蛹虫草菌株虎米基（H型）及其应用的制作方法

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技术领域：
】本发明涉及生物
技术领域：
，特别涉及蛹虫草菌株虎米基(h型)及其应用。
背景技术：
：蛹虫草(cordycepsmilitaris)又叫北冬虫夏草，北虫草，简称蛹草是一种食药用真菌，虫草属的模式种，化学成份与药理作用与冬虫夏草相似。众所周知，冬虫夏草的生长环境严苛，人类过度采挖，数量急剧下降，而蛹虫草栽培和开发利用能部分替代冬虫夏草。蛹虫草世界性分布，天然资源数量很少，但是其药用价值极高，为此，为了能有效利用这一珍贵的资源，目前有很多蛹虫草种质资源得到选育，培育方法也多样，但是微生物育种是一个长期而漫长的过程，为了丰富虫草的种质资源，有效提高其内含物质的含量，有必要对蛹虫草进行选育，选育出虫草素更高、腺苷含量更高、虫草多糖含量更高的优质虫草，然后将其用来加工酒、茶等养生产品，提高蛹虫草的保健价值。技术实现要素：鉴于上述开发更高商品性的蛹虫草，本发明的目的在于提供一种蛹虫草(cordycepsmilitaris)菌株虎米基(h型)；该菌株具有高虫草素、腺苷和虫草多糖的品质；将其用于加工食品，能有效提高食品的保健价值。为达到上述目的，本发明筛选出一种蛹虫草(cordycepsmilitaris)菌株虎米基(h型)，其保藏编号为cgmccno.20216。属于食用菌，属于蛹虫草(cordycepsmilitaris)种。所述蛹虫草保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmccno.20216，保藏日期为2020年06月30日。进一步的，本申请的菌株具有耐高温、耐高湿、虫草素、腺苷和虫草多糖含量高的特性。本申请还包括一种选育所述的蛹虫草(cordycepsmilitaris)菌株虎米基(h型)的方法，所述方法包括如下步骤：收集多个亲本的蛹虫草孢子粉，混合在无菌水和三角瓶中充分振荡，梯度稀释，在平板中涂布纯化，获得单菌株，然后将不同菌株进行出菇实验，选择菌株中子实体颜色更黄、菌丝生长速度更快的菌株进行反复栽培，保证该菌株能稳定遗传。本申请还包括一种所述蛹虫草(cordycepsmilitaris)菌株虎米基(h型)的应用，所述菌株做为亲本进行杂交育种。本申请还包括一种蛹虫草孢子，该孢子通过培养所述菌株得到。本申请还包括一种蛹虫草菌丝体，该菌丝体通过培养所述菌株得到。本申请还包括一种蛹虫草子实体，该子实体通过培养所述菌株得到。本申请还包括一种所述子实体在食品加工中的应用。本申请还包括一种制备所述饮料的方法，所述方法为：(1)制备虎米基(h型)蛹虫草提取物：将所述子实体晒干、粉碎后进行醇提，过滤后取滤液浓缩到相对密度为1.05-1.20kg/m3：(2)制备甜菊叶提取液：将甜叶菊与水熬煮后过滤即得；(3)制备金花茶提取液：将金花茶树叶与水熬煮后过滤即得；(4)将甜菊叶浓缩液、金花茶提取液和蛹虫草提取物按照质量比为1:1:1混合，倒入带培养基的虎米基(h型)蛹虫草子实体中，蛹虫草子实体和混合物质量比为1:2，在25℃、避光条件下浸泡7-10d；过滤后、灭菌、封罐即得所述饮料。本发明具有以下有益效果：本申请的蛹虫草(cordycepsmilitaris)菌株虎米基(h型)是一株新的蛹虫草菌株，其子实体与亲本相比较为匀称、呈棒状、比亲本更细长，其为亲本蛹虫草c1(采集自吉林长白山的野外种)、亲本蛹虫草n1(采集自青海湖鸟岛的野外种)和亲本蛹虫草k1(采集自四川康定的野外种)的孢子杂交新菌株，本申请的菌株与3个亲本相比，该菌株具有子实体比亲本更细长、匀称、呈棒状的特征，特别是具有虫草素含量高、腺苷含量高、虫草多糖含量高的优良商品性，是用来加工食品、保健品的佳品；申请人用该菌株开发制备了虫草饮料，将虫草乙醇提取物、甜菊叶浓缩液、金花茶提取液放入带培养基的虫草子实体中浸泡，能有效提高虫草提取液的虫草素、腺苷含量；同时改善饮料口感，制得的饮料口感好、色泽佳、沉淀少、气味香甜；是一种口感良好的保健饮料。【附图说明】图1为本发明虎米基(h型)菌株子实体的培养情况图；图2为本发明亲本之一的蛹虫草c1菌株子实体的培养情况图；图3为本发明虎米基(h型)菌株子实体的培养情况图；图4为本发明虎米基(h型)菌株子实体在培养瓶内的培养情况图。【具体实施方式】下面结合附图、实施例和试验对本发明作进一步说明。本申请实施例的亲本为野外采集获得：亲本1：蛹虫草c1：采集自吉林省延边市长白山的野外种；子实体黄色，子实体头部较大，不匀称，出现白化现象，菌棒孢子粉适中、容易老化倒伏、子实体子座高2.78-3.65cm，直径0.54-0.68cm(如本申请的附图图2所示)。亲本2：蛹虫草n1：采集自青海省海南藏族自治州青海湖鸟岛的野外种；子实体黄色，棒状，头部出现白化现象，头部较大，孢子粉含量较多，孢子粉黄色，子实体子座高2.63-3.32cm，直径0.46-0.63cm；亲本3：蛹虫草k1：采集自四川甘孜藏族自治州康定市的野外种；子实体淡黄色，较均匀，头部无白化现象，孢子粉含量较少、孢子粉淡黄色，子实体子座高5.12-6.36cm，直径0.38-0.60cm。实施例1：本实施例筛选出了一种蛹虫草(cordycepsmilitaris)菌株虎米基(h型)，其保藏编号为cgmccno.20216。属于食用菌，属于蛹虫草(cordycepsmilitaris)种。所述蛹虫草保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmccno.20216，保藏日期为2020年06月30日。上述蛹虫草(cordycepsmilitaris)菌株虎米基(h型)特性：在固体培养基上呈白色，成熟子实体为黄色、棒状、均匀，整个颜色均匀，白化现象少、子实体子座高8.35-9.26cm，直径0.36-0.53cm；黄色，成熟时有黄色孢子粉(如本申请的附图图1、图3、图4所示)。图1中并未发现虎米基(h型)虫草具有头部白化现象(如图2)的表型，且整个子实体其孢子粉较多，图3中可见，虎米基(h型)虫草整体均匀，并无头部特别大(如图2)的表型；图3中虎米基(h型)虫草的整个子实体菌棒基本上充满整个培养瓶，显示出细长的特性。上述蛹虫草菌株的育种方法如下：(1)将蛹虫草c1、蛹虫草n1和蛹虫草k1放入常年温度为16-23℃，湿度为70％-80％条件的山洞中培育；(2)收集上述几个品种的蛹虫草孢子混合，然后放入无菌水中振荡，稀释至约104个/ml后，在平板中涂布均匀，之后再步骤(1)的山洞条件下培育7天，挑取边缘菌丝于另一培养皿中纯化培养，然后继续在平板中涂布培养，待平板中长出单菌落时，将单菌落在光照条件下培养5d转色，挑取颜色最黄、菌丝生长速度最快的菌株10株进行反复栽培；(3)栽培过程中观察蛹虫草的生长情况，选择颜色最深、菌丝生长速度快的菌株进行进一步纯化、留种得到虎米基(h型)蛹虫草，并测定蛹虫草子实体虫草素、腺苷和虫草多糖含量。经hplc法测定，本申请虫草菌株：虎米基(h型)、3个亲本品种的虫草素、腺苷和虫草多糖含量如下表1所示：表1虫草菌株的有效成分含量虫草菌株品种虫草素(mg/g)腺苷(mg/g)虫草多糖(mg/g)虎米基(h型)2.453.1573.11蛹虫草c10.951.8250.32蛹虫草n11.751.9660.36蛹虫草k10.781.8758.69由表1可知，本申请的虫草菌株:虎米基(h型)，其与亲本相比，其子实体具有更高的虫草素、腺苷和虫草多糖含量。实施例2：为了加强对实施例1虫草菌株进行进一步的食品加工，申请人将本申请的菌株加工成虫草饮料，具体方法为：(1)制备虎米基(h型)蛹虫草提取物：将蛹虫草粉碎后与75％(v/v)的乙醇按照1:5的质量比浸泡24h后，过滤、取滤液浓缩到相对密度为1.20kg/m3，即得；(2)制备甜菊叶提取液：将甜叶菊粉碎后按照质量比为1:5混合熬煮，熬煮20min后，过滤、取滤液即得；(3)制备金花茶提取液：将金花茶树叶与水按照1:5进行熬煮，熬煮20min，过滤、取滤液即得；(4)将甜菊叶浓缩液、金花茶提取液和蛹虫草提取物按照质量比为1:1:1混合，倒入带培养基的虎米基(h型)蛹虫草子实体中，蛹虫草子实体和混合物质量比为1:2，在25℃、避光条件下浸泡10d；过滤后、灭菌、封罐即得所述饮料。虫草饮料原料及配比的研究：饮料原料制备：(1)制备虎米基(h型)蛹虫草提取物：将蛹虫草粉碎后与75％(v/v)的乙醇按照1:5的质量比浸泡24h后，过滤、取滤液浓缩到相对密度为1.20kg/m3，即得；(2)制备甜菊叶浓缩液：将甜叶菊粉碎后按照质量比为1:5混合熬煮，熬煮20min后，过滤、取滤液即得；(3)制备金花茶提取液：将金花茶树叶与水按照1:5进行熬煮，熬煮20min，过滤、取滤液即得；(4)制备绞股蓝提取液：将绞股蓝与水按照1:5进行熬煮，熬煮20min，过滤、取滤液即得；(5)制备罗汉果提取液：将金花茶树叶与水按照1:5进行熬煮，熬煮20min，过滤、取滤液即得；将上述提取液混按照表2选取原料，混合后倒入带培养基的蛹虫草子实体中，在25℃、避光条件下浸泡10d；过滤后、灭菌、封罐即得所述饮料：表2饮料原料表组别原料组别原料组1蛹虫草子实体：蛹虫草提取物1:2组4蛹虫草子实体：绞股蓝提取液1:2组2蛹虫草子实体：甜菊叶浓缩液1:2组5蛹虫草子实体：罗汉果提取液1:2组3蛹虫草子实体：金花茶提取液1:2组6蛹虫草子实体：蒸馏水1:2制得饮料后测试上述组别的的虫草素和腺苷含量，具体如表3：表3饮料有效成分含量组别虫草素(mg/g)腺苷(mg/g)组别虫草素(mg/g)腺苷(mg/g)组11.061.23组40.04——组20.470.11组5————组30.160.08组6————由表3可知，组4-组6中的饮料中基本上不能检测出虫草素和腺苷含量，说明罗汉果提取液和绞股蓝提取液基本上不能从虫草子实体中提取虫草素和腺苷；组1中虫草素、腺苷含量来源于蛹虫草提取物，说明，乙醇能从虫草子实体中提取虫草素和腺苷；而组2和组3中能提取一定的虫草素和腺苷，但是其提取能力远低于乙醇的提取能力。对组1-3的饮料进行感官品评，发现组1带有浓重的草腥味，组2带甜味但是仍有腥气，组3带有苦味，为此，发明人思考，将上述几种对虫草子实体有一定提取作用的原料：甜菊叶浓缩液：金花茶提取液混合与虫草提取物一起，改善饮料口感，研究过程中发现，饮料口感和浸泡时间、是否带培养基浸泡有很大关系，具体实验过程为：将原料：混合液：蛹虫草提取物：甜菊叶浓缩液：金花茶提取液＝1:1:1混合后在不同条件下浸泡不同时间(具体分组方式如表4所示)，其感官品评如表5所示：表4原料浸泡时间组别分组(质量比)浸泡时间(d)实验例1带培养基虫草子实体：混合液＝1:25实验例2带培养基虫草子实体：混合液＝1:26实验例3带培养基虫草子实体：混合液＝1:27实验例4带培养基虫草子实体：混合液＝1:28实验例5带培养基虫草子实体：混合液＝1:29实验例6带培养基虫草子实体：混合液＝1:210实验例7带培养基虫草子实体：混合液＝1:211实验例8不带培养基虫草子实体：混合液＝1:210表4中，培养基制备方法为：向30g的大米中加入300ml水，煮沸50min，煮沸时盖上盖子，过滤，取滤液然后加入20g葡萄糖放入滤液中，搅拌至完全溶解，加水定容至1000ml再加入1.8的琼脂粉，调节ph值即得。根据上述分组进行感官评价，具体如下表5：表5虫草饮料感官评价组别气味色泽口感实验例1腥味浓重颜色淡黄、沉淀少口感淡，甜味淡、淡苦实验例2腥味较淡、带清香颜色略深黄、清亮、沉淀少有甜味、微苦，口感没有层次实验例3基本无腥，香气浓郁颜色略深黄、清亮、无沉淀甜味略优于例2实验例4基本无腥，香气浓郁金黄、清亮透明、无沉淀清甜与例3类似、口感浓郁实验例5基本无腥，香气浓郁金黄、清亮透明、无沉淀清甜与例3类似、口感浓郁实验例6基本无腥，香气浓郁金黄、清亮透明、无沉淀少苦、清甜与例3类似实验例7腥味轻、有馊味颜色暗黄、透明、沉淀多少苦、回甘、有酸味实验例8腥味重、香气浓颜色暗黄、不透明、沉淀多虽然甜，但是苦味较重、有酸味由表5可知，实施例1-2优于浸泡时间不够腥味较重、颜色不够深，口感不佳，而实施例3-6的气味、色泽、口感均优于实施例1-2且，实施例7优于浸泡时间过长，色泽过深、沉淀过多，变酸、滋味不如实施例3-6；说明虫草饮料浸泡时间应为7-10d过早过晚都会影响饮料口感；而实验例8和实验例6浸泡时间一致，但是气味、色泽、口感差别很大，说明，带培养基的虫草饮料，其口感要优于不带培养基，这可能是因为，培养基中的有机质成分比较适合微生物繁殖，会含有除虫草外的部分微生物能对饮料起到发酵作用，发酵后口感更加柔和、色泽更加清亮，同时气味也得到了改善。综上所述，本申请的蛹虫草菌株虎米基(h型)属于新菌株，该菌株是由3个亲本的混合群交获得，该菌株具有比亲本高的虫草素、腺苷和虫草多糖含量，是一种虫草素、腺苷和虫草多糖含量较高的菌株，具有更高的保健和营养价值；同时，申请人还利用上述菌株制备饮料，饮料通过虫草的醇提物、甜菊叶提取物、金花茶提取物混合与带培养基的虫草子实体浸泡、发酵而得，饮料口感清甜、营养价值高，是一种新型的保健产品。上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。当前第1页1 2 3 

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