川续断皂苷VI在制备治疗肌腱损伤的药物中的用途的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体涉及川续断皂苷vi在肌腱修复治疗中的用途。

背景技术：

肌腱是连接骨骼和肌肉的特殊结缔组织，能够传递肌肉与骨之间的力量，带动关节活动，完成复杂的肢体运动。这就导致了肌腱会长时间承受巨大而持续的机械负荷，日积月累则可能出现损伤。肌腱损伤后的愈合十分缓慢，且易产生疤痕组织导致无法恢复原始组织结构，严重降低肌腱的硬度和任性，影响肌腱的机械性能，导致更容易再次损伤。

目前的肌腱损伤治疗临床上常采用关节镜下断裂肌腱重建、非甾体类消炎药、冷冻疗法、低强度脉冲超声、物理治疗等方法，可以恢复肌腱及关节功能，减轻炎症与相关疼痛，但是治疗后经常出现复发。因此，对肌腱的修复及功能的重建依然是目前所面临的难题。

川续断是川续断科(dipsacaceae)川续断属(dipsacus)植物川续断(c.y.chengett.m.ai.)的根，又名川断。川续断中化学成分复杂，可大致分为生物碱类、挥发油类、皂苷类、环烯醚萜糖苷类和多糖类。川续断皂苷vi是其中的一种三萜皂苷类化合物，又名木通皂苷d或续断皂苷c，药理作用广泛，包括神经保护、预防骨质疏松、心肌保护、阵痛、保肝降脂等多种作用。但是，川续断皂苷vi对肌腱修复的作用目前还未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种川续断皂苷vi的新用途。

本发明提供了一种川续断皂苷vi在制备治疗肌腱损伤的药物中的用途。

进一步地，上述川续断皂苷vi是从川续断植物的根中提取得到，纯度大于等于98％。

进一步地，上述药物为提升胶原i、胶原iii和腱调蛋白tnmd水平的药物。

进一步地，上述药物为降低金属蛋白酶mmp1、金属蛋白酶抑制剂timp1含量的药物。

进一步地，上述药物为提升转化生长因子tgf-β1、纤溶酶原激活物抑制剂pai-1含量的药物。

进一步地，上述药物为促进肌腱纤维组织形成、促进纤维连续规整排列和抑制炎性细胞浸润的药物。

进一步地，上述药物为治疗肩袖损伤、肱二头肌长头肌肌腱损伤、肱三头肌肌腱损伤、股内收肌腱损伤、髂胫束损伤、股四头肌肌腱损伤、髌腱断裂、髌腱末端病、跟腱断裂、跟腱止点末端病中的一种或几种疾病的药物。

本发明还提供了一种治疗肌腱损伤的药物，是以川续断皂苷vi为活性成分，加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的药物。

进一步地，上述药物是川续断皂苷vi溶液，优选地，上述川续断皂苷vi溶液的浓度是10～40mg/kg，以川续断皂苷vi与生理盐水混匀制得。

实验结果表明，川续断皂苷vi能显著升高col1、col3、tnmd水平，改善mmp1/timp1比例，降低mmp1，提升tgf-β1、pai-1表达，对肌腱损伤进行干预后纤维组织没有或仅有轻微波浪状改变，但纤维连续，无明显断裂或炎性细胞浸润，排列及分布均接近正常肌腱组织。川续断皂苷vi可明显改善胶原破坏和促腱调蛋白恢复，防止肌腱基质过度降解，利于保持肌腱胶原的稳定性，具有明显的修复肌腱作用。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为各组兔肌腱细胞中col1,col3,tnmd蛋白水平的变化。

图2为各组兔肌腱细胞中mmp1,timp1,tgf-β1,pai-1蛋白水平的变化。

图3为各组兔肌腱组织masson染色情况。

图4为各组兔肌腱组织he染色情况。

具体实施方式

本发明所用川续断皂苷vi、生理盐水等原料均为已知产品，通过购买市售产品所得。

实施例1、川续断皂苷vi注射液的制备

川续断皂苷vi溶于生理盐水，制得低剂量：10mg/kg；中剂量：20mg/kg；和高剂量：40mg/kg的注射液。

以下通过试验例的方式来证明本发明的有益效果：

试验例1、肌腱相关基因表达检测

1、实验方法：

(1)建模与给药：48只成年雄性新西兰大白兔，左跟骨附着点近端约距离2.0cm处注射前列腺素e20.2ml(300ng/0.2ml),1次/周，共4次，肌骨超声检测造模成功。将造模成功的32只兔再次通过数字分组法随机分为4组，低剂量组(10mg/kg)、中剂量组(20mg/kg)、高剂量组(40mg/kg)、模型对照组(model)，每组8只。生理盐水组(ns)和模型对照组(model)给与注射等量生理盐水，正常组(control)不做任何干预，低剂量组、中剂量组、高剂量组治疗组给与注射10，20，40mg/kg川续断皂苷vi。药物均以生理盐水溶解。每天注射1次，连续4周。末次给药后禁食不禁水24h，称量体重，用空气栓塞法处死所有实验动物。

(2)采用western-blot法检测胶原ⅰ、ⅲ(col1、col3)、腱调蛋白tenomodulin(tnmd)、金属蛋白酶(mmp1)、金属蛋白酶抑制剂1(timp1)、转化生长因子(tgf-β1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(pai-1)的表达。

2、实验结果：与control组相比，model组、10mg/kg组(低剂量组)、20mg/kg组(中剂量组)的col1、col3、tnmd蛋白水平明显降低(p＜0.05)；ns组col1、tnmd蛋白水平降低(p＜0.05)；40mg/kg组(高剂量组)col1、col3、tnmd蛋白水平恢复至正常水平。与model组相比，各组col1、col3、tnmd蛋白水平明显升高；asd各干预组中，呈asd浓度依赖性，且剂量越大，col1、col3、tnmd蛋白水平升高越明显(p＜0.05)。与ns组相比，10mg/kg组col1、col3蛋白水平明显降低(p＜0.05),20mg/kg组col1、col3、tnmd蛋白水平明显降低(p＜0.05)，40mg/kg组col1、tnmd蛋白水平明显升高(p＜0.05)。与10mg/kg组相比，40mg/kg组col1、col3、tnmd蛋白水平明显升高(p＜0.05)。与20mg/kg组相比，40mg/kg组col1、col3、tnmd蛋白水平明显升高(p＜0.05)(如图所示1)。

在炎症期给药模型中，与model组相比，ns组mmp1、timp1显著降低(p＜0.05)，tgf-β1、pai-1显著升高(p＜0.05)。川续断皂苷干预后，mmp1、timp1呈剂量依赖性降低，20、40mg/kg组可显著降低mmp1、timp1蛋白含量(p＜0.05)，但tgf-β1、pai-1含量呈剂量依赖性升高，40mg/kg组显著升高(p＜0.05)。与control组相比，model组mmp1、timp1显著升高，tgf-β1、pai-1显著降低(p＜0.05)。ns组pai-1显著降低(p＜0.05)。川续断皂苷干预后，10、20mg/kg组mmp1、timp1剂量依赖性降低，tgf-β1、pai-1呈剂量依赖性升高(p＜0.05)。40mg/kg组timp1显著下降(p＜0.05)。各剂量组相比，10mg/kg组对timp1、tgf-β1作用显著(p＜0.05)，20mg/kg组对mmp1、timp1、tgf-β1作用显著(p＜0.05)，40mg/kg组对mmp1、timp1、tgf-β1、pai-1作用效果均显著(p＜0.05)(如图2所示)。

以上结果表明，在兔肌腱病动物模型中，川续断皂苷vi40mg/kg组能显著升高col1、col3、tnmd水平(p＜0.05)，显著改善mmp1/timp1比例，降低mmp1，提升tgf-β1、pai-1表达(p＜0.05)，且对上述肌腱相关基因的表达具有川续断皂苷vi的浓度依赖性。因而表明川续断皂苷vi可明显改善胶原破坏和促腱调蛋白恢复，防止肌腱基质过度降解，利于保持肌腱胶原的稳定性。

试验例2、兔肌腱组织病理学观察

1、实验方法：

(1)建模与给药：48只成年雄性新西兰大白兔，左跟骨附着点近端约距离2.0cm处注射前列腺素e20.2ml(300ng/0.2ml),1次/周，共4次，肌骨超声检测，成功建立兔跟腱病模型。将造模成功的32只兔再次通过数字分组法随机分为4组，低剂量组(10mg/kg)、中剂量组(20mg/kg)、高剂量组(40mg/kg)、模型对照组(model)，每组8只。生理盐水组(ns)和模型对照组(model)给与注射等量生理盐水，正常组(control)不做任何干预，低剂量组、中剂量组、高剂量组治疗组给与注射10，20，40mg/kg川续断皂苷vi。药物均以生理盐水溶解。每天注射1次，连续4周。末次给药后禁食不禁水24h，称量体重，用空气栓塞法处死所有实验动物。

(2)收集所有动物左下肢跟腿组织观察大体形态，pbs漂洗2次，置于40g/l多聚甲醛中固定24h,石蜡包埋，纵向切片，常规masson和he染色，由病理专业人员在光学显微镜下阅片，对比各组间肌腱纤维形态，检查有无血管增生和炎细胞浸润等病变。

2、结果：masson染色能够较为明显地显示肌肉纤维组织，control组肌肉纤维排列整齐，整体性强，纤维染色充分；40mg/kg纤维组织有轻微波浪状改变，但纤维连续，无明显炎性细胞浸润；20mg/kg组纤维组织轻微紊乱，但组织无明显断裂，排列成波浪样改变，炎性细胞浸润明显；10mg/kg组纤维组织断裂明显，胶原纤维明显减少，纤维呈波浪样变，排列紊乱、卷曲，同时细胞核变形明显，炎性细胞浸润明显；model照组已无明显纤维排列结构，纤维失染明显，甚至可见脂肪样改变，炎性细胞浸润明显(如图3所示)。

he切片染色后光镜10倍下可见，40mg/kg组纤维组织排列有序，纤维完整，细胞核形态以长梭形为主，但纤维排列紧凑，纤维排列无明显波浪形表现，细胞密度正常。20mg/kg组可见纤维组织有少许断裂，纤维排列较为整齐，纤维略松散，整体呈轻微波浪形表现。10mg/kg组可见较为明显的纤维断裂，纤维结构松散，呈波浪形改变，细胞核变圆，同时细胞密度增加。model组肌腱纤维形态差，未见完整纤维结构，纤维排列成明显波浪形改变，细胞核明显变圆，细胞密度增加明显，新生血管异常增生，炎性细胞浸润明显(如图4所示)。

以上结果表明：用中、高剂量川续断皂苷vi干预的纤维组织没有或仅有轻微波浪状改变，但纤维连续，无明显断裂或炎性细胞浸润，排列及分布均接近正常肌腱组织，说明川续断皂苷vi具有修复肌腱的作用。

综上，川续断皂苷vi能显著升高col1、col3、tnmd水平，改善mmp1/timp1比例，降低mmp1，提升tgf-β1、pai-1表达，对肌腱损伤进行干预后纤维组织没有或仅有轻微波浪状改变，但纤维连续，无明显断裂或炎性细胞浸润，排列及分布均接近正常肌腱组织。川续断皂苷vi可明显改善胶原破坏和促腱调蛋白恢复，防止肌腱基质过度降解，利于保持肌腱胶原的稳定性，具有明显的修复肌腱作用，是一种潜在的治疗肌腱病的药物。

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