一种提取卵黄中抗体的新方法

专利名称：一种提取卵黄中抗体的新方法
技术领域：
本发明属卵黄中抗体的提取方法。
卵黄能富集机体所产生的抗体，其中抗体的浓度与血清中抗体浓度相近或略高，且卵黄比血清易获取，因此往往采用含抗体的卵黄进行人工被动免疫接种。但是由于卵黄中含有大量卵磷脂等脂质，大大增加了卵黄的粘稠度，将卵黄脂质与水溶性蛋白质分开是能否更有效地利用其中抗体的关键。近年来，在这方面的研究，主要有PEG提取法(Polson et al.，1985)，生物胶提取法(Hajime HATTA et al.，1990)，乙醇超临界CO2脱脂法(八田一等，1994)等，虽然在收率及纯度上较好，但难以解决试剂用量大、毒性大、操作繁琐及需高速离心等难题，因此未能在生产中推广应用。
本发明是对由卵黄中提取抗体的方法的创新，旨在简化卵黄抗体的提取程序，提高回收率，保持较高的活性，降低成本，且具有一定的防腐作用。
本发明的要点是，对产蛋鸡免疫接种传染性法氏囊病病毒等抗原，经2～3次免疫接种后，将含高效价抗体的卵黄，用磷酸盐缓冲液(PBS)等稀释(卵黄∶稀释液＝1∶3—6)，按0.3—1.2％的比例加入甲醛溶液(含甲醛37％)，混匀，置于-10℃以下温度经4—10小时冻结，取出快速解冻，卵黄呈胶冻状，并可出现少量清亮的液体。将卵黄挤压，即可有液体流出，并将余渣用稀释液(原体积的1/4)漂洗，收集两次液体，即为所制备的抗体溶液，冻存。
本发明提取工艺流程如下 本发明各成份的添加比例如下卵黄1份稀释液 3—6份甲醛溶液0.3—1.2％(占卵黄＋稀释液之和)制备过程无需特殊或贵重的仪器，所用甲醛的量很少，也不需其他化学药品，因此，实现本发明的费用很低。获得的卵黄中抗体活性高，注射于动物体易吸收，副作用小，保护力强，易保存。本发明克服了以往卵黄抗体提取法的不足之处，具有很大的实用价值。
实施例将高免卵黄液1份，加0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液3份，混匀，再加入0.5％甲醛溶液(甲醛含量为37％)，混匀，置-10℃条件下结冰，解冻，去除卵黄固形物，即为富含抗体的提取物。
权利要求
1.一种提取卵黄中抗体的新方法，其特征在于应用甲醛溶液与卵黄、稀释液磷酸盐缓冲液混匀，将其置于低温下冻结，然后快速解冻提取，即为富含抗体的提取物。
2.根据权利要求1所述的一种提取卵黄中抗体的新方法，其特征在于浓度为37％的甲醛溶液占稀释卵黄液总量的0.3—1.2％。
3.根据权利要求1所述的一种提取卵黄中抗体的新方法，其特征在于卵黄与稀释液的添加比例为1∶3—6。
全文摘要
本发明提供了一种提取卵黄中抗体的新方法。该方法是将高免卵黄用磷酸盐缓冲液等稀释液稀释(卵黄∶稀释液＝1∶3-6)，加入0.3-1.2％甲醛溶液(含37％甲醛)，混匀，置于-10℃以下温度，经4-10小时冻结，然后快速解冻，将固形物去除，收集液体，即为富含抗体的提取物。本发明工艺简单可行。按本发明提取的抗体，纯度高，收获率高，活性强，注射于动物体内易吸收，防治效果良好。因此，该方法易于推广应用。
文档编号C07K1/14GK1117974SQ95110458
公开日1996年3月6日 申请日期1995年5月19日 优先权日1995年5月19日
发明者柴家前, 陈鑫磊, 姚永秀, 张绍学, 牛钟相 申请人:山东农业大学

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