一种以鸡蛋溶菌酶淀粉样纤维为材料包埋和稳定胡萝卜素的方法与流程

本发明涉及鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维溶液制备并包埋胡萝卜素及检测胡萝卜素稳定性的技术领域。

背景技术：

胡萝卜素是一种具有生理活性的物质，在抗氧化、抗癌、增强免疫、预防心血管疾病、防治白内障和保护肝脏等方面有着重要的作用。然而作为亲脂性的化合物，胡萝卜素极易受热、紫外线、过渡金属、氧和自由基的迫害而降解，这极大地限制了其在食品、医药行业的应用范围。近年来，用乳液包埋胡萝卜素达到提高脂溶性胡萝卜素的稳定性、水溶性、生物有效性的目的成为食品科技领域的研究热点之一。高内相乳液因其高内相特性而在功能性物质的包埋负载上有着巨大的应用前景。大量低分子或高分子表面活性剂常用于稳定乳液，但是，表面活性剂具有一定的生物毒性，不适合应用于食品、医药行业。随之，关于用蛋白类的大分子食品级的物质稳定乳液的研究内容引起越来越多的关注，球蛋自以及球蛋白聚集体在高内相乳液领域已有较多研究，但纤维状蛋白聚集体未见报道。本发明所用的鸡蛋清溶菌酶来源于鸡蛋清，且转化为淀粉样纤维后仍具有良好的生物相容性、安全性。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种利用鸡蛋清溶菌酶转化为淀粉样纤维后包埋胡萝卜素并提高胡萝卜素稳定性的方法。

本方法的技术方案如下：

(1)溶菌酶淀粉样纤维的制备，其特征在于：对鸡蛋清溶菌酶用超纯水于4℃下透析纯化，然后对透析后溶菌酶溶液进行冻干处理。称取一定质量的鸡蛋清溶菌酶冻干粉溶于超纯水中制得2wt％鸡蛋清溶菌酶溶液，用2mhcl调节ph至2，在90℃下，磁力搅拌孵育8h后制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维母液。将鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维母液(2wt％，ph2)与bis-tris缓冲液(10mm，ph7.2)按体积比1∶3稀释，得到ph6的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维。在鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维溶液(2wt％，ph2)与bis-tris缓冲液体积比相同的情况下，将无鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维的ph2去离子水与bis-tris缓冲液混合，制备相应的空白工作溶液(ws)。将鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维工作液与相应的空白工作液稀释，制备ph值相同的不同浓度样品。

(2)包埋胡萝卜素溶菌酶淀粉样纤维乳液的制备，其特征在于：称取一定质量的胡萝卜素溶于油中，将步骤(1)所得的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维与油溶液以一定的体积比混合，利用分散机以10000rpm分散2分钟，形成乳液；

(3)包埋胡萝卜素的溶菌酶淀粉样纤维乳液在紫外光、高温，三价铁离子条件下的保留率测定，其特征在于：乳液静置半小时后，将乳液置于不同的环境条件下(紫外光，高温，三价铁离子)处理4～6小时。萃取不同样品中的胡萝卜素，在450nm条件下用紫外分光光度计测量吸光值，对比胡萝卜素标曲，计算胡萝卜素的保留率。经过4～6小时处理，鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维稳定的乳液中的胡萝卜素的保留率明显高于直接溶解在油里的胡萝卜素。

本发明具有以下优点；

首次将淀粉样纤维应用于高内相乳液，大大提高了胡萝卜素负载量。

鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维稳定的乳液中的胡萝卜素的保留率明显高于直接溶解在油里的胡萝卜素。

附图说明

图1胡萝卜素在紫外光照条件下4小时的保留率变化曲线

图2胡萝卜素在90℃加热条件下6小时的保留率变化曲线

图3胡萝卜素在氯化铁存在条件下6小时的保留率变化曲线

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行进一步描述。所描述的实施例是本发明的部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一：

(1)对鸡蛋清溶菌酶用超纯水于4℃下透析纯化，然后对透析后溶菌酶溶液进行冻干处理。称取一定质量的鸡蛋清溶菌酶冻干粉溶于超纯水中制得2wt％鸡蛋清溶菌酶溶液，用2mhcl调节ph至2，在90℃下，磁力搅拌孵育8h后制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维母液。将鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维母液(2wt％，ph2)与bis-tris缓冲液(10mm，ph7.2)按体积比1∶3稀释，得到ph6的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维。在鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维溶液(2wt％，ph2)与bis-tris缓冲液体积比相同的情况下，将无鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维的ph2去离子水与bis-tris缓冲液混合，制备相应的空白工作溶液(ws)。将鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维工作液用空白工作液稀释一倍，制得ph6的0.25wt％溶菌酶淀粉样纤维。

(2)称取一定质量的胡萝卜素溶于油中，将步骤(1)所得的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维与油溶液按1∶3体积比混合，利用分散机以10000rpm分散2分钟，形成胡萝卜素含量为0.01wt％的油相体积比为75％的高内相乳液；

(3)乳液静置半小时后，将乳液置于不同的环境条件下(紫外光，高温，三价铁离子)处理4～6小时。萃取不同样品中的胡萝卜素，在450nm条件下用紫外分光光度计测量吸光值，对比胡萝卜素标曲，计算胡萝卜素的保留率。经过4～6小时处理，鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维稳定的乳液中的胡萝卜素的保留率明显高于直接溶解在油里的胡萝卜素。

实施例二：

(1)胡萝卜素标曲的测定

称取一定量的胡萝卜素溶于油，配制成不同浓度，其浓度梯度为0.1μg/ml、1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml，在450nm的波长下，用紫外分光光度计测定相应的吸光值，绘制曲线，拟合方程。

(2)胡萝卜素萃取

称取一定质量的乳液，加入0.5ml萃取剂(乙醇∶正己烷＝2∶3)，涡旋混匀，12000rpm离心1分钟，取上清液，加入合适体积的正己烷稀释，用分光光度计检测450nm条件下的吸光值。

从图1～图3可以看出，以鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维为乳化剂的乳液包埋的胡萝卜素在紫外光，90℃高温，三价铁离子条件下的稳定性显著提高。

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