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一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法与流程

2021-01-06 18:01:10|492|起点商标网
本发明涉及芒果选育种
技术领域:
,特别涉及一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法。
背景技术:
:芒果是热带、亚热带著名水果之一,芒果栽培地区主要分布于海南、广西、广东、云南和四川的金沙江干热河谷区域,具有很高的经济价值和社会价值。在芒果的选育种领域,从实生选育种、人工杂交育种到突变育种分别展开了不同程度的研究并取得一定的有效成果,但因芒果是基因高度杂合的木本植物,其种子的存活期短,传统的育种方法改良芒果品种难度大,周期长;而对于芒果的组培种苗选育方法的研究却相当薄弱,其往往存在组培过程酚害严重、组培苗移栽成活率低等问题,因此,寻找一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,建立可靠高效的高产、抗病的芒果种苗植株的快速选育工艺,对于优良芒果品种的快速选育和推广运用具有重要的意义。技术实现要素:鉴于此,本发明提出一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,可有效著消除了芒果种苗组培过程的酚害影响,并显著提高组培种苗的移栽成活率和生长质量,加快芒果选育种周期,为优良芒果品种的快速育种和推广运用奠定基础。本发明的技术方案是这样实现的:本发明提供一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,包括如下步骤:步骤1:从大田中选取具有高产、抗病性的优良性状的芒果变异单株;步骤2:取芒果变异单株中带有1~3个腋芽的茎段作外植体,进行组培快速育苗;将外植体经过灭菌处理,首先在添加聚乙烯吡咯烷酮(0.4~0.6)mg/l和硝酸银(2.0~3.0)mg/l的1/2ms培养基中黑暗预培养3~5d后,再转入添加聚乙烯吡咯烷酮(0.05~1.5)mg/l、tdz(0.4~0.6)mg/l和na2s2o3(8~12)mg/l的1/2ms培养基中黑暗过渡培养3~5d后,转入传代培养基中培养,获得芒果再生组培苗植株;步骤3:待芒果再生组培苗植株至5~8cm高且≥3条不定根时,将芒果组培瓶苗转移至炼苗床中,自然光照,控制温度为20~26℃,湿度为60~85%进行初步无菌炼苗培养3~6d后,再开盖炼苗;待幼苗长至10~15cm高时,取出幼苗用清水清洗基部,并转移至含有炼苗强化基质的营养杯中进行强化炼苗处理至株高≥20cm,控制温度22~30℃,湿度为45~55%,炼苗强化基质包括质量比为(7~10):(4~6):(2~4)的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土;步骤4:将步骤3获得的芒果植株置于室温下培育至株高≥35cm后,定植至大田中进行表证实验,选择出稳定遗传优良性状的单株作为新品种。本发明提出一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,其不仅有效消除了芒果种苗组培过程的酚害影响,并且显著提高芒果树苗的移栽成活率和生长质量,加快芒果树苗选育种的周期,优良芒果品种的稳定、高效的选育工艺。进一步说明,所述营养化椰糠泥土是采用椰糠、泥炭土和混合生长调理液按照重量比为(2~3):(2~3):1混合而成;所述混合生长调理液为由芸苔素、硝酸钙、硫酸镁和水按照(0.5~1.5):(2-3):(2~3):(1200-1500)的重量比混合而成。营养化椰糠泥土既有效避免了营养杯中炼苗基质的保水透气性差而影响种苗生长的情况,同时为种苗根系提供充足营养,促进根系吸收生长,提高根系的抗逆性,增加芒果组培苗炼苗移栽的成活率。进一步说明,步骤(3)中,所述炼苗强化基质包括质量比为8:5:3的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土。进一步说明,步骤(2)中,所述黑暗预培养的培养基为1/2ms+6-ba2.0mg/l+聚乙烯吡咯烷酮0.5mg/l+硝酸银2.5mg/l,ph为5.8~6.0;黑暗过渡培养的培养基为1/2ms+6-ba3.0mg/l+聚乙烯吡咯烷酮0.1mg/l+tdz0.5mg/l+na2s2o310mg/l,ph为5.8~6.0。进一步说明,步骤(2)中,所述黑暗预培养的温度为19~20℃,培养4d;所述黑暗过渡培养为22~25℃,培养4d。进一步说明,步骤(2)中,所述传代培养基为ms+6-ba(4.0~5.0)mg/l+naa(0.2~0.4)mg/l+iaa(1~2)mg/l,ph5.8~6.2;培养条件为:培养温度为:25~26℃,光照时间为12h/d,光照强度为2000~2500lx。进一步说明,步骤(3)中,所述开盖炼苗温度为25~28℃,湿度为50~60%。进一步说明,步骤(2)中,所述茎段长度为1.3~1.5cm。与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明通过以芒果茎段作为外植体,采用了高浓度的聚乙烯吡咯烷酮和硝酸银组合低温暗处理与低浓度的聚乙烯吡咯烷酮与tdz、na2s2o3组合的过渡处理相结合,不仅有效控制酚害褐化,消除芒果种苗组培过程的酚害影响,并且促进外植体的生长与增殖,既有效传承母株的优良性状的同时,又显著提高芒果再生组培苗的成活率,从而大大加快了种苗培育周期,快速获得大量芒果组培苗。同时,本发明优化芒果再生组培苗的炼苗工艺,根据芒果再生组培苗的生长情况,进行了分段恒温恒湿炼苗的基础上,联合采用了由营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土混合而成的炼苗强化基质进行强化炼苗处理,充分提高了芒果组培苗的移栽成活率和生长质量,加快芒果树苗的生长,从而建立了可靠高效的高产、抗病的芒果种苗植株的快速选育工艺,为优良芒果品种的快速育种和推广运用奠定基础。具体实施方式为了更好理解本发明技术内容,下面提供具体实施例,对本发明做进一步的说明。本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。本发明实施例所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。本发明选择了高产、抗病性的“台农一号”的芒果品种进行培育实验。实施例1-一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,包括如下步骤:步骤1:从大田中选取具有高产、抗病性的优良性状的“台农一号”芒果变异单株;步骤2:从芒果变异单株取带有1个腋芽的茎段作外植体,茎段长度为1.3cm,进行组培快速育苗;将外植体经过灭菌处理,首先在添加聚乙烯吡咯烷酮0.4mg/l、硝酸银2.0mg/l和6-ba2.0mg/l的1/2ms培养基中,ph为5.8~6.0,19℃下黑暗预培养3d后,再转入添加聚乙烯吡咯烷酮0.05mg/l、tdz0.4mg/l、na2s2o38mg/l和6-ba3.0mg/l的1/2ms培养基中,ph为5.8~6.0,22℃下黑暗过渡培养3d后,转入传代培养基中培养,传代培养基为ms+6-ba4.0mg/l+naa0.2mg/l+iaa1mg/l,ph5.8~6.2;培养条件为:培养温度为:25℃,光照时间为12h/d,光照强度为2000lx,获得芒果再生组培苗植株;步骤3:待芒果再生组培苗植株至5~8cm高且≥3条不定根时,将芒果组培瓶苗转移至炼苗床中,自然光照,控制温度为20℃,湿度为60%进行初步无菌炼苗培养3d后,再开盖炼苗,温度为25℃,湿度为50%;待幼苗长至10~15cm高时,取出幼苗用清水清洗基部,并转移至含有炼苗强化基质的营养杯中进行强化炼苗处理至株高≥20cm,控制温度22℃,湿度为45%,炼苗强化基质包括质量比为7:4:2的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土;所述营养化椰糠泥土是采用椰糠、泥炭土和混合生长调理液按照重量比为2:2:1混合而成;所述混合生长调理液为由芸苔素、硝酸钙、硫酸镁和水按照0.5:2:2:1200的重量比混合而成;步骤4:将步骤3获得的芒果植株置于室温下培育至株高≥35cm后,定植至大田中进行表证实验,选择出稳定遗传优良性状的单株作为新品种。实施例2-一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,包括如下步骤:步骤1:从大田中选取具有高产、抗病性的优良性状的“台农一号”芒果变异单株;步骤2:从芒果变异单株取带有2个腋芽的茎段作外植体,茎段长度为1.5cm,进行组培快速育苗;将外植体经过灭菌处理,首先在添加聚乙烯吡咯烷酮0.6mg/l、硝酸银3.0mg/l和6-ba2.0mg/l的1/2ms培养基中,ph为5.8~6.0,20℃下黑暗预培养5d后,再转入添加聚乙烯吡咯烷酮1.5mg/l、tdz0.6mg/l、na2s2o312mg/l和6-ba3.0mg/l的1/2ms培养基中,ph为5.8~6.0,25℃下黑暗过渡培养5d后,转入传代培养基中培养,传代培养基为ms+6-ba5.0mg/l+naa0.4mg/l+iaa2mg/l,ph5.8~6.2;培养条件为:培养温度为:26℃,光照时间为12h/d,光照强度为2500lx,获得芒果再生组培苗植株;步骤3:待芒果再生组培苗植株至5~8cm高且≥3条不定根时,将芒果组培瓶苗转移至炼苗床中,自然光照,控制温度为26℃,湿度为85%进行初步无菌炼苗培养6d后,再开盖炼苗,温度为28℃,湿度为60%;待幼苗长至10~15cm高时,取出幼苗用清水清洗基部,并转移至含有炼苗强化基质的营养杯中进行强化炼苗处理至株高≥20cm,控制温度30℃,湿度为55%,炼苗强化基质包括质量比为10:6:4的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土;所述营养化椰糠泥土是采用椰糠、泥炭土和混合生长调理液按照重量比为3:3:1混合而成;所述混合生长调理液为由芸苔素、硝酸钙、硫酸镁和水按照1.5:3:3:1500的重量比混合而成;步骤4:将步骤3获得的芒果植株置于室温下培育至株高≥35cm后,定植至大田中进行表证实验,选择出稳定遗传优良性状的单株作为新品种。实施例3-一种高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,包括如下步骤:步骤1:从大田中选取具有高产、抗病性的优良性状的“台农一号”芒果变异单株;步骤2:从芒果变异单株取带有3个腋芽的茎段作外植体,茎段长度为1.4cm,进行组培快速育苗;将外植体经过灭菌处理,首先在添加聚乙烯吡咯烷酮0.5mg/l、硝酸银2.5mg/l和6-ba2.0mg/l的1/2ms培养基中,ph为5.8~6.0,19℃下黑暗预培养4d后,再转入添加聚乙烯吡咯烷酮0.1mg/l、tdz0.5mg/l、na2s2o310mg/l和6-ba3.0mg/l的1/2ms培养基中,ph为5.8~6.0,25℃下黑暗过渡培养4d后,转入传代培养基中培养,传代培养基为ms+6-ba4.5mg/l+naa0.3mg/l+iaa1.5mg/l,ph5.8~6.2;培养条件为:培养温度为:26℃,光照时间为12h/d,光照强度为2300lx,获得芒果再生组培苗植株;步骤3:待芒果再生组培苗植株至5~8cm高且≥3条不定根时,将芒果组培瓶苗转移至炼苗床中,自然光照,控制温度为23℃,湿度为75%进行初步无菌炼苗培养5d后,再开盖炼苗,温度为26℃,湿度为50~60%;待幼苗长至10~15cm高时,取出幼苗用清水清洗基部,并转移至含有炼苗强化基质的营养杯中进行强化炼苗处理至株高≥20cm,控制温度26℃,湿度为50%,炼苗强化基质包括质量比为8:5:3的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土;所述营养化椰糠泥土是采用椰糠、泥炭土和混合生长调理液按照重量比为2.5:2.5:1混合而成;所述混合生长调理液为由芸苔素、硝酸钙、硫酸镁和水按照1:2.5:2.5:1300的重量比混合而成;步骤4:将步骤3获得的芒果植株置于室温下培育至株高≥35cm后,定植至大田中进行表证实验,选择出稳定遗传优良性状的单株作为新品种。对比例1-根据实施例3的高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,区别在于,步骤(2)中,将外植体经过灭菌处理,在添加聚乙烯吡咯烷酮0.5mg/l、硝酸银2.5mg/l、tdz0.5mg/l、na2s2o310mg/l和6-ba2.0mg/l的1/2ms培养基中,ph为5.8~6.0,25℃下黑暗预培8d后,转入传代培养基中培养,其余参数和步骤均与实施例3相同。对比例2-根据实施例3的高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,区别在于,步骤(3)中,炼苗强化基质为质量比为4:4:5:3的椰糠、泥炭土、膨化珍珠岩和腐殖土。根据实施例1~3和对比例3的高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,分别统计组培苗褐化率、组培苗成活率、芒果树苗移栽成活率,其结果如下表1:由表1可知,根据本发明实施例1~3中高产、抗病芒果树苗的快速选育方法,组培苗的褐化率降低至<20%,成活率明显提高;表明本发明可更好地控制酚害褐化,消除芒果种苗组培过程的酚害影响,而且有效促进了外植体的生长与增殖。根据组培苗进行移植获得的株系的各性状与母株无明显差异,未出现性状分离现象,本发明既有效传承母株的优良性状的同时,又显著提高芒果再生组培苗的成活率;同时,通过优化芒果再生组培苗的炼苗工艺,提高芒果再生组培苗的成活率至>95%,从而形成了可靠高效的高产、抗病的芒果种苗植株的快繁选育体系,促进优良芒果品种的快速育种和推广运用。由实施例3与对比例1~2相比,对比例2中的组培苗的褐化率增加,对比例2中的移栽成活率明显低于实施例3;表明本发明采用了高浓度的聚乙烯吡咯烷酮和硝酸银组合低温暗处理与低浓度的聚乙烯吡咯烷酮与tdz、na2s2o3组合的过渡处理相结合,可显著改善了芒果种苗组培过程的酚害影响;并且根据芒果再生组培苗的生长情况,进行了分段恒温恒湿炼苗的基础上,联合采用了由营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土混合而成的炼苗强化基质进行强化炼苗处理,表明了营养化椰康泥土具有更好的保水、保肥、透气性能,充分提高了芒果组培苗的移栽成活率和生长质量。本发明根据实施例3的高产、抗病芒果树苗的快速选育方法获得芒果再生组培苗植株,设置不同炼苗基质组分的配比对芒果树苗移栽成活率的影响实验,各实验组如下,其结果见表2。实施例4-所述炼苗强化基质的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土的质量比为7:5:3对比例3-所述炼苗强化基质的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土的质量比为5:5:3。对比例4-所述炼苗强化基质的营养化椰糠泥土、膨化珍珠岩和腐殖土的质量比为15:5:3。组别炼苗数/株芒果树苗移栽成活率%实施例48097.5对比例38093.8对比例48092.5由表2可知,对比例3和4的树苗移栽成活率均低于实施例4,在对比例4中过量的营养化椰糠泥土也会影响种根系生长,基质富营养化使根系发育缓慢,表明了采用一定质量的营养化椰糠泥土搭配膨化珍珠岩和腐殖土混合作为炼苗强化基质,可有效保持营养杯中炼苗基质的保水透气性差,为种苗根系提供充足营养,促进根系吸收生长,提高根系的抗逆性,增加芒果组培苗炼苗移栽的成活率。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3 

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