夫西地酸A环并氨基噻唑环衍生物的应用的制作方法

本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及一类结构新颖的夫西地酸a环并氨基噻唑环衍生物制备肿瘤耐药逆转剂的新应用。

技术背景

恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，目前化学治疗是治疗恶性肿瘤的主要方法之一。据统计，在2018年超过了960万例肿瘤患者死亡，研究表明肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药性(mdr)是化疗失败的主要原因之一。天然产物具有结构多样的特点，已成为发现治疗重大疾病的药物或良好先导化合物的重要来源。从天然产物中寻找和开发结构新颖、低毒、安全和高效mdr逆转活性的新型化合物是肿瘤治疗学及药物学研究的热点内容。

夫西地酸(fusidicacid，fa)是从真菌fusidiumcoccineum中分离出来的窄谱高效抗生素，它被用于由金黄色葡萄球菌以及其他几种革兰氏阳性菌引起的皮肤感染，骨关节感染和烧伤感染等的治疗。夫西地酸自1962年上市以来，对夫西地酸有着广泛地研究，但主要集中在抗菌方面。

技术实现要素：

本发明的目的就是提供一种具有肿瘤耐药逆转活性、结构新颖的夫西地酸衍生物及其制备方法，同时提供该类衍生物在肿瘤耐药逆转领域中的新应用，对开发新型肿瘤耐药逆转剂具有重要意义。

本发明是通过以下技术方案来实现：

通式i所示夫西地酸a环并氨基噻唑环衍生物及其药学上可接受的盐制备肿瘤耐药逆转剂、可药用载体的应用，

其中：

通式i：r1代表羟基、氧代；

r2代表or3、

r3代表h、卤素取代或非取代苄基；

x代表c、n；

y代表f、cl、br。

优选，通式i所示夫西地酸a环并氨基噻唑环衍生物及其药学上可接受的盐，

其中，通式i：r1代表羟基、氧代；

r2代表or3、

r3代表h、苄基；

x代表c、n；

y代表cl。

优选，通式i所示夫西地酸a环并氨基噻唑环衍生物及其药学上可接受的盐，

其中，通式i：

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸苄酯；

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(7-氮杂苯并三氮唑-1)酯；

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(6-氯-1h-苯并三氮唑-1)酯；

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮-3)酯；

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(1h-苯并三氮唑-1)酯。

上述通式i所示夫西地酸a环并氨基噻唑环衍生物及其药学上可接受的盐的制备方法，当r1为羟基时，制备步骤包括：

a.以夫西地酸为原料，用氯铬酸吡啶氧化3位羟基；

b.在碱性条件和催化剂作用下，a步得到的产物与醇或溴化苄反应；

c.b步所得产物依次与三溴化吡啶鎓、硫脲反应即得。

当r1为氧代时，制备步骤包括：

a.以夫西地酸为原料，用氯铬酸吡啶氧化3，11位羟基；

b.在碱性条件和催化剂作用下，a步得到的产物与醇或溴化苄反应；

c.b步所得产物依次与三溴化吡啶鎓、硫脲反应即得。

本发明通式i夫西地酸衍生物及其医学上可接受的盐用途，用于制备肿瘤耐药逆转剂和/或可药用载体，用于治疗动物，优选治疗人类疾病或病症。

有效量的通式i夫西地酸衍生物及其医学上可接受的盐制备的肿瘤耐药逆转剂与临床抗肿瘤药物合用，用于治疗胃癌、肺癌、宫颈癌、乳腺癌或结肠癌等疾病或病症。优选的，所述临床抗肿瘤药物是指紫杉醇。

夫西地酸是一种上市的抗菌药物，其本身无肿瘤耐药逆转活性，通式i夫西地酸衍生物使对紫杉醇耐药的肿瘤耐药细胞kbv对紫杉醇的敏感性显著提高，使紫杉醇仍能以极低的浓度对其产生良好的抗肿瘤活性，可见具体实施方式部分的药理试验。

具体实施方式

1.下面通过实施例进一步详细描述本发明，但本发明不仅仅局限于以下实施例。

实施例1

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸苄酯

取500ml茄形瓶，将夫西地酸(10.0g，19.4mmol)溶于无水二氯甲烷(200ml)中，加入新制备的pcc(5.4g，25.2mmol)，室温搅拌反应5小时。反应结束后，二氯甲烷稀释，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(v氯仿:v甲醇＝100:1)，得白色固体x1(3.2g，32.5％)。

取250ml茄形瓶，将x1(2.5g，4.9mmol)溶于dmf(100ml)中，加入碳酸钾(1.4g，9.7mmol)、溴化苄(0.9ml，7.3mmol)，50℃搅拌反应6小时。反应结束后，乙酸乙酯稀释，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(v氯仿:v甲醇＝100:1)，得白色固体x2(2.2g，74.5％)。

取100ml茄形瓶，将x2(1.0g，1.7mmol)溶于三氯甲烷(40ml)中，加入三溴化吡啶嗡(0.8g，2.4mmol)，室温搅拌反应8小时。反应结束后，蒸除溶剂，乙酸乙酯稀释，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(v氯仿:v甲醇＝100:1)，得白色固体x3(0.6g，52.5％)。

取50ml茄形瓶，将x3(100mg，146μmol)溶于无水乙醇(30ml)中，加入硫脲(54.5mg，0.7mmol)，80℃回流反应6小时。反应结束后，蒸除溶剂，硅胶柱层析(v氯仿:v甲醇＝90:1)，得淡黄色固体(60.5mg，62.8％)。¹h-nmr(cdcl3,400mhz)δ:7.45-7.28(m,5h,5×ar-h),5.93(d,j＝8.40hz,1h,16-h),5.24(d,j＝12.20hz,1h,char),5.09(t,j＝7.20hz,1h,24-h),4.96(d,j＝12.20hz,1h,char),4.40(s,1h,11-h),3.70-3.68(m,1h,4-h),3.49-3.47(m,1h,1-h),3.25-3.21(m,1h,1-h),3.04(d,j＝11.50hz,1h,13-h),2.49-2.42(m,2h,2×22-h),2.37-2.28(m,1h,12-h),2.26-2.00(m,4h,15-h,2×23-hand5-h),1.95(s,3h,ococh3),1.93-1.76(m,2h,12-hand7-h),1.66(s,3h,27-ch3),1.65-1.57(m,2h,6-hand9-h),1.55(s,3h,26-ch3),1.31(s,3h,30-ch3),1.36-1.27(m,3h,15-h,6-hand7-h),1.01(s,3h,19-ch3),0.97(s,3h,18-ch3),0.89(s3h,28-ch3).

实施例2

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(7-氮杂苯并三氮唑-1)酯；

合成方法参照实施例1，得淡黄色固体(66.8mg,69.0％)。¹h-nmr(cdcl3,400mhz)δ:8.53-8.50(m,1h,pyr-h),8.25-8.20(m,1h,pyr-h),7.30-7.27(m,1h,pyr-h),5.85(d,j＝8.40hz,1h,16-h),5.09(t,j＝7.20hz,1h,24-h),4.38(s,1h,11-h),4.16-4.12(m,1h,4-h),4.00-3.96(m,1h,1-h),3.23-3.18(m,1h,1-h),3.03(d,j＝11.50hz,1h,13-h),2.48-2.45(m,2h,2×22-h),2.37-2.28(m,1h,12-h),2.26-2.00(m,4h,15-h,2×23-hand5-h),1.95(s,3h,ococh3),1.93-1.85(m,2h,12-hand7-h),1.66(s,3h,27-ch3),1.63-1.60(m,2h,6-hand9-h),1.58(s,3h,26-ch3),1.27(s,3h,30-ch3),1.23(s,3h,19-ch3),0.92(s,3h,18-ch3),0.89(s,3h,28-ch3).

实施例3

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(6-氯-1h-苯并三氮唑-1)酯；

合成方法参照实施例1，得淡黄色固体(62.9mg,64.9％)。¹h-nmr(cdcl3,400mhz)δ:7.72-7.69(m,1h,ar-h),7.60(s,1h,ar-h),7.21(m,1h,ar-h),5.86(d,j＝8.40hz,1h,16-h),5.07(t,j＝7.20hz,1h,24-h),4.33(s,1h,11-h),4.21-4.18(m,1h,4-h),4.01-3.98(m,1h,1-h),3.21-3.16(m,1h,1-h),3.02(d,j＝11.50hz,1h,13-h),2.44-2.38(m,2h,2×22-h),2.37-2.28(m,1h,12-h),2.26-2.00(m,4h,15-h,2×23-hand5-h),1.96(s,3h,ococh3),1.93-1.76(m,2h,12-hand7-h),1.66(s,3h,27-ch3),1.65-1.59(m,2h,6-hand9-h),1.58(s,3h,26-ch3),1.28(s,3h,30-ch3),1.24(s,3h,19-ch3),0.91(s,3h,18-ch3),0.87(s,3h,28-ch3).

实施例4

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮-3)酯；

合成方法参照实施例1，得淡黄色固体(60.3mg,62.2％)。¹h-nmr(cdcl3,400mhz)δ:8.36-8.34(m,1h,ar-h),8.21-8.19(m,1h,ar-h),8.00-7.98(m,1h,ar-h),7.84-7.80(m,1h,ar-h),5.96(d,j＝8.40hz,1h,16-h),5.19(t,j＝7.20hz,1h,24-h),4.40(s,1h,11-h),3.42-3.40(m,1h,4-h),3.25-3.15(m,2h,2×1-h),3.14(d,j＝11.50hz,1h,13-h),2.44-2.38(m,2h,2×22-h),2.37-2.28(m,1h,12-h),2.26-2.20(m,4h,15-h,2×23-hand5-h),2.08(s,3h,ococh3),1.93-1.76(m,2h,12-hand7-h),1.66(s,3h,27-ch3),1.65-1.59(m,2h,6-hand9-h),1.42(s,3h,26-ch3),1.27(s,3h,30-ch3),1.24(s,3h,19-ch3),1.01(s,3h,18-ch3),0.95(s,3h,28-ch3).

实施例5

16β-乙酰氧基-11α-羟基-4α,8α,14β-三甲基-2,3-并[2,3-b]氨基噻唑-18-去甲-5α,10β-胆甾-(17z)-17(20),24-二烯-21-酸(1h-苯并三氮唑-1)酯

合成方法参照实施例1，得淡黄色固体(68.7mg,71.0％)。¹h-nmr(cdcl3,400mhz)δ:7.77-7.75(m,1h,ar-h),7.67-7.66(m,1h,ar-h),7.36-7.33(m,2h,ar-h),5.86(d,j＝8.40hz,1h,16-h),5.08(t,j＝7.20hz,1h,24-h),4.35(s,1h,11-h),3.76-3.72(m,1h,4-h),3.50-3.40(m,1h,1-h),3.36-3.32(m,1h,1-h),3.12-3.10(m,1h,13-h),2.49-2.42(m,2h,2×22-h),2.37-2.28(m,1h,12-h),2.26-2.00(m,4h,15-h,2×23-hand5-h),1.95(s,3h,ococh3),1.93-1.76(m,2h,12-hand7-h),1.64(s,3h,27-ch3),1.65-1.59(m,2h,6-hand9-h),1.57(s,3h,26-ch3),1.23(s,3h,30-ch3),1.11(s,3h,19-ch3),1.05(s,3h,18-ch3),0.90(s,3h,28-ch3).

2.下面是本发明部分化合物的药理实验结果。

(1)实验方法：实施例1-5对抗肿瘤药物紫杉醇在kbv耐药株细胞的存活率的检测

细胞铺板：取处于对数生长期生长状态良好的kbv耐药株细胞，胰酶消化后处理后加入培养基，轻轻吹打成单细胞悬液。细胞计数后用培养基将细胞浓度稀释成3-4×10⁴个/ml，以100μl/孔的体积接种于96孔细胞板培养板中，将其放置于二氧化碳培养箱中静置培养。

细胞给药：细胞铺板24h后，分别加入10μm的不同化合物联合给予100nm的paclitaxel及相应溶剂对照培养。每组3个平行孔。加药完毕后，将96孔板置于培养箱中，静置培养72h。

mtt检测：给予相应的药物培养细胞72h后，对其进行细胞存活率的检测。

(2)实验结果：

实施例1-5单独用药和联合用药时细胞存活率如表1所示。

表1.实施例1-5单独用药和联合用药时细胞存活率

实施例1-5对抗肿瘤药物紫杉醇在kbv耐药株细胞的存活率分析：

衍生物的kbv耐药株细胞的存活率评价结果显示，夫西地酸本身无肿瘤耐药逆转活性，实施例1-5都具有较好的肿瘤耐药逆转活性，其中活性最好的为实施例3，且效果优于常用抗肿瘤药物verapamil(维拉帕米)40.37±2.62％的活性。分析原因在于作为杂环胺的氨基噻唑环引入结构中与靶点易形成氢键、疏水作用以及配位键等多种作用，制得结构新颖的夫西地酸衍生物，同时提供该类衍生物在肿瘤耐药逆转领域中的新应用，对开发新型肿瘤耐药逆转剂具有重要意义。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种等同变换，这些等同变换均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

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