酵母蛋白硒及其制备方法、发酵培养基、富硒小分子肽原液及其制备方法和食品与流程

[0001]
本发明涉及食品加工领域，尤其涉及一种酵母蛋白硒及其制备方法、发酵培养基、富硒小分子肽原液及其制备方法和食品。


背景技术：

[0002]
人体内的氧化损伤会引起人的生病、衰老，而硒可以激活人体自身的抗氧化系统，控制沉降的氧化损伤，预防疾病的发生。现有技术中人们对硒元素的利用，主要通过无机物或有机物的形态添加到食品或者保健品中，但是普遍存在着吸收差、综合效果不理想的问题。
[0003]
如何更好的利用硒元素，获得富硒的产品，进而提高吸收率和综合保健效果，成为人们研究的重点。
[0004]
有鉴于此，特提出本申请。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于提供一种酵母蛋白硒及其制备方法、发酵培养基、富硒小分子肽原液及其制备方法和食品，以解决上述问题。
[0006]
为实现以上目的，本发明特采用以下技术方案：
[0007]
一种酵母蛋白硒的制备方法，包括：
[0008]
将酵母菌种接种至含有硒化合物的酵母培养基中进行发酵，得到所述酵母蛋白硒。
[0009]
优选地，所述硒化合物包括亚硒酸钠；
[0010]
优选地，所述酵母培养基中所述亚硒酸钠的含量为15-25mg/kg；
[0011]
优选地，所述酵母培养基还包括麦芽汁；
[0012]
优选地，所述麦芽汁占所述酵母培养基的总体积的10-15％；
[0013]
优选地，所述麦芽汁的浓度为4-6be；
[0014]
优选地，所述酵母培养基的ph值为5-6；
[0015]
优选地，所述接种之前，将所述酵母培养基进行灭菌处理；
[0016]
优选地，所述灭菌处理的温度为120-125℃、压力为0.05-0.15mpa、时间为25-35min；
[0017]
优选地，所述酵母菌种接种之前制备成酵母孢子悬浮液，所述酵母孢子悬浮液的接种量为所述酵母培养基的总体积的2-12％；
[0018]
优选地，所述发酵的温度为27-29℃，压力为0.02-0.04mpa、时间为36-60h；
[0019]
优选地，所述发酵在搅拌状态下进行；
[0020]
优选地，所述搅拌的速度为160-200r/min；
[0021]
优选地，所述发酵进入对数生长期后补加亚硒酸钠，使得体系中亚硒酸钠的浓度
达到55-65mg/kg；
[0022]
优选地，所述发酵之后还包括后处理；
[0023]
优选地，所述后处理包括：将发酵得到的发酵液过滤、浓缩、干燥得到所述酵母蛋白硒。
[0024]
麦芽汁的主要成分是麦芽糖，是碳水化合物的一种，是由含淀粉酶的麦芽制得，有利于酵母的生长。对酵母发酵的工艺进行研究和控制，可以更好的获得酵母蛋白硒。
[0025]
可选地，所述酵母培养基中所述亚硒酸钠的含量可以为15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg以及15-25mg/kg之间的任一值；所述麦芽汁可以占所述酵母培养基的总体积的10％、11％、12％、13％、14％、15％以及10-15％之间的任一值；所述麦芽汁的浓度可以为4be、5be、6be以及4-6be之间的任一值；所述酵母培养基的ph值可以为5、5.5、6以及5-6之间的任一值；所述灭菌处理的温度可以为120℃、121℃、122℃、123℃、124℃、125℃以及120-125℃之间的任一值，压力可以为0.05mpa、0.06mpa、0.07mpa、0.08mpa、0.09mpa、0.10mpa、0.11mpa、0.12mpa、0.13mpa、0.14mpa、0.15mpa以及0.05-0.15mpa之间的任一值，时间可以为25min、26min、27min、28min、29min、30min、31min、32min、33min、34min、35min以及25-35min之间的任一值；所述酵母孢子悬浮液的接种量可以为2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％以及所述酵母培养基的总体积的2-12％之间的任一值；所述发酵的温度可以为27℃、28℃、29℃以及27-29℃之间的任一值，压力可以为0.02mpa、0.03mpa、0.04mpa以及0.02-0.04mpa之间的任一值，时间可以为36h、42h、48h、54h、60h以及36-60h之间的任一值；所述搅拌的速度可以为160r/min、170r/min、180r/min、190r/min、200r/min以及160-200r/min之间的任一值；补加亚硒酸钠后体系中亚硒酸钠的浓度可以为55mg/kg、56mg/kg、57mg/kg、58mg/kg、59mg/kg、60mg/kg、61mg/kg、62mg/kg、63mg/kg、64mg/kg、65mg/kg以及55-65mg/kg之间的任一值。
[0026]
一种酵母蛋白硒，使用所述的制备方法制得。
[0027]
一种发酵培养基，其原料包括所述的酵母蛋白硒。
[0028]
优选地，所述酵母蛋白硒的含量为2-3mg/l；
[0029]
优选地，所述发酵培养基还包括酵母浸粉1.5-3g/l、蛋白胨1.5-3g/l、葡萄糖40-80g/l、白砂糖30-60g/l、海洋鱼低聚肽粉2-4g/l、玉米粉0.01-0.05g/l、大豆粉0.01-0.05g/l、氯化钠0.15-0.2g/l和第一复合微量元素组合物0.1-0.3g/l；
[0030]
优选地，所述第一复合微量元素组合物包括硫酸镁0.03850-0.05g/l、磷酸二氢钾0.077-0.08g/l和硫酸亚铁0.022-0.03g/l；
[0031]
优选地，所述发酵培养基的ph值为6.5-7.0。
[0032]
可选地，所述发酵培养基的原料中，酵母蛋白硒的含量可以是2mg/l、2.5mg/l、3mg/l以及2-3mg/l之间的任一值，酵母浸粉的含量可以是1.5g/l、2g/l、2.5g/l、3g/l以及1.5-3g/l之间的任一值，蛋白胨的含量可以是1.5g/l、2g/l、2.5g/l、3g/l以及1.5-3g/l之间的任一值，葡萄糖的含量可以是40g/l、50g/l、60g/l、70g/l、80g/l以及40-80g/l之间的任一值，白砂糖的含量可以是30g/l、40g/l、50g/l、60g/l以及30-60g/l之间的任一值，海洋鱼低聚肽粉的含量可以是2g/l、3g/l、4g/l以及2-4g/l之间的任一值，玉米粉的含量可以是0.01g/l、0.02g/l、0.03g/l、0.04g/l、0.05g/l以及0.01-0.05g/l之间的任一值，大豆粉的
含量可以是0.01g/l、0.02g/l、0.03g/l、0.04g/l、0.05g/l以及0.01-0.05g/l之间的任一值，氯化钠的含量可以是0.15g/l、0.16g/l、0.17g/l、0.18g/l、0.19g/l、0.2g/l以及0.15-0.2g/l之间的任一值，第一复合微量元素组合物的含量可以是0.1g/l、0.2g/l、0.3g/l以及0.1-0.3g/l之间的任一值；硫酸镁的用量可以为0.03850g/l、0.04g/l、0.045g/l、0.05g/l以及0.03850-0.05g/l之间的任一值，磷酸二氢钾的用量可以为0.077g/l、0.078g/l、0.079g/l、0.08g/l以及0.077-0.08g/l之间的任一值，硫酸亚铁的用量可以为0.022g/l、0.023g/l、0.024g/l、0.025g/l、0.026g/l、0.027g/l、0.028g/l、0.029g/l、0.03g/l以及0.022-0.03g/l之间的任一值；所述发酵培养基的ph值可以为6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0以及6.5-7.0之间的任一值。
[0033]
一种富硒小分子肽原液的制备方法，包括：
[0034]
将枯草芽孢杆菌接种至所述的发酵培养基中，培养得到所述富硒小分子肽原液。
[0035]
优选地，所述枯草芽孢杆菌包括纳豆菌；
[0036]
优选地，所述枯草芽孢杆菌的接种量为所述发酵培养基的总体积的1-5％；
[0037]
优选地，所述培养包括第一阶段和第二阶段；所述第一阶段的培养温度为36.5-37.5摄氏度，培养时间为55-65天；所述第二阶段的培养温度为10-15摄氏度，培养时间为100-125天。
[0038]
可选地，所述枯草芽孢杆菌的接种量可以为所述发酵培养基的总体积的1％、2％、3％、4％、5％以及1-5％之间的任一值；所述第一阶段的培养温度可以为36.5℃、37℃、37.5℃以及36.5-37.5℃之间的任一值，培养时间可以为55天、60天、65天以及55-65天之间的任一值；所述第二阶段的培养温度可以为10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃以及10-15℃之间的任一值，培养时间可以为100天、105天、110天、115天、120天、125天以及100-125天之间的任一值。
[0039]
优选地，使用枯草芽孢杆菌种子悬浮液接种所述枯草芽孢杆菌；
[0040]
优选地，所述枯草芽孢杆菌种子悬浮液的制备方法包括：将所述枯草芽孢杆菌接种至种子培养基，培养得到所述枯草芽孢杆菌种子悬浮液；
[0041]
优选地，所述枯草芽孢杆菌的接种量为所述种子培养基的总体积的1-5％；
[0042]
优选地，所述种子培养基的原料包括：酵母膏1.5-3g/l、蛋白胨1.5-3g/l、葡萄糖20-40g/l、白砂糖30-60g/l、氯化钠1.5-2g/l和第二复合微量元素组合物0.5-1g/l；
[0043]
优选地，所述第二复合微量元素组合物包括硫酸镁0.0385-0.05g/l、磷酸二氢钾0.077-0.08g/l和硫酸亚铁0.022-0.03g/l；
[0044]
优选地，所述种子培养基的ph值为6.5-7；
[0045]
优选地，所述种子培养基使用前进行灭菌；
[0046]
优选地，所述灭菌采用湿热法；
[0047]
优选地，所述湿热法的灭菌温度为120-122℃、压力为0.1-0.15mpa、时间为20-30min；
[0048]
优选地，使用所述种子培养基进行培养的时间为36-60h；
[0049]
优选地，所述培养在搅拌状态下进行；
[0050]
优选地，所述搅拌的速度为180-220r/min。
[0051]
种子培养基中，蛋白胨的作用主要是补充有机氮源，有利于枯草芽孢杆菌的生长，
菌丝生长粗壮，着色深，od值高。
[0052]
可选地，所述枯草芽孢杆菌的接种量可以为所述种子培养基的总体积的1％、2％、3％、4％、5％以及1-5％之间的任一值；所述种子培养基的原料中，酵母膏的含量可以为1.5g/l、2g/l、2.5g/l、3g/l以及1.5-3g/l之间的任一值，蛋白胨的含量可以为1.5g/l、2g/l、2.5g/l、3g/l以及1.5-3g/l之间的任一值，葡萄糖的含量可以为20g/l、25g/l、30g/l、35g/l、40g/l以及20-40g/l之间的任一值，白砂糖的含量可以为30g/l、40g/l、50g/l、60g/l以及30-60g/l之间的任一值，氯化钠的含量可以为1.5g/l、1.6g/l、1.7g/l、1.8g/l、1.9g/l、2g/l以及1.5-2g/l之间的任一值，第二复合微量元素组合物的含量可以为0.5g/l、0.6g/l、0.7g/l、0.8g/l、0.9g/l、1g/l以及0.5-1g/l之间的任一值；硫酸镁的用量可以为0.03850g/l、0.04g/l、0.045g/l、0.05g/l以及0.03850-0.05g/l之间的任一值，磷酸二氢钾的用量可以为0.077g/l、0.078g/l、0.079g/l、0.08g/l以及0.077-0.08g/l之间的任一值，硫酸亚铁的用量可以为0.022g/l、0.023g/l、0.024g/l、0.025g/l、0.026g/l、0.027g/l、0.028g/l、0.029g/l、0.03g/l以及0.022-0.03g/l之间的任一值；所述种子培养基的ph值可以为6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0以及6.5-7.0之间的任一值；所述湿热法的灭菌温度可以为120℃、121℃、122℃以及120-122℃之间的任一值，压力可以为0.10mpa、0.11mpa、0.12mpa、0.13mpa、0.14mpa、0.15mpa以及0.1-0.15mpa之间的任一值，时间可以为20min、25min、30min以及20-30min之间的任一值；使用所述种子培养基进行培养的时间可以为36h、42h、48h、54h、60h以及36-60h之间的任一值；所述搅拌的速度可以为180r/min、190r/min、200r/min、210r/min、220r/min以及180-220r/min之间的任一值。
[0053]
一种富硒小分子肽原液，使用所述的制备方法制得。
[0054]
一种食品，使用包括所述的富硒小分子肽原液在内的原料制得。
[0055]
需要说明的是，此处所指的食品可以是用富硒小分子肽原液提取得到的固态物质，如富硒小分子肽；也可以是使用富硒小分子肽原液作为原料加工得到的保健品，例如丸剂、片剂或其它常见形式的产品。
[0056]
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
[0057]
本申请提供的酵母蛋白硒的制备方法，通过在含有麦芽汁和硒化合物的酵母培养基中培养酵母菌，获得硒含量高的酵母蛋白硒，工艺简单；
[0058]
本申请提供的酵母蛋白硒，作为富硒小分子肽原液发酵培养基中的重要成分，是获得硒含量高的富硒小分子肽原液的核心原料之一；
[0059]
本申请提供的发酵培养基，以酵母蛋白硒作为核心成分，为枯草芽孢杆菌的培养提供丰富的营养物质，从而获得硒含量高、营养丰富的富硒小分子肽原液；
[0060]
本申请提供的富硒小分子肽原液的制备方法和富硒小分子肽原液，采用枯草芽孢杆菌在含有酵母蛋白硒的发酵培养基中进行发酵培养，枯草芽孢杆菌吸收酵母蛋白硒后将其转化为菌丝，枯草芽孢杆菌繁殖至衰亡期时出现菌丝自溶，生成大量的分子量小于等于500的富硒小分子肽，因此本申请制得的富硒小分子肽原液中不仅含有丰富的酵母蛋白硒，而且含有大量的富硒小分子肽，营养丰富易吸收，其本身以及以其作为原料制得的食品、保健品等具有很好的保健作用。
具体实施方式
[0061]
如本文所用之术语：
[0062]“由
……
制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0063]
连接词“由
……
组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由
……
组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
[0064]
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
[0065]
在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。
[0066]“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说a组分的质量份为a份，b组分的质量份为b份，则表示a组分的质量和b组分的质量之比a：b。或者，表示a组分的质量为ak，b组分的质量为bk(k为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。
[0067]“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，a和/或b包括(a和b)和(a或b)。
[0068]
下面将结合具体实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0069]
本申请实施例使用的原材料购自北京奥博星生物技术有限责任公司。
[0070]
实施例1
[0071]
在发酵罐中加入啤酒麦芽汁，浓度调至4be，啤酒麦芽汁的体积为酵母培养基总体积的15％，按照55mg/kg的含量添加亚硒酸钠至酵母培养基中，再用水调至400kg，控制ph为6。将得到的培养基在120℃、压力0.15mpa条件下，保温保压灭菌25分钟。灭菌后冷却至28℃得到酵母培养基。
[0072]
将制备好的酵母孢子悬浮液在火焰圈的保护下接入到发酵罐中，接种量为酵母培养基总体积的12％。在搅拌转速160r/min、罐压0.04mpa，温度27℃条件下培养；在发酵进入到生长对数期后，再添加亚硒酸钠，使浓度达到65mg/kg；发酵罐运转36小时的时候，酵母蛋白硒的生物量8.25g，酵母细胞中的含量达到1230μg/g，总含硒量达到17467μg/l。
[0073]
将发酵得到的发酵液过滤、浓缩、干燥得到酵母蛋白硒。
[0074]
将原始枯芽草孢杆菌枯草亚种菌株(纳豆菌)经过分离、斜面培养得到枯草芽孢杆菌。
[0075]
按照以下配方准备种子培养基：酵母膏3g/l、蛋白胨1.5g/l、葡萄糖40g/l、白砂糖30g/l、氯化钠2g/l和第二复合微量元素组合物0.5g/l；第二复合微量元素组合物包括硫酸镁、磷酸二氢钾和硫酸亚铁。其中，硫酸镁的用量为0.04g/l，磷酸二氢钾的用量为0.078g/l，硫酸亚铁的用量为0.026g/l。
[0076]
用容器将原料搅拌混合，混合液ph7.0，溶解后将原料分装至三角瓶中，塞好瓶塞，扎好瓶口。采用湿热法对液体培养基进行灭菌，温度120℃，压力0.15mpa，保温20分钟，然后降温冷却至37℃。
[0077]
将枯芽草孢杆菌枯草亚种(bacillus subtilis subsp.subtilis)的悬浮液按种子培养基的总体积的5％接入种子培养基中。培养温度37℃，摇瓶转速180转/分，周期60小时；当种子悬浮液的ph值为6.0左右、孢子数为9.0
×
10
8
时，在超净工作台的无菌环境下进行无菌操作合瓶，得到枯草芽孢杆菌种子悬浮液。
[0078]
按照以下配方制备发酵培养基：酵母蛋白硒3mg/l、酵母浸粉1.5g/l、蛋白胨3g/l、葡萄糖80g/l、白砂糖30g/l、海洋鱼低聚肽粉4g/l、玉米粉0.01g/l、大豆粉0.05g/l、氯化钠0.15g/l和第一复合微量元素组合物0.3g/l；第一复合微量元素组合物包括：硫酸镁、磷酸二氢钾和硫酸亚铁。加水至300l，调节ph至6.5。其中，硫酸镁的用量为0.04g/l，磷酸二氢钾的用量为0.078g/l，硫酸铵的用量为0.025g/l。
[0079]
将枯草芽孢杆菌种子悬浮液在火焰圈的保护下分别接至不锈钢桶中。高温37.5℃培养，定期取样检测镜检，测ph值和无菌情况，周期55天。
[0080]
然后在15℃条件下进行低温后熟，定期检测镜检，观察菌丝生长情况，测ph值和无菌情况，周期100天。
[0081]
经过高温发酵、低温后熟，纳豆菌在约半年的时间里，历经了孢子发芽期、菌丝生长期、菌丝大量繁殖对数期、迟滞期、衰亡期，最后菌丝自溶，形成大量的富硒小分子生物肽。
[0082]
发酵液成熟后，经由粗滤网过滤，再经滤袋过滤，得到带有富硒小分子肽的滤液，分装桶内。得到的富硒小分子肽的滤液ph为4.4、糖含量为0.15wt％、蛋白质含量为1.0wt％，小分子肽蛋白硒含量1500ug/l，寡肽2.1824g/l，寡糖16g/l原液无杂菌，发酵气味浓郁，口感厚重。
[0083]
把料液分装至不锈钢桶中，封好口灭菌；高温灭菌温度120℃，灭菌柜压力0.1mpa，时间30分钟。冷却后保藏，避光，干燥。
[0084]
实施例2
[0085]
在发酵罐中加入啤酒麦芽汁，浓度调至6be，啤酒麦芽汁的体积为酵母培养基总体积的10％，按照25mg/kg的含量添加亚硒酸钠至酵母培养基中，再用水调至400kg，控制ph为5。将得到的培养基在125℃、压力0.05-0.13mpa条件下，保温保压灭菌35分钟。灭菌后冷却至28℃得到酵母培养基。
[0086]
将制备好的酵母孢子悬浮液在火焰圈的保护下接入到发酵罐中，接种量为酵母培养基总体积的2％。在搅拌转速200r/min、罐压0.02mpa，温度29℃条件下培养；在发酵进入
到生长对数期后，再添加亚硒酸钠，使浓度达到55mg/kg；发酵罐运转60小时的时候，酵母蛋白硒的生物量10g，酵母细胞中的含量达到2000μg/g，总含硒量达到25000μg/l。
[0087]
将发酵得到的发酵液过滤、浓缩、干燥得到酵母蛋白硒。
[0088]
将原始枯芽草孢杆菌枯草亚种菌株(纳豆菌)经过分离、斜面培养得到枯草芽孢杆菌。
[0089]
按照以下配方准备种子培养基：酵母膏1.5g/l、蛋白胨3g/l、葡萄糖20g/l、白砂糖60g/l、氯化钠1.5g/l和第二复合微量元素组合物1g/l；第二复合微量元素组合物包括硫酸镁、磷酸二氢钾和硫酸亚铁。其中，硫酸镁的用量为0.05g/l，磷酸二氢钾的用量为0.077g/l，硫酸亚铁的用量为0.03g/l。
[0090]
用容器将原料搅拌混合，混合液ph6.5，溶解后将原料分装至三角瓶中，塞好瓶塞，扎好瓶口。采用湿热法对液体培养基进行灭菌，温度122℃，压力0.1mpa，保温30分钟，然后降温冷却至37℃。
[0091]
将枯芽草孢杆菌枯草亚种(bacillus subtilis subsp.subtilis)的悬浮液按种子培养基的总体积的1％接入种子培养基中。培养温度37℃，摇瓶转速220转/分，周期36小时；当种子悬浮液的ph值为6.0左右、孢子数为9.0
×
10
8
时，在超净工作台的无菌环境下进行无菌操作合瓶，得到枯草芽孢杆菌种子悬浮液。
[0092]
按照以下配方制备发酵培养基：酵母蛋白硒3mg/l、酵母浸粉1.5g/l、蛋白胨3g/l、葡萄糖40g/l、白砂糖60g/l、海洋鱼低聚肽粉2g/l、玉米粉0.05g/l、大豆粉0.01g/l、氯化钠0.2g/l和第一复合微量元素组合物0.1g/l；第一复合微量元素组合物包括：硫酸镁、磷酸二氢钾和硫酸亚铁。加水至300l，调节ph至7.0。其中，硫酸镁的用量为0.05g/l，磷酸二氢钾的用量为0.077g/l，硫酸铵的用量为0.03g/l。
[0093]
将枯草芽孢杆菌种子悬浮液在火焰圈的保护下分别接至不锈钢桶中。高温36.5℃培养，定期取样检测镜检，测ph值和无菌情况，周期65天。
[0094]
然后在10℃条件下进行低温后熟，定期检测镜检，观察菌丝生长情况，测ph值和无菌情况，周期125天。
[0095]
经过高温发酵、低温后熟，纳豆菌在约半年的时间里，历经了孢子发芽期、菌丝生长期、菌丝大量繁殖对数期、迟滞期、衰亡期，最后菌丝自溶，形成大量的富硒小分子生物肽。
[0096]
发酵液成熟后，经由粗滤网过滤，再经滤袋过滤，得到带有富硒小分子肽的滤液，分装桶内。得到的富硒小分子肽的滤液ph为4.5、糖含量为0.5wt％、蛋白质含量为1.2wt％，小分子肽蛋白硒含量1380ug/l寡肽2.16g/l，寡糖15.99g/l原液无杂菌，发酵气味浓郁，口感厚重。
[0097]
把料液分装至不锈钢桶中，封好口灭菌；高温灭菌温度120℃，灭菌柜压力0.1mpa，时间30分钟。冷却后保藏，避光，干燥。
[0098]
实施例3
[0099]
在发酵罐中加入啤酒麦芽汁，浓度调至5be，啤酒麦芽汁的体积为酵母培养基总体积的12％，按照20mg/kg的含量添加亚硒酸钠至酵母培养基中，再用水调至400kg，控制ph为5.5。将得到的培养基在122℃、压力0.1mpa条件下，保温保压灭菌30分钟。灭菌后冷却至28℃得到酵母培养基。
[0100]
将制备好的酵母孢子悬浮液在火焰圈的保护下接入到发酵罐中，接种量为酵母培养基总体积的10％。在搅拌转速180r/min、罐压0.03mpa，温度28℃条件下培养；在发酵进入到生长对数期后，再添加亚硒酸钠，使浓度达到60mg/kg；发酵罐运转40小时的时候，酵母蛋白硒的生物量12g,酵母细胞中的含量达到1580μg/g，总含硒量达到18000μg/l。
[0101]
将发酵得到的发酵液过滤、浓缩、干燥得到酵母蛋白硒。
[0102]
将原始枯芽草孢杆菌枯草亚种菌株(纳豆菌)经过分离、斜面培养得到枯草芽孢杆菌。
[0103]
按照以下配方准备种子培养基：酵母膏2g/l、蛋白胨2g/l、葡萄糖30g/l、白砂糖40g/l、氯化钠1.8g/l和第二复合微量元素组合物0.8g/l；第二复合微量元素组合物包括硫酸镁、磷酸二氢钾和硫酸亚铁。其中，硫酸镁的用量为0.0385g/l，磷酸二氢钾的用量为0.08g/l，硫酸亚铁的用量为0.022g/l。
[0104]
用容器将原料搅拌混合，混合液ph6.7，溶解后将原料分装至三角瓶中，塞好瓶塞，扎好瓶口。采用湿热法对液体培养基进行灭菌，温度121℃，压力0.12mpa，保温25分钟，然后降温冷却至37℃。
[0105]
将枯芽草孢杆菌枯草亚种(bacillus subtilis subsp.subtilis)的悬浮液按种子培养基的总体积的3％接入种子培养基中。培养温度37℃，摇瓶转速200转/分，周期48小时；当种子悬浮液的ph值为6.0左右、孢子数为9.0
×
10
8
时，在超净工作台的无菌环境下进行无菌操作合瓶，得到枯草芽孢杆菌种子悬浮液。
[0106]
按照以下配方制备发酵培养基：酵母蛋白硒3mg/l、酵母浸粉1.5g/l、蛋白胨2.5g/l、葡萄糖60g/l、白砂糖50g/l、海洋鱼低聚肽粉3g/l、玉米粉0.03g/l、大豆粉0.04g/l、氯化钠0.18g/l和第一复合微量元素组合物0.2g/l；第一复合微量元素组合物包括：硫酸镁、磷酸二氢钾和硫酸亚铁。加水至300l，调节ph至7.0。其中，硫酸镁的用量为0.0385g/l，磷酸二氢钾的用量为0.08g/l，硫酸亚铁的用量为0.022g/l。
[0107]
将枯草芽孢杆菌种子悬浮液在火焰圈的保护下分别接至不锈钢桶中。高温37℃培养，定期取样检测镜检，测ph值和无菌情况，周期60天。
[0108]
然后在12℃条件下进行低温后熟，定期检测镜检，观察菌丝生长情况，测ph值和无菌情况，周期120天。
[0109]
经过高温发酵、低温后熟，纳豆菌在约半年的时间里，历经了孢子发芽期、菌丝生长期、菌丝大量繁殖对数期、迟滞期、衰亡期，最后菌丝自溶，形成大量的富硒小分子生物肽。
[0110]
发酵液成熟后，经由粗滤网过滤，再经滤袋过滤，得到带有富硒小分子肽的滤液，分装桶内。得到的富硒小分子肽的滤液ph为5.0、糖含量为1wt％、蛋白质含量为1.3wt％，小分子肽蛋白硒含量1450μg/l，寡肽2.1376g/l，寡糖16.5g/l原液无杂菌，发酵气味浓郁，口感厚重。
[0111]
把料液分装至不锈钢桶中，封好口灭菌；高温灭菌温度120℃，灭菌柜压力0.1mpa，时间30分钟。冷却后保藏，避光，干燥。
[0112]
对比例1
[0113]
与实施例1不同的是，对比例1采用的种子培养基为：白砂糖30g/l、硫酸铵(无机氮源)0.045/l，氯化钠2g/l和第二复合微量元素组合物0.5g/l。
[0114]
通过镜检发现，采用该种子培养基得到的菌丝细弱，着色浅，od值为0.1-0.2；而实施例1得到的菌丝生长粗壮，着色深，od值为0.5-0.7。
[0115]
对比例2
[0116]
与实施例1不同的是，对比例2采用的种子培养基为：酵母蛋白硒3mg/l、硫酸铵0.045g/l、葡萄糖40g/l、白砂糖60g/l、海洋鱼低聚肽粉2g/l、玉米粉0.05g/l、大豆粉0.01g/l、氯化钠0.2g/l和第一复合微量元素组合物0.1g/l；第一复合微量元素组合物包括：硫酸镁、磷酸二氢钾和硫酸亚铁。
[0117]
由其培养得到的小分子肽滤液，ph在5-6之间，糖含量小于0.15％、蛋白质含量约为0.6-0.8wt％，总寡肽含量0.55
±
0.0331g/l，寡糖含量5.6
±
0.41g/l，硒蛋白含量1380μg/l，原液无杂菌。
[0118]
由对比例1和对比例2可知，采用蛋白胨作为有机氮源，相比无机氮源硫酸铵而言，可以获得更好的发酵效果。
[0119]
本申请提供的酵母蛋白硒的制备方法制备得到的酵母蛋白硒，硒含量高；将其作为发酵培养基的主要成分进行枯草芽孢杆菌培养，可以得到富硒小分子肽原液，含有丰富的硒元素、小分子肽、寡糖和维生素等营养成分，易吸收，保健效果好。
[0120]
富硒小分子肽的功效与作用很多，通常有以下几方面：1.抗氧化、抗肿瘤、抗衰老；人体内的氧化损伤，会引起人的生病、衰老，而硒可以激活人体自身的抗氧化系统，控制沉降的氧化损伤，预防疾病的发生。硒的抗氧化作用，是维生素e的五百倍以上。2.保护和修复细胞；硒存在于体内的细胞质中的抗氧化物中，具有代谢活性，保护细胞的接触结构，减少氧化损伤；保护细胞，进而保护人体心脏、肝、肾、肺、眼等重要器官。3.提高红细胞携氧能力，保护红细胞，防止红细胞中血红蛋白被氧化，使携氧能力增强，能给机体的每一细胞带来足够的氧气，使每一个细胞都能维持正常的功能。4.增强人体免疫力；硒能增强免疫系统，并能够认识到身体的病变。硒元素还可以提高机体的免疫功能，从根本上提高了抗病能力。5.解毒、排毒；硒作为带负电荷的非金属离子，在人体内可以结合带正电荷的有害金属离子，彻底消除有毒的金属离子，达到解毒和排毒的效果。6.癌性肿瘤的预防；微量元素硒既能抑制多种潜在的致癌物质，还能成为癌细胞的杀伤剂，可降低化疗的副作用，减轻晚期癌症患者的疼痛。
[0121]
寡糖和小分子肽都是小分子，喝后不用消化，可直接吸收，适合术后恢复和辅助癌症病人放疗和化疗的治疗。富硒小分子肽属于优质的有机硒源，吸收率高，满足人类细胞硒的需要，还可以在人体内储存，避免短期内再次缺硒。富硒小分子肽作为谷胱甘肽过氧化物酶活性中心的组成成分，主要以蛋氨酸硒，硒代半胱氨酸及衍生物的形式存在，生物参与机体抗氧化系统，富硒小分子肽通过提高人机体抗氧化能力，维护肠道细构和功能，也可改善富硒营养物质的吸收。
[0122]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
[0123]
此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所
包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本发明的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本发明的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

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