一种从桑黄中同时纯化提取酚类和黄酮化合物的方法与流程

[0001]
本发明涉及一种同时纯化提取桑黄中酚类和黄酮的方法，属于天然有机化学领域。


背景技术：

[0002]
桑黄(phellinus baumii pilat.)属于真菌界(kingdom fungi)，担子菌门(basidiomy-cota)，是一种传统药用蕈菌。桑黄中含有大量的多酚类物质和黄酮类物质，多酚类物质具有多种功能，能够成为自由基清除剂和金属离子螯合剂。研究表明，多酚含量与抗氧化活性呈线性正相关。桑黄中的酚类物质除了具有较强的抗氧化活性外还有抗癌活性。黄酮类物质具有抗脑缺血、抗心肌缺血、抗心律失常、抗自由基作用、镇痛、护肝、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性。现代药理研究表明，桑黄黄酮类化合物对于癌细胞的生长具有一定的抑制作用，同时还具有较强的抗氧化、抗肝纤维化、增强免疫的作用。目前，对于桑黄多糖的提取、分离纯化研究较多，而酚类和黄酮化合物的研究较少。


技术实现要素：

[0003]
本发明的技术任务是为了弥补现有技术的不足，提供一种从桑黄中同时纯化提取酚类和黄酮化合物的方法，该方法耗时短、成本低、操作简单，具有很好的工业前景。
[0004]
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0005]
(1)将除杂后的桑黄在60℃下烘干后粉碎，过40目筛网，得到桑黄干粉；
[0006]
(2)向桑黄干粉中加入去离子水混合均匀，去离子水是桑黄干粉质量的2-5倍；用柠檬酸调混合液ph值为4-6，再按桑黄干粉质量的0.2～0.5％加入复合酶，在40～60℃下酶解40～90分钟，酶解液经离心分离得到上清液和沉淀物；
[0007]
(3)在步骤(2)中上清液中加入共价有机框架材料tapt-dhta-cof，其添加量为桑黄干粉质量的1％，进行多频超声萃取，经离心分离得到tapt-dhta-cof富集材料；
[0008]
(4)tapt-dhta-cof富集材料置于离心管中，加入洗脱液，超声振荡1分钟，经离心分离得到上清液和tapt-dhta-cof；上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到酚类和黄酮产品。
[0009]
所述复合酶，由纤维素酶和葡萄糖氧化酶组成，其添加量为桑黄干粉质量的5～10倍，其中，纤维素酶和葡萄糖氧化酶质量比为3：1～1：3。
[0010]
所述共价有机框架材料tapt-dhta-cof，由2,5-二羟基-1,4-苯二羧醛和2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪在n
2
保护的dmf溶液中150℃回流12h得到,比表面积是660m
2
g-1
，孔体积为0.56cm
3
/g，在400℃高温条件下可以保持其组成和结晶度，其结构式如下：
[0011][0012]
所述多频超声萃取，超声频率为20-80khz，两两组合或三种同时组合，超声处理功率为100-1000w，萃取时间为30-300s。
[0013]
所述离心分离，在700～2000rpm下离心10～30min。
[0014]
所述洗脱液，由乙醇、水、乙酸乙酯中的一种或二种及以上混合；洗脱液添加量为tapt-dhta-cof富集材料质量的2～5倍。
[0015]
所述超声振荡,超声频率为30khz，超声处理功率为600w。
[0016]
所述酚类和黄酮产品为含有原儿茶酸(图1所示1)、丁香酸(图1所示2)、4-(4-羟基苯基)-3-丁烯-2-酮(图1所示3)、咖啡酸(图1所示4)、4',5,7-三羟基黄酮(图1所示5)、芫花素(图1所示6)、桑黄黄酮a(图1所示7)和桑黄黄酮b(图1所示8)的混合物，提取率为60％-70％。
[0017][0018]
相对于现有技术，本发明所述的从桑黄中同时纯化提取酚类和黄酮的方法具有以下优势：
[0019]
(1)本发明在桑黄的酚类和黄酮提取中加入了多频超声协同提取方法，显著缩短提取时间，减少溶剂用量，提高提取率；且得到的酚类和黄酮提取物纯度高，无需后续分离处理，富集材料可反复循环利用；提取物具有广阔的药用和食用的应用前景。
[0020]
(2)共价有机框架材料tapt-dhta-cof是由轻质元素c、n和o连接而成的高度有序多孔晶态材料，具有低的密度和高的比表面积(660m
2
g-1
)，在400℃高温下也可以稳定存在，其作为富集材料可反复循环利用，孔体积为0.56cm
3
/g，孔道内含有大量羟基，对酚类和黄酮化合物具有高的选择性吸附性能；与其他多孔性吸附材料相比，具有无法比拟的优势。
具体实施方式
[0021]
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义，所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0022]
下面结合实施例来详细说明本发明。
[0023]
实施例1一种从桑黄中同时纯化提取酚类和黄酮化合物的方法
[0024]
(1)将除杂后的桑黄在60℃下烘干后粉碎，过40目筛网，得到桑黄干粉；
[0025]
(2)向桑黄干粉中加入去离子水混合均匀，去离子水是桑黄干粉质量的2倍，用柠檬酸调混合液ph值为4，再按桑黄干粉质量的0.2％加入复合酶，在60℃下酶解90分钟，酶解液经离心分离得到上清液和沉淀物；
[0026]
(3)在步骤(2)中上清液中加入共价有机框架材料tapt-dhta-cof，其添加量为桑黄干粉质量的1％，进行多频超声萃取，经离心分离得到tapt-dhta-cof富集材料；
[0027]
(4)tapt-dhta-cof富集材料置于离心管中，加入洗脱液，超声振荡1分钟，经离心分离得到上清液和tapt-dhta-cof；上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到酚类和黄酮产品。
[0028]
所述复合酶，由纤维素酶和葡萄糖氧化酶组成，其添加量为桑黄干粉质量的5倍，其中，纤维素酶和葡萄糖氧化酶质量比为3：1；
[0029]
所述共价有机框架材料tapt-dhta-cof，由2,5-二羟基-1,4-苯二羧醛和2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪在n
2
保护的dmf溶液中150℃回流12h得到,比表面积是660m
2
g-1
，孔体积为0.56cm
3
/g，在400℃高温条件下可以保持其组成和结晶度，其结构式如下：
[0030][0031]
所述多频超声萃取，超声频率为20khz和80khz同时组合，超声处理功率为1000w，萃取时间为30s；
[0032]
所述离心分离，在2000rpm下离心10min；
[0033]
所述洗脱液，由乙醇和水混合；洗脱液添加量为tapt-dhta-cof富集材料质量的2倍；
[0034]
所述超声振荡,超声频率为30khz，超声处理功率为600w。
[0035]
实施例2一种从桑黄中同时纯化提取酚类和黄酮化合物的方法
[0036]
(1)将除杂后的桑黄在60℃下烘干后粉碎，过40目筛网，得到桑黄干粉；
[0037]
(2)向桑黄干粉中加入去离子水混合均匀，去离子水是桑黄干粉质量的5倍，用柠檬酸调混合液ph值为6，再按桑黄干粉质量的0.5％加入复合酶，在40℃下酶解40分钟，酶解液经离心分离得到上清液和沉淀物；
[0038]
(3)在步骤(2)中上清液中加入共价有机框架材料tapt-dhta-cof，其添加量为桑黄干粉质量的1％，进行多频超声萃取，经离心分离得到tapt-dhta-cof富集材料；
[0039]
(4)tapt-dhta-cof富集材料置于离心管中，加入洗脱液，超声振荡1分钟，经离心分离得到上清液和tapt-dhta-cof；上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到酚类和黄酮产品。
[0040]
所述复合酶，由纤维素酶和葡萄糖氧化酶组成，其添加量为桑黄干粉质量的10倍，其中，纤维素酶和葡萄糖氧化酶质量比为1：3；
[0041]
所述共价有机框架材料tapt-dhta-cof，由2,5-二羟基-1,4-苯二羧醛和2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪在n
2
保护的dmf溶液中150℃回流12h得到,比表面积是660m
2
g-1
，孔体积为0.56cm
3
/g，在400℃高温条件下可以保持其组成和结晶度，其结构式如下：
[0042][0043]
所述多频超声萃取，超声频率为30khz和70khz同时组合，超声处理功率为100w，萃取时间为300s；
[0044]
所述离心分离，在700rpm下离心30min；
[0045]
所述洗脱液，由乙醇和乙酸乙酯混合；洗脱液添加量为tapt-dhta-cof富集材料质量的5倍；
[0046]
所述超声振荡,超声频率为30khz，超声处理功率为600w。
[0047]
实施例3一种从桑黄中同时纯化提取酚类和黄酮化合物的方法
[0048]
(1)将除杂后的桑黄在60℃下烘干后粉碎，过40目筛网，得到桑黄干粉；
[0049]
(2)向桑黄干粉中加入去离子水混合均匀，去离子水是桑黄干粉质量的3.5倍，用柠檬酸调混合液ph值为5，再按桑黄干粉质量的0.4％加入复合酶，在50℃下酶解65分钟，酶解液经离心分离得到上清液和沉淀物；
[0050]
(3)在步骤(2)中上清液中加入共价有机框架材料tapt-dhta-cof，其添加量为桑黄干粉质量的1％，进行多频超声萃取，经离心分离得到tapt-dhta-cof富集材料；
[0051]
(4)tapt-dhta-cof富集材料置于离心管中，加入洗脱液，超声振荡1分钟，经离心分离得到上清液和tapt-dhta-cof；上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到酚类和黄酮产品。
[0052]
所述复合酶，由纤维素酶和葡萄糖氧化酶组成，其添加量为桑黄干粉质量的6倍，其中，纤维素酶和葡萄糖氧化酶质量比为1：1；
[0053]
所述共价有机框架材料tapt-dhta-cof，由2,5-二羟基-1,4-苯二羧醛和2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪在n
2
保护的dmf溶液中150℃回流12h得到,比表面积是660m
2
g-1
，孔体积为0.56cm
3
/g，在400℃高温条件下可以保持其组成和结晶度，其结构式如下：
[0054][0055]
所述多频超声萃取，超声频率为20khz，50khz和80khz同时组合，超声处理功率为600w，萃取时间为170s；
[0056]
所述离心分离，在1400rpm下离心20min；
[0057]
所述洗脱液，由乙醇、水、乙酸乙酯混合；洗脱液添加量为tapt-dhta-cof富集材料质量的3.5倍；
[0058]
所述超声振荡,超声频率为30khz，超声处理功率为600w。
[0059]
实施例4共价有机框架材料tapt-dhta-cof的制备方法
[0060]
(1)在n
2
气氛下，0.71g1,3,5-三-(4-氨基苯基)三嗪和0.42g2,5-二羟基对苯二酚醛悬浮于15ml无水dmf中；
[0061]
(2)混合液回流12小时后，冷却至室温，过滤，用dmf和乙醇洗涤3次；
[0062]
(3)在120℃真空条件下干燥48h，得到红色粉末tapt-dhta-cof，产率为75％；
[0063]
循环利用的共价有机框架材料tapt-dhta-cof需要在120℃真空条件下活化48h。

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