含有作为有效成分的七羟基黄烷的用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的组合物的制作方法

本公开中所公开的是一种用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的组合物。

背景技术：

虽然所有人都想逃避衰老，但是完全防止生物衰老的方法还未知。皮肤细胞的活性度以及再生能力会随年龄而衰退，从而导致皮肤老化，包括例如黄褐斑、雀斑、老年斑等的皮肤色素沉着以及皮肤弹力降低。这些现象在人与人之间发生的情况有所不同，这不仅取决于内在因素和基因因素，还取决于例如环境污染和uv等的环境因素。

mmp(基质金属蛋白酶；matrixmetalloproteinase)为在活性位点中含有锌的钙依赖性金属蛋白酶。它们在生物体内以潜在酶原(zymogen)的形态分泌，并且通过结构修饰而酶促地活化。mmp在氨基末端裂开时活化。活化的mmp通过例如2-巨球蛋白或者timp(组织金属蛋白酶抑制剂；tissueinhibitorsofmetalloproteinase)等的抑制剂来调节活性。包括角质细胞、成纤维细胞等的大多数皮肤细胞会分泌mmp。mmp家族根据结构和功能性特征而分为各种各样的亚族。其中，mmp-1又称间质性胶原酶(interstitialcollagenase)，是在伤口愈合、组织再生及重建中重要的蛋白质。在暴露于紫外线后，mmp-1在体内产生的量比平时大，并且通过与胶原蛋白结合，使胶原蛋白断裂而诱导皮肤皱纹并降低皮肤弹力。

本公开的发明人寻求一种用于增进皮肤弹力和改善皮肤皱纹的方法。在这样做的过程中，发明人已经确定七羟基黄烷(heptahydroxyflavan)对增进皮肤弹力和改善皮肤皱纹是有效的，从而完成了本公开。

【相关技术的参考文献】

【专利文献】

(专利文献1)注册公开号为10-1702389的韩国专利

(专利文献2)公开号为10-2012-0095296的韩国专利

技术实现要素：

在一方面，本公开旨在提供一种用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的组合物。

一方面，本公开提供了一种用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的组合物，其含有作为有效成分的七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物。

在另一方面，本公开提供了一种作为有效成分的七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物在制备用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的组合物中的用途。

在一方面，作为本公开的有效成分的七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物可以通过抑制mmp-1活性来增进皮肤弹力并改善皮肤皱纹。另外，作为本公开的有效成分的七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物安全且没有细胞毒性，可以被用于各种各样的组合物中，例如化妆品、保健功能食品等。

附图说明

图1a和图1b示意性地描述了制备七羟基黄烷的过程。

图2示出了研究细胞毒性的结果。

图3示出了研究mmp-1表达水平影响皮肤皱纹或皮肤弹力的结果。

具体实施方式

在一方面，本公开提供了一种用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的组合物，该组合物含有作为有效成分的七羟基黄烷、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物。

在另在一方面，本公开提供了一种用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的方法，包括对有需要的对象施加组合物，该组合物含有作为有效成分的七羟基黄烷、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物。

以下，对本公开进行详细描述。

在本公开中，“盐”包括从七羟基黄烷衍生出的任意有机或无机附加盐，其被用于这样的浓度，该浓度对个体表现出相对无毒且无害的有效作用，并且从七羟基黄烷衍生出的盐具有的副作用不会降低七羟基黄烷的有益功效。该“盐”包括具有可以在七羟基黄烷上存在的酸性或碱性官能团(functionalgroup)的所有盐。例如，其可以是由游离酸(freeacid)形成的酸附加盐，还可以是由酸或碱形成的金属盐。

例如，无机酸或有机酸可以作为所述游离酸使用，作为无机酸，可以使用盐酸、氢溴酸、溴酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、磷酸等；作为有机酸，可以使用乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、2-乙烷二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2,2,2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯丙酸、三甲基乙酸、叔-7丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、已二烯二酸、枸橼酸等。例如，所述金属盐可以是碱金属盐或者碱土金属盐。

在本公开中，“异构体”不仅包括光学异构体(opticalisomer)，(即基本上纯的对映异构体(essentiallypureenantiomer)、基本上纯的非对映异构体(essentiallypurediastereomer)或其混合物)，还包括构象异构体(conformationisomer)(即仅在一个或多个化学键的角度上不同的异构体)和位置异构体(positionisomer)，位置异构体包括例如互变异构体(tautomer)或顺-反异构体等的几何异构体(geometricisomer)。表述“基本上纯的(essentiallypure)”是指：例如针对对映异构体或非对映异构体使用时，特定化合物(例如对映异构体或非对映异构体)的存在量为：约90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、99％或更多、或者99.5％或更多(w/w)。

例如，七羟基黄烷的异构体可以是由化学式1表示的(2r,3s)-七羟基黄烷或者由化学式2表示的(2r,3r)-七羟基黄烷，但并不局限于此。

【化学式1】

【化学式2】

在本公开中，“水合物”是指结合了水的化合物。该术语在广义上使用，包括缺乏与水化学键合的包合物。

在本公开中，“溶剂化物”是指在溶质的分子或离子与溶剂的分子或离子之间形成的高阶化合物。

在一方面，本公开中的七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物可以在市场上购得，或者可以通过合成等来获得。

在一方面，七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物的施用量可以为：0.1mg/kg/日或更多、0.5mg/kg/日或更多、1mg/kg/日或更多、1.5mg/kg/日或更多、2mg/kg/日或更多、2.5mg/kg/日或更多、3mg/kg/日或更多、3.5mg/kg/日或更多、4mg/kg/日或更多、4.5mg/kg/日或更多、5mg/kg/日或更多、5.5mg/kg/日或更多、6mg/kg/日或更多、6.5mg/kg/日或更多、7mg/kg/日或更多、7.5mg/kg/日或更多、8mg/kg/日或更多、8.5mg/kg/日或更多、9mg/kg/日或更多、9.5mg/kg/日或更多、10mg/kg/日或更多、10.5mg/kg/日或更多、11mg/kg/日或更多或者11.5mg/kg/日或更多；以及12mg/kg/日或更少、12.5mg/kg/日或更少、13mg/kg/日或更少、13.5mg/kg/日或更少、14mg/kg/日或更少、14.5mg/kg/日或更少、15mg/kg/日或更少、15.5mg/kg/日或更少、16mg/kg/日或更少、或者16.5mg/kg/日或更少，但并不局限于此。

在一方面，七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物可以按以下量被包括：0.01wt％或更多、0.03wt％或更多、0.05wt％或更多、0.08wt％或更多、0.1wt％或更多、0.3wt％或更多、0.5wt％或更多、0.8wt％或更多、1wt％或更多、1.3wt％或更多、1.5wt％或更多、1.8wt％或更多、2wt％或更多、2.3wt％或更多、2.5wt％或更多、2.8wt％或更多、3wt％或更多、3.3wt％或更多、3.5wt％或更多、3.8wt％或更多、4wt％或更多、4.3wt％或更多、4.5wt％或更多或者4.8wt％或更多；以及5wt％或更少、5.3wt％或更少、5.5wt％或更少、5.8wt％或更少、6wt％或更少、6.3wt％或更少、6.5wt％或更少、6.7wt％或更少、7wt％或更少、7.3wt％或更少、7.5wt％或更少、7.8wt％或更少、8wt％或更少、8.3wt％或更少、8.5wt％或更少、8.8wt％或更少、9wt％或更少、9.3wt％或更少、9.5wt％或更少、9.8wt％或更少及10wt％或更少，但并不局限于此。

在一方面，皮肤由作为复层扁平上皮的表皮、作为致密结缔组织的真皮、以及作为疏松结缔组织的皮下组织构成。例如，本发明的组合物可以在由于真皮层受损或真皮层体积减少而引起的皮肤弹力降低或者皮肤皱纹严重时，对增进皮肤弹力或者改善皮肤皱纹特别有效。

在一方面，该组合物可以抑制mmp-1。

在一方面，该组合物可能没有细胞毒性。

在一方面，本公开的组合物可以为化妆品组合物。

在本公开中，“化妆品组合物”是指一种改善人的外观的组合物，并且本公开的用于增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的化妆品组合物是指一种通过抑制对皮肤的不良影响而使人的外观改善的组合物，但并不局限于此。

在一方面，化妆品组合物除了七羟基黄烷或其盐、其异构体、其水合物或其溶剂化物之外，还可以包括在化妆品组合物中常用的例如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、色素、香料等的助剂以及载体。例如，化妆品组合物还可以包括例如甘油、丁二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油、生育酚乙酸酯、柠檬酸、泛醇、角鲨烷、柠檬酸钠、尿囊素等的辅助成分。

在一方面，化妆品组合物可以被制备成在本领域内常用的施加在皮肤上的任何剂型。示例包括溶液、悬浮液、乳浊液、糊剂(paste)、凝胶、霜剂、乳液、粉末、肥皂、含表面活性剂的洁面剂、油、粉状粉底、乳液状粉底、蜡状粉底以及喷雾等，但并不局限于此。更具体地，其可以被制成柔软性化妆水、营养性化妆水、营养霜、按摩霜、精华、眼霜、洁面霜、洁面乳、卸妆水、面膜、喷剂或粉末。

在一方面，当本公开的剂型为糊剂、霜剂或凝胶时，作为载体可以包括动物纤维、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石粉、氧化锌等。

在一方面，当本公开的剂型为粉末或喷剂时，作为载体可以包括乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末等。特别地，喷剂还可以包含例如氯氟烃、丙烷/丁烷、二甲醚等的推进剂。

在一方面，当本公开的剂型为溶液或乳浊液时，作为载体可以包括溶剂、增溶剂、乳化剂等。特别地，作为载体可以包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇油、脂肪族甘油酯、聚乙二醇、山梨糖醇酐脂肪酸脂等。

在一方面，当本公开的剂型为悬浮液时，作为载体可以包括：例如水、乙醇、丙二醇等的液相稀释剂；例如乙氧基异十八醇、聚氧乙烯山梨醇酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐酯等的悬浮剂；微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、黄蓍胶等。

在一方面，当本公开的剂型为含表面活性剂的洁面剂时，作为载体可以包括：脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油酯脂肪酸酯等。

在一方面，本公开的组合物可以是保健功能食品组合物。

在本公开中，“保健功能食品组合物”是指通过物理、生化或生物技术赋予特定功能的食品，或指这样的加工食品：其被设计为赋予与生物防御节律的控制、疾病的预防和从疾病中恢复等有关的调节功能，所述保健功能食品组合物即使长期使用也对人体无害的。

在一方面，该保健功能食品可以包括社会上可接受的食品添加剂，并且还可以包括通常被用于制备健康功能食品的适当载体、赋形剂或稀释剂。

在一方面，可以将保健功能食品组合物作为食品添加剂来使用，在此情况下，根据常规方法，可以单独添加该组合物或者将其与其他食品或者食品成分组合添加。有效成分的混合量可以适当地根据使用目的(预防、健康改善或治疗)来确定。

在一方面，保健功能食品可以是例如包括冰淇淋的乳制品、汤、饮料、茶、饮品、酒精饮料、多种维剂等，并且包括被赋予特定功能的食品、或者以下加工食品，其被设计为赋予与生物防御节律的控制、疾病的预防和从疾病中恢复等有关的调节功能。

在一方面，保健功能食品组合物还可以包括各种营养剂、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶状增补剂、ph值控制剂、稳定剂、防腐剂、甘油、乙醇、用于碳酸饮料的碳酸剂等。

为了避免重复，在前面的描述中省略了与上述相同的内容，并且在本公开中未定义的术语具有本公开所属技术领域中常用的含义。另外，除非另有明确说明，否则表述“或者”应理解为包括“和”。

在下文中，为了有助于理解本发明，将通过示例、试验示例以及制备示例详细地描述本公开。然而，以下示例、试验示例以及制备示例仅是出于说明目的的，并且对本领域普通技术人员显而易见的是，本公开的范围不受所述示例、试验示例以及制备示例的限制。提供本发明的示例、试验示例以及制备示例，以向本技术领域普通技术人员更充分地描述本公开。

实施例1.七羟基黄烷

如图1a中所示，在存在nah、bncl/bnbr以及dmf的情况下，从作为起始物料的儿茶素(catechin)a中连续制备四-o-苄基儿茶素b以及五-o-苄基儿茶素c。然后，通过vilsmeier-haack反应制备作为五-o-苄基儿茶素c的位置异构体(位置异构物)的化合物d。然后，在在-40℃的dmdo溶剂中，通过在化合物d的c-6位置处引入新的羟基来制备化合物e。

然后，如图1b中所示，在通过用nah、bnbr和dmf处理，用保护基将化合物e的c-6位置处的羟基覆盖之后，经由dakin反应制备化合物f-1。随后，在通过缓慢进行反应而获得化合物f-2之后，通过使所有苄基氢化来获得由化学式1表示的(2r,3s)-七羟基黄烷。

【化学式1】

除了使用表儿茶素(epicatechin)代替儿茶素作为起始物料之外，通过与上述相同的过程，获得由化学式2表示的(2r,3r)-七羟基黄烷。

【化学式2】

测试例1.细胞毒性试验

从atcc获取的正常人皮肤成纤维细胞在含有fbs的培养基中、在37℃和5％co2的条件下培养24小时。在将培养基用无血清培养基替代之后，将细胞培养24小时或更久。将在示例1中获得的(2r,3s)-七羟基黄烷(在下文中，也被称为“apnp-054”)以及(2r,3r)-七羟基黄烷(在下文中，也被称为“apnp-055”)溶解在100％的dmso中，以分别在6.25μg/ml(＝约19.4μm)、12.5μg/ml(＝约38.3μm)、25μg/ml(＝约77.6μm)、50μg/ml(＝约155.1μm)以及100μg/ml(＝约310.3μm)的浓度下制备共10个样品，作为比较示例，将儿茶素和表儿茶素溶解在100％的dmso中，以分别在6.25μm、12.5μm、25μm、50μm以及100μm的浓度下制备共10个样品。然后，在将人类成纤维细胞以0.6×10⁴细胞/孔分株到96孔板中之后，在37℃以及5％co2的条件下使其稳定24小时，然后处理20个样品。阴性对照组不对以上样品中的任一个进行处理。24小时之后，常用方法进行了mtt分析。图2中示出该结果。

从图2中可以看出，本公开的七羟基黄烷即使在高浓度下也没有显示出细胞毒性。这意味着本公开的七羟基黄烷是可以以例如化妆品、药品、食品等的各种形式对人体治疗的安全物质。

测试例2.研究对皮肤皱纹或者皮肤弹力的影响

从atcc获取的角质细胞(hacat细胞)以2.5×10⁵细胞/孔被分株到6孔板，并在37℃以及5％co2的条件下培养24小时。然后，在将培养基换成无-fbs的dmem培养基以使细胞成为饥饿状态之后，第二天用uv对其进行处理。

与此不同的是，从atcc获取的人类成纤维细胞以0.6×10⁴细胞/孔被分株到96孔板上，并在37℃且5％co2的条件下培养24小时。然后，通过将培养基换成不含补充剂(supplement)的fbm培养基来使细胞饥饿。然后，用如下共六个样品对受uv刺激的hacat细胞培养液和人类成纤维细胞培养液进行处理，这六个样品是通过将在实施例1中获得的(2r,3s)-七羟基黄烷和(2r,3r)-七羟基黄烷溶解在5％的dmso中，至分别为5μg/ml(＝约15.5μm)、10μg/ml(＝约31.0μm)以及20μg/ml(＝约62.1μm)的浓度而制备的。此时，作为比较例，上述培养液用如下共6个样品进行处理，这六个样品是通过将儿茶素和表儿茶素溶解在5％的dmso中，分别以25μm、50μm以及100μm的浓度制备。

在这些样品的处理之后，使用mmp-1elisa试剂盒(r&dsystems公司)来测定mmp-1的表达水平。与此分开地，以与上述相同的方式用10μm的egcg或10μm的视黄酸代替七羟基黄烷对阳性对照组进行了处理。表1和图3中示出了该结果。

表1

从表1和图3所中可以看出，七羟基黄烷(apnp-054：(2r,3s)-七羟基黄烷、apnp-055：(2r,3r)-七羟基黄烷)与具有类似的化学结构的儿茶素和表儿茶素相比，表现出非常优越的对mmp-1的抑制效果。这意味着七羟基黄烷与具有类似化学结构的其他化合物相比，具有增进皮肤弹力或改善皮肤皱纹的优越效果。

剂型实施例1.化妆品剂型的制备

1-1.柔软性化妆水的制备

根据常规方法，通过混合以下项制备柔软性化妆水：0.1wt％的七羟基黄烷、5.2wt％的1,3-丁二醇、1.5wt％的油醇、3.2wt％的乙醇、3.2wt％的聚山梨酯20、2.0wt％的二苯甲酮-9、1.0wt％的聚羧乙烯、3.5wt％的甘油、微量的香料、微量的防腐剂，以及余量为纯净水。

1-2.牛奶润肤露的制备

根据常规方法，通过混合以下项制备牛奶润肤露：0.1wt％的七羟基黄烷、5.1wt％的甘油、4.2wt％的丙二醇、3.0wt％的生育酚乙酸酯、4.6wt％的液状石蜡、1.0wt％的三乙醇胺、3.1wt％的角鲨烷、2.5wt％的澳洲坚果油、1.6wt％的聚山梨醇酯60、1.6wt％的山梨坦倍半油酸酯、0.6wt％的对羟基苯甲酸丙酯、1.5wt％的聚羧乙烯、微量的香料、微量的防腐剂，以及余量为纯净水。

1-3.营养霜的制备

根据常规方法，通过混合以下项制备营养霜：0.5wt％的七羟基黄烷、4.0wt％的甘油、3.5wt％的凡士林、2.1wt％的三乙醇胺、5.3wt％的液状石蜡、3.0wt％的角鲨烷、2.6wt％的蜂蜡、5.4wt％的生育酚乙酸酯、3.2wt％的聚山梨酯60、1.0wt％的聚羧乙烯、3.1wt％的山梨坦倍半油酸酯、微量的香料、微量的防腐剂，以及余量为纯净水。

剂型实施例2.食品剂型的制备

2-1.保健食品的制备

根据常规方法，通过混合以下项制备保健食品：100mg的七羟基黄烷、适量的维生素混合物、70μg的维生素a乙酸酯、1.0mg的维生素e、0.13mg的维生素b1、0.15mg的维生素b2、0.5mg的维生素b6、0.2μg的维生素b12、10mg的维生素c、10μg的生物素、1.7mg的烟酰胺、50μg的叶酸、0.5mg的泛酸钙、适量的矿物质混合物、1.75mg的硫酸亚铁、0.82mg的氧化锌、25.3mg的碳酸镁、15mg的磷酸二氢钾、55mg的磷酸氢钙、90mg的柠檬酸钾、100mg的碳酸钙以及24.8mg的氯化镁。

2-2.保健饮料的制备

根据制备保健饮料的常规方法，在混合100mg的七羟基黄烷、15g的维生素c、100g的维生素e(粉末)、19.75g的乳酸亚铁、3.5g的氧化锌、3.5g的烟酰胺、0.2g的维生素a、0.25g的维生素b1、0.3g的维生素b2以及适量的水之后，将获得的溶液在85℃下搅拌加热约1小时。过滤所制备的溶液，将其装入无菌的2l容器中，然后对其进行灭菌。所制备的保健饮料被存储在冰箱中。

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