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您当前的位置： 经烧结的粒子在治疗肠道感染以及提升生长性能上的用途的制作方法
2021-01-08 11:01:34|
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起点商标网 本发明是有关于一种使用含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物来治疗肠道病原体感染和/或提升生长性能的方法。
背景技术：
：：在生物体的大小肠道中存在可能会造成肠炎(enteritis)和/或结肠炎(colitis)的肠道病原体(包括感染)是有健康顾虑的。常见与肠道病原体感染有关的临床表现为频繁的腹泻、恶心、呕吐、腹痛、发烧、冷颤，以及其他正常身体状况的改变。常见的肠道病原体是细菌性肠道病原体(bacterialenteropathogens)[诸如，沙门杆菌属物种(salmonellaspp.)、志贺杆菌属物种(shigellaspp.)、大肠杆菌(escherichiacoli)、弯曲菌属物种(campylobacterspp.)、霍乱弧菌(vibriocholerae)等等]；病毒性肠道病原体(viralenteropathogens)[诸如，肠道病毒(enteroviruses)、轮状病毒(rotaviruses)、诺罗病毒(norwalkvirus)以及腺病毒(adenoviruses)]；真菌[诸如，念珠菌(candida)]；以及寄生虫性肠道病原体(parasiticenteropathogens)[诸如，球虫(coccidia)、梨形鞭毛虫(giardialamblia)、大肠纤毛虫(balantidiumcoli)、人芽囊原虫(blastocystishominis)、隐孢子虫属物种(cryptosporidiumspp.)、蛲虫(enterobiusvermicularis)以及痢疾阿米巴(entamoebahistolytica)]。多种预防和治疗的策略(诸如，疫苗接种、抗生素或止吐剂的给药)已被采用来对抗肠道病原体的感染。然而，仍有需要去进一步改善这些预防和/或治疗的策略。申请人的美国专利申请公开号2017/0224727a1揭示一种能够稳定地通过胃的氨基酸亚铁螯合物，其在控制体重以及增强脂质代谢(lipidmetabolism)与脂肪分解(lipolysis)上是有效的。此外，如同在申请人先前的专利申请(包括美国专利申请公开号2015/0065569a1和2017/0007568a1，以及中国台湾发明专利公告号i587856)中所揭示的，所述氨基酸亚铁螯合物亦能够被用于癌症与糖尿病的治疗，以及降低癌细胞的乳酸产生。这些专利申请与专利以它们的整体在此被并入本案以作为参考资料。技术实现要素：因此，在第一个方面，本发明提供一种含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物供应用于制备用来治疗肠道病原体的感染的医药品的用途，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子通过烧结包括亚铁离子以及氨基酸的氨基酸亚铁螯合物而被制得，并且具有范围落在500至2,600nm内的平均粒径以及具有范围落在1,500至600,000道尔顿(dalton)内的重均分子量(weightaveragemolecularweight)。本发明所述的用途，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在400,000至600,000道尔顿内的重均分子量。本发明所述的用途，所述肠道病原体为细菌性肠道病原体。本发明所述的用途，所述细菌性肠道病原体选自由下列所构成的群组：大肠杆菌、沙门杆菌属物种、产气荚膜芽孢梭菌，以及它们的组合。本发明所述的用途，所述肠道病原体为寄生虫性肠道病原体。本发明所述的用途，所述寄生虫性肠道病原体是球虫。本发明所述的用途，所述氨基酸亚铁螯合物是甘氨酸亚铁螯合物。本发明所述的用途，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例落在1：1至1：4的范围内。在第二个方面，本发明提供一种用于治疗肠道病原体的感染的方法，其包含有对需要的个体给药以如上所述的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物。在第三个方面，本发明提供一种动物饲料，其包含有如上所述的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子通过烧结包括亚铁离子以及氨基酸的氨基酸亚铁螯合物而被制得。本发明所述的动物饲料，所述氨基酸亚铁螯合物是甘氨酸亚铁螯合物。本发明所述的动物饲料，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例是落在1：1至1：4的范围内。在第四个方面，本发明提供一种用于提升在动物中的生长性能的方法，其包括对所述动物投予如上所述的组合物和/或如上所述的动物饲料。具体实施方式本发明的上述以及其它目的、特征与优点，在参照以下的详细说明与较佳实施例后，将变得明显。除非另外有所定义，在本文中所使用的所有技术性与科学术语具有本领域技术人员所共同了解的意义。本领域技术人员会认知到许多与那些被描述于本文中者相似或等效的方法和材料，它们可被用于实施本发明。当然，本发明决不受到所描述的方法和材料的限制。为表清楚，下面的界定被使用于本文中。如本文中所使用的术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”意指降低(lessening)、诱发停滞(inducingstasis)或者延后(postponing)或减少(reducing)疾病或病况(condition)的进展(progression)、发展(development)、发作(onset)或严重性(severity)或者与本文中所描述的疾病或障碍(disorder)或病况相关的一或多个症状(symptoms)的严重性，或者改善(ameliorating)现有的不受控制或非所欲的症状、预防额外的症状，或者缓解(relieving)或减轻(alleviating)个体所经历的疾病表现的强度和/或期间。术语“治疗”亦包括预防性地(prophylactically)防止(preventing)、治疗(curing)、治愈(healing)、改变(altering)、医治(remedying)、改善(ameliorating)、好转(improving)或影响(affecting)病况(例如，疾病)、所述病况的症状，或对所述病况的倾向(predisposition)。本发明提供一种用于治疗肠道病原体的感染的方法，其包含有对需要的个体给药以含有氨基酸亚铁螯合物和/或由烧结所述氨基酸亚铁螯合物所制得的经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物。所述氨基酸亚铁螯合物包括亚铁离子以及氨基酸。依据本发明，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例(chelatingratio)落在1：1至1：4的范围内。在某些具体例中，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例落在1：1.5与1：2.5之间。用于制备所述氨基酸亚铁螯合物的方法已被揭示在，例如，us2017/0224727a1中，并且包括在加热下使亚铁化合物与氨基酸混合的步骤。在某些具体例中，所述混合步骤可在范围落在60℃至90℃的温度下被进行。在某些具体例中，所述混合步骤可被进行历时8小时至48小时。依据本发明，在所述制备方法中所使用的所述亚铁化合物与所述氨基酸的重量比例介于1：1.2与1：1.5之间。在本发明的具体例中，所述亚铁化合物与所述氨基酸的重量比例为1：1.3。在某些具体例中，所述亚铁化合物可为硫酸亚铁(ferroussulfate)、氯化亚铁(ferrouschloride)、焦磷酸亚铁(ferrouspyrophosphate)，或者它们的组合。在某些具体例中，所述氨基酸可为甘氨酸(glycine)。也就是说，所述氨基酸亚铁螯合物可为甘氨酸亚铁螯合物(ferrousglycinatechelate)。在某些具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在500至2,600nm内的平均粒径(averageparticlesize)以及范围落在1,500至600,000道尔顿(dalton)内的重均分子量(weightaveragemolecularweight)。在某些具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在1,500至15,000道尔顿内的重均分子量。在其他具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在400,000至550,000道尔顿内的重均分子量。在示范性具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有约为550,000道尔顿的重均分子量。在示范性具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有约为1,465.90±132.29nm的平均粒径[其通过，例如，在beckmancoultern5submicron粒径分析仪(beckmancoultern5submicronparticlesizeanalyzer)上的动态光散射(dynamiclightscattering,dls)且于水中所测得]。此外，溶解于水中的所述经烧结的氨基酸亚铁粒子的数均分子量(number-averagemolecularweight,mn)、重均分子量(weight-averagemolecularweight,mw)、峰值分子量(peakmolecularweight,mp)以及多分散性指数(polydispersity,pdi)[通过使用watersalliance2695系统(watersalliance2695system)的凝胶渗透层析法(gelpermeationchromatography)所测得]分别为68,188道尔顿、525,538道尔顿、286,426道尔顿以及7.707205道尔顿。如本文中所使用的，术语“个体”意指任何感兴趣的动物，诸如人(humans)、猴子(monkeys)、牛(cows)、绵羊(sheeps)、马(horses)、猪(pigs)、鸡(chickens)、山羊(goats)、狗(dogs)、猫(cats)、小鼠(mice)以及大鼠(rats)。在某些具体例中，所述个体可为鸡。在某些具体例中，所述肠道病原体可为细菌性肠道病原体(bacterialenteropathogen)。细菌性肠道病原体的实例包括，但不限于：弯曲菌属物种(campylobacterspp.)、产气荚膜芽孢梭菌(clostridiumperfringens)、大肠杆菌(escherichiacoli)[诸如肠内病原大肠杆菌(enteropathogenice.coli,epec)、肠侵袭性大肠杆菌(enteroinvasivee.coli,eiec)、肠聚集性大肠杆菌(enteroaggregativee.coli,eaec)、肠毒性大肠杆菌(enterotoxigenice.coli,etec)等等]、单核细胞增多性李氏菌(listeriamonocytogenes)、霍乱弧菌(vibriocholerae)、沙门杆菌属物种(salmonellaspp.)以及金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)。弯曲菌菌株的实例包括，但不限于：空肠弯曲杆菌(campylobacterjejuni)、大肠弯曲杆菌(campylobactercoli)、红嘴鸥弯曲杆菌(campylobacterlari)以及乌普萨拉弯曲杆菌(campylobacterupsaliensis)。沙门杆菌菌株的实例包括，但不限于：肠道沙门杆菌(salmonellaenterica)、邦戈沙门杆菌(salmonellabongori)，以及它们的亚种(subspecies)。肠道沙门杆菌是一种物种(species)并且被进一步分成七个亚种[也就是肠道沙门杆菌亚利桑那亚种(s.entericasubsp.arizonae)、肠道沙门杆菌双相亚利桑那亚种(s.entericasubsp.diarizonae)、肠道沙门杆菌肠道亚种(s.entericasubsp.enteric)、肠道沙门杆菌豪顿亚种(s.entericasubsp.houtenae)、肠道沙门杆菌印度亚种(s.entericasubsp.indica)、肠道沙门杆菌肠炎亚种(s.entericasubsp.enteritidis)以及肠道沙门杆菌萨拉姆亚种(s.entericasubsp.salamae)]，所述亚种包含有超过2,500个血清型(serotypes)，诸如，鸡沙门杆菌(salmonellagallinarum)、雏白痢沙门杆菌(salmonellapullorum)、猪霍乱沙门杆菌(salmonellacholeraesuis)、都柏林沙门杆菌(salmonelladublin)、肠炎沙门杆菌(salmonellaenteritidis)、海登堡沙门杆菌(salmonellaheidelberg)、副伤寒沙门杆菌(salmonellaparatyphi)、伤寒沙门杆菌(salmonellatyphi)，以及鼠伤寒沙门杆菌(salmonellatyphimurium)。在某些具体例中，所述肠道病原体可为寄生虫性肠道病原体(parasiticenteropathogen)。寄生虫性肠道病原体的实例包括，但不限于：球虫(coccidia)、梨形鞭毛虫(giardia)、蛲虫(enterobiusvermicularis)、痢疾阿米巴(entamoebahistolytica)、隐孢子虫属物种(cryptosporidiumspp.)、大肠纤毛虫(balantidiumcoli)、人芽囊原虫(blastocystishominis)以及环孢子虫(cyclospora)。依据本发明，所述组合物可被制备成药学组合物(pharmaceuticalcomposition)或食物组合物(foodcomposition)的形式。若所述组合物被制备成药学组合物的形式，所述组合物可进一步包含药学上可接受的载剂(pharmaceuticallyacceptablecarrier)，并且利用本领域技术人员所详知的技术而被制造成适合于口服给药(oraladministration)的剂型(dosageform)。所述剂型的实例包括，但不限于：溶液(solution)、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、粉末(powder)、锭剂(tablet)、丸剂(pill)、糖浆(syrup)、口含锭(lozenge)、片剂(troche)、口嚼胶(chewinggum)、胶囊(capsule)、浓浆(slurry)以及类似物。适用于本发明的药学上可接受的载剂的实例可包括，但不限于：溶剂(solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagents)、分解剂(decomposers)、黏结剂(bindingagents)、赋形剂(excipients)、稳定剂(stabilizingagents)、螯合剂(chelatingagents)、稀释剂(diluents)、胶凝剂(gellingagents)、防腐剂(preservatives)、润滑剂(lubricants)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagents)、脂质体(liposomes)，以及它们的组合。依据本发明，所述组合物可呈食品添加物(foodadditive)的形式(食品组合物的示范性实例)，其可以被添加至可食性材料(ediblematerial)中以制备供人类或动物食用的食品产品。依据本发明，所述食物产品的实例可包括，但不限于：流体乳品(fluidmilkproducts)[诸如，牛奶(milk)以及浓缩牛奶(concentratedmilk)]、健康食品(healthfoods)、动物饲料(animalfeeds)以及膳食补充品(dietarysupplements)。申请人进一步添加如上所述的氨基酸亚铁螯合物至动物饲料中并以所述动物饲料来饲养鸡以及离乳后仔猪(postweaningpiglets)。从实验结果中已被证实的是：依据本发明，氨基酸亚铁螯合物能够有效地提升动物的生长性能。因此，本发明提供动物饲料，其包含有如上所述的氨基酸亚铁螯合物和/或得自于其中的经烧结的氨基酸亚铁粒子。本发明亦提供一种用于提升在动物中的生长性能的方法，其包括对所述动物投予如上所述的动物饲料。如本文中所使用的术语“生长性能(growthperformance)”意指生长速率(growthrate)、体重和/或饲料效率(feedefficiency)。在某些具体例中，本发明的氨基酸亚铁螯合物和/或得自于其中的经烧结的氨基酸亚铁粒子能够通过使用本领域普通技术人员所熟知的标准技术来被添加至动物饲料。举例来说，氨基酸亚铁螯合物和/或经烧结的氨基酸亚铁粒子可直接地被添加至动物饲料，或可被用来制备成适合随后地被添加至动物饲料中的中间体组合物(intermediatecomposition)(例如，一种饲料添加物或预混合物)。在某些具体例中，本发明的动物饲料由氨基酸亚铁螯合物与动物底物饲料混合在一起所制得。依据本发明的动物饲料可口服地给药，并且可通过本领域普通技术人员所熟知的技术来制造成一形式，包括，但不限于：液态形式(liquidform)、固态形式(solidform)[诸如，粉末形式(powderform)、粒状形式(granularform)、颗粒形式(particulateform)或经压制的锭剂(compressedtablet)]、凝胶形式(gelform)，以及浓浆形式(slurryform)。本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述实施例只是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。<实施例>一般实验材料：1.含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物的制备：含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物(货号：f171001，制造日期：2017.10.5)呈冷冻干燥粉末的形式，并且由chinataiwanbioligandco.,ltd.所制造。具体而言，硫酸亚铁与甘氨酸(高于98％的纯度)以为1：1.3的重量比例而被混合，继而自60℃加热至90℃历时8小时至48小时以得到具有范围落在1：1至1：4的亚铁离子与氨基酸的螯合比例的氨基酸亚铁螯合物。氨基酸亚铁螯合物接着在范围落在200℃至240℃内的温度下被烧结以得到经烧结的氨基酸亚铁粒子。通过在beckmancoultern5submicron粒径分析仪(beckmancoultern5submicronparticlesizeanalyzer)上的动态光散射(dynamiclightscattering,dls)且于水中所测得的经烧结的氨基酸亚铁粒子的平均粒径为1,465.90±132.29nm。通过使用watersalliance2695系统(watersalliance2695system)的凝胶渗透层析法(gelpermeationchromatography)所测得的溶解于水中的经烧结的氨基酸亚铁粒子的数均分子量(number-averagemolecularweight,mn)、重均分子量(weight-averagemolecularweight,mw)、峰值分子量(peakmolecularweight,mp)以及多分散性指数(polydispersity,pdi)分别为68,188道尔顿、525,538道尔顿、286,426道尔顿以及7.707205道尔顿。实施例1.实验方法：中国台湾黑羽土鸡(1日龄)是购自于嘉义大学的动物试验场(animalresearchfarminnationalchia-yiuniversity)(中国台湾)，并且在符合中国台湾某机构的动物照护委员会(animalcarecommitteeofthecouncilofagriculture,taiwan)的准则下饲育于农场中。实验鸡只被随机地分成一个对照组以及一个实验组(n＝40/组)，且各组被置于大小为6.5m2的圈栏中。水被任意采食地(adlibitum)提供给所有的实验鸡只。各个实验鸡只是以每日0.1kg的剂量而被喂食以混合饲料历时12周。提供给对照组的混合饲料(每1000kg的混合饲料有20g的铁)由基础饲粮(basaldiet)以及硫酸亚铁所制备。提供给实验组的混合饲料(每1000kg的混合饲料有20g的铁)由所述基础饲粮以及如在“一般实验材料”中标题为“1.含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物的制备”的部分中所述而制得的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制备。各个鸡只的体重在供给所述混合饲料之前与之后测定。随后，各组鸡只的平均日增重(averagedailygain,adg)根据体重以及摄食量(feedintake)来计算。定义为总摄食量对总体重的比值的饲料效率(feedefficiency,fe)亦被计算。实验数据通过史徒登氏t-试验(student’st-test)来作分析以评估试验组别间的差异性。统计学显著性(statisticalsignificance)以p<0.05来表示。此外，在供给所述混合饲料的期间，十五只鸡只在指定的时间点被随机地挑选出，以使用棉花棒从其泄殖腔(cloaca)收集粪便。球虫感染(coccidiainfestation)通过显微镜观察所得到的粪便样品来判定。此外，所得到的粪便是使用tacotmdna/rna提取试剂盒(tacotmdna/rnaextractionkit)(genereachbiotechnologycorp.)并依据制造商的操作指南来进行核酸提取。所得到的dna样品(供作为模板)被用来进行实时聚合酶链式反应(realtimepolymerasechainreaction,real-timepcr)。具体而言，实时pcr实验在含有5μl的模板、1.2μl的各个引物(10μm)、0.5μl的探针(10μm)、10μl的反应缓冲液(universalmastermixiiwithung,appliedbiosystems)以及2.1μl的二次水的20μl的反应混合物中来进行。用来检测各个肠道病原体的引物以及探针被列于表1中。表1注：探针的5’-端以及3’-端分别被标示以荧光素酰胺(fluoresceinamidite,fam)以及黑洞荧光淬灭剂-1(blackholequencher-1,-1)。在起始反应(initiation)步骤期间，在pcr管中的各个样品被预-变性在55℃下历时2分钟接着在95℃下历时10分钟以活化dna聚合酶，继而进行45个循环如下：在95℃下进行变性反应(denaturation)历时15秒，以及在60℃下进行引物退火(primerannealing)与dna延长反应(elongation)历时60秒。结果：关于生长性能以及肠道病原体感染的实验结果被显示于表2中。表21:以平均值±标准差(standarddeviation,s.d.)来表示2:以在所挑选出的15只鸡只中的感染百分比表示*:当与对照组作比较，p<0.05从表2可看到的是：在供给所述混合饲料之后，实验组鸡只的体重显著地高于对照组鸡只。实验组的adg以及fe分别地优于对照组的adg以及fe。此外，当相较于对照组，实验组的各个所试验的肠道病原体的感染百分比是显著较低的。上面的结果显示：由本发明含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制得的混合饲料能够有效地降低肠道病原体所引起的感染并且提升鸡只的生长性能。实施例2.实验方法：大约1000只雄性仔猪与1000只雌性仔猪(购自于中国台湾云林县海丰牧场，并且饲养于养殖场中)被使用于下面的实验中。实验仔猪被随机地分成一个实验组以及一个对照组，并且充足的水以及饲料被提供给所述实验仔猪。在离乳之后(也就是在4周龄时)，各个实验仔猪被喂食以混合饲料历时8周直到所述实验仔猪达到12周龄。提供给对照组的混合饲料由呈为1000：1的重量比的基础饲粮以及硫酸亚铁所制备。提供给实验组的混合饲料是由呈为1000：1的重量比的所述基础饲粮以及如在“一般实验材料”中标题为“1.含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物的制备”的部分中所述而制得的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制备。在4与12周龄时，各组离乳后仔猪的总摄食量以及体重被测量并记录。随后，各组离乳后仔猪的平均日增重(adg)以及平均日摄食量(averagedailyfeedintake,adfi)根据体重以及总摄食量来计算。定义为adfi对adg的比值的饲料效率(fe)亦被计算。实验结果被显示于表3中。实验数据是以平均值(mean)±s.d.来表示，并且通过史徒登氏t-试验来作分析以评估试验组别间的差异性。统计学显著性是以p<0.05来表示。结果：表31：以平均值±s.d.表示*：当与对照组作比较，p<0.05参见表3，在仔猪12周龄时，实验组离乳后仔猪的体重显著地高于对照组离乳后仔猪。此外，实验组离乳后仔猪的adg高于对照组离乳后仔猪的adg，且实验组的fe显著地低于(也就是优于)对照组的fe。上面的实验结果显示：由本发明含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制得的混合饲料能够有效地提升离乳后仔猪的生长性能。本说明书中被引述的所有专利和文献以其整体被并入本案作为参考资料。若有所冲突时，本案详细说明(包含界定在内)将占上风。在上面的详细说明中，为了说明的目的，许多具体细节已被描述以供彻底了解具体例。然而，对于本领域技术人员而言将会明显的是，一或多个其他具体例可在没有这些具体细节中的部分者而被实施。亦应被了解的是，本说明书通篇所提及的“一个具体例(oneembodiment)”、“一具体例(anembodiment)”，带有序号标示的具体例等等意指特定的特征、结构或特性可被包括在本发明的实施中。在详细说明中应被进一步了解的是，为了精简本发明并有助于理解各种不同的发明方面的目的，各种不同的特征有时被集合在一个单一的具体例、图式或其说明中，在实施本发明时，若适当，来自于一个具体例的一或多个特征或具体细节可与来自于另一个具体例的一或多个特征或具体细节一起被实施。虽然本发明已参考上述特定的具体例被描述，明显地在不背离本发明的范围和精神下可作出很多的修改和变化。因此意欲的是，本发明只受如随文检附的权利要求书所示者的限制。<110>普惠德生技股份有限公司<120>经烧结的粒子在治疗肠道感染以及提升生长性能上的用途<160>9<170>patentinversion3.5<210>1<211>23<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测大肠杆菌(e.coli)的正向引物<400>1ttatagcgacagcaccaaatatg23<210>2<211>24<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测大肠杆菌的反向引物<400>2cacgataccatccatatatctgag24<210>3<211>24<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测大肠杆菌的探针<400>3ttccacctaacgcagaaacctcct24<210>4<211>23<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测沙门杆菌属物种(salmonellaspp.)的正向引物<400>4ctcaccaggagattacaacatgg23<210>5<211>23<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测沙门杆菌属物种的反向引物<400>5agctcagaccaaaagtgaccatc23<210>6<211>22<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测沙门杆菌属物种的探针<400>6caccgacggcgagaccgacttt22<210>7<211>26<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测产气荚膜芽孢梭菌(c.perfringens)的正向引物<400>7ggcaaagaggaaattataaacaagct26<210>8<211>21<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测产气荚膜芽孢梭菌的反向引物<400>8gcgctatcaacggcagtaaca21<210>9<211>19<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测产气荚膜芽孢梭菌的探针<400>9atactccatatcatcctgc19当前第1页1 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：：在生物体的大小肠道中存在可能会造成肠炎(enteritis)和/或结肠炎(colitis)的肠道病原体(包括感染)是有健康顾虑的。常见与肠道病原体感染有关的临床表现为频繁的腹泻、恶心、呕吐、腹痛、发烧、冷颤，以及其他正常身体状况的改变。常见的肠道病原体是细菌性肠道病原体(bacterialenteropathogens)[诸如，沙门杆菌属物种(salmonellaspp.)、志贺杆菌属物种(shigellaspp.)、大肠杆菌(escherichiacoli)、弯曲菌属物种(campylobacterspp.)、霍乱弧菌(vibriocholerae)等等]；病毒性肠道病原体(viralenteropathogens)[诸如，肠道病毒(enteroviruses)、轮状病毒(rotaviruses)、诺罗病毒(norwalkvirus)以及腺病毒(adenoviruses)]；真菌[诸如，念珠菌(candida)]；以及寄生虫性肠道病原体(parasiticenteropathogens)[诸如，球虫(coccidia)、梨形鞭毛虫(giardialamblia)、大肠纤毛虫(balantidiumcoli)、人芽囊原虫(blastocystishominis)、隐孢子虫属物种(cryptosporidiumspp.)、蛲虫(enterobiusvermicularis)以及痢疾阿米巴(entamoebahistolytica)]。多种预防和治疗的策略(诸如，疫苗接种、抗生素或止吐剂的给药)已被采用来对抗肠道病原体的感染。然而，仍有需要去进一步改善这些预防和/或治疗的策略。申请人的美国专利申请公开号2017/0224727a1揭示一种能够稳定地通过胃的氨基酸亚铁螯合物，其在控制体重以及增强脂质代谢(lipidmetabolism)与脂肪分解(lipolysis)上是有效的。此外，如同在申请人先前的专利申请(包括美国专利申请公开号2015/0065569a1和2017/0007568a1，以及中国台湾发明专利公告号i587856)中所揭示的，所述氨基酸亚铁螯合物亦能够被用于癌症与糖尿病的治疗，以及降低癌细胞的乳酸产生。这些专利申请与专利以它们的整体在此被并入本案以作为参考资料。技术实现要素：因此，在第一个方面，本发明提供一种含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物供应用于制备用来治疗肠道病原体的感染的医药品的用途，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子通过烧结包括亚铁离子以及氨基酸的氨基酸亚铁螯合物而被制得，并且具有范围落在500至2,600nm内的平均粒径以及具有范围落在1,500至600,000道尔顿(dalton)内的重均分子量(weightaveragemolecularweight)。本发明所述的用途，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在400,000至600,000道尔顿内的重均分子量。本发明所述的用途，所述肠道病原体为细菌性肠道病原体。本发明所述的用途，所述细菌性肠道病原体选自由下列所构成的群组：大肠杆菌、沙门杆菌属物种、产气荚膜芽孢梭菌，以及它们的组合。本发明所述的用途，所述肠道病原体为寄生虫性肠道病原体。本发明所述的用途，所述寄生虫性肠道病原体是球虫。本发明所述的用途，所述氨基酸亚铁螯合物是甘氨酸亚铁螯合物。本发明所述的用途，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例落在1：1至1：4的范围内。在第二个方面，本发明提供一种用于治疗肠道病原体的感染的方法，其包含有对需要的个体给药以如上所述的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物。在第三个方面，本发明提供一种动物饲料，其包含有如上所述的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子通过烧结包括亚铁离子以及氨基酸的氨基酸亚铁螯合物而被制得。本发明所述的动物饲料，所述氨基酸亚铁螯合物是甘氨酸亚铁螯合物。本发明所述的动物饲料，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例是落在1：1至1：4的范围内。在第四个方面，本发明提供一种用于提升在动物中的生长性能的方法，其包括对所述动物投予如上所述的组合物和/或如上所述的动物饲料。具体实施方式本发明的上述以及其它目的、特征与优点，在参照以下的详细说明与较佳实施例后，将变得明显。除非另外有所定义，在本文中所使用的所有技术性与科学术语具有本领域技术人员所共同了解的意义。本领域技术人员会认知到许多与那些被描述于本文中者相似或等效的方法和材料，它们可被用于实施本发明。当然，本发明决不受到所描述的方法和材料的限制。为表清楚，下面的界定被使用于本文中。如本文中所使用的术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”意指降低(lessening)、诱发停滞(inducingstasis)或者延后(postponing)或减少(reducing)疾病或病况(condition)的进展(progression)、发展(development)、发作(onset)或严重性(severity)或者与本文中所描述的疾病或障碍(disorder)或病况相关的一或多个症状(symptoms)的严重性，或者改善(ameliorating)现有的不受控制或非所欲的症状、预防额外的症状，或者缓解(relieving)或减轻(alleviating)个体所经历的疾病表现的强度和/或期间。术语“治疗”亦包括预防性地(prophylactically)防止(preventing)、治疗(curing)、治愈(healing)、改变(altering)、医治(remedying)、改善(ameliorating)、好转(improving)或影响(affecting)病况(例如，疾病)、所述病况的症状，或对所述病况的倾向(predisposition)。本发明提供一种用于治疗肠道病原体的感染的方法，其包含有对需要的个体给药以含有氨基酸亚铁螯合物和/或由烧结所述氨基酸亚铁螯合物所制得的经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物。所述氨基酸亚铁螯合物包括亚铁离子以及氨基酸。依据本发明，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例(chelatingratio)落在1：1至1：4的范围内。在某些具体例中，在所述氨基酸亚铁螯合物中所述亚铁离子与所述氨基酸的螯合比例落在1：1.5与1：2.5之间。用于制备所述氨基酸亚铁螯合物的方法已被揭示在，例如，us2017/0224727a1中，并且包括在加热下使亚铁化合物与氨基酸混合的步骤。在某些具体例中，所述混合步骤可在范围落在60℃至90℃的温度下被进行。在某些具体例中，所述混合步骤可被进行历时8小时至48小时。依据本发明，在所述制备方法中所使用的所述亚铁化合物与所述氨基酸的重量比例介于1：1.2与1：1.5之间。在本发明的具体例中，所述亚铁化合物与所述氨基酸的重量比例为1：1.3。在某些具体例中，所述亚铁化合物可为硫酸亚铁(ferroussulfate)、氯化亚铁(ferrouschloride)、焦磷酸亚铁(ferrouspyrophosphate)，或者它们的组合。在某些具体例中，所述氨基酸可为甘氨酸(glycine)。也就是说，所述氨基酸亚铁螯合物可为甘氨酸亚铁螯合物(ferrousglycinatechelate)。在某些具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在500至2,600nm内的平均粒径(averageparticlesize)以及范围落在1,500至600,000道尔顿(dalton)内的重均分子量(weightaveragemolecularweight)。在某些具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在1,500至15,000道尔顿内的重均分子量。在其他具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有范围落在400,000至550,000道尔顿内的重均分子量。在示范性具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有约为550,000道尔顿的重均分子量。在示范性具体例中，所述经烧结的氨基酸亚铁粒子具有约为1,465.90±132.29nm的平均粒径[其通过，例如，在beckmancoultern5submicron粒径分析仪(beckmancoultern5submicronparticlesizeanalyzer)上的动态光散射(dynamiclightscattering,dls)且于水中所测得]。此外，溶解于水中的所述经烧结的氨基酸亚铁粒子的数均分子量(number-averagemolecularweight,mn)、重均分子量(weight-averagemolecularweight,mw)、峰值分子量(peakmolecularweight,mp)以及多分散性指数(polydispersity,pdi)[通过使用watersalliance2695系统(watersalliance2695system)的凝胶渗透层析法(gelpermeationchromatography)所测得]分别为68,188道尔顿、525,538道尔顿、286,426道尔顿以及7.707205道尔顿。如本文中所使用的，术语“个体”意指任何感兴趣的动物，诸如人(humans)、猴子(monkeys)、牛(cows)、绵羊(sheeps)、马(horses)、猪(pigs)、鸡(chickens)、山羊(goats)、狗(dogs)、猫(cats)、小鼠(mice)以及大鼠(rats)。在某些具体例中，所述个体可为鸡。在某些具体例中，所述肠道病原体可为细菌性肠道病原体(bacterialenteropathogen)。细菌性肠道病原体的实例包括，但不限于：弯曲菌属物种(campylobacterspp.)、产气荚膜芽孢梭菌(clostridiumperfringens)、大肠杆菌(escherichiacoli)[诸如肠内病原大肠杆菌(enteropathogenice.coli,epec)、肠侵袭性大肠杆菌(enteroinvasivee.coli,eiec)、肠聚集性大肠杆菌(enteroaggregativee.coli,eaec)、肠毒性大肠杆菌(enterotoxigenice.coli,etec)等等]、单核细胞增多性李氏菌(listeriamonocytogenes)、霍乱弧菌(vibriocholerae)、沙门杆菌属物种(salmonellaspp.)以及金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)。弯曲菌菌株的实例包括，但不限于：空肠弯曲杆菌(campylobacterjejuni)、大肠弯曲杆菌(campylobactercoli)、红嘴鸥弯曲杆菌(campylobacterlari)以及乌普萨拉弯曲杆菌(campylobacterupsaliensis)。沙门杆菌菌株的实例包括，但不限于：肠道沙门杆菌(salmonellaenterica)、邦戈沙门杆菌(salmonellabongori)，以及它们的亚种(subspecies)。肠道沙门杆菌是一种物种(species)并且被进一步分成七个亚种[也就是肠道沙门杆菌亚利桑那亚种(s.entericasubsp.arizonae)、肠道沙门杆菌双相亚利桑那亚种(s.entericasubsp.diarizonae)、肠道沙门杆菌肠道亚种(s.entericasubsp.enteric)、肠道沙门杆菌豪顿亚种(s.entericasubsp.houtenae)、肠道沙门杆菌印度亚种(s.entericasubsp.indica)、肠道沙门杆菌肠炎亚种(s.entericasubsp.enteritidis)以及肠道沙门杆菌萨拉姆亚种(s.entericasubsp.salamae)]，所述亚种包含有超过2,500个血清型(serotypes)，诸如，鸡沙门杆菌(salmonellagallinarum)、雏白痢沙门杆菌(salmonellapullorum)、猪霍乱沙门杆菌(salmonellacholeraesuis)、都柏林沙门杆菌(salmonelladublin)、肠炎沙门杆菌(salmonellaenteritidis)、海登堡沙门杆菌(salmonellaheidelberg)、副伤寒沙门杆菌(salmonellaparatyphi)、伤寒沙门杆菌(salmonellatyphi)，以及鼠伤寒沙门杆菌(salmonellatyphimurium)。在某些具体例中，所述肠道病原体可为寄生虫性肠道病原体(parasiticenteropathogen)。寄生虫性肠道病原体的实例包括，但不限于：球虫(coccidia)、梨形鞭毛虫(giardia)、蛲虫(enterobiusvermicularis)、痢疾阿米巴(entamoebahistolytica)、隐孢子虫属物种(cryptosporidiumspp.)、大肠纤毛虫(balantidiumcoli)、人芽囊原虫(blastocystishominis)以及环孢子虫(cyclospora)。依据本发明，所述组合物可被制备成药学组合物(pharmaceuticalcomposition)或食物组合物(foodcomposition)的形式。若所述组合物被制备成药学组合物的形式，所述组合物可进一步包含药学上可接受的载剂(pharmaceuticallyacceptablecarrier)，并且利用本领域技术人员所详知的技术而被制造成适合于口服给药(oraladministration)的剂型(dosageform)。所述剂型的实例包括，但不限于：溶液(solution)、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、粉末(powder)、锭剂(tablet)、丸剂(pill)、糖浆(syrup)、口含锭(lozenge)、片剂(troche)、口嚼胶(chewinggum)、胶囊(capsule)、浓浆(slurry)以及类似物。适用于本发明的药学上可接受的载剂的实例可包括，但不限于：溶剂(solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagents)、分解剂(decomposers)、黏结剂(bindingagents)、赋形剂(excipients)、稳定剂(stabilizingagents)、螯合剂(chelatingagents)、稀释剂(diluents)、胶凝剂(gellingagents)、防腐剂(preservatives)、润滑剂(lubricants)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagents)、脂质体(liposomes)，以及它们的组合。依据本发明，所述组合物可呈食品添加物(foodadditive)的形式(食品组合物的示范性实例)，其可以被添加至可食性材料(ediblematerial)中以制备供人类或动物食用的食品产品。依据本发明，所述食物产品的实例可包括，但不限于：流体乳品(fluidmilkproducts)[诸如，牛奶(milk)以及浓缩牛奶(concentratedmilk)]、健康食品(healthfoods)、动物饲料(animalfeeds)以及膳食补充品(dietarysupplements)。申请人进一步添加如上所述的氨基酸亚铁螯合物至动物饲料中并以所述动物饲料来饲养鸡以及离乳后仔猪(postweaningpiglets)。从实验结果中已被证实的是：依据本发明，氨基酸亚铁螯合物能够有效地提升动物的生长性能。因此，本发明提供动物饲料，其包含有如上所述的氨基酸亚铁螯合物和/或得自于其中的经烧结的氨基酸亚铁粒子。本发明亦提供一种用于提升在动物中的生长性能的方法，其包括对所述动物投予如上所述的动物饲料。如本文中所使用的术语“生长性能(growthperformance)”意指生长速率(growthrate)、体重和/或饲料效率(feedefficiency)。在某些具体例中，本发明的氨基酸亚铁螯合物和/或得自于其中的经烧结的氨基酸亚铁粒子能够通过使用本领域普通技术人员所熟知的标准技术来被添加至动物饲料。举例来说，氨基酸亚铁螯合物和/或经烧结的氨基酸亚铁粒子可直接地被添加至动物饲料，或可被用来制备成适合随后地被添加至动物饲料中的中间体组合物(intermediatecomposition)(例如，一种饲料添加物或预混合物)。在某些具体例中，本发明的动物饲料由氨基酸亚铁螯合物与动物底物饲料混合在一起所制得。依据本发明的动物饲料可口服地给药，并且可通过本领域普通技术人员所熟知的技术来制造成一形式，包括，但不限于：液态形式(liquidform)、固态形式(solidform)[诸如，粉末形式(powderform)、粒状形式(granularform)、颗粒形式(particulateform)或经压制的锭剂(compressedtablet)]、凝胶形式(gelform)，以及浓浆形式(slurryform)。本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述实施例只是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。<实施例>一般实验材料：1.含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物的制备：含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物(货号：f171001，制造日期：2017.10.5)呈冷冻干燥粉末的形式，并且由chinataiwanbioligandco.,ltd.所制造。具体而言，硫酸亚铁与甘氨酸(高于98％的纯度)以为1：1.3的重量比例而被混合，继而自60℃加热至90℃历时8小时至48小时以得到具有范围落在1：1至1：4的亚铁离子与氨基酸的螯合比例的氨基酸亚铁螯合物。氨基酸亚铁螯合物接着在范围落在200℃至240℃内的温度下被烧结以得到经烧结的氨基酸亚铁粒子。通过在beckmancoultern5submicron粒径分析仪(beckmancoultern5submicronparticlesizeanalyzer)上的动态光散射(dynamiclightscattering,dls)且于水中所测得的经烧结的氨基酸亚铁粒子的平均粒径为1,465.90±132.29nm。通过使用watersalliance2695系统(watersalliance2695system)的凝胶渗透层析法(gelpermeationchromatography)所测得的溶解于水中的经烧结的氨基酸亚铁粒子的数均分子量(number-averagemolecularweight,mn)、重均分子量(weight-averagemolecularweight,mw)、峰值分子量(peakmolecularweight,mp)以及多分散性指数(polydispersity,pdi)分别为68,188道尔顿、525,538道尔顿、286,426道尔顿以及7.707205道尔顿。实施例1.实验方法：中国台湾黑羽土鸡(1日龄)是购自于嘉义大学的动物试验场(animalresearchfarminnationalchia-yiuniversity)(中国台湾)，并且在符合中国台湾某机构的动物照护委员会(animalcarecommitteeofthecouncilofagriculture,taiwan)的准则下饲育于农场中。实验鸡只被随机地分成一个对照组以及一个实验组(n＝40/组)，且各组被置于大小为6.5m2的圈栏中。水被任意采食地(adlibitum)提供给所有的实验鸡只。各个实验鸡只是以每日0.1kg的剂量而被喂食以混合饲料历时12周。提供给对照组的混合饲料(每1000kg的混合饲料有20g的铁)由基础饲粮(basaldiet)以及硫酸亚铁所制备。提供给实验组的混合饲料(每1000kg的混合饲料有20g的铁)由所述基础饲粮以及如在“一般实验材料”中标题为“1.含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物的制备”的部分中所述而制得的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制备。各个鸡只的体重在供给所述混合饲料之前与之后测定。随后，各组鸡只的平均日增重(averagedailygain,adg)根据体重以及摄食量(feedintake)来计算。定义为总摄食量对总体重的比值的饲料效率(feedefficiency,fe)亦被计算。实验数据通过史徒登氏t-试验(student’st-test)来作分析以评估试验组别间的差异性。统计学显著性(statisticalsignificance)以p<0.05来表示。此外，在供给所述混合饲料的期间，十五只鸡只在指定的时间点被随机地挑选出，以使用棉花棒从其泄殖腔(cloaca)收集粪便。球虫感染(coccidiainfestation)通过显微镜观察所得到的粪便样品来判定。此外，所得到的粪便是使用tacotmdna/rna提取试剂盒(tacotmdna/rnaextractionkit)(genereachbiotechnologycorp.)并依据制造商的操作指南来进行核酸提取。所得到的dna样品(供作为模板)被用来进行实时聚合酶链式反应(realtimepolymerasechainreaction,real-timepcr)。具体而言，实时pcr实验在含有5μl的模板、1.2μl的各个引物(10μm)、0.5μl的探针(10μm)、10μl的反应缓冲液(universalmastermixiiwithung,appliedbiosystems)以及2.1μl的二次水的20μl的反应混合物中来进行。用来检测各个肠道病原体的引物以及探针被列于表1中。表1注：探针的5’-端以及3’-端分别被标示以荧光素酰胺(fluoresceinamidite,fam)以及黑洞荧光淬灭剂-1(blackholequencher-1,-1)。在起始反应(initiation)步骤期间，在pcr管中的各个样品被预-变性在55℃下历时2分钟接着在95℃下历时10分钟以活化dna聚合酶，继而进行45个循环如下：在95℃下进行变性反应(denaturation)历时15秒，以及在60℃下进行引物退火(primerannealing)与dna延长反应(elongation)历时60秒。结果：关于生长性能以及肠道病原体感染的实验结果被显示于表2中。表21:以平均值±标准差(standarddeviation,s.d.)来表示2:以在所挑选出的15只鸡只中的感染百分比表示*:当与对照组作比较，p<0.05从表2可看到的是：在供给所述混合饲料之后，实验组鸡只的体重显著地高于对照组鸡只。实验组的adg以及fe分别地优于对照组的adg以及fe。此外，当相较于对照组，实验组的各个所试验的肠道病原体的感染百分比是显著较低的。上面的结果显示：由本发明含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制得的混合饲料能够有效地降低肠道病原体所引起的感染并且提升鸡只的生长性能。实施例2.实验方法：大约1000只雄性仔猪与1000只雌性仔猪(购自于中国台湾云林县海丰牧场，并且饲养于养殖场中)被使用于下面的实验中。实验仔猪被随机地分成一个实验组以及一个对照组，并且充足的水以及饲料被提供给所述实验仔猪。在离乳之后(也就是在4周龄时)，各个实验仔猪被喂食以混合饲料历时8周直到所述实验仔猪达到12周龄。提供给对照组的混合饲料由呈为1000：1的重量比的基础饲粮以及硫酸亚铁所制备。提供给实验组的混合饲料是由呈为1000：1的重量比的所述基础饲粮以及如在“一般实验材料”中标题为“1.含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物的制备”的部分中所述而制得的含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制备。在4与12周龄时，各组离乳后仔猪的总摄食量以及体重被测量并记录。随后，各组离乳后仔猪的平均日增重(adg)以及平均日摄食量(averagedailyfeedintake,adfi)根据体重以及总摄食量来计算。定义为adfi对adg的比值的饲料效率(fe)亦被计算。实验结果被显示于表3中。实验数据是以平均值(mean)±s.d.来表示，并且通过史徒登氏t-试验来作分析以评估试验组别间的差异性。统计学显著性是以p<0.05来表示。结果：表31：以平均值±s.d.表示*：当与对照组作比较，p<0.05参见表3，在仔猪12周龄时，实验组离乳后仔猪的体重显著地高于对照组离乳后仔猪。此外，实验组离乳后仔猪的adg高于对照组离乳后仔猪的adg，且实验组的fe显著地低于(也就是优于)对照组的fe。上面的实验结果显示：由本发明含有经烧结的氨基酸亚铁粒子的组合物所制得的混合饲料能够有效地提升离乳后仔猪的生长性能。本说明书中被引述的所有专利和文献以其整体被并入本案作为参考资料。若有所冲突时，本案详细说明(包含界定在内)将占上风。在上面的详细说明中，为了说明的目的，许多具体细节已被描述以供彻底了解具体例。然而，对于本领域技术人员而言将会明显的是，一或多个其他具体例可在没有这些具体细节中的部分者而被实施。亦应被了解的是，本说明书通篇所提及的“一个具体例(oneembodiment)”、“一具体例(anembodiment)”，带有序号标示的具体例等等意指特定的特征、结构或特性可被包括在本发明的实施中。在详细说明中应被进一步了解的是，为了精简本发明并有助于理解各种不同的发明方面的目的，各种不同的特征有时被集合在一个单一的具体例、图式或其说明中，在实施本发明时，若适当，来自于一个具体例的一或多个特征或具体细节可与来自于另一个具体例的一或多个特征或具体细节一起被实施。虽然本发明已参考上述特定的具体例被描述，明显地在不背离本发明的范围和精神下可作出很多的修改和变化。因此意欲的是，本发明只受如随文检附的权利要求书所示者的限制。<110>普惠德生技股份有限公司<120>经烧结的粒子在治疗肠道感染以及提升生长性能上的用途<160>9<170>patentinversion3.5<210>1<211>23<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测大肠杆菌(e.coli)的正向引物<400>1ttatagcgacagcaccaaatatg23<210>2<211>24<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测大肠杆菌的反向引物<400>2cacgataccatccatatatctgag24<210>3<211>24<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测大肠杆菌的探针<400>3ttccacctaacgcagaaacctcct24<210>4<211>23<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测沙门杆菌属物种(salmonellaspp.)的正向引物<400>4ctcaccaggagattacaacatgg23<210>5<211>23<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测沙门杆菌属物种的反向引物<400>5agctcagaccaaaagtgaccatc23<210>6<211>22<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测沙门杆菌属物种的探针<400>6caccgacggcgagaccgacttt22<210>7<211>26<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测产气荚膜芽孢梭菌(c.perfringens)的正向引物<400>7ggcaaagaggaaattataaacaagct26<210>8<211>21<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测产气荚膜芽孢梭菌的反向引物<400>8gcgctatcaacggcagtaaca21<210>9<211>19<212>dna<213>人工的序列<220><223>用于检测产气荚膜芽孢梭菌的探针<400>9atactccatatcatcctgc19当前第1页1 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