抗HER2抗体的制作方法

抗her2抗体
[0001]
本申请要求于2018年2月13日提交的sg10201801219v的优先权，其内容和元素出于所有目的通过引用并入本文。
发明领域
[0002]
本发明涉及与her2蛋白结合的抗体。
[0003]
发明背景
[0004]
乳腺癌是女性最常见的癌症死亡原因，全球每年有40万多人死于乳腺癌。在新加坡，它是女性中最常见的癌症；从2007年至2011年，该疾病影响了新加坡的8,000多名妇女，约占新加坡女性癌症病例的30％，并且是新加坡女性癌症死亡的主要原因(新加坡癌症注册，中期年度注册报告，新加坡癌症发病率趋势)。
[0005]
通过引入针对表皮生长因子受体2(her2/her-2)阳性癌症(即约20-30％的乳腺癌和最具侵略性的类型)的单克隆抗体曲妥珠单抗已经达到了乳腺癌治疗的转折点。her2是表皮生长因子受体家族的成员，该家族包括表皮生长因子受体(egfr/her1)、her3和her4。这些受体酪氨酸激酶的同二聚体或异二聚体导致细胞内结构域残基的磷酸化，从而触发包括ras/raf和akt途径的下游信号级联。已知her2的二聚化导致细胞存活率，增殖和对凋亡的抵抗力增加。
[0006]
曲妥珠单抗是一种人源化抗体，于1998年被fda批准用于治疗her2阳性乳腺癌。曲妥珠单抗与her2的iv结构域结合，尽管仍不清楚抗体的作用机理，但已观察到多种作用，包括细胞周期阻滞、免疫介导的细胞溶解和血管生成抑制。但是，曲妥珠单抗治疗的应答率仍然很低，为15％至30％。虽然将曲妥珠单抗与化学疗法联合使用可延长应答时间，但大多数应答者会在一年内产生耐药性。
[0007]
耐药性的机制已被深入研究，但尚未得到临床验证。耐药的可能原因包括曲妥珠单抗结合减少，例如与her2结合时muc4糖蛋白掩盖曲妥珠单抗结合位点，通过替代的不依赖her22的途径(例如胰岛素样生长因子-i受体(igf-ir))作信号传导，以及下游信号分子(例如pten和pi3k)发生突变导致her2信号持续传导。
[0008]
此外，有证据表明her3/her2异二聚体在乳腺癌的发展中具有重要作用，而曲妥珠单抗不能抑制这种异二聚体的形成可能是治疗耐药性的一个重要因素。
[0009]
为了解决这个问题，研发了第二代her2人源化单克隆抗体帕妥珠单抗它与her2结构域ii结合，后者是一个阻碍受体二聚化的表位。iii期临床研究比较了帕妥珠单抗联合曲妥珠单抗和抗有丝分裂药物多西他赛在her2阳性患者中的使用，该新方案显著改善了患者的总生存期，促使fda在2012年批准了该组合用于her2阳性转移性乳腺癌患者的治疗。
[0010]
her2相关癌症的流行和对当前疗法产生耐药性的高风险凸显了开发治疗此类癌症的新疗法的重要性。


技术实现要素：

[0011]
本发明涉及与her2结合的抗体或抗原结合片段。还公开了重链和轻链多肽。抗体、抗原结合片段和多肽可以以分离和/或纯化的形式提供，并且可以配制成适合用于研究、治疗和诊断的组合物。
[0012]
在本发明的一个方面，提供了一种抗体或抗原结合片段，该抗体或抗原结合片段的氨基酸序列可以包含氨基酸序列i)至iii)或氨基酸序列iv至vi)，或优选氨基酸序列i)至vi)：
[0013]
i)lc-cdr1：glssgsvstx
1
x
2
yx
3
s(seq id no：9)；
[0014]
ii)lc-cdr2：x
4
tnx
5
rss(seq id no：10)；
[0015]
iii)lc-cdr3：x
6
lyx
7
gx
8
gix
9
v(seq id no：11)；
[0016]
iv)hc-cdr1：x
10
x
11
x
12
x
13
x
14
x
15
x
16
(seq id no：12)；
[0017]
v)hc-cdr2：x
17
x
18
x
19
x
20
x
21
x
22
gx
23
tx
24
yx
25
x
26
x
27
x
28
x
29
x
30
(seq id no：13)；
[0018]
vi)hc-cdr3：x
31
x
32
x
33
x
34
x
35
sx
36
x
37
yx
38
x
39
x
40
x
41
x
42
x
43
(seq id no：14)；
[0019]
或其变体，其中一个或多个氨基酸序列(i)至(vi)中的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸替换，其中x
1
＝g或s；x
2
＝h或y；x
3
＝a或p；x
4
＝n，s或t；x
5
＝t，s或i；x
6
＝v或m；x
7
＝v或m；x
8
＝d或s；x
9
＝w或s；x
10
＝s或缺失；x
11
＝s或缺失；x
12
＝s或g；x
13
＝y或n；x
14
＝y或w；x
15
＝i或w；x
16
＝h，g或s；x
17
＝i或缺失；x
18
＝i，s或e；x
19
＝n或i；x
20
＝p，y或n；x
21
＝g，y或h；x
22
＝n或s；x
23
＝d或s；x
24
＝n或y；x
25
＝a或n；x
26
＝q或p，x
27
＝r或s，x
28
＝f或l；x
29
＝q或k；x
30
＝g或s；x
31
＝e或缺失；x
32
＝i，y或m；x
33
＝a或g；x
34
＝s，p，i或a，x
35
＝y，d或n；x
36
＝g或s；x
37
＝g或s；x
38
＝l或缺失；x
39
＝v或y；x
40
＝a，d或g；x
41
＝f，m或y；x
42
＝d或缺失；x
43
＝i，v或缺失。
[0020]
在一些实施方式中，lc-cdr1是glssgsvstghyas(seq id no：15)，glssgsvstgyyps(seq id no：21)或glssgsvstsyyps(seq id no：27)之一。
[0021]
在一些实施方式中，lc-cdr2是ntntrss(seq id no：16)，stnsrss(seq id no：22)，ttnirss(seq id no：28)或stntrss(seq id no：33)之一。
[0022]
在一些实施方式中，lc-cdr3是vlyvgdgiwv(seq id no：17)，vlymgsgisv(seq id no：23)；mlymgsgiwv(seq id no：29)或vlymgsgiwv(seq id no：34)之一。
[0023]
在一些实施方式中，hc-cdr1是syyih(seq id no：18)，sssyywg(seq id no：24)，gyyws(seq id no：30)或ssnwws(seq id no：35)之一。
[0024]
在一些实施方式中，hc-cdr2是iinpgngdtnyayafqq(seq id no：19)，siyysgstyynpslks(seq id no：25)，einhsgstnynpslks(seq id no：31)或eiyhsgstnynpslks(seq id no：36)之一。
[0025]
在一些实施方式中，hc-cdr3是eiasysgsyydy(seq id no：20)，yapdssgylvafdi(seq id no：26)，mginsggylygmdv(seq id no：32)或mgansggylygmdv(seq id no：37)之一。
[0026]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的轻链可变区：
[0027]
lc-cdr1：glssgsvstx
1
x
2
yx
3
s(seq id no：9)；
[0028]
lc-cdr2：x
4
tnx
5
rss(seq id no：10)；
[0029]
lc-cdr3：x
6
lyx
7
gx
8
gix
9
v(seq id no：11)；
[0030]
其中x
1
＝g或s；x
2
＝h或y；x
3
＝a或p；x
4
＝n，s或t；x
5
＝t，s或i；x
6
＝v或m；x
7
＝v或m；x
8
＝d或s；x
9
＝w或s。
[0031]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的轻链可变区：
[0032]
lc-cdr1：glssgsvstghyas(seq id no：15)
[0033]
lc-cdr2：ntntrss(seq id no：16)
[0034]
lc-cdr3：vlyvgdgiwv(seq id no：17)。
[0035]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的轻链可变区：
[0036]
lc-cdr1：glssgsvstgyyps(seq id no：21)
[0037]
lc-cdr2：stnsrss(seq id no：22)
[0038]
lc-cdr3：vlymgsgisv(seq id no：23)。
[0039]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的轻链可变区：
[0040]
lc-cdr1：glssgsvstsyyps(seq id no：27)
[0041]
lc-cdr2：ttnirss(seq id no：28)
[0042]
lc-cdr3：mlymgsgiwv(seq id no：29)。
[0043]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的轻链可变区：
[0044]
lc-cdr1：glssgsvstsyyps(seq id no：27)
[0045]
lc-cdr2：stntrss(seq id no：33)
[0046]
lc-cdr3：vlymgsgiwv(seq id no：34)。
[0047]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的重链可变区：
[0048]
hc-cdr1：x
10
x
11
x
12
x
13
x
14
x
15
x
16
(seq id no：12)；
[0049]
hc-cdr2：x
17
x
18
x
19
x
20
x
21
x
22
gx
23
tx
24
yx
25
x
26
x
27
x
28
x
29
x
30
(seq id no：13)；
[0050]
hc-cdr3：x
31
x
32
x
33
x
34
x
35
sx
36
x
37
yx
38
x
39
x
40
x
41
x
42
x
43
(seq id no：14)；
[0051]
其中x
10
＝s或缺失；x
11
＝s或缺失；x
12
＝s或g；x
13
＝y或n；x
14
＝y或w；x
15
＝i或w；x
16
＝h，g或s；x
17
＝i或缺失；x
18
＝i，s或e；x
19
＝n或i；x
20
＝p，y或n；x
21
＝g，y或h；x
22
＝n或s；x
23
＝d或s；x
24
＝n或y；x
25
＝a或n；x
26
＝q或p，x
27
＝r或s，x
28
＝f或l；x
29
＝q或k；x
30
＝g或s；x
31
＝e或缺失；x
32
＝i，y或m；x
33
＝a或g；x
34
＝s，p，i或a，x
35
＝y，d或n；x
36
＝g或s；x
37
＝g或s；x
38
＝l或缺失；x
39
＝v或y；x
40
＝a，d或g；x
41
＝f，m或y；x
42
＝d或缺失；x
43
＝i，v或缺失。
[0052]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的重链可变区：
[0053]
hc-cdr1：syyih(seq id no：18)
[0054]
hc-cdr2：iinpgngdtnyaqrfqg(seq id no：19)
[0055]
hc-cdr3：eiasysgsyydy(seq id no：20)。
[0056]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的重链可
变区：
[0057]
hc-cdr1：sssyywg(seq id no：24)
[0058]
hc-cdr2：siyysgstyynpslks(seq id no：25)
[0059]
hc-cdr3：yapdssgylvafdi(seq id no：26)。
[0060]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的重链可变区：
[0061]
hc-cdr1：gyyws(seq id no：30)
[0062]
hc-cdr2：einhsgstnynpslks(seq id no：31)
[0063]
hc-cdr3：mginsggylygmdv(seq id no：32)。
[0064]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可包含至少一个包含以下cdr的重链可变区：
[0065]
hc-cdr1：ssnwws(seq id no：35)
[0066]
hc-cdr2：eiyhsgstnynpslks(seq id no：36)
[0067]
hc-cdr3：mgansggylygmdv(seq id no：37)。
[0068]
该抗体可以包含至少一个轻链可变区(v
l
)，该轻链可变区包含以下氨基酸序列之一：seq id no：1、15、16、17；或2、21、22、23；或3、27、28、29；或4、33、34、35；或与seq id no 1、15、16、17；或2、21、22、23；或3、27、28、29；或4、33、34、35具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列。
[0069]
该抗体可以包含至少一个重链可变区(v
h
)，该重链可变区包含以下氨基酸序列之一：seq id no：5、18、19、20；或6、24、25、26；或7、30、31、32；或8、36、37、38；或与seq id no：5、18、19、20；或6、24、25、26；或7、30、31、32；或8、36、37、38具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列。
[0070]
该抗体可以包含至少一个轻链可变区(v
l
)，该轻链可变区包含以下氨基酸序列之一：seq id no：1、15、16、17；或2、21、22、23；或3、27、28、29；或4、33、34、35；或与seq id no 1、15、16、17；或2、21、22、23；或3、27、28、29；或4、33、34、35具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列；和至少一个重链可变区(v
h
)，其包含以下氨基酸序列之一：seq id no：5、18、19、20；或6、24、25、26；或7、30、31、32；或8、36、37、38；或与seq id no：5、18、19、20；或6、24、25、26；或7、30、31、32；或8、36、37、38具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列。
[0071]
本文提供的抗体、抗原结合片段或多肽可以任选地结合her2，任选地为人或鼠的her2。所述抗体、抗原结合片段、多肽可以与人、猕猴和/或鼠her2特异性结合。所述抗体、抗原结合片段或多肽可任选地具有如上所述的氨基酸序列成分。所述抗体、抗原结合片段或多肽可以是igg或衍生自igg。所述抗体、抗原结合片段或多肽的分子量可以为约140至160kda，优选为约150kda。在一个实施方式中，提供了一种任选分离的体外复合物，其包含如本文所述的结合至her2的抗体、抗原结合片段或多肽。
[0072]
在本发明的一个方面，提供了一种分离的轻链可变区多肽，该轻链可变区多肽包含以下cdr：
[0073]
lc-cdr1：glssgsvstx
1
x
2
yx
3
s(seq id no：9)
[0074]
lc-cdr2：x
4
tnx
5
rss(seq id no：10)
[0075]
lc-cdr3：x
6
lyx
7
gx
8
gix
9
v(seq id no：11)；
[0076]
其中x
1
＝g或s；x
2
＝h或y；x
3
＝a或p；x
4
＝n，s或t；x
5
＝t，s或i；x
6
＝v或m；x
7
＝v或m；x
8
＝d或s；x
9
＝w或s。
[0077]
在一些实施方式中，分离的轻链可变区多肽与本文所述的重链可变区多肽组合提供。
[0078]
在一些实施方式中，lc-cdr1是glssgsvstghyas(seq id no：15)，glssgsvstgyyps(seq id no：21)或glssgsvstsyyps(seq id no：27)之一。在一些实施方式中，lc-cdr2是ntntrss(seq id no：16)，stnsrss(seq id no：22)，ttnirss(seq id no：28)或stntrss(seq id no：33)之一。在一些实施方式中，lc-cdr3是vlyvgdgiwv(seq id no：17)，vlymgsgisv(seq id no：23)；mlymgsgiwv(seq id no：29)或vlymgsgiwv(seq id no：34)之一。在一些实施方式中，分离的轻链可变区多肽能够结合her2。
[0079]
在本发明的一个方面，提供了轻链可变区多肽，其包含与轻链序列seq id no：1、2、3或4(图1a至1d)具有至少85％的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，分离的轻链可变区多肽能够结合her2。
[0080]
在本发明的一个方面，提供了一种分离的重链可变区多肽，该重链可变区多肽包含以下cdr：
[0081]
hc-cdr1：x
10
x
11
x
12
x
13
x
14
x
15
x
16
(seq id no：12)；
[0082]
hc-cdr2：x
17
x
18
x
19
x
20
x
21
x
22
gx
23
tx
24
yx
25
x
26
x
27
x
28
x
29
x
30
(seq id no：13)；
[0083]
hc-cdr3：x
31
x
32
x
33
x
34
x
35
sx
36
x
37
yx
38
x
39
x
40
x
41
x
42
x
43
(seq id no：14)；
[0084]
其中x
10
＝s或缺失；x
11
＝s或缺失；x
12
＝s或g；x
13
＝y或n；x
14
＝y或w；x
15
＝i或w；x
16
＝h，g或s；x
17
＝i或缺失；x
18
＝i，s或e；x
19
＝n或i；x
20
＝p，y或n；x
21
＝g，y或h；x
22
＝n或s；x
23
＝d或s；x
24
＝n或y；x
25
＝a或n；x
26
＝q或p，x
27
＝r或s，x
28
＝f或l；x
29
＝q或k；x
30
＝g或s；x
31
＝e或缺失；x
32
＝i，y或m；x
33
＝a或g；x
34
＝s，p，i或a，x
35
＝y，d或n；x
36
＝g或s；x
37
＝g或s；x
38
＝l或缺失；x
39
＝v或y；x
40
＝a，d或g；x
41
＝f，m或y；x
42
＝d或缺失；x
43
＝i，v或缺失。
[0085]
在一些实施方式中，分离的重链可变区多肽与本文所述的轻链可变区多肽组合提供。
[0086]
在一些实施方式中，hc-cdr1是syyih(seq id no：18)，sssyywg(seq id no：24)，gyyws(seq id no：30)或ssnwws(seq id no：35)之一。在一些实施方式中，hc-cdr2是iinpgngdtnyayafqq(seq id no：19)，siyysgstyynpslks(seq id no：25)，einhsgstnynpslks(seq id no：31)或eiyhsgstnynpslks(seq id no：36)之一。在一些实施方式中，hc-cdr3是eiasysgsyydy(seq id no：20)，yapdssgylvafdi(seq id no：26)，mginsggylygmdv(seq id no：32)或mgansggylygmdv(seq id no：37)之一。在一些实施方式中，分离的重链可变区多肽能够结合her2。
[0087]
在本发明的一个方面，提供了分离的重链可变区多肽，其包含与seq id no：5、6、7或8的重链序列具有至少85％的序列同一性的氨基酸序列(图2a至2d)。在一些实施方式中，
分离的重链可变区多肽能够结合her2。
[0088]
在本发明的一个方面，提供了一种抗体或抗原结合片段，该抗体或抗原结合片段包含重链和轻链可变区序列，其中：
[0089]
轻链包含lc-cdr1，lc-cdr2，lc-cdr3，分别与以下序列具有至少85％整体序列同一性：lc-cdr1：glssgsvstx
1
x
2
yx
3
s(seq id no：9)、glssgsvstghyas(seq id no：15)、glssgsvstgyyps(seq id no：21)或glssgsvstsyyps(seq id no：27)之一，lc-cdr2：x
4
tnx
5
rss(seq id no：10)、ntntrss(seq id no：16)、stnsrss(seq id no：22)、ttnirss(seq id no：28)或stntrss(seq id no：33)之一，和lc-cdr3：x
6
lyx
7
gx
8
gix
9
v(seq id no：11)、vlyvgdgiwv(seq id no：17)、vlymgsgisv(seq id no:23)、mlymgsgiwv(seq id no：29)或vlymgsgiwv(seq id no：34)之一，其中x
1
＝g或s；x
2
＝h或y；x
3
＝a或p；x
4
＝n，s或t；x
5
＝t，s或i；x
6
＝v或m；x
7
＝v或m；x
8
＝d或s；x
9
＝w或s，并且
[0090]
重链包含hc-cdr1，hc-cdr2，hc-cdr3，分别与以下序列具有至少85％的整体序列同一性：hc-cdr1：x
10
x
11
x
12
x
13
x
14
x
15
x
16
(seq id no：12)、syyih(seq id no：18)、sssyywg(seq id no：24)、gyyws(seq id no：30)或ssnwws(seq id no：35)之一，hc-cdr2：x
17
x
18
x
19
x
20
x
21
x
22
gx
23
tx
24
yx
25
x
26
x
27
x
28
x
29
x
30
(seq id no：13)、i inpgngdtnyaqrfqg(seq id no：19)、siyysgstyynpslks(seq id no：25)、einhsgstnynpslks(seq id no：31)、或eiyhsgstnynpslks(seq id no：36)之一，和hc-cdr3：x
31
x
32
x
33
x
34
x
35
sx
36
x
37
yx
38
x
39
x
40
x
41
x
42
x
43
(seq id no：14)、eiasysgsyydy(seq id no：20)、yapdssgylvafdi(seq id no：26)、mginsggylygmdv(seq id no：32)或mgansggylygmdv(seq id no：37)之一，其中x
10
＝s或缺失；x
11
＝s或缺失；x
12
＝s或g；x
13
＝y或n；x
14
＝y或w；x
15
＝i或w；x
16
＝h，g或s；x
17
＝i或缺失；x
18
＝i，s或e；x
19
＝n或i；x
20
＝p，y或n；x
21
＝g，y或h；x
22
＝n或s；x
23
＝d或s；x
24
＝n或y；x
25
＝a或n；x
26
＝q或p，x
27
＝r或s，x
28
＝f或l；x
29
＝q或k；x
30
＝g或s；x
31
＝e或缺失；x
32
＝i，y或m；x
33
＝a或g；x
34
＝s、p、i或a，x
35
＝y、d或n；x
36
＝g或s；x
37
＝g或s；x
38
＝l或缺失；x
39
＝v或y；x
40
＝a、d或g；x
41
＝f、m或y；x
42
＝d或缺失；x
43
＝i、v或缺失。
[0091]
在一些实施方式中，序列同一性的程度可以是86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一。
[0092]
本发明的另一个方面，提供了任选分离的能够结合her2的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
[0093]
所述轻链序列与seq id no：1、2、3或4的轻链序列具有至少85％的序列同一性(图1a至1d)，以及；
[0094]
所述重链序列与seq id no：5、6、7或8的重链序列具有至少85％的序列同一性(图2a至2d)。
[0095]
在一些实施方式中，序列同一性的程度可以是86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一。
[0096]
在本发明的另一方面，提供了任选分离的能够结合her2的抗体、抗原结合片段或多肽，其具有氨基酸序列i)至i ii)或氨基酸序列iv)至vi)，或优选地，氨基酸序列i)至vi)：
[0097]
i)lc-cdr1：rssqsllhsngfnyld(seq id no：74)，rssqsllhsdgnkyld(seq id no：84)，rssqslvysdgntyln(seq id no：93)，rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，
rssqsllhsngntyld(seq id no:110)，rasqsvrnnla(seq id no：120)，gsttgavtsghyps(seq id no：138)，rasqsvsssyla(seq id no：161)，rssqslqhsngyqyld(seq id no：170)，tgrsaiggfdvq(seq id no：186)，altsgsvstsyyps(seq id no：194)，tssqslvysdgntyln(seq id no：211)，rssqsllrsdgynfvd(seq id no：217)，rasqgisswla(seq id no：226)，rassrvgkyla(seq id no：247)，glssgsvsttyyps(seq id no：255)，tlrsginvgtyriy(seq id no：261)，rasqsvssyla(seq id no：270)，gltsgavsssyyps(seq id no：279)，tgnnnnvgfagaa(seq id no：287)之一；
[0098]
ii)lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，kvsnrds(seq id no：94)，sgsnras(seq id no：111)，yastrat(seq id no：121)，stsnkhs(seq id no：139)，lgshras(seq id no：146)，lgsnrap(seq id no：155)，gassrat(seq id no：162)，lgsfras(seq id no：171)，dnsnrps(seq id no：187)，stnlrss(seq id no：195)，kvsdrds(seq id no：204)，kvskrds(seq id no：212)，lgsdras(seq id no：218)，aasslqs(seq id no：227)，yksdsdkqqgs(seq id no：262)，dastras(seq id no：248)，stntrss(seq id no：33)，dasnrat(seq id no：271)，ntdirfs(seq id no：280)，rnndrps(seq id no：288)之一；
[0099]
iii)lc-cdr3：mqglqtpyt(seq id no：76)，mlgthwppmyi(seq id no：85)，mqgthwplt(seq id no：95)，mqalqtpwt(seq id no：103)，mqgthwppt(seq id no：112)，qhygssrt(seq id no：122)，maglqtprlt(seq id no：130)，llyyggarv(seq id no：140)，mqalqtplt(seq id no：147)，qqygssprt(seq id no：163)，mhalstppwt(seq id no：172)，mqgthwpgt(seq id no：180)，gtwdsylniwv(seq id no：188)，elymgsgisv(seq id no：196)，mqgthwpqt(seq id no：205)，mqalqtprt(seq id no：219)，qqansfppt(seq id no：228)，qqygsssa(seq id no：233)，miwhssawv(seq id no：263)，qhygtsppfi(seq id no：249)，vlymgngisv(seq id no：256)，qqrsnwplt(seq id id：272)，vlymgsgisv(seq id no：23)，sawdsslkvqv(seq id no：289)之一；
[0100]
iv)hc-cdr1：sygmh(seq id no：77)，saaaawn(seq id no：86)，syamh(seq id no：96)，sfamn(seq id no：113)，sygis(seq id no：123)，syams(seq id no：131)，syais(seq id no：148)，tytmh(seq id no：173)，gyyws(seq id no：30)，sywig(seq id no：197)，nygmh(seq id no：234)，syaih(seq id no：241)，sssyywg(seq id no：24)，dyyih(seq id no：281)之一；
[0101]
v)hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，rtyyrskwyseyavsvks(seq id no：87)，wingnngntkysqkfqg(seq id no：104)，tiggsgdstfyadpvkg(seq id no：114)，wisayngntnyaqklqg(seq id no：124)，aisgsggstyyadsvkg(seq id no：132)，giipifgtanyaqkfqg(seq id no：149)，ginwnggstgyadsvkg(seq id no：164)，witpgngnthysqnfqg(seq id no：174)，einhsgstnynpslks(seq id no：31)，i iysf seq id no：198)，aissnggstyyadsvkg(seq id no：206)，visydesnkyyadsvkg(seq id no：220)，fisydgtnkyyadsvkg(seq id no：235)，siyysgstyynpslks(seq id no：25)，viwydgsnkyyadsvkg(seq id no：264)，sisssssyiyyadsvkg(seq id no：273)，wvsayngdtnyaqkfqg(seq id no：282)之一；
[0102]
vi)hc-cdr3：dlfavvgyyyyygmdv(seq id no：79)，gsifdv(seq id no：88)，srgyygmdv(seq id no：97)，ggylvgy(seq id no：105)，aygsgghyffay(seq id no：115)，
dwgsswsdy(seq id no：125)，tyydfwsgrvgafdi(seq id no：133)，drgyygmdv(seq id no：141)，grgsgypdtwfwfdp(seq id no：150)，sygsgsyrshafdi(seq id no：156)，glvpaasmdv(seq id no：165)，srvgaldy(seq id no：175)，srgysgydn(seq id no：181)，glpyyyfdy(seq id no：189)，lgygvplpeyfdl(seq id no：199)，epsgswsylyyyyygmdv(seq id no：221)，hygdyyyyygmdv(seq id no：236)，vygyglhyygmdv(seq id no：242)，sydssgyyyfdy(seq id no：250)，yapdssgylvafdi(seq id no：26)，mttedy(seq id no：265)，dgsawsrpy(seq id id：274)，eiasysgsyydy(seq id no：20)，gadwnsdy(seq id no：290)之一；
[0103]
或其变体，其中(i)至(vi)中的一个或多个序列的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0104]
本发明的另一方面，提供了任选分离的能够结合her2的抗体、抗原结合片段或多肽，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
[0105]
轻链包含lc-cdr1，lc-cdr2，lc-cdr3，与以下序列具有至少85％的整体序列同一性：lc-cdr1：rssqsllhsngfnyld(seq id no：74)，rssqsllhsdgnkyld(seq id no：84)，rssqslvysdgntyln(seq id no：93)，rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，rssqsllhsngntyld(seq id no：110)，rasqsvrnnla(seq id no：120)，gsttgavtsghyps(seq id no：138)，rasqsvsssyla(seq id no：138)，rasqsvsssyla(seq id no：161)，rssqslqhsngyqyld(seq id no：170)，tgrsaniggfdvq(seq id no：186)，altsgsvstsyyps(seq id no：194)，tssqslvysdgntyln(seq id no：211)，rssqsllrsdgynfvd(seq id no：217)，rasqgisswla(seq id no：226)，rassrvgkyla(seq id no：247)，glssgsvsttyyps(seq id no：255)，tlrsginvgtyriy(seq id no：261)，rasqsvssyla(seq id no：270)，gltsgavsssyyps(seq id no：279)，tgnnnnvgfagaa(seq id no：287)之一；
[0106]
lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，kvsnrds(seq id no：94)，sgsnras(seq id no：111)，yastrat(seq id no：121)，stsnkhs(seq id no：139)，lgshras(seq id no：146)，lgsnrap(seq id no：155)，gassrat(seq id no：162)，lgsfras(seq id no：171)，dnsnrps(seq id no：187)，stnlrss(seq id no：195)，kvsdrds(seq id no：204)，kvskrds(seq id no：212)，lgsdras(seq id no：218)，aasslqs(seq id no：227)，yksdsdkqqgs(seq id no：262)，dastras(seq id no：248)，stntrss(seq id no：33)，dasnrat(seq id no：271)，ntdirfs(seq id no：280)，rnndrps(seq id no：288)之一；
[0107]
lc-cdr3：mqglqtpyt(seq id no：76)，mlgthwppmyi(seq id no：85)，mqgthwplt(seq id no：95)，mqalqtpwt(seq id no：103)，mqgthwppt(seq id no：112)，qhygssrt(seq id no：122)，maglqtprlt(seq id no：130)，llyyggarv(seq id no：140)，mqalqtplt(seq id no：147)，qqygssprt(seq id no：163)，mhalstppwt(seq id no：172)，mqgthwpgt(seq id no：180)，gtwdsylniwv(seq id no：188)，elymgsgisv(seq id no：196)，mqgthwpqt(seq id no：205)，mqalqtprt(seq id no：219)，qqansfppt(seq id no：228)，qqygsssa(seq id no：233)，miwhssawv(seq id no：263)，qhygtsppfi(seq id no：249)，vlymgngisv(seq id no：256)，qqrsnwplt(seq id no：272)，vlymgsgisv(seq id no：23)，sawdsslkvqv(seq id no：289)之一；和
[0108]
重链包含hc-cdr1，hc-cdr2，hc-cdr3，与以下序列具有至少85％的整体序列同一性：hc-cdr1：sygmh(seq id no：77)，saaaawn(seq id no：86)，syamh(seq id no：96)，
sfamn(seq id no：113)，sygis(seq id no：123)，syams(seq id no：131)，syais(seq id no：148)，tytmh(seq id no：173)，gyyws(seq id no：30)，sywig(seq id no：197)，nygmh(seq id no：234)，syaih(seq id no：241)，sssyywg(seq id no：24)，dyyih(seq id no：281)之一；
[0109]
hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，rtyyrskwyseyavsvks(seq id no：87)，wingagngntkysqkfqg(seq id no：104)，tiggsgdstfyadpvkg(seq id no：114)，wisayngntnyaqklqg(seq id no：124)，aisgsggstyyadsvkg(seq id no：132)，giipifgtanyaqkfqg(seq id no：149)，ginwnggstgyadsvkg(seq id no：164)，witpgngnthysqnfqg(seq id no：174)，einhsgstnynpslks(seq id no：31)，iiqpgds no：198)，aissnggstyyadsvkg(seq id no：206)，visydesnkyyadsvkg(seq id no：220)，fisydgtnkyyadsvkg(seq id no：235)，siyysgstyynpslks(seq id no：25)，viwydgsnkyyadsvkg(seq id no：264)，sisssssyiyyadsvkg(seq id no：273)，wvsayngdtnyaqkfqg(seq id no：282)之一；
[0110]
hc-cdr3：dlfavvgyyyyygmdv(seq id no：79)，gsifdv(seq id no：88)，srgyygmdv(seq id no：97)，ggylvgy(seq id no：105)，aygsgghyffay(seq id no：115)，dwgsswsdy(seq id no：125)，tyydfwsgrvgafdi(seq id no：133)，drgyygmdv(seq id no：141)，grgsgypdtwfwfdp(seq id no：150)，sygsgsyrshafdi(seq id no：156)，glvpaasmdv(seq id no：156)no：165)，srvgaldy(seq id no：175)，srgysgydn(seq id no：181)，glpyyyfdy(seq id no：189)，lgygvplpeyfdl(seq id no：199)，epsgswsylyyyyygmdv(seq id no：221)，hygdyyyyygmdv(seq id no：236)，vygyglhyygmdv(seq id no：242)，sydssgyyyfdy(seq id no：250)，yapdssgylvafdi(seq id no：26)，mttedy(seq id no：265)，dgsawsrpy(seq id no：265)，dgsawsrpy(seq id no：274)，eiasysgsyydy(seq id no：20)，gadwnsdy(seq id no：290)之一。
[0111]
在一些实施方式中，序列同一性的程度可以是86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一。
[0112]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngfnyld(seq id no：74)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mqglqtpyt(seq id no：76)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sygmh(seq id no：77)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：dlfavvgyyyyygmdv(seq id no：79)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngfnyld(seq id no：74)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mqglqtpyt(seq id no：76)，以及至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sygmh(seq id no：77)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：dlfavvgyyyyygmdv(seq id no：79)。
[0113]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsdgnkyld(seq id no：84)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mlgthwppmyi(seq id no：85)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：saaaawn(seq id no：86)，hc-cdr2：
rtyyrskwyseyavsvks(seq id no：87)，hc-cdr3：gsifdv(seq id no：88)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsdgnkyld(seq id no：84)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mlgthwppmyi(seq id no：85)，以及至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：saaaawn(seq id no：86)，hc-cdr2：rtyyrskwyseyavsvks(seq id no：87)，hc-cdr3：gsifdv(seq id no：88)。
[0114]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqslvysdgntyln(seq id no：93)，lc-cdr2：kvsnrds(seq id no：94)，lc-cdr3：mqgthwplt(seq id no：95)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：srgyygmdv(seq id no：97)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqslvysdgntyln(seq id no：93)，lc-cdr2：kvsnrds(seq id no：94)，lc-cdr3：mqgthwplt(seq id no：95)，以及至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：srgyygmdv(seq id no：97)。
[0115]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mqalqtpwt(seq id no：103)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：winagngntkysqkfqg(seq id no：104)，hc-cdr3：ggylvgy(seq id no：105)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mqalqtpwt(seq id no：103)，以及至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：winagngntkysqkfqg(seq id no：104)，hc-cdr3：ggylvgy(seq id no：105)。
[0116]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngntyld(seq id no：110)，lc-cdr2：sgsnras(seq id no：111)，lc-cdr3：mqgthwppt(seq id no：112)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sfamn(seq id no：113)，hc-cdr2：tiggsgdstfyadpvkg(seq id no：114)，hc-cdr3：aygsgghyffay(seq id no：115)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngntyld(seq id no：110)，lc-cdr2：sgsnras(seq id no：111)，lc-cdr3：mqgthwppt(seq id no：112)，以及至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sfamn(seq id no：113)，hc-cdr2：tiggsgdstfyadpvkg(seq id no：114)，hc-cdr3：aygsgghyffay(seq id no：115)。
[0117]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rasqsvrnnla(seq id no:120)，lc-cdr2:yastrat(seq id no:121)，lc-cdr3:qhygssrt(seq id no:122)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少
一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sygis(seq id no:123)，hc-cdr2:wisayngntnyaqklqg(seq id no:124)，hc-cdr3:dwgsswsdy(seq id no:125)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rasqsvrnnla(seq id no:120)，lc-cdr2:yastrat(seq id no:121)，lc-cdr3:qhygssrt(seq id no:122)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sygis(seq id no:123)，hc-cdr2:wisayngntnyaqklqg(seq id no:124)，hc-cdr3:
[0118]
dwgsswsdy(seq id no:125)。
[0119]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqsllhsngynyld(seq id no:102)，lc-cdr2:lgsnras(seq id no:75)，lc-cdr3:maglqtprlt(seq id no:130)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syams(seq id no:131)，hc-cdr2:aisgsggstyyadsvkg(seq id no:132)，hc-cdr3:tyydfwsgrvgafdi(seq id no:133)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqsllhsngynyld(seq id no:102)，lc-cdr2:lgsnras(seq id no:75)，lc-cdr3:maglqtprlt(seq id no:130)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syams(seq id no:131)，hc-cdr2:aisgsggstyyadsvkg(seq id no:132)，hc-cdr3:tyydfwsgrvgafdi(seq id no:133)。
[0120]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:gsttgavtsghyps(seq id no:138)，lc-cdr2:stsnkhs(seq id no:139)，lc-cdr3:llyyggarv(seq id no:140)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sygmh(seq id no:77)，hc-cdr2:visydgsnkyyadsvkg(seq id no:78)，hc-cdr3:drgyygmdv(seq id no:141)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:gsttgavtsghyps(seq id no:138)，lc-cdr2:stsnkhs(seq id no:139)，lc-cdr3:llyyggarv(seq id no:140)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sygmh(seq id no:77)，hc-cdr2:visydgsnkyyadsvkg(seq id no:78)，hc-cdr3:drgyygmdv(seq id no:141)。
[0121]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqsllhsngynyld(seq id no:102)，lc-cdr2:lgshras(seq id no:146)，lc-cdr3:mqalqtplt(seq id no:147)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syais(seq id no:148)，hc-cdr2:giipifgtanyaqkfqg(seq id no:149)，hc-cdr3:grgsgypdtwfwfdp(seq id no:150)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqsllhsngynyld(seq id no:102)，lc-cdr2:lgshras(seq id no:146)，lc-cdr3:mqalqtplt(seq id no:147)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syais(seq id no:148)，hc-cdr2:giipifgtanyaqkfqg(seq id no:149)，hc-cdr3:grgsgypdtwfwfdp(seq id no:150)。
[0122]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqsllhsngynyld(seq id no:102)，lc-cdr2:lgsnrap(seq id no:
155)，lc-cdr3:mqgthwplt(seq id no:95)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syamh(seq id no:96)，hc-cdr2:visydgsnkyyadsvkg(seq id no:78)，hc-cdr3:sygsgsyrshafdi(seq id no:156)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqsllhsngynyld(seq id no:102)，lc-cdr2:lgsnrap(seq id no:155)，lc-cdr3:mqgthwplt(seq id no:95)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syamh(seq id no:96)，hc-cdr2:visydgsnkyyadsvkg(seq id no:78)，hc-cdr3:sygsgsyrshafdi(seq id no:156)。
[0123]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rasqsvsssyla(seq id no:161)，lc-cdr2:gassrat(seq id no:162)，lc-cdr3:qqygssprt(seq id no:163)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syams(seq id no:131)，hc-cdr2:ginwnggstgyadsvkg(seq id no:164)，hc-cdr3:glvpaasmdv(seq id no:165)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rasqsvsssyla(seq id no:161)，lc-cdr2:gassrat(seq id no:162)，lc-cdr3:qqygssprt(seq id no:163)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syams(seq id no:131)，hc-cdr2:ginwnggstgyadsvkg(seq id no:164)，hc-cdr3:glvpaasmdv(seq id no:165)。
[0124]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqslqhsngyqyld(seq id no:170)，lc-cdr2:lgsfras(seq id no:171)，lc-cdr3:mhalstppwt(seq id no:172)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:tytmh(seq id no:173)，hc-cdr2:witpgngnthysqnfqg(seq id no:174)，hc-cdr3:srvgaldy(seq id no:175)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqslqhsngyqyld(seq id no:170)，lc-cdr2:lgsfras(seq id no:171)，lc-cdr3:mhalstppwt(seq id no:172)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:tytmh(seq id no:173)，hc-cdr2:witpgngnthysqnfqg(seq id no:174)，hc-cdr3:srvgaldy(seq id no:175)。
[0125]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqslvysdgntyln(seq id no:93)，lc-cdr2:kvsnrds(seq id no:94)，lc-cdr3:mqgthwpgt(seq id no:180)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sygmh(seq id no:77)，hc-cdr2:visydgsnkyyadsvkg(seq id no:78)，hc-cdr3:srgysgydn(seq id no:181)。在一些实施方式中，lc-cdr1:rssqslvysdgntyln(seq id no:93)，lc-cdr2:kvsnrds(seq id no:94)，lc-cdr3:mqgthwpgt(seq id no:180)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sygmh(seq id no:77)，hc-cdr2:visydgsnkyyadsvkg(seq id no:78)，hc-cdr3:srgysgydn(seq id no:181)。
[0126]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:tgrsaniggfdvq(seq id no:186)，lc-cdr2:dnsnrps(seq id no:187)，
lc-cdr3:gtwdsylniwv(seq id no:188)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:gyyws(seq id no:30)，hc-cdr2:einhsgstnynpslks(seq id no:31)，hc-cdr3:glpyyyfdy(seq id no:189)。在一些实施方式中，lc-cdr1:tgrsaniggfdvq(seq id no:186)，lc-cdr2:dnsnrps(seq id no:187)，lc-cdr3:gtwdsylniwv(seq id no:188)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:gyyws(seq id no:30)，hc-cdr2:einhsgstnynpslks(seq id no:31)，hc-cdr3:glpyyyfdy(seq id no:189)。
[0127]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:altsgsvstsyyps(seq id no:194)，lc-cdr2:stnlrss(seq id no:195)，lc-cdr3:elymgsgisv(seq id no:196)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sywig(seq id no:197)，hc-cdr2:iiypgdsdtryspsfqg(seq id no:198)，hc-cdr3:lgygvplpeyfdl(seq id no:199)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:altsgsvstsyyps(seq id no:194)，lc-cdr2:stnlrss(seq id no:195)，lc-cdr3:elymgsgisv(seq id no:196)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:sywig(seq id no:197)，hc-cdr2:iiypgdsdtryspsfqg(seq id no:198)，hc-cdr3:lgygvplpeyfdl(seq id no:199)。
[0128]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqslvysdgntyln(seq id no:93)，lc-cdr2:kvsdrds(seq id no:204)，lc-cdr3:mqgthwpqt(seq id no:205)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syamh(seq id no:96)，hc-cdr2:aissnggstyyadsvkg(seq id no:206)，hc-cdr3:srgyygmdv(seq id no:97)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1:rssqslvysdgntyln(seq id no:93)，lc-cdr2:kvsdrds(seq id no:204)，lc-cdr3:mqgthwpqt(seq id no:205)，和至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1:syamh(seq id no:96)，hc-cdr2:aissnggstyyadsvkg(seq id no:206)，hc-cdr3:srgyygmdv(seq id no:97)。
[0129]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：tssqslvysdgntyln(seq id no：211)，lc-cdr2：kvskrds(seq id no：212)，lc-cdr3：mqgthwplt(seq id no：95)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：srgyygmdv(seq id no：97)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：tssqslvysdgntyln(seq id no：211)，lc-cdr2：kvskrds(seq id no：212)，lc-cdr3：mqgthwplt(seq id no：95)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：srgyygmdv(seq id no：97)。
[0130]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllrsdgynfvd(seq id no：217)，lc-cdr2：lgsdras(seq id no：
218)，lc-cdr3：mqalqtprt(seq id no：219)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydesnkyyadsvkg(seq id no：220)，hc-cdr3：epsgswsylyyyyygmdv(seq id no：221)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllrsdgynfvd(seq id no：217)，lc-cdr2：lgsdras(seq id no：218)，lc-cdr3：mqalqtprt(seq id no：219)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydesnkyyadsvkg(seq id no：220)，hc-cdr3：epsgswsylyyyyygmdv(seq id no：221)。
[0131]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rasqgisswla(seq id no：226)，lc-cdr2：aasslqs(seq id no：227)，lc-cdr3：qqansfppt(seq id no：228)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：srgyygmdv(seq id no：97)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rasqgisswla(seq id no：226)，lc-cdr2：aasslqs(seq id no：227)，lc-cdr3：qqansfppt(seq id no：228)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：srgyygmdv(seq id no：97)。
[0132]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rasqsvsssyla(seq id no：161)，lc-cdr2：gassrat(seq id no：162)，lc-cdr3：qqygsssa(seq id no：233)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：nygmh(seq id no：234)，hc-cdr2：fisydgtnkyyadsvkg(seq id no：235)，hc-cdr3：hygdyyyyygmdv(seq id no：236)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rasqsvsssyla(seq id no：161)，lc-cdr2：gassrat(seq id no：162)，lc-cdr3：qqygsssa(seq id no：233)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：nygmh(seq id no：234)，hc-cdr2：fisydgtnkyyadsvkg(seq id no：235)，hc-cdr3：hygdyyyyygmdv(seq id no：236)。
[0133]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mqgthwpgt(seq id no：180)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syaih(seq id no：241)，hc-cdr2：aissnggstyyadsvkg(seq id no：206)，hc-cdr3：vygyglhyygmdv(seq id no：242)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，lc-cdr3：mqgthwpgt(seq id no：180)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syaih(seq id no：241)，hc-cdr2：aissnggstyyadsvkg(seq id no：206)，hc-cdr3：vygyglhyygmdv(seq id no：242)。
[0134]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链
可变区：lc-cdr1：rasrsvgkyla(seq id no：247)，lc-cdr2：dastras(seq id no：248)，lc-cdr3：qhygtsppfi(seq id no：249)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syais(seq id no：148)，hc-cdr2：giipifgtanyaqkfqg(seq id no：149)，hc-cdr3：sydssgyyyfdy(seq id no：250)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rasrsvgkyla(seq id no：247)，lc-cdr2：dastras(seq id no：248)，lc-cdr3：qhygtsppfi(seq id no：249)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syais(seq id no：148)，hc-cdr2：giipifgtany aqkfqg(seq id no：149)，hc-cdr3：sydssgyyyfdy(seq id no：250)。
[0135]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：glssgsvsttyyps(seq id no：255)，lc-cdr2：stntrss(seq id no：33)，lc-cdr3：vlymgngisv(seq id no：256)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sssyywg(seq id no：24)，hc-cdr2：siyysgstyynpslks(seq id no：25)，hc-cdr3：yapdssgylvafdi(seq id no：26)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：glssgsvsttyyps(seq id no：255)，lc-cdr2：stntrss(seq id no：33)，lc-cdr3：vlymgngisv(seq id no：256)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sssyywg(seq id no：24)，hc-cdr2：siyysgstyynpslks(seq id no：25)，hc-cdr3：yapdssgylvafdi(seq id no：26)。
[0136]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：tlrsginvgtyriy(seq id no：261)，lc-cdr2：yksdsdkqqgs(seq id no：262)，lc-cdr3：miwhssawv(seq id no：263)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sygmh(seq id no：77)，hc-cdr2：viwydgsnkyyadsvkg(seq id no：264)，hc-cdr3：mttedy(seq id no：265)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：lc-cdr1：tlrsginvgtyriy(seq id no：261)，lc-cdr2：yksdsdkqqgs(seq id no：262)，lc-cdr3：miwhssawv(seq id no：263)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：sygmh(seq id no：77)，hc-cdr2：viwydgsnkyyadsvkg(seq id no：264)，hc-cdr3：mttedy(seq id no：265)。
[0137]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rasqsvssyla(seq id no：270)，lc-cdr2：dasnrat(seq id no：271)，lc-cdr3：qqrsnwplt(seq id no：272)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syams(seq id no：131)，hc-cdr2：sisssssyiyyadsvkg(seq id no：273)，hc-cdr3：dgsawsrpy(seq id no：274)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rasqsvssyla(seq id no：270)，lc-cdr2：dasnrat(seq id no：271)，lc-cdr3：qqrsnwplt(seq id no：272)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syams(seq id no：131)，hc-cdr2：sisssssyiyyadsvkg(seq id no：273)，hc-cdr3：dgsawsrpy(seq id no：274)。
[0138]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：gltsgavsssyyps(seq id no：279)，lc-cdr2：ntdirfs(seq id no：280)，lc-cdr3：vlymgsgisv(seq id no：23)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：dyyih(seq id no：281)，hc-cdr2：wvsayngdtnyaqkfqg(seq id no：282)，hc-cdr3：eiasysgsyydy(seq id no：20)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：gltsgavsssyyps(seq id no：279)，lc-cdr2：ntdirfs(seq id no：280)，lc-cdr3：vlymgsgisv(seq id no：23)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：dyyih(seq id no：281)，hc-cdr2：wvsayngdtnyaqkfqg(seq id no：282)，hc-cdr3：eiasysgsyydy(seq id no：20)。
[0139]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：tgnnnnvgfagaa(seq id no：287)，lc-cdr2：rnndrps(seq id no：288)，lc-cdr3：sawdsslkvqv(seq id no：289)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syais(seq id no：148)，hc-cdr2：giipifgtanyaqkfqg(seq id no：149)，hc-cdr3：gadwnsdy(seq id no：290)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：tgnnnnvgfagaa(seq id no：287)，lc-cdr2：rnndrps(seq id no：288)，lc-cdr3：sawdsslkvqv(seq id no：289)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syais(seq id no：148)，hc-cdr2：giipifgtanyaqkfqg(seq id no：149)，hc-cdr3：gadwnsdy(seq id no：290)。
[0140]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，lc-cdr2：lgsnrap(seq id no：155)，lc-cdr3：mqgthwplt(seq id no：95)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：sygsgsyrshafdi(seq id no：156)。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：lc-cdr1：rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，lc-cdr2：lgsnrap(seq id no：155)，lc-cdr3：mqgthwplt(seq id no：95)，并具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：hc-cdr1：syamh(seq id no：96)，hc-cdr2：visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，hc-cdr3：sygsgsyrshafdi(seq id no：156)。
[0141]
本发明的另一方面，提供了任选分离的能够结合her2的抗体、抗原结合片段或多肽，其包含重链和轻链可变区序列，其中：
[0142]
轻链序列与seq id no：72、82、91、100、108、118、128、136、144、153、159、168、178、184、192、202、209、215、224、231、239、245、253、259、268，277、285或293的轻链序列具有至少85％的序列同一性，以及；
[0143]
重链序列与seq id no：73、83、92、101、109、119、129、137、145、154、160、169、179、185、193、203、210、216、225、232、240、246、254、260、269、278、286或294的重链序列具有至少85％的序列同一性。
[0144]
在一些实施方式中，序列同一性的程度可以是86％、87％、88％、89％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一。
[0145]
在一些实施方式中，提供了包含以下cdr的分离的轻链可变区多肽：
[0146]
lc-cdr1：rssqsllhsngfnyld(seq id no：74)，rssqsllhsdgnkyld(seq id no：84)，rssqslvysdgntyln(seq id no：93)，rssqsllhsngynyld(seq id no：102)，rssqsllhsngntyld(seq id no：110)，rasqsvrnnla(seq id no：120)，gsttgavtsghyps(seq id no：138)，rasqsvsssyla(seq id no：161)，rssqslqhsngyqyld(seq id no：170)，tgrsaiggfdvq(seq id no：186)，altsgsvstsyyps(seq id no：186)no：194)，tssqslvysdgntyln(seq id no：211)，rssqsllrsdgynfvd(seq id no：217)，rasqgisswla(seq id no：226)，rassrvgkyla(seq id no：247)，glssgsvsttyyps(seq id no：255)，tlrsginvgtyriy(seq id no：261)，rasqsvssyla(seq id no：270)，gltsgavsssyyps(seq id no：279)或tgnnnnvgfagaa(seq id no：287)之一；
[0147]
lc-cdr2：lgsnras(seq id no：75)，kvsnrds(seq id no：94)，sgsnras(seq id no：111)，yastrat(seq id no：121)，stsnkhs(seq id no：139)，lgshras(seq id no：146)，lgsnrap(seq id no：155)，gassrat(seq id no：162)，lgsfras(seq id no：：171)，dnsnrps(seq id no：187)，stnlrss(seq id no：195)，kvsdrds(seq id no：204)，kvskrds(seq id no：212)，lgsdras(seq id no：218)，aasslqs(seq id no：227)，yksdsdkqqgsgs(seq id no：262)，dastras(seq id no：248)，stntrss(seq id no：33)，dasnrat(seq id no：271)，ntdirfs(seq id no：no：280)或rnndrps(seq id no：288)之一；
[0148]
lc-cdr3：mqglqtpyt(seq id no：76)，mlgthwppmyi(seq id no：85)，mqgthwplt(seq id no：95)，mqalqtpwt(seq id no：103)，mqgthwppt(seq id no：112)，qhygssrt(seq id no：122)，maglqtprlt(seq id no：130)，llyyggarv(seq id no：140)，mqalqtplt(seq id no：147)，qqygssprt(seq id no：163)，mhalstppwt(seq id no：163)no：172)，mqgthwpgt(seq id no：180)，gtwdsylniwv(seq id no：188)，elymgsgisv(seq id no：196)，mqgthwpqt(seq id no：205)，mqalqtprt(seq id no：219)，qqansfppt(seq id no：228)，qqygsssa(seq id no：233)，miwhssawv(seq id no：263)，qhygtsppfi(seq id no：249)，vlymgngisv(seq id no：256)，qqrsnwplt(seq id no：272)，vlymgsgisv(seq id no：23)或sawdsslkvqv(seq id no：289)之一。
[0149]
在一些实施方式中，提供了包含以下cdr的分离的重链可变区多肽：
[0150]
hc-cdr1：sygmh(seq id no：77)，saaaawn(seq id no：86)，syamh(seq id no：96)，sfamn(seq id no：113)，sygis(seq id no：123)，syams(seq id no：131)，syais(seq id no：148)，tytmh(seq id no：173)，gyyws(seq id no：30)，sywig(seq id no：197)，nygmh(seq id no：234)，syaih(seq id no：241)，sssyywg(seq id no：24)或dyyih(seq id no：281)之一；
[0151]
visydgsnkyyadsvkg(seq id no：78)，rtyyrskwyseyavsvks(seq id no：87)，winagngntkysqkfqg(seq id no：104)，tiggsgdstfyadpvkg(seq id no：114)，wisayngntnyaqklqg(seq id no：124)，aisgsggggyy(seq id no：132)，gi ipifgtanyaqkfqg(seq id no：149)，ginwnggstgyadsvkg(seq id no：164)，witpgngnthysqnfqg(seq id no：174)，einhsgstnynpslks(seq id no：31)，iiypgdsdtryspsfqg(seq id no：198)，aissnggstyyadsvkg(seq id no：206)，
visydesnkyyadsvkg(seq id no：220)，fisydgtnkyyadsvkg(seq id no：235)，siyysgstyynpslks(seq id no：25)，viwydgsnkyyadsvkg(seq id no：264)，sisssssyiyyadsvkg(seq id no：264)no：273)或wvsayngdtnyaqkfqg(seq id no：282)之一；
[0152]
hc-cdr3：dlfavvgyyyyygmdv(seq id no：79)，gsifdv(seq id no：88)，srgyygmdv(seq id no：97)，ggylvgy(seq id no：105)，aygsgghyffay(seq id no：115)，dwgsswsdy(seq id no：125)，tyydfwsgrvgafdi(seq id no：133)，drgyygmdv(seq id no：141)，grgsgypdtwfwfdp(seq id no：150)，sygsgsyrshafdi(seq id no：156)，glvpaasmdv(seq id no：156)no：165)，srvgaldy(seq id no：175)，srgysgydn(seq id no：181)，glpyyyfdy(seq id no：189)，lgygvplpeyfdl(seq id no：199)，epsgswsylyyyyygmdv(seq id no：221)，hygdyyyyygmdv(seq id no：236)，vygyglhyygmdv(seq id no：242)，sydssgyyyfdy(seq id no：250)，yapdssgylvafdi(seq id no：26)，mttedy(seq id no：265)，dgsawsrpy(seq id no：274)，eiasysgsyydy(seq id no：20)或gadwnsdy(seq id no：290)之一。
[0153]
在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽包含本文所述的任意6个cdr序列。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽包含本文所述的任意3个轻链(“lc”)cdr序列和/或本文所述的任意3个重链(“hc”)cdr序列。
[0154]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含根据下式的cdr之间的可变区轻链框架序列：lcfr1-cdr1-lcfr2-cdr2-lcfr3-cdr3-lcfr4。所述框架序列可以源自人共有框架序列。
[0155]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽还包含根据下式的cdr之间的可变区重链框架序列：hcfr1-cdr1-hcfr2-cdr2-hcfr3-cdr3-hcfr4。所述框架序列可以源自人共有框架序列。
[0156]
在一些实施方式中，抗体、抗体结合片段或多肽可进一步包含人恒定区。例如选自igg1、igg2、igg3和igg4之一。
[0157]
在一些实施方式中，抗体、抗体结合片段或多肽可进一步包含鼠恒定区。例如，选自igg1、igg2a、igg2b和igg3之一。
[0158]
在本发明的另一方面，提供了与药物部分或可检测部分缀合的抗体、抗原结合片段或多肽。所述药物部分可以是抗癌药物部分。
[0159]
在本发明的另一方面，提供了一种组合物。所述组合物可以是例如药物组合物或药物。所述组合物可包含本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽。所述组合物可以包含本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽，以及至少一种药学上可接受的运载体、赋形剂、佐剂或稀释剂。所述组合物可包含本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽和至少一种抗癌剂，任选地与至少一种药学上可接受的运载体、赋形剂、佐剂或稀释剂结合。
[0160]
在本发明的另一方面，提供了一种体外复合物，其包含如本文所述的与her2结合的抗体、抗原结合片段或多肽。所述体外复合物可以被分离。
[0161]
在本发明的任一方面，本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽可通过细胞膜破坏诱导细胞死亡。在本发明的任一方面，本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽可通过凋亡诱导细胞死亡。凋亡过程可以通过胱冬酶(caspase)3/7途径进行，并且任选地涉及parp切割。本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽可诱导胱冬酶3/7的活化并触发parp切割。由细胞膜
破坏或凋亡引起的细胞死亡可通过本文所述的抗体、抗原结合片段或与her2结合的多肽诱导。
[0162]
在本发明的另一方面，提供了编码本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽的核酸，该核酸是任选分离的。所述核酸可包含seq id no：38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68或69中的一个或多个序列，或由于遗传密码简并的编码序列，或可能与其具有至少70％，可选地为75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的同一性的核苷酸序列。所述核酸可包含seq id no：70、71、80、81、89、90、98、99、106、107、116、117、126、127、134、135、142、143、151、152、157、158、166、167、176、177、182、183、190、191、200、201、207、208、213、214、222、223、229、230、237、238、243、244、251、252、257、258、266、267、275、276、283、284、291或292中的一个或多个序列，或由于遗传密码简并的编码序列，或可能与其具有至少70％，可选地为75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的同一性的核苷酸序列。由于遗传密码而简并的编码序列是指通过遗传密码的冗余编码等效多肽序列的编码序列。
[0163]
在本发明的一个方面，提供了一种载体，其包含本文所述的核酸。在本发明的另一方面，提供了一种包含载体的细胞。例如，所述细胞可以是真核的，或者是哺乳动物的，例如人类或非人类的中国仓鼠卵巢(cho)细胞，也可以是原核细胞，例如大肠杆菌(e.coli)。
[0164]
在本发明的一个方面，提供了制备本文所述的抗体或抗原结合片段或多肽的方法，所述方法包括在适于表达来自本文描述的核酸或载体的抗体或抗原结合片段或多肽的条件下培养本文所述的细胞。
[0165]
在本发明的另一方面，提供了本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、细胞或组合物，用于治疗或医学治疗方法。本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、细胞或组合物可用于医学治疗或预防方法。
[0166]
在本发明的另一方面，提供了抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、细胞或组合物，用于治疗癌症，例如，提供了用于治疗或预防癌症的方法。在一些实施方式中，所述癌症是her2阳性(her2+)癌症。在一些实施方式中，所述癌症包括her2阳性肿瘤细胞。在一些实施方式中，所述癌症包括her2阳性肿瘤。在一些实施方式中，所述治疗包括与治疗剂组合施用抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。在一些实施方式中，所述治疗剂是抗癌剂。在一些实施方式中，所述治疗剂是抗her2抗体。在一些实施方式中，所述治疗剂可以是曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。
[0167]
在本发明的另一方面，提供了本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方式中，所述癌症是her2阳性(her2+)癌症。在一些实施方式中，所述癌症包括her2阳性肿瘤细胞。在一些实施方式中，所述癌症包括her2阳性肿瘤。
[0168]
在本发明的另一方面，提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括将本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物施用于患有癌症的患者。在一些实施方式中，所述癌症是her2阳性(her2+)癌症。在一些实施方式中，所述癌症包括her2阳性肿瘤细胞。在一些实施方式中，所述癌症包括her2阳性肿瘤。在一些实施方式中，所述方法包括与治疗剂组合施
用抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。在一些实施方式中，所述治疗剂是抗癌剂。在一些实施方式中，所述治疗剂是靶向her2的制剂。在一些实施方式中，所述治疗剂是抗her2抗体。在一些实施方式中，所述治疗剂可以是曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。
[0169]
在本发明的另一方面，提供了一种抑制肿瘤细胞生长的方法，其包括向所述细胞施用如本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。所述方法可以是体外的或体内的。在一些实施方式中，提供了抑制受试者体内肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。还提供了本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物，用于抑制受试者体内肿瘤细胞生长的方法。在一些实施方式中，抑制肿瘤细胞生长的方法包括与本文所述的治疗剂组合施用抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。
[0170]
还提供了一种杀伤肿瘤细胞的方法，所述方法包括向细胞施用本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。所述方法可以在体外或体内进行。在一些实施方式中，提供了一种杀伤受试者体内的肿瘤细胞的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。在一些实施方式中，所述杀伤肿瘤细胞的方法包括与本文所述的治疗剂组合施用抗体、抗原结合片段、多肽或组合物。肿瘤细胞的杀伤可能是例如膜破裂、细胞裂解、诱导凋亡、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、补体依赖性细胞毒性(cdc)，或者通过与抗体、抗原结合片段或多肽结合的药物的作用。还提供了如本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽或组合物，用于杀伤例如在受试者体内肿瘤细胞的方法。
[0171]
在本发明的另一方面，提供了一种方法，所述方法包括使含有或怀疑含有her2的样品与本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽接触，并检测抗体、抗原结合片段或多肽与her2复合物的形成。
[0172]
在本发明的另一方面，提供了一种诊断受试者的疾病或病状的方法，所述方法包括将来自受试者的样品与本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽体外接触，以及检测抗体、抗原结合片段或多肽与her2复合物的形成。
[0173]
在本发明的另一方面，提供了一种选择或分层用于her2靶向药物治疗的受试者的方法，所述方法包括将来自受试者的样品与抗体、抗原结合片段或多肽体外接触，以及检测抗体、抗原结合片段或多肽与her2复合物的形成。
[0174]
在本发明的另一方面，提供了本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽在体外检测her2中的用途。在本发明的另一方面，提供了如本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽作为体外诊断剂的用途。
[0175]
在本发明的方法中，抗体、抗原结合片段或多肽可以作为本文所述的组合物提供。
[0176]
本发明还提供了包含根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽的嵌合抗原受体(car)。
[0177]
本发明还提供了一种任选分离的体外复合物，其包含一种根据本发明的与her2结合的car。
[0178]
本发明还提供了一种任选分离的编码根据本发明的car的核酸。
[0179]
本发明还提供了一种包含根据本发明的核酸的表达载体。
[0180]
本发明还提供了一种包含根据本发明的car、核酸或表达载体的细胞。
[0181]
本发明还提供了一种包含根据本发明的car、核酸、表达载体或细胞的组合物。
[0182]
本发明还提供了一种根据本发明的car、核酸、表达载体、细胞或组合物，用于医学治疗或预防方法。本发明还提供了一种根据本发明的car、核酸、表达载体、细胞或组合物，用于治疗或预防癌症的方法。
[0183]
在任一方面或实施方式中，所述抗体可以是本文所述的克隆p1a3、p1c5、p1e4或p1f1。在任一方面或实施方式中，所述抗体可以是本文所述的克隆pfa4、pfb4、pfb5、pfc3、pfd4、pfe1、pff5或pfg3。在任一方面或实施方式中，所述抗体可以是本文所述的克隆pfa1、pfa2、pfa5、pfb1、pfb2、pfb3、pfc2、pfc4、pfd1、pfd2、pfd3、pfe2、pfe5、pff2、pff3、pff4、pfg1、pfg2、pfg4或pfg5。
[0184]
说明
[0185]
抗体和抗原结合分子
[0186]
本发明提供了能够结合her2的抗体和抗原结合分子。
[0187]
根据本发明的抗体优选结合her2(抗原)，优选人或鼠her2，任选地k d
值为4至23nm。
[0188]
根据本发明的抗体可以分离的形式提供。可以以基本上纯化的形式提供抗体。
[0189]
根据本发明的抗体可以表现出以下至少一种特性：
[0190]
a)与人her2结合的k
d
值等于或小于1μm，优选地≤100nm、≤75nm、≤50nm、≤40nm、≤30nm、≤20nm、≤15nm、≤12.5nm、≤10nm、≤9nm、≤8nm、≤7nm、≤6nm、≤5nm、≤4nm、≤3nm、≤2nm、≤1nm、≤500pm(例如由spr确定)；
[0191]
b)与过表达her2的细胞或表达her2的细胞结合，任选不与her2阴性细胞结合；
[0192]
c)与her2(可选地是人her2)的一个抗原决定簇结合，该抗原决定簇与曲妥珠单抗结合的her2抗原决定簇不同；
[0193]
d)诱导表达her2的细胞死亡，可选地通过破坏细胞膜来进行；
[0194]
e)通过凋亡，可选地通过胱冬酶3/7途径激活和切割的parp激活，诱导表达her2的细胞死亡；
[0195]
f)在应用后40分钟内诱导表达her2的细胞死亡；
[0196]
g)可选地在体内抑制肿瘤生长；
[0197]
h)与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗组合使用时，可选地在体内显示出对抑制肿瘤生长的协同作用。
[0198]
关于“抗体”，此处包括其片段或衍生物，或合成抗体或合成抗体片段。其片段和衍生物可以被称为“抗原结合分子”或“抗原结合片段”。
[0199]“抗体”或“抗原结合分子”是指能够结合靶抗原的分子，并且包括单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段(例如，fv、scfv、fab、scfab、f(ab')2、fab2、双抗体、三抗体、scfv-fc、小抗体、单域抗体(例如vhh)等)，只要它们表现出与相关靶分子的结合即可。本发明的抗体/抗原结合分子包含能够结合靶抗原的部分。在一些实施方式中，能够结合靶抗原的部分包含能够特异性结合靶抗原的抗体的抗体重链可变区(vh)和抗体轻链可变区(vl)。在一些实施方式中，能够结合靶抗原的部分包含能结合靶抗原的适配体或由适配体组成，所述适配体能够结合靶抗原，例如核酸适体(例如zhou和rossi在nat rev drug discov，201716(3):181-202中所综述)。在一些实施方
[lc-cdr2]-[lc-fr3]-[lc-cdr3]-[lc-fr4]-c端。
[0209]
定义抗体cdr和fr有几种不同的惯例，例如kabat等人在《免疫学意义的蛋白质序列(第5版)》(马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院公共卫生服务出版社于1991年出版)；chothia等人，j.mol.biol.196：901-917(1987)中描述的惯例，vbase2参见retter等人，nucl.acids res.(2005)33(增刊1)：d671-d674；和国际imgt(immunogenetics)信息系统(lefranc等人，nucleic acids res.(2015)43(数据库问题)：d413-22)，它使用imgt v-domain编号规则，如lefranc等人在dev.comp.immunol.(2003)27:55-77。comp.immunol.(2003)27:55-77中所述。
[0210]
在一些实施方式中，抗体/抗原结合分子包含能够结合her2的抗原结合分子的cdr。在一些实施方式中，抗体/抗原结合分子包含能够结合her2的抗原结合分子的fr。在一些实施方式中，抗原结合分子包含能够结合her2的抗原结合分子的cdr和fr。即，在一些实施方式中，抗原结合分子包含能够结合her2的抗原结合分子的vh区和vl区。
[0211]
抗体可以经亲和力成熟的过程产生，其中与未修饰的亲本抗体相比，产生的修饰的抗体对抗原的亲和力有所改善。亲和力成熟的抗体可以通过本领域已知的方法产生，例如，marks等人，rio/technology，10：779-783(1992)；和barbas等人，proc nat.acad.sci.usa 91:3809-3813(1994)；schier等人，gene 169:147-155(1995)；yelton等人，j.immunol.155：1994-2004(1995)；jackson等人，immunol.154(7)：331 0-159(1995)；和hawkins等人，j.mol.biol.889-896(1992)。根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽可以经历亲和力成熟。
[0212]
根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选地表现出与her2的特异性结合。特异性与靶分子结合的抗体、抗原结合片段或多肽优选地与靶分子结合的亲和力和/或持续时间大于与其他靶分子结合的时间。
[0213]
本发明的抗体、抗原结合片段或多肽与给定分子的结合可以通过本领域技术人员众所熟知的技术来测量，包括酶联免疫吸附测定(elisa)、表面等离振子共振(spr)(参见例如hearty等，methods mol biol(2012)907：411-442)、生物层干涉法(bio-layer interferometry)(参见例如lad等人，(2015)j biomol screen 20(4)：498-507)、流式细胞仪或放射免疫法(ria)酶联免疫吸附法。通过这种分析，可以测量和定量与给定靶标的结合。在一些实施方式中，结合可以是在给定测定中检测到的应答。抗体与其靶标的结合亲和力通常以其解离常数(k
d
)来描述。
[0214]
抗体与无关靶标的结合程度可以小于抗体与靶标的结合程度的约10％，如通过elisa、spr、生物层干涉或ria所测量。可选地，结合特异性可以反映为结合亲和力，其中本发明的抗her2抗体以至少0.1个数量级(即0.1
×
10
n
,其中n是一个整数代表数量级)的k
d
值结合至her2，大于抗体针对另一个靶分子的k
d
值。这可以选自至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0之一。
[0215]
根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选具有≤25nm、≤20nm、≤15nm、≤10nm、≤5nm、≤3nm、≤2nm、≤1.5nm、≤1.4nm、≤1.3nm、≤1.25nm、≤1.24nm、≤1.23nm、≤1.22nm、≤1.21nm、≤1.2nm、≤1.15nm、≤1.1nm、≤1.05nm、≤1nm、≤900pm、≤800pm、≤700pm、≤600pm或≤500pm之一的解离常数(k
d
)，根据spr、生物层干涉法或ria通过分析确定。k
d
可以在约0.1至约3nm的范围内。k
d
可以在约0.1至约10nm的范围内。k
d
可以在约0.1至
约15nm的范围内。k
d
可以在约0.1至约25nm的范围内。k
d
可以在约1至约100nm的范围内。k
d
可以在约50至约500nm的范围内。
[0216]
根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽可以表现出对her2的高结合亲和力。在一些实施方式中，根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽具有4至25nm的解离常数(k
d
)。根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽可表现出对her2的中等或低结合亲和力。在一些实施方式中，根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽具有12至350nm的解离常数(k
d
)。在一些实施方式中，根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽具有14至310nm的解离常数(k
d
)。在一些实施方式中，根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽具有25至310nm的解离常数(k
d
)。在一些实施方式中，根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽具有150至310nm的解离常数(k
d
)。
[0217]
本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选地结合至her2过表达或her2表达的细胞。抗体、抗原结合片段或多肽可优选地结合至her2过表达细胞。优选地，本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽不与her2阴性细胞，即不表达her2的细胞结合。
[0218]
本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选地结合与曲妥珠单抗本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选地结合与曲妥珠单抗结合的不同her2表位。据报道，曲妥珠单抗结合在her2细胞外结构域的iv亚结构域的c-末端部分(cho等人，(2003)nature 421：756-760)。表位结合测定可以通过本领域已知的方法进行，例如通过本文所述的spr进行(参见例如hearty等，methods mol biol(2012)907：411-442)。简而言之，将感兴趣的抗体固定在spr微芯片上，将重组her-2应用于结合在固定的抗体上，然后将其他感兴趣的抗体释放并测量它们的结合。如本文所述，树状图追溯可以鉴定目标抗体是否与曲妥珠单抗共享共同的表位(相似的结合谱)，或是与不同的表位结合(不同的结合谱)。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选地结合与不同于帕妥珠单抗(perjeta)结合的her2表位。
[0219]
本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选地诱导表达her2的细胞的细胞死亡。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽通过破坏细胞膜来诱导细胞死亡。可以使用本领域所熟知的和本文描述的方法来测量细胞死亡，例如通过碘化丙啶染色。碘化丙啶插入细胞则表示细胞裂解。
[0220]
在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽通过凋亡诱导表达her2的细胞的细胞死亡。可以使用本领域所熟知的和本文描述的方法来测量细胞凋亡，例如通过用膜联蛋白-v和碘化丙啶染色。被膜联蛋白-v染色的细胞是凋亡细胞。
[0221]
胱冬酶3/7途径参与凋亡过程。胱冬酶3/7活化后，激活细胞核中切割的parp，进而触发了线粒体释放促凋亡因子，并阻断了dna修复过程。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽通过胱冬酶3/7途径激活和切割的parp激活，通过凋亡诱导her2表达细胞的细胞死亡。胱冬酶3/7途径激活和parp切割可以使用本领域众所熟知的方法来测量。
[0222]
在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽在施用后40分钟内诱导表达her2的细胞的细胞死亡。诱导的细胞死亡可以通过碘化丙锭的摄取来测量。
[0223]
本发明的抗体、抗原结合片段或多肽优选抑制肿瘤生长。在一些实施方式中，肿瘤生长的抑制是体内的。肿瘤生长可以通过本领域众所熟知和本文所述的方法测量，例如使用细胞增殖测定法来测量。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽显示出对抑制肿瘤生长的协同作用。在一些实施方式中，当与曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗组合使
用时，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽显示出对抑制肿瘤生长的协同作用。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽能够以与曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗诱导相似的效率诱导表达her2的细胞死亡。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽能够以比曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗诱导的效率增加的效率诱导表达her2的细胞死亡。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽能够诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)或补体依赖性细胞毒性(cdc)，例如通过promega cytotox 96非放射性的细胞毒性测定试剂盒测量ldh释放。
[0224]
在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽能够减小肿瘤大小，例如，与未用本发明的抗体、抗原结合片段或多肽治疗的肿瘤的大小相比。
[0225]
在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或多肽能够在给予抗体、抗原结合片段或多肽后赋予针对癌症、癌细胞、肿瘤和/或肿瘤细胞的长期保护。所赋予的保护可以比本领域中已知的其他her2疗法更长，例如曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。
[0226]
本发明提供了抗原结合多肽。在本发明的各个方面，抗原结合多肽能够结合her2。所述多肽可以分离或基本上以纯化的形式提供。
[0227]“抗原结合多肽”是指能够与靶分子结合的多肽，并且包括单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们显示出与相关靶分子结合即可。本文所用的抗原结合多肽还指一种以上多肽(例如2、3、4、6或8个多肽)的非共价或共价复合物，例如包含两个重链多肽和两个轻链多肽的双特异性抗原结合多肽。
[0228]
本文所述的抗原结合多肽优选地显示出与相关靶标(例如her2)的特异性结合。如本文所用，“特异性结合”是指对抗原具有选择性的结合，并且可以与对非靶标抗原的非特异性结合区分开。特异性结合靶分子的抗原结合多肽优选地以比其结合其他非靶分子更大的亲和力和/或更长的持续时间结合靶分子。
[0229]
在一些实施方式中，与能够与靶分子(即her2)结合的参比抗原结合多肽相比，抗原结合多肽与靶分子的相同表位或重叠表位结合。在一些实施方式中，抗原结合多肽显示与参比抗原结合多肽的竞争性结合，该参比抗原结合多肽能够结合靶分子。给定的抗原结合多肽是否显示出这种竞争性结合可以通过技术人员已知的各种方法来确定，包括竞争性elisa。
[0230]
在一些实施方式中，抗原结合多肽包含能够结合靶分子(即her2)的抗原结合多肽的互补决定区(cdr)。抗体通常包含六个cdr；三个在轻链可变(lh)区中：lc-cdr1、lc-cdr2、lc-cdr3，以及三个在重链可变区(vh)中：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3。六个cdr共同定义了抗体的互补位，它是抗体与靶分子结合的部分。定义抗体cdr有几种不同的惯例，例如kabat等人在《免疫学意义的蛋白质序列(第5版)》(马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院公共卫生服务出版社于1991年出版)，chothia等人，j.mol.biol.196：901-917(1987)中描述的惯例，和vbase2，如retter等人，nucl.acids res.(2005)33(增刊1)：d671-d674中所述。除非另有说明，否则本文描述的抗原结合多肽的cdr是根据kabat等人在《免疫学意义的蛋白质序列(第5版)》(马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院公共卫生服务出版社于1991年出版)中所定义。
[0231]
在本说明书中，多肽包含一个以上结构域或区域，应理解为多个结构域/区域优选地存在于同一多肽链中。也就是说，所述多肽包含一个以上的结构域或区域是包含该结构
域/区域的融合多肽。
[0232]
可以使用能够结合her2的单克隆抗体(mab)的序列设计和制备抗原结合多肽。也可以使用/提供抗体的抗原结合区，例如单链可变片段(scfv)、fab和fab2片段。“抗原结合区”是指能够与给定抗体特异的靶标结合的抗体的任何片段。
[0233]
在一些实施方式中，本发明的抗原结合多肽是her2结合多肽。在一些实施方式中，抗原结合多肽包含或由her2结合多肽组成。在一些实施方式中，抗原结合多肽包含重链可变(vh)区，其包含本文所述的her2结合抗体克隆的hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2、hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。在一些实施方式中，抗原结合多肽包含轻链可变区(vl)，其包含本文所述的her2结合抗体克隆的lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2、lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。在一些实施方式中，抗原结合多肽包含本文所述的her2结合抗体克隆的包含hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3的vh区和包含lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3的vl区，或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2、hc-cdr3、lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0234]
在一些实施方式中，抗原结合多肽包含vh区，该vh区包含氨基酸序列或由其组成，所述氨基酸序列与本文所述her2结合抗体克隆的vh区具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。在一些实施方式中，抗原结合多肽包含vl区，该vl区包含氨基酸序列或由其组成，所述氨基酸序列与本文所述her2结合抗体克隆的vl区具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。在一些实施方式中，抗原结合多肽包含vh区，该vh区包含氨基酸序列或由其组成，所述氨基酸序列与本文所述her2结合抗体克隆的vh区具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性；和一vl区包含氨基酸序列或由其组成，所述氨基酸序列与本文所述her2结合抗体克隆的vl区具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。
[0235]
在一些实施方式中，抗原结合多肽可以包含参比vl/vh区的变体，例如相对于参比vl/vh区的氨基酸序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代。在一些实施方式中，所述取代不在cdr中。在一些实施方式中，所述取代是在框架区中，即除cdr之外的vl/vh区的氨基酸序列。
[0236]
在一些实施方式中，所述取代是保守的取代，例如根据下表的取代。在一些实施方式中，在中间列中的同一区块中的氨基酸被取代。在一些实施方式中，最右边一栏中同一行中的氨基酸被取代：
[0237][0238]
在一些实施方式中，根据本发明的her2结合性抗原结合多肽包含或由一氨基酸序列组成：所述氨基酸序列与seq id no：1到4之一具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。在一些实施方式中，根据本发明的her2结合抗原结合多肽包含或由一氨基酸序列组成：所述氨基酸序列与seq id no：5到8之一具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。
[0239]
在一些实施方式中，根据本发明的her2结合性抗原结合多肽包含或由一氨基酸序列组成：所述氨基酸序列与seq id no：72、82、91、100、108、118、128、136、144、153、159、168、178、184、192、202、209、215、224、231、239、245、253、259、268，277、285或293之一具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。在一些实施方式中，根据本发明的her2结合性抗原结合多肽包含或由一氨基酸序列组成：氨基酸序列与seq id no：73、83、92、101、109、119、129、137、145、154、160、169、179、185、193、203、210、216、225、232、240、246、254、260、269、269，278、286或294之一具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性。
[0240]
在一些实施方式中，根据本发明的结合her2的抗原结合多肽缺乏以下一个或多个克隆的hc-cdr1、hc-cdr2、hc-cdr3、lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3：p1a3、p1c5、p1e4和p1f1。在一些实施方式中，根据本发明的her2结合抗原结合多肽缺乏一个或多个所述克隆的vl结构域序列和/或vh结构域序列。
[0241]
抗体的抗原结合区的vl和vh区共同构成fv区。在一些实施方式中，根据本发明的抗原结合多肽包含与her2结合的fv区或由其组成。
[0242]
在一些实施方式中，所述多肽还包含一个或多个抗体重链恒定区(ch)。在一些实施方式中，所述多肽还包含一个或多个抗体轻链恒定区(cl)。在一些实施方式中，所述多肽包含免疫球蛋白(ig)的ch1、ch2区和/或ch3区。
[0243]
抗体的抗原结合区的vl和轻链恒定(cl)区，以及vh区和重链恒定1(ch1)区共同构成fab区。在一些实施方式中，本文所述的抗原结合多肽的抗原结合多肽包含与her2结合的fab区或由其组成。
[0244]
在一些实施方式中，所述多肽包含免疫球蛋白重链恒定序列中的一个或多个区域。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的ch1区。在一些实施方式中，所述多肽包
含如本文所述的ch1-ch2铰链区。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的ch2区。在一些实施方式中，所述多肽包含如本文所述的ch3区。
[0245]
在一些实施方式中，所述多肽缺乏免疫球蛋白重链恒定序列中的一个或多个区域。在一些实施方式中，所述多肽缺乏ch2区。在一些实施方式中，所述多肽缺乏ch3区。在一些实施方式中，所述多肽缺少ch2区域，也缺少ch3区域。
[0246]
在一些实施方式中，根据本发明的多肽从n末端到c末端包含以下之一的结构：
[0247]
(i)vh
[0248]
(ii)vl
[0249]
(iii)vh-ch1
[0250]
(iv)vl-cl
[0251]
(v)vl-ch1
[0252]
(vi)vh-cl
[0253]
(vii)vh-ch1-ch2-ch3
[0254]
(viii)vl-cl-ch2-ch3
[0255]
(ix)vl-ch1-ch2-ch3
[0256]
(x)vh-cl-ch2-ch3
[0257]
本发明还提供了由本发明的多肽组成的抗体和抗原结合分子。在一些实施方式中，本发明的抗体/抗原结合分子包含以下多肽组合之一：
[0258]
(a)vh+vl
[0259]
(b)vh-ch1+vl-cl
[0260]
(c)vl-ch1+vh-cl
[0261]
(d)vh-ch1-ch2-ch3+vl-cl
[0262]
(e)vh-cl-ch2-ch3+vl-ch1
[0263]
(f)vl-ch1-ch2-ch3+vh-cl
[0264]
(g)vl-cl-ch2-ch3+vh-ch1
[0265]
(h)vh-ch1-ch2-ch3+vl-cl-ch2-ch3
[0266]
(i)vh-cl-ch2-ch3+vl-ch1-ch2-ch3
[0267]
在一些实施方式中，抗原结合分子包含以上(a)至(i)中所示的组合的多肽中的一种以上。举例来说，参考上文(d)，在一些实施方式中，所述抗原结合分子包含两个包含vh-ch1-ch2-ch3结构的多肽，和两个包含vl-cl结构的多肽。
[0268]
在一些实施方式中，本文所述的抗原结合多肽包含与her2结合的完整抗体或由其组成。如本文所用，“完整抗体”是指具有与免疫球蛋白(ig)的结构基本相似的结构的抗体。例如，在schroeder和cavacini的j allergy clin immunol.(2010)125(202):s41-s52中描述了不同种类的免疫球蛋白及其结构，其通过引用整体并入本文。
[0269]
g型免疫球蛋白(即igg)是约150kda的糖蛋白，包含两条重链和两条轻链。从n末端到c末端，重链包含vh，其后是包含三个恒定结构域(ch1、ch2和ch3)的重链恒定区，类似地，轻链包含vl，其后是cl。根据重链，免疫球蛋白可以分为igg(例如igg1、igg2、igg3、igg4)，iga(例如iga1、iga2)，igd，ige或igm。轻链可以是κ(κ)或λ(λ)。
[0270]
在一些实施方式中，本文所述的抗原结合多肽包含与her2结合的igg(例如igg1、
igg2、igg3、igg4)，iga(例如iga1、iga2)、igd、ige或igm，或由其组成。
[0271]
本发明的抗原结合多肽可以以任何合适的形式提供。
[0272]
在一些方面，该抗体是p1a3克隆或p1a3的变体。p1a3包含以下cdr序列：
[0273]
轻链：
[0274]
lc-cdr1：glssgsvstghyas(seq id no：15)
[0275]
lc-cdr2：ntntrss(seq id no：16)
[0276]
lc-cdr3：vlyvgdgiwv(seq id no：17)
[0277]
重链：
[0278]
hc-cdr1：syyih(seq id no：18)
[0279]
hc-cdr2：iinpgngdtnyaqrfqg(seq id no：19)
[0280]
hc-cdr3：eiasysgsyydy(seq id no：20)
[0281]
除非另有说明，否则本文描述的抗原结合多肽的cdr是根据kabat等人编写，由美国国立卫生研究院公共卫生服务(马里兰州贝塞斯达)于1991年出版的《免疫学目的蛋白质的序列》第5版。
[0282]
在一些方面，该抗体是p1c5克隆或p1c5的变体。p1c5包含以下cdr序列：
[0283]
轻链：
[0284]
lc-cdr1：glssgsvstgyyps(seq id no：21)
[0285]
lc-cdr2：stnsrss(seq id no：22)
[0286]
lc-cdr3：vlymgsgisv(seq id no：23)
[0287]
重链：
[0288]
hc-cdr1：sssyywg(seq id no：24)
[0289]
hc-cdr2：siyysgstyynpslks(seq id no：25)
[0290]
hc-cdr3：yapdssgylvafdi(seq id no：26)。
[0291]
在一些方面，抗体是p1e4克隆或p1e4的变体。p1e4包含以下cdr序列：
[0292]
轻链：
[0293]
lc-cdr1：glssgsvstsyyps(seq id no：27)
[0294]
lc-cdr2：ttnirss(seq id no：28)
[0295]
lc-cdr3：mlymgsgiwv(seq id no：29)
[0296]
重链：
[0297]
hc-cdr1：gyyws(seq id no：30)
[0298]
hc-cdr2：einhsgstnynpslks(seq id no：31)
[0299]
hc-cdr3：mginsggylygmdv(seq id no：32)。
[0300]
在一些方面，抗体是p1f1克隆或p1f1的变体。p1f1包含以下cdr序列：
[0301]
轻链：
[0302]
lc-cdr1：glssgsvstsyyps(seq id no：27)
[0303]
lc-cdr2：stntrss(seq id no：33)
[0304]
lc-cdr3：vlymgsgiwv(seq id no：34)
[0305]
重链：
[0306]
hc-cdr1：ssnwws(seq id no：35)
[0307]
hc-cdr2：eiyhsgstnynpslks(seq id no：36)
[0308]
hc-cdr3：mgansggylygmdv(seq id no：37)。
[0309]
根据本发明的抗体可以包含p1a3、p1c5、p1e4或p1f1的cdr或seq id nos 1和5、2和6、3和7、或4和8之一。在根据本发明的抗体中，六个cdr序列中的一个或两个或三个或四个可以变化。变体可以在六个cdr序列的一个或两个中具有一个或两个氨基酸取代。
[0310]
p1a3(seq id no：1和5)，p1c5(seq id no：2和6)，p1e4(seq id no：3和7)和p1f1(seq id no：4和8)的v
l
和v
h
链的氨基酸序列如图1a-1d(v
l
)和2a-2d(v
h
)所示。编码核苷酸序列显示在seq id no：39和43(p1a3)，40和44(p1c5)，41和45(p1e4)，42和46(p1f1)，以及图16和17中。
[0311]
在一些方面，根据本发明的抗体可以包含本文所述的一个或多个氨基酸序列。根据本发明的抗体可以由本文所述的一种或多种核苷酸序列编码。在某些方面，抗体是如本文所述的克隆a1、a2、a4、a5、b1、b2、b3、b4、b5、c2、c3、c4、d1、d2、d3、d4、e1、e2、e5、f2、f3、f4、f5、g1、g1、g2、g3、g4或g5或所述克隆的变体。
[0312]
在一些方面和实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽包含根据以下(1)至(31)之一的至少一个vl区：
[0313]
(1)(p1a3)包含以下cdr的vl区：
[0314]
具有seq id no：15的氨基酸序列的lc-cdr1
[0315]
具有seq id no：16的氨基酸序列的lc-cdr2
[0316]
具有seq id no：17的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0317]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0318]
(2)(p1c5)包含以下cdr的vl区：
[0319]
具有seq id no：21的氨基酸序列的lc-cdr1
[0320]
具有seq id no：22的氨基酸序列的lc-cdr2
[0321]
具有seq id no：23的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0322]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0323]
(3)(p1e4)包含以下cdr的vl区：
[0324]
具有seq id no：27的氨基酸序列的lc-cdr1
[0325]
具有seq id no：28的氨基酸序列的lc-cdr2
[0326]
具有seq id no：29的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0327]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0328]
(4)(p1f1)包含以下cdr的vl区：
[0329]
具有seq id no：27的氨基酸序列的lc-cdr1
[0330]
具有seq id no：33的氨基酸序列的lc-cdr2
[0331]
具有seq id no：34的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0332]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0333]
(5)(pfa1)包含以下cdr的vl区：
[0334]
具有seq id no：74的氨基酸序列的lc-cdr1
[0335]
具有seq id no：75的氨基酸序列的lc-cdr2
[0336]
具有seq id no：76的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0337]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0338]
(6)(pfa2)包含以下cdr的vl区：
[0339]
具有seq id no：84的氨基酸序列的lc-cdr1
[0340]
具有seq id no：75的氨基酸序列的lc-cdr2
[0341]
具有seq id no：85的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0342]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0343]
(7)(pfa4)包含以下cdr的vl区：
[0344]
具有seq id no：93的氨基酸序列的lc-cdr1
[0345]
具有seq id no：94的氨基酸序列的lc-cdr2
[0346]
具有seq id no：95的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0347]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0348]
(8)(pfa5)包含以下cdr的vl区：
[0349]
具有seq id no：102的氨基酸序列的lc-cdr1
[0350]
具有seq id no：75的氨基酸序列的lc-cdr2
[0351]
具有seq id no：103的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0352]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0353]
(9)(pfb1)包含以下cdr的vl区：
[0354]
具有seq id no：110的氨基酸序列的lc-cdr1
[0355]
具有seq id no：111的氨基酸序列的lc-cdr2
[0356]
具有seq id no：112的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0357]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0358]
(10)(pfb2)包含以下cdr的vl区：
[0359]
具有seq id no：120的氨基酸序列的lc-cdr1
[0360]
具有seq id no：121的氨基酸序列的lc-cdr2
[0361]
具有seq id no：122的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0362]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0363]
(11)(pfb3)包含以下cdr的vl区：
[0364]
具有seq id no：102的氨基酸序列的lc-cdr1
[0365]
具有seq id no：75的氨基酸序列的lc-cdr2
[0366]
具有seq id no：130的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0367]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0368]
(12)(pfb4)包含以下cdr的vl区：
[0369]
具有seq id no：138的氨基酸序列的lc-cdr1
[0370]
具有seq id no：139的氨基酸序列的lc-cdr2
[0371]
具有seq id no：140的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0372]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0373]
(13)(pfb5)包含以下cdr的vl区：
[0374]
具有seq id no：102的氨基酸序列的lc-cdr1
[0375]
具有seq id no：146的氨基酸序列的lc-cdr2
[0376]
具有seq id no：147的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0377]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0378]
(14)(pfc2；pfg5)包含以下cdr的vl区：
[0379]
具有seq id no：102的氨基酸序列的lc-cdr1
[0380]
具有seq id no：155的氨基酸序列的lc-cdr2
[0381]
具有seq id no：95的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0382]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0383]
(15)(pfc3)包含以下cdr的vl区：
[0384]
具有seq id no：161的氨基酸序列的lc-cdr1
[0385]
具有seq id no：162的氨基酸序列的lc-cdr2
[0386]
具有seq id no：163的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0387]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0388]
(16)(pfc4)包含以下cdr的vl区：
[0389]
具有seq id no：170的氨基酸序列的lc-cdr1
[0390]
具有seq id no：171的氨基酸序列的lc-cdr2
[0391]
具有seq id no：172的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0392]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0393]
(17)(pfd1)包含以下cdr的vl区：
[0394]
具有seq id no：93的氨基酸序列的lc-cdr1
[0395]
具有seq id no：94的氨基酸序列的lc-cdr2
[0396]
具有seq id no：180的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0397]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0398]
(18)(pfd2)包含以下cdr的vl区：
[0399]
具有seq id no：186的氨基酸序列的lc-cdr1
[0400]
具有seq id no：187的氨基酸序列的lc-cdr2
[0401]
具有seq id no：188的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0402]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0403]
(19)(pfd3)包含以下cdr的vl区：
[0404]
具有seq id no：194的氨基酸序列的lc-cdr1
[0405]
具有seq id no：195的氨基酸序列的lc-cdr2
[0406]
具有seq id no：196的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0407]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0408]
(20)(pfd4)包含以下cdr的vl区：
[0409]
具有seq id no：93的氨基酸序列的lc-cdr1
[0410]
具有seq id no：204的氨基酸序列的lc-cdr2
[0411]
具有seq id no：205的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0412]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0413]
(21)(pfe1)包含以下cdr的vl区：
[0414]
具有seq id no：211的氨基酸序列的lc-cdr1
[0415]
具有seq id no：212的氨基酸序列的lc-cdr2
[0416]
具有seq id no：95的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0417]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0418]
(22)(pfe2)包含以下cdr的vl区：
[0419]
具有seq id no：217的氨基酸序列的lc-cdr1
[0420]
具有seq id no：218的氨基酸序列的lc-cdr2
[0421]
具有seq id no：219的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0422]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0423]
(23)(pfe5)包含以下cdr的vl区：
[0424]
具有seq id no：226的氨基酸序列的lc-cdr1
[0425]
具有seq id no：227的氨基酸序列的lc-cdr2
[0426]
具有seq id no：228的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0427]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0428]
(24)(pff2)包含以下cdr的vl区：
[0429]
具有seq id no：161的氨基酸序列的lc-cdr1
[0430]
具有seq id no：162的氨基酸序列的lc-cdr2
[0431]
具有seq id no：233的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0432]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0433]
(25)(pff3)包含以下cdr的vl区：
[0434]
具有seq id no：102的氨基酸序列的lc-cdr1
[0435]
具有seq id no：75的氨基酸序列的lc-cdr2
[0436]
具有seq id no：180的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0437]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0438]
(26)(pff4)包含以下cdr的vl区：
[0439]
具有seq id no：247的氨基酸序列的lc-cdr1
[0440]
具有seq id no：248的氨基酸序列的lc-cdr2
[0441]
具有seq id no：249的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0442]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0443]
(27)(pff5)包含以下cdr的vl区：
[0444]
具有seq id no：255的氨基酸序列的lc-cdr1
[0445]
具有seq id no：33的氨基酸序列的lc-cdr2
[0446]
具有seq id no：256的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0447]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0448]
(28)(pfg1)包含以下cdr的vl区：
[0449]
具有seq id no：261的氨基酸序列的lc-cdr1
[0450]
具有seq id no：262的氨基酸序列的lc-cdr2
[0451]
具有seq id no：263的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0452]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0453]
(29)(pfg2)包含以下cdr的vl区：
[0454]
具有seq id no：270的氨基酸序列的lc-cdr1
[0455]
具有seq id no：271的氨基酸序列的lc-cdr2
[0456]
具有seq id no：272的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0457]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0458]
(30)(pfg3)包含以下cdr的vl区：
[0459]
具有seq id no：279的氨基酸序列的lc-cdr1
[0460]
具有seq id no：280的氨基酸序列的lc-cdr2
[0461]
具有seq id no：23的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0462]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0463]
(31)(pfg4)包含以下cdr的vl区：
[0464]
具有seq id no：287的氨基酸序列的lc-cdr1
[0465]
具有seq id no：288的氨基酸序列的lc-cdr2
[0466]
具有seq id no：289的氨基酸序列的lc-cdr3，
[0467]
或其变体，其中lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代。
[0468]
在一些方面和实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽包含根据以下(32)至(63)之一的至少一个vl区：
[0469]
(32)(p1a3)包含与seq id no：1的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0470]
(33)(p1c5)包含与seq id no：2的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0471]
(34)(p1e4)包含与seq id no：3的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0472]
(35)(p1f1)包含与seq id no：4的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0473]
(36)(pfa1)包含与seq id no：72的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0474]
(37)(pfa2)包含与seq id no：82的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0475]
(38)(pfa4)包含与seq id no：91的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0476]
(39)(pfa5)包含与seq id no：100的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0477]
(40)(pfb1)包含与seq id no：108的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0478]
(41)(pfb2)包含与seq id no：118的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0479]
(42)(pfb3)包含与seq id no：128的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少
75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0480]
(43)(pfb4)包含与seq id no：136的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0481]
(44)(pfb5)包含与seq id no：144的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0482]
(45)(pfc2)包含与seq id no：153的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0483]
(46)(pfc3)包含与seq id no：159的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0484]
(47)(pfc4)包含与seq id no：168的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0485]
(48)(pfd1)包含与seq id no：178的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0486]
(49)(pfd2)包含与seq id no：184的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0487]
(50)(pfd3)包含与seq id no：192的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0488]
(51)(pfd4)包含与seq id no：202的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0489]
(52)(pfe1)包含与seq id no：209的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0490]
(53)(pfe2)包含与seq id no：215的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0491]
(54)(pfe5)包含与seq id no：224的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0492]
(55)(pff2)包含与seq id no：231的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少
75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0493]
(56)(pff3)包含与seq id no：239的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0494]
(57)(pff4)包含与seq id no：245的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0495]
(58)(pff5)包含与seq id no：253的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0496]
(59)(pfg1)包含与seq id no：259的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0497]
(60)(pfg2)包含与seq id no：268的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0498]
(61)(pfg3)包含与seq id no：277的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0499]
(62)(pfg4)包含与seq id no：285的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0500]
(63)(pfg5)包含与seq id no：293的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0501]
在一些方面和实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽包含根据以下(64)至(92)之一的至少一个vh区：
[0502]
(64)(p1a3)包含以下cdr的vh区：
[0503]
具有seq id no：18的氨基酸序列的hc-cdr1
[0504]
具有seq id no：19的氨基酸序列的hc-cdr2
[0505]
具有seq id no：20的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0506]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0507]
(65)(p1c5；pff5)包含以下cdr的vh区：
[0508]
具有seq id no：24的氨基酸序列的hc-cdr1
[0509]
具有seq id no：25的氨基酸序列的hc-cdr2
[0510]
具有seq id no：26的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0511]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨
基酸被另一个氨基酸取代。
[0512]
(66)(p1e4)包含以下cdr的vh区：
[0513]
具有seq id no：30的氨基酸序列的hc-cdr1
[0514]
具有seq id no：31的氨基酸序列的hc-cdr2
[0515]
具有seq id no：32的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0516]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0517]
(67)(p1f1)包含以下cdr的vh区：
[0518]
具有seq id no：35的氨基酸序列的hc-cdr1
[0519]
具有seq id no：36的氨基酸序列的hc-cdr2
[0520]
具有seq id no：37的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0521]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0522]
(68)(pfa1)包含以下cdr的vh区：
[0523]
具有seq id no：77的氨基酸序列的hc-cdr1
[0524]
具有seq id no：78的氨基酸序列的hc-cdr2
[0525]
具有seq id no：79的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0526]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0527]
(69)(pfa2)包含以下cdr的vh区：
[0528]
具有seq id no：86的氨基酸序列的hc-cdr1
[0529]
具有seq id no：87的氨基酸序列的hc-cdr2
[0530]
具有seq id no：88的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0531]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0532]
(70)(pfa4)包含以下cdr的vh区：
[0533]
具有seq id no：96的氨基酸序列的hc-cdr1
[0534]
具有seq id no：78的氨基酸序列的hc-cdr2
[0535]
具有seq id no：97的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0536]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0537]
(71)(pfa5)包含以下cdr的vh区：
[0538]
具有seq id no：96的氨基酸序列的hc-cdr1
[0539]
具有seq id no：104的氨基酸序列的hc-cdr2
[0540]
具有seq id no：105的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0541]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0542]
(72)(pfb1)包含以下cdr的vh区：
[0543]
具有seq id no：113的氨基酸序列的hc-cdr1
[0544]
具有seq id no：114的氨基酸序列的hc-cdr2
[0545]
具有seq id no：115的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0546]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0547]
(73)(pfb2)包含以下cdr的vh区：
[0548]
具有seq id no：123的氨基酸序列的hc-cdr1
[0549]
具有seq id no：124的氨基酸序列的hc-cdr2
[0550]
具有seq id no：125的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0551]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0552]
(74)(pfb3)包含以下cdr的vh区：
[0553]
具有seq id no：131的氨基酸序列的hc-cdr1
[0554]
具有seq id no：132的氨基酸序列的hc-cdr2
[0555]
具有seq id no：133的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0556]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0557]
(75)(pfb4)包含以下cdr的vh区：
[0558]
具有seq id no：77的氨基酸序列的hc-cdr1
[0559]
具有seq id no：78的氨基酸序列的hc-cdr2
[0560]
具有seq id no：141的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0561]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0562]
(76)(pfb5)包含以下cdr的vh区：
[0563]
具有seq id no：148的氨基酸序列的hc-cdr1
[0564]
具有seq id no：149的氨基酸序列的hc-cdr2
[0565]
具有seq id no：150的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0566]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0567]
(77)(pfc2；pfg5)包含以下cdr的vh区：
[0568]
具有seq id no：96的氨基酸序列的hc-cdr1
[0569]
具有seq id no：78的氨基酸序列的hc-cdr2
[0570]
具有seq id no：156的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0571]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0572]
(78)(pfc3)包含以下cdr的vh区：
[0573]
具有seq id no：131的氨基酸序列的hc-cdr1
[0574]
具有seq id no：164的氨基酸序列的hc-cdr2
[0575]
具有seq id no：165的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0576]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨
基酸被另一个氨基酸取代。
[0577]
(79)(pfc4)包含以下cdr的vh区：
[0578]
具有seq id no：173的氨基酸序列的hc-cdr1
[0579]
具有seq id no：174的氨基酸序列的hc-cdr2
[0580]
具有seq id no：175的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0581]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0582]
(80)(pfd1)包含以下cdr的vh区：
[0583]
具有seq id no：77的氨基酸序列的hc-cdr1
[0584]
具有seq id no：78的氨基酸序列的hc-cdr2
[0585]
具有seq id no：181的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0586]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0587]
(81)(pfd2)包含以下cdr的vh区：
[0588]
具有seq id no：30的氨基酸序列的hc-cdr1
[0589]
具有seq id no：31的氨基酸序列的hc-cdr2
[0590]
具有seq id no：189的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0591]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0592]
(82)(pfd3)包含以下cdr的vh区：
[0593]
具有seq id no：197的氨基酸序列的hc-cdr1
[0594]
具有seq id no：198的氨基酸序列的hc-cdr2
[0595]
具有seq id no：199的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0596]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0597]
(83)(pfd4)包含以下cdr的vh区：
[0598]
具有seq id no：96的氨基酸序列的hc-cdr1
[0599]
具有seq id no：206的氨基酸序列的hc-cdr2
[0600]
具有seq id no：97的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0601]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0602]
(84)(pfe1；pfe5)包含以下cdr的vh区：
[0603]
具有seq id no：96的氨基酸序列的hc-cdr1
[0604]
具有seq id no：78的氨基酸序列的hc-cdr2
[0605]
具有seq id no：97的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0606]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0607]
(85)(pfe2)包含以下cdr的vh区：
[0608]
具有seq id no：96的氨基酸序列的hc-cdr1
[0609]
具有seq id no：220的氨基酸序列的hc-cdr2
[0610]
具有seq id no：221的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0611]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0612]
(86)(pff2)包含以下cdr的vh区：
[0613]
具有seq id no：234的氨基酸序列的hc-cdr1
[0614]
具有seq id no：235的氨基酸序列的hc-cdr2
[0615]
具有seq id no：236的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0616]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0617]
(87)(pff3)包含以下cdr的vh区：
[0618]
具有seq id no：241的氨基酸序列的hc-cdr1
[0619]
具有seq id no：206的氨基酸序列的hc-cdr2
[0620]
具有seq id no：242氨基酸序列的hc-cdr3，
[0621]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0622]
(88)(pff4)包含以下cdr的vh区：
[0623]
具有seq id no：148的氨基酸序列的hc-cdr1
[0624]
具有seq id no：149的氨基酸序列的hc-cdr2
[0625]
具有seq id no：250的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0626]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0627]
(89)(pfg1)包含以下cdr的vh区：
[0628]
具有seq id no：77的氨基酸序列的hc-cdr1
[0629]
具有seq id no：264的氨基酸序列的hc-cdr2
[0630]
具有seq id no：265的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0631]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0632]
(90)(pfg2)包含以下cdr的vh区：
[0633]
具有seq id no：131的氨基酸序列的hc-cdr1
[0634]
具有seq id no：273的氨基酸序列的hc-cdr2
[0635]
具有seq id no：274的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0636]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0637]
(91)(pfg3)包含以下cdr的vh区：
[0638]
具有seq id no：281的氨基酸序列的hc-cdr1
[0639]
具有seq id no：282的氨基酸序列的hc-cdr2
[0640]
具有seq id no：20的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0641]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨
基酸被另一个氨基酸取代。
[0642]
(92)(pfg4)包含以下cdr的vh区：
[0643]
具有seq id no：148的氨基酸序列的hc-cdr1
[0644]
具有seq id no：149的氨基酸序列的hc-cdr2
[0645]
具有seq id no：290的氨基酸序列的hc-cdr3，
[0646]
或其变体，其中hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中一个或多个的一个或两个或三个氨基酸被另一个氨基酸取代。
[0647]
在一些方面和实施方式中，抗体、抗原结合片段或多肽包含根据以下(93)至(124)之一的至少一个vh区：
[0648]
(93)(p1a3)包含与seq id no：5的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vh区。
[0649]
(94)(p1c5)包含与seq id no：6的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0650]
(95)(p1e4)包含与seq id no：7的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0651]
(96)(p1f1)包含与seq id no：8的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0652]
(97)(pfa1)包含与seq id no：73的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0653]
(98)(pfa2)包含与seq id no：83的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0654]
(99)(pfa4)包含与seq id no：92的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0655]
(100)(pfa5)包含与seq id no：101的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0656]
(101)(pfb1)包含与seq id no：109的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0657]
(102)(pfb2)包含与seq id no：119的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0658]
(103)(pfb3)包含与seq id no：129的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0659]
(104)(pfb4)包含与seq id no：137的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0660]
(105)(pfb5)包含与seq id no：145的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0661]
(106)(pfc2)包含与seq id no：154的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0662]
(107)(pfc3)包含与seq id no：160的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0663]
(108)(pfc4)包含与seq id no：169的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0664]
(109)(pfd1)包含与seq id no：179的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0665]
(110)(pfd2)包含与seq id no：185的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0666]
(111)(pfd3)包含与seq id no：193的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0667]
(112)(pfd4)包含与seq id no：203的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0668]
(113)(pfe1)包含与seq id no：210的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0669]
(114)(pfe2)包含与seq id no：216的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0670]
(115)(pfe5)包含与seq id no：225的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0671]
(116)(pff2)包含与seq id no：232的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0672]
(117)(pff3)包含与seq id no：240的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0673]
(118)(pff4)包含与seq id no：246的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0674]
(119)(pff5)包含与seq id no：254的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0675]
(120)(pfg1)包含与seq id no：260的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0676]
(121)(pfg2)包含与seq id no：269的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0677]
(122)(pfg3)包含与seq id no：278的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0678]
(123)(pfg4)包含与seq id no：286的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0679]
(124)(pfg5)包含与seq id no：294的氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列的vl区。
[0680]
在一些实施方式中，抗原结合分子包含根据以上(1)至(63)中任一项的至少一个vl区和根据以上(64)至(124)中任一项的至少一个vh区。
[0681]
轻链和重链cdr也可以与许多不同的框架区结合在一起而特别有用。因此，具有lc-cdr1-3或hc-cdr1-3的轻链和/或重链可具有可替代的框架区。合适的框架区是本领域公知的，并且在例如学术出版社于2001年出版的m.lefranc和g.lefranc的“免疫球蛋白factsbook”中有所描述，其通过引用并入本文。
[0682]
在本说明书中，抗体可具有v
l
和/或v
h
链，其包含与一个或多个与seq id nos1和5、2和6、3和7、或4和8的v
l
和/或v
h
氨基酸序列，或如图1和2所示的氨基酸序列之一具有高百分比序列同一性的氨基酸序列。
[0683]
例如，根据本发明的抗体包括结合her2并具有v
l
或v
h
链的抗体，所述v
l
或v
h
链包含与seq id no 1至8之一的v
l
或v
h
链氨基酸序列，或与图1和2所示的氨基酸序列之一具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、
94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0684]
在一些实施方式中，本文提供的抗体、抗原结合分子或多肽包含pfa4、pfb4、pfb5、pfc3、pfd4、pfe1、pff5或pfg3的cdr、v
l
和/或v
h
链。在一些实施方式中，本文提供的抗体、抗原结合分子或多肽包含pfa4、pfb4、pfc3、pfd4、pfe1、pff5或pfg3的cdr、v
l
和/或v
h
链。在一些实施方式中，本文提供的抗体、抗原结合分子或多肽包含pfb4、pfc3、pfd4、pfe1、pff5或pfg3的cdr、v
l
和/或v
h
链。在一些实施方式中，本文提供的抗体、抗原结合分子或多肽包含pfb4、pfc3、pfe1、pff5或pfg3的cdr、v
l
和/或v
h
链。在一些实施方式中，本文提供的抗体、抗原结合分子或多肽包含pfb4、pfc3、pfe1、pff5或pfg3的cdr、v
l
和/或v
h
链。
[0685]
在某些实施方式中，本文提供的抗体、抗原结合分子或多肽包含p1a3、p1c5、p1e4、p1f1、pfa4、pfb4、pfc3、pfd4或pfe1的cdr、v
l
和/或v
h
链。
[0686]
多价抗体
[0687]
完整抗体和f(ab')
2
片段是“二价”的。“二价”是指所述抗体和f(ab')
2
片段具有两个抗原结合位点。相反，fab、fv、scfv和dab片段是单价的，仅具有一个抗原结合位点。
[0688]
本申请还提供了能够结合her2的抗体或抗原结合片段，其是双特异性抗体或双特异性抗原结合片段。在一些实施方式中，所述双特异性抗体或双特异性抗原结合片段可以被分离。术语“双特异性”是指抗原结合分子能够特异性结合至少两个不同的抗原决定簇。
[0689]
在一些实施方式中，所述双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包含根据本发明的抗原结合片段或多肽。在一些实施方式中，所述双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包含能够与her2结合的抗原结合片段，其中能够与her2结合的抗原结合片段包括抗原结合片段或根据本发明的多肽或由其组成。
[0690]
在一些实施方式中，所述双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包含能够与her2结合的抗原结合片段，和能够与另一靶蛋白结合的抗原结合片段。在一些实施方式中，所述双特异性抗体/抗原结合片段包含能够结合her2的抗原结合分子和能够结合her2以外的抗原的抗原结合分子。在一些实施方式中，her2以外的抗原是免疫细胞表面分子。在一些实施方式中，her2以外的抗原是癌细胞抗原。在一些实施方式中，her2以外的抗原是受体分子，例如细胞表面受体。
[0691]
癌细胞抗原是由癌细胞表达或过表达的抗原。癌细胞抗原可以是任何肽/多肽、糖蛋白、脂蛋白、聚糖、糖脂、脂质或其片段。癌细胞抗原的表达可能与癌症有关。癌细胞抗原可以由癌细胞异常表达(例如，癌细胞抗原可以异常定位表达)，或者可以由癌细胞以异常结构表达。癌细胞抗原可能能够引发免疫反应。在一些实施方式中，抗原在癌细胞的细胞表面表达(即癌细胞抗原是癌细胞表面抗原)。在一些实施方式中，与本文所述的抗原结合分子结合的抗原的一部分展示在癌细胞的外表面上(即是细胞外的)。癌细胞抗原可以是癌症相关抗原。在一些实施方式中，所述癌细胞抗原是其表达与癌症症状的发展、进展或严重性相关的抗原。与癌症相关的抗原可能与癌症的原因或病理有关，或者可能由于癌症而异常表达。在一些实施方式中，所述癌细胞抗原是与相应的非癌细胞(例如，源自相同组织/细胞类型的非癌细胞)的表达水平相比，其表达被癌细胞上调(例如在rna和/或蛋白质水平上)的抗原。在一些实施方式中，所述癌症相关抗原可以优先由癌细胞表达，而不由相应的非癌细胞(例如，衍生自相同组织/细胞类型的非癌细胞)表达。在一些实施方式中，所述癌症相关抗原可以是突变的癌基因或突变的抑癌基因的产物。在一些实施方式中，与癌症相关的
抗原可以是过度表达的细胞蛋白、由致癌病毒产生的癌症抗原、癌胚抗原或细胞表面糖脂或糖蛋白的产物。
[0692]
免疫细胞表面分子可以是在免疫细胞的细胞表面上或表面表达的任何肽/多肽、糖蛋白、脂蛋白、聚糖、糖脂、脂质或其片段。在一些实施方式中，免疫细胞表面分子的被本发明的抗原结合分子结合的部分在免疫细胞的外表面上(即在细胞外)。免疫细胞表面分子可以在任何免疫细胞的细胞表面表达。在一些实施方式中，免疫细胞可以是造血起源的细胞，例如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、树突状细胞、淋巴细胞或单核细胞。淋巴细胞可以是例如t细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞、nkt细胞或先天性淋巴样细胞(ilc)或其前体(例如胸腺细胞或b前体细胞)。在一些实施方式中，免疫细胞表面分子可以是共刺激分子(例如，cd28、ox40、4-1bb、icos或cd27)或其配体。在一些实施方式中，免疫细胞表面分子可以是检查点抑制剂(例如pd-1、ctla-4、lag-3、tim-3、tigit或btla)或其配体。
[0693]
在一些实施方式中，所述双特异性抗体/抗原结合片段包含本文提供的抗原结合片段/分子和能够结合her2的抗原结合片段/分子。在一些实施方式中，所述双特异性抗体/抗原结合片段包含能够在第一表位结合her2的抗原结合片段/分子和能够在第二表位结合her2的抗原结合片段/分子。例如，所述双特异性抗体/抗原结合片段包含本文提供的抗原结合片段/分子和衍生自曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗的抗原结合片段/分子。
[0694]
能够与另一靶蛋白结合的抗原结合片段可以与除her2之外的另一蛋白结合。
[0695]
本文所述的抗体和抗原结合多肽可以是多特异性的。多特异性抗体和抗原结合多肽可以以任何合适的形式提供，例如在kontermann mabs 2012，4(2)：182-197中描述的那些形式，其通过引用整体并入本文。例如，抗原结合多肽可以是双特异性抗体缀合物(例如igg2、f(ab')2或covx-body)，双特异性igg或igg样分子(例如igg、scfv4-ig、igg-scfv、scfv-igg、dvd-ig、igg-svd、svd-igg、1-igg、mab2或tandemab常见lc)，不对称双特异性igg或igg样分子(例如kih igg、kih igg常见lc、crossmab、kih igg-scfab、mab-fv、电荷对或seed抗体)，小双特异性抗体分子(例如diabody(db)、dsdb、dart、scdb、tandabs、串联scfv(tafv)、串联dab/vhh、三体、三头、fab-scfv或f(ab')2-scfv2)，双特异性fc和ch3融合蛋白(例如tafv-fc、di-diabody、scdb-ch3、scfv-fc-scfv、hcab-vhh、scfv-kih-fc或scfv-kih-ch3)或双特异性融合蛋白(例如scfv2-白蛋白、scdb-白蛋白、tafv毒素、dnl-fab3、dnl-fab4-igg、dnl-fab4-igg-细胞因子2)。特别参见kontermann mabs 2012，4(2)：182-19的图2。“多特异性”是指抗原结合分子显示出与一个以上靶标的特异性结合。
[0696]
技术人员能够设计并制备双特异性抗体。产生双特异性抗体的方法包括抗体或抗体片段的化学交联，例如通过可还原的二硫键或不可还原的硫醚键，如segal和bast于2001在《双特异性抗体的生产》，免疫学最新方案14：iv：2.13：2.13.1
–
2.13.16中所述，其通过引用整体并入本文。例如，n-琥珀酰亚胺基-3-(-2-吡啶基二硫代)-丙酸酯(spdp)可用于化学交联，例如fab片段经由铰链区sh-基团以产生二硫键连接的双特异性f(ab)2异二聚体。产生双特异性抗体的其他方法包括融合产生抗体的杂交瘤，例如，用聚乙二醇与聚乙二醇产生一个能够分泌双特异性抗体的方形细胞，如d.m.和bast，b.j.于2001在《双特异性抗体的生产》，免疫学最新方案14：iv：2.13：2.13.1
–
2.13.16中所述。
[0697]
双特异性抗体也可以通过重组产生，例如通过由编码抗原结合分子的多肽的核酸构建体表达，例如《抗体工程》：方法和方案，第二版(humana出版社，2012年)，第40章：双特
异性抗体的产生：diabodies and tandem scfv或法文(hornig )，或《如何制备双特异性抗体》，分子医学方法2000，40：333-339中所述，其通过引用整体并入本文。例如，编码两个抗原结合片段的轻链和重链可变域的dna构建体(即能够结合her2的抗原结合片段的轻链和重链可变域，以及用于结合her2的轻链和重链可变域能够与另一种靶蛋白/与另一种表位结合的抗原结合片段)，并包括在抗原结合片段之间编码合适的连接子或二聚结构域的序列，可以通过分子克隆技术制备。然后，可以通过在合适的宿主细胞(例如哺乳动物宿主细胞)中表达(例如体外)构建体来产生重组双特异性抗体，然后可以任选地纯化表达的重组双特异性抗体。
[0698]
抗体缀合物
[0699]
本发明还提供了抗体缀合物，包括根据本发明结合到化学部分的抗体、抗原结合片段或多肽。
[0700]
在一些实施方式中，所述化学部分可以是用于提供治疗效果的部分。在一些实施方式中，所述化学部分可以是药物部分(例如，细胞毒性剂或细胞生长抑制剂)。细胞毒性剂是杀死细胞的试剂。细胞生长抑制剂是抑制细胞生长的试剂。
[0701]
使用抗体-药物缀合物靶向表达her2的癌细胞传递药物部分，并可以促进其细胞内累积。
[0702]
在一些实施方式中，所述化学部分可以是至少一种抗癌剂。“至少一种抗癌剂”是指有效治疗恶性或癌性疾病，例如本文所述的癌症的一种或两种或三种或三种或四种或更多种药物。抗癌剂在本文中也可以描述为治疗剂、另外的药剂或另外的治疗剂。
[0703]
在一些实施方式中，所述药物部分可以是如下文所述的化学治疗药物。在一些实施方式中，所述药物部分可以是能够控制肿瘤生长的激素，例如乙炔雌二醇(ethinyloestradiol)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、炔诺酮(norethisterone)、孕酮(megestrol)、二乙基雌二醇(diethylstilboestrol)或磷雌酚(fosfestrol)。在一些实施方式中，所述药物部分可以是激素拮抗剂，例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、氨基谷氨酰胺(aminoglutethimide)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)、依西美坦(exemestane)、三氯噻酮(trilostane)、戈瑟瑞林(goserel in)、布塞林(buserelin)、戈瑟瑞林(goserelin)、亮丙瑞林(leuprorelin)、曲普瑞林(triptorelin)、醋酸环丙孕酮(cyproterone acetate)、氟他胺(flutamide)或比卡鲁胺(bicalutamide)。
[0704]
在一些实施方式中，所述化学部分可以是可检测的部分。合适的部分和用于其检测的手段是本领域技术人员所熟知的，并且包括上文所述的放射性同位素或非同位素实体。
[0705]
抗体缀合物可包含可被切割以便在靶标位置释放药物的接头。
[0706]
嵌合抗原受体
[0707]
可以将根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽掺入能够结合her2的嵌合抗原受体(car)。因此，本发明还提供了包含本发明的抗体、抗原结合分子或多肽的car。
[0708]
嵌合抗原受体(car)是提供抗原结合和t细胞活化功能的重组受体。例如，dotti等人在immunol rev(2014)257(1)中综述了car的结构和工程学，其通过引用整体并入本文。car包含连接至细胞膜锚定区和信号传导区的抗原结合区。任选的铰链区可以在抗原结合
区和细胞膜锚定区之间提供分离作用，并可充当柔性接头。
[0709]
根据本发明的抗体、抗原结合片段或多肽可以用作嵌合抗原受体(car)的抗原结合结构域。在一些实施方式中，car包含根据本文所述的任一实施方式的抗体、抗原结合片段或多肽的v
l
结构域和v
h
结构域。因此，根据本发明与car结合的抗原是her2。
[0710]
还提供了任选分离的体外复合物，其包含与her2结合的car。
[0711]
car可以与共刺激配体、嵌合共刺激受体或细胞因子结合使用，以进一步增强t细胞的效能、特异性和安全性(sadelain等，嵌合抗原受体(car)设计的基本原理，cancer discov.2013年4月；3(4)：388
–
398，doi：10.1158/2159-8290.cd-12-0548，其通过引用整体并入本文。
[0712]
本发明提供了任选分离的编码本文所述的car的核酸。还提供了包含所述核酸的表达载体。本发明还提供了包含本文所述的car、核酸或表达载体的细胞。还提供了包含本文所述的car、核酸、表达载体或细胞的组合物。car可以用于产生靶向肿瘤的t细胞，例如靶向表达或过表达her2的car特异的肿瘤细胞的t细胞。
[0713]
所述细胞可以是免疫细胞，例如抗原特异性t细胞(例如病毒特异性t细胞)、抗原特异性cd4 t细胞、抗原特异性cd8 t细胞、效应记忆cd4 t细胞、效应记忆cd8 t细胞、中央记忆cd4 t细胞、中央记忆性cd8 t细胞、细胞毒性cd8+t细胞(即ctl)、nk细胞或抗原特异性nk细胞。
[0714]
工程改造car进入细胞可以在体外培养过程中进行，以进行转导和扩增，例如在t细胞扩增以进行过继t细胞疗法的过程中。转导可以利用多种方法，但是需要稳定的基因转移以确保在克隆扩增和迁移的t细胞中实现持续的car表达。
[0715]
除了本文所述的her2特异性决定元件外，还可进一步改造car分子以表达共刺激内部结构域，例如衍生自cd28和肿瘤坏死因子受体超家族成员9(tnfrsf9；4-1bb)以促进t细胞遇到肿瘤细胞后增殖和持续存在(nishio和dotti，oncoimmunology 4：2，e988098；2015年2月)。
[0716]
car通常在单个嵌合蛋白中将抗原结合结构域与cd3-ζ链或fcγri蛋白的胞内结构域结合。sjouke等人描述了car的结构特征(第二代嵌合抗原受体的药理学，nature reviews drug discovery，14，499-509(2015)doi：10.1038/nrd4597)。car通常具有连接至跨膜结构域和内部结构域的细胞外抗原结合结构域。任选的铰链或间隔域可以在结合部分和跨膜结构域之间提供分离作用，并且可以充当柔性接头。
[0717]
根据本发明，如本文所述，car的抗原识别结构域可以是或可以衍生自能够结合her2的抗体、抗原结合片段或多肽。本发明的car的抗原结合区可以以任何合适的形式提供，例如scfv、scfab等
[0718]
在一些实施方式中，car的抗原识别结构域可以是或可以源自如本文所述的克隆p1a3、p1c5、p1e4或p1f1。
[0719]
在一些实施方式中，car可包含本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽，其显示与her2的中等或较低结合，如本文所述。中等和/或较低亲和力的抗原结合区可能能够将过表达靶蛋白的癌细胞与表达生理学靶标水平的正常细胞区分开，如liu等人在cancer res.2015；(75)(17)3596-3607所述。这种方法可以避开非癌细胞，同时专门靶向癌细胞并降低脱靶毒性。在一些实施方式中，如本文所述，car的抗原识别结构域可以是克隆pfa4、
pfb4、pfb5、pfc3、pfd4、pfe1、pff5或pfg3，或可以由其衍生。在一些实施方式中，如本文所述，car的抗原识别结构域可以是克隆pfa4、pfb4、pfc3、pfd4、pfe1、pff5或pfg3，或可以由其衍生。
[0720]
铰链区或间隔区可以是允许结合部分沿不同方向定向的柔性结构域。铰链区或间隔区可以衍生自免疫球蛋白的igg1、igh或ch
2
ch
3
区域。
[0721]
跨膜结构域可以是跨细胞膜的疏水性α螺旋。通常使用与内部结构域相关的跨膜结构域。跨膜区可以称为细胞膜锚定区。在一些实施方式中，car包含细胞膜锚定区，该细胞膜锚定区包含或由以下氨基酸序列组成：该氨基酸序列包含cd3-ζ、cd4、cd8或cd28之一的跨膜区氨基酸序列，或由其组成或由其衍生。如本文所用，一区域“源自”一参比氨基酸序列，是指该区域包含一与参比序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％之一的序列同一性的氨基酸序列。
[0722]
内部结构域在抗原结合后负责受体聚簇/二聚化，并引发向细胞的信号转导。一种常用的跨膜结构域是cd3-ζ跨膜和内部结构域。来自一个或多个共刺激蛋白受体(例如cd28 4-1bb、ox40、icos)的细胞内结构域可以可选地并入car的细胞质尾部，以提供其他共刺激信号，这可能在抗肿瘤活性方面是有益的。
[0723]
本文所述的car可以包含具有抗原识别结构域、跨膜结构域和细胞质结构域的细胞外结构域。可以使用与car中一个结构域天然结合的跨膜结构域，或者可以通过氨基酸取代选择或修饰该跨膜结构域，以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，从而尽量减少与受体复合物其他成员的相互作用。可以将细胞质结构域设计为单独包含cd28和/或4-1bb信号结构域，或与任何其他所需的细胞质结构域组合。可以将细胞质结构域设计为进一步包含cd3-ζ的信号传导结构域。例如，car的细胞质结构域可包括但不限于cd3-ζ、4-1bb和cd28信号传导模块及其组合。
[0724]
本文还提供了car t细胞，其包含如本文所述的能够结合her2的抗原结合片段作为car。
[0725]
如本文所述的car t细胞可通过将包含所需car的慢病毒载体体外产生，例如将包含抗her2、cd8a铰链和跨膜结构域以及人4-1bb和cd3-ζ信号结构域的car导入所述细胞中。如本文所述的car t细胞也可以通过电穿孔编码所需car的mrna产生。本发明的car t细胞能够体内复制并长期持续存在，这可以导致持续的肿瘤控制。
[0726]
在一些实施方式中，根据本发明的car t细胞促进细胞，例如癌细胞或肿瘤细胞的细胞溶解。
[0727]
本发明提供了本文所述的car、核酸、表达载体、细胞或组合物，其用于医学治疗或预防方法。本文还描述了表达如本文所述的car、核酸或表达载体的基因修饰的t细胞的施用，以用于医学治疗或预防方法。在一些实施方式中，本文所述的car或t细胞用于治疗患有癌症或有患癌风险的患者。在一些实施方式中，所述待治疗的癌症是本文所述的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是乳腺癌。在一些实施方式中，所述待治疗的癌症是卵巢、子宫、肺(例如肺腺癌)、或胃肠道(例如胃、唾液导管)的癌症。
[0728]
可以通过淋巴细胞输注给药。优选地，在治疗中使用自体淋巴细胞输注，即淋巴细胞源自其被引入的患者。从需要治疗的患者中收集自体pbmc(外周血单核细胞)，并使用本
领域已知的方法活化和扩增t细胞，然后将其注入患者体内。细胞的产生、活化和扩增可以体外或离体进行。在某些情况下，可以从不是患者的个体获得细胞并将其引入患者，即同种异体细胞疗法。
[0729]
过继性t细胞转移在例如chia wk等人，molecular therapy(2014)，22(1)：132-139；kalos和june，2013，immunity 39(1)：49-60和cobbold等人，(2005)j.exp.med.202:379-386中所述，其通过引用整体并入本文。因此，技术人员能够确定用于本文所述免疫细胞过继转移的合适的试剂和方法。
[0730]
检测方法
[0731]
本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞可以被检测标记或至少能够检测。例如，抗体可以用放射性原子或有色分子或荧光分子或易于以任何其他方式检测的分子标记。合适的可检测分子包括荧光蛋白、萤光素酶、酶底物和放射性标记。结合部分可以直接用可检测标记物标记，或者可以间接标记。例如，结合部分可以是未标记的抗体，其可以被本身被标记的另一种抗体检测。备选地，第二抗体可以已经与生物素结合，并且标记的链霉亲和素与生物素的结合被用于间接标记第一抗体。
[0732]
本文所述的抗体，抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞可用于涉及抗体或抗原结合片段与her2结合的方法中。此类方法可能涉及检测抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞与her2的结合复合物。像这样，在一个实施方式中，提供了一种方法，该方法包括使含有或怀疑含有her2的样品与本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞接触，并检测抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞与her2复合物的形成。
[0733]
合适的方法形式是本领域所熟知的，包括免疫测定法，例如夹心测定法，例如elisa。该方法可以包括用可检测的标记例如荧光、发光或放射性标记来标记抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞，或her2，或两者。her2表达可以通过免疫组织化学(ihc)或荧光原位杂交(fish)来测量，例如在通过活检获得的组织样品中。
[0734]
这种方法可以为需要检测和/或定量her2的疾病或病症的诊断方法提供基础。这样的方法可以在患者样品上体外执行，或者在患者样品处理之后执行。一旦收集了样本，就不需要患者进行体外诊断方法，因此该方法可以是不在人体或动物体上实践的一种方法。
[0735]
该方法可以涉及确定患者样品中存在的her2的量。该方法可以进一步包括将确定的量与标准或参考值进行比较，作为达到诊断的过程的一部分。其他诊断检测可以与此处描述的检测结合使用，以增强诊断或预后的准确性或确认通过使用此处描述的检测获得的结果。
[0736]
患者样品中存在的her2水平可以提示患者可以对抗her2抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞的治疗产生反应。样品中存在高水平的her2可用于选择要用抗her2抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞治疗的患者。因此，本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞可用于选择用抗her2疗法治疗的患者。
[0737]
样品中her2的检测可以用于诊断患者的癌性疾病，诊断癌性疾病的易感性或提供癌性疾病的预后(预后)。诊断或预后可能与现有的(先前诊断的)癌性疾病有关，可能是良性或恶性的，可能与可疑的癌症性疾病有关，或者可能与对患者的癌性疾病的筛查(可能先前未被诊断)有关。
[0738]
样品可以从任何组织或体液中获取。样品可以包含或可以源自：一定量的血液；从
个体血液中提取的一定量的血清，可能包括去除纤维蛋白凝块和血细胞后获得的血液中的液体部分；组织样本或活检；或从所述个体分离的细胞。
[0739]
根据本发明的方法优选体外进行。术语“体外”旨在涵盖培养细胞的实验，而术语“体内”旨在涵盖完整的多细胞生物的实验。
[0740]
如本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞可以，例如在体内，用于检测、定位或成像癌症(例如肿瘤)的方法。
[0741]
抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞可以适当地直接或间接地用可检测的标记物(例如产生信号的标记物)，如放射性同位素或非同位素实体进行标记以进行检测。放射性同位素包括：碘123、碘125、碘126、碘131、碘133、溴77、锝99m、铟111、铟113m、镓67、镓68、钌95、钌97、钌103、钌105、汞207、汞203、铼99m、铼101、铼105、钪47、碲121m、碲122m、碲125m、铥165、铥167、铥168、铜67、氟18、钇90、钯100、铋217和锑211。非同位素实体可以选自酶(例如过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶)、染料、半抗原、发光剂，例如放射发光、化学发光(例如a啶酯、鲁米诺、异鲁米诺)、生物发光、荧光(例如荧光素、若丹明、曙红和ndb、稀土的绿色荧光蛋白(gfp)螯合物如euro(eu)、b(tb)和sa(sm)、四甲基若丹明、德克萨斯红、4-甲基伞形酮、7-氨基4-甲基香豆素、cy3、cy5)或磷光剂、抗体、受体和配体，例如生物素、抗生物素蛋白、链霉亲和素或洋地黄毒苷。
[0742]
检测技术是本领域技术人员所熟知的，并且能够选择与标记剂相对应的检测技术。合适的技术包括寡核苷酸标签的pcr扩增、质谱分析、荧光或颜色的检测，例如通过报告蛋白将底物酶促转化或放射性检测。
[0743]
在一些实施方式中，所述方法包括将抗体、抗体片段、多肽、结合物、car或细胞施用给受试者，例如被诊断患有或怀疑患有癌症并检测抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞的患者。在一些实施方式中，所述方法包括检测来自抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞的信号。在一些实施方式中，所述方法包括将信号转换为图像。
[0744]
本发明还提供了使用根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞，选择/分层用于her2靶向药物治疗的受试者的方法。在一些实施方式中，所述方法包括使来自受试者的样品与抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞接触。在一些实施方式中，使样品体外接触。在一些实施方式中，基于对her2或编码her2的核酸(例如从个体获得的样本中)的存在的检测，选择根据本发明进行治疗的受试者，或鉴定为将从这种治疗中受益的受试者。
[0745]
治疗应用
[0746]
可以提供根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car和细胞以及包含此类试剂的组合物，用于医学治疗方法。可以向患有需要治疗的疾病或病症的受试者提供治疗。所述疾病或病症可以是癌症。所述疾病或病症可以是her2过表达的癌症。
[0747]
本发明提供了根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car或细胞，用于医学治疗或预防方法。本发明还提供了根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car或细胞在制备用于治疗或预防疾病或病症的药物中的用途。本发明还提供了一种治疗或预防疾病或病症的方法，其包括向受试者施用治疗或预防有效量的根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car或细胞。
[0748]
her2是表皮生长因子受体家族的成员，并与egfr家族的其他成员(egfr/her1、
her3和her4)一起作为优先异二聚体信号转导伴侣，在包括细胞增殖和分化在内的细胞发育的所有阶段均发挥着重要作用(karunagaran等人，(1996)embo j.15：254-264；klapper等人，(1999)pnas 96：4995-5000)。作为细胞存活的关键基因，her2基因扩增和蛋白质过表达导致恶性转化(neve等人，(2001)ann oncol.12增刊(1)：s9-13)。
[0749]
her2在多种癌症中表达，包括乳腺癌、卵巢癌、胃内膜癌、膀胱癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌和头颈癌。her2的过表达与不良的临床预后直接相关。her2过表达发生在约15-30％的乳腺癌和10-30％的胃癌中(iqbal和iqbal(2014)分子生物学国际，vol.2014，文章id 852748)。
[0750]
在一些实施方式中，所述癌症可包含过度表达her2的细胞。在一些实施方式中，所述癌症可包含所述抗体、抗原结合片段或多肽特异性的表达her2的细胞。
[0751]
可以提供根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、组合物、car或细胞，用于治疗表达或过表达her2的癌症。例如，可以通过用根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、car或细胞进行处理来直接杀死过表达her2的肿瘤细胞，例如通过细胞裂解或凋亡，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)，补体依赖性细胞毒性(cdc)或使用抗her2抗体-药物偶联物。
[0752]“治疗”可能是例如疾病/病症的发展或进展减慢，疾病/病症的症状缓解或疾病/病症的病理减轻。治疗或缓解疾病/病症可以有效地预防疾病/病症的进展，例如以防止病情恶化或减慢发展速度。在一些实施方式中，治疗或缓解可导致疾病/病症的改善，例如，减轻疾病/病症的症状或减轻疾病/病症的严重性/活动性的某些其他相关性。预防/预防疾病/病症可以指预防病症的恶化或预防疾病/病症的发展，例如预防早期疾病/病情发展到晚期慢性病。
[0753]
所述治疗可以旨在预防癌症的发展或进展。像这样，可以使用抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、组合物、car或细胞来配制药物组合物或药物，并且可以预防性治疗受试者以抵抗疾病的发展。这可以在疾病状态的症状发作之前发生，和/或可以给予被认为处于癌症发展或进展的更大风险中的受试者。
[0754]
所述治疗可以旨在减少表达her2的细胞的数量；诱导表达her2的细胞死亡；减少肿瘤大小；或抑制/预防肿瘤的生长。
[0755]
在一些实施方式中，可选地在体外确定要治疗的癌症、细胞、肿瘤或受试者为her2阳性(her2+)。在一些实施方式中，本文所述的治疗或预防方法包括可选地在体外确定待治疗的受试者的癌症、细胞或肿瘤是否表达her2。所述确定可以在从受试者获得的样品中进行。
[0756]
在一些实施方式中，待治疗的癌症、细胞、肿瘤或受试者是不能接受或对her2+癌症的其他疗法无反应的癌症。在一些实施方式中，待治疗的受试者不能接受和/或已经确定他们不能接受曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗治疗。例如，曲妥珠单抗与心脏毒性作用有关(murray，cmaj.2006；174(1):36
–
37)。
[0757]
在一些实施方式中，待治疗的癌症、细胞、肿瘤或受试者是已经使用针对her2+癌症的另一种疗法治疗的癌症、细胞、肿瘤或受试者。在一些实施方式中，待治疗的受试者已经使用曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗施用和/或治疗。
[0758]
癌症
[0759]
癌症可以是任何有害细胞增殖(或表现为有害细胞增殖的任何疾病)、赘生物或肿瘤，或有害细胞增殖、赘生物或肿瘤的风险增加或易感性。癌症可以是良性或恶性的，可以是原发性或继发性的(转移性)。赘生物或肿瘤可以是细胞的任何异常生长或增殖，并且可以位于任何组织中。组织的例子包括肾上腺、肾上腺髓质、肛门、阑尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、大脑、乳腺、盲肠、中枢神经系统(包括或不包括大脑)小脑、子宫颈、结肠、十二指肠、子宫内膜、上皮细胞(例如肾上皮)、胆囊、食道、神经胶质细胞、心脏、回肠、空肠、肾脏、泪腺、喉、肝、肺、淋巴、淋巴结、淋巴母细胞、上颌、纵隔、肠系膜、子宫肌层、鼻咽、网膜、口腔、卵巢、胰腺、腮腺、周围神经系统、腹膜、胸膜、前列腺、唾液腺、乙状结肠、皮肤、小肠、软组织、脾脏、胃、睾丸、胸腺、甲状腺、舌头、扁桃体、气管、子宫、外阴、白细胞。
[0760]
在一些实施方式中，所述待治疗的癌症是乳腺癌。在一些实施方式中，所述待治疗的癌症是卵巢、子宫、肺(例如肺腺癌)、或胃肠道(例如胃、唾液导管)的癌症。
[0761]
待治疗的肿瘤可能是神经或非神经系统肿瘤。神经系统肿瘤可能起源于中枢神经系统或周围神经系统，例如神经胶质瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、神经纤维瘤、室管膜瘤、神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤。非神经系统癌症/肿瘤可能起源于任何其他非神经组织，例如黑色素瘤、间皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、霍奇金淋巴瘤、慢性粒细胞性白血病(cml)、急性髓性白血病(aml)、骨髓增生异常综合症(mds)、皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、肝癌、表皮样癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、胸腺癌、非小细胞肺癌、血液癌和肉瘤。
[0762]
在一些实施方式中，所述癌症是编码或表达her2的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是过度表达her2的癌症。如本文所用，“her2阳性癌症”或“her2+癌症”是表达或过表达her2基因和/或蛋白质的癌症。
[0763]
如本文所用，“编码或表达her2的癌症”或“过表达her2的癌症”包括编码或表达her2的任何细胞。在一些实施方式中，所述细胞可以是肿瘤细胞。这样的细胞可以被鉴定为her2阳性细胞或her2阳性肿瘤细胞。如本文所用，“肿瘤细胞”包括一个或多个肿瘤细胞。
[0764]
可以通过免疫组织化学(ihc)、荧光原位杂交(fish)、显色原位杂交(cish)和银增强原位杂交(sish)等方法来鉴定表达或过度表达her2的癌症或细胞(wolff等人，arch pathol lab med.2007；131(1)：18-43，其通过引用整体并入本文。其他方法包括检测，该检测使用veratag系统测量总her2以及her2同二聚体和异二聚体以预测抗her2治疗的功效(shi等人，(2009)diagn mol pathol.mar；18(1)：11-21)，其通过引用整体并入本文。
[0765]
ihc的her2检测结果分为三类：阳性、模棱两可和阴性。阳性状态的评分为3+，表示浸润性肿瘤细胞中>30％的均匀强烈膜染色。模棱两可的状态得分为2+，表示在至少10％的细胞中膜完全染色，强度不均匀或弱，或者在≤30％的肿瘤细胞中膜强烈染色。阴性状态的得分为1+或0，表示在任何比例的肿瘤细胞中膜染色均较弱或不完全，或者没有染色(wolff等人，同上)。在本发明的上下文中，得分3+或2+被认为是“her2阳性”。
[0766]
用于her2基因扩增的荧光(fish)或显色(cish)原位杂交已成为乳腺癌患者诊断工作不可或缺的一部分。原位杂交的原理很简单：与感兴趣的基因组序列互补的dna探针被生成，标记并随后与靶组织杂交。fish/cish方法可用于多种样品：细胞系、冷冻组织、石蜡包埋的组织和微组织阵列。fish利用荧光显微镜，而cish利用光学显微镜(gutierrez和
schiff(2011)arch pathol lab med.135(1):55
–
62)。与fish相比，cish在检测基因扩增方面具有一些优势：1)永久染色，样品可以存档；2)使用明场显微镜；3)易于识别靶细胞；4)容易评估肿瘤的异质性，但是cish不能确定实际的基因拷贝数(lambros等人，hum pathol.2007年8月；38(8)：1105-22)。
[0767]
her2 fish阳性的定义是:在没有内部对照探针或her2/cep 17比率超过2.2的检测系统中，平均有大于6个her2基因拷贝/细胞核，其中cep17是her2基因所在的17染色体的着丝粒探针。对于没有内部对照的系统，her2 fish分析的模棱两可范围定义为her/cep比从1.8到2.2或平均基因拷贝数在4.0到6.0之间。对于没有内部对照探针的系统，阴性her2 fish扩增定义为her2/cep17比值小于1.8或每个核平均少于四个her2基因拷贝(wolff等人，同上)。在本发明的上下文中，阳性或模棱两可的fish状态被认为是“her2阳性”。
[0768]
配制药学上有效的组合物和药物
[0769]
可以将根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car和细胞配制成用于临床的药物组合物，并且可以包含药学上可接受的运载体、稀释剂、赋形剂或佐剂。
[0770]
根据本发明，还提供了用于生产药学上有用的组合物的方法，这种生产方法可以包括一个或多个选自以下的步骤：分离本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car、或细胞；和/或将分离的本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car或细胞与药学上可接受的运载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合。
[0771]
例如，本发明的另一个方面涉及配制或生产用于治疗癌症的药物或药物组合物的方法，该方法包括通过混合如本文所述的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car或细胞，以及药学上可接受的运载体、佐剂、赋形剂或稀释剂。
[0772]
可以将根据本发明方面的抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car、细胞、药物和药物组合物配制为可通过多种途径施用，包括但不限于肠胃外、静脉内、动脉内、肌肉内、肿瘤内、口腔和鼻腔。所述药物和组合物可以配制为用于注射或配制为固体形式。抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、car、细胞和治疗剂可以配制为流体或固体形式。可以配制流体制剂以通过注射到人体或动物体的选定区域来给药。
[0773]
优选以“治疗有效量”施用抗体、抗原结合片段、多肽、结合物、核酸、载体、组合物、car或细胞，这足以显示出对个体的有益作用。实际给药的量以及给药的速率和时间过程将取决于所治疗疾病的性质和严重程度。治疗处方，例如决定剂量等，是全科医生和其他医生的责任，并且通常要考虑待治疗的疾病、个别患者的病情、递送部位、给药方法和从业者已知的其他因素。上述技术和方案的实施例可以在2000年由利平科特，威廉&威尔金斯出版社出版的《雷明顿药学(remington
’
s pharmaceutical sciences)(第20版)》中找到，其通过引用并入本文。
[0774]
抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、car、细胞、药物和药物组合物可单独或与其他治疗组合给药，或根据待治疗的病症同时或依次给药。所述另一种治疗可以是一种或多种治疗剂。
[0775]
在本说明书中，可以同时或依次施用本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、car、细胞或组合物和治疗剂。所述治疗剂可以是化学治疗剂。
[0776]
在一些实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、组
合物、car或细胞的治疗可以伴随化学疗法。
[0777]
在一些实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、组合物、car或细胞的治疗可以伴有至少一种抗癌剂。“至少一种抗癌剂”是指有效治疗恶性或癌性疾病，例如本文所述的癌症的一种或两种或三种或三种或四种或更多种药物。
[0778]
同时给药是指将抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、组合物、car或细胞与治疗剂或抗癌剂一起给药，例如作为包含两种试剂的药物组合物(联合制剂)，或紧接着彼此并可选地通过相同的给药途径，例如到同一条动脉、静脉或其他血管。
[0779]
依次给药是指在给定的时间间隔后给药抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、组合物、car、细胞或治疗剂/抗癌剂中的一种，以此与另一药剂分开给药。尽管在某些实施例中是这种情况，但是不需要通过相同的途径来施用两种药剂。所述该时间间隔可以是任何时间间隔。
[0780]
如本文所述的治疗剂或抗癌剂可以是抗her2抗体或靶向her2的试剂。在一些实施方式中，本文所述的治疗剂或抗癌剂是曲妥珠单抗曲妥珠单抗emtansine拉帕替尼和/或帕妥珠单抗中的一种或多种。在一些实施例中，本例所述抗体、抗原结合分子或多肽与上述一种或多种药物，例如曲妥珠单抗和/或帕妥珠单抗联合使用，例如同时或依次使用。
[0781]
可以配制本文所述的治疗剂或抗癌剂，使其适于注射或输注至肿瘤或血液。
[0782]
化学疗法/放射疗法
[0783]
化学疗法和放射疗法分别是指用药物或电离辐射治疗癌症(例如，使用x射线或γ射线的放射疗法)。
[0784]
所述药物可以是化学实体，例如小分子药物、抗生素、dna嵌入剂、蛋白质抑制剂(例如激酶抑制剂)或生物制剂，例如抗体、抗体片段、核酸或肽适体、核酸(例如dna、rna)、肽、多肽或蛋白质。所述药物可以配制成药物组合物或药物。所述制剂可以包含一种或多种药物(例如一种或多种活性剂)以及一种或多种药学上可接受的稀释剂、赋形剂或运载体。
[0785]
治疗可能涉及一种以上药物的给药。药物可以单独使用，或与其他治疗方法结合使用，也可以根据待治疗的病症同时或依次使用。例如，所述化学疗法可以是涉及两种药物给药的联合疗法，其中的一种或多种可以旨在治疗癌症。
[0786]
所述化学疗法可以通过一种或多种给药途径给药，例如肠胃外、静脉内注射、口服、皮下、皮内或瘤内。
[0787]
所述化疗疗法可以根据治疗方案进行。所述治疗方案可以是化学疗法施用的预定时间表、计划、方案或计划表，其可以由医师或医学从业者准备并且可以定制以适合需要治疗的患者。
[0788]
所述治疗方案可以表示以下一种或多种：向患者施用的化学疗法的类型；每种药物或放射线的剂量；给药之间的时间间隔；每次治疗的时间；任何治疗假期的数量和性质(如果有的话)。对于联合治疗，可以提供单一治疗方案，该方案表明每种药物的给药方式。
[0789]
化学治疗药物和生物制剂可以选自：烷化剂，例如顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、甲乙胺(mechlorethamine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥
(chlorambucil)、异环磷酰胺(ifosfamide)；嘌呤或嘧啶抗代谢物，例如硫唑嘌呤或巯基嘌呤；生物碱和类萜，例如长春花生物碱(例如长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春地辛(vindesine))、鬼臼毒素(podophyl lotoxin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、紫杉烷类例如紫杉醇(taxol tm
)、多西他赛(docetaxel)；拓扑异构酶抑制剂，例如i型拓扑异构酶抑制剂喜树碱(camptothecins)、伊立替康(irinotecan)和托泊替康(topotecan)，或i i型拓扑异构酶抑制剂胺苯吖啶(amsacrine)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、替尼泊苷(epirubicin)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类抗生素)，如放线菌素(dactinomycin)、阿霉素(doxorubicin，adriamycin
tm
)、表柔比星(epirubicin)、博来霉素(bleomycin)、雷帕霉素(rapamycin)；基于抗体的试剂，例如抗pd-1抗体、抗pd-l1抗体、抗tim-3抗体、抗ctla-4、抗4-1bb、抗gitr、抗cd27、抗blta、抗ox43、抗vegf、抗tnfα、抗il-2、抗gpi ib/ii ia、抗cd-52、抗cd20、抗rsv、抗her2/neu(erbb2)、抗tnf受体、抗egfr抗体、单克隆抗体或抗体片段，其实例包括：西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、巴利昔单抗(basiliximab)、贝伐单抗(bevacizumab，)、阿昔单抗(abciximab)、达克珠单抗(daclizumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、利妥昔单抗(rituximab，)、帕利珠单抗(palivizumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、益赛普(etanercept)、阿达莫单抗(adalimumab)、尼莫珠单抗(nimotuzumab)；egfr抑制剂，如厄洛替尼(erlotinib)、西妥昔单抗(cetuximab)和吉非替尼(gefitinib)；抗血管生成剂，例如贝伐单抗(bevacizumab，)；癌症疫苗，例如sipuleucel-t
[0790]
进一步化学治疗药物可以选自：13-顺式视黄酸(13-cis-retinoic acid)、2-氯去氧腺苷(2-chlorodeoxyadenosine)、5-氮杂胞苷(5-azacitidine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)、白蛋白结合紫杉醇(abraxane)、异维甲酸放线菌素-d阿德里亚霉素(actinomycin-d)、氟尿嘧啶依维莫司安归宁可的索可的索阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、力比泰(alimta)、阿利维甲酸(alitretinoin)、长春花碱马法兰全反式维甲酸(all-transretinoic acid)、α干扰素(alpha interferon)、六甲密胺(altretamine)、氨甲喋呤(amethopterin)、氨磷汀(amifostine)、氨基谷氨酰胺(aminoglutethimide)、阿那格雷(anagrelide)、尼鲁米特阿那曲唑(anastrozole)、阿糖胞苷(arabinosylcytosine)、阿法达贝泊汀阿可达瑞宁得阿诺新奈拉滨三氧化二砷(arsenic trioxide)、天冬酰胺酶(asparaginase)、阿瓦斯丁(atra)、阿扎胞苷(azacitidine)、卡介苗(bcg)、卡氮芥(bcnu)、苯达莫司汀(bendamustine)、贝伐单抗(bevacizumab)、贝克萨罗汀(bexarotene)、百克沙比卡鲁胺(bicalutamide)、卡莫司汀(bicnu)、博来霉素
博来霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、白消安甲酰四氢叶酸钙(calcium leucovorin)、坎帕斯伊立替康喜树碱11(camptothecin-11)、卡培他滨(capecitabine)、carac
tm
、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、康士得cc-5013、cci-779、环已亚硝脲(ccnu)、顺铂(cddp)、洛莫司汀(ceenu)、柔红霉素西妥昔单抗(cetuximab)、氯丁酸苄酯(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)，柠檬酸因子(citrovorum factor)、克拉屈滨(cladribine)、可的松(cortisone)、更生霉素盐酸伊立替康(cpt-11)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、氨鲁米特阿糖胞苷赛德萨-u(cytarabine )、癌得星地西他滨(dacogen)、放线菌素(dactinomycin)、阿法达贝泊汀(darbepoetin alfa)、达沙替尼(dasatinib)、道诺霉素(daunomycin)、达柔比星(daunorubicin)、盐酸达柔比星(daunorubicin hydrochloride)、达柔比星脂质体(daunorubicin liposomal)、柔红霉素脂质体地塞米松(decadron)、地西他滨(decitabine)、泼尼松龙泼尼松地尼白介素(denileukin)、地尼白介素(diftitox)、脂质体阿糖胞苷(depocyt
tm
)、地塞米松(dexamethasone)、醋酸地塞米松(dexamethasone acetate)、地塞米松磷酸钠(dexamethasone sodium phosphate)、地塞米松(dexasone)、地拉佐烷(dexrazoxane)、米托葸醌(dhad)、dic、diodex、多西他赛(docetaxel)，盐酸阿霉素脂质体阿霉素(doxorubicin)、阿霉素脂质体(doxorubicin liposomal,)、羟基脲(droxia
tm
)、氮烯咪胺(dtic)、达卡巴嗪醋酸甲泼尼龙醋酸亮丙瑞林(eligard
tm
)、表柔比星(ellence
tm
)、奥利沙铂(eloxatin
tm
)、天冬酰胺酶依立适表柔比星(epirubicin,)、阿法依泊汀(epoetin alfa)、爱必妥(erbitux)、厄洛替尼(erlotinib)、欧文氏菌l-天冬酰胺酶(erwinia l-asparaginase)、雌莫司汀(estramustine)、依托泊福斯(ethyol )、依托泊苷(etoposide)、依托泊苷磷酸盐(etoposide phosphate)、氟他胺依维莫司(everolimus)、雷洛昔芬依西美坦(exemestane)、氟维司群弗隆非格司亭(filgrastim)、氟尿苷(floxuridine)、福达华氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧啶氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、亚叶酸(folinic acid)、氟尿苷氟维西汀(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)、格列卫(gleevec
tm
)、格立得(wafer)、戈瑟瑞林(goserelin)、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、赫赛汀地塞米松(hexadrol)、克瘤灵六甲基三聚氰胺(hexamethylmelamine)、六甲蜜胺(hmm)、和美新羟基脲
醋酸氢化可的松(hydrocort)、氢化可的松(hydrocortisone)、氢化可的松磷酸钠(hydrocortisone sodium phosphate)、氢化可的松琥珀酸钠(hydrocortisone sodium succinate)、氢化可的松磷酸酯(hydrocortone phosphate)、羟基丁酸(hydroxyurea)、依立妥单抗(ibritumomab)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、伊达比星伊达比星(idarubicin)、ifn-α、异环磷酰胺(ifosfamide)、il-11、il-2、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)、咪唑羧酰胺(imidazole carboxamide)、干扰素α、干扰素α-2b(peg结合物)、白介素-2、白介素-11、(干扰素α-2b)、易瑞沙伊立替康(irinotecan)、异维a酸(isotretinoin)、伊沙贝比隆(ixabepilone)、伊沙匹隆(ixempra
tm
)、门冬酰胺酶(kidrolase)、拉帕替尼(lapatinib)、l-天冬酰胺酶、lcr、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑(letrozole)、白斑素、瘤可宁(leukeran)、沙格司亭(leukine
tm
)、来普洛利特(leuprolide)、长春新碱(leurocristine)、克拉屈滨(leustatin
tm
)、脂质体ara-c(liposomal ara-c)、液体pred(liquid)、洛莫司汀(lomustine)、l-pam、l-糖胶溶素、亮丙瑞林亮丙瑞林(lupron)、甲基苄肼maxidex、甲氮芥(mechlorethamine)、甲氮芥盐酸盐(mechlorethamine hydrochloride)、美达拉酮甲泼尼龙甲地孕酮甲地孕酮(megestrol)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、米尔法兰(melphalan)、巯基嘌呤、美司钠(mesna)、美司钠(mesnex
tm
)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氨蝶呤钠(methotrexate sodium)、甲基强的松龙(methylprednisolone)、强的松丝裂霉素、丝裂霉素c、米托蒽醌(mitoxantrone)、mtc、甲氨蝶呤(mtx)、二氯甲二乙胺氮介(mustine)、突变霉素马利兰mylocel
tm
、吉妥单抗诺维本奈拉滨(nelarabine)、环磷酰胺非格司亭(neulasta
tm
)、非格司亭索拉非尼尼鲁米特尼鲁米特(nilutamide)、喷司他丁氮芥末(nitrogen mustard)、米托蒽醌奥曲肽(octreotide)、奥曲肽乙酸酯(octreotide acetate)、硫酸长春新碱onxal
tm
、oprevelkin、奥沙利铂(oxal iplatin)、紫杉醇、结合紫杉醇的蛋白、帕米膦酸(pamidronate)、帕尼单抗(panitumumab)、阿利维a酸伯尔定泼尼松龙peg干扰素、培门冬酶(pegaspargase)、培非格司亭(pegfilgrastim)、佩乐能(peg-intron
tm
)、peg-l-天冬酰胺酶、培美曲塞(pemetrexed)、戊抑素(pentostatin)、苯丙氨酸芥子碱(phenylalanine mustard)、顺铂顺铂强的松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松
普卡巴嗪(procarbazine)、普罗克里特阿地白介素prolifeprospan 20与卡莫斯汀植入物雷洛昔芬(raloxifene)、雷利米得甲氨蝶呤美罗华利妥昔单抗(rituximab)、罗扰素((干扰素α-2a))、盐酸鲁比霉素(rubidomycin hydrochloride)、善宁善龙(sandostatin)、沙格司亭(sargramostim)、甲强龙索拉非尼(sorafenib)、达沙替尼(sprycel
tm
)、sti-571、链脲霉素(streptozocin)、su11248、舒尼替尼(sunitinib)、索坦他莫昔芬、特罗凯贝沙罗汀紫杉醇紫杉特尔替莫唑胺替莫唑胺(temozolomide)、替莫罗莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、tespa、沙利度胺(thalidomide)、沙利度胺硫鸟嘌呤(thioguanine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、硫代磷酰胺(thiophosphoamide)、塞替派塞替派(thiotepa)、拓扑杀托泊替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、驮瑞塞尔托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、存达维甲酸(tretinoin)、trexall
tm
、三氧化二砷tspa、泰立沙vcr、维克替比(vectibix
tm
)、万珂维甲酸viadur
tm
、维达扎长春碱(vinblastine)、长春碱硫酸盐(vinblastine sulfate)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、酒石酸长春瑞滨(vinorelbine tartrate)、长春花碱(vlb)、vm-26、伏立诺他(vorinostat)、vp-16、希罗达链佐星泽瓦林(zevalin
tm
)、诺雷得唑来膦酸(zoledronic acid)、伏立诺他(zolinza)、择泰
[0791]
在一些实施方式中，根据本发明的抗体/抗原结合片段与阿霉素、表柔比星、紫杉醇、多西紫杉醇、氟尿嘧啶、环磷酰胺、甲氨蝶呤和卡培他滨中的一种或多种联合施用。
[0792]
剂量方案
[0793]
可以提供多种剂量的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、car或细胞。一个或多个或每个剂量可以同时或依次施用另一种治疗剂。
[0794]
多个剂量可以通过预定时间间隔分开，该预定时间间隔可以被选择为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天中的一种，或1、2、3、4、5或6个月。举例来说，剂量可以每7、14、21或28天(正负3、2或1天)给予一次。
[0795]
试剂盒
[0796]
在本发明的一些方面，提供了诸元件的一套试剂盒。在一些实施方式中，所述试剂
盒可以具有至少一个容器，该容器具有预定量的根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、car或细胞。试剂盒可以以药物或药物组合物的形式提供抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、car或细胞，并且可以与用于给药患者的说明书一起提供给患者以治疗指定的疾病或病症。抗体、抗原结合片段或多肽可以被配制，使其适合于注射或输注至肿瘤或血液。
[0797]
在一些实施方式中，所述试剂盒可以进一步包括至少一个容器，该容器含有预定量的另一种治疗剂(例如化学治疗剂或抗癌剂)。在这样的实施方式中，所述试剂盒还可以包含第二种药物或药物组合物，使得可以同时或分别施用两种药物或药物组合物，从而提供针对特定疾病或病症的联合治疗。还可以配制治疗剂或抗癌剂以适合于注射或输注到肿瘤或血液。
[0798]
受试者
[0799]
用根据本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、缀合物、核酸、载体、car或细胞治疗的受试者可以是任何动物或人类。所述受试者优选是哺乳动物，更优选是人类。所述受试者可以是非人类哺乳动物，但更优选是人类。所述受试者可以是男性或女性。所述受试者可以是患者。受试者可能已经被诊断出患有需要治疗的疾病或病症，或者被怀疑患有这种疾病或病症。
[0800]
序列同一性
[0801]
序列同一性百分比(％)被定义为在比对序列后，候选序列中与给定列出序列(由seq id no表示)中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比，在必要时引入缺口以达到最大序列同一性，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分。优选地在各个序列的完整长度上计算序列同一性。
[0802]
当比对的序列具有不同的长度时，较短的比较序列的序列同一性可以在较长的给定序列的完整长度上确定；或者，如果比较序列长于给定序列，则可以在较短的给定序列的完整长度上确定比较序列的序列同一性。
[0803]
可以通过本领域技术人员已知的多种方式来实现用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对，例如，使用可公开获得的计算机软件，如clustalw 1.82、clustalo、t-coffee或megalign(dnastar)软件。使用此类软件时，默认参数例如对于空位罚分和延伸罚分，优选使用。clustalw 1.82的默认参数是：蛋白质空位开放罚分＝10.0，蛋白质空位延伸罚分＝0.2，蛋白质基质＝gonnet，蛋白质/dna endgap＝-1，蛋白质/dna gapdist＝4。clustalo的默认参数如j.(2005)“通过hmm-hmm比较进行蛋白质同源性检测”生物信息学21，951-960中所述。
[0804]
重组生产
[0805]
本发明的免疫原、抗体、片段、多肽、缀合物和car可以通过重组表达产生。适用于重组生产的分子生物学技术是本领域众所周知的，例如green和sambrook在《分子克隆：实验室手册(第4版)》(冷泉港出版社，2012年)中所述，在此以引用的方式整体并入本文。
[0806]
在一些实施方式中，本文所述的核酸是纯化的或分离的，例如来自其他核酸或天然存在的生物材料。在一些实施方式中，所述核酸包含dna和/或rna或由其组成。
[0807]
表达可以来自核苷酸序列。核苷酸序列可以包含在载体中。如本文所用，“载体”是用作媒介将外来遗传物质转移到细胞中的寡核苷酸分子(dna或rna)。所述载体可以是用于
在细胞中表达外源遗传物质的表达载体。这样的载体可以包括与编码要表达的序列的核苷酸序列可操作地连接的启动子序列。载体还可以包括终止密码子和表达增强子。本领域已知的任何合适的载体、启动子、增强子和终止密码子可用于表达来自根据本发明的载体的肽或多肽。在一些实施方式中，载体可以是质粒、mac、病毒等。在一些实施方式中，载体可以是真核表达载体，例如包含在真核细胞中表达源于载体表达蛋白质所必需的元素的载体。在一些实施方式中，所述载体可以是哺乳动物表达载体，例如包含巨细胞病毒(cmv)或sv40启动子以驱动蛋白质表达。
[0808]
术语“可操作地连接”可以包括这样的情况，其中所选核苷酸序列和调节性核苷酸序列(例如启动子和/或增强子)以将核苷酸序列的表达置于调节序列影响或控制下的方式共价连接(从而形成表达盒)。因此，如果调控序列能够影响核苷酸序列的转录，则该调控序列可操作地连接至所选核苷酸序列。然后可以将所得的转录本翻译成所需的肽或多肽。
[0809]
对于根据本发明的重组生产，可以使用适合于表达多肽的任何细胞。所述细胞可以是原核细胞或真核细胞。在一些实施方式中，所述细胞是原核细胞，例如古细菌或细菌的细胞。在一些实施方式中，所述细菌可以是革兰氏阴性细菌，如肠杆菌科的细菌，例如大肠杆菌。
[0810]
在一些实施方式中，所述细胞是真核细胞，如酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞，例如cho、hek、hela或cos细胞。在一些实施方式中，所述宿主细胞是非人类细胞，例如非人类的哺乳动物细胞。
[0811]
在某些情况下，所述细胞不是原核细胞，因为某些原核细胞不允许与真核细胞相同的折叠或翻译后修饰。另外，在真核生物中可能有非常高的表达水平，并且使用适当的标签可以更容易地从真核生物中纯化蛋白质。也可以使用增强蛋白质向培养基中分泌的特定质粒。
[0812]
生产可以涉及经修饰以表达肽或多肽的真核细胞的培养或发酵。所述培养或发酵可在配备有适当养分、空气/氧气和/或生长因子的生物反应器中进行。分泌的蛋白质可通过从细胞中分离培养基/发酵液，提取蛋白质含量并分离单个蛋白质以分离分泌的肽或多肽来收集。培养、发酵和分离技术是本领域技术人员所熟知的，并且描述于例如green和sambrook，《分子克隆：实验室手册(第4版)》；其通过引用并入本文。
[0813]
生物反应器包括一个或多个可以在其中培养细胞的容器。生物反应器中的培养可以连续进行，反应物连续流入反应器，培养细胞连续流出。或者，培养可以分批进行。生物反应器监测和控制环境条件，例如ph、氧气、流入和流出容器的流速以及容器内的搅动，从而为培养的细胞提供最佳条件。
[0814]
培养表达免疫原、抗体、片段、多肽、缀合物或car的细胞后，优选分离感兴趣的肽/多肽。可以使用本领域已知的从细胞培养物中分离蛋白质的任何合适方法。为了从培养物中分离肽/多肽，可能有必要首先将培养的细胞与含有目的肽/多肽的培养基分离。如果从细胞分泌目的肽/多肽，则可通过离心将细胞与含有分泌的目的肽/多肽的培养基分离。如果目的肽/多肽聚集在细胞内，则有必要在离心之前破坏细胞，例如使用超声、快速冻融或渗透裂解法。离心将产生含有培养细胞或培养细胞的细胞碎片的沉淀，以及含有培养基和感兴趣的肽/多肽的上清液。
[0815]
然后可能需要从上清液或培养基中分离感兴趣的肽/多肽，所述上清液或培养基
可以包含其他蛋白质和非蛋白质成分。从上清液或培养基中分离蛋白质成分的常用方法是沉淀。不同溶解度的蛋白质会在不同浓度的沉淀剂(例如硫酸铵)下沉淀。例如，在低浓度的沉淀剂下，提取水溶性蛋白质。因此，通过添加不同的浓度增加的沉淀剂，可以区分具有不同溶解度的蛋白质。随后可使用透析法从分离的蛋白质中去除硫酸铵。
[0816]
区分不同蛋白质的其他方法是本领域已知的，例如离子交换层析和大小层析。这些可以用作沉淀的替代，或者可以在沉淀之后进行。
[0817]
一旦从培养物中分离出目标肽/多肽，可能需要或必须浓缩肽或多肽。浓缩蛋白质的许多方法是本领域已知的，例如超滤或冻干。
[0818]
序列
[0819]
[0820]
[0821]
[0822]
[0823]
[0824]
[0825]
[0826]
[0827]
[0828]
[0829]
[0830]
[0831]
[0832]
[0833]
[0834][0835]
本发明包括所描述的方面和优选特征的组合，除非明显不允许或明确避免这种组合。
[0836]
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。
[0837]
现在将参考附图通过实施例的方式示出本发明的方面和实施例。对于本领域技术人员而言，其他方面和实施例将是显而易见的。本文中提及的所有文件均通过引用并入本文。
[0838]
在整个说明书中，包括所附的权利要求书，除非上下文另有要求，否则词语“包括”以及诸如“包含”和“含有”之类的变体将被理解为意味着包含一个指定的整数或步长或一组整数或步长，但不排除任何其他整数或步长或一组整数或步长。
[0839]
必须注意，在说明书和所附权利要求书中使用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数对象，除非上下文另外明确指出。范围可以在本文中表示为从“大约”一个特定值和/或到“大约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一实施例包括从一个特定值和/或至另一特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，可以理解为特定值形成另一实施例。
附图说明
[0840]
说明本发明原理的实施例和实验现在将参照附图进行讨论，其中:
[0841]
图1.抗her2抗体克隆(a)p1a3、(b)p1c5、(c)p1e4和(d)p1f1的轻链可变域氨基酸序列。cdr用下划线标出。
[0842]
图2.抗her2抗体克隆(a)p1a3、(b)p1c5、(c)p1e4和(d)p1f1的重链可变域氨基酸序列。cdr用下划线标出。
[0843]
图3.选自抗体噬菌体展示文库的细菌生产的粗制fabs与固定her2蛋白的结合。
[0844]
图4.在spr分析中，p1a3、p1c5、p1e4和p1f1与固定在微芯片上的her-2、egfr和her-3的结合。曲妥珠单抗用作her-2阳性结合剂对照。
[0845]
图5.p1a3、p1c5、p1e4和p1f1与her-2过表达细胞(a)、低表达细胞(b)或不表达细胞(c)的结合。曲妥珠单抗用作阳性结合剂对照，单独的二抗用作阴性对照。
[0846]
图6.p1a3、p1c5、p1e4和p1f1与过表达her-2的细胞sk-br-3或较低表达的bt-20和mcf-7细胞的剂量效应结合。显示的是在各种浓度的抗体存在下孵育细胞后的平均荧光强度(mfi)，结合通过使用氟标记的二抗显示，曲妥珠单抗用作阳性结合对照。
[0847]
图7.曲妥珠单抗、p1a3、p1c5、p1e4和p1f1与已与固定抗体结合的her-2的结合。p1a3、p1c5、p1e4和p1f1与结合在曲妥珠单抗上的her-2结合(第一个图)。曲妥珠单抗结合与任何sign抗体结合的her-2(所有其他图)。
[0848]
图8.在裂解缓冲液(裂解阳性对照)、曲妥珠单抗、同种型对照或p1a3、p1c5、p1e4或p1f1存在下孵育后，在bt-474细胞上用碘化丙啶染色。被碘化丙啶染色是细胞裂解的证据。
[0849]
图9.p1e4诱导的细胞凋亡。在p1e4或曲妥珠单抗存在下孵育后，用碘化丙锭和膜联蛋白(annexin-v)对bt-474细胞(a)和sk-br-3细胞(b)染色。
[0850]
图10.通过胱冬酶3/7触发细胞凋亡，p1e4切割parp。(a)在曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或p1e4存在下孵育bt-474细胞后对碘化丙啶的摄取。(b)在曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或p1e4存在下孵育bt-474细胞后，胱冬酶3/7的激活。(c)在与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或p1e4孵育后bt-474细胞中切割的parp水平。
[0851]
图11.在p1e4或曲妥珠单抗存在下孵育bt-474细胞后细胞裂解的动力学。图示为碘化丙啶阳性细胞的平均比例
±
sd。
[0852]
图12.用1μg/ml、5μg/ml或25μg/ml抗体孵育后，p1e4、曲妥珠单抗和帕妥珠单抗对b-474肿瘤细胞生长的细胞抑制作用。将mda-mb-468细胞的生长用作阴性对照。图示为与在没有任何处理的情况下的bt-474细胞的生长相比，平均细胞生长
±
sd。
[0853]
图13.与1μg/ml、5μg/ml或25μg/ml的抗体孵育后，与单一抗体相比，p1e4、曲妥珠单抗和帕妥珠单抗组合对bt-474肿瘤细胞生长的细胞抑制作用(a)。将mda-mb-468(her-2
阴性细胞)细胞生长用作阴性对照(b)。图示为与在没有任何处理的情况下的bt-474细胞的生长相比，平均细胞生长
±
sd。
[0854]
图14.与曲妥珠单抗相比，bt-474细胞中由p1a3、p1c5、p1e4和p1f1诱导的adcc。在各种浓度的抗体存在下，以效应子与靶标10：1的比率孵育细胞。图示为平均细胞死亡
±
sd。
[0855]
图15.注射了bt-474细胞并用各种剂量的抗体治疗的裸鼠中，通过p1e4和曲妥珠单抗治疗的肿瘤控制和消退。图示为每组5只小鼠的平均肿瘤体积
±
sem。黑线代表抗体治疗开始时的肿瘤大小。
[0856]
图16.使用抗her2抗体组合的长期有效肿瘤控制。用10mg/kg抗体的p1e4、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗组合治疗注射了her-2+bt-474细胞的裸鼠。图示为每组5只小鼠的平均肿瘤体积
±
sem。黑色虚线表示抗体治疗开始时的肿瘤大小。
[0857]
图17.抗her2 car的构建示意图，显示了信号肽(sp)、抗her2 scfv、igh铰链、cd28跨膜结构域以及4-1bb和cd3ζ结构域的信号尾巴。
[0858]
图18a和18b.图示为包含克隆a4、b4、b5、d4、e1、f5和g3的抗her2 car t细胞的特征。(18a)car t细胞对bt474人乳腺癌细胞的细胞溶解百分比。(18b)car t细胞的细胞因子(ifnγ和il-2)产量。
[0859]
图19.抗her2 car mrna的示意图。
[0860]
图20a和20b.图示为包含克隆c3的抗her2 car t细胞的特征。(20a)car t细胞对bt474人乳腺癌细胞的细胞溶解百分比。(20b)car t细胞的细胞因子(ifnγ和il-2)产量。
实施例
[0861]
实施例1:发现
[0862]
在三轮生物淘选中，通过噬菌体展示从人fabs文库中分离出的抗人her-2结合抗体。通过elisa测定了来自人fabs库的分离的fabs与固定的her-2蛋白的结合(图3)。通过表面等离子体共振(spr)测量每个克隆从her-2的解离速率(k
d
)。结果显示于表1。
[0863]
表1.通过spr在固定化的her2蛋白上测得的解离速率(k
d
)
[0864][0865][0866]
最初选择了四个克隆用于进一步表征：p1a3、p1c5、p1e4和p1f1。还选择了克隆a4、b4、b5、c3、d4、e1、f5和g3进行表征和研究在car中的效用。
[0867]
实施例2：与her-2的特异性结合
[0868]
与her-2的结合
[0869]
利用结合在微芯片上的可溶性her-2，通过spr检测四个抗体克隆(p1a3、p1c5、p1e4和p1f1)与her-2之间的相互作用。为了评估结合的特异性，还利用与her-2密切相关的分子，即egfr和her-3作为结合抗原。人源化抗her-2抗体曲妥珠单抗用作阳性对照。
[0870]
这四种抗体显示出与人her-2的特异性结合，与her-3或egfr没有任何相互作用(图4)。
[0871]
与表达her-2的细胞结合
[0872]
为了进一步表征抗体与her-2的结合，将抗体与组成型过表达her-2的的细胞孵育，如bt-474和sk-br-3；表达但不过度表达her-2的细胞，如bt-20和mcf-7；或不表达抗原
的三阴性癌细胞系如mda-mb-468。bt-474和sk-br-3细胞系的her-2表达(即过表达)均归为3+。bt-20细胞系分类为基础her-2细胞系，表达得分为0/1+；mcf-7得分相同，被归类为腔肿瘤细胞系。mda-mb-468的her-2表达得分为0(subik k等人，2010，breast cancer(auckl)，4：35-41)。
[0873]
孵育后，添加第二抗体以通过流式细胞仪检测与细胞的结合。在所有测定中，曲妥珠单抗均用作阳性对照。
[0874]
四种抗her-2抗体以与曲妥珠单抗相似的方式与过表达her-2(图5a)和表达her-2(图5b)的细胞结合，而在her-2阴性细胞上未观察到结合(图5c)。
[0875]
然后将抗体与各种浓度的her-2表达细胞一起孵育，以研究剂量效应结合图谱。在这种测定中，e4显示出与曲妥珠单抗最接近的结合曲线(图6)。
[0876]
实施例3：与不同于曲妥珠单抗结合的抗原决定簇结合
[0877]
为了评估四种抗her-2抗体p1a3、p1c5、p1e4和p1f1是否与曲妥珠单抗结合相同的表位，通过spr进行了结合测定。简而言之，将感兴趣的抗体固定在spr微芯片上，重组her-2流过，然后与固定的抗体结合。之后，所有其他抗体都流过并测量了它们的结合。
[0878]
所有四种抗体均显示相似的树状图，表明它们共享共同的表位或与非常接近的表位结合。但是，曲妥珠单抗显示出不同的结合特性，表明这四种抗体不共享曲妥珠单抗的表位(图7)。
[0879]
如上所述通过spr评估克隆a4、b4、b5、c3、d4、e1、f5和g3的结合表位。将结合概况与曲妥珠单抗的结合概况进行比较，发现克隆a4、b4、b5、c3、d4、e1、f5和g3与曲妥珠单抗结合不同的表位。
[0880]
实施例4：对人类her-2的亲和力
[0881]
亲和力通过spr测量。在四个克隆中，e4对her-2的亲和力最高(表2)。
[0882]
表2：抗体p1a3、p1c5、p1e4和p1f1对her-2的亲和力。
[0883][0884]
克隆a4、b4、b5、c3、d4、e1、f5和g3的结合特征也通过spr测定。测定抗her2 fab分子的缔合速率常数，解离常数(k
a
，k
d
)和平衡解离常数(k
d
)。将人her2蛋白(50μg/ml)固定在spr传感器芯片上，并以流通细胞2倍或3倍稀释度暴露于五种不同浓度的fab。1：1langmuir模型用于导出常数。
[0885]
结果显示于表3。
[0886]
表3：a4、b4、b5、c3、d4、e1、f5和g3 fab对her-2的亲和力。
[0887][0888][0889]
实施例5：作用机理
[0890]
膜破裂
[0891]
在p1a3、p1c5、p1e4或p1f1和碘化丙锭的存在下孵育her2过表达的bt-474细胞。与曲妥珠单抗不同，这4种抗体诱导膜破坏，允许碘化丙啶插入，并证明诱导细胞死亡(图8)。
[0892]
诱导细胞凋亡
[0893]
在p1e4或曲妥珠单抗存在下孵育her2过表达的细胞系bt-474和sk-br-3，并用annexin-v和碘化丙啶染色以测量细胞凋亡和死亡。
[0894]
与p1e4孵育并显示碘化丙啶染色的细胞，即将死/死细胞，也显示与annexin-v染色，表明p1e4通过凋亡诱导细胞死亡(图9)。
[0895]
为了进一步证实细胞凋亡的诱导作用，将bt-474细胞在p1e4、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗(另一种抗her-2抗体)存在下进行孵育，以用于随后的丙锭摄入，胱冬酶3/7通路活化和切割的parp活化。胱冬酶3/7通路参与凋亡过程。胱冬酶3/7活化后，激活细胞核中切割的parp，进而触发了线粒体释放促凋亡因子，并阻断了dna修复过程。
[0896]
如前所示，在p1e4存在下孵育会导致碘化丙啶的摄取(图10a)。p1e4诱导胱冬酶3/7激活(图10b)并触发切割的parp(图10c)。曲妥珠单抗和帕妥珠单抗均未在试验中显示触发该通路，提示其作用机制不同。
[0897]
还分析了p1e4诱导的细胞死亡的动力学。简而言之，将bt-474和sk-br-3细胞与10μg/ml的e4或曲妥珠单抗在37℃条件下孵育。加入抗体后第10、20、30、40、50和60分钟收获细胞，并通过碘化丙啶摄取分析诱导的细胞死亡。
[0898]
加入p1e4后10-20分钟，细胞开始死亡，而与曲妥珠单抗一起孵育的细胞未显示任何裂解迹象(图11)。
[0899]
评估克隆a3、c5、f1、a4、b4、b5、c3、d4、e1、f5和g3的作用机理并发现其诱导细胞死亡，例如通过凋亡。
[0900]
实施例6：功效
[0901]
体外抗肿瘤活性
[0902]
为了评估抗体对肿瘤生长的活性，在各种浓度的p1e4存在下将bt-474细胞孵育72
il2的texmacs
tm
培养基中以1至2
×
10
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个细胞/ml的密度维持48小时。刺激过后，用编码抗-her2 car的慢病毒转导细胞，所述抗-her2 car包含克隆a4、b4、b5、d4、e1、f5和g3之一。
[0918]
转导后72小时，通过基于电阻抗的肿瘤细胞培养系统(xcelligence)实时分析抗肿瘤活性(细胞溶解百分比)。一式三份将bt474细胞(人乳腺癌细胞)以每孔10,000个细胞的密度接种在带有电极的96孔板(e板)中。24小时后，以每个靶细胞(bt474)对应3个效应细胞的比例加入car t细胞(效应细胞)。
[0919]
通过elisa测量48小时共培养后分泌到培养基中的细胞因子(ifn-γ和il-2)。三次的数据表示为平均值
±
sem
[0920]
结果显示在图18a和18b中。包含七个抗-her2 car中的每一个的car t细胞表现出肿瘤细胞的细胞溶解作用，即抗肿瘤活性(18a)和ifn-γ和il-2分泌的增加，即t细胞活化(18b)。
[0921]
电穿孔构造
[0922]
图19显示了抗her2 car mrna的示意图。
[0923]
car t细胞是通过mrna电穿孔产生的。如上所述，将来自健康供体的t细胞分离，活化并培养48小时。活化的t细胞用包含克隆c3的car mrna电穿孔(2ug每1
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6
t细胞)，并在电穿孔后20小时通过xcelligence系统评估其溶细胞活性(％)。通过elisa测量48小时共培养后分泌到培养基中的细胞因子(ifn-γ和il-2)。三次的数据表示为平均值
±
sem
[0924]
结果显示在图20a和20b中。包含抗her2 car(c3)的car t细胞表现出肿瘤细胞的细胞溶解作用，即抗肿瘤活性(20a)，和ifn-γ和il-2分泌增加，即t细胞活化(20b)。
[0925]
对肿瘤细胞的选择性
[0926]
评估根据本发明的抗her2 car t细胞区分过表达her2的细胞和具有较低或生理水平的her2的细胞的能力。对her2具有较低或中等亲和力的car t细胞可能能够区分高水平和低水平表达her2的细胞(例如liu等人，cancer res.2015；(75)(17)3596-3607)。
[0927]
本发明的抗-her2 car t细胞用过量表达her2的肿瘤细胞系刺激，例如sk-br3(乳腺癌)、sk-ov3(卵巢癌)和/或bt-474(乳腺癌)，或用以低水平或不可检测的水平表达her2的肿瘤细胞系刺激，例如mcf7(乳腺癌)、293t(胚胎肾脏)、a549(肺癌)、624mel(黑色素瘤)、pc3(前列腺癌)、mda231(乳腺癌)和/或mda468(乳腺癌)。24或48小时后，通过cd137(4-1bb)的上调，ifnγ和il2的分泌和/或表面cd107a的诱导表达来评估car t细胞的活化。将表达包含曲妥珠单抗的抗原结合结构域的car的t细胞(高亲和力car)和表达非her2特异性car的t细胞用作对照。通过流式细胞术(例如cd3+门控)测量cd137和cd107a的表达，通过elisa测量培养上清液中的细胞因子分泌。
[0928]
结果发现包含本发明的抗原结合分子的car-t细胞对高her2表达的肿瘤细胞具有强反应性，但是对低或无her2表达的肿瘤细胞系具有低反应性或无反应性。当暴露于表达高水平her2的细胞时，还发现抗her2 car t细胞分泌更高水平的细胞因子，这表明与表达低水平或不表达her2的细胞相比，t细胞的活化程度更高。
[0929]
为了评估抗her2 car t细胞是否能够区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞，使t细胞与过表达her2的肿瘤细胞(例如bt-474)和以生理水平表达her2的细胞(例如原代器官细胞系)接触。表达非her2特异性car的t细胞和高或低表达her2的细胞系用作对照。用表达her2的细胞刺激car t细胞4小时。通过监测cd107a上调来评估car t细胞的识别和激活，并通过流
式细胞术门控cd3+细胞进行分析。
[0930]
结果发现包含本发明的抗原结合分子的car-t细胞对her2过表达细胞具有选择性。这些细胞对过表达her2的细胞显示出强反应性，而当与器官细胞系接触时则表现出没有激活或弱激活。

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