA、0.1mM PMSF和0.01％肝菌肽，PH7.4)中均化，上述大脑皮质以50,000xg的速度离心30分钟并且再悬浮于缓冲液中，将此步骤重复4次，最终的悬浮液贮存于-80℃。把冷冻的悬浮液在室温下融化，用0.08％Triton X-100溶液在2℃培养10分钟，然后把得到的悬浮液洗涤二次并悬浮于50mM Tris-乙酸盐缓冲溶液(PH7.4)得到膜样品。把膜样品与100nM[3H]甘氨酸和实施例1得到的化合物Ia的一系列不同浓度的溶液混合，将该混合物于0℃下培养10分钟。将每种混合物稀释，用Whatman GF/C滤纸过滤以终止反应，用液体闪烁计数器测量留存于滤纸上的3H的放射性。非特异性结合试验用1mM无放射性甘氨酸进行以测定IC50值。测定化合物Ia的IC50值，用上文所述相同的方法以YM900(WO92/07847实施例15的化合物)作为对照测定。结果列于表2。
表2
a)使用[3H]甘氨酸。
化合物Ia显示出的拮抗效果大的是YM900的10倍。
试验实施例26-硝基-7-(4-氧代-4H-吡啶-1-基)-1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮(Ia)对AMPA受体的竞争性结合试验首先，将Slc-Wistar大鼠(体重250-300g)的大脑皮质在10倍体积的30mM Tris乙酸盐缓冲溶液(含有2.5mM CaCl2，PH7.1)中均化，将上述大脑皮质以30,000xg的速度离心15分钟，并再悬浮于缓冲溶液中，将此步骤重复3次，最终的悬浮液贮存于-80℃。把冷冻的悬浮液在室温下融化并悬浮于30mM Tris-乙酸盐缓冲液(含2.5mM CaCl2和100mM KSCN，PH7.1)中得到膜样品。把上述膜样品与30nM[3H]AMPA以及一系列不同浓度的化合物Ia溶液混合，将这些混合物于0℃培养30分钟。把各个混合物稀释并用WhatmanGF/C滤纸过滤以终止反应，用液体闪烁计数器测量留于滤纸上的3H放射性。非特异性结合试验用1mM无放射性谷氨酸进行以测定IC50值。化合物Ia的IC50值是以YM900为对照，用上述同样的方法测定的。结果列于表3。
表3
a)使用[3H]AMPA
本发明的氧代吡啶基喹喔啉衍生物是新化合物，对中枢神经元的NMDA受体和AMPA受体显示出显著的拮抗作用。本发明化合物对由兴奋性氨基酸引起的神经系统疾病是有效的治疗剂，因为它们能抑制兴奋性氨基酸与NMDA受体或AMPA受体的结合。
很显然，会有各种其它的改进形式，这对本领域熟练技术人员而言是很容易作到的，这些并没有离开本发明的范围和其精髓。因此，不能把要求保护的权利要求的范围限制在这里所公布的说明书，而应对权利要求有宽范围的解释。
权利要求
1.下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基；R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
2.根据权利要求1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1和R3独立地为氢或硝基；R2为卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R4为氢或低级烷基； R5为独立地选自卤素、硝基和低级烷基的取代基；n为0-4的整数。
3.根据权利要求1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1和R3各自为氢；R2为卤素、硝基、氰基或三卤代甲基； R4为氢或低级烷基；R5为独立地选自卤素和硝基的取代基；n为0-4的整数。
4.根据权利要求1的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中n为0。
5.根据权利要求4的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1、R3和R4各自为氢；R2为硝基。
6.一种药物组合物，它包括下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成份 其中R1为氢、卤素、硝基或三卤代甲基，R2为氢、卤素、硝基、氰基、三卤代甲基、氨基甲酰基、被低级烷基取代的氨基甲酰基、氨磺酰基或被低级烷基取代的氨磺酰基；R3为氢、硝基或卤素；R4为氢、低级烷基、取代的低级烷基、低级环烷基或取代的低级环烷基；R5为独立地选自卤素、硝基、氰基、低级烷基、氨基甲酰基和被低级烷基取代的氨基甲酰基的取代基； n为0-4的整数。
7.根据权利要求6的药物组合物，该组合物用于竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋。
8.根据权利要求6的药物组合物，该组合物对谷氨酸受体具有拮抗活性。
9.根据权利要求6的药物组合物，该组合物用于治疗由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋而造成的神经疾病。
10.根据权利要求9的药物组合物，其中神经疾病是至少一种选自帕金森神经机能障碍、老年性痴呆、亨廷顿舞蹈病和癫痫。
11.一种竞争性地抑制由兴奋性氨基酸引起的神经元的过度兴奋的方法，包括体内施用治疗有效量的权利要求1的化合物。
全文摘要
下式I表示的氧代吡啶基喹喔啉衍生物或其药学上可接受的盐式I中的各基团的定义参见说明书。这些衍生物可作为对NMDA受体和AMPA受体二者的拮抗剂，因此它们可作为由结合受体的兴奋性氨基酸引起的神经疾病的有效治疗剂。
文档编号C07D401/04GK1123792SQ9510515
公开日1996年6月5日 申请日期1995年4月8日 优先权日1994年4月8日
发明者高田进, 长命信雄, 足立诚, 永业正美, 川崎和夫 申请人:盐野义制药株式会社
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