一种蛹虫草培养方法及其应用与流程

本发明属于食用菌栽培领域，具体涉及一种蛹虫草培养方法及其应用。

技术背景

蛹虫草，属真菌门(fungi)、子囊菌纲(ascomycota)、肉座菌目(hypocreales)、麦角菌科(clavicipitaceae)、虫草属(cordyceps)。因含有虫草素、虫草酸、腺苷及多糖等活性成分而具有抗肿癌，抗炎，抗病毒，增强机体免疫力等功效，是一种具有滋补作用的药食两用真菌，有很高的药用价值和营养价值，被越来越多的消费者所接受，需求量也逐年攀升。

虫草素(cordycepin)又名3｀一脱氧腺苷，是cuningham于1951年分离得到的一种腺苷类活性物质，分子式为c10h13n503，虫草素是蛹虫草中主要的有效成份之一，具有抗菌抗病毒、抗肿瘤、以及抗疲劳、抗衰老、抗炎提高人体免疫能力，抑制单胺氧化酶活性，具有较高的药用价值和广泛的药理作用。

腺苷(adenosine)是核苷的一种，由核糖(呋喃核糖)与腺嘌呤的一部分组成，中间由β-n9-配糖键(β-n9-glycosidicbond)连结。腺苷在生物化学上扮演重要角色，包括以腺苷三磷酸(atp)或腺苷双磷酸(adp)形式转移能量，或是以环状腺苷单磷酸(camp)进行信号传递等。此外腺苷也是一种抑制性神经传导物(inhibitoryneurotransmitter)，可能会促进睡眠。在冬虫夏草中腺苷含量高于虫草素，腺苷也是冬虫夏草的质量标准(《中国药典》)。

由于冬虫夏草特殊苛刻的生长环境以及资源的匮乏，人们对冬虫夏草最优替代品蛹虫草的需求也在逐步扩大，对能提高蛹虫草子实体产量及其虫草素含量的培养方法的研究也越来越多，但这些研究大多注重蛹虫草子实体体的产量或者只注重单一活性成分虫草素含量，而忽略了作为冬虫夏草质量标准的腺苷含量。

技术实现要素：

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种蛹虫草培养方法及其应用，该培养方法培养出的虫草子实体产量高且虫草素、腺苷含量高，操作简单，易于推广，并且可以满足人们提高蛹虫草子实体中多种活性组分含量的需求。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种蛹虫草培养方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)培养基配制：称(量)取培养基各组分，培养基的组成成分为：桑叶粉10-50g/l、玉米渣50-200g/l、麦麸皮50-100g/l、蛋白胨5-10g/l、磷酸二氢钾1.2-1.5g/l、磷酸二氢钠0.8-1.2g/l、硫酸镁1g/l，然后加入水混匀，定容到所需体积，分装，121摄氏度、1.1mpa下高压灭菌20-30min，冷却待用；

2)接种：在超净台中向装有所述蛹虫草培养基的培养瓶中接种蛹虫草菌种；

3)培养：a暗培养：在温度22℃、湿度75～85％条件下避光培养3～5天，至蛹虫草菌丝长满所述蛹虫草培养基表面；b光培养：第5～20天采用的光照培养：白天12小时日光灯光照，温度20～22℃、湿度80～85％，光照强度控制在100～150lx；晚上12小时避光，温度18～20℃、湿度75～85％；第20～35天采用的光照培养：白天12小时自然光加日光灯光照，温度20～22℃、湿度75％～85％，总光照强度控制在1000～1200lx；晚上12小时闭光，温度18～20℃、湿度75～85％；

4)收获及再培养：步骤3)光照培养后，将培养瓶中成熟的蛹虫草子实体取出，剩余部分按照步骤3)第20～35天的方法继续培养至子实体成熟；

优选的，培养基各组分的浓度为：桑叶粉30g/l、玉米渣100g/l、麦麸皮50g/l、蛋白胨10g/l、磷酸二氢钾1.5g/l、磷酸二氢钠1g/l、硫酸镁1g/l。

优选的，所述水为蒸馏水或去离子水。

优选的，步骤2)中所述蛹虫草菌种为蛹虫草液体菌种，其密度为3-5个菌球/ml，所述蛹虫草培养基与所述蛹虫草液体菌种的体积比为50:1。

优选的，步骤3)中的日光灯光照采用散射光。

优选的，步骤3)中光培养时，每天通风2次，早晚各一次，每次20～30分钟；

所述蛹虫草培培养方法培养的蛹虫草在食品、保健品以及食物添加剂中的应用。

有益效果是：培养方法培养出的虫草子实体产量高且虫草素、腺苷含量高，操作简单，易于推广，并且可以满足人们提高蛹虫草子实体中多种活性组分含量的需求。

附图说明

图1是本发明实施例3中活性物质检测hplc图谱。

图中:1号峰为腺苷，2号峰为虫草素。

具体实施方式

为了使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

蛹虫草培养基的配制包括如下步骤：

称(量)取培养基各组分，培养基的组成成分为：桑叶粉10-50g/l、玉米渣50-200g/l、麦麸皮50-100g/l、蛋白胨5-10g/l、磷酸二氢钾1.2-1.5g/l、磷酸二氢钠0.8-1.2g/l、硫酸镁1g/l，按下文中表1的比例称取以上各固体成分，然后加入水混匀，定容到所需体积，分装，121摄氏度、1.1mpa下高压灭菌20-30min，冷却待用。本实施例具体获得如表1所示的5种不同培养基各3瓶，每瓶50ml。

表1不同培养基所含各组分浓度(单位g/l)

1.麦麸皮含有丰富的蛋白质、矿物质、维生素、碳水化合物、膳食纤维。它不仅粗纤维、粗蛋白质含量高，而且质量较好。其氨基酸组成较平衡，其中赖氨酸、色氨酸和苏氨酸含量均较高，麦麸皮的维生素b族及维生素e的含量极高，不但可提供多种营养成分还可使培养基疏松，有利于蛹虫草培养前期菌丝体的生长；

2.我国是农业和蚕业大国，麦麸皮、玉米和桑叶产量高，容易获得，成本低廉；

3.本发明提供培养方法获得的蛹虫草子实体虫草素腺苷含量高，子实体产量高，且量稳定，方法简单易于推广。

实施例2

蛹虫草的培养，包括以下步骤：

1、在超净台中接种虫草菌体(菌种为cordycepsmilitaris(l)link)，液体菌种，密度控制在3-5个菌球/ml，每培养瓶1ml，在温度22℃、湿度75～85％条件下避光培养3～5天，使虫草菌丝迅速长满培养基表面；

2、第5～20天光照培养，白天12小时日光灯光照，温度20～22℃(最好为22℃)、湿度80～85％，光照强度控制在100～150lx；晚上12小时避光，温度18～20℃(最好18℃)、湿度75～85％。每天通风2次，早晚各一次，气温相对低的时候进行每次20～30分钟。白天晚上温差有利于原基的分化形成；

3、第20～35天白天12小时光照(自然光加日光灯)，温度20～22℃(最好为22℃)、湿度75％～85％，光照强度控制在1000～1200lx；晚上12小时闭光，温度18～20℃(最好为18℃)、湿度75～85％。此时间为子实体生长时期，强光对子实体的生长有利，使其呈棒状生长并不断成熟、健壮、色泽变为鲜艳的橙黄色，在此生长阶段每天通风2次，早晚各一次，气温相对低的时候进行每次20～30分钟；

4、收获及再培养，采摘成熟的蛹虫草子实体(只采摘培养基上面的部分)，培养瓶中剩余部分按第20～35天的培养条件及方法继续培养，再次收获。

实施例3

虫草素和腺苷的测定

将采收的子实体烘干(水分含量5％以下)，磨成细粉，溶于水，超声提取30min后，12000rpm离心10min，取上清，过0.22微米滤膜。采用hplc的方法测量提取液中虫草素和腺苷的含量，结果如表2所示。

表2各组分培养基培养子实体腺苷和虫草素含量(平均值)

通过从实验结果可以总结出，本发明提供的培养基培养的蛹虫草子实体，可有效提高虫草素和腺苷两种活性物质的含量。其中，虫草素含量普遍高于0.6％，最高可达到0.69％，腺苷的含量也可以达到0.5％以上，有的甚至高于虫草素的含量，尤其是培养基中桑叶粉含量在30g/l，玉米渣含量在100g/l时，麦麸皮含量为50g/l时效果最好。

实施例4

本发明提供的蛹虫草培养方法培养的蛹虫草在食品、保健品、药物、添加剂等方面的应用。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。

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