一种抗菌消炎熊果酸衍生物及其制备方法与流程

本发明属于化学药物合成技术领域，涉及一种抗菌消炎熊果酸衍生物及其制备方法。

背景技术：

炎症是机体对于刺激的一种防御反应，是由血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应。抗菌消炎药是对抗炎症比较好的方法，得益于消炎药疗效好、见效快，因此得到大规模的应用。

目前，临床上常见的抗菌消炎类的药物主要有青霉素类(青霉素g、青霉素v等)、头孢菌素类(头孢拉定、头孢羟氨苄等)、氨基糖苷类(庆大霉素、妥布霉素、奈替米星等)等，从目前的临床所用的抗菌消炎药物来看，虽然这类药是安全、有效的，但这类西药在人体内的副反应也是不可避免，西药也不能从根本上起到杀菌消炎的目的，反而由于长期服用抗菌药，会产生大量耐药性的细菌，从而增加了治疗难度；此外，长期大量服用西药还会损坏胃肠道功能、破坏胃粘膜。中医中药在长期的临床实践中已经积累了许多成功的经验和独特的优势，中药具有抗菌消炎、提高机体免疫功能，还能够降低药物对人体的毒副作用。

熊果酸又名乌苏酸或乌索酸，属于三萜类化合物，广泛存在于中草药、食物等中。熊果酸具有消炎抗菌的生物学效应，其表现在抑制nfκb、丝裂原活化蛋白酶以及t细胞、b细胞增殖，激活pparγ。作为传统的中药，虽然熊果酸在抗菌消炎方面具有明显的优势，但由于熊果酸不溶于水，为液体制剂的制备带来了很大困难，致使熊果酸的药理活性无法得到充分利用。

技术实现要素：

鉴于上述药物存在的局限性，本发明提供了一种抗菌消炎熊果酸衍生物，其具有式(i)分子结构：

本发明的另一个目的在于提供一种抗菌消炎熊果酸衍生物的制备方法，包括如下步骤：

(1)在一定量的熊果酸中加入有机溶剂，回流溶解15～30min，再加入2滴dmf(n，n-二甲基甲酰胺)，在低温下缓慢加入草酰氯，滴加速度以控制反应体系的温度不超过-5℃为准，升温至35～45℃，回流反应3～6h，反应结束旋蒸除去多余的草酰氯，得化合物a；

(2)将化合物a溶解在吡啶中，再加入对氨基苯磺酰胺，室温下搅拌反应，结束反应，加入5％的盐酸溶液分散产物，二氯甲烷萃取，合并萃取液，再用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析纯化，洗脱液减压浓缩、干燥得熊果酸衍生物；

步骤(1)中，所述有机溶剂为二氯甲烷或甲苯；

所述有机溶剂与熊果酸的体积质量比为6.5ml/g～12.5ml/g；

所述熊果酸与草酰氯的投料摩尔比为1:3～5；

步骤(2)中，所述的吡啶与化合物a的体积质量比为5ml/g～20ml/g；

所述对氨基苯磺酰胺的用量为化合物a用量的30～60％；

所述硅胶柱层析中层析柱的填充剂为200～300目硅胶；所述硅胶柱层析中的洗脱液为石油醚与乙酸乙酯的混合液，两者的体积比为2:1～5:1；所述无水硫酸钠干燥后的产物用无水乙醇溶解，再用硅胶拌样，得上样样品。

根据上述制备方法的一种优选，包括如下步骤：

(1)在25g熊果酸中加入163ml甲苯，回流溶解15～30min，加入2滴dmf(n，n-二甲基甲酰胺)，在低温下缓慢加入14ml草酰氯，滴加速度以控制反应体系的温度不超过-5℃为准，升温至温度35～45℃，回流反应3～6h，反应结束旋蒸除去多余的草酰氯，得化合物a；

(2)将5g化合物a溶解在50ml吡啶中，加入对氨基苯磺酰胺，室温下搅拌反应，结束反应，加入5％的盐酸溶液分散产物，二氯甲烷萃取，合并萃取液，再用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，将干燥后的产物加入无水乙醇溶解，再用200～300目硅胶拌样，样品过硅胶柱层析分离(洗脱剂：v石油醚：v乙酸乙酯＝5:1)，洗脱液减压浓缩、干燥得熊果酸衍生物。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明将原本具有抗菌消炎活性的熊果酸与对氨基苯磺酰胺结合，获得结构新颖的熊果酸衍生物，新化合物能够抑制金黄色葡萄球菌、万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的生长，且最小抑菌浓度已达到16ug/ml；由于引入了磺酰胺基团，改善了新化合物的水溶性，使其生物利用度更高；

(2)本发明所提供的制备方法简单、原料易得、收率高、操作条件温和，可以方便地制备出结构新颖的熊果酸衍生物，适合工业化生产。

附图说明

图1：实施例1为抗菌消炎的熊果酸衍生物的核磁共振氢谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

实施例1

(1)在25g熊果酸中加入163ml甲苯，回流溶解15～30min，加入2滴dmf(n，n-二甲基甲酰胺)，在低温下缓慢加入14ml草酰氯，滴加速度以控制反应体系的温度不超过-5℃为准，升温至35～45℃，回流反应3～6h，反应结束旋蒸除去多余的草酰氯，得化合物a；

(2)将5g化合物a溶解在50ml吡啶中，加入4g对氨基苯磺酰胺，室温下搅拌反应，结束反应，加入5％的盐酸溶液分散产物，二氯甲烷萃取，合并萃取液，再用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，将干燥后的产物加入无水乙醇溶解，再用200～300目硅胶拌样，样品过硅胶柱层析分离(洗脱剂：v石油醚：v乙酸乙酯＝5:1)，洗脱液减压浓缩、干燥得熊果酸衍生物，产率为80.72％。

核磁共振氢谱检测：

将样品放入样品管中，用注射器取0.5mlcdcl3(氘代氯仿)注入样品管，使样品充分溶解。要求样品与试剂充分混合，溶液澄清、透明、无悬浮物或其他杂质，经核磁共振鉴定，得到核磁共振氢谱图，结果见如图1。

实施例2本发明化合物的水溶性测试

称取0.1g实施例1化合物于试管中，加入纯化水10.0ml，室温下每隔5min振摇30秒，30min后观察溶解情况，记录溶剂用量，将实验结果折算为标准溶解度(25℃)，测试结果见表1。

表1实施例1化合物溶解度与收率

结果表明，与熊果酸相比，本发明的熊果酸衍生的水溶性有显著提高。

实施例3本发明实施例药物的抑菌活性实验

1.供试菌种：金黄色葡萄球菌(a)、大肠杆菌(b)、万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌(c)、表皮葡萄球菌(d)、枯草芽胞杆菌(e)、白色念珠球菌(f)。

2.菌株培养：以mueller-hinton(mh)肉汤培养基分别培养上述细菌株，当其生长8～12h至约0.5个mcfarland浓度(1×10⁸cfu)时，得到菌液，备用。

3.药物抑菌活性实验：

(1)将本发明的熊果酸衍生物药物溶解在无水乙醇中，用胰蛋白胨大豆肉汤培养液稀释至1000ug/ml，继续用培养液稀释使药物的浓度从256～0.25ug/ml，获得实验溶液；再配制浓度范围为256～0.25ug/ml对氨基苯磺酰胺溶液与熊果酸溶液，分别作为对照组2和对照组3。

再配制浓度范围为256～0.25ug/ml的万古霉素作为阳性对照组(对照组1)。

(2)在96孔板上每孔加入浓度范围为256～0.25ug/ml的药液和100ul的菌液，最终药物的浓度为5×10⁴cfu，以胰蛋白胨大豆肉汤培养基加菌液作为阴性对照(tsb培养基、菌液各100ul)，以不加菌液的tsb肉汤培养基为空白对照(tsb培养基200ul)，将96孔板密封后置于37℃恒温培箱中，孵育20小时。

(3)以肉眼观察阴性对照孔内细菌的生长情况，加入药液后孔内细菌无明显生长的药物最低浓度为最小抑菌浓度，实验平行重复三次，取平均值。

4.实验结果

表2为本发明实施例药物的体外抗菌活性测试

由上表的实验数据表明，本发明的熊果酸衍生物虽然对表皮葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、白色念珠球菌几乎没有抑菌活性，但却能够抑制金黄色葡萄球菌、万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的生长，并且最小抑菌浓度已达到16ug/ml，说明本发明的熊果酸衍生物具有抗菌活性。

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