商标分类 
商标转让 
您当前的位置： 用于禽类或用于反刍动物的益生菌的制作方法
2021-01-06 19:01:31|
348|
起点商标网 本发明涉及用于禽类或用于反刍动物的益生菌领域。更特别地，本发明涉及益生菌以及包含其的用于禽类或用于反刍动物的饲料、适应于弱有机酸的活性酵母的用途以及该酵母。甚至更特别地，本发明涉及适应于弱有机酸的所述活性酵母或包含该酵母的益生菌在禽类或反刍动物中的用途。对于禽类，所述酵母或益生菌特别用于改进禽类的动物学表现。对于反刍动物，所述酵母或益生菌特别用于预防和/或治疗反刍动物的消化系统疾病，特别是预防反刍动物的酸中毒。
背景技术：
：对于禽类多年来，具有生长因子作用的抗生素通常以非药物剂量被用于改进禽类育种的动物学表现。但是，该常规使用并非没有后果，例如发展细菌部分的抗生素耐药性。因此，在2006年，欧盟决定禁止在禽类中使用抗生素作为生长因子，以限制出现耐药现象。因此，生产者寻求抗生素的替代品。因此，益生菌在禽类中的使用已变得广泛。出售的用于禽类的大多数益生菌都是细菌来源的，主要来自芽孢杆菌家族，因为它们具有形成孢子的能力，因此可以抵抗禽类饲料生产中的高温胁迫。尽管已经注意到酵母，特别是酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)，可以对猪和牛牲畜的生长和表现产生积极作用，但尚未证明其对禽类的生长和增重的作用，而且通常作用非常有限且不明显。例如，us2002/0146399提出了一种可以添加到特别是用于禽类的动物饲料中的产品，其包含山梨酸和至少一种具有益生菌活性的微生物培养物，例如酿酒酵母的培养物。wo97/00017提出了一种特别是用于母鸡的益生菌，它含有藻粉、活性干酵母和矿物成分，该益生菌可能属于酿酒酵母物种。另外，欧盟目前没有授权将酵母作为用于禽类的益生菌。因此，真正需要找到有效的“酵母益生菌”，从而使得可以改进禽类的生长和增重表现以及消耗指数(ci)。术语“酵母益生菌”旨在表示包含酵母或具有益生菌功能的酵母的益生菌。“酵母益生菌”也可以表示为“益生菌酵母”。对于反刍动物反刍动物中常见的酸中毒构成反刍动物现代营养学的主要关注点之一。事实上，生产潜力的增加导致食物摄入的能量更高。结果，动物的瘤胃(胃)必须处理增加量的可发酵有机物，并且由此产生的更强烈的发酵导致具有不利的动物学作用的酸中毒状态：消极的消化相互作用、牛奶中黄油含量的降低、病理性消化和代谢状况等。酸中毒可归纳为由于瘤胃中的ph(瘤胃ph)下降而导致的酸碱平衡紊乱，这是由于可发酵碳水化合物的降解所致，瘤胃中的细菌迅速消化了碳水化合物，产生了挥发性脂肪酸(vfa)和乳酸。在正常情况下，瘤胃乳头吸收vfa和乳酸，以帮助动物生产牛奶。当vfa和乳酸的产生超过瘤胃乳头吸收它们的能力时，就会发生酸中毒。为了抵消反刍动物，特别是奶牛的酸中毒状态，文献中已经提出了各种饲料添加剂，包括益生菌酵母。实际上，益生菌酵母因其在瘤胃环境中的稳定作用而闻名。几项研究1,2证明了活酵母对瘤胃ph的影响，即使瘤胃ph高度依赖于饮食，特别是取决于构成所述饮食的食物的性质。在高产奶牛中，用活酵母补充食物摄入量是一种用于限制使用产酸饮食对反刍动物的消化和表现的负面作用的有利的解决方案。除了测量瘤胃ph值外，测量瘤胃氧化-还原电位(氧化还原电位)(以mv为单位的eh)已被证明是了解活酵母作用方法的关键工具3。氧化还原电势是不仅可以用于了解瘤胃的工作原理，还可以用于了解益生菌酵母的瘤胃作用的目标理化参数。因此，在文献4中已经表明，当瘤胃功能障碍的风险足够高时，活酵母对瘤胃eh的调节特别有效4。但是，目前仍然需要找到用于预防和/或治疗反刍动物酸中毒的有效解决方案。技术实现要素：从它们特别适应于弱有机酸的意义上说，本发明人已经开发并建立了具有特殊性质的新型活性酵母。因此，根据第一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的这些新型活性酵母。根据第二方面，本发明涉及这些适应性活性酵母在禽类或反刍动物中的用途。根据另一方面，本发明涉及用于禽类或用于反刍动物的益生菌，其特征在于，其包含适应于弱有机酸的活性酵母。发明人还建立了包含根据本发明的益生菌的用于禽类或用于反刍动物的饲料。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母用于改进禽类的动物学表现的用途。为了本发明的目的，表述“禽类的动物学表现的改进”旨在表示禽类的生长和增重表现以及消耗指数(ci)的改进。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母或包含其的益生菌，其用于预防和/或治疗反刍动物的消化系统疾病，特别是预防反刍动物的酸中毒。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母在用于禽类或用于反刍动物的饲料中的用途。有利地，使用根据本发明的适应性酵母或益生菌使得可以避免向饲料中添加酶。具体实施方式本发明的一个主题是适应于弱有机酸的酿酒酵母活性酵母，其特征在于，其衍生自选自分别于2010年12月2日以编号i-4407，于2016年8月31日以编号i-5128、i-5129、i-5130和i-5131，以及于2017年8月30日以编号i-5222和i-5223保藏于cncm的菌株的菌株，并且其特征在于，衍生自选自i-4407、i-5128、i-5129、i-5130、i-5131、i-5222和i-5223的菌株的根据a1测试的所述适应性活性酵母的活性与衍生自选自i-4407、i-5128、i-5129、i-5130、i-5131、i-5222和i-5223的相同菌株的根据a1测试的非适应性活性酵母的活性之比大于或等于1。术语“酵母”表示通过培养酵母菌株获得的酵母。酵母菌株的培养在适应于酵母菌株生长的培养基中进行。本领域技术人员能够根据geraldreed和tilakw.nagodawithana在参考书“yeasttechnology”(isbn0-442-31892-8)第284-293页中描述的方案，来测定适于给定酵母菌株的培养基的组成。实施例1中描述了用于培养菌株并获得适应于弱有机酸的酵母的方法。与活酵母同义的术语“活性酵母”表示具有代谢活性的酵母细胞群。表述“衍生自菌株的活性酵母...”旨在表示通过培养和适应菌株获得的酵母。表述“适应于弱有机酸的活性酵母”旨在表示由于先前暴露于该酸而提高了对给定弱有机酸的耐受性的酵母(warth,1988,appl.environ.microbiol.,54(8):2091-2095)。因此，当适应性酵母至少第二次处于存在弱有机酸的情况下，所述酵母的生长和发酵能力不会被抑制。为了本发明的目的，术语“适应于弱有机酸的活性酵母”、“适应于弱有机酸的酵母”、“适应性酵母”、“适应性活性酵母”具有相同的含义。术语“弱有机酸”旨在表示有机酸本身及其盐。它们选自下组：丙酸、苯甲酸、乙酸、丁酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、乳酸、苹果酸和山梨酸及其盐，特别是钙盐或钠盐。作为更具体实例，将提及适应于丙酸或苯甲酸的盐的酵母，优选适应于丙酸钙或苯甲酸钠的酵母。基于专利us4318991中描述的方法，在实施例1中描述了用于获得适应于弱有机酸的酵母的方法。更特别地，通过在其最终增殖阶段的最后几个小时期间，通过在每升培养基中添加0.1g-10g的弱有机酸和/或其盐，使本发明的酵母适应于弱有机酸的存在。根据本发明的一个具体实施方案，酿酒酵母活性酵母更特别是布拉迪酵母(saccharomycescerevisiaevar.boulardii)，其也被称为布拉氏酵母(saccharomycesboulardii.)。有利地，本发明的主题是适应性活性酵母或包含其的益生菌，其中根据a1测试的适应性活性酵母与非适应性活性酵母的活性之率大于或等于1。因此，根据本发明，所选活性酵母是酿酒酵母属的活性酵母，其特征在于，根据a1测试的该所选“适应性”活性酵母与非适应性酵母的活性的如下比率大于或等于1：根据a1测试的适应性酵母的活性根据a1测试的非适应性酵母的活性。所述a1测试对应于以下方案：根据由b.godon和w.loisel配合完成的参考书“guidepratiqued’analysesdanslesindustriesdecéréales”[“practicalguidetoanalysesincerealindustries”](publishedbylavoisier-tec&doc-1997-isbn.2-7430-0123-2-2ndedition)第579-584页中所述的标准方法，用burrows和harrisson发酵仪测量活性酵母释放的co2体积2小时，其使用以下适应性程序：(a)分批称量20克面粉，该面粉是hagberg下落时间为200-300秒(如上述参考书第680和681页所定义)的软质小麦粉，并将其置于干洗管中，然后向每支管中加入2g蔗糖，并在开始测试前将试管在30℃的水浴架中孵育至少30分钟；(b)取相当于1.066克酵母固体的酵母样品；(c)在100ml的蒸馏水中制备稀释的酵母样品(干酵母方法描述于上述参考书的第583页)，并在调整至100ml之前添加0.5ml浓度为6.6％(w/v)的乙酸；(d)用移液管吸取15ml混合所需的充分混合的稀释样品，这15ml提供1.066g×0.15＝0.160g的酵母固体；其余遵循参考书中所述的程序说明，在2个小时内进行测量。为了考虑干燥对酵母活性的影响，根据a1测试的活性酵母的活性定义如下：·所测试的酵母为干燥形式，即固体含量至少为90％，其活性对应于测得的co2体积。根据本发明的另一个具体实施方案，通过对选自分别于2016年8月31日以编号i-5128、i-5129、i-5130和i-5131，于2017年8月30日以编号i-5222和i-5223以及于2010年12月2日以编号i-4407保藏于thecollectionnationaledeculturesdemicroorganismes[frenchnationalmicroorganismculturecollection]，25ruedudocteurroux75724pariscedex15的菌株中的酿酒酵母菌株进行培养和适应，从而获得适应于弱有机酸的酵母，所述酵母优选包括在用于禽类或用于反刍动物的益生菌中。实际上，发明人惊奇地发现，在其培养期间经历了对弱有机酸的适应过程的酵母在禽类或反刍动物中比没有经历该过程的酵母更有效。因此，这些“适应性”酵母使得可以特别地改进生长和增重表现以及相对于禽类的增重的饲料消耗转化指数。禽类的表述“相对于增重的饲料消耗转化指数”旨在表示禽类的消耗指数。消耗指数(ci)是禽鸟为了摄取1千克活重而摄入的饲料量(以千克计)。出人意料的是，在反刍动物中，本发明的适应性活性酵母使得可以特别地改进反刍动物的理化参数(诸如ph或氧化还原电位)的调节，从而预防和/或治疗反刍动物的酸中毒。根据本发明的另一具体实施方案，适应于弱有机酸的酵母为干燥形式。术语“干酵母”旨在表示固体含量大于90％的任何酵母。活性干酵母是一种活酵母，其被干燥以保留其发酵能力并具有很长的保质期。所述活性干酵母具有高含量的活酵母细胞，并且可以是各种形式，例如为小球、颗粒或粉末的形式，所有这些形式的平均水含量为4-8％。干燥根据本领域技术人员已知的并且与细胞存活力相容的任何方法进行，也就是说，可以保留高含量的活细胞。本领域技术人员还知晓，取决于进行的干燥类型，活细胞的含量或多或少地较高，并且可以影响a1测试中的性能。固体的重量通过本领域技术人员已知的常规方法确定。根据本发明的另一个实施方案，适应性活性酵母为颗粒、微球或粗粉的形式，或水可分散形式。本发明的另一主题是益生菌，其包含如上文所定义的适应于弱有机酸的活性酵母。术语“益生菌”旨在表示当摄入足够量的活微生物时，对健康的影响超出传统的营养作用。如上定义的益生菌包含至少90重量％的适应性活性酵母的固体。更特别地，本发明的益生菌是用于禽类或用于反刍动物的益生菌。根据另一方面，本发明涉及用于禽类或用于反刍动物的包含上述益生菌的饲料。根据本发明的益生菌和用于禽类或反刍动物的饲料还可以包含除所述适应性活性酵母以外的一种或多种成分，诸如特别是维生素、膳食矿物质、微量元素、膳食酶、酸化剂、植物提取物、酵母壁和膳食脂肪、以及在适当情况下，其他具有益生菌作用的微生物。根据禽类育种领域的技术人员的知识，鸡的生长期是从出生到35-42天。在此期间，它的重量从30到50克增加到2到3千克，在10天的时间内质量增加了5到6倍。就其数量而言，其食物优先根据其年龄而固定。根据本发明的一个具体实施方案，并基于禽类的重量，该动物接受每天每千克106-1011cfu的适应于弱有机酸的活性酵母的饲料，优选每天109-1011cfu/kg的饲料，甚至更优选每天109-1010cfu/kg的饲料。术语cfu是指菌落形成单位，一个cfu对应于一个菌落。根据另一方面，本发明涉及一种用于改进动物的动物学表现，特别是用于改进禽类的生长和增重表现以及禽类的消耗指数的方法，该方法在于为动物提供适应于弱有机酸的活性酵母，特别是每天每千克106-1011cfu的适应于弱有机酸的活性酵母的饲料，优选每天109-1011cfu/kg的饲料，甚至更优选每天109-1010cfu/kg的饲料。根据另一方面，本发明涉及适应于有机酸的活性酵母在改进禽类的动物学表现中的用途。术语“动物学表现”旨在表示动物的生长表现、质量或体重增加、消耗指数和动物的育种参数。实际上已经注意到，在禽类中使用适应性酵母使得可以提高增重和所摄取的饲料量，并且可以改进相对于增重的饲料消耗指数，特别是在生长的禽类中。更特别地，本发明的主题是如上所定义的适应性活性酵母或如上所定义的益生菌在禽类中特别是用于改进禽类的生长和增重表现以及消耗指数(ci)的用途。本发明的主题还在于如上定义的适应性活性酵母或如上定义的益生菌在反刍动物中的用途。更特别地，在反刍动物中该用途使得可以对瘤胃的理化参数(诸如ph或氧化还原电位)起作用，但是也可以对发酵参数(例如瘤胃中存在的vfa的含量)起作用。根据本发明的一个有利实施方案，使用适应性活性酵母使得可以将瘤胃的ph值维持和/或重建为大于或等于5.82。根据另一个有利实施方案，使用本发明的适应性活性酵母使得可以将瘤胃的氧化还原电位维持和/或重新建立在-200mv至-150mv的范围内。上述ph和氧化还原电位值对应于通过以下实施例4中所述的测量方法获得的ph和氧化还原电位。根据又一个有利实施方案，使用本发明的适应性活性酵母使得可以增加瘤胃中的vfa浓度。通过如上所述作用于理化或发酵参数，本发明的适应性活性酵母有利地使得可以作用于反刍动物的酸中毒，并且更特别地防止反刍动物中的瘤胃酸中毒。因此，本发明的主题还在于如上所定义的适应性活性酵母或如上所定义的益生菌，其用于预防和/或治疗反刍动物的消化系统疾病，更特别地用于预防或反刍动物的酸中毒。根据另一方面，本发明涉及用于预防和/或治疗反刍动物酸中毒的方法，其在于为该动物提供适应于弱有机酸的活性酵母，特别是每个动物每天以0.5g-50g的适应性活性酵母的量，优选每个动物每天1g-10g的适应性酵母的量。根据另一方面，本发明涉及如上所述的适应于有机酸的活性酵母在用于禽类或用于反刍动物的益生菌和/或饲料中的用途。本发明的一个主题是如上定义的适应性活性酵母或如上定义的益生菌在用于禽类或用于反刍动物的饲料中的用途。根据本发明的另一个具体实施方案，适应于有机酸和/或益生菌的活性酵母以适合用于膳食基质的形式使用，所述基质例如是颗粒、粗粉或饮用水。适应于弱有机酸的酵母和/或益生菌例如当与饲料混合时呈颗粒或粗粉形式，而当与饮用水混合时呈水可分散形式。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母的用途，其中所述动物，特别是体重为30-3000g的禽类，接受每天每千克106-1011cfu的适应于弱有机酸的活性酵母的饲料，优选每天109-1011cfu/kg的饲料，甚至更优选每天109-1010cfu/kg的饲料。根据本发明的益生菌、饲料、适应性酵母的用途和适应性酵母特别用于选自以下的组的禽类育种领域：-农禽类和鸡鸟，特别是母鸡，包括小鸡、公鸡和小公鸡、阉鸡和蛋鸡、火鸡母鸡和火鸡公鸡，-雁形目，特别是雄鸭、雌鸭、鹅和野鸡、珍珠鸡、鹌鹑和鹧鸪，-鸠鸽科，特别是鸽子，-平胸鸟类，特别是鸵鸟、鸸鹋和鹬鸵。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母的用途，其中反刍动物接受每天0.5g-50g的适应于弱有机酸的活性酵母，优选每天1g-10g的酵母。根据本发明的益生菌、饲料、适应性酵母的用途和适应性酵母特别用于牛科和骆驼科的反刍动物的饲养领域。牛科(bovids)(牛科(bovidae))包括几个亚科，特别包括牛科(bovines)(其包括牛(cattle))和羊亚科(caprinae)(其涵盖山羊家族成员和绵羊家族成员)。骆驼科(camelids)(骆驼科(camelidae))是涵盖例如单峰骆驼、骆驼或羊驼的偶蹄哺乳动物。根据本发明的益生菌包含至少90质量％的所选择的“适应性”活性酵母固体。将通过以下实施例来说明本发明，应当理解，所述实施例绝不限制范围。实施例实施例1：获得适应于弱有机酸的活性干酵母的方法1.1“标准”培养方法可以通过例如分批加料法通过在甜菜根糖蜜或甘蔗糖蜜上培养来获得酵母。培养方法包括如geraldreed和tilakw.nagodawithana(isbn0-442-31892-8)的参考书“yeasttechnology”第284-293页所述的一系列发酵步骤。1.2诱导适应的方法诱导适应于弱有机酸的方法对应于上述标准培养方法，并根据以下步骤进行了如下修改：1.酸化：培养结束前2-3h(参见上文，“标准”培养方法)和适应阶段之前，例如用硫酸将培养基的ph调整为4.0-5.5的值，并且保持到适应阶段结束；2.适应：将一定量的弱有机酸或其相关盐添加到培养基中，以便在培养基中获得按重量计为1500-3000ppm(百万分之一)的弱有机酸。弱酸添加剂量与所用弱酸或其相关盐的组成有关。培养基不含缓冲液。本领域技术人员将知晓如何调节ph和要使用的弱有机酸的量，而这不会带来过多的负担。1.3干燥为了获得大于90％的固体含量，根据本领域技术人员已知的技术通过干燥获得所选择的活性干酵母，即具有高含量活性酵母细胞的干酵母。实施例2：根据a1测试测量的适应性酵母和非适应性酵母的活性比率酵母a和b对应于2016年8月31日以编号i-5131保藏于cncm的非适应性菌株的2个不同批次a和b，即实施例1.2中所述的未经历所述适应方法的酵母。根据实施例1.1和1.2中所述的方法，在a1测试中使用的已经“适应性”酵母对应于同一酵母菌株i-5131的2个不同批次a和b。a1测试如上所述。a1测试的结果菌株活性(co2的ml)i-5131非适应性(a)103i-5131非适应性(b)113i-5131适应性(a)106i-5131适应性(b)132表1根据a1测试的适应性酵母i-5131与非适应性酵母i-5131的活性比率：批次比率批次(a)1.029批次(b)1.168表2结论：因此，根据本发明使用的适应性酵母具有大于1的比率。分别进行了其他测试，包括所有批次：-衍生自i-5131菌株的非适应性酵母批次，-衍生自i-5131菌株的适应于丙酸的酵母批次。下表3列出了获得的结果：结论：根据本发明使用的适应性活性酵母的比率大于1，考虑了所有批次。分别进行了其他测试，考虑了所有批次：-衍生自i-5129菌株的非适应性酵母批次，-衍生自i-5129菌株的适应于丙酸的酵母批次。下表4列出了获得的结果：结论：根据本发明使用的适应性活性酵母的比率大于1，考虑了所有批次。实施例3：测试用于饲养禽类的“适应性”酵母适应性活性干酵母在禽类养殖领域表现出令人惊讶的有利特性。这些令人惊讶的有利特性通过以下对小鸡的测试结果来说明。常规地，根据禽类育种领域的技术人员的知识，用于小鸡的饲料是增稠小麦，换句话说，是品质中等至劣质的小麦。这代表一种营养挑战，换句话说是一种压力。根据本领域技术人员的知识，用于改进这种小麦的消化性的手段之一是添加酶。在本发明的上下文中，不添加酶，这在成本方面代表了不小的优势。在该测试中，将通过将根据本发明的益生菌添加到小鸡的饲料中获得的结果与用这种无添加剂的饲料以及该饲料与非适应性的相同活性干酵母的混合物获得的结果进行比较。小鸡在对应于以下标准的小鸡群体上进行1-21天的测试：在测试开始时1日龄的ross小鸡。用于小鸡的粗粉饲料的组成粗粉饲料主要由根据如下组成的不含抗增稠酶的小麦和玉米组成(如上所解释)：成分含量(％)小麦40.0玉米39.8大豆粗粉16.6dl蛋氨酸0.1焦磷酸钙1.5碳酸钙1.0维生素-矿物质预混料0.6盐0.4表5用于小鸡的各种混合物的组成在下表6中给出。表6测试方案将小鸡群随机分为3个批次的2个重复样本，每批次6只笼子，每笼含20只小鸡，每只小鸡接受表5所示的待测混合物。从第一天开始，每组的小鸡随意喂食对应于测试批次的混合物。还提供小鸡自由饮水。小鸡没有其他食物来源。测量每组的粗粉消耗量。在测试期间的不同时间，分别在d0(1日龄鸡)，d+7天，d+14天，d+21天分别测量小鸡的活重。结果：表7给出了d+21天的测试结果，其中：-fi-x表示给定组的每只小鸡在x天后消耗的混合物的总平均量(以克计)(在此处为fi-21的情况下，是21天后)；-lw-x表示给定组的小鸡在x天后的平均活重(以克计)(在此处为lw-21的情况下，在21天后)；-fcr-x表示，一方面，给定组的小鸡在x天后的平均活重增加(以克计)，另一方面，给定组的每只小鸡消耗的混合物的总平均量(在此处为fcr-21的情况下，是21天后)之间的比率。sem是指平均值的标准误差。anova是指方差分析所用的不同字母a、b表示值在统计上是否不同。因此，当报告相同字母时，结果没有显著差异(p>0.05)。结论：结果表明，补充适应性酵母可以显著改进小鸡的生长(lw21)和饲料转化(fcr21)结果，而非适应性酵母则没有作用。实施例4：适应性活性酵母对反刍动物的理化和发酵参数的影响方案/方法说明在此实施例中选择的体外工具是“双流”方法，该方法已证明其具有有效模仿瘤胃中发酵的能力6,7。在常规的双流系统中，使用酸和碱将ph保持恒定。在该实施例中，ph仅由注入发酵反应器中的人工唾液的量和缓冲能力控制，使得动力学的理化参数以与在瘤胃中测量的相同的方式演变。在用于测量本发明参数的双流发酵系统中，使用者可以配置液体稀释和固体稀释的程度以在弱酸中毒或强酸中毒的情况下模仿瘤胃。它由二十四个1l生物反应器组成，该反应器配有2个侧臂，以排出固体颗粒并进料和泵送液体。每个生物反应器都有4个入口，即唾液进料口、气体出口、ph探针和氧化还原探针。通过在水浴中温育含有瘤胃液的生物反应器，将温度保持在39℃，并使用搅拌器搅拌内容物。用碳酸氢盐缓冲液8维持ph。ph和氧化还原电势(eh)使用多条目数据记录器实时记录。接种后，将系统密闭，并通过测量氧化还原电势评估厌氧状态。每天收集流出物。采样在瘤胃水平上带有插管的泌乳母牛，并收集液体，通过两层平纹细布过滤，并在无氧条件下与等体积的碳酸氢盐缓冲液混合。然后，将每个生物反应器填充至溢流状态，同时使其经受co2，并接种15克由玉米青贮、大豆油饼、干草和转化玉米组成的饲料。每天上午9点至下午4点进料每个生物反应器(15克颗粒)。最初，双流实验是根据stern等人8中的描述进行设计的。先前的研究表明，为了获得稳定的发酵方案，需要将饲料适应至少7天。在等当量的cfu中评估了不适应于和适应于丙酸钙或苯甲酸钠的活酵母菌株i-5129。将cfu的数量调整为具有等当量的cfu。在发酵的第16天和第17天建立的测量动力学上测量和组织诸如ph或氧化还原电势(eh)的理化参数，该动力学通过在测量的第16天和第17天的协变量周期进行校正。对来自瘤胃的液体(瘤胃液)进行了单独和全部vfa的分析，该液体取样自与ph和氧化还原电位测量相同的基础。通过连续测量软件在各个阶段(稳定和适应阶段)进行昼夜ph和eh记录。使用spss软件(il，chicago)通过线性混合模型收集和处理数据，并通过单变量模型处理发酵参数。每个单独发酵罐都被认为是一个实验单位。每种处理(酵母或无酵母)重复6次。在p<0.05时和倾向p<0.10时，处理效果显著不同，并且配对比较也是如此。结果在下表中：-“i-5129na”表示非适应性酵母，-“i-5129prop”表示适应于丙酸钙的酵母，-“i-5129benz”表示适应于苯甲酸钠的酵母。对照表示不存在酵母的瘤胃液样品。瘤胃pha，b：在同一行上带有同一后缀的平均值在统计学上彼此没有差异。ph对适应于丙酸钙的酵母作用显著。瘤胃氧化还原电位(eh)a，b：在同一行上带有同一后缀的平均值在统计学上彼此没有差异。相对于对照(-10mv)和非适应性酵母(-6mv)，使用适应于丙酸和苯甲酸盐的酵母i-5129的氧化还原电位动力学显著下降至较低值。适应性酵母的氧化还原电位eh的动力学相对于非适应性酵母显示出显著差异(-6mv)。a，b：在同一行上带有同一后缀的平均值在统计学上彼此没有差异。对于分别为非适应性和适应性酵母，eh值从-147.5mv到-166.0mv变化。结论适应性酵母显示较低的氧化还原电位值，这表明瘤胃培养基的还原能力得到增强。vfa浓度总vfa浓度范围从无酵母对照的90.4mm变化到具有适应于苯甲酸盐的酵母i-5129的93.7mm。相对于对照或相对于非适应性酵母i-5129(+1.4％或1.3mm/l)，采用适应于苯甲酸盐的酵母i-5129的总vfa浓度显著增加(+3.7％或3.3mm/l)。结论：适应于苯甲酸盐的酵母i-5129促进了更加还原性的瘤胃(ruminal)(瘤胃(rumen))培养基，从而导致更高的vfa含量。参考文献marden,j.p.,julien,c.,monteils,v.,auclair,e.,moncoulon,r.,bayourthe,c.,2008,howdoesliveyeastdifferfromsodiumbicarbonatetostabilizeruminalphinhighyieldingdairycows？j.dairysci.91,3528-3535.2.desnoyers,m.,giger-reverdin,s.,bertin,g.,duvaux-ponter,c.,sauvant,d.,2009,meta-analysisoftheinfluenceofsaccharomycescerevisiaesupplementationonruminalparametersandmilkproductionofruminants.j.dairysci.92(4),1620-1632.3.marden,j.p.,bayourthe,c.,enjalbert,f.,moncoulon,r.,2005,anewdeviceformeasuringkineticsofruminalphandredoxpotentialindairycows.j.dairysci.88,277-281.4.pinloche,e.,mcewan,n.,marden,j.p.,bayourthe,c.,auclair,e.,newbold,c.j.,2013,theeffectsofaprobioticyeastonthebacterialdiversityandpopulationstructureintherumenofcattle.plosone8(7):e67824.doi:10.1371/journal.pone.0067824.5.huangetal.,analysequantitativedel’effetdeslevuresvivantessurlepotentielredoxruminalchezlavachelaitière.rencontresautourdesrecherchessurlesruminants23,41.6.busquetm,calsamiglias,ferreta,cardozopw,kamelc(2005)effectsofcinnamaldehydeandgarlicoilonrumenmicrobialfermentationinadualflowcontinuousculture.jdairysci88:2508-2516.7.cerrato-sanchezm,calsamiglias,ferreta(2008)effectofthemagnitudeofthedecreaseofrumenphonrumenfermentationinadual-flowcontinuousculturesystem.janimsci86:378-383.8.m.d.stern,h.w.hoover(1990).thedualflowcontinuousculturesystem.proc.continuousculturefermenters:frustrationorfermentation,northwestadsa-asasregionalmeeting,chazy,ny(1990),pp.17-32.pct/ro/134表当前第1页1 2 3
背景技术：
：对于禽类多年来，具有生长因子作用的抗生素通常以非药物剂量被用于改进禽类育种的动物学表现。但是，该常规使用并非没有后果，例如发展细菌部分的抗生素耐药性。因此，在2006年，欧盟决定禁止在禽类中使用抗生素作为生长因子，以限制出现耐药现象。因此，生产者寻求抗生素的替代品。因此，益生菌在禽类中的使用已变得广泛。出售的用于禽类的大多数益生菌都是细菌来源的，主要来自芽孢杆菌家族，因为它们具有形成孢子的能力，因此可以抵抗禽类饲料生产中的高温胁迫。尽管已经注意到酵母，特别是酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)，可以对猪和牛牲畜的生长和表现产生积极作用，但尚未证明其对禽类的生长和增重的作用，而且通常作用非常有限且不明显。例如，us2002/0146399提出了一种可以添加到特别是用于禽类的动物饲料中的产品，其包含山梨酸和至少一种具有益生菌活性的微生物培养物，例如酿酒酵母的培养物。wo97/00017提出了一种特别是用于母鸡的益生菌，它含有藻粉、活性干酵母和矿物成分，该益生菌可能属于酿酒酵母物种。另外，欧盟目前没有授权将酵母作为用于禽类的益生菌。因此，真正需要找到有效的“酵母益生菌”，从而使得可以改进禽类的生长和增重表现以及消耗指数(ci)。术语“酵母益生菌”旨在表示包含酵母或具有益生菌功能的酵母的益生菌。“酵母益生菌”也可以表示为“益生菌酵母”。对于反刍动物反刍动物中常见的酸中毒构成反刍动物现代营养学的主要关注点之一。事实上，生产潜力的增加导致食物摄入的能量更高。结果，动物的瘤胃(胃)必须处理增加量的可发酵有机物，并且由此产生的更强烈的发酵导致具有不利的动物学作用的酸中毒状态：消极的消化相互作用、牛奶中黄油含量的降低、病理性消化和代谢状况等。酸中毒可归纳为由于瘤胃中的ph(瘤胃ph)下降而导致的酸碱平衡紊乱，这是由于可发酵碳水化合物的降解所致，瘤胃中的细菌迅速消化了碳水化合物，产生了挥发性脂肪酸(vfa)和乳酸。在正常情况下，瘤胃乳头吸收vfa和乳酸，以帮助动物生产牛奶。当vfa和乳酸的产生超过瘤胃乳头吸收它们的能力时，就会发生酸中毒。为了抵消反刍动物，特别是奶牛的酸中毒状态，文献中已经提出了各种饲料添加剂，包括益生菌酵母。实际上，益生菌酵母因其在瘤胃环境中的稳定作用而闻名。几项研究1,2证明了活酵母对瘤胃ph的影响，即使瘤胃ph高度依赖于饮食，特别是取决于构成所述饮食的食物的性质。在高产奶牛中，用活酵母补充食物摄入量是一种用于限制使用产酸饮食对反刍动物的消化和表现的负面作用的有利的解决方案。除了测量瘤胃ph值外，测量瘤胃氧化-还原电位(氧化还原电位)(以mv为单位的eh)已被证明是了解活酵母作用方法的关键工具3。氧化还原电势是不仅可以用于了解瘤胃的工作原理，还可以用于了解益生菌酵母的瘤胃作用的目标理化参数。因此，在文献4中已经表明，当瘤胃功能障碍的风险足够高时，活酵母对瘤胃eh的调节特别有效4。但是，目前仍然需要找到用于预防和/或治疗反刍动物酸中毒的有效解决方案。技术实现要素：从它们特别适应于弱有机酸的意义上说，本发明人已经开发并建立了具有特殊性质的新型活性酵母。因此，根据第一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的这些新型活性酵母。根据第二方面，本发明涉及这些适应性活性酵母在禽类或反刍动物中的用途。根据另一方面，本发明涉及用于禽类或用于反刍动物的益生菌，其特征在于，其包含适应于弱有机酸的活性酵母。发明人还建立了包含根据本发明的益生菌的用于禽类或用于反刍动物的饲料。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母用于改进禽类的动物学表现的用途。为了本发明的目的，表述“禽类的动物学表现的改进”旨在表示禽类的生长和增重表现以及消耗指数(ci)的改进。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母或包含其的益生菌，其用于预防和/或治疗反刍动物的消化系统疾病，特别是预防反刍动物的酸中毒。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母在用于禽类或用于反刍动物的饲料中的用途。有利地，使用根据本发明的适应性酵母或益生菌使得可以避免向饲料中添加酶。具体实施方式本发明的一个主题是适应于弱有机酸的酿酒酵母活性酵母，其特征在于，其衍生自选自分别于2010年12月2日以编号i-4407，于2016年8月31日以编号i-5128、i-5129、i-5130和i-5131，以及于2017年8月30日以编号i-5222和i-5223保藏于cncm的菌株的菌株，并且其特征在于，衍生自选自i-4407、i-5128、i-5129、i-5130、i-5131、i-5222和i-5223的菌株的根据a1测试的所述适应性活性酵母的活性与衍生自选自i-4407、i-5128、i-5129、i-5130、i-5131、i-5222和i-5223的相同菌株的根据a1测试的非适应性活性酵母的活性之比大于或等于1。术语“酵母”表示通过培养酵母菌株获得的酵母。酵母菌株的培养在适应于酵母菌株生长的培养基中进行。本领域技术人员能够根据geraldreed和tilakw.nagodawithana在参考书“yeasttechnology”(isbn0-442-31892-8)第284-293页中描述的方案，来测定适于给定酵母菌株的培养基的组成。实施例1中描述了用于培养菌株并获得适应于弱有机酸的酵母的方法。与活酵母同义的术语“活性酵母”表示具有代谢活性的酵母细胞群。表述“衍生自菌株的活性酵母...”旨在表示通过培养和适应菌株获得的酵母。表述“适应于弱有机酸的活性酵母”旨在表示由于先前暴露于该酸而提高了对给定弱有机酸的耐受性的酵母(warth,1988,appl.environ.microbiol.,54(8):2091-2095)。因此，当适应性酵母至少第二次处于存在弱有机酸的情况下，所述酵母的生长和发酵能力不会被抑制。为了本发明的目的，术语“适应于弱有机酸的活性酵母”、“适应于弱有机酸的酵母”、“适应性酵母”、“适应性活性酵母”具有相同的含义。术语“弱有机酸”旨在表示有机酸本身及其盐。它们选自下组：丙酸、苯甲酸、乙酸、丁酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、乳酸、苹果酸和山梨酸及其盐，特别是钙盐或钠盐。作为更具体实例，将提及适应于丙酸或苯甲酸的盐的酵母，优选适应于丙酸钙或苯甲酸钠的酵母。基于专利us4318991中描述的方法，在实施例1中描述了用于获得适应于弱有机酸的酵母的方法。更特别地，通过在其最终增殖阶段的最后几个小时期间，通过在每升培养基中添加0.1g-10g的弱有机酸和/或其盐，使本发明的酵母适应于弱有机酸的存在。根据本发明的一个具体实施方案，酿酒酵母活性酵母更特别是布拉迪酵母(saccharomycescerevisiaevar.boulardii)，其也被称为布拉氏酵母(saccharomycesboulardii.)。有利地，本发明的主题是适应性活性酵母或包含其的益生菌，其中根据a1测试的适应性活性酵母与非适应性活性酵母的活性之率大于或等于1。因此，根据本发明，所选活性酵母是酿酒酵母属的活性酵母，其特征在于，根据a1测试的该所选“适应性”活性酵母与非适应性酵母的活性的如下比率大于或等于1：根据a1测试的适应性酵母的活性根据a1测试的非适应性酵母的活性。所述a1测试对应于以下方案：根据由b.godon和w.loisel配合完成的参考书“guidepratiqued’analysesdanslesindustriesdecéréales”[“practicalguidetoanalysesincerealindustries”](publishedbylavoisier-tec&doc-1997-isbn.2-7430-0123-2-2ndedition)第579-584页中所述的标准方法，用burrows和harrisson发酵仪测量活性酵母释放的co2体积2小时，其使用以下适应性程序：(a)分批称量20克面粉，该面粉是hagberg下落时间为200-300秒(如上述参考书第680和681页所定义)的软质小麦粉，并将其置于干洗管中，然后向每支管中加入2g蔗糖，并在开始测试前将试管在30℃的水浴架中孵育至少30分钟；(b)取相当于1.066克酵母固体的酵母样品；(c)在100ml的蒸馏水中制备稀释的酵母样品(干酵母方法描述于上述参考书的第583页)，并在调整至100ml之前添加0.5ml浓度为6.6％(w/v)的乙酸；(d)用移液管吸取15ml混合所需的充分混合的稀释样品，这15ml提供1.066g×0.15＝0.160g的酵母固体；其余遵循参考书中所述的程序说明，在2个小时内进行测量。为了考虑干燥对酵母活性的影响，根据a1测试的活性酵母的活性定义如下：·所测试的酵母为干燥形式，即固体含量至少为90％，其活性对应于测得的co2体积。根据本发明的另一个具体实施方案，通过对选自分别于2016年8月31日以编号i-5128、i-5129、i-5130和i-5131，于2017年8月30日以编号i-5222和i-5223以及于2010年12月2日以编号i-4407保藏于thecollectionnationaledeculturesdemicroorganismes[frenchnationalmicroorganismculturecollection]，25ruedudocteurroux75724pariscedex15的菌株中的酿酒酵母菌株进行培养和适应，从而获得适应于弱有机酸的酵母，所述酵母优选包括在用于禽类或用于反刍动物的益生菌中。实际上，发明人惊奇地发现，在其培养期间经历了对弱有机酸的适应过程的酵母在禽类或反刍动物中比没有经历该过程的酵母更有效。因此，这些“适应性”酵母使得可以特别地改进生长和增重表现以及相对于禽类的增重的饲料消耗转化指数。禽类的表述“相对于增重的饲料消耗转化指数”旨在表示禽类的消耗指数。消耗指数(ci)是禽鸟为了摄取1千克活重而摄入的饲料量(以千克计)。出人意料的是，在反刍动物中，本发明的适应性活性酵母使得可以特别地改进反刍动物的理化参数(诸如ph或氧化还原电位)的调节，从而预防和/或治疗反刍动物的酸中毒。根据本发明的另一具体实施方案，适应于弱有机酸的酵母为干燥形式。术语“干酵母”旨在表示固体含量大于90％的任何酵母。活性干酵母是一种活酵母，其被干燥以保留其发酵能力并具有很长的保质期。所述活性干酵母具有高含量的活酵母细胞，并且可以是各种形式，例如为小球、颗粒或粉末的形式，所有这些形式的平均水含量为4-8％。干燥根据本领域技术人员已知的并且与细胞存活力相容的任何方法进行，也就是说，可以保留高含量的活细胞。本领域技术人员还知晓，取决于进行的干燥类型，活细胞的含量或多或少地较高，并且可以影响a1测试中的性能。固体的重量通过本领域技术人员已知的常规方法确定。根据本发明的另一个实施方案，适应性活性酵母为颗粒、微球或粗粉的形式，或水可分散形式。本发明的另一主题是益生菌，其包含如上文所定义的适应于弱有机酸的活性酵母。术语“益生菌”旨在表示当摄入足够量的活微生物时，对健康的影响超出传统的营养作用。如上定义的益生菌包含至少90重量％的适应性活性酵母的固体。更特别地，本发明的益生菌是用于禽类或用于反刍动物的益生菌。根据另一方面，本发明涉及用于禽类或用于反刍动物的包含上述益生菌的饲料。根据本发明的益生菌和用于禽类或反刍动物的饲料还可以包含除所述适应性活性酵母以外的一种或多种成分，诸如特别是维生素、膳食矿物质、微量元素、膳食酶、酸化剂、植物提取物、酵母壁和膳食脂肪、以及在适当情况下，其他具有益生菌作用的微生物。根据禽类育种领域的技术人员的知识，鸡的生长期是从出生到35-42天。在此期间，它的重量从30到50克增加到2到3千克，在10天的时间内质量增加了5到6倍。就其数量而言，其食物优先根据其年龄而固定。根据本发明的一个具体实施方案，并基于禽类的重量，该动物接受每天每千克106-1011cfu的适应于弱有机酸的活性酵母的饲料，优选每天109-1011cfu/kg的饲料，甚至更优选每天109-1010cfu/kg的饲料。术语cfu是指菌落形成单位，一个cfu对应于一个菌落。根据另一方面，本发明涉及一种用于改进动物的动物学表现，特别是用于改进禽类的生长和增重表现以及禽类的消耗指数的方法，该方法在于为动物提供适应于弱有机酸的活性酵母，特别是每天每千克106-1011cfu的适应于弱有机酸的活性酵母的饲料，优选每天109-1011cfu/kg的饲料，甚至更优选每天109-1010cfu/kg的饲料。根据另一方面，本发明涉及适应于有机酸的活性酵母在改进禽类的动物学表现中的用途。术语“动物学表现”旨在表示动物的生长表现、质量或体重增加、消耗指数和动物的育种参数。实际上已经注意到，在禽类中使用适应性酵母使得可以提高增重和所摄取的饲料量，并且可以改进相对于增重的饲料消耗指数，特别是在生长的禽类中。更特别地，本发明的主题是如上所定义的适应性活性酵母或如上所定义的益生菌在禽类中特别是用于改进禽类的生长和增重表现以及消耗指数(ci)的用途。本发明的主题还在于如上定义的适应性活性酵母或如上定义的益生菌在反刍动物中的用途。更特别地，在反刍动物中该用途使得可以对瘤胃的理化参数(诸如ph或氧化还原电位)起作用，但是也可以对发酵参数(例如瘤胃中存在的vfa的含量)起作用。根据本发明的一个有利实施方案，使用适应性活性酵母使得可以将瘤胃的ph值维持和/或重建为大于或等于5.82。根据另一个有利实施方案，使用本发明的适应性活性酵母使得可以将瘤胃的氧化还原电位维持和/或重新建立在-200mv至-150mv的范围内。上述ph和氧化还原电位值对应于通过以下实施例4中所述的测量方法获得的ph和氧化还原电位。根据又一个有利实施方案，使用本发明的适应性活性酵母使得可以增加瘤胃中的vfa浓度。通过如上所述作用于理化或发酵参数，本发明的适应性活性酵母有利地使得可以作用于反刍动物的酸中毒，并且更特别地防止反刍动物中的瘤胃酸中毒。因此，本发明的主题还在于如上所定义的适应性活性酵母或如上所定义的益生菌，其用于预防和/或治疗反刍动物的消化系统疾病，更特别地用于预防或反刍动物的酸中毒。根据另一方面，本发明涉及用于预防和/或治疗反刍动物酸中毒的方法，其在于为该动物提供适应于弱有机酸的活性酵母，特别是每个动物每天以0.5g-50g的适应性活性酵母的量，优选每个动物每天1g-10g的适应性酵母的量。根据另一方面，本发明涉及如上所述的适应于有机酸的活性酵母在用于禽类或用于反刍动物的益生菌和/或饲料中的用途。本发明的一个主题是如上定义的适应性活性酵母或如上定义的益生菌在用于禽类或用于反刍动物的饲料中的用途。根据本发明的另一个具体实施方案，适应于有机酸和/或益生菌的活性酵母以适合用于膳食基质的形式使用，所述基质例如是颗粒、粗粉或饮用水。适应于弱有机酸的酵母和/或益生菌例如当与饲料混合时呈颗粒或粗粉形式，而当与饮用水混合时呈水可分散形式。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母的用途，其中所述动物，特别是体重为30-3000g的禽类，接受每天每千克106-1011cfu的适应于弱有机酸的活性酵母的饲料，优选每天109-1011cfu/kg的饲料，甚至更优选每天109-1010cfu/kg的饲料。根据本发明的益生菌、饲料、适应性酵母的用途和适应性酵母特别用于选自以下的组的禽类育种领域：-农禽类和鸡鸟，特别是母鸡，包括小鸡、公鸡和小公鸡、阉鸡和蛋鸡、火鸡母鸡和火鸡公鸡，-雁形目，特别是雄鸭、雌鸭、鹅和野鸡、珍珠鸡、鹌鹑和鹧鸪，-鸠鸽科，特别是鸽子，-平胸鸟类，特别是鸵鸟、鸸鹋和鹬鸵。根据另一方面，本发明涉及适应于弱有机酸的活性酵母的用途，其中反刍动物接受每天0.5g-50g的适应于弱有机酸的活性酵母，优选每天1g-10g的酵母。根据本发明的益生菌、饲料、适应性酵母的用途和适应性酵母特别用于牛科和骆驼科的反刍动物的饲养领域。牛科(bovids)(牛科(bovidae))包括几个亚科，特别包括牛科(bovines)(其包括牛(cattle))和羊亚科(caprinae)(其涵盖山羊家族成员和绵羊家族成员)。骆驼科(camelids)(骆驼科(camelidae))是涵盖例如单峰骆驼、骆驼或羊驼的偶蹄哺乳动物。根据本发明的益生菌包含至少90质量％的所选择的“适应性”活性酵母固体。将通过以下实施例来说明本发明，应当理解，所述实施例绝不限制范围。实施例实施例1：获得适应于弱有机酸的活性干酵母的方法1.1“标准”培养方法可以通过例如分批加料法通过在甜菜根糖蜜或甘蔗糖蜜上培养来获得酵母。培养方法包括如geraldreed和tilakw.nagodawithana(isbn0-442-31892-8)的参考书“yeasttechnology”第284-293页所述的一系列发酵步骤。1.2诱导适应的方法诱导适应于弱有机酸的方法对应于上述标准培养方法，并根据以下步骤进行了如下修改：1.酸化：培养结束前2-3h(参见上文，“标准”培养方法)和适应阶段之前，例如用硫酸将培养基的ph调整为4.0-5.5的值，并且保持到适应阶段结束；2.适应：将一定量的弱有机酸或其相关盐添加到培养基中，以便在培养基中获得按重量计为1500-3000ppm(百万分之一)的弱有机酸。弱酸添加剂量与所用弱酸或其相关盐的组成有关。培养基不含缓冲液。本领域技术人员将知晓如何调节ph和要使用的弱有机酸的量，而这不会带来过多的负担。1.3干燥为了获得大于90％的固体含量，根据本领域技术人员已知的技术通过干燥获得所选择的活性干酵母，即具有高含量活性酵母细胞的干酵母。实施例2：根据a1测试测量的适应性酵母和非适应性酵母的活性比率酵母a和b对应于2016年8月31日以编号i-5131保藏于cncm的非适应性菌株的2个不同批次a和b，即实施例1.2中所述的未经历所述适应方法的酵母。根据实施例1.1和1.2中所述的方法，在a1测试中使用的已经“适应性”酵母对应于同一酵母菌株i-5131的2个不同批次a和b。a1测试如上所述。a1测试的结果菌株活性(co2的ml)i-5131非适应性(a)103i-5131非适应性(b)113i-5131适应性(a)106i-5131适应性(b)132表1根据a1测试的适应性酵母i-5131与非适应性酵母i-5131的活性比率：批次比率批次(a)1.029批次(b)1.168表2结论：因此，根据本发明使用的适应性酵母具有大于1的比率。分别进行了其他测试，包括所有批次：-衍生自i-5131菌株的非适应性酵母批次，-衍生自i-5131菌株的适应于丙酸的酵母批次。下表3列出了获得的结果：结论：根据本发明使用的适应性活性酵母的比率大于1，考虑了所有批次。分别进行了其他测试，考虑了所有批次：-衍生自i-5129菌株的非适应性酵母批次，-衍生自i-5129菌株的适应于丙酸的酵母批次。下表4列出了获得的结果：结论：根据本发明使用的适应性活性酵母的比率大于1，考虑了所有批次。实施例3：测试用于饲养禽类的“适应性”酵母适应性活性干酵母在禽类养殖领域表现出令人惊讶的有利特性。这些令人惊讶的有利特性通过以下对小鸡的测试结果来说明。常规地，根据禽类育种领域的技术人员的知识，用于小鸡的饲料是增稠小麦，换句话说，是品质中等至劣质的小麦。这代表一种营养挑战，换句话说是一种压力。根据本领域技术人员的知识，用于改进这种小麦的消化性的手段之一是添加酶。在本发明的上下文中，不添加酶，这在成本方面代表了不小的优势。在该测试中，将通过将根据本发明的益生菌添加到小鸡的饲料中获得的结果与用这种无添加剂的饲料以及该饲料与非适应性的相同活性干酵母的混合物获得的结果进行比较。小鸡在对应于以下标准的小鸡群体上进行1-21天的测试：在测试开始时1日龄的ross小鸡。用于小鸡的粗粉饲料的组成粗粉饲料主要由根据如下组成的不含抗增稠酶的小麦和玉米组成(如上所解释)：成分含量(％)小麦40.0玉米39.8大豆粗粉16.6dl蛋氨酸0.1焦磷酸钙1.5碳酸钙1.0维生素-矿物质预混料0.6盐0.4表5用于小鸡的各种混合物的组成在下表6中给出。表6测试方案将小鸡群随机分为3个批次的2个重复样本，每批次6只笼子，每笼含20只小鸡，每只小鸡接受表5所示的待测混合物。从第一天开始，每组的小鸡随意喂食对应于测试批次的混合物。还提供小鸡自由饮水。小鸡没有其他食物来源。测量每组的粗粉消耗量。在测试期间的不同时间，分别在d0(1日龄鸡)，d+7天，d+14天，d+21天分别测量小鸡的活重。结果：表7给出了d+21天的测试结果，其中：-fi-x表示给定组的每只小鸡在x天后消耗的混合物的总平均量(以克计)(在此处为fi-21的情况下，是21天后)；-lw-x表示给定组的小鸡在x天后的平均活重(以克计)(在此处为lw-21的情况下，在21天后)；-fcr-x表示，一方面，给定组的小鸡在x天后的平均活重增加(以克计)，另一方面，给定组的每只小鸡消耗的混合物的总平均量(在此处为fcr-21的情况下，是21天后)之间的比率。sem是指平均值的标准误差。anova是指方差分析所用的不同字母a、b表示值在统计上是否不同。因此，当报告相同字母时，结果没有显著差异(p>0.05)。结论：结果表明，补充适应性酵母可以显著改进小鸡的生长(lw21)和饲料转化(fcr21)结果，而非适应性酵母则没有作用。实施例4：适应性活性酵母对反刍动物的理化和发酵参数的影响方案/方法说明在此实施例中选择的体外工具是“双流”方法，该方法已证明其具有有效模仿瘤胃中发酵的能力6,7。在常规的双流系统中，使用酸和碱将ph保持恒定。在该实施例中，ph仅由注入发酵反应器中的人工唾液的量和缓冲能力控制，使得动力学的理化参数以与在瘤胃中测量的相同的方式演变。在用于测量本发明参数的双流发酵系统中，使用者可以配置液体稀释和固体稀释的程度以在弱酸中毒或强酸中毒的情况下模仿瘤胃。它由二十四个1l生物反应器组成，该反应器配有2个侧臂，以排出固体颗粒并进料和泵送液体。每个生物反应器都有4个入口，即唾液进料口、气体出口、ph探针和氧化还原探针。通过在水浴中温育含有瘤胃液的生物反应器，将温度保持在39℃，并使用搅拌器搅拌内容物。用碳酸氢盐缓冲液8维持ph。ph和氧化还原电势(eh)使用多条目数据记录器实时记录。接种后，将系统密闭，并通过测量氧化还原电势评估厌氧状态。每天收集流出物。采样在瘤胃水平上带有插管的泌乳母牛，并收集液体，通过两层平纹细布过滤，并在无氧条件下与等体积的碳酸氢盐缓冲液混合。然后，将每个生物反应器填充至溢流状态，同时使其经受co2，并接种15克由玉米青贮、大豆油饼、干草和转化玉米组成的饲料。每天上午9点至下午4点进料每个生物反应器(15克颗粒)。最初，双流实验是根据stern等人8中的描述进行设计的。先前的研究表明，为了获得稳定的发酵方案，需要将饲料适应至少7天。在等当量的cfu中评估了不适应于和适应于丙酸钙或苯甲酸钠的活酵母菌株i-5129。将cfu的数量调整为具有等当量的cfu。在发酵的第16天和第17天建立的测量动力学上测量和组织诸如ph或氧化还原电势(eh)的理化参数，该动力学通过在测量的第16天和第17天的协变量周期进行校正。对来自瘤胃的液体(瘤胃液)进行了单独和全部vfa的分析，该液体取样自与ph和氧化还原电位测量相同的基础。通过连续测量软件在各个阶段(稳定和适应阶段)进行昼夜ph和eh记录。使用spss软件(il，chicago)通过线性混合模型收集和处理数据，并通过单变量模型处理发酵参数。每个单独发酵罐都被认为是一个实验单位。每种处理(酵母或无酵母)重复6次。在p<0.05时和倾向p<0.10时，处理效果显著不同，并且配对比较也是如此。结果在下表中：-“i-5129na”表示非适应性酵母，-“i-5129prop”表示适应于丙酸钙的酵母，-“i-5129benz”表示适应于苯甲酸钠的酵母。对照表示不存在酵母的瘤胃液样品。瘤胃pha，b：在同一行上带有同一后缀的平均值在统计学上彼此没有差异。ph对适应于丙酸钙的酵母作用显著。瘤胃氧化还原电位(eh)a，b：在同一行上带有同一后缀的平均值在统计学上彼此没有差异。相对于对照(-10mv)和非适应性酵母(-6mv)，使用适应于丙酸和苯甲酸盐的酵母i-5129的氧化还原电位动力学显著下降至较低值。适应性酵母的氧化还原电位eh的动力学相对于非适应性酵母显示出显著差异(-6mv)。a，b：在同一行上带有同一后缀的平均值在统计学上彼此没有差异。对于分别为非适应性和适应性酵母，eh值从-147.5mv到-166.0mv变化。结论适应性酵母显示较低的氧化还原电位值，这表明瘤胃培养基的还原能力得到增强。vfa浓度总vfa浓度范围从无酵母对照的90.4mm变化到具有适应于苯甲酸盐的酵母i-5129的93.7mm。相对于对照或相对于非适应性酵母i-5129(+1.4％或1.3mm/l)，采用适应于苯甲酸盐的酵母i-5129的总vfa浓度显著增加(+3.7％或3.3mm/l)。结论：适应于苯甲酸盐的酵母i-5129促进了更加还原性的瘤胃(ruminal)(瘤胃(rumen))培养基，从而导致更高的vfa含量。参考文献marden,j.p.,julien,c.,monteils,v.,auclair,e.,moncoulon,r.,bayourthe,c.,2008,howdoesliveyeastdifferfromsodiumbicarbonatetostabilizeruminalphinhighyieldingdairycows？j.dairysci.91,3528-3535.2.desnoyers,m.,giger-reverdin,s.,bertin,g.,duvaux-ponter,c.,sauvant,d.,2009,meta-analysisoftheinfluenceofsaccharomycescerevisiaesupplementationonruminalparametersandmilkproductionofruminants.j.dairysci.92(4),1620-1632.3.marden,j.p.,bayourthe,c.,enjalbert,f.,moncoulon,r.,2005,anewdeviceformeasuringkineticsofruminalphandredoxpotentialindairycows.j.dairysci.88,277-281.4.pinloche,e.,mcewan,n.,marden,j.p.,bayourthe,c.,auclair,e.,newbold,c.j.,2013,theeffectsofaprobioticyeastonthebacterialdiversityandpopulationstructureintherumenofcattle.plosone8(7):e67824.doi:10.1371/journal.pone.0067824.5.huangetal.,analysequantitativedel’effetdeslevuresvivantessurlepotentielredoxruminalchezlavachelaitière.rencontresautourdesrecherchessurlesruminants23,41.6.busquetm,calsamiglias,ferreta,cardozopw,kamelc(2005)effectsofcinnamaldehydeandgarlicoilonrumenmicrobialfermentationinadualflowcontinuousculture.jdairysci88:2508-2516.7.cerrato-sanchezm,calsamiglias,ferreta(2008)effectofthemagnitudeofthedecreaseofrumenphonrumenfermentationinadual-flowcontinuousculturesystem.janimsci86:378-383.8.m.d.stern,h.w.hoover(1990).thedualflowcontinuousculturesystem.proc.continuousculturefermenters:frustrationorfermentation,northwestadsa-asasregionalmeeting,chazy,ny(1990),pp.17-32.pct/ro/134表当前第1页1 2 3
起点商标作为专业知识产权交易平台，可以帮助大家解决很多问题，如果大家想要了解更多知产交易信息请点击 【在线咨询】或添加微信 【19522093243】
与客服一对一沟通，为大家解决相关问题。
此文章来源于网络,如有侵权,请联系删除
热门咨询
tips