一种抗猪瘟免疫球蛋白的配制方法与流程

[0001]
本发明属于抗猪瘟技术领域，具体是涉及到一种抗猪瘟免疫球蛋白的配制方法。


背景技术：

[0002]
猪瘟俗称“烂肠瘟”，是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种急性、发热、接触性传染传染病。具有高度传染性和致死性。本病在自然条件下只感染猪，不同年龄、性别、品种的猪和野猪都易感，一年四季均可发生。
[0003]
免疫球蛋白是一种被动免疫疗法，它是把免疫球蛋白内含有的大量抗体输给受者，使之从低或无免疫状态很快达到暂时免疫保护状态，由于抗体与抗原相互作用起到直接中和毒素，中和病毒的作用。
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在免疫球蛋白市场仍处于短缺状况的现实下，为有效提取分离获得猪瘟病免疫球蛋白，进一步优化制备工艺具有重要意义。


技术实现要素：

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本发明提供了一种抗猪瘟免疫球蛋白的配制方法，旨在提供操作简便、工艺简单，病毒含量高的猪瘟活疫苗。
[0006]
本发明通过以下技术方案得以实现。
[0007]
一种抗猪瘟免疫球蛋白的配制方法，包括如下步骤：
[0008]
(1)按体积比1：1将灭活处理的猪瘟病毒加入弗氏完全佐剂混匀制备成猪瘟病毒原毒弗氏完全佐剂灭火苗，每只猪注射猪瘟病毒原毒弗氏完全佐剂灭火苗进行基础免疫，在基础免疫后进行加强免疫；
[0009]
(2)加强免疫后，当猪瘟抗体滴度达到峰值时，准备屠宰和采血，获取血浆；
[0010]
(3)将血浆加入反应皿内，加入低温纯化水，搅拌溶解沉淀物，并调节ph至5.0～5.3，继续搅拌15分钟；
[0011]
(4)向反应皿加入-25℃的乙醇，调节乙醇浓度至10％，将温度控制在-5～-10℃持续搅拌2小时，并在搅拌后维持-5～-10℃温度调节进行压滤得到上清液；
[0012]
(5)向上清液内加入0.2mol/l nahco3溶液，调节ph至8.2，并向上清液内加入nacl溶液，控制反应皿温度，然后向上清液内加入-15℃的乙醇调节至乙醇浓度20％，搅拌静置后进行压滤得到沉淀物；
[0013]
(6)用低温纯化水溶解沉淀物，调节ph值至6.3，并加入nacl溶液，用凝胶和磷酸盐调节ph至6.0，收集蛋白液；
[0014]
(7)将蛋白液进行浓缩，用氯化钠溶液调节蛋白液，并加入青霉素和链霉素凝结获得免疫球蛋白。
[0015]
本发明的有益效果在于：本发明提供的一种抗猪瘟免疫球蛋白的制备方法，该方法利用猪瘟病毒加入弗氏完全佐剂混匀制备成猪瘟病毒原毒弗氏完全佐剂灭火苗，然后免疫猪，避免了同种猪之间某些其它病毒性传染病的人为传染因素。制备过程利用低温乙醇，
制备工艺稳定，借助压缩过滤获得免疫球蛋白，质量高。该制备工艺制成的猪瘟免疫球蛋白，注入猪机体后，能够降低染病风险，提升自身的抗逆性。
具体实施方式
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为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0017]
下面对本发明实施例的抗猪瘟免疫球蛋白的配制方法进行具体说明。以下为进一步描述本发明的技术方案，但要求保护的范围并不局限于所述。
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实施例1
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一种抗猪瘟免疫球蛋白的配制方法，包括如下步骤：
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(1)按体积比1：1将灭活处理的猪瘟病毒加入弗氏完全佐剂混匀制备成猪瘟病毒原毒弗氏完全佐剂灭火苗，每只猪注射猪瘟病毒原毒弗氏完全佐剂灭火苗进行基础免疫，在基础免疫后进行加强免疫；
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(2)加强免疫后，当猪瘟抗体滴度达到峰值时，准备屠宰和采血，获取血浆；
[0022]
(3)将血浆加入反应皿内，加入低温纯化水，搅拌溶解沉淀物，并调节ph至5.0～5.3，继续搅拌15分钟；
[0023]
(4)向反应皿加入-25℃的乙醇，调节乙醇浓度至10％，将温度控制在-5～-10℃持续搅拌2小时，并在搅拌后维持-5～-10℃温度调节进行压滤得到上清液；
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(5)向上清液内加入0.2mol/l nahco3溶液，调节ph至8.2，并向上清液内加入nacl溶液，控制反应皿温度，然后向上清液内加入-15℃的乙醇调节至乙醇浓度20％，搅拌静置后进行压滤得到沉淀物；
[0025]
(6)用低温纯化水溶解沉淀物，调节ph值至6.3，并加入nacl溶液，用凝胶和磷酸盐调节ph至6.0，收集蛋白液；
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(7)将蛋白液进行浓缩，用氯化钠溶液调节蛋白液，并加入青霉素和链霉素凝结获得免疫球蛋白。
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本发明提供的一种抗猪瘟免疫球蛋白的制备方法，该方法利用猪瘟病毒加入弗氏完全佐剂混匀制备成猪瘟病毒原毒弗氏完全佐剂灭火苗，然后免疫猪，避免了同种猪之间某些其它病毒性传染病的人为传染因素。制备过程利用低温乙醇，制备工艺稳定，借助压缩过滤获得免疫球蛋白，质量高。该制备工艺制成的猪瘟免疫球蛋白，注入猪机体后，能够降低染病风险，提升自身的抗逆性。
[0028]
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干等同替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明。

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