淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒及其制法与应用的制作方法

2021-01-07 10:01:31|

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本发明属于乳化技术领域，具体涉及一种淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒及其制法与应用，尤其涉及一种中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒及其制备方法，以及中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒于制备w2/o2/(o1/w1)多重乳液中的应用。

背景技术：

茶多酚酯作为一种具有较强自由基清除率的新型抗氧化剂，同时又保留了茶多酚一些特殊的生理功效，近年来在食品及药品领域被广泛的研究。然而多酚含有的多个酚羟基基团使得它们对光、高温和碱性条件不稳定，同时生物利用度也有所降低。许多研究表明多酚与生物聚合物的共价结合可能増加其物理稳定性，抗氧化活性和生物利用度。

多重乳液的制备在食品、医药、化妆品和农业等领域的广泛应用而成为研究的热点。与传统的乳液相比，多重乳液由于内部区域的划分，导致其在微胶囊化、缓释及低脂食品的研发方面具有独特的优势。与传统的乳液相比，多重乳液由于内部结构的划分，在食品工业中的应用具有独特的优势，例如作为营养活性成分的递送载体，作为敏感性活性成分的保护层，油溶性和水溶性成分的双向递送，药物控释等。然而，由于油滴的絮凝，聚结和内外水相组分的迁移导致多重乳液的热力学不稳定特性，其应用受到很大限制。近年来，可食用颗粒型乳化剂的研究引起了人们广大的兴趣，其能够不可逆的吸附于油水界面，形成界面层，赋予乳液良好的稳定性。用可食用纳米颗粒代替至少一种类型的表面活性剂分子为多重乳液的稳定提供了新的方法。纳米颗粒吸附在油水界面形成界面膜，阻碍了界面处乳化剂之间的交换和液滴薄膜间水分的排出，提高了抑制液滴聚结和ostwald熟化的能力。另外，多重乳液中的脂质类生物活性物质在储藏过程中容易发生氧化。研究表明界面是乳液发生氧化的主要场所，构建具有抗氧化活性的界面是提高乳液氧化稳定性的有效方式。

因此，因此如何构建抗氧化性纳米颗粒，并将其应用于多重乳液的制备，对提高多重乳液的稳定性和脂质的抗氧化性，扩大其在食品，医药以及化妆品领域的应用具有重要意义。

技术实现要素：

本发明的主要目的在于提供一种淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒及其制法与应用，以克服现有技术的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒的制备方法，其包括：

使包含玉米醇溶蛋白、茶多酚酯、氢氧化钠、乙醇和水的第一混合反应体系于25℃反应24h，获得玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物，之后使包含玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物、碳酸钠、乙醇和水的第二混合反应体系于25℃反应4h，获得中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒；

使包含羧甲基糊精、茶多酚酯、乙醇和水的第三混合反应体系发生共沉淀反应，获得羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物；

以及，使包含所述中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒、羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物和水的第四混合反应体系于25℃反应2h，获得中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒，即淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒。

本发明实施例还提供了由前述方法制备的淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)。

本发明实施例还提供了前述的淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)于制备w2/o2/(o1/w1)型多重乳液的中用途。

本发明实施例还提供了一种w2/o2/(o1/w1)型多重乳液的制备方法，其包括：

提供前述的淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)；

使聚甘油蓖麻醇酯与玉米油于65℃混合形成第一油相，之后将作为第一水相的氯化钠和明胶的混合溶液与所获第一油相混合并采用高压微射流进行均质处理3min，制得w2/o2型初级乳液；

使第二油相与作为第二水相的淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)的悬浮液混合并进行高压均质处理3min，制得o1/w1型皮克林乳液；

以及，使所述w2/o2型初级乳液与o1/w1型皮克林乳液混合并进行高压均质处理3min，制得w2/o2/(o1/w1)型多重乳液。

本发明实施例还提供了由前述方法制备的w2/o2/(o1/w1)型多重乳液。

本发明实施例还提供了前述的w2/o2/(o1/w1)型多重乳液于食品、医药或化妆品领域中的用途。

在本发明中，与实心玉米醇溶蛋白纳米颗粒相比，中空玉米醇溶蛋白纳米颗粒对茶多酚酯有更高的封装度；与中空玉米醇溶蛋白纳米颗粒相比，中空玉米醇溶蛋白稳定的w2/o2/(o1/w1)多重乳液不稳定，容易出现聚集和聚结现象。茶多酚酯中的醌类物质与玉米醇溶蛋白的亲核基团相互作用并形成共价键使得玉米醇溶蛋白的溶解性和乳化性增强，一定程度上可以提高w2/o2/(o1/w1)多重乳液的稳定。羧甲基糊精作为一种多糖可以与玉米醇溶蛋白静电复合改善玉米醇溶蛋白的疏水性，提高玉米醇溶蛋白纳米颗粒的稳定性和乳化性，可以进一步提高其稳定的w2/o2/(o1/w1)多重乳液的稳定性。茶多酚酯具有出色的生理功效，例如抗氧化和抗衰老等作用。但是由于其固有的物理化学不稳定性和在水性介质中的低溶解度，其口服生物利用度较低。玉米醇溶蛋白共价结合茶多酚酯可以对茶多酚酯进行包埋提高其溶解度。羧甲基糊精的螺旋空腔对茶多酚酯也有包埋作用，与玉米醇溶蛋白在包埋茶多酚酯提高其水溶性和保护其抵抗环境应力方面有协同作用。同时，茶多酚酯同时嵌入玉米醇溶蛋白和羧甲基糊精中，可以更好的增强多重乳液的抗氧化活性。与中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精稳定的多重乳液相比，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯稳定的多重乳液具有更强的抗氧化能力。与中空玉米醇溶蛋白/茶多酚酯稳定的多重乳液相比，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯稳定的多重乳液具有高稳定性，在食品应用方面有利于提高货架期。而且与中空玉米醇溶蛋白/茶多酚酯稳定的多重乳液相比，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯稳定的多重乳液还可以提高茶多酚酯的生物利用率。此多重乳液制备方法简单，利于实现工业化生产，扩大了多重乳液在食品工业上的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明首先制备中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒，随后中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒和羧甲基糊精-茶多酚酯通过静电络合形成中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒，茶多酚酯在玉米醇溶蛋白和羧甲基糊精中的共同嵌入使中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒制备的多重乳液兼具更强的抗氧化性能且本发明制备的中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒能够在液滴表面进行吸附，通过形成致密的界面膜抑制液滴的聚结和ostwald熟化，利于多重乳液的稳定；另外本发明提供的w2/o2/(o1/w1)型多重乳液的制备方法简单，易于实现工业化生产，扩大了多重乳液在食品工业上的应用。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例2以及对比例1、2制备zein-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒、zein-茶多酚酯/纳米颗粒、zein-茶多酚酯/cmd纳米颗粒的粒径图；

图2为本发明实施例2以及对比例1、2制备的不同纳米颗粒形成的多重乳液的粒径图；

图3示出了实施例1中制备的中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒在不同浓度下形成的多重乳液粒径的变化图；

图4为本发明实施例2以及对比例1、2制备的不同纳米颗粒形成的多重乳液的抗氧化活性图。

具体实施方式

鉴于现有技术的缺陷，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案，下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例的一个方面提供了一种淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒的制备方法，其包括：

使包含羧甲基糊精、茶多酚酯、乙醇和水的第三混合反应体系发生共沉淀反应，获得羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物；

在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法包括：

将玉米醇溶蛋白、茶多酚酯溶解于乙醇溶液形成混合溶液，之后向所获混合溶液中加入氢氧化钠溶液形成所述第一混合反应体系并发生反应，然后将所获混合物进行透析、冷冻干燥处理，获得所述玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物，其中，所述第一混合反应体系的ph值为9.0；

以及，将所述玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物溶解于乙醇溶液形成玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物的分散液，之后与碳酸钠的乙醇悬浮液混合均匀，然后将所获玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物与碳酸钠的混合液与水混合形成所述第二混合反应体系并发生反应，获得所述中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒。

进一步的，所述第一混合反应体系中玉米醇溶蛋白的浓度为1-2wt％。

进一步的，所述玉米醇溶蛋白与茶多酚酯的质量比为5:1-1:1。

进一步的，所述乙醇溶液中的乙醇的体积分数为75-80％。

进一步的，所述透析处理包括：在所述第一混合反应体系反应完成后，将所获混合物于水浴中超声透析处理24h。

进一步的，所述碳酸钠的乙醇悬浮液为碳酸钠水溶液与无水乙醇的混合液。

进一步的，所述碳酸钠水溶液的浓度为1-2wt％。

进一步的，所述碳酸钠水溶液与无水乙醇的体积比为3:7。

进一步的，所述玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物的分散液与碳酸钠的乙醇悬浮液的体积比为1:1。

进一步的，所述玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物与碳酸钠的混合液与水的体积比为1:1-1:6。

在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法具体包括：

将糯玉米淀粉依次经糊化、脱支、灭酶处理，获得线性糊精；

以及，对所获线性糊精于30℃进行碱化反应4h，之后向所获混合液中添加一氯乙酸并于ph值为4，温度为40℃的条件下进行醚化反应7h，获得所述羧甲基糊精。

进一步的，所述羧甲基糊精(cmd)的制备方法包括：

将20g糯玉米淀粉加入400ml磷酸缓冲溶液中(0.01mol/l，ph值为5.5)，在99℃下搅拌1h使其完全糊化；将完全糊化后的淀粉冷却至55℃并置于55℃水浴锅中，向上述淀粉糊中添加普鲁兰酶(100u/g)酶解24h进行脱支处理。反应结束后将溶液沸水浴10min进行灭酶，然后4500rpm离心15min获取上清液。对上清液真空冷冻干燥得到线性糊精(ld)；

将10g的ld和6g的氢氧化钠加入100ml的90％乙醇溶液在30℃搅拌1h，之后将6g的氯乙酸添加至混合溶液中，40℃搅拌4h，随后使用7.0mol/l的盐酸将上述溶液调ph值为4，并于3500rpm离心15min获得沉积物，用85％乙醇溶液洗涤沉淀数次，直到洗净氯离子，然后再用无水乙醇洗涤数次，上述沉淀物在45℃的烘箱中干燥24h，研磨后得到cmd。

进一步的，所述羧甲基糊精的取代度为0.315。

在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法包括：将羧甲基糊精的水溶液于沸水浴处理20min，之后与茶多酚酯的乙醇溶液混合形成所述第三混合反应体系并于80℃搅拌反应2h，获得所述羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物。

在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法包括：

分别将所述中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒、羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶于水形成中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液和羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶液，之后将所述中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液滴加至所述羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶液中形成所述第四混合反应体系并发生反应，获得所述中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒。

进一步的，所述制备方法还包括：在所述第四混合反应体系反应完成后，调节所获混合物的ph值为4.0。

进一步的，所述中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒与羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物的质量比为4:1～1:4，优选为4:1、2:1、1:1、1:2、1:4中的任一者。

作为本发明的优选实施方案之一，所述淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)的制备方法具体包括：

(1)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒的制备

将玉米醇溶蛋白和茶多酚酯分别溶解于80％(v/v)的乙醇溶液，混合后用0.1mol/l的氢氧化钠溶液将其ph值调至9.0，并于25℃连续搅拌反应24h，待反应结束后，将所获混合溶液于水浴中超声透析24h，期间更换透析液8次以除去游离的茶多酚酯，最后溶液通过冷冻干燥处理，制得玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物；

将2g玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物溶解于100ml乙醇溶液(体积分数80％)中，并于800rpm搅拌2h，静置至完全溶解，同时将2wt％的碳酸钠水溶液与无水乙醇按体积比3:7均匀混合形成碳酸钠的乙醇悬浮液，将上述悬浮液与玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物溶液按体积比1:1混合，该步骤使玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物能够涂覆碳酸钠颗粒，将玉米醇溶蛋白-茶多酚酯共价复合物和碳酸钠的混合溶液按照体积比1:6缓慢加入到蒸馏水中，并于800rpm搅拌反应4h，再经冷冻干燥处理，制得中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒。

(2)羧甲基糊精(cmd)的制备

将20g糯玉米淀粉加至400ml的磷酸缓冲溶液中(0.01m，ph值为5.5)，于99℃搅拌1h使其完全糊化，将完全糊化后的淀粉冷却至，之后向上述糊化后的淀粉中添加普鲁兰酶(100u/g)并于55℃酶解24h进行脱支处理，待反应结束后，将所获溶液置于沸水浴10min进行灭酶处理，然后以4500rpm的转速离心15min，对离心的上清液进行真空冷冻干燥处理，制得线性糊精(ld)；

将10g的ld、6g的氢氧化钠、100ml的乙醇溶液(体积分数90％)混合，之后于30℃搅拌反应1h，然后将6g的氯乙酸添加至混合溶液中，并于40℃搅拌反应4h，随后使用7.0m盐酸将上述反应后的溶液调节ph值为4，并以3500rpm的转速离心15min获得沉淀物，之后用85％乙醇溶液洗涤沉淀物数次，直至洗净氯离子，再用无水乙醇洗涤数次，最后将沉淀物于45℃的烘箱中干燥24h，再经研磨后得到cmd。

(3)cmd-茶多酚酯共价复合物的制备

采用共沉淀法制备cmd-茶多酚酯共价复合物，将0.2g的茶多酚酯溶于50ml无水乙醇形成茶多酚酯溶液，同时将1g羧甲基糊精溶于100ml蒸馏水中并于沸水浴中搅拌处理20min促进分子链展开，随后冷却至80℃；然后将50ml茶多酚酯溶液加至冷却后的溶液中并继续搅拌反应2h，之后再将混合物放置过夜确保完全混合，然后以8000rpm的转速离心25min获得沉淀，再用50％的无水乙醇洗涤3次，置于40℃烘箱中干燥，制得羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物。

(4)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒的制备

将1g中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶于50ml蒸馏水中，并于800rpm搅拌2h形成中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液，同时将羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶解于200ml的去离子水中，并于800rpm连续搅拌4h形成羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶液；然后将50ml的中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液逐滴加入200ml的cmd-茶多酚酯的溶液中，并于800rpm搅拌反应2h，同时将上述体系的ph值调整为4，得到不同质量比的中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒。

进一步的，步骤(1)中玉米醇溶蛋白的浓度为2wt％。

进一步的，步骤(1)中玉米醇溶蛋白与茶多酚酯质量比是5:1。

进一步的，步骤(2)中得到的羧甲基糊精的取代度为0.315。

进一步的，步骤(4)中中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒与羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物质量比例是4:1、2:1、1:1、1:2、1:4中的任一者。

本发明实施例的另一个方面还提供了由前述方法制备的淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)。

本发明实施例的另一个方面还提供了前述的淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)于制备w2/o2/(o1/w1)型多重乳液的中用途。

本发明实施例的另一个方面还提供了一种w2/o2/(o1/w1)型多重乳液的制备方法，其包括：

提供前述的淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)；

使第二油相与作为第二水相的所述淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)的悬浮液混合并进行高压均质处理3min，制得o1/w1型皮克林乳液；

以及，使所述w2/o2型初级乳液与o1/w1型皮克林乳液混合并进行高压均质处理3min，制得w2/o2/(o1/w1)型多重乳液。

在一些较为具体的实施方案中，所述聚甘油蓖麻醇酯与玉米油的质量比为5:100。

进一步的，所述第一水相与第一油相的体积比为1:9-5:5。

进一步的，所述o1/w1型皮克林乳液淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)的浓度为0.1-2.0wt％。

进一步的，所述第一水相中，nacl的浓度为3％(w/v)，明胶的浓度为0-7wt％。

进一步的，所述第二油相为玉米油，且不限于此。

进一步的，所述第二油相与第二水相的体积比为2:8-5:5。

进一步的，所述w2/o2型初级乳液与o1/w1型皮克林乳液的体积比为1:9-5:5。

本发明利用三步乳化法制备w2/o2/(o1/w1)型多重乳液，其具体包括：

(1)制备w2/o2型初级乳液：以含有nacl和明胶的混合溶液为第一水相，以含有聚甘油蓖麻醇酯的玉米油为第一油相，通过高压微射流法制备w2/o2型乳液；(2)制备o1/w1型皮克林乳液：采用高压均质技术，使玉米油(第二油相)和所述中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒悬浮液(第二油相)均匀混合，获得o1/w1型皮克林乳液；(3)制备w2/o2/(o1/w1)型多重乳液：将w2/o2型初级乳液加入到含有o1/w1型皮克林乳液的水相中，经高压均质得到稳定的w2/o2/(o1/w1)多重乳液。

作为本发明的优选实施方案之一，所述w2/o2/(o1/w1)型多重乳液的制备方法可以包括：

(1)w2/o2型初级乳液的制备

在65℃下，将聚甘油蓖麻醇酯与玉米油混合搅拌，完全溶解后获得第一油相；将作为第一水相的含有nacl和明胶的混合溶液与获得的第一油相混合，所得混合物立即通过高压微射流进行均质处理3min，制备得到w2/o2型初级乳液；

(2)o1/w1型皮克林乳液的制备

将玉米油(第二油相)加入到淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精-茶多酚酯纳米颗粒)悬浮液(第二水相)中，高压均质3min，得到o1/w1型皮克林乳液；

(3)w2/o2/(o1/w1)型多重乳液的制备

将w2/o2型初级乳液加入到o1/w1型皮克林乳液中，经高压均质得到稳定的w2/o2/(o1/w1)多重乳液。

进一步的，所述聚甘油蓖麻醇酯的添加质量为玉米油质量的5wt％。

进一步的，所述第一水相中，nacl的浓度为3％(w/v)，明胶的浓度为0-7wt％。

进一步的，所述w2/o2型初级乳液中水相(w2)和油相(o2)之间的体积比为1:9-5:5。

进一步的，所述o1/w1型初级乳液中淀粉基糊精改性玉米醇溶蛋白纳米颗粒(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒)的浓度为0.1-2wt％。

进一步的，所述o1/w1型皮克林乳液中水相(w1)和油相(o1)之间的体积比为1:9-5:5。

本发明实施例的另一个方面还提供了由前述方法制备的w2/o2/(o1/w1)型多重乳液。

本发明实施例的另一个方面还提供了前述的w2/o2/(o1/w1)型多重乳液于食品、医药或化妆品领域中的用途。

下面结合若干优选实施例及附图对本发明的技术方案做进一步详细说明，本实施例在以发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

下面所用的实施例中所采用的实验材料，如无特殊说明，均可由常规的生化试剂公司购买得到。

实施例1

(1)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒的制备

(2)羧甲基糊精(cmd)的制备

(3)羧甲基糊精-茶多酚酯(cmd-茶多酚酯)共价复合物的制备

(4)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒的制备

将1g中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶于50ml蒸馏水中，并于800rpm搅拌2h形成中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液，同时将羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶解于200ml的去离子水中，并于800rpm连续搅拌4h形成羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶液；然后将50ml的中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液逐滴加入200ml的cmd-茶多酚酯的溶液中，并于800rpm搅拌反应2h，同时将上述体系的ph值调整为4，其中，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒与cmd-茶多酚酯的质量比为2:1，制得中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒(zein-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒)。

(5)w2/o2/(o1/w1)多重乳液的制备

将3g明胶分散于3％(w/v)的nacl水溶液中形成第一水相w2，同时于65℃将5％的聚甘油蓖麻醇酯与玉米油混合搅拌15min形成第一油相o2，然后将第一水相w2和第一油相o2以3:7的比例混合，之后立即通过高压微射流进行均质处理3min，制得w2/o2型初级乳液；

将玉米油加入到中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒的悬浮液中，再经高压均质3min得，制得到o1/w1皮克林乳液，其中乳化剂(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒)的浓度均为1.0wt％；

将w2/o2型初级乳液加入o1/w1型皮克林乳液中，并经高压均质3min，制得w2/o2/(o1/w1)多重乳液，其中，w2/o2型初级乳液和o1/w1型皮克林乳液的体积比为4:6。

本实施例中中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒制备的双重乳液粒径30μm-70μm，纳米颗粒能够在油/水界面不可逆地吸附和锚定，形成致密层增加了空间位阻效应从而增加乳液的稳定，显著的提高了乳液抵抗聚结和ostwald熟化的能力，利于多重乳液的稳定。

实施例2

(1)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒的制备

(2)羧甲基糊精(cmd)的制备

(3)羧甲基糊精-茶多酚酯(cmd-茶多酚酯)共价复合物的制备

(4)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒的制备

将1g中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶于50ml蒸馏水中，并于800rpm搅拌2h形成中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液，同时将羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶解于200ml的去离子水中，并于800rpm连续搅拌4h形成羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶液；然后将50ml的中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液逐滴加入200ml的cmd-茶多酚酯的溶液中，并于800rpm搅拌反应2h，同时将上述体系的ph值调整为4，其中，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒与cmd-茶多酚酯的质量比为1:1，制得中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒(zein-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒)。

(5)w2/o2/(o1/w1)多重乳液的制备

将2g明胶分散于3％(w/v)的nacl水溶液中形成第一水相w2，同时于65℃将5％的聚甘油蓖麻醇酯与玉米油混合搅拌15min形成第一油相o2，然后将第一水相w2和第一油相o2以2:8的比例混合，之后立即通过高压微射流进行均质处理3min，制得w2/o2型初级乳液；

将玉米油加入到中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒的悬浮液中，再经高压均质3min得，制得到o1/w1皮克林乳液，其中乳化剂(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒)的浓度均为2.0wt％；

将w2/o2型初级乳液加入o1/w1型皮克林乳液中，并经高压均质3min，制得w2/o2/(o1/w1)多重乳液，其中，w2/o2型初级乳液和o1/w1型皮克林乳液的体积比为4:6。

实施例3

(1)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒的制备

(2)羧甲基糊精(cmd)的制备

(3)羧甲基糊精-茶多酚酯(cmd-茶多酚酯)共价复合物的制备

(4)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒的制备

将1g中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶于50ml蒸馏水中，并于800rpm搅拌2h形成中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液，同时将羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶解于200ml的去离子水中，并于800rpm连续搅拌4h形成羧甲基糊精-茶多酚酯共价复合物溶液；然后将50ml的中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液逐滴加入200ml的cmd-茶多酚酯的溶液中，并于800rpm搅拌反应2h，同时将上述体系的ph值调整为4，其中，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒与cmd-茶多酚酯的质量比为1:2，制得中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒(zein-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒)。

(5)w2/o2/(o1/w1)多重乳液的制备

将5g明胶分散于3％(w/v)的nacl水溶液中形成第一水相w2，同时于65℃将5％的聚甘油蓖麻醇酯与玉米油混合搅拌15min形成第一油相o2，然后将第一水相w2和第一油相o2以5:5的比例混合，之后立即通过高压微射流进行均质处理3min，制得w2/o2型初级乳液；

将玉米油加入到中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒的悬浮液中，再经高压均质3min得，制得到o1/w1皮克林乳液，其中乳化剂(中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒)的浓度为0.5wt％；

将w2/o2型初级乳液加入o1/w1型皮克林乳液中，并经高压均质3min，制得w2/o2/(o1/w1)多重乳液，其中，w2/o2型初级乳液和o1/w1型皮克林乳液的体积比为5:5。

对比例1：中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒制备的多重乳液

(1)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒的制备

(2)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒(zein-茶多酚酯纳米颗粒)多重乳液的制备

将玉米油加入到zein-茶多酚酯纳米颗粒的悬浮液中，再经高压均质3min得，制得到o1/w1皮克林乳液，其中乳化剂(zein-茶多酚酯纳米颗粒)的浓度均为2.0wt％；

将w2/o2型初级乳液加入o1/w1型皮克林乳液中，并经高压均质3min，制得w2/o2/(o1/w1)多重乳液，其中，w2/o2型初级乳液和o1/w1型皮克林乳液的体积比为4:6。

对比例2：中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精纳米颗粒制备的多重乳液

(1)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒的制备

(2)羧甲基糊精(cmd)的制备

(3)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/羧甲基糊精纳米颗粒的制备

将1g中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒加入50ml蒸馏水溶液中，800rpm搅拌2小时。cmd溶解在200ml的去离子水，在800rpm连续搅拌4h。然后，将50ml的玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒溶液逐滴加入200ml的cmd溶液中，在800rpm搅拌2h。将上述分散体系的ph值调整为4，其中，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯纳米颗粒与cmd的质量比为1:2；

(4)中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd纳米颗粒(zein-茶多酚酯/cmd纳米颗粒)多重乳液的制备；

将玉米油加入到zein-茶多酚酯/cmd纳米颗粒的悬浮液中，再经高压均质3min得，制得到o1/w1皮克林乳液，其中乳化剂(zein-茶多酚酯/cmd纳米颗粒)的浓度均为2.0wt％；

将w2/o2型初级乳液加入o1/w1型皮克林乳液中，并经高压均质3min，制得w2/o2/(o1/w1)多重乳液，其中，w2/o2型初级乳液和o1/w1型皮克林乳液的体积比为4:6。

性能表征：

图1为实施例2以及对比例1、2制备的zein-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒、zein-茶多酚酯/纳米颗粒、zein-茶多酚酯/cmd纳米颗粒的粒径图；

图2为实施例2以及对比例1、2制备的不同纳米颗粒形成的多重乳液的粒径，从图2中可以看出，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒制备的多重乳液粒径最小，乳液滴为31.7μm，且储藏一个月后，粒径没有显著变化，表明其具有良好的稳定性，此处，单独的中空玉米醇溶蛋白纳米颗粒制备的多重乳液聚结，所以无法测的其稳定的乳液粒径；

图3为实施例1制备的中玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒在不同浓度下形成的多重乳液粒径的变化。从图3中可以看出，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒浓度为2wt％，形成最小的乳液滴为31.7um，且储藏一个月后，粒径没有显著变化，表明其具有良好的稳定性。

图4为实施例2以及对比例1、2制备的不同纳米颗粒形成的多重乳液的抗氧化活性，从图4中可以看出，中空玉米醇溶蛋白-茶多酚酯/cmd-茶多酚酯纳米颗粒稳定的多重乳液有最高的抗氧化活性。

此外，本案发明人还参照前述实施例，以本说明书述及的其它原料、工艺操作、工艺条件进行了试验，并均获得了较为理想的结果。

本发明的各方面、实施例、特征及实例应视为在所有方面为说明性的且不打算限制本发明，本发明的范围仅由权利要求书界定。在不背离所主张的本发明的精神及范围的情况下，所属领域的技术人员将明了其它实施例、修改及使用。

在本发明案中标题及章节的使用不意味着限制本发明；每一章节可应用于本发明的任何方面、实施例或特征。

在本发明案通篇中，在将组合物描述为具有、包含或包括特定组份之处或者在将过程描述为具有、包含或包括特定过程步骤之处，预期本发明教示的组合物也基本上由所叙述组份组成或由所叙述组份组成，且本发明教示的过程也基本上由所叙述过程步骤组成或由所叙述过程步骤组组成。

应理解，各步骤的次序或执行特定动作的次序并非十分重要，只要本发明教示保持可操作即可。此外，可同时进行两个或两个以上步骤或动作。

尽管已参考说明性实施例描述了本发明，但所属领域的技术人员将理解，在不背离本发明的精神及范围的情况下可做出各种其它改变、省略及/或添加且可用实质等效物替代所述实施例的元件。另外，可在不背离本发明的范围的情况下做出许多修改以使特定情形或材料适应本发明的教示。因此，本文并不打算将本发明限制于用于执行本发明的所揭示特定实施例，而是打算使本发明将包含归属于所附权利要求书的范围内的所有实施例。此外，除非具体陈述，否则术语第一、第二等的任何使用不表示任何次序或重要性，而是使用术语第一、第二等来区分一个元素与另一元素。

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