选择性CDK4/6抑制剂的琥珀酸盐及其晶型的制作方法

选择性cdk4/6抑制剂的琥珀酸盐及其晶型
技术领域
[0001]
本发明涉及化学制药技术领域，具体地说涉及n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的琥珀酸盐及其晶型，其为选择性的细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)如cdk4/6的抑制剂，可以用于治疗细胞增殖性疾病如癌症。


背景技术：

[0002]
目前仍然需要鉴定和开发用于治疗包括癌症在内的增殖性疾病和病症的新化合物。其中研究的潜在抗增殖化合物的众多“靶点”是被称为蛋白激酶的酶组。
[0003]
细胞周期蛋白依赖性激酶(cdks)是一种蛋白激酶。已知它们与各种细胞周期蛋白亚基相关，在细胞各种重要的调节通路的调节中起关键作用，包括细胞周期控制，细胞凋亡，神经元生理机能，分化和转录。目前总共有超过20种cdk，根据他们的功能主要分为两类：即细胞周期调节剂cdk和转录调节剂cdk。细胞周期调节剂cdk的类别包括cdk1、cdk2、cdk3、cdk4和cdk6，并且它们与其细胞周期蛋白配体(例如细胞周期蛋白a、b、d1、d2、d3、e和f)起作用以调节细胞周期的促进。包括cdk7、cdk8、cdk9和cdk11在内的转录调节剂cdk的类别与细胞周期蛋白c、h、k、li、l2、t1和t2一起起作用，并倾向于在转录调节中起作用。细胞增殖是细胞分裂周期直接或间接失控的后果，cdk在调节该周期的各个阶段调节中起关键作用。因此，cdk及其相关细胞周期蛋白的抑制剂被认为是癌症治疗的有用靶点。
[0004]
某些嘧啶类化合物已经被研究用于治疗包括癌症在内的细胞增殖性疾病和病症，例如4-噻唑-2-吡啶氨基-嘧啶和5-取代-4-噻唑-嘧啶(分别参见国际专利wo2009/118567和wo2013/156780)。这些化合物能抑制多种蛋白激酶，包括cdk蛋白激酶家族，如cdk1，cdk2，cdk4/6/，cdk7和cdk9。
[0005]
wo2017/020065 a1公开了一类抑制cdk4和/或cdk6的活性来抑制细胞增殖的化合物，发明人进一步研究发现，该申请中的优选化合物n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺(以下简称“化合物a”)具有突出的活性，可以作为新一代cdk4/6激酶抑制剂。
[0006]
上述化合物亦被记载于公开号为cn108349964a的中国发明专利中，该文献的相关内容可作为本申请的参考。
[0007]
但在药物研究过程中，本发明人发现n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺在溶解性、稳定性、口服生物利用度等方面结果仍然不理想。


技术实现要素：

[0008]
针对该化合物在使用过程中存在的溶解性、稳定性和口服生物利用度等问题，本发明人经过长期努力，发现将n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺制备成相应的可药用盐能够解决这一问题。
[0009]
本发明的第一方面涉及n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的可药用盐，其中所述的可药用盐为本领域常规的无机盐或者有机盐，进一步的，所述的无机盐优选为盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐；所述的有机盐优选为马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、对甲苯磺酸盐、1,2-乙二磺酸盐、2-奈磺酸盐、马尿酸盐、戊二酸盐、己二酸盐、抗坏血酸盐、丙二酸盐、龙胆酸盐、烟酸盐、l-苹果酸盐、l-酒石酸盐、dl-乳酸盐。尤其优选可药用盐为琥珀酸盐，其相对于游离碱和其他盐在溶解度、稳定性和生物利用度方面更具有优势。
[0010]
本发明的第二方面提供了n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的可药用盐的制备，该化合物的制备可根据本领域常规的成盐方法制备。
[0011]
本发明的第三方面涉及了一种药物剂型，它含有如式-所示的n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的可药用盐和一种或多种可药用载体。
[0012]
本发明的第四方面涉及了n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的可药用盐用于制备治疗增殖性紊乱引起的疾病或病症的药物中的应用。
[0013]
进一步的，所述增殖性紊乱引起的疾病或病症为肿瘤。
[0014]
进一步的，n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的可药用盐是通过抑制蛋白激酶来实现抗肿瘤作用的。
[0015]
本发明的第五方面提供了n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的琥珀酸盐晶型a，其具有位于大约为4.33、12.98、16.91、18.19、19.08、19.69、21.12、26.21和27.38等的2θ值位置的峰的粉末x射线衍射图；以及具有位于221.0℃的尖吸热峰的dsc热谱图。
[0016]
进一步的，所述n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的琥珀酸盐晶型a的粉末x射线衍射图如图10所示。
[0017]
本发明的第六方面提供了n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的琥珀酸盐晶型a用于制备治疗增殖性紊乱引起的疾病或病症的药物中的用途。
[0018]
进一步的，所述增殖性紊乱引起的疾病或病症是癌症。
[0019]
本发明还提供了n-环戊基-5-(2-((5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺的琥珀酸盐晶型a用于制备抑制蛋白激酶的药物中的用途。
[0020]
相对于游离碱以及其他盐形式包括盐酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐等，该琥珀酸盐提供了诸多优势。与游离碱相比，该琥珀酸盐的水溶性提高了40倍，在生物溶媒fassif中也具备类似的溶解性提升效果；并且上述溶解性的提高并未同时伴随着吸湿性的显著提高，琥珀酸盐的吸湿性显著低于其他的盐型，甚至低于游离碱；溶解度的提高使得应用该琥珀酸盐开发口服固体制剂时，相较于化合物a，动物体内生物利用度有了显著提高，上述以及其他的优势将有助于克服开发含有式-的选择性cdk4/6激酶抑制剂药物产品所面临的各种挑
战。
附图说明
[0021]
通过参照下面的描述以及附图，本发明所具有的各种特征、优势以及其他应用将更加明显。
[0022]
图1为起始化合物a游离碱样品的
1
h nmr图；
[0023]
图2为起始化合物a游离碱样品的xrpd图；
[0024]
图3为按本发明中的制备方法得到化合物a盐酸盐产物的
1
h nmr图；
[0025]
图4为按本发明中的制备方法得到化合物a磷酸盐产物的
1
h nmr图；
[0026]
图5为按本发明中的制备方法得到化合物a琥珀酸盐产物的
1
h nmr图；
[0027]
图6为按本发明中的制备方法得到化合物a甲磺酸酸盐产物的
1
h nmr图；
[0028]
图7为食蟹猴静脉和灌胃给予化合物a后的药时曲线图；
[0029]
图8为雄性食蟹猴灌胃给予化合物a琥珀酸盐后的药时曲线图；
[0030]
图9为雌性食蟹猴灌胃给予化合物a琥珀酸盐后的药时曲线图；
[0031]
图10为按本发明中的制备方法得到的琥珀酸盐晶型a的xrpd图；
[0032]
图11为按本发明中的制备方法得到的琥珀酸盐晶型b的xrpd图；
[0033]
图12为本发明中的制备方法得到的琥珀酸盐晶型a和b的xrpd叠加图。
具体实施方式
[0034]
以下结合实施例对本发明作进一步作具体描述，但不局限于此。
[0035]
定义
[0036]
术语“癌症”包括但不限于下述癌症：白血病、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃癌、皮肤癌、肺癌、骨癌、结肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、胆道癌、咽癌、唇癌、舌癌、口腔癌、咽喉癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑和中枢神经系统癌症、恶性脑胶质瘤、膀胱癌、肝癌、肾癌、淋巴癌等。
[0037]
本申请中，如化合物的化学命名与结构式相矛盾，以结构式为准，结构式有明显错误的情形除外。
[0038]
实施例1
[0039]
一、化合物a可药用盐的制备
[0040]
制备实施例1、化合物a的盐酸盐制备：
[0041]
称取5g化合物a至200ml玻璃瓶中，加入80ml的丙酮形成悬浮液；再缓慢加入835μl的盐酸溶液(37％溶液)；室温下搅拌2天后离心分离固体，在50℃下真空干燥3小时，收集固体产物，得化合物a的盐酸盐4.0g。
[0042]
制备实施例2、化合物a的磷酸盐制备：
[0043]
称取3.75g化合物a至100ml玻璃瓶中，加入60ml的乙醇形成悬浮液；再缓慢加入517.5μl的磷酸溶液，室温下磁力搅拌2天后离心分离固体，在50℃下真空干燥3小时，收集固体产物，得化合物a的磷酸盐2.2g。
[0044]
制备实施例3、化合物a的琥珀酸盐制备：
[0045]
称取106g化合物a和25.4g琥珀酸置于10l反应瓶中，加入3.07l乙醇，搅拌，升温至
回流反应4小时，降温后抽滤，滤饼用乙醇(20ml x 2)洗涤，抽干后转至热风烘箱中烘干至恒重，得化合物a的琥珀酸盐122g。
[0046]
制备实施例4、化合物a的甲磺酸盐制备：
[0047]
称取582mg的甲磺酸至100ml玻璃瓶中，加入50ml的乙酸乙酯形成甲磺酸乙酸乙酯溶液；称取3.0g化合物a加入到上述甲磺酸乙酸乙酯溶液中；室温下磁力搅拌2天后，离心分离固体，在50℃下真空干燥5小时，收集固体产物，得化合物a的甲磺酸盐2.5g。
[0048]
二、化合物a可药用盐的相关性质
[0049]
1、熔点
[0050]
表1
[0051] 熔点化合物a174.7℃化合物a的盐酸盐250.4℃化合物a的磷酸盐218.1℃化合物a的琥珀酸盐219.2℃化合物a的甲磺酸盐198.6℃
[0052]
2、溶解度
[0053]
为比较化合物a在成盐前后的溶解度差异，在37℃下对四种优选盐型及化合物a在生物溶媒fassif(模拟禁食状态肠液)和水中的动态溶解度(1小时、2小时、4小时和24小时)进行了测试，测试结果汇总于表2。
[0054]
试验结果表明相对于化合物a，其盐酸盐，琥珀酸盐及甲磺酸盐在水中与fassif的溶解度有明显的提高，化合物a的盐酸盐，琥珀酸盐和甲磺酸盐相较于其磷酸盐在溶解度上具有优势，综上化合物a的盐酸盐、甲磺酸盐、琥珀酸盐在水中及fassif中能够显著提高化合物a的溶解度。
[0055]
表2 37℃条件下四种优选盐型和游离碱的动态溶解度测试
[0056][0057]
s：溶解度(以游离碱，毫克/毫升)
[0058]
3、稳定性
[0059]
化合物a及其不同种类的可药用盐在不同条件下的稳定性
[0060]
为了比较四种优选盐型与化合物a的固态稳定性，分别对化合物a及其盐酸盐、磷酸盐、琥珀酸、甲磺酸盐在25℃/60％rh和40℃/75％rh条件下进行了14天稳定性评估。稳定
性测试样品通过hplc测定其纯度以评估化学稳定性(原料起始纯度：97.6％，采用hplc法测定纯度)
[0061]
表3：稳定性评估总结
[0062][0063][0064]
结论：化合物a及其四种盐在25℃/60％rh/14d及40℃/75％rh/14d的条件下均未发现明显的纯度降低。
[0065]
4、引湿性评估
[0066]
利用动态水分吸附(dvs)，针对化合物a及其四种优选盐型进行引湿性评估。在25℃恒温条件下，采集固体样品(化合物a和化合物a的盐酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、甲磺酸盐)质量随湿度变化的数据，引湿性评估总结见表4：
[0067]
表4：引湿性评估总结
[0068]
样品25℃/80％rh下吸收的水分(％)引湿性化合物a1.4略有引湿性化合物a的盐酸盐3.4有引湿性化合物a的磷酸盐3.7有引湿性化合物a的琥珀酸盐1.1略有引湿性化合物a的甲磺酸盐14.4极具引湿性
[0069]
结论：从上述引湿性评估结果可以看出化合物a的盐酸盐和磷酸盐有引湿性，甲磺酸盐极具引湿性，而琥珀酸盐具有比化合物a更低的引湿性，表现为略有引湿性，显示出更好的理化性质。
[0070]
实施例2化合物a的琥珀酸盐对体外肿瘤细胞的抑制作用
[0071]
1、方法
[0072]
用3h-tdr的方法检测研究化合物a的琥珀酸盐对19株肿瘤细胞株细胞增殖的毒性作用。收集对数生长期细胞，计数后调整细胞浓度，接种入96孔板，与一系列浓度梯度的化合物a的琥珀酸盐在细胞培养箱中孵育24小时，加入3h-tdr后继续在培养箱中孵育72小时，将样品处理后加入闪烁液，在液闪计数仪上读数，并计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率。
[0073]
2、结果
[0074]
结果表明：化合物a的琥珀酸盐具有很好的体外抑制肿瘤生长作用，ic50为36～2440μm。具体结果见表5：
[0075]
表5：化合物a的琥珀酸盐对不同细胞株细胞毒ic
50
值(nm)汇总
[0076]
细胞株肿瘤类型ic
50
(nm)u-87mg脑瘤42.57colo-205结肠癌839.1sk-ov-3卵巢癌811.6zr-75-1乳腺癌35.72mda-mb-435s乳腺癌37.28panc-1胰腺癌811.6raji淋巴瘤608.4molm-13白血病259.9mv-4-11白血病88.77pc-3前列腺癌167.9
[0077]
实施例3：化合物a的琥珀酸盐对人卵巢癌a2780裸鼠皮下移植瘤药效评价(一)方法
[0078]
雌性balb/c裸小鼠皮下接种a2780肿瘤细胞，建立a2780裸鼠移植瘤模型。接种后根据肿瘤体积大小采用随机区组法将荷瘤鼠分为5组，包括溶剂对照组(超纯水)、对照样品palbociclib 75mg/kg组、化合物a琥珀酸盐62.5mg/kg组、化合物a琥珀酸盐125mg/kg组和化合物a琥珀酸盐250mg/kg剂量组，每组8只动物。各组均采用灌胃给药，各组给药体积均为10ml/kg，每天给药一次，连续给药14天。
[0079]
给药期间，每周测量2次瘤径(计算瘤体积、瘤体积抑制率和相对肿瘤增值率)、称量动物体重，观察动物生活状态，对异常状况进行记录；试验结束时，对动物实施安乐死，剥取瘤块后称重、拍照，计算瘤重抑瘤率；对动物进行大体解剖，观察各主要脏器有无异常。
[0080]
(二)结果
[0081]
给药14天后(接种后第20天)，溶剂对照组平均肿瘤体积为3135.74
±
246.49mm
3
，试验结束。对照样品palbociclib 75mg/kg组的相对肿瘤体积与溶剂对照组比较，存在极显著差异(p<0.01)，其相对肿瘤增殖率为59.61％；化合物a琥珀酸盐62.5mg/kg、125mg/kg、250mg/kg剂量组的相对肿瘤体积与溶剂对照组比较，存在极显著差异(p<0.01)，其相对肿瘤增殖率分别为57.90％、32.98％和17.79％，试验结束当日，对动物实施安乐死，剥取瘤块称重、拍照，计算瘤重抑瘤率。溶剂对照组动物平均瘤重为3.6713
±
0.2807g；对照样品palbociclib 75mg/kg组的瘤重与溶剂对照组比较，存在极显著差异(p<0.01)，瘤重抑瘤率为38.79％。化合物a琥珀酸盐62.5mg/kg、125mg/kg、250mg/kg剂量组的瘤重与溶剂对照组比较，存在极显著差异(p<0.01)，瘤重抑瘤率分别为42.88％、67.10％、84.57％(见表6和表7)。
[0082]
本次试验结果表明，化合物a琥珀酸盐具有很好的抑制a2780肿瘤细胞生长的作用，且其抑制作用呈现很好的剂量依赖关系。本次试验过程中，动物对各剂量组药物耐受较好，试验结束后对动物进行解剖观察，各组动物的主要脏器均未发现肉眼可见明显异常。
[0083]
表6：化合物a琥珀酸盐对a2780荷瘤小鼠末次给药后(接种后第20天)瘤体积抑制效果
[0084][0085]
注：“*”表示与溶剂对照组比较，p<0.05，“**”表示与溶剂对照组比较，p<0.01。
[0086]
表7：化合物a琥珀酸盐对a2780荷瘤小鼠末次给药后(接种后第20天)瘤重抑制效果
[0087][0088]
注：“*”表示与溶剂对照组比较，p<0.05，“**”表示与溶剂对照组比较，p<0.01。
[0089]
实施例4：化合物a的琥珀酸盐对人结肠癌colo 205裸鼠皮下移植瘤药效评价
[0090]
(一)方法
[0091]
雌性balb/c裸小鼠皮下接种colo 205肿瘤细胞，建立colo 205裸鼠移植瘤模型。接种后根据肿瘤体积大小采用随机区组法将荷瘤鼠分为4组，包括溶剂对照组(超纯水)、对照样品5-fu 15mg/kg组、化合物a琥珀酸盐50mg/kg组和化合物a琥珀酸盐100mg/kg剂量组，每组8只动物。溶剂对照组和化合物a琥珀酸盐组采用灌胃给药，5-fu组采用腹腔注射给药，各组给药体积均为10ml/kg，每天给药一次，连续给药21天。
[0092]
给药期间，每周测量2次瘤径(计算瘤体积、瘤体积抑制率和相对肿瘤增值率)、称量动物体重，观察动物生活状态，对异常状况进行记录；试验结束时，对动物实施安乐死，剥取瘤块后称重、拍照，计算瘤重抑瘤率；对动物进行大体解剖，观察各主要脏器有无异常。
[0093]
(二)结果
[0094]
给药21天后(接种第29天)，溶剂对照组平均肿瘤体积为1410.72
±
136.44mm
3
，试验结束。对照样品5-fu 15mg/kg组和化合物a琥珀酸盐100mg/kg剂量组的相对肿瘤体积分别与溶剂对照组比较，存在极显著差异(p<0.01)，其相对肿瘤增殖率分别为57.73％和31.12％。化合物a琥珀酸盐50mg/kg组与溶剂对照组比较，存在显著差异(p<0.05)，相对肿瘤增值率为68.85％。试验结束当日，对动物实施安乐死，剥取瘤块称重、拍照，计算瘤重抑瘤率。溶剂对照组动物平均瘤重为1.5203
±
0.1519g；对照样品5-fu 15mg/kg组、化合物a琥珀酸盐50mg/kg和100mg/kg剂量组的瘤重分别与溶剂对照组比较，均存在极显著差异(p<0.01)，瘤重抑瘤率分别为43.95％、34.56％和68.80％(见表8和表9)。
[0095]
本次试验结果表明，化合物a琥珀酸盐具有很好的抑制colo 205肿瘤细胞生长的作用，且其抑制作用呈现很好的剂量依赖关系。本次试验过程中，对照组5-fu 15mg/kg组动物给药约两周时体重下降明显，结束试验时该组平均体重下降率达到26.26％，化合物a琥
珀酸盐组动物在给药期间均无明显异常，表明耐受较好。试验结束时，对动物进行解剖观察，各组动物的主要脏器均未发现肉眼可见明显异常。
[0096]
表8：化合物a琥珀酸盐对colo 205荷瘤小鼠末次给药后(接种第29天)瘤体积抑制效果
[0097][0098]
注：“*”表示与溶剂对照组比较，p<0.05，“**”表示与溶剂对照组比较，p<0.01。
[0099]
表9：化合物a琥珀酸盐对colo 205荷瘤小鼠末次给药后(接种第29天)瘤重抑制效果
[0100][0101]
注：“*”表示与溶剂对照组比较，p<0.05，“**”表示与溶剂对照组比较，p<0.01。
[0102]
实施例5：口服生物利用度研究
[0103]
一、化合物a口服生物利用度研究(一)方法
[0104]
使用3只雄性食蟹猴，先单次静脉注射化合物a，给药后在不同时间点采集血样。洗脱1周后，单次灌胃给予化合物a，给药后在不同时间点采集血样(试验设计见表10)。采集的血样置于抗凝管中，离心后分离得到血浆。使用已建立的lc-ms/ms方法进行样品分析，测定血浆中化合物a的浓度。用不同时间点的浓度计算药代动力学参数，获得化合物a在食蟹猴体内的药代动力学特征和生物利用度。
[0105]
表10：试验设计
[0106][0107]
(二)结果
[0108]
结果见表11和图7，食蟹猴灌胃给予50mg/kg化合物a后，在6.67个小时内达到血药浓度最高峰，半衰期为8.34小时，cmax为643ng
·
ml-1
。auc
(0-24)
为9543ng
·
h
·
ml-1
，口服生物利用度约为21.8％。
[0109]
表11：化合物a药代数据
[0110][0111]
二、化合物a琥珀酸盐口服生物利用度研究
[0112]
(一)方法
[0113]
使用4只食蟹猴(雌雄各半)，分为2组，一组单次静脉注射化合物a琥珀酸盐2mg/kg，另一组单次灌胃给予化合物a琥珀酸盐24mg/kg(试验设计见表12)，给药后在不同时间点采集血样，采集的血样置于抗凝管中，离心后分离得到血浆。使用已建立的lc-ms/ms方法进行样品分析，测定血浆中化合物a琥珀酸盐的浓度。用不同时间点的浓度计算药代动力学参数，获得化合物a琥珀酸盐在食蟹猴体内的药代动力学特征和生物利用度。
[0114]
表12：试验设计
[0115]
组别动物数剂量(mg/kg)浓度(mg/ml)给药体积(ml/kg)静脉组222.50.8灌胃组224102.4
[0116]
(二)结果
[0117]
食蟹猴灌胃给予24mg/kg化合物a琥珀酸盐后的药代参数见表13，药时曲线见图8和9。经分析，化合物a琥珀酸盐在雌雄食蟹猴中的生物利用度分别为73％和55％，相比化合物a的生物利用度(22％)有明显提高。
[0118]
表14：化合物a琥珀酸盐药代数据
[0119][0120]
实施例6：化合物a琥珀酸盐晶型研究
[0121]
针对化合物a琥珀酸盐进行多晶型筛选，以化合物a游离碱为原料，先通过与琥珀酸在丙酮溶剂中悬浮搅拌的方法制备得到化合物a的琥珀酸盐晶型a样品，再以琥珀酸盐晶型a为起始物料，采用多种方法设置进行96个多晶型筛选试验，共得到两种琥珀酸盐无水晶型，即晶型a与晶型b。根据筛选得到固体样品及后续重复试验得到样品的xrpd表征结果，共发现化合物a琥珀酸盐的2种无水晶型(晶型a与晶型b，其中晶型a为起始晶型)。其中晶型a、晶型b、晶型a和b的xrpd叠加图如图10～12所示。
[0122]
(1)琥珀酸盐晶型a的具体制备方法：
[0123]
在四口瓶中，加入化合物a、0.24倍(化合物a重量，1当量)琥珀酸和23.25倍(化合物a重量，7当量)乙醇，搅拌，升温至回流，保温反应4小时，体系温度降至5～10℃，抽滤(或
者离心甩干)，滤饼用适量乙醇淋洗。所得滤饼用60
±
5℃热风干燥，得到类白色固体产品即为化合物a的琥珀酸盐晶型a。
[0124]
(2)琥珀酸盐晶型b的具体制备方法：
[0125]
化合物a琥珀酸盐晶型b是以琥珀酸盐晶型a为起始，经由meoh/chcl
3
(1:6,v/v)溶剂体系中缓慢降温后再挥发的方式得到。获得样品后采集xrpd数据；tga/dsc结果显示样品由室温加热至110℃时有1.3％失重(一水合物理论失重约2.8％；半水合物理论失重约1.4％)，并且样品在91.8℃(峰值温度)处存在一个宽吸热峰，在149.4℃(峰值温度)存在一个弱宽放热峰，在220.9℃(峰值温度)存在一尖锐吸热峰。
1
h nmr显示样品中琥珀酸与游离碱的摩尔比约为1:1。
[0126]
为研究琥珀酸盐晶型a与晶型b之间的热力学稳定性关系关系，分别在室温和50℃下，两种溶剂体系(etoh和thf)中，就晶型a和晶型b进行了混悬竞争试验。结果显示所有试验中晶型b均转为晶型a；同时就琥珀酸盐晶型a与晶型b，在室温纯水以及室温etoh/h
2
o混合溶剂体系中进行了混悬竞争实验，结果显示试验中晶型b也均转为晶型a。两者混悬竞争试验表明，在室温至50℃条件下琥珀酸盐晶型a为热力学上更稳定性的无水晶型。
[0127]
发明人惊奇的发现，在溶解度、引湿性以及生物利用度方面琥珀酸盐均具有突出的表现，并且其晶型a为热力学稳定晶型。
[0128]
本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。

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