基于三氮杂环十二烷磺酰胺(“TCD”)的蛋白质分泌抑制剂的制作方法

基于三氮杂环十二烷磺酰胺(“tcd”)的蛋白质分泌抑制剂
技术领域
[0001]
本公开涉及基于三氮杂环十二烷磺酰胺(“tcd”)的蛋白质分泌抑制剂，包括其制造和使用方法。
[0002]
以引用并入的电子提交材料
[0003]
本申请含有作为本公开的一个单独部分的计算机可读取形式的序列表(文件名:40056p2_seqlisting.txt；20,193字节；于2019年2月11日建立)，其通过引用整体并入本文。


背景技术：

[0004]
蛋白质转移到内质网(“er”)构成蛋白质分泌的第一个步骤。在所有的真核细胞中，er蛋白质输入是必要的且对于快速生长的肿瘤细胞尤其重要。因此，蛋白质分泌的过程可以作为潜在癌症药物和细菌毒力因子的靶标。参见kalies和traffic,16(10):1027-1038(2015)。
[0005]
当n-端疏水性信号肽从核糖体突出时，即开始在细胞质中将蛋白质运输到er。当信号识别粒子(“srp”)与信号序列结合时，其使得核糖体-新生链-srp复合物靶向er膜，且在srp与其受体接触后驱动信号肽转移至sec61。sec61为由3个主要子单元(异三聚体)构成甜甜圈形状的er膜转运蛋白(aka易位子)。它包含一个“塞子”可以阻挡蛋白质进出er。当新生多肽的疏水区与sec61的“接合”区相互作用时，塞子会被取代进而允许该多肽转移到er腔体内。在哺乳类动物中，只有短蛋白质(小于160个氨基酸)可以在翻译后进入er，而小于120个氨基酸的蛋白质则是强制使用此路径。某些运输能力是经由钙调蛋白结合至信号序列。一旦抵达sec61通道，信号肽或信号锚插入sec61α的跨膜区(“tmd”)2和7之间，形成网关的侧面部分使该通道打开以供可溶性的分泌性蛋白通过。当由被sec61γ形成的疏水性夹钳围绕的10个tmd(sec61α)组成sec61通道时，通道打开取决于所有tmd实际参与的结构性改变。
[0006]
抑制蛋白传输通过er膜具有治疗或预防疾病(例如癌细胞生长和炎性反应)的潜力。已知的分泌抑制剂涵盖从广谱性至高度底物特异性，几乎可干扰该多步过程的任何阶段，甚至干扰被胞吞的抗原传输至细胞质内进行交叉呈递。这些抑制剂经由与信号肽、伴随蛋白或sec61通道相互作用来阻挡受体结合或防止蛋白运输到er内所需要的结构性改变。蛋白质分泌抑制剂的示例包含钙调蛋白抑制剂(例如，e6 berbamine(小蘖胺)和ophiobolin(蛇孢假壳素)a)、镧、固醇、环酯肽(例如hun-7293、cam741、nfi028、cotrainsin、apratoxin a、decatransin、缬胺霉素)、cada、环内脂类毒素(mycolactone)、eeyarestatin i(“esi”)和外毒素a。然而，以上这些分泌抑制剂遭受以下一种或多种情况：缺少sec61通道选择性，因结构复杂性的生产制造挑战，给药的分子量限制，生物有效性和分布。
[0007]
因此，存在对新的小分子蛋白质分泌抑制剂的需求。


技术实现要素：

[0008]
在一个方面，本文提供了一种式(i)化合物，或其药学上可接受的盐：
[0009][0010]
其中：r
a
和r
b
各自独立地为h或c
1-3
烷基；r
1
为h、oh、c
1-3
烷基、oc
1-3
烷基、＝ch
2
或＝nor
5
；或者r
1
为c
3-6
环烷基或c
3-6
杂环烷基，且与其所连接的环碳形成螺环基；r
1a
和r
1b
各自独立地为h或c
1-3
烷基；r
2
为c
1-6
烷基、n(r
5
)
2
、c
3-8
环烷基、c
3-9
杂环烷基、c
3-9
杂环烯基或c
6-10
芳基；r
3
为h、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、c
3-8
环烯基、c
3-7
杂环烷基、c
6-10
芳基或c
2-6
杂芳基；r
4
为c
3-8
环烷基、c
3-9
杂环烷基、c
6-10
芳基或c
2-9
杂芳基；各r
5
独立地为h、c
1-3
烷基或c
0-2
亚烷基-c
6-10
芳基；x为不存在、c
1-3
亚烷基、c＝o或(c＝o)o；y为so或so
2
；各杂环烷基、杂环烯基和杂芳基独立地具有1、2或3个选自n、o和s的环杂原子。
[0011]
在一些实施方式中，各y为so。在不同的实施方式中，各y为so
2
。
[0012]
在不同的情况下，r
a
为h。在一些情况下，r
a
为c
1-3
烷基。在一些实施方式中，r
a
为ch
3
。在一些实施方式中，r
b
为h。在不同的实施方式中，r
b
为c
1-3
烷基。在不同的情况下，r
b
为ch
3
。在不同的情况下，各r
a
和r
b
为h。
[0013]
在一些情况下，r
1
为h、oh或＝nor
5
。在不同的情况下，各r
5
独立地为h、c
1-3
烷基或c
0-2
亚烷基-c
6-10
芳基。在一些情况下，r
5
为h或ch
3
。在一些实施方式中，r
1
为c
1-3
烷基或oc
1-3
烷基。在不同的实施方式中，r
1
为ch
3
或och
3
。在一些情况下，r
1
为ch
3
且展现s立体化学性。在不同的实施方式中，r
1
为c
3-6
环烷基或c
3-6
杂环烷基，且与其所连接的环碳形成螺环基。在一些情况下，r
1
连同其所连接的环原子形成在不同的情况下，r
1
为＝ch
2
。
[0014]
在一些情况下，r
1a
和r
1b
各自为h。在一些情况下，r
1a
和r
1b
中的至少一个为c
1-3
烷基。在一些情况下，r
1a
和r
1b
各自为ch
3
。
[0015]
在一些实施方式中，r
2
为c
1-6
烷基或n(r
5
)
2
。在不同的情况下，各r
5
独立地包括h、c
1-3
烷基或苄基。在不同的实施方式中，r
2
为et、ipr、n(ch
3
)
2
、在一些情况下，r
2
包括c
3-8
环烷基。在不同的情况下，r
2
包括环戊基或环己基。在一些实施方式中，r
2
为c
3-9
杂环烷基或c
3-9
杂环烯基。在不同的实施方式中，r
2
包括氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、吗啉基或四氢吡啶基。在不同的实施方式中，c
3-9
杂环烷基或c
3-9
杂环烯基包含桥接基或螺环基。在一些情况下，包含桥接基或螺环基的c
3-9
杂环烷基选自由及
组成的组，且r
6
为c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基或c
6-10
芳基。在一些情况下，r
6
为任选地被1至3个独立地选自卤素、c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基和cn的基团所取代的苯基。在不同的情况下，r
2
选自由以下组成的组：选自由以下组成的组：
[0016][0016]
在一些情况下，r
2
选自由以下组成的组：选自由以下组成的组：选自由以下组成的组：在不同的情况下，r
2
为c
6-10
芳基。在一些实施方式中，r
2
为为
[0017]
在不同的实施方式中，x不存在。在一些实施方式中，r
3
包括c
1-6
烷基或h。在一些情况下，r
3
为2-甲基丁基、异丙基、异戊基、ch
2
ch
2
och
3
、ch
2
c(ch
3
)
2
cn、ch
2
cf
3
或ch
2
ch
2
cf
3
。在不同的情况下，r
3
为异丁基。
[0018]
在一些实施方式中，x为c
1-3
亚烷基。在一些情况下，x为ch
2
、ch
2
ch
2
或ch(ch
3
)。在不同的情况下，r
3
包括c
3-8
环烷基、c
3-8
环烯基、c
3-7
杂环烷基、c
6-10
芳基或c
2-6
杂芳基。在一些实施方式中，r
3
包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊烯基、环己烯基、四氢吡喃基、苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、恶唑基、异恶唑基、恶二唑基、噻二唑基、吡啶基、吡嗪基或嘧啶基。在不同的实施方式中，x-r
3
选自由以下组成的组：
[0019][0019][0019]
在一些情况
下，x-r
3
为在一些情况下，x-r
3
为
[0020]
在一些实施方式中，x为c＝o或(c＝o)o。在不同的实施方式中，r
3
包括c
1-6
烷基或c
6-10
芳基。在一些情况下，x-r
3
为为
[0021]
在不同的情况下，r
4
包括c
3-8
环烷基或c
3-9
杂环烷基。在一些实施方式中，r
4
为在不同的实施方式中，r
4
包括c
6-10
芳基或c
2-9
杂芳基，且r
4
任选地被1至3个独立地选自卤素、c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、c(o)n(r
n
)
2
和n(r
n
)
2
的基团取代，且各r
n
独立地为h或c
1-3
烷基。在一些实施方式中，r
4
选自由以下组成的组：选自由以下组成的组：选自由以下组成的组：在不同的实施方式中，r
4
为
[0022]
在一些实施方式中，r
a
、r
b
、r
1a
和r
1b
各自为h；r
1
为＝ch
2
或ch
3
；r
2
为为
x-r
3
为异丁基、为异丁基、r
4
为且各y为so
2
。
[0023]
在一些实施方式中，r
1
呈(s)构象。
[0024]
本文还提供了于表a、表b中所列出的化合物、及其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，本文提供了一种选自由以下组成的组的化合物：
[0025]
[0026][0027]
本文还提供了一种药物组合物，其包括式(i)化合物、表a中所列化合物、表b中所列化合物、或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
[0028]
本文还提供了一种抑制细胞中的蛋白质分泌的方法，其包括使细胞与有效量的所述式(i)化合物或盐、表a中所列化合物或其药学上可接受的盐、表b中所列化合物或其药学上可接受的盐、或本文所述的药物组合物接触，以抑制分泌。在一些情况下，所述接触包括将该化合物或组合物施用于受试者。
[0029]
本文还提供了一种治疗受试者的炎症的方法，其包括向该受试者施用治疗有效量的式(i)化合物或盐、表a中所列化合物或其药学上可接受的盐、表b中所列化合物或其药学
上可接受的盐、或本文所述的药物组合物。
[0030]
本文还提供了一种治疗或预防受试者的癌症或癌前病况的方法，其包括向该受试者施用治疗有效量的式(i)化合物或盐、表a中所列化合物或其药学上可接受的盐、表b中所列化合物或其药学上可接受的盐、或本文所述的药物组合物。
[0031]
通过结合附图阅读以下详细描述，进一步的方面和优点对于本领域普通技术人员将是显而易见的。在理解本公开为说明性的情况下，下文的描述包括特定的实施方式，而无意将本发明限制于本文所述的特定实施方式。
附图说明
[0032]
图1描绘了化合物a87与抗pd-1疗法相比的b16f10功效数据。在肿瘤生长抑制和体重百分比方面，化合物a87在难治性模型中相对于抗pd-1疗法每周一次给药展现出优异的功效。
[0033]
进一步的方面和优点对于本领域普通技术人员将是显而易见的。尽管本文公开的化合物和方法允许各种形式的实施方式，但是在理解本公开为说明性的情况下，下文的描述包括特定的实施方式，而无意将本发明限制于本文所述的特定实施方式。
具体实施方式
[0034]
本文提供了一种抑制蛋白质分泌的化合物。本文所述的化合物可用于治疗或预防与过度蛋白质分泌相关的疾病，例如炎症和癌症，以改善受影响个体的生活质量。
[0035]
本文所述的化合物具有式(i)的结构
[0036][0037]
其中此类取代基详述于下文中。
[0038]
在不受任何特定理论的束缚下，本文所述的化合物通过结合易位子组分及使其失能来抑制蛋白质分泌，该易位子组分包括但不限于sec61，并且在一些情况下，破坏翻译蛋白的新生信号序列与该易位子组分(包括但不限于sec61)之间的序列特异性方式相互作用。本文所述的化合物可特异性地结合至该信号序列且与易位子本身几乎没有相互作用。
[0039]
本文所述的化合物可有利于抑制tnfα的分泌，ic
50
为至多5μm，或至多3μm，或至多1μm。在不同的情况下，本文所述的化合物可抑制il-2的分泌，ic
50
为至多5μm，或至多3μm，或至多1μm。在一些情况下，本文所述的化合物可抑制pd-1的分泌，ic
50
为至多5μm，或至多3μm，或至多1μm。
[0040]
本文所述的化合物可有效降低肿瘤的生长和体重。例如，与抗pd-1疗法相比，化合物a87在难治性模型中每周一次给药可显示出降低肿瘤生长的优异功效。参见实施例部分和图1。
[0041]
化学定义
[0042]
如本文所使用，术语“烷基”是指含有一至三十个碳原子，例如一至二十个碳原子或一至十个碳原子的直链及分支链饱和烃基。术语c
n
意思指烷基具有“n”个碳原子。举例而言，c
4
烷基是指具有4个碳原子的烷基。c
1-7
烷基是指具有涵盖整个范围(即1至7个碳原子)以及全部亚组(例如1-6个、2-7个、1-5个、3-6个、1个、2个、3个、4个、5个、6个及7个碳原子)数量的碳原子的烷基。烷基的非限制性实例包含甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基(2-甲基丙基)、叔丁基(1,1-二甲基乙基)、3,3-二甲基戊基和2-乙基己基。除非另外指示，否则烷基可以是未经取代的烷基或经取代的烷基。
[0043]
如本文所使用，术语“亚烷基”是指二价饱和脂族基。术语c
n
意思指亚烷基具有“n”个碳原子。举例而言，c
1-6
亚烷基是指具有涵盖如先前关于“烷基”所描述的整个范围以及所有亚组的多个碳原子的亚烷基。
[0044]
如本文所使用，术语“烯基”的定义与“烷基”相同，只是含有至少一个碳-碳双键，且具有2至30个碳原子，例如2至20个碳原子。术语c
n
表示烯基基团具有“n”个碳原子。例如，c
4
烯基是指具有4个碳原子的烯基基团。c
2-7
烯基是指具有涵盖整个范围(即2至7个碳原子)以及所有亚组(例如2-6个、2-5个、3-6个、2个、3个、4个、5个、6个及7个碳原子)的多个碳原子的烯基。确切预想到的烯基基团包含乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基和丁烯基。除非另外指示，否则烯基可以是未经取代的烯基或经取代的烯基。
[0045]
如本文所使用，术语“环烷基”是指脂族环状烃基。术语c
n
意思指环烷基具有“n”个碳原子。举例而言，c
5
环烷基是指在环中具有5个碳原子的环烷基。c
5-8
环烷基是指具有涵盖整个范围(即5至8个碳原子)以及所有亚组(例如5-6个、6-8个、7-8个、5-7个、5个、6个、7个及8个碳原子)的多个碳原子的环烷基。环烷基的非限制性实例包含环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。除非另外指示，否则环烷基可以是未经取代的环烷基或经取代的环烷基。
[0046]
如本文所使用，术语“环烯基”的定义与“环烷基”相同，只是含有至少一个碳-碳双键，但不是芳香族的。术语c
n
表示环烯基基团具有“n个”碳原子。例如，c
5
环烯基是指在环结构中具有5个碳原子的环烯基基团。c
5-8
环烯基是指具有涵盖整个范围(即5至8个碳原子)以及所有亚组(例如5-6个、6-8个、7-7个、5个、6个、7个及8个碳原子)的多个碳原子的环烯基基团。环烯基基团的非限制性实例包含环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环庚烯基和环辛烯基。除非另外指示，否则环烯基可以是未经取代的环烯基或经取代的环烯基。
[0047]
如本文所使用，术语“杂环烷基”是以与环烷基类似的方式定义，不过环含有一至三个独立地选自氧、氮或硫的杂原子。杂环烷基的非限制性实例包含吡啶、四氢呋喃、四氢吡喃、二氢呋喃、吗啉、氧氮杂环庚烷基及类似基团。环烷基和杂环烷基可以是任选地被例如一至三个基团取代的饱和或部分不饱和环系统，所述基团是独立选择的烷基、亚烷基oh、c(o)nh
2
、nh
2
、侧氧基(＝o)、芳基、卤烷基、卤素及oh。杂环烷基任选地可进一步进行n取代。
[0048]
如本文所使用，术语“芳基”是指单环或多环(例如稠合双环及稠合三环)碳环芳环系统。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、菲基、联苯基、茚满基、茚基、蒽基、芴基、四氢啉基(tetralinyl)。除非另外指示，否则芳基可以是未经取代的芳基或经取代的芳基。
[0049]
如本文所使用，术语“杂芳基”是指单环或多环(例如稠合双环及稠合三环)芳环系统，其中一个环原子至四个环原子是选自氧、氮或硫，且剩余环原子为碳，所述环系统通过
任何环原子接合于分子其余部分。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、噻二唑基、恶二唑基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、异喹啉基、苯并恶唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、三嗪基、三唑基、嘌呤基、吡嗪基、嘌呤基、吲哚啉基、酞嗪基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、萘啶基、吡啶并吡啶基、吲哚基、3h-吲哚基、蝶啶基及喹喔啉基。除非另外指示，否则杂芳基可为未经取代的杂芳基或经取代的杂芳基。
[0050]
如本文所使用，术语“羟基(hydroxy)”或“羟基(hydroxyl)”在本文中是用于指
“–
oh”基。
[0051]
如本文所使用，术语“烷氧基(alkoxy)”或“烷氧基(alkoxyl)”是指
“-
o-烷基”。
[0052]
如本文所使用，术语“卤素”的定义为氟基、氯基、溴基及碘基。
[0053]
如本文所使用，术语“羧基(carboxy)”或“羧基(carboxyl)”是指
“–
cooh”基。
[0054]
如本文所使用，术语“氨基”是指
“–
nh
2”或
“–
nh
–”
基，其中任一个氢可以被烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基取代。
[0055]
如本文所使用，术语“磺酰基”是指基。
[0056]“经取代的”官能团(例如烷基、亚烷基、环烷基、芳基或杂芳基)是具有至少一个氢基被非氢基(即取代基)取代的官能团。非氢基(或取代基)的实例包括但不限于烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、醚、芳基、杂芳基、杂环烷基、羟基、氧基(或侧氧基)、烷氧基、酯、硫酯、酰基、羧酸基、氰基、硝基、氨基、酰氨基、硫、与卤素。当经取代的烷基包含多于一个非氢基时，取代基可以结合至相同的碳或是两个或多个不同的碳原子。
[0057]
蛋白质分泌抑制剂
[0058]
在一个方面，本发明的化合物具有式(i)的结构，或其药学上可接受的盐：
[0059][0060]
其中：
[0061]
r
a
和r
b
各自独立地为h或c
1-3
烷基；
[0062]
r
1
为h、oh、c
1-3
烷基、oc
1-3
烷基、＝ch
2
或＝nor
5
；或者r
1
为c
3-6
环烷基或c
3-6
杂环烷基，且与其所连接的环碳形成螺环基；
[0063]
r
1a
和r
1b
各自独立地为h或c
1-3
烷基；
[0064]
r
2
为c
1-6
烷基、n(r
5
)
2
、c
3-8
环烷基、c
3-9
杂环烷基、c
3-9
杂环烯基或c
6-10
芳基；
[0065]
r
3
为h、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、c
3-8
环烯基、c
3-7
杂环烷基、c
6-10
芳基或c
2-6
杂芳基；
[0066]
r
4
为c
3-8
环烷基、c
3-9
杂环烷基、c
6-10
芳基或c
2-9
杂芳基；
[0067]
各r
5
独立地为h、c
1-3
烷基或c
0-2
亚烷基-c
6-10
芳基；
[0068]
x为不存在、c
1-3
亚烷基、c＝o或(c＝o)o；
[0069]
y为so或so
2
；
[0070]
各杂环烷基、杂环烯基和杂芳基独立地具有1、2或3个选自n、o和s的环杂原子。
[0071]
在一些实施方式中，各y为so。在不同的实施方式中，各y为so
2
。
[0072]
在不同的情况下，r
a
为h。在一些情况下，r
a
为c
1-3
烷基。在一些实施方式中，r
a
为ch
3
。在一些实施方式中，r
b
为h。在不同的实施方式中，r
b
为c
1-3
烷基。在不同的情况下，r
b
为ch
3
。在一些情况下，r
a
和r
b
皆为h。
[0073]
在一些情况下，r
1
为h、oh或＝nor
5
。在不同的情况下，r
5
为h或ch
3
。因此，适合的r
1
基团可包含h、oh、＝noh及＝norch
3
。在一些实施方式中，r
1
为c
1-3
烷基或oc
1-3
烷基。例如，r
1
可为ch
3
或och
3
。在一些情况下，r
1
为ch
3
且展现s立体化学性。在不同的实施方式中，r
1
为c
3-6
环烷基或c
3-6
杂环烷基，且与其所连接的环碳形成螺环基。适合的r
1
螺环基可包含螺环基可包含在不同的情况下，r
1
为＝ch
2
。在一些实施方式中，r
1a
和r
1b
各自为h。在一些实施方式中，r
1a
和r
1b
中的至少一个为c
1-3
烷基。在一些实施方式中，r
1a
和r
1b
各自为ch
3
。在一些实施方式中，r
a
为h，r
b
为h，且r
1
为ch
3
。在不同的实施方式中，r
a
为ch
3
，r
b
为h，且r
1
为h。在一些情况下，r
a
为h，r
b
为ch
3
，且r
1
为h。在不同的情况下，r
a
为ch
3
，r
b
为h，且r
1
为ch
3
。在一些实施方式中，r
a
为h，r
b
为ch
3
，且r
1
为ch
3
。在不同的实施方式中，r
a
为ch
3
，r
b
为ch
3
，且r
1
为h。
[0074]
在一些实施方式中，r
2
为c
1-6
烷基或n(r
5
)
2
。在一些情况下，各r
5
独立地包括h、c
1-3
烷基或苄基。适合的r
2
基团可包含et、ipr、n(ch
3
)
2
、、在一些情况下，r
2
包括c
3-8
环烷基。在不同的情况下，r
2
包括环戊基或环己基。在一些实施方式中，r
2
为c
3-9
杂环烷基或c
3-9
杂环烯基。在不同的实施方式中，r
2
包括氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、吗啉基或四氢吡啶基。在不同的实施方式中，c
3-9
杂环烷基或c
3-9
杂环烯基包含桥接基或螺环基。在一些情况下，所述包含桥接基或螺环基的c
3-9
杂环烷基选自由及组成的组，且r
6
为c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基或c
6-10
芳基。在一些情况下，r
6
为任选地被1至3个独立地选自卤素、c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基和cn的基团所取代的苯基。
[0075]
适合的r
2
基团实例包含
[0076]
在一些情况下，r
2
选自由以下组成的组：由以下组成的组：由以下组成的组：在不同的情况下，r
2
为c
6-10
芳基。在一些实施方式中，r
2
为
[0077]
在不同的实施方式中，x不存在。在一些实施方式中，r
3
包括c
1-6
烷基或h。在一些情况下，r
3
为c
1-6
烷基，诸如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基。在一些情况下，r
3
为2-甲基丁基、异丙基、异戊基、ch
2
ch
2
och
3
、ch
2
c(ch
3
)
2
cn、ch
2
cf
3
或ch
2
ch
2
cf
3
。在不同的情况下，r
3
为异丁基。
[0078]
在一些实施方式中，x为c
1-3
亚烷基。在一些情况下，x为ch
2
、ch
2
ch
2
或ch(ch
3
)。在不同的情况下，r
3
包括c
3-8
环烷基、c
3-8
环烯基、c
3-7
杂环烷基、c
6-10
芳基或c
2-6
杂芳基。在一些实施方式中，r
3
包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊烯基、环己烯基、四氢吡喃基、苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、恶唑基、异恶唑基、恶二唑基、噻二唑基、吡啶基、吡嗪基或嘧啶基。适合的x-r
3
实例包含
在一些情况下，x-r
3
为为在一些情况下，x-r
3
为为
[0079]
在一些实施方式中，x为c＝o或(c＝o)o。在不同的实施方式中，r
3
包括c
1-6
烷基或c
6-10
芳基。在一些情况下，x-r
3
为为
[0080]
在不同的情况下，r
4
包括c
3-8
环烷基或c
3-9
杂环烷基，诸如杂环烷基，诸如在不同的实施方式中，r
4
包括c
6-10
芳基或c
2-9
杂芳基，且r
4
任选地被1至3个独立地选自卤素、c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、c(o)n(r
n
)
2
和n(r
n
)
2
的基团取代，且各r
n
独立地为h或c
1-3
烷基。在一些实施方式中，r
4
选自由以下组成的组：选自由以下组成的组：选自由以下组成的组：在不同的实施方式中，r
4
为
[0081]
在一些实施方式中，r
a
、r
b
、r
1a
和r
1b
各自为h，r
1
为＝ch
2
或ch
3
；r
2
为
x-r
3
为异丁基、为异丁基、r
4
为且各y为so
2
。在一些情况下，r
1
呈(s)构象。在一些情况下，本文提供包括有
[0082]
结构的化合物，其中r
2
为为且r
3
为环丁基、环戊基或环己基。
[0083]
式(i)化合物的实例是显示于表a中的化合物a1-a210或其药学上可接受的盐。在一些情况下，该化合物为化合物a1-a151或其药学上可接受的盐。
[0084]
表a
[0085]
[0086]
[0087]
[0088]
[0089]
[0090]
[0091]
[0092]
[0093]
[0094]
[0095]
[0096]
[0097]
[0098]
[0099]
[0100]
[0101]
[0102][0103]
在一些实施方式中，本发明的化合物包括：
[0104]
[0105][0106]
或其药学上可接受的盐。
[0107]
本发明其他化合物是显示于表b中的化合物b1-b22或其药学上可接受的盐。在一些情况下，该化合物为化合物b1-b20或其药学上可接受的盐。
[0108]
表b
[0109]
[0110][0111]
具有一个或多个以虚线及粗线(即和)描绘的立体中心的化学结构意在指示该化学结构中存在的立体中心的绝对立体化学。由简单线表示的键并不指示立体偏向性。除非另外指示与之相反，否则本文中所说明但未指示绝对或相对立体化学的包括一个或多个立体中心的化学结构涵盖化合物所有可能的立体异构形式(例如非对映异构体、对映异构体)及其混合物。具有单一粗线或虚线及至少一个其他简单线的结构涵盖所有可能非对
映异构体的单一对映异构系列。
[0112]
蛋白质分泌抑制剂的合成
[0113]
本文所提供的化合物可使用常规技术和本领域技术人员已知的易获得的起始材料合成。一般而言，本文所提供的化合物可通过标准有机化学合成方法来常规获得。
[0114]
最终化合物的合成
[0115]
在一些情况下，本文所述的化合物可通过使具有期望r
2
基团的磺酰氯与丙烷-1,3-二胺反应，且使所得产物与具有期望r
3
基团的醛反应，以形成经n-取代的丙胺化合物。经由与2-(3-溴丙基)异吲哚啉-1,3-二酮反应，接着与肼反应，可以将丙氨基团导入经n-取代的丙胺的r
4
位置，且可通过使该化合物与经期望r
4
基团官能化的磺酰氯反应而将期望r
4
基团缀合到该化合物上。最后，该化合物可经由具有期望r
1
基团的环化剂环化，诸如3-氯-2-氯甲基-1-丙烯、二乙磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯、环丙烷-1,1-二基双(亚甲基)二乙磺酸盐、1,3-二氯丙烷或1,4-二氯丁烷。
[0116]
在一些实施方式中，通过将经期望r
3
和r
4
基团衍生化的(3-氨基丙基)丙烷-1,3-二氨基团与期望的r
2-胺磺酰氯或r
2-磺酰氯基团缀合，可合成在r
1
具有亚甲基基团的化合物，且接着使所得化合物与3-氯-2-氯甲基-1-丙烯反应，以形成期望三氮杂环十二磺酰胺(triazacyclododecansulfonamide)化合物，如实施例部分中的途径1中所例示。
[0117]
在不同的实施方式中，合成在r
1
上具有亚甲基的化合物可通过将受保护的丁烷-1,3-二胺与具有期望r
3
基团的醛缀合以形成3-(氮杂基)-n-丁-1-胺(3-(azaneyl)-n-butan-1-amine)，使r
2
位置的氨基与经期望r
2
基团官能化的氯基团反应，经由与2-(3-溴丙基)异吲哚啉-1,3-二酮反应且随后与肼反应而将丙氨基基团导入3-(氮杂基)-n-丁-1-胺的r
4
位置，使所得的r
4
位置氨基基团与经期望r
4
基团官能化的氯基团反应，接着使所得化合物与3-氯-2-氯甲基-1-丙烯反应，以形成期望三氮杂环十二烷磺酰胺化合物，如实施例部分中的途径2中所例示。
[0118]
在一些情况下，合成在r
1
具有螺环基的化合物可通过使经期望r
2
、r
3
和r
4
基团衍生化的n-(3-(氮杂基)丙基)丙烷-1,3-二氨基基团与经期望螺环基衍生化的1,1-二基双(亚甲基)二乙磺酸盐反应，如实施例部分中的途径3、8及9中所例示。
[0119]
在不同的情况下，本文所提供的化合物的合成可通过将经期望r
3
和r
4
基团官能化的n-(3-(氮杂基)丙基)丙烷-1,3-二氨基上的在r
2
的苄基基团还原，接着使所得产物与期望的经期望r
2
基团(例如二甲基环己基)衍生化的醛反应，如实施例部分中的途径4中所例示。
[0120]
在一些实施方式中，在r
2
具有羧酸基团的化合物的制备可通过使经期望r
1
、r
3
和r
4
基团衍生化的三氮杂环十二烷磺酰基基团与期望烷基基团及三光气在碱性条件下反应，如实施例部分中的途径5中所例示。
[0121]
在不同的实施方式中，在r
2
具有哌啶基基团的化合物的制备可通过使dbu/巯乙醇与具有期望r
1
、r
3
和r
4
基团且在r
2
经硝苯基基团官能化的三氮杂环十二烷磺酰基化合物反应，且接着使所得产物与哌啶基磺酰氯缀合，如实施例部分中的途径6中所例示。
[0122]
在一些实施方式中，在r
1
具有氢基团的化合物的合成可通过将经期望r
2
、r
3
和r
4
基团官能化的n-(3-(氮杂基)丙基)丙烷-1,3-二氨基与1,3-二氯丙烷或1,4-二氯丁烷缀合，如实施例部分的途径7及途径17所例示。
[0123]
在一些情况下，在r
2
具有氯苯基甲酮基团的化合物的合成可通过使经r
1
、r
3
和r
4
基团官能化的三氮杂环十二烷磺酰基与4-氯苯甲酰氯于碱性条件下反应，如实施例部分中的途径10中所例示。
[0124]
在不同的情况下，在r
4
具有4-(二甲基氨基)-2-甲基苄基基团且在r
1
具有螺环基的化合物的制备可通过使经期望r
2
和r
3
基团官能化的n-(3-(氮杂基)丙基)丙烷-1,3-二氨基化合物与4-(二甲基氨基)-2-甲苯磺酰氯反应，接着经由与经期望螺环基使用本文前述方法衍生化的1,1-二基双(亚甲基)二乙磺酸盐缀合而将该化合物环化，如实施例部分的途径11所例示。
[0125]
在一些实施方式中，本文所述的化合物的制备可通过使具有期望r
2
基团的磺酰氯与丙烷-1,3-二胺反应，且使所得产物与具有期望r
3
基团的醛反应，以形成3-(氮杂基)-n-丁-1-胺化合物。可经由与2-(3-溴丙基)异吲哚啉-1,3-二酮反应且随后与肼反应而将丙氨基基团导入3-(氮杂基)-n-丁-1-胺的r
4
位置，且可通过使该化合物与期望磺酰氯(例如4-(二甲基氨基)-2-甲苯磺酰氯)反应而使期望r
4
基团缀合该化合物。最后，可经由合适的环化剂(诸如本文前述的3-氯-2-氯甲基-1-丙烯、二乙磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯、环丙烷-1,1-二基双(亚甲基)二乙磺酸盐、1,3-二氯丙烷或1,4-二氯丁烷)而将该化合物环化，如实施例部分中的途径12中所例示。
[0126]
在不同的实施方式中，在r
2
具有4-苯基哌啶基-1-基磺酰基基团的化合物的合成可通过使经期望r
1
、r
3
和r
4
基团官能化的三氮杂环十二烷磺酰基基团与三氟甲烷磺酸3-甲基-1-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯反应，如实施例部分中的途径14中所例示。
[0127]
在一些情况下，在r
2
具有4-苯基哌啶基-1-基磺酰基基团的化合物的合成可通过使经期望r
3
和r
4
基团官能化的n-(3-(氮杂基)丙基)丙烷-1,3-二氨基与三氟甲烷磺酸3-甲基-1-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯反应，接着用合适的环化剂(诸如本文前述的二乙磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯、3-氯-2-氯甲基-1-丙烯、环丙烷-1,1-二基双(亚甲基)二乙磺酸盐、1,3-二氯丙烷或1,4-二氯丁烷)将该化合物环化，如实施例部分中的途径15中所例示。具有与r
4
氮相邻的甲基的类似化合物可同样使用3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯来合成，如实施例部分中的途径18中所例示。
[0128]
在一些情况下，r
1
具有醇基团的化合物的合成可通过在碱性条件下用受保护的1,3-二氯丙-2-醇将n-(3-(氮杂基)丙基)丙烷-1,3-二氨基化合物环化，如实施例部分中的途径19中所例示。在r
1
的醇基团可经由在甲苯中与mei和nah反应而甲基化，如实施例部分中的途径21中所例示。在r
1
的醇基团可经由与戴斯-马丁过碘烷反应而氧化成羰基，如实施例部分中的途径22中所例示。在r
1
的羰基可与羟胺盐酸盐反应而形成肟化合物，如实施例部分中的途径25中所例示。
[0129]
在不同的情况下，在r
1
具有s-甲基基团的化合物的合成可通过使经期望r
2
基团官能化的氨基与三氟甲烷磺酸2,3-二甲基-1-((2-甲基-1h-咪唑-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯反应，随后与cf
3
so
3
me反应，以形成经期望r
2
基团官能化的三氟甲烷磺酸2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯。产物可与经期望r
4
基团官能化的(r)-n-(3-氨基-2-甲基丙基)反应，以形成经期望r
2
和r
4
基团官能化的(s)-n,n'-(2-甲基丙烷-1,3-二氨基。所得产物接着可与经期望r
3
基团官能化的二甲烷磺酸(氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯反应而得到期望化合物，
如实施例部分中的途径27中所例示。
[0130]
中间体的合成
[0131]
用于制备本文所述的化合物的中间体也可通过本领域技术人员已知的标准方法来制备，如在下面实施例部分中所述(例如途径13、途径16、途径20、途径24、途径26、途径28、途径30、途径31、途径32、途径33)。
[0132]
使用的方法
[0133]
本文所公开的化合物(例如式(i)化合物、表a和b中所列出的化合物、以及前述化合物的药学上可接受的盐)可抑制感兴趣蛋白质的蛋白质分泌。本文所公开的化合物可干扰细胞的sec61蛋白质分泌机制。在一些情况下，本文所公开的化合物抑制tnfα、vcam、prl、il-2、infg、cd4、胰岛素和pd-1(小鼠和/或人类)中的一个或多个的分泌，或抑制tnfα、vcam、prl、il-2、infg、cd4、胰岛素和pd-1(小鼠和/或人类)中每一个的分泌。在一些情况下，本文所公开的化合物可抑制检查点蛋白的分泌，或抑制细胞表面蛋白、内质网相关蛋白、或涉及抗肿瘤免疫反应的调控的分泌性蛋白。在不同的情况下，本文所公开的化合物可抑制pd-1、pd-l1、tim-1、lag-3、ctla4、btla、ox-40、b7h1、b7h4、cd137、cd47、cd96、cd73、cd40、vista、tigit、lair1、cd160、2b4、tgfrβ及其组合中一个或多个的分泌。蛋白质分泌活性可以用下面实施例部分中所述的方式评估。
[0134]
如本文所使用，术语“抑制剂”意指描述阻断或降低药理学靶标的活性的化合物(例如抑制蛋白质分泌路径中的sec61功能的化合物)。抑制剂可以竞争性、非竞争性或非竞争性抑制的方式进行作用。抑制剂可以可逆或不可逆方式进行结合，且因此该术语包含作为蛋白质或酶的自杀底物的化合物。抑制剂可以修饰蛋白质活性位置上或附近的一个或多个位点，或者其可造成酶上其他位置的结构变化。术语抑制剂在本文中比科学文献更广泛地使用，以便也涵盖其他类别的药理学或治疗上有用的试剂，诸如促效剂、拮抗剂、刺激剂和辅助因子等。
[0135]
因此，本文提供了在细胞中抑制蛋白质分泌的方法。在这些方法中，使细胞与有效抑制感兴趣蛋白质分泌的量的本文所述的化合物(例如式(i)化合物、或表a或b中所列出的化合物、以及前述化合物的药学上可接受的盐)，或其药物制剂接触。在一些实施方式中，所述细胞在体外接触。在不同的实施方式中，所述细胞在体内接触。在不同的实施方式中，所述接触包括将该化合物或药物制剂施用于该受试者。
[0136]
sec61抑制的生物学结果很多。例如，已经提出sec61抑制用于治疗或预防受试者的炎症和/或癌症。因此，sec61特异性化合物的药物制剂提供了向受试者施用药物及治疗这些病状的手段。如本文所使用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”等是指消除、减少或改善疾病或病况和/或与其相关的症状。尽管未排除，但治疗疾病或病况不要求所述疾病、病况或与其相关的症状被完全消除。如本文所使用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”等可包括“预防性治疗”，其是指在未患有疾病、但有风险或易于重新发生疾病或病况或所述疾病或病况有复发风险或易于复发的受试者中，减少重新发生疾病或病况的可能性，或减少之前控制的疾病或病况的复发的可能性。术语“治疗”和同义词预期给予需要所述治疗的受试者治疗有效量的本发明化合物。在本发明的含义内，“治疗”还包括复发预防或阶段预防，以及治疗急性或慢性征兆、症状和/或机能障碍。治疗可以是针对症状的，例如抑制症状。其可在短时期内起作用，针对
中等时期内，或可以是长期治疗，例如在维持疗法的情况下。如本文所使用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”、“预防(prevention)”为本领域公认的，且当用于相关病况诸如局部复发(例如疼痛)、疾病诸如癌症、复杂综合征诸如心脏衰竭或任何其他的医学病况时是本领域熟知的，并且包括组合物的施用，相对于不接受组合物的受试者，其减少受试者的医学病况的症状频率或延迟受试者的医学病况的症状发作。因此，癌症的预防包括例如相对于未经治疗对照群组，在接受预防性治疗的病人群组中减少可检测的癌生长的数目，和/或在治疗群组对于未经治疗对照群组中，延迟可检测的癌生长的出现，例如以统计上和/或临床上显著的量。感染的预防包括例如在治疗群组对于未经治疗对照群组中，减少感染的诊断数目，和/或在治疗群组对于未经治疗对照群组中，延迟感染症状的发作。疼痛的预防包括例如在治疗群组对于未经治疗对照群组中，减少受试者所经历的疼痛大小或者延迟受试者所经历的痛觉。如本文所使用，术语“患者”及“受试者”可交换使用并且表示动物，诸如狗、猫、牛、马和绵羊(即非人动物)以及人类。特定的患者为哺乳动物(例如人)。术语患者包含雄性和雌性。
[0137]
抑制sec61介导的炎性蛋白质(例如tnfα)的分泌可破坏发言的信号传递。因此，本文提供了一种治疗受试者的炎症的方法，其通过向该受试者施用治疗有效量的本文所述的化合物(即式(i)化合物或表a或b中所列出的化合物、或前述化合物的药学上可接受的盐)。
[0138]
另外，癌细胞的存活力依赖于增加的蛋白质分泌到er中以便存活。因此，sec61介导的蛋白质分泌的非选择性或部分选择性抑制可抑制肿瘤生长。或者，在免疫-肿瘤学设定中，已知分泌性或跨膜性免疫检查点蛋白(例如pd-1、tim-3、lag3等)的选择性分泌抑制剂可导致免疫系统的活化以抵抗各种癌症。
[0139]
因此，本文还提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其通过向该受试者施用治疗有效量的本文所述的化合物(例如式(i)化合物、表a或b中所列出的化合物、或前述化合物的药学上可接受的盐)。特别预想到可以使用本文所述的化合物和组合物进行治疗的癌症包括但不限于黑色素瘤、多发性骨髓瘤、前列腺癌、肺癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞癌、白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、npm/alk-转化的间变性大细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、神经内分泌肿瘤、乳癌、外套细胞淋巴瘤、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、小细胞癌、腺癌、胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、甲状腺癌、间变性大细胞淋巴瘤、血管瘤、头颈癌、膀胱癌和结肠直肠癌。在一些情况下，该癌症为实体瘤。在不同的情况下，该癌症为头颈癌、鳞状细胞癌、胃癌或胰腺癌。
[0140]
本文所述的化合物也可预想被使用在预防和/或治疗许多种疾病，包括但不限于增生性疾病、神经毒性/退化性疾病、缺血性病状、自身免疫性疾病和自身炎性疾病、炎症、免疫相关疾病、hiv、癌症、器官移植物排斥、感染性休克、病毒及寄生虫感染、与酸中毒相关的病症、黄斑部病变、肺部疾病、肌肉萎缩疾病、纤维化疾病、骨骼和毛发生长疾病。
[0141]
增生性疾病或病状的实例包括糖尿病视网膜病变、黄斑部病变、糖尿病肾病变、肾小球硬化、iga肾病变、肝硬化、胆道闭锁、充血性心脏衰竭、硬皮病、放射性纤维化和肺纤维化(特发性肺纤维化、胶原血管疾病、肉状瘤病、间质性肺病和外因性肺病症)。
[0142]
炎性疾病包括急性病状(例如支气管炎、结膜炎、心肌炎、胰脏炎)和慢性病状(例如慢性胆囊炎、支气管扩张、主动脉瓣狭窄、血管再狭窄、牛皮癣和关节炎)，以及与炎症相关的病状，诸如纤维化、感染和局部缺血。
dementia)、额叶性痴呆诸如皮克氏病(pick
’
s disease)、皮质下痴呆(诸如亨丁顿氏或进行性核上麻痹)、皮层萎缩综合征(诸如原发性失语症)、代谢毒性痴呆(诸如慢性甲状腺功能低下或b12缺陷)和通过感染(诸如梅毒或慢性脑膜炎)引起的痴呆。
[0147]
可以在下面实施例部分中找到使用本文所述的化合物和组合物(例如式(i)化合物、表a或b中所列出的化合物、或前述化合物的药学上可接受的盐)来抑制蛋白质分泌的进一步指导。
[0148]
药物制剂及施用
[0149]
本发明所提供的方法包括药物组合物的制造和使用，其中药物组合物包括本发明所提供的一种或多种化合物。此外，还包括药物组合物本身。药物组合物通常包含药学上可接受的载体。因此，本文提供包含了如本文前述的本文所述化合物(例如式(i)化合物、表a或b中所列出的化合物、或前述化合物的药学上可接受的盐)以及一种或多种药学上可接受的载体的药物制剂。
[0150]
词组“药学上可接受的”在本文中是指配体、材料、组合物和/或剂型，其在可靠医学判断的范畴内适用于与人类和动物的组织接触，而无过量毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，且其与合理利益/风险比相匹配。
[0151]
如本文中所使用，词组“药学上可接受的载体”表示药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。如本文中所使用，语词“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的缓冲液、注射用无菌水、溶剂、分散介质、涂料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。各载体按可与制剂的其他成分兼容且在对患者无害的意义中必须为“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、和经取代或未经取代β-环糊精；(3)纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油、棉子油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇类，诸如丙二醇；(11)多元醇类，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯类，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；及(21)用于药物制剂中的其他无毒可兼容材料。在某些实施方式中，本文所提供的药物组合物为非致热性的，即当施用于患者时不会引起显著的升温。
[0152]
术语“药学上可接受的盐”是指本文所提供的化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐类。这些盐类可在本文所提供的化合物的最终分离及纯化期间当场制备，或通过使其游离碱形式的化合物与适当有机或无机酸反应并分离由此形成的盐而单独地制备。代表性盐类包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、顺丁烯二酸盐、反丁烯二酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐(naphthylate)、甲磺酸盐、葡糖庚酸盐、乳酸盐(lactobionate)、月桂基磺酸盐类和氨基酸盐类等(参见例如berge等人，(1977)“pharmaceutical salts”,j.pharm.sci.66:1-19)。
[0153]
在一些实施方式中，本文所提供的化合物可含有一个或多个酸性官能团并因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”在这些实例中是指
本文所提供的化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐类同样可在该化合物的最终分离及纯化期间当场制备，或通过使其游离离酸形式的经纯化化合物与适当碱、诸如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，与氨或与药学上可接受的有机一级、二级或三级胺反应而单独地制备。代表性碱金属或碱土金属盐包括锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺和哌嗪等(参见例如berge等人，同上)。
[0154]
润湿剂、乳化剂和润滑剂(诸如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁)，以及着色剂、释放剂、涂布剂、甜味剂、调味剂及芳香剂、防腐剂及抗氧化剂也可存在于该组合物中。
[0155]
如此项技术中所熟知的，如本文中所述制备的组合物可根据待治疗的病症以及患者的年龄、病状和体重而以各种形式施用。例如，在待口服施用组合物时，组合物可配制为片剂、胶囊、颗粒、粉末或糖浆；或非经肠施用，化合物可配制为注射剂(静脉内、肌肉内或皮下)、滴注剂或栓剂。对于通过眼科黏膜路径的应用，化合物可配置为滴眼剂或眼膏。这些制剂可通过常规方式结合本文所述的方法来制备，且如果需要，则活性成分可与任何常规添加剂或赋形剂混合，诸如黏合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、增溶剂、悬浮助剂、乳化剂或涂布剂。
[0156]
本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可改变以获得“治疗有效量”，以有效实现对特定患者、组合物和施用模式而言期望的治疗反应而对患者无毒性的活性成分的量。
[0157]
本文所提供的化合物在药学上可接受的混合物中的浓度将根据多个因素(包括待施用化合物的剂量、所用化合物的药物动力学特性及施用路径)而改变。在一些实施方式中，本文所提供的组合物可以包含约0.1-10％w/v的本文所公开化合物以及其他物质的水溶液形式来提供，用于非经肠施用。典型剂量范围为每天从约0.01至约50毫克/公斤体重，以1-4次分开剂量来给予。各分开剂量可包含相同或不同的化合物。剂量将为治疗有效量，其取决于包括患者的总体健康状况及所选化合物的制剂和施用路径的多个因素。
[0158]
可以制备含有0.005％至100％范围内的本发明所述的化合物与其余由无毒载体所组成的剂型或组合物。这些组合物的制备方法是本领域技术人员所熟知的。所考虑的组合物可含有0.001％-100％活性成分，在一个实施方式中为0.1-95％，在另一个实施方式中为75％-85％。尽管剂量将根据患者的症状、年龄和体重、待治疗或预防病症的性质和严重性、药物的施用路径和形式而改变，但通常地，对于成年人患者，推荐从0.01至2000毫克化合物的每天剂量，且这可以单一剂量或以分开剂量来施用。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将通常为产生治疗效果的化合物的量。
[0159]
在禁止授予在人体上实践的方法专利权的权限中，向人类受试者“施用”组合物的含义应受限于开具控制性物质的处方，所述控制性物质将由人类受试者经任何技术(例如口服、吸入、表面施加、注射、插入等)自施用。符合界定可获专利的主题的法律或法规的最广泛合理解释是所需的。在不禁止授予在人体上实践的方法专利权的权限中，“施用”组合物包含在人体上实践的方法以及前述活动。
[0160]
其他实施方式
[0161]
应理解，虽然本发明内容是结合其详细描述来说明，但前述说明旨在说明性的而不限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围来界定。其他方面、优点和修改
均落入以下权利要求的范围内。
[0162]
实施例
[0163]
提供以下实例用于说明且并不旨在限制本发明的范围。
[0164]
途径1
[0165][0166]
起始材料使用在j.med.chem.2016,59,2633-2647中所述的方法来合成。向n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-甲苯磺胺(0.200g,0.523mmol)的dcm(2.0ml)溶液中添加diea(2eq,1.05mmol,179ul)且随后添加哌啶-1-磺酰氯(0.096g,0.523mmol)。在16小时后，用碳酸氢钠(饱和)使反应物淬灭，用dcm萃取，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。
[0167]
向粗制n-(3-((环己基甲基)(3-((4-甲基苯基)磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)哌啶-1-磺胺的dmf(10ml)溶液中添加nah(2.5eq,1.31mmol,0.052g的60％于矿物油中的分散液)。将混合物搅拌1小时且接着加热至85℃，并经4小时添加3-氯-2-氯甲基-1-丙烯(0.9eq,0.471mmol,55ul溶解于0.5ml dmf中)。在加热16小时后，将混合物冷却至环境温度，用盐水和水稀释，用乙酸乙酯萃取(3x)，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-60％己烷/乙酸乙酯+1％dea)得到游离碱产物。
[0168]
向该游离碱添加二乙醚(1.0ml)以溶解，且添加hcl(4n二恶烷溶液,1.046mmol,262ul)。将该hcl盐过滤且在高真空下干燥，以得到化合物a5。ms(ei)的c
29
h
48
n
4
o
4
s
2
实测值581[m+h]
+
。
[0169]
以下化合物以相似方式合成：
[0170][0171]
途径2
[0172][0173]
向(3-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g,13.3mmol)的dcm(12.5ml)、饱和na
2
co
3
(12.5ml)和饱和nacl(12.5ml)溶液中添加tscl(13.3mmol,2.54g)。在1小时后，将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，以得到(3-((4-甲基苯基)磺酰氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯，其不需进一步纯化即进一步使用。
[0174]
向该甲苯磺酸盐(13.3mmol)添加tfa(66.5mmol,5.09ml)和dcm(5.09ml)。在2小时后，将反应物浓缩，用naoh(1n,30ml)稀释，用dcm(3x30ml)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，以得到胺。
[0175]
向该胺(10.94mmol)添加甲苯(49ml)和环己烷羧醛(1.34g,12.0mmol)。用迪安-史塔克(dean stark)设备使该混合物回流隔夜(外部温度为185℃)且接着浓缩，用乙醇(绝对,19ml)稀释且逐份添加nabh
4
(0.827g,21.8mmol)，同时维持内部温度<20℃。在搅拌2小时后，将该混合物用水(10ml)稀释，搅拌20分钟，用dcm(3x)萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，以得到胺。将该胺用二乙醚(20ml)稀释且逐滴添加hcl(浓hcl,～0.3ml)。在5分钟内使该hcl盐破碎且使用二乙醚过滤以洗涤。产物经真空干燥隔夜以得到n-(4-((环己基甲基)氨基)丁-2-基)-4-甲苯磺胺盐酸盐。
[0176]
向该hcl盐(3.5mmol)添加乙腈(9ml)、碳酸钠(0.99g,9.2mmol)、lii(0.114g)和3-溴丙基酞酰亚胺(2.30g)。将该混合物加热至70℃持续5小时，在该时间点将其过滤和浓缩。粗制的酞酰亚胺不需进一步纯化即进一步使用。
[0177]
向该酞酰亚胺(3.5mmol)添加单水合肼(4.2ml)和乙醇(15ml)。在加热至80℃持续30分钟后完成反应，将沉淀物过滤且用乙醇洗涤。将滤液浓缩且用hcl(2n,30ml)稀释，接着使其静置1小时。向该水性混合物添加naoh(1n)而碱化至ph 10。接着将该混合物用dcm(3x)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，以得到粗制n-(4-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)
丁-2-基)-4-甲苯磺胺。
[0178]
向该胺(695mg,1.76mmol)添加dcm(9ml)、饱和na
2
co
3
(9ml)、饱和nacl(9ml)、tscl(1.76mmol,336mg)。在搅拌1小时后，将该混合物用dcm(3x)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，以得到游离碱。通过将游离碱稀释于二乙醚(50ml)中并添加hcl(浓hcl,300ul)而制备该hcl盐。置于高真空下2小时后，收集该hcl盐(1.02g)。
[0179]
向该hcl盐(0.400g,0.683mmol)的dmf(14ml)溶液中添加nah(3.5eq,2.39mmol,60％于矿物油中的分散液,80.3mg)。在搅拌1小时后，经3小时逐滴添加3-氯-2-氯甲基-1-丙烯(0.9eq,0.615mmol,71ul于7ml dmf中)。在另外加热2小时后，将该混合物冷却至环境温度，用盐水、水和乙酸乙酯稀释。将该混合物用乙酸乙酯(2x)萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-90％己烷/乙酸乙酯+1％dea)得到产物。通过将该游离碱稀释于二乙醚(20vol.)且添加hcl(4n二恶烷溶液,4eq)来形成该hcl盐，以得到5-(环己基甲基)-2-甲基-11-亚甲基-1,9-二甲苯磺酰基-1,5,9-三氮杂环十二烷盐酸盐，即化合物b1。ms(ei)的c
32
h
47
n
3
o
4
s
2
实测值602[m+h]
+
。
[0180]
以下化合物以相似方式合成：
[0181][0182]
途径3
[0183][0184]
向n-(3-((环己基甲基)(3-((4-甲基苯基)磺酰氨基)丁基)氨基)丙基)-4-甲苯磺胺(0.099mmol)的dmf(10.0ml)溶液中添加氢化钠(0.350mmol的60％于矿物油中的分散液)。在环境温度下搅拌该混合物30分钟且接着加热至80℃，随后经2小时的时程添加二乙磺酸环丙烷-1,1-二基双(亚甲基)酯(0.099mmol,溶解于1.0mldmf中)。在80℃下另外搅拌4小时后，将该混合物冷却至环境温度，用盐水淬灭，用乙酸乙酯(3x)萃取。将合并的有机物用盐水(2x)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-60％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)得到游离碱产物，将其溶解于二乙醚(2ml)中且添加hcl(0.1ml的4n 1,4-二恶烷溶液)。将该混合物浓缩以得到4-{[9-(环己基甲基)-13-(4-甲基苯磺酰基)-5,9,13-三氮杂螺[2.11]十四烷-5-基]磺酰基}-n,n-二甲基苯胺盐酸盐，即化合物a11。ms(ei)的c
33
h
50
n
4
o
4
s
2
实测值631[m+h]
+
。
[0185]
途径4
[0186][0187]
起始材料使用在j.med.chem.2016,59,2633-2647中所述的方法来合成。向起始材料(0.327mmol)的甲醇(2.0ml)溶液中添加pd/c(20mg)。建立氢气环境且在环境温度下搅拌该混合物。在3小时后将反应物过滤且通过快速柱色谱(0-80％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)纯化以得到产物。
[0188]
向该起始材料(0.028mmol)添加甲苯(5ml)且随后添加醛(0.028mmol)。在回流下搅拌该混合物3小时且接着浓缩。向该亚胺添加乙醇且随后添加硼氢化钠。在环境温度下搅拌该混合物30分钟，接着用水(1ml)稀释，用dcm(3x1ml)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。将产物用快速柱色谱(0-60％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)纯化。将该游离碱用乙醚(1ml)稀释且添加hcl(7μl,4n二恶烷溶液)。将混合物过滤以得到4-((9-((4,4-二甲基环己基)甲基)-3-亚甲基-5-甲苯磺酰基-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺盐酸盐(化合物a10)。ms(ei)的c
34
h
52
n
4
o
4
s
2
实测值645[m+h]
+
。
[0189]
途径5
[0190][0191]
向三光气(0.0316mmol,9.4mg)的dcm(100ul)溶液中添加1-丙醇(0.190mmol 14ul)。在搅拌45分钟后将该溶液添加至胺(0.0158mmol,8.2mg)、diea(0.126mmol,22ul)和dcm(100ul)。在环境温度下搅拌该混合物1小时，接着用快速柱色谱(0-70％己烷/乙酸乙
酯)直接纯化以得到5-((4-(二甲氨基)苯基)磺酰基)-7-亚甲基-9-甲苯磺酰基-1,5,9-三氮杂环十二烷-1-甲酸丙酯(化合物a12)。ms(ei)的c
29
h
42
n
4
o
6
s
2
实测值607[m+h]
+
。
[0192]
途径6
[0193][0194]
起始材料4-((9-(环己基甲基)-3-亚甲基-5-((2-硝苯基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺用途径2中所述的相似方法改用合适的磺酰氯来合成。
[0195]
向该起始材料(1.09g,1.68mmol)的acn(12.3ml)溶液中添加dbu(0.780ml,5.22mmol)且随后添加2-巯乙醇(0.135ml,1.92mmol)。在室温下搅拌该混合物2小时，接着添加另外一等分的2-巯乙醇(1.14eq)。在另外搅拌2小时后，将混合物浓缩且直接以fcc(0-100％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)纯化。4-((9-(环己基甲基)-3-亚甲基-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺。
[0196]
向该胺(70mg,0.152mmol)的dcm(2ml)溶液中添加diea(0.303mmol,52ul)且随后添加哌啶-1-磺酰氯(0.152mmol,28mg)。在使其静置隔夜后，用快速柱色谱(己烷(1％dea)/乙酸乙酯0-60％)直接纯化该反应物。通过将该游离碱溶解于二乙醚(1ml)并添加hcl(4n二恶烷溶液,38ul)来制备hcl盐产物。收集滤液以得到4-((9-(环己基甲基)-3-亚甲基-5-(哌啶-1-基磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺盐酸盐(化合物a15)。ms(ei)的c
30
h
51
n
5
o
4
s
2
实测值610[m+h]
+
。
[0197]
以下化合物以相似方式合成：
[0198]
[0199]
途径7
[0200][0201]
起始材料n-(3-((环己基甲基)(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)-4-甲苯磺胺用途径1中所述的相同方法改用合适的磺酰氯来合成。
[0202]
向该二胺(49mg,0.087mmol)的dmf(2.5ml)溶液中添加nah(0.22mmol,9mg)。在环境温度下搅拌30分钟后，经1小时缓慢添加1,3-二氯丙烷(0.087mmol,8.3ul于0.5ml dmf中)且同时在80℃下加热。在3小时后将该混合物冷却至环境温度，用盐水(10ml)、水(5ml)和乙酸乙酯(10ml)稀释。将水层用乙酸乙酯(3
×
5ml)萃取，将有机物合并且用盐水(1
×
5ml)洗涤，经硫酸钠干燥，且浓缩。用快速柱色谱(0-50％己烷(1％dea/乙酸乙酯))得到游离碱产物，其在添加乙醚(1ml)且接着添加hcl(20ul,4n二恶烷溶液)后转变成hcl盐。收集滤液且浓缩，以得到4-((5-(环己基甲基)-9-甲苯磺酰基-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺(化合物a14)。ms(ei)的c
31
h
48
n
4
o
4
s
2
实测值605[m+h]
+
。
[0203]
以下化合物以相似方式合成：
[0204][0205]
途径8
[0206]
[0207]
起始材料使用在j.med.chem.2006,49,1291-1312中所述的方法来合成。向n1-(3-氨基丙基)-n1-苄基丙烷-1,3-二胺(363mg,1.64mmol)的dcm(2ml)溶液中添加diea(1.14ml,6.56ml)且接着添加磺酰氯(345μl,2.46mmol)。使该溶液在环境温度下静置隔夜。用快速柱色谱(0-80％(1％dea)/乙酸乙酯)浓缩并纯化以得到产物。
[0208]
向该起始材料(260mg,504μl)的dmf(20ml)溶液中添加nah(50mg的60％于矿物油中的分散液,1.26mmol)。在80℃下搅拌该混合物20分钟，接着经1小时的时程添加该双磺酸盐(144mg,504μl)。在加热4小时后反应完成，且用乙酸乙酯(40ml)和盐水(40ml)稀释，用乙酸乙酯(2x20ml)萃取。将合并的有机物用盐水(20ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(己烷(1％dea)/乙酸乙酯0-50％)得到产物，产物用乙醚(5ml)稀释且添加hcl(4n二恶烷溶液,100ul)。将混合物浓缩，用二乙醚洗涤，并干燥，以得到9-苄基-5,13-双(哌啶-1-基磺酰基)-5,9,13-三氮杂螺[2.11]十四烷盐酸盐(化合物a18)。ms(ei)的c
28
h
47
n
5
o
4
s
2
实测值581[m+h]
+
。
[0209]
途径9
[0210][0211]
起始材料n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺用途径2中所述的相似方法合成。
[0212]
向n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(559mg,1.36mmol)的dcm(2ml)溶液中添加diea(0.71ml,4.08mmol)且接着添加磺酰氯(250mg,1.36mmol)。使该溶液在环境温度下静置隔夜。用快速柱色谱(0-80％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)浓缩并纯化以得到产物。
[0213]
以与途径8相似的方式进行n-(3-((环己基甲基)(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)哌啶-1-磺胺的环化及形成盐，以得到4-((9-(环己基甲基)-13-(哌啶-1-基磺酰基)-5,9,13-三氮杂螺[2.11]十四烷-5-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺盐酸盐(化合物a19)。ms(ei)的c
31
h
53
n
5
o
4
s
2
实测值624[m+h]
+
。
[0214]
以下化合物以相似方式合成：化合物a25、a26、a27、a28和a29的环化使用nmp作为溶剂进行。
[0215][0216][0217]
途径10
[0218][0219]
向该胺(67mg,0.14mmol)的dcm(12ml)溶液中添加diea(35mg,0.27mmol)且随后添加4-氯苯甲酰氯(24mg,0.14mmol)。在环境温度下静置30分钟后，用碳酸氢钠(饱和)使反应物淬灭，用dcm(3x)萃取，经硫酸钠干燥，且过滤。用快速柱色谱(0-60％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)得到(5,13-双(哌啶-1-基磺酰基)-5,9,13-三氮杂螺[2.11]十四烷-9-基)(4-氯苯基)甲酮(化合物a24)。ms(ei)的c
28
h
44
cln
5
o
5
s
2
实测值630[m+h]
+
。
[0220]
途径11
[0221][0222]
向n,n-3-三甲基苯胺(1.35g,10.0mmol)的chcl
3
(4ml)溶液中添加氯磺酸(4ml)。将该反应混合物在80℃下加热18小时。将该混合物冷却至环境温度且用dcm(20ml)稀释。将所得混合物倾注入冰水(30ml)中，接着用饱和na
2
co
3
水溶液调整至ph＝7～8。将有机层分离，用饱和nahco
3
水溶液洗涤，经无水na
2
so
4
干燥并浓缩。残余物在石油醚/etoac(10:1,10ml)中重结晶，以得到4-(二甲基氨基)-2-甲苯磺酰氯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.88(d,j＝9.6hz,1h),6.53(m,2h),3.09(s,6h),2.70(s,3h)。
[0223]
按照途径12中所述程序来制备4-{[9-(环己基甲基)-13-(哌啶-1-磺酰基)-5,9,13-三氮杂螺[2.11]十四烷-5-基]磺酰基}-n,n,3-三甲基苯胺而得到化合物a30。
1
h nmr(400mhz,dmso-d
6
):δ9.57(br s,1h),7.50(d,j＝8.8hz,2h),6.85(m,2h),3.95(br s,1h),2.89～3.55(m,24h),1.45～1.90(m,15h),1.28(m,4h),0.95(m,2h),0.66(br s,4h)。ms(ei)的c
32
h
55
n
5
o
4
s
2
实测值638[m+h]
+
。
[0224]
以下化合物以相似方式合成：
[0225][0226]
途径12
[0227][0228]
向哌啶-1-磺酰氯(68.3g,0.37mol)的甲苯(350ml)溶液中逐滴添加丙烷-1,3-二胺(83.4g,1.12mol)的甲苯(150ml)溶液。将该反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。将所得浆液过滤且将滤液浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(dcm/meoh＝50:1至20:1)纯化，以得到n-(3-氨基丙基)哌啶-1-磺胺。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ3.17(m,6h),2.88(t,j＝6.0hz,2h),1.65(m,6h),1.54(m,2h)。
[0229]
将在甲苯(90.0ml)中的n-(3-氨基丙基)哌啶-1-磺胺(22.62mmol)与环己烷羧醛(2.8g,24.89mmol)混合物在回流下加热隔夜，且通过迪安-史塔克(dean stark)设备移除水。将该混合物冷却至环境温度且真空浓缩。将所得产物溶解于乙醇(35ml)中并添加nabh
4
(1.66g,43.7mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。用2n hcl(30ml)水溶液使反应物淬灭，且接着用naoh水溶液调整至ph＝10。将所得混合物用乙酸乙酯(50ml)萃取且将有机层浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(dcm/meoh＝50:1至40:1)纯化，以得到n-(3-(环己基甲基氨基)丙基)哌啶-1-磺胺。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ3.17(m,6h),2.78(t,j＝6.0hz,2h),2.45(d,j＝6.4hz,2h),1.75(m,12h),1.44(m,1h),1.23(m,3h),0.96(m,2h)。ms(ei)的
c
15
h
31
n
3
o
2
s实测值318[m+h]
+
。
[0230]
向n-(3-(环己基甲基氨基)丙基)哌啶-1-磺胺(2.8g,8.83mmol)的ch
3
cn(50ml)添加na
2
co
3
(0.97g,9.19mmol)、lii(0.28g,2.12mmol)和3-溴丙基酞酰亚胺(5.66g,21.19mmol)。将反应混合物在回流下加热隔夜。将该混合物冷却至室温且过滤。将滤液浓缩且将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:3)纯化，以得到n-(3-((环己基甲基)(3-(1,3-二侧氧基异吲哚啉-2-基)丙基)氨基)丙基)哌啶-1-磺胺。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.85(m,2h),7.73(m,2h),5.82(br s,1h),3.68(t,j＝7.2hz,2h),3.17(m,6h),2.46(m,4h),2.14(m,2h),1.82(m,2h),1.67(m 12h),1.45(m,3h),1.18(m,2h),0.87(m,2h)。
[0231]
向n-(3-((环己基甲基)(3-(1,3-二侧氧基异吲哚啉-2-基)丙基)氨基)丙基)哌啶-1-磺胺(500mg,0.10mmol)的etoh(5ml)溶液中添加nh
2
nh
2
(1.5ml,2.55mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。在减压环境下移除溶剂，且将残余物用乙酸乙酯(20ml)稀释。将所得混合物用水(2
×
10ml)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)哌啶-1-磺酰胺(380mg,定量)。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ3.17(m,6h),2.78(t,j＝6.8hz,2h),2.45(m,4h),2.14(d,j＝7.2hz,2h),1.82(m,2h),1.67(m 12h),1.45(m,3h),1.18(m,2h),0.87(m,2h)。ms(ei)的c
18
h
38
n
4
o
2
s实测值375[m+h]
+
。
[0232]
向n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)哌啶-1-磺酰胺(2.42g,6.49mmol)和diea(1.31g,10.3mmol)的dcm(50ml)溶液中添加磺酰氯(1.69g,7.13mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌2小时。用水(50ml)洗涤该混合物。有机层经无水na
2
so
4
干燥并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(meoh/dcm＝1:80至1:30)纯化，以得到n-(3-((环己基甲基)(3-(4-(二甲基氨基)-2-氟苯基磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)哌啶-1-磺胺。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.66(m,1h),6.43(m,2h),5.58(br s,2h),3.15(m,6h),3.03(s,6h),2.99(br s,2h)2.46(br s,4h),2.12(br s,2h),1.30～1.70(m,18h),1.21(m,4h),0.82(m,2h)。ms(ei)的c
26
h
46
fn
5
o
4
s
2
实测值575[m+h]
+
。
[0233]
向n-(3-((环己基甲基)(3-(4-(二甲基氨基)-2-氟苯基磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)哌啶-1-磺胺(2.28g,3.97mmol)的dmf(20ml)溶液中添加氢化钠(400mg,3.97mmol)。将该混合物在环境温度下搅拌30分钟。添加二乙磺酸环丙烷-1,1-二基双(亚甲基)酯(1.3g,3.97mmol)且将反应混合物在80℃下搅拌2小时。将该混合物冷却至环境温度且倾注入水(150ml)中。用乙酸乙酯(100ml)萃取所得混合物。有机层用水(50ml
×
2)洗涤，经无水硫酸钠干燥且浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:15至1:8)纯化，以得到游离碱并将其溶解于乙醚(5ml)中。添加氢氯酸(1.5ml或3n的1,4-二恶烷溶液)且搅拌该混合物0.5小时。在真空下移除溶剂且将残余物用乙醚湿磨3次以得到化合物a40。
1
h nmr(400mhz,dmso-d
6
):δ9.89(br s,1h),7.54(m,1h),6.63(m,2h),3.67(br s,1h),3.55-2.89(m,23h),1.90-1.45(m,15h),1.28(m,4h),0.95(m,2h),0.69(m,4h)。ms(ei)的c
31
h
52
fn
5
o
4
s
2
实测值643[m+h]
+
。
[0234]
以下化合物以相似方式合成：
3-鎓酯(化合物a51的中间体)。
[0243]
三氟甲烷磺酸1-((7-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a52的中间体)。
[0244]
三氟甲烷磺酸1-((6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a53的中间体)。
[0245]
三氟甲烷磺酸1-((5-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a54的中间体)。
[0246]
三氟甲烷磺酸1-((6-氟-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a59的中间体)。
[0247]
三氟甲烷磺酸1-((6-溴-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a60的中间体)。
[0248]
三氟甲烷磺酸1-((4-异丙氧基哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯盐酸盐(化合物a66的中间体)。
[0249]
三氟甲烷磺酸1-((4-(环戊-1-烯-1-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a67的中间体)。
[0250]
三氟甲烷磺酸1-((4-(环己-1-烯-1-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a68的中间体)。
[0251]
三氟甲烷磺酸1-((4-(3-氯苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a69的中间体)。
[0252]
三氟甲烷磺酸1-((4-(2-氯苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a73的中间体)。
[0253]
三氟甲烷磺酸1-((4-(4-氯苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a74的中间体)。
[0254]
三氟甲烷磺酸1-((4-(1h-吡唑-1-基)哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a79的中间体)。
[0255]
三氟甲烷磺酸1-((4-(苯并[d]恶唑-2-基)哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a80的中间体)。
[0256]
三氟甲烷磺酸3-甲基-1-((4-(嘧啶-2-基)哌啶-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a81的中间体)。
[0257]
三氟甲烷磺酸1-((2-氯-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5h)-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a82的中间体)。
[0258]
三氟甲烷磺酸1-((5-氯异吲哚啉-2-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a89的中间体)。
[0259]
途径14
[0260][0261]
向4-((9-(环己基甲基)-3-亚甲基-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺(97mg,0.21mmol)的acn(0.8ml)溶液中添加三氟甲烷磺酸3-甲基-1-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯(95mg,0.21mmol)且将该混合物加热至80℃持续8小时，接着直接用快速柱色谱(0-70％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)浓缩并纯化以得到游离碱。向此游离碱添加二乙醚(5ml)和hcl(52μl的4n hcl的1,4-二恶烷溶液)且使该混合物静置10分钟并接着浓缩，以得到4-{[9-(环己基甲基)-3-亚甲基-5-[(4-苯基哌啶-1-基)磺酰基]-1,5,9-三氮杂环十二-1-基]磺酰基}-n,n-二甲基苯胺盐酸盐(化合物a35)。ms(ei)的c
36
h
55
n
5
o
4
s
2
实测值686[m+h]
+
。
[0262]
以下化合物以相似方式合成：
[0263]
[0264][0265]
途径15
[0266][0267]
向n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(838mg,1.84mmol)的acn(5ml)溶液中添加三氟甲烷磺酸3-甲基-1-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯(838mg,1.84mmol)且将该混合物加热至80℃持续8小时，将其直接用快速柱色谱(0-70％己烷(1％dea/乙酸乙酯)浓缩并纯化以得到产物。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.68(d,j＝8.8hz,2h),7.33(m,5h),6.68(d,j＝8.8hz,2h),5.75(br s,2h),3.84(m,2h),3.18(m,2h),3.05(s,6h),2.91(m,4h),2.65(m,1h),2.43(m,4h),2.08(m,2h),1.73(m,12h),1.40(m,1h),1.15(m,4h),0.85(m,2h)。
[0268]
经20分钟向4-((9-(环己基甲基)-3-甲基-5-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺(123mg,0.194mmol)的nmp(10ml)溶液中添加氢化钠(19mg的60％于矿物油中的分散液,0.485mmol)。将混合物在环境温度下搅拌30分钟且接着在80℃下另外搅拌20分钟。接着经1小时的时程添加该双磺酸盐。在80℃下8小时后，将该混合物冷却至环境温度，用盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯(3x)萃取，合并的有机物用用盐水(3x)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-50％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)得到游离碱。添加乙醚(5ml)和hcl(4n二恶烷溶液,50ul)使该游离碱转变成hcl盐。浓缩10分钟以得到4-{[9-(环己基甲基)-3-甲基-5-[(4-苯基哌啶-1-基)磺酰基]-1,5,9-三氮杂环十二-1-基]磺酰基}-n,n-二甲基苯胺盐酸盐(化合物a44)。ms(ei)的c
36
h
57
n
5
o
4
s
2
实测值688[m+h]
+
。
[0269]
以下化合物以相似方式合成：
[0270][0271]
途径16
[0272][0273]
向1,1-双(羟甲基)环丙烷(5.00,49.0mmol)的丙酮(20ml)溶液中添加tea(2.2eq,108mmol)且将该混合物冷却至0-5℃。以保持内部温度低于10℃(～1小时)的速率加入乙磺酰氯。在环境温度下另外搅拌2小时后，将该混合物用150ml的水稀释，用乙酸乙酯(2x50ml)萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，以得到产物。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ4.16(s,4h),3.20(m,4h),1.46(t,j＝7.2hz,6h),0.83(s,4h)。ms(ei)的c
9
h
18
o
6
s
2
实测值287[m+h]
+
。
[0274]
以下化合物以相似方式合成：二乙磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯(化合物a44的中间体)。
[0275]
途径17
[0276][0277]
经20分钟向n-(3-((环己基甲基)(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)-4-苯基哌啶-1-磺胺(89mg,0.14mmol)的nmp(7ml)溶液逐份添加nah(14mg的60％于矿物油中的分散液,0.35mmol)。将混合物在环境温度下搅拌30分钟且接着在80℃下搅拌20分钟。接着添加二氯化物且将该混合物在80℃下加热。在80℃下8小时后，将该混合物冷却至环境温度，用盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯(3x)萃取，将合并的有机物以用盐水(3x)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-50％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)得到产物。添加乙醚(5ml)和hcl(4n二恶烷溶液,35ul)使产物转变成hcl盐。将该混和物浓缩以得到4-{[5-(环己基甲基)-9-[(4-苯基哌啶-1-基)磺酰基]-1,5,9-三氮杂环十三烷-1-基]磺酰基}-n,n-二甲基苯胺盐酸盐(化合物b5)。ms(ei)的c
36
h
57
n
5
o
4
s
2
实测值688[m+h]
+
。
[0278]
以下化合物以相似方式合成：
[0279][0280]
途径18
[0281][0282]
n-(4-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丁-2-基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺按照途径2改用合适的磺酰氯来合成。
[0283]
4-((5-(环己基甲基)-2-甲基-11-亚甲基-9-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺按照途径15中所述的程序改用3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯来合成，以得到4-((5-(环己基甲基)-2-甲基-11-亚甲基-9-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺(化合物b6)。ms(ei)的c
37
h
57
n
5
o
4
s
2
实测值700[m+h]
+
。
[0284]
以下化合物以相似方式合成：
[0285]
[0286]
[0287]
[0288]
[0289]
[0290][0291]
途径19
[0292][0293]
向n-(3-((环己基甲基)(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)-4-苯基哌啶-1-磺胺(33mg,0.052mmol)的nmp(3ml)溶液中添加氢化钠(4.6mg的60％于矿物油中的分散液,0.11mmol)。将混合物在环境温度下搅拌30分钟且接着在80℃下另外搅拌20分钟。接着添加二氯化物(19mg,0.052mmol)。在80℃下2小时后，将该混合物冷却至环境温度，用盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯(3x)萃取，合并的有机物用盐水(3x)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-50％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)得到9-(环己基甲基)-1-[4-(二甲基氨基)苯磺酰基]-5-[(4-苯基哌啶-1-基)磺酰基]-1,5,9-三氮杂环十二-3-醇(化合物a55)。ms(ei)的c
35
h
55
n
5
o
5
s
2
实测值690[m+h]
+
。
[0294]
途径20
[0295][0296]
向3-氟-4-碘苯胺(1.11g,4.68mmol)的乙腈(15.00ml)溶液中添加37％甲醛水溶液(8.0ml,99.9mmol)和氰基硼氢化钠(1.88g,29.97mmol)。接着经10分钟逐滴添加乙酸(1ml)且将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。添加naoh(1n,30ml)且用乙酸乙酯(50ml)萃取所得混合物。有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到3-氟-4-碘-n,n-二甲基苯胺。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.47(m,1h),6.43(m,1h),6.28(m,1h),2.94(s,6h)。
[0297]
在-78℃下向3-氟-4-碘-n,n-二甲基苯胺(500mg,1.89mmol)的乙醚(5ml)溶液中添加n-buli(0.8ml,1.89mmol)。在此温度下将该混合物搅拌0.5小时。添加硫酰二氯(405mg,3mmol)且搅拌该反应混合物1小时。用水(10ml)使反应物淬灭，接着用饱和nahco
3
水溶液调整至ph＝8。用乙酸乙酯(10ml)萃取所得混合物。将有机层分离燥并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱纯化，以得到4-(二甲基氨基)-2-氟苯-1-磺酰氯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.73(m,1h),6.43(m,2h),3.15(s,3h)。
[0298]
途径21
[0299][0300]
向9-(环己基甲基)-1-((4-(二甲氨基)苯基)磺酰基)-5-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-3-醇(30mg,0.043mmol)的甲苯(0.5ml)溶液中添加nah(1.6mg的60％于矿物油中的分散液,0.065mmol)且随后添加碘甲烷(14μl,0.22mmol)。在搅拌1小时后，用水使该混合物淬灭，用dcm(2x)萃取，将有机物合并且经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-50％己烷/乙酸乙酯+1％dea)得到4-{[9-(环己基甲基)-3-甲氧基-5-[(4-苯基哌啶-1-基)磺酰基]-1,5,9-三氮杂环十二-1-基]磺酰基}-n,n-二甲基苯胺(化合物a61)。ms(ei)的c
36
h
57
n
5
o
5
s
2
实测值704[m+h]
+
。
[0301]
途径22
[0302][0303]
向9-(环己基甲基)-1-((4-(二甲氨基)苯基)磺酰基)-5-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-3-醇(171mg,0.248mmol)添加dcm(10ml)且随后添加戴斯-马丁过碘烷(126mg,0.297mmol)。在室温下使该混合物静置2小时，接着将其直接以fcc(0-60％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)浓缩并纯化，以得到9-(环己基甲基)-1-((4-(二甲氨基)苯基)磺酰基)-5-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-3-酮(化合物b20)。ms(ei)的c
35
h
53
n
5
o
5
s
2
实测值688[m+h]
+
。
[0304]
途径23
[0305][0306]
向4-((5-((6-溴-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-9-(环己基甲基)-3-亚甲
基-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺(70mg,0.095mmol)的dmf(0.7ml)溶液中添加水(0.1ml)、苯基硼酸(13mg,0.10mmol)、pd(dppf)cl
2-dcm(7.8mg,0.001mmol)和碳酸钠(30mg,0.29mmol)。将该混合物加热至80℃持续1小时，接着用盐水稀释，用乙酸乙酯(2x)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用快速柱色谱(0-50％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)得到4-((9-(环己基甲基)-3-亚甲基-5-((6-苯基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-1-基)磺酰基)-n,n-二甲基苯胺(化合物a63)。ms(ei)的c
40
h
53
n
5
o
4
s
2
实测值734[m+h]
+
。
[0307]
途径24
[0308][0309]
在-20℃下向在dcm(130ml)中的环戊酮(5.50g,65.5mmol)和na
2
co
3
(10.4g,98.2mmol)混合物添加tf
2
o(18.6g,72.0mmol)。使该反应混合物升温至环境温度且搅拌隔夜。将固体滤除且将滤液浓缩以得到三氟甲烷磺酸环戊烯基酯。
[0310]
将三氟甲烷磺酸环戊烯基酯(7.7g,35.6mmol)于1,4-二恶烷(105ml)和水(50ml)中的溶液脱气且接着充填氩气。添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(6.0g,19.4mmol)、pd(pph
3
)
4
(1.02g,0.88mmol)和碳酸钠(10.3g,97.1mmol)。在90℃下将该反应混合物搅拌隔夜且接着冷却至环境温度。将该混合物倾注入水中且用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水na
2
so
4
干燥，且在减压环境下浓缩。快速硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷＝1:99至5:95)纯化以得到4-环戊烯基-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ5.73(br s,1h),5.56(br s,1h),4.00(br s,2h),3.45(br s,2h),2.47(m,4h),2.33(br s,2h),1.94(m,2h),1.48(s,9h)。
[0311]
向4-环戊烯基-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(3.3g,15.3mmol)的甲醇(30ml)溶液中添加pd/c(0.6g)。将该混合物在15psi压力下氢化5小时。将该混合物过滤且将滤液在减压环境下浓缩，以得到4-环戊基哌啶-1-甲酸叔丁酯。
[0312]
向4-环戊基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.9g,11.5mmol)的乙酸乙酯(15ml)溶液中添加etoac/hcl(4n,20ml)。搅拌该混合物2小时且将溶剂移除。将所得产物用乙醚洗涤以得到4-环戊基哌啶盐酸盐。
1
h nmr(400mhz,d
2
o):δ3.25(m,2h),2.75(m,2h),1.84(m,2h),1.61(m,2h),1.45(m,8h),0.96(m,2h)。
[0313]
将三氟甲烷磺酸4-环戊基哌啶盐酸盐(1.4g,9.5mmol)和1-(1h-咪唑-1-基磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(3.45g,9.5mmol)混合在ch
3
cn(20ml)中。将混合物在环境温
度下搅拌隔夜。将溶液移除。将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:9至1:3)纯化，以得到1-(1h-咪唑-1-基磺酰基)-4-环戊基哌啶。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.91(s,1h),7.24(s,1h),7.14(s,1h),3.87(m,2h),2.51(m,2h),1.83(m,4h),1.54(m,5h),1.33(m,2h),1.08(m,3h)。
[0314]
向1-(1h-咪唑-1-基磺酰基)-4-环戊基哌啶(500mg,1.8mmol)的dcm(5ml)溶液中添加meotf(0.3g,1.8mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。移除溶剂且将所得产物用乙醚洗涤以得到三氟甲烷磺酸1-((4-环戊基哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯。
1
h nmr(400mhz,cd
3
od):δ9.59(s,1h),8.02(s,1h),7.78(s,1h),4.00(s,3h),3.95(m,2h),2.87(m,2h),1.81(m,4h),1.54(m,6h),1.23(m,4h)。
[0315]
以下化合物以相似方式合成：
[0316]
三氟甲烷磺酸1-((4-环己基哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a65的中间体)。
[0317]
三氟甲烷磺酸3-甲基-1-((4-(四氢-2h-哌喃-4-基)哌啶-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a78的中间体)。
[0318]
途径25
[0319][0320]
向在dcm(0.5ml)和甲醇(0.05ml)中的9-(环己基甲基)-1-((4-(二甲氨基)苯基)磺酰基)-5-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-3-酮(19mg,0.028mmol)添加羟胺盐酸盐(5.8mg,0.083mmol)和乙酸钠(6.8mg,0.083mmol)。在环境温度下搅拌该混合物6小时，接着用快速柱色谱(0-60％己烷(1％dea)/乙酸乙酯)浓缩并纯化以得到9-(环己基甲基)-1-((4-(二甲氨基)苯基)磺酰基)-5-((4-苯基哌啶-1-基)磺酰基)-1,5,9-三氮杂环十二-3-酮肟(化合物a75)。ms(ei)的c
35
h
54
n
6
o
5
s
2
实测值703[m+h]
+
。
[0321]
途径26
[0322][0323]
将1-氯-2-碘苯(5.0g,21.1mmol)的dmf(150ml)溶液脱气且接着充填氩气。添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(7.13g,23.0mmol)、pd(dppf)cl
2
(1.7g,2.1mmol)和碳酸钾(8.69g,63.0mmol)。在110℃下搅拌该反应混合物隔夜且接着冷却至环境温度。将该混合物倾注入水中且用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水na
2
so
4
干燥并在减压环境下浓缩。用快速硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷＝1:9至1:4)纯化以得到4-(2-氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.37(m,1h),7.18(m,3h),5.67(m,1h),4.06(m,2h),3.64(m,2h),2.46(br s,2h),1.51(s,9h)。
[0324]
向4-(2-氯苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(2.0g,6.8mmol)的meoh(20ml)溶液中添加hcl/meoh(3m,20ml)。将该混合物在环境温度下搅拌2小时。所得溶液4-(2-氯苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐直接用于下个步骤中。
[0325]
向4-(2-氯苯基)哌啶盐酸盐的meoh/hcl溶液中添加pto
2
(0.1g)。将该混合物在15psi压力下氢化3小时。将催化剂滤除且将滤液浓缩以得到产物。
1
hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.19(br s,2h),7.37(m,1h),7.36(m,4h),3.44(m,1h),3.33(m,2h),3.08(m,2h),1.95(m,4h)。
[0326]
将游离碱(0.95g,4.8mmol)和三氟甲烷磺酸1-(1h-咪唑-1-基磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(1.76g,4.8mmol)混合在ch
3
cn(10ml)中。将该混合物在环境温度下搅拌隔夜。将溶剂移除，且将残余物用硅胶柱色谱纯化，以得到1-(1h-咪唑-1-基磺酰基)-4-(2-氯苯基)哌啶。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ8.01(s,1h),7.36(m,2h),7.18(m,4h),4.07(m,2h),3.06(m,1h),2.74(m,2h),1.99(m,2h),1.81(m,2h)。
[0327]
向1-(1h-咪唑-1-基磺酰基)-4-(2-氯苯基)哌啶(501mg,1.5mmol)的dcm(5ml)溶液中添加meotf(0.27g,1.63mmol)。将该混合物在环境温度下搅拌隔夜。将溶液移除。将所得产物用乙醚洗涤以得到三氟甲烷磺酸1-((4-(2-氯苯基)哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a57的中间体)。
1
hnmr(400mhz,cd
3
od):δ9.65(s,1h),8.08(s,1h),7.82(s,1h),7.39(m,4h),4.16(m,2h),4.02(s,3h),3.31(m,3h),2.03(m,2h),1.85(m,2h)。
[0328]
以下化合物以相似方式合成：
[0329]
三氟甲烷磺酸1-((4-(3-氯苯基)哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(化合物a58的中间体)。
[0330]
三氟甲烷磺酸1-((4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯
(化合物a72的中间体)。
[0331]
途径27
[0332][0333]
在0℃下向在dcm(1.5l)中的2-(3-氯苯基)乙胺(149g,0.95mol)和tea(144g,1.42mol)逐滴添加氯甲酸乙酯(107g,1.14mol)。搅拌该反应混合物3小时且接着用1nhcl水溶液(1l)和饱和nahco
3
水溶液(600ml)洗涤。dcm层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到3-氯苯乙基氨基甲酸甲酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.27(m,3h),7.08(m,1h),4.77(m,1h),3.78(s,3h),3.44(m,2h),2.80(m,2h)。
[0334]
将3-氯苯乙基氨基甲酸甲酯(193g,0.9mol)溶解于cf
3
so
3
h(1.36kg)中。在120℃下将该混合物隔夜加热。将该混合物冷却至环境温度且倾注入冰水(4l)。以过滤收集所得产物且用乙醚洗涤以得到6-氯-3,4-二氢异喹啉-1(2h)-酮。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ8.01(m,1h),7.35(m,1h),7.25(m,2h),6.21(br s,1h),3.60(m,2h),3.01(m,2h)。
[0335]
向6-氯-3,4-二氢异喹啉-1(2h)-酮(33g,182mmol)的thf(330ml)溶液逐滴添加bh
3-me
2
s(73ml,729mmol)。使反应混合物回流隔夜。将该混合物冷却至环境温度且接着用6nhcl水溶液淬灭(300ml)。在减压环境下将thf移除，且使剩余溶液回流隔夜。将该混合物浓缩至一定体积且接着用2nnaoh水溶液进行碱化。用dcm萃取所得混合物。dcm层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到6-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉。
[0336]
向6-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉(18.5g,0.11mol)的ch
3
cn(180ml)溶液中添加化合物三氟甲烷磺酸2,3-二甲基-1-((2-甲基-1h-咪唑-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯(43.5g,0.11mol,参考文献:j.org.chem.2002,68,115-119.)。在30℃下将反应混合物搅拌隔夜。将溶剂移除，且将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:1)纯化，以得到6-氯-2-(2-甲基-1h-咪唑-1-基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.21(m,
1h),7.18(s,1h),7.02(m,1h),6.94(m,1h),4.45(s,2h),3.62(m,2h),2.92(m,2h),2.67(s,3h)。
[0337]
向6-氯-2-(2-甲基-1h-咪唑-1-基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(25.5g,82mmol)的dcm(260ml)溶液中添加cf
3
so
3
me(13.45g,82mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。移除溶剂且将残余物用乙醚洗涤以得到三氟甲烷磺酸1-(6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯。
[0338]
向三氟甲烷磺酸1-(6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(8.7g,18.4mmol)的ch
3
cn(100ml)溶液中添加(r)-n-(3-氨基-2-甲基丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(5.0g,18.4mmol)。在30℃下将反应混合物搅拌隔夜。将溶剂移除，且将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:3至1:1)纯化，以得到(s)-6-氯-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(化合物b10)。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.85(m,2h),7.43(m,2h),7.18(m,2h),7.03(m,1h),4.35(s,2h),3.48(m,2h),3.18(s,6h),3.15(m,1h),2.95(m,6h),2.85(m,1h),1.89(m,1h),0.89(m,3h)。
[0339]
将(s)-6-氯-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(300mg,0.6mmol)溶解于nmp(3ml)中且添加nah(60％,96mg,2.4mmol)。将该混合物在环境温度下搅拌30分钟且接着在80℃下加热20分钟。将该混合物冷却至环境温度。添加二甲磺酸((环己基甲基)氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯(231mg,0.6mmol)的nmp(1ml)溶液。在80℃下加热该反应混合物1小时，接着冷却至环境温度且用水(10ml)淬灭。用乙酸乙酯(15ml)萃取所得混合物。将萃取物用盐水洗涤并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:8至1:3)纯化，以得到化合物a87。ms(ei)的c
34
h
52
cln
5
o
4
s
2
实测值695[m+h]
+
。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.59(d,j＝8.8hz,2h),7.15(m,2h),7.00(m,1h),6.68(d,j＝8.8hz,2h),4.34(m,2h),3.71(m,2h),3.45(m,2h),3.17(m,3h),3.05(s,6h),2.88(m,4h),2.25(m,2h),2.15(m,6h),1.95(m,2h),1.65(m,8h),1.23(m,6h),0.95(m,5h)。
[0340]
以下化合物以相似方式合成：
[0341]
[0342]
[0343][0344]
途径28
[0345][0346]
向苯甲胺(37.7g,0.350mol)的ch
3
cn(1l)溶液中添加3-氯丙-1-醇(100g,1.06mol)和na
2
co
3
(131g,1.24mol)。使该反应混合物回流50小时，接着冷却至环境温度。将该混合物过滤且将滤液在减压环境下浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(meoh/dcm＝1:99至3:97)纯化，以得到3,3'-(苄基氮烷二基)二丙-1-醇。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.34(m,5h),3.70(m,4h),3.61(s,2h),3.48(s,2h),2.68(m,4h),1.78(m,4h)。
[0347]
向3,3'-(苄基氮烷二基)二丙-1-醇(55g)的meoh(500ml)溶液中添加pd/c(10g)。将该混合物在15kg压力下于环境温度中氢化6小时。将该混合物过滤且将滤液浓缩以得到3,3'-氮烷二基二丙-1-醇。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ3.78(m,4h),3.46(s,2h),2.84(m,4h),1.75(m,4h)。
[0348]
向3,3'-氮烷二基二丙-1-醇(15g,113mmol)的dcm(300ml)溶液中添加环己烷羧醛(18.8g,141mmol)和nabh(oac)
3
(72.5g,0.34mol)。搅拌该混合物0.5小时且添加hoac(20.4g,0.34mol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。用水(150ml)使该混合物淬灭，接
naoh水溶液调整至ph＝11且用乙醚(200ml)萃取。将萃取物用水(150ml
×
3)洗涤以移除未反应的3-氨基丙基氨基甲酸叔丁酯，经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(3-((3-(((苯甲氧基)羰基)氨基)丙基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.36(m,5h),5.60(br s,1h),5.11(m,3h),3.30(m,2h),3.20(m,2h),2.68(m,4h),1.70(m,5h),1.44(s,9h)。
[0354]
向(3-((3-(((苯甲氧基)羰基)氨基)丙基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.27mmol)的dcm(5ml)溶液中添加环己烷羧醛(31mg,0.27mmol)和hoac(30mg,1.1mmol)。搅拌该混合物0.5小时且一次添加入nabh(oac)
3
(235g,1.1mmol)。搅拌该反应混合物4小时。tlc分析显示出有50％的转化，且添加另一份的环己烷羧醛(15mg,0.13mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。添加水(10ml)使反应物淬灭，且添加hoac将该混合物调整至ph＝2。另外搅拌该混合物0.5小时，接着用naoh水溶液(1n)调整至ph＝12。将有机层分离并浓缩，以得到(3-((3(((苯甲氧基)羰基)氨基)丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.27(m,5h),6.12(br s,1h),5.55(br s,1h),5.01(s,3h),3.34(m,2h),3.18(m,2h),3.08(m,2h),2.80(m,4h),1.65(m,9h),1.44(s,9h),1.12(m,6h)。
[0355]
向(3-((3-(((苯甲氧基)羰基)氨基)丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(0.50g,1.1mmol)的meoh(5ml)溶液中添加pd/c(0.1g)。将该混合物在15psi压力下氢化3小时。将该混合物过滤且将滤液浓缩以得到(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ5.78(br s,1h),3.19(br s,2h),2.78(m,2h),2.40(m,4h),2.13(m,2h),1.98(br s,2h),1.67(m,9h),1.44(s,9h),1.12(m,4h),0.89(m,2h)。
[0356]
向(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g,3.7mmol)的ch
3
cn(10ml)溶液中添加3-甲基-1-(4-苯基哌啶-1-基磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓(1.47g,3.7mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。将溶剂移除，且将残余物用硅胶柱色谱纯化，以得到3-((环己基甲基)(3-(4-苯基哌啶-1-磺酰氨基)丙基)氨基)丙基氨基甲酸叔丁酯。
[0357]
向3-((环己基甲基)(3-(4-苯基哌啶-1-磺酰氨基)丙基)氨基)丙基氨基甲酸叔丁酯(0.85g，1.5mmol)的dcm(15ml)溶液中添加tfa(10ml)。将反应混合物在环境温度下搅拌3小时。移除溶剂且将残余物溶解于dcm(50ml)中。用1n naoh水溶液使该溶液碱化。dcm层经无水na
2
so
4
干燥并浓缩，以得到n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-苯基哌啶-1-磺酰胺。
[0358]
向n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-苯基哌啶-1-磺酰胺(90mg,0.20mmol)的dcm(5ml)溶液中添加tea(40mg,0.4mmol)。将该混合物冷却至0℃并添加4-(二甲基氨基)-2,6-二氟苯-1-磺酰氯(60mg,0.24mmol)的dcm(1ml)溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌2小时。将该混合物用dcm(30ml)稀释且接着用水(20ml)洗涤。有机层经无水na
2
so
4
干燥并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱纯化，以得到n-(3-((环己基甲基)(3-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)-4-苯基哌啶-1-磺胺。
[0359]
向n-(3-((环己基甲基)(3-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)-4-苯基哌啶-1-磺胺(80mg,0.123mmol)的nmp(2ml)溶液中添加nah(12mg,0.29mmol)。在80℃下加热该混合物0.5小时。将该混合物冷却至环境温度且添加3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯
(15mg,0.12mmol)的nmp(0.1ml)溶液。将反应混合物在80℃下加热2小时。将该混合物冷却至环境温度且添加水(20ml)。将所得混合物用乙酸乙酯(15ml)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷＝10:30至20:10)纯化，以得到化合物a86。ms(ei)的c
36
h
53
f
2
n
5
o
4
s
2
实测值733[m+h]
+
。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.31(m,5h),6.18(m,2h),5.25(m,2h),4.05(s,2h),3.87(m,4h),3.20(m,4h),3.05(s,6h),2.88(m,2h),2.41(m,4h),2.05(m,5h),1.75(m,9h),1.27(m,6h),0.85(m,2h)。
[0360]
途径30
[0361][0362]
在-78℃下向3,5-二氟-4-碘-n,n-二甲基苯胺(500mg,1.77mmol)的乙醚(5ml)溶液逐滴添加n-buli(0.71ml,1.77mmol)。在-78℃下搅拌该混合物0.5小时。添加硫酰二氯(358mg,1.5mmol)。以水(10ml)使该混合物淬灭，接着用乙酸乙酯(15ml)萃取。有机层经无水na
2
so
4
干燥并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱纯化以得到粗产物，其进一步在己烷/etoac(10:1)中重结晶以得到4-(二甲基氨基)-2,6-二氟苯-1-磺酰氯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ6.21(s,1h),6.18(s,1h),3.09(s,6h)。
[0363]
途径31
[0364][0365]
向1,3-二氯丙-2-酮(5.0g,39.5mmol)的h
2
o(50ml)悬浮液添加o-甲胲盐酸盐(3.5g,41.5mmol)，且将反应混合物在环境温度下搅拌1小时。将有机层分离，用乙醚稀释并真空浓缩(<30℃)，以得到1,3-二氯丙-2-酮o-甲肟。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ4.33(s,2h),4.27(s,2h),3.94(s,3h)。
[0366]
途径32
[0367][0368]
在0℃下向(s)-6-氯-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(100.0mg,0.200mmol)的无水nmp(3ml)溶液中添加nah(24.0mg,0.600mmol)，在环境温度下搅拌该混合物20分钟且其在此期间从混浊的混合物转变成几乎透明。添加碘甲烷(27μl,0.440mmol)，在环境温度下搅拌该混合物1小时且进展未超过～50％完成度，因而再加入相同量的nah和甲基碘使反应在环境温度下再过一小时后完成。添加盐水(10ml)和ea(10ml)。将水层用ea(1x5ml)萃取且将有机物合并，用盐水洗涤(3x10ml)，经硫酸钠干燥，过滤且浓缩。以fcc(己烷/ea 0-70％)得到化合物b12。ms(ei)的c
23
h
33
cln
4
o
4
s
2
实测值529[m+h]
+
。
[0369]
途径33
[0370][0371]
向甲基丙烯酸甲酯(300g,3.0mol)的meoh(1.5l)溶液中添加(s)-1-苯基乙胺(363g,3mol)。使该反应混合物回流5天。将该混合物浓缩且将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:9至1:1)纯化，以得到2-甲基-3-((s)-1-苯基乙基氨基)丙酸甲酯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.25(m,5h),3.75(m,1h),3.69(s,3h),2.75(m,3h),1.39(m,1h),1.28(m,3h),1.09(m,3h)。
[0372]
向2-甲基-3-((s)-1-苯基乙基氨基)丙酸甲酯(440g,1.99mol)的丙酮(6l)溶液中添加tsoh-h
2
o(378g,1.99mol)。将该混合物在环境温度下搅拌1小时。通过过滤来收集沉淀的固体并干燥，以得到盐类(300g)且使其悬浮于丙酮(2l)中并回流1小时。将该混合物冷却至环境温度且以过滤收集所得沉淀物而得到盐类，且使其悬浮于dcm(2l)和饱和k
2
co
3
水溶液(1.5l)中。搅拌该混合物0.5小时将固体溶解。将dcm层分离，经无水na
2
so
4
干燥并浓缩，以得到(r)-2-甲基-3-((s)-1-苯基乙基氨基)丙酸甲酯。
[0373]
向(r)-2-甲基-3-((s)-1-苯基乙基氨基)丙酸甲酯(140g,0.630mol)的meoh(1.4l)溶液中添加hoac(30ml)和pd/c(15g)。在60℃于20kg压力下将该混合物氢化。通过过滤将催化剂移除，且将滤液浓缩以得到(r)-3-氨基-2-甲基丙酸甲酯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ5.09(br,3h),3.72(s,3h),3.05(m,1h),2.93(m,1h),2.75(m,1h),1.23(d,j＝7.2hz,3h)。
[0374]
在0～5℃下向(r)-3-氨基-2-甲基丙酸甲酯(112g,0.63mol)的二氯甲烷(1l)溶液中添加tea(160g,1.58mol)和boc
2
o(152g,0.69mol)。使反应混合物升温至环境温度并搅拌隔夜。该混合物分别用盐水(1l)、2n hcl水溶液(1l)和饱和nahco
3
水溶液(1l)洗涤。有机层经无水na
2
so
4
干燥并浓缩。将残余物用硅胶柱色谱纯化，以得到(r)-3-(叔丁氧基羰基)-2-甲基丙酸甲酯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ4.94(br s,1h),3.70(s,3h),3.31(m,2h),2.70(m,1h),1.52(s,9h),1.18(d,j＝7.2hz,3h)。
[0375]
向(r)-3-(叔丁氧基羰基)-2-甲基丙酸甲酯(6g,51.3mmol)的thf(60ml)溶液中添
加libh
4
(1.12g,102mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。用水(30ml)使该混合物淬灭，随后添加1nhcl水溶液调整至ph＝2～3。将所得混合物用乙酸乙酯萃取，将萃取物用饱和nahco
3
水溶液洗涤，经无水na
2
so
4
干燥并浓缩，以得到(r)-3-羟基-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ3.57(m,1h),3.37(m,2h),3.05(m,1h),1.77(m,1h),1.48(s,9h),0.88(d,j＝7.2hz,3h)。
[0376]
向(r)-3-羟基-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(2.5g,13.2mmol)的甲苯(25ml)溶液中添加pph
3
(4.15g,15.8mmol)和异吲哚啉-1,3-二酮(2.72g,18.5mmol)。将该混合物冷却至0～5℃且逐滴添加diad(3.2g,15.8mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌3小时。将沉淀的固体滤除并将滤液浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:9至1:1)纯化，以得到(r)-3-(1,3-二侧氧基异吲哚啉-2-基)-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.85(m,2h),7.47(m,2h),5.23(br s,1h),3.64(m,2h),3.03(br s,2h),2.13(m,1h),1.43(s,9h),0.96(d,j＝6.4hz,3h)。
[0377]
向(r)-3-(1,3-二侧氧基异吲哚啉-2-基)-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(40g,8.83mmol)的meoh(200ml)溶液中添加甲胺溶液(7.8g,30％的meoh溶液)。在60℃下将该反应混合物加热6小时。在减压环境下将溶剂移除。使残余物悬浮于乙醚(300ml)中且接着搅拌0.5小时。将固体滤除且在减压环境下将滤液浓缩以得到(s)-3-氨基-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。
[0378]
向(s)-3-氨基-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(12.5g,66.5mmol)的dcm(250ml)溶液中添加tea(10.3g,101.7mmol)。将该混合物冷却至0～5℃且添加4-(二甲基氨基)苯-1-磺酰氯(16g,72mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌3小时。将该混合物用水洗涤且将有机相在减压环境下浓缩。将残余物用硅胶柱色谱(etoac/石油醚＝1:9至3:7)纯化，以得到(r)-3-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.70(d,j＝8.8hz,2h),6.71(d,j＝8.8hz,2h),5.45(m,1h),4.72(m,1h),3.18(m,1h),3.04(s,6h),2.98(m,2h),2.75(m,1h),1.78(m,1h),1.41(s,9h),0.87(m,j＝6.8hz,3h)。
[0379]
向(r)-3-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(21g,59.3mmol)的meoh(150ml)溶液中添加4nhcl/meoh(150ml)。在环境温度下搅拌该混合物3小时。在减压环境下移除溶剂。使所得固体悬浮于dcm(200ml)中且添加饱和k
2
co
3
水溶液(150ml)。将该混合物搅拌5分钟且将有机层分离，经无水na
2
so
4
干燥，且浓缩得到化合物(r)-n-(3-氨基-2-甲基丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺.
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.70(d,j＝8.8hz,2h),6.68(d,j＝8.8hz,2h),3.04(s,6h),2.98(m,1h),2.75(m,2h),2.58(m,1h),1.78(m,2h),0.87(m,j＝7.2hz,3h)。
[0380]
使用相似的方法来合成(s)-n-(3-氨基-2-甲基丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(化合物a76的中间体)。
[0381]
途径34
[0382][0383]
在0℃下向6-氯-n-((r)-3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-1,2,3,4-四氢萘-2-磺胺(100mg,200μm)的无水nmp(4ml)溶液中添加nah(24mg,600μmol)，在环境温度下搅拌该混合物20分钟且其在此期间从混浊的混合物转变成几乎透明。添加二氯化物(21.3μl,200μmol)且将该混合物加热至80℃。在40分钟后用盐水使反应物淬灭且用乙酸乙酯(2x)萃取水层，合并的有机物用盐水(3x)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。用柱色谱(0-50％己烷+1％二乙胺)/乙酸乙酯)得到产物(化合物b21)。ms(ei)的c
25
h
35
cln
4
o
4
s
2
实测值555[m+h]
+
。
[0384]
途径35
[0385][0386]
向三氟甲烷磺酸1-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪(1.4g,6.8mmol)的ch
3
cn(15ml)溶液中添加1-(1h-咪唑-1-基磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(2.7g,6.8mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。接着将该混合物浓缩且将残余物用柱色谱纯化，以得到1-((1h-咪唑-1-基)磺酰基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪。
[0387]
在0℃下向1-((1h-咪唑-1-基)磺酰基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪(0.92g,2.7mmol)的dcm(10ml)溶液中添加cf
3
so
3
me(0.45g,2.7mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌5小时且接着浓缩，并将所得产物用乙醚洗涤以得到三氟甲烷磺酸1-((4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯。
[0388]
向(r)-n-(3-氨基-2-甲基丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(0.6g,2.2mmol)的ch
3
cn(6ml)溶液中添加三氟甲烷磺酸1-((4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)磺酰基)-3-甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(1.1g,2.2mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。将该混合物浓缩且将残余物用柱色谱纯化，以得到(s)-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺胺。
[0389]
向(s)-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺胺(771mg,1.42mmol)的nmp(7ml)溶液中添加nah(140mg,3.48mmol,60％)。在80℃下搅拌该混合物0.5小时。将该混合物冷却至70℃并添加二甲磺酸((环己基甲基)氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯(820mg,2.1mmol)。在70℃下搅拌该反应混合物2小时，接着冷却且倾注入水中。用乙酸乙酯萃取所得混合物。将萃取物浓缩且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝10:1)纯化，以得到化合物a137。ms(ei)的c
36
h
57
fn
6
o
5
s
2
实测值737[m+h]
+
。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.62(d,j＝8.8hz,2h),7.16(m,2h),7.05(m,1h),6.86(d,j＝8.8hz,2h),4.35(m,2h),3.62(m,4h),3.19(m,2h),3.04(s,6h),2.87(m4h),2.46(m,5h),1.92(m,1h),1.79(m,2h),1.66(m,4h)。
[0390]
以下化合物以相似方式合成：
[0391]
[0392]
[0393]
[0394][0395]
途径36
[0396][0397]
向(r)-2-((叔丁氧基羰基)甲基)丁酸甲酯(4.8g,20.8mmol)的thf(50ml)溶液中添加libh
4
(0.7g,33mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。以水(30ml)使该混合物淬灭，随后逐滴添加1nhcl水溶液调整至ph＝2～3。将所得混合物用乙酸乙酯萃取，且将萃取物用饱和nahco
3
水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(r)-2-(羟甲基)丁基氨基甲酸叔丁酯。
[0398]
向(r)-2-(羟甲基)丁基氨基甲酸叔丁酯(3.4g,16.7mmol)的甲苯(40ml)溶液中添加pph
3
(6.2g,17.4mmol)和异吲哚啉-1,3-二酮(3.7g,25mmol)。将该混合物冷却至0～5℃并逐滴添加diad(4.3g,22mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌3小时。将所得沉淀物过
滤且将滤液浓缩。将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝9:1至1:1)纯化，以得到1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-4-(2-甲基-1h-咪唑-1-基磺酰基)哌嗪。
[0399]
向1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-4-(2-甲基-1h-咪唑-1-基磺酰基)哌嗪(3.8g,11.4mmol)的etoh(70ml)溶液中添加胼水合物(1.1g,80％)。使该反应混合物回流6小时。将所得产物过滤且将滤液在减压环境下浓缩。将残余物溶解于1n naoh水溶液(20ml)中，接着用dcm(50ml)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(s)-2-(氨基甲基)丁基氨基甲酸叔丁酯。
[0400]
向(s)-2-(氨基甲基)丁基氨基甲酸叔丁酯(1.87g,9.2mmol)的dcm(20ml)溶液中添加tea(1.01g,10.1mol)。将该混合物冷却至0～5℃并添加4-(二甲基氨基)苯-1-磺酰氯(2.0g,9.2mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌3小时。将该混和物以水洗涤并接着浓缩。将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝9:1至7:3)纯化，以得到(r)-2-((4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)甲基)丁基氨基甲酸叔丁酯。
[0401]
向(r)-2-((4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)甲基)丁基氨基甲酸叔丁酯(2.9g,7.5mmol)的meoh(10ml)溶液中添加4nhcl/meoh(15ml)。在环境温度下搅拌该混合物3小时。在减压环境下移除溶剂。使所得产物悬浮于dcm(100ml)中并添加饱和k
2
co
3
水溶液(450ml)。搅拌该混合物5分钟。将dcm层分离，经无水硫酸钠干燥，且浓缩得到(r)-n-(2-(氨基甲基)丁基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺。
[0402]
向(r)-n-(2-(氨基甲基)丁基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(0.9g,3.2mmol)的ch
3
cn(9ml)溶液中添加三氟甲烷磺酸1-((6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(0.59g,3.2mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。将该混合物浓缩且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝8:1至2:1)纯化，以得到(s)-6-氯-n-(2-((4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)甲基)丁基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺。
[0403]
向(s)-6-氯-n-(2-((4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)甲基)丁基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(0.8g,1.5mmol)的nmp(3ml)溶液中添加nah(159mg,3.9mmol,60％)。在80℃下搅拌该混合物0.5小时。将该混合物冷却至70℃并添加二甲磺酸环丙烷-1,1-氮烷二基双(亚甲基)酯(510mg,2.0mmol)。在70℃下搅拌该反应混合物2小时。移除溶剂且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝15:1)纯化，以得到化合物a182。lc-ms:m/z 708.2[m+h]
+
.1h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.59(m,2h),7.15(m,2h),7.05(m,1h),6.68(m,2h),4.34(m,2h),3.55(m,4h),3.19(m,6h),3.04(s,6h),2.87(m,4h),2.15(m,4h),1.89(m,10h),1.32(m,8h),0.88(m,3h)。
[0404]
途径37
[0405][0406]
向(s)-5-((6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-9-((4-(二甲氨基)苯基)磺酰基)-7-甲基-1,5,9-三氮杂环十二烷-1-甲酸苯甲酯(25mg)添加hbr(33％的乙酸溶液,0.5ml)。在环境温度下30分钟后将该混合物用二乙醚及水(1:1混合,10ml)稀释，并将有机层移出。水层用二乙醚(1x5ml)洗涤，用naoh(4n)碱化至ph～12，接着用dcm(3x2ml)萃取。有机物经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。添加己烷(～2ml)且随后进行浓缩以便于使产物沉淀。在真空下干燥以得到化合物a183。ms(ei)的c
27
h
40
cln
5
o
4
s
2
实测值598[m+h]
+
。
[0407]
途径38
[0408][0409]
向3,3'-氮烷二基二丙-1-醇(1.0g,7.5mmol)的dcm(20ml)溶液中添加异丁醛(1.22g,11.3mmol)。在环境温度下搅拌该混合物30分钟。添加乙酸(1.8g,30.1mmol)且搅拌该混合物另外30分钟。接着添加三乙酰氧基硼氢化钠(6.40g,30.1mmol)且将该反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。将该混合物用3nhcl水溶液调整至ph＝1-2且接着搅拌1小时。向该混合物添加20％naoh水溶液(调整ph至10-11)且接着将其用dcm(50ml)萃取。将萃取物用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，且浓缩得到3,3'-(异丁基氮烷二基)双(丙-1-醇)。
[0410]
向3,3'-(异丁基氮烷二基)双(丙-1-醇)(780mg,4.1mmol)的dcm(10ml)溶液中添加net
3
(820mg,8.2mmol)。接着在0℃下缓慢加入mscl(935mg,8.2mmol)。在环境温度下搅拌该反应混合物3小时。将该混合物dcm(20ml)稀释且接着用水(25ml)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到二甲磺酸3,3'-(异丁基氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯。
[0411]
在环境温度下向(s)-6-氯-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(0.515g,1.03mmol)的无水n-甲基吡咯烷酮溶液中添加nah(0.25g,2.26mmol)。在80℃下将该混合物搅拌加热30分钟且接着冷却至环境温度。添加
二甲磺酸3,3'-(异丁基氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯(0.5g,1.5mmol)且在80℃下将该反应混合物2小时。以水使反应物淬灭，接着用乙酸乙酯萃取。萃取物经无水硫酸钠干燥且浓缩。将残余物用快速柱色谱纯化以得到化合物a152。ms(ei)的c
31
h
48
cln
5
o
4
s
2
实测值654.4[m+h]
+
。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.59(d,2h),7.16(m,2h),7.04(m,1h),6.69(d,2h),4.32(m,2h),3.60(m,4h),3.31(m,3h),3.04(s,6h),2.90(m,4h),2.27(m,4h),1.93(m,2h),1.79(m,1h),0.87(m,9h)。
[0412]
以下化合物以相似方式合成：
[0413]
[0414]
[0415][0416]
途径39
[0417][0418]
向在i-proh(250ml)中的4-氟-2-甲氧基苯胺(25.0g,177mmol)、k
2
co
3
(36.7g,266mmol)和nai(10.6g,0.07mmol)混合物添加双(2-氯乙基)胺盐酸盐(47g,177mmol)。使该反应混合物回流隔夜。移除溶剂且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝10:1)纯化，以得到1-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪。ms:m/z 212.36[m+h]
+
。
[0419]
向1-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪(4.0g,19mmol)的mecn(40ml)溶液中添加2,3-二甲基-1-(2-甲基-1h-咪唑-1-基磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓(7.5g,19mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。移除溶剂且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝20:1)纯化，以得到1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-4-(2-甲基-1h-咪唑-1-基磺酰基)哌嗪。ms:m/z 355.36[m+h]
+
。
[0420]
向1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-4-(2-甲基-1h-咪唑-1-基磺酰基)哌嗪(6.0g,17mmol)的dcm(60ml)溶液中添加cf
3
so
3
me(2.78g,17mmol)。在环境温度下搅拌该反应混合物2小时。移除溶剂且将残余物用乙醚洗涤以得到三氟甲烷磺酸1-(4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯。
[0421]
向三氟甲烷磺酸1-(4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(740mg,2.3mmol)的ch
3
cn(8ml)溶液中添加3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基氨基甲酸叔丁酯(1.17g,2.3mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。将该混合物浓缩且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝8:1至2:1)纯化，以得到3-((环己基甲基)(3-(4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺酰氨基)丙基)氨基)丙基氨基甲酸叔丁酯。
[0422]
向3-((环己基甲基)(3-(4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺酰氨基)丙基)氨基)丙基氨基甲酸叔丁酯(600mg,1mmol)的dcm(30ml)溶液中添加tfa(30ml)。在环境温度下搅拌该混合物2小时。移除溶剂且将残余物溶解于乙酸乙酯中并接着用饱和nahco
3
水溶液洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺胺。
[0423]
向n-(3-((3-氨基丙基)(环己基甲基)氨基)丙基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺胺(416mg,0.83mmol)的dcm(5ml)溶液中添加et
3
n(170mg,1.66mmol)和4-(二甲基氨基)苯磺酰氯(365mg,1.66mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。将该混合物浓缩且用柱色谱(石油醚/etoac＝8:1至2:1)纯化，以得到n-(3-((环己基甲基)(3-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺胺。
[0424]
向n-(3-((环己基甲基)(3-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丙基)氨基)丙基)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪-1-磺胺(320mg,0.45mmol)的nmp(3ml)溶液中添加nah(53mg,1.32mmol,60％分散液)。在80℃下搅拌该混合物0.5小时，接着冷却至70℃并添加二甲磺酸环丙烷-1,1-二基双(亚甲基)酯(170mg,0.66mmol)。在70℃下搅拌该反应混合物2小时。移除溶剂且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝15:1)纯化，以得到化合物a193。ms(ei)的c
37
h
57
fn
6
o
5
s
2
实测值745.0[m+h]
+
。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):d 7.57(t,2h),6.64(t,1h),6.63(br s,4h),3.86(s,3h),3.19(m,4h),3.04(m,8h),2.87(m,12h),2.36(m,2h),1.56(m,15h),0.43(m,4h)。
[0425]
途径40
2-甲基丙基)苯并[d]异恶唑-5-磺胺。
[0432]
向(s)-n-(3-(6-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-磺酰氨基)-2-甲基丙基)苯并[d]异恶唑-5-磺胺(0.61g,1.22mmol)的nmp(6ml)溶液中添加nah(122mg,3.05mmol,60％)。在80℃下搅拌该混合物0.5小时。将该混合物冷却至70℃并添加二甲磺酸3,3'-(环己基甲基氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯(0.74g,1.83mmol)。在70℃下搅拌该反应混合物2小时。将该混合物冷却并倾注入水中。用乙酸乙酯萃取所得混合物。将有机相浓缩且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝12:1)纯化，以得到化合物a180。lc-ms(esi):m/z 692.2[m+h]
+
.1hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.84(s,1h),7.61(m,1h),7.13(m,3h),6.69(m,2h),4.32(m,2h),3.66(m,5h),3.21(m,5h),2.91(m,4h),2.77(m,4h),1.91(m,4h),1.57(m,6h),1.13(m,6h),0.89(m,3h)。
[0433]
以下化合物以相似方式合成：
[0434][0435]
途径41
336.06[m+h]
+
。
[0441]
向(s)-3-(2-甲氧基苯基)-1-((2-甲基-1h-咪唑-1-基)磺酰基)哌啶(800g,2.4mmol)的dcm(10ml)溶液中添加cf
3
so
3
me(398mg,2.4mmol)。在环境温度下搅拌该反应混合物2小时。移除溶剂且将残余物用乙醚洗涤以得到三氟甲烷磺酸(s)-1-(3-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯。
[0442]
向三氟甲烷磺酸(s)-1-(3-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(1g,2mmol)的ch
3
cn(24ml)溶液中添加(r)-n-(3-氨基-2-甲基丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(0.55g,2mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。将该混合物浓缩。将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝8:1至2:1)纯化，以得到(s)-n-((s)-3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-3-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-磺胺。
[0443]
向(s)-n-((s)-3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-3-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-磺胺(454mg,0.86mmol)的nmp(14ml)溶液中添加nah(104mg,2.6mmol,60％)。在80℃下搅拌该混合物0.5小时。将该混合物冷却至70℃并添加二甲磺酸((环己基甲基)氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯(500mg,1.3mmol)。在70℃下搅拌该反应混合物2小时。将该混合物冷却至0-5℃并倾注入水中。用乙酸乙酯萃取所得混合物。有机相经无水硫酸钠干燥且浓缩。将残余物用制备型hplc纯化以得到化合物a210。lc-ms(esi):m/z 718.17[m+h]
+
。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.60(m,2h),7.23(m,2h),6.95(m,2h),6.68(m,2h),3.82(s,3h),3.73(m,5h),3.26(m,4h),3.12(s,6h),2.76(m,5h),2.36(m,4h),1.76(m,9h),1.33(m,10h),0.86(m,6h)。
[0444]
以下化合物以相似方式合成：
[0445][0446]
途径42
[0447][0448]
向在1,4-二恶烷(50ml)和h
2
o(10ml)中的3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(10.92g,35mmol)、1-溴-3-甲氧基苯(6.6g,35mmol)与cs
2
co
3
(3.44g,106mmol)溶液中添加pd(dppf)cl
2
(1.32g,1.75mmol)。在80℃下将反应混合物搅拌隔夜。将溶剂移除。将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝10:1)纯化，以得到3-(3-甲氧基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯。lc-ms(esi):m/z290.12[m+h]
+
。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.26(m,1h),6.96(m,1h),6.89(s,1h),6.81(m,1h),6.19(s,1h),4.25(s,2h),3.81(s,3h),3.54(m,2h),2.30(s,2h),1.49(s,9h)。
[0449]
将该混合物在环境温度下于h
2
环境中搅拌4小时。将该混合物过滤且将滤液浓缩以得到3-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.25(m,1h),6.81(m,3h),3.99(m,2h),3.73(s,3h),2.65(m,1h),2.55(m,1h),2.50(m,2h),1.98(m,1h),1.65(m,2h),1.44(s,9h)。
[0450]
将3-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.85g,27mmol)的hcl/meoh(80ml)溶液在环境温度下搅拌4小时。将该混合物用水处理，接着用3nnaoh水溶液调整至ph＝12。用etoac(100ml
×
2)萃取所得混合物。合并的萃取物经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到3-(3-甲氧基苯基)。lc-ms(esi):m/z 192.09[m+h]
+
。
[0451]
向d-(-)-酒石酸(2.5g,16.7mmol)的meoh(12.5ml)溶液中添加3-(3-甲氧基苯基)哌啶(3.2g,16.7mmol)。将该混合物在80℃下搅拌24小时且接着冷却至环境温度。通过过滤收集所得沉淀物，接着使其在meoh中重结晶三次以得到(s)-3-(3-甲氧基苯基)哌啶。
[0452]
向(s)-3-(3-甲氧基苯基)哌啶(1.28g,6.7mmol)的ch
3
cn(10ml)溶液中添加三氟
751.33[m+h]
+
。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.68(m,2h),6.92(m,1h),6.78(m,4h),3.92(s,4h),3.86(m,1h),3.62(m,1h),3.40(m,2h),3.19(m,3h),3.04(s,9h),2.87(m2h),2.26(m,3h),1.92(m,3h),1.79(m,4h),1.66(m,2h),1.54(m,2h),1.38(m,4h),1.26(m,5h),0.98(m,3h),0.83(m,4h)。
[0459]
以下化合物以相似方式合成：
[0460][0461]
途径44
[0462][0463]
向1-溴-4-氟-2-甲氧基苯(910mg,4.4mmol)与1m khmds(18ml,18mmol)的1,4-二恶烷(9ml)溶液中添加(3r,5r)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(950mg,4.4mmol)。在100℃下搅拌该反应混合物3小时。移除溶剂且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝20:1)纯化，以得到(3r,5r)-4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。lc-ms(esi):m/z 339.0[m+h]
+
。
[0464]
向(3r,5r)-4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(800mg,
2.4mmol)的dcm(4ml)溶液中添加tfa(4ml)。将该混合物在环境温度下搅拌1小时。将溶剂移除。将残余物溶解于dcm(50ml)中且接着用饱和k
2
co
3
水溶液洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(2r,6r)-1-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-2,6-二甲基哌嗪。
[0465]
向(2r,6r)-1-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-2,6-二甲基哌嗪(500mg,2.1mmol)的mecn(5ml)溶液中添加三氟甲烷磺酸2,3-二甲基-1-((2-甲基-1h-咪唑-1-基)磺酰基)-1h-咪唑-3-鎓酯(825mg,2.1mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。将溶剂移除。将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝20:1)纯化，以得到(2r,6r)-1-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2,6-二甲基-4-((2-甲基-1h-咪唑-1-基)磺酰基)哌嗪。lc-ms(esi):m/z 383.53[m+h]
+
。
[0466]
向(2r,6r)-1-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-2,6-二甲基哌嗪(450mg,1.2mmol)的dcm(5ml)溶液中添加cf
3
so
3
me(193mg,1.2mmol)。在环境温度下搅拌该反应混合物2小时。移除溶剂且将残余物用乙醚洗涤以得到三氟甲烷磺酸1-(((3r,5r)-4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯。
[0467]
向三氟甲烷磺酸1-(((3r,5r)-4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(500mg,0.91mmol)的ch
3
cn(5ml)溶液中添加(r)-n-(3-氨基-2-甲基丙基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(248mg,0.91mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。将该混合物浓缩。将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝8:1至2:1)纯化，以得到(2s,6s)-n-((s)-3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2,6-二甲基哌嗪-1-磺胺。lc-ms(esi):m/z 572.4[m+h]
+
。
[0468]
向(2s,6s)-n-((s)-3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)-2-甲基丙基)-4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2,6-二甲基哌嗪-1-磺胺(430mg,0.75mmol)的nmp(4ml)溶液中添加nah(91mg,2.3mmol,60％)。在80℃下搅拌该混合物0.5小时。将该混合物冷却至70℃并添加二甲磺酸((环己基甲基)氮烷二基)双(丙烷-3,1-二基)酯(435mg,1.1mmol)。在70℃下搅拌该反应混合物2小时。将该混合物冷却并倾注入水中。移除溶剂且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝15:1)纯化，以得到化合物a200。lc-ms(esi):m/z 764.3[m+h]
+
。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.60(d,2h),6.69(d,2h),6.32(d,3h),3.78(s,3h),3.06(q,2h),3.04(s,8h),3.00(s,2h),2.87(d,2h),2.76(s,2h),2.34(br s,4h),2.09(br s,2h),1.33(s,17h),1.04(d,7h),0.93(d,3h)。
[0469]
(s)-3,3'-(1-环己基乙基氮烷二基)二丙-1-醇(化合物a203、a190、a207的中间体)
[0470][0471]
向(s)-1-环己基乙胺(4.0g,31.46mmol)的甲醇(50ml)溶液中添加丙烯酸甲酯(8.1g,94.38mmol)。在45℃下搅拌该反应混合物72小时。将该混合物浓缩且将残余物用柱色谱(石油醚/etoac＝30:1)纯化，以得到(s)-3,3'-(1-环己基乙基氮烷二基)二丙酸二甲酯。
[0472]
向(s)-3,3'-(1-环己基乙基氮烷二基)二丙酸二甲酯(4.0g,13.37mmol)的thf(50ml)溶液中添加libh
4
(1.45g,66.84mmol)。在60℃下搅拌该反应混合物2小时。将该混合
物冷却至0～5℃并用水(30ml)淬灭。将该混合物用1n氢氯酸水溶液调整至ph＝3并搅拌30分钟。用二氯甲烷洗涤所得混合物。将水层用饱和碳酸钠水溶液调整至ph＝9-10且接着用dcm(3x)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(s)-3,3'-(1-环己基乙基氮烷二基)二丙-1-醇。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ3.66(s,1h),2.82(m,2h),2.42(m,2h),2.21(m,1h),1.96(m,2h),1.67(m,4h),1.22(m,4h),0.91(m,3h),0.81(m,1h),0.72(m,1h)。
[0473]
以下化合物以相似方式合成：(r)-3,3'-(1-环己基乙基氮烷二基)二丙-1-醇(化合物a191的中间体)和(s)-3,3'-((1-苯基乙基)氮烷二基)双(丙-1-醇)(化合物a205的中间体)。
[0474]
6-氯-n-(((1r,2s)-2-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)环丁基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(化合物b22的中间体)
[0475][0476]
经0.5小时时间在-55℃下向在甲苯(1l)中的顺式-3-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2,4-二酮(32.8g,200mmol)和奎宁(71.4g,220mmol)悬浮液逐滴添加苯甲醇(64.9g,600mmol)。在-55℃下搅拌该反应混合物96小时。将所得澄清溶液浓缩至干燥，且将残余物溶解于二乙醚(1.2l)中。将该溶液用2n hcl(1l)水溶液洗涤，将有机层用饱和碳酸氢钠(500
×
5ml)萃取，且将所得的合并水相用二乙醚(500ml)洗涤以移除痕量的苯甲醇。将水相用8n hcl水溶液酸化，接着用dcm(1.0l
×
2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(1s,2r)-2(苄基氧基羰基)环丁烷甲酸。
[0477]
在0℃下向(1s,2r)-2-(苄基氧基羰基)环丁烷甲酸(40.1g,171.4mmol)和三乙胺(26.0g,257mmol)的二氯乙烷(400ml)溶液逐滴添加dppa(51.8g,188.5mmol)。在环境温度下搅拌该混合物2小时，接着用水洗涤并经无水naso
4
干燥。向该有机溶液中添加bnoh(18.5g,171mmol)和三乙胺(34.6g,342mmol)。使该反应混合物回流隔夜且接着用dcm
(500ml)稀释。用1n hcl水溶液(1l)和饱和nahco
3
水溶液洗涤该混合物。有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩，且用柱色谱纯化以得到(1r,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸苯甲酯。
[0478]
在0℃下向(1r,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸苯甲酯(20g,59mmol)的thf(100ml)溶液中添加4nnaoh水溶液(50ml)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。将该混合物用水(30ml)稀释且接着用乙醚(50mlx2)萃取。将水层用3nhcl水溶液酸化，且用乙酸乙酯萃取。萃取物经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(1r,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.34(m,5h),5.12(m,2h),4.62(m,1h),3.58(m,1h),2.28(m,2h),1.89(m,2h)。
[0479]
向(1r,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸(4.0g,16.1mmol)与k
2
co
3
(4.4g,32mmol)的dmf(40ml)溶液中添加mei(2.96g,20.8mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。将该混合物倾注入水(150ml)中且用乙醚(200ml)萃取。有机相经无水硫酸钠干燥且浓缩。残余物用柱色谱纯化，以得到(1r,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸甲酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.34(m,5h),5.69(m,1h),5.08(s,2h),4.62(m,1h),3.66(s,3h),3.38(m,1h),2.32(m,2h),1.99(m,2h)。
[0480]
向(1r,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸甲酯(8.9g,33.8mmol)的meoh(250ml)溶液中添加naome(9.1g,169mmol)。在45℃下将该混合物加热4小时，接着冷却至0℃，并逐滴添加hoac(10.2g,169mmol)。接着将该混合物倾注入水(500ml)中，并用乙酸乙酯萃取(300ml)。萃取物用饱和nahco
3
水溶液洗涤且经无水硫酸钠干燥。将该有机溶液浓缩且将残余物用柱色谱纯化，以得到(1s,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸甲酯。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.34(m,5h),5.08(m,3h),4.38(m,1h),3.72(s,3h),3.38(m,1h),2.32(m,2h),1.89(m,2h)。
[0481]
向(1s,2s)-2-(苄基氧基羰基氨基)环丁烷甲酸甲酯(1.3g,4.9mmol)的thf(10ml)溶液中添加libh
4
(0.38g,9.8mmol)。在环境温度下搅拌该反应混合物3小时，接着倾注入水(15ml)中并用乙酸乙酯萃取。有机相经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(1s,2s)-2-(羟甲基)环丁基氨基甲酸苯甲酯。
1
h nmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.34(m,5h),5.08(m,3h),3.72(m,1h),3.57(m,2h),2.32(m,2h),1.89(m，2h)，1.45(m，1h)。
[0482]
在0℃下向(1s,2s)-2-(羟甲基)环丁基氨基甲酸苯甲酯(1.1g,4.94mmol)、pph
3
(1.5g,5.9mmol)和异吲哚啉-1,3-二酮(1.0g,6.9mmol)的甲苯(10ml)溶液中添加diad(1.2g,5.9mmol)。搅拌该反应混合物3小时。将沉淀物滤除且将滤液浓缩并用柱色谱纯化，以得到(1s,2r)-2-((1,3-二侧氧基异吲哚啉-2-基)甲基)环丁基氨基甲酸苯甲酯。
[0483]
向(1s,2r)-2-((1,3-二侧氧基异吲哚啉-2-基)甲基)环丁基氨基甲酸苯甲酯(2.0g,5.5mmol)的etoh(40ml)溶液中添加胼水合物(0.64g)。使该反应混合物回流3小时。将该混合物冷却，过滤，且将滤液浓缩。将残余物溶解于1n hcl水溶液(30ml)，接着用乙醚(20ml)洗涤。将水层调整至ph＝10。将所得混合物用dcm(50ml
×
2)萃取。合并的有机物经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(1s,2r)-2-(氨基甲基)环丁基氨基甲酸苯甲酯。
[0484]
向(1s,2r)-2-(氨基甲基)环丁基氨基甲酸苯甲酯(0.8g,3.4mmol)的ch
3
cn(10ml)溶液中添加三氟甲烷磺酸1-((6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基)磺酰基)-2,3-二甲基-1h-咪唑-3-鎓酯(2.4g,5.12mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。将该混合物浓缩且将残余物用柱色谱纯化，以得到(1s,2r)-2-((6-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-磺酰氨基)甲
基)环丁基氨基甲酸苯甲酯。
[0485]
向在hoac(10ml)中的40％hbr溶液中添加(1s,2r)-2-((6-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-磺酰氨基)甲基)环丁基氨基甲酸苯甲酯(1.2g,2.6mmol)。搅拌该混合物3小时，接着倾注入水(50ml)中并用乙醚洗涤。将水层用8nnaoh水溶液调整至ph＝10。用dcm(50ml)萃取该混合物。有机相经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到n-(((1r,2s)-2-氨基环丁基)甲基)-6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺酰胺。
[0486]
在0℃下向n-(((1r,2s)-2-氨基环丁基)甲基)-6-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺酰胺(0.66g,2.0mmol)和net
3
(350mg,3.5mmol)的dcm(5ml)溶液中添加4-(二甲基氨基)苯磺酰氯(426mg,2.0mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌2小时且接着浓缩。将残余物溶解于dcm中且用水洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到6-氯-n-(((1r,2s)-2-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)环丁基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺。
1
hnmr(400mhz,cdcl
3
):δ7.77(m,2h),7.18(m,2h),7.05(m,1h),6.75(m,2h),5.28(m,1h),5.05(m,1h),4.36(s,2h),3.50(m,2h),3.35(m,1h),3.15(m,1h),3.09(s,6h),2.92(m,3h),2.42(m,1h),2.03(m,1h),1.65(m,2h),1.25(m,1h)。
[0487]
(s)-甲烷磺酸3-((环己基甲基)((r)-2-甲基-3-(甲基磺酰基氧基)丙基)氨基)-2-甲基丙基酯(化合物a178的中间体)
[0488][0489]
在0
–
5℃下向(s)-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯(4.0g,25.42mmol)与三乙胺(5.3g,50.84mmol)的dcm(60ml)溶液缓慢添加甲磺酰氯(5.6g,10.20mmol)。在环境温度下搅拌该反应混合物1小时。接着将该混合物用dcm(100ml)稀释且用水(50ml)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(s)-2-甲基-3-(甲基磺酰基氧基)丙酸甲酯。
[0490]
向(r)-2-氨基丙酸甲酯盐酸盐(1.60g,10.20mmol)的乙腈(200ml)溶液中添加(s)-2-甲基-3-(甲基磺酰基氧基)丙酸甲酯(4.2g,21.43mmol)和碳酸钾(4.20g,30.60mmol)。使反应混合物回流16小时且接着过滤，并将滤液浓缩以得到(2r,2's)-2,2'-氮烷二基双(亚甲基)二丙酸二甲酯。
[0491]
向(2r,2's)-2,2'-氮烷二基双(亚甲基)二丙酸二甲酯(650mg,3.0mmol)的dcm(10ml)溶液中添加环己烷羧醛(336mg,3.0mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(954mg,4.50mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌隔夜。以水使该混合物淬灭且调整至ph＝10。将所得混合物用dcm萃取。将该萃取物浓缩且将残余物用柱色谱纯化，以得到(2r,2's)-2,2'-(环己基甲基氮烷二基)双(亚甲基)二丙酸二甲酯。
[0492]
向(2r,2's)-2,2'-(环己基甲基氮烷二基)双(亚甲基)二丙酸二甲酯(350mg,1.28mmol)的thf(10ml)溶液中添加libh
4
(486mg,12.80mmol)。在80℃下搅拌该反应混合物隔夜。将该混合物冷却且用水淬灭。将所得混合物用1n氢氯酸水溶液调整至ph＝5且搅拌0.5小时，接着调整至ph＝10且用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机物经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(2r,2's)-2,2'-(环己基甲基氮烷二基)双(亚甲基)二丙-1-醇。
[0493]
在0℃下向在dcm(5ml)中的(2r,2's)-2,2'-(环己基甲基氮烷二基)双(亚甲基)二丙-1-醇(153mg,0.59mmol)与三乙胺(0.12g,1.2mmol)溶液中添加mscl(135mg,1.18mmol)。在环境温度下搅拌该反应混合物3小时。将该混合物用dcm(15ml)稀释且接着用水(20ml
×
2)洗涤。有机物经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(s)-甲烷磺酸3-((环己基甲基)((r)-2-甲基-3-(甲基磺酰基氧基)丙基)氨基)-2-甲基丙基酯。ms(ei)的c
17
h
35
no
6
s
2
实测值414[m+h]
+
。
[0494]
以下化合物以相似方式合成：(2s,2's)-二甲磺酸((环己基甲基)氮烷二基)双(2-甲基丙烷-3,1-二基)酯(化合物a160的中间体)。
[0495]
(r)-6-氯-n-(4-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丁-2-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(化合物a148的中间体)
[0496][0497]
经用无水氨饱和化的(r)-1-氰基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(13.0g,71mmol)的乙醇(250ml)溶液在55psi的h
2
下用raney-ni(24g)处理隔夜。使该混合物通过硅藻土垫过滤且将滤液浓缩。将残余物用柱色谱纯化，以得到(r)-4-氨基丁-2-基氨基甲酸叔丁酯。
[0498]
在0-5℃下向在dcm(25ml)中的(r)-4-氨基丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(2.5g,13.3mmol)与三乙胺(1.33g,13.3mmol)溶液缓慢添加4-(二甲基氨基)苯-1-磺酰氯(2.93g,13.3mmol)的dcm(15ml)溶液。在环境温度下搅拌该反应混合物1小时。将该混合物用dcm(50ml)稀释且用水(30ml)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩。将残余物用柱色谱纯化，以得到(r)-4-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丁-2-基氨基甲酸叔丁酯。
[0499]
向(r)-4-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.2g,3.2mmol)的dcm(15ml)溶液中添加tfa(7ml)。搅拌该混合物2小时并将溶剂移除。将残余物溶解于dcm(30ml)中且接着用饱和nahco
3
水溶液洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到(r)-n-(3-氨基丁基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(0.88g,定量)。
[0500]
向(r)-n-(3-氨基丁基)-4-(二甲基氨基)苯磺酰胺(0.88g,4.0mmol)的ch
3
cn
(10ml)溶液中添加6-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉(1.98g,4.0mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌隔夜。将该混合物浓缩且将残余物用柱色谱纯化，以得到(r)-6-氯-n-(4-(4-(二甲基氨基)苯基磺酰氨基)丁-2-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺。
[0501]
以下化合物以相似方式合成：(s)-6-氯-n-(4-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)丁-2-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(化合物a147的中间体)；(s)-6-氯-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)丁基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(化合物a150的中间体)；和(r)-6-氯-n-(3-((4-(二甲基氨基)苯基)磺酰氨基)丁基)-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-磺胺(化合物a149的中间体)。
[0502]
(r)-1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪(化合物a177的中间体))
[0503][0504]
向在甲苯(50ml)中的(r)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.37g,26.8mmol)与1-溴-4-氟-2-甲氧基苯(5.00g,24.4mmol)溶液中添加叔丁醇钠(4.69g,48.8mmol)且随后添加brettphos环钯配合物g3(66.4mg,0.0732mmol)。将该混合物在氮气下密封，且在100℃下搅拌，在1小时后将该混合物冷却至环境温度，且用乙酸乙酯及水稀释。有机层经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩。将粗产物用柱色谱(0-40％,乙酸乙酯/己烷)纯化以得到产物。ms(ei)的c
17
h
25
fn
2
o
3
实测值325[m+h]
+
。
[0505]
向(r)-4-(4-氟-2-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.51g,1.6mmol)添加hcl(1.6ml,4n二恶烷溶液)，且使该混合物在环境温度下静置16小时，接着用水(5ml)和乙酸乙酯(5ml)稀释。将有机层移出且用水(1x5ml)洗涤。合并的水层用乙酸乙酯(1x5ml)洗涤，用naoh(5n至ph～12)碱化，用dcm(3x5ml)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，以得到(r)-1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪且其不需进一步纯化即进一步使用。ms(ei)的c
12
h
17
fn
2
o实测值225[m+h]
+
。
[0506]
以下化合物以相似方式合成：
[0507]
1-(4-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪(a137的中间体)
[0508]
1-(2-甲氧基苯基)哌嗪(a154的中间体)
[0509]
2-(哌嗪-1-基)苯并腈(a118的中间体)
[0510]
1-(2,6-二甲基苯基)哌嗪(a119的中间体)
[0511]
2-(4-氟-2-甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷(a161的中间体)
[0512]
(s)-1-(4-氟-2-甲基苯基)-3-甲基哌嗪(a162的中间体)
[0513]
(r)-1-(4-氟-2-甲基苯基)-3-甲基哌嗪(a163的中间体)
[0514]
1-(2-(三氟甲氧基)苯基)哌嗪(a173的中间体)
[0515]
1-(3,4-二氟-2-甲氧基苯基)哌嗪(a174的中间体)
[0516]
1-(3-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪(a175的中间体)
[0517]
1-(5-氟-2-甲氧基苯基)哌嗪(a176的中间体)
[0518]
1-(2-氯苯基)哌嗪(a198的中间体)
[0519]
1-(4-甲氧基苯基)哌嗪(a199的中间体)
[0520]
1-(3-甲氧基苯基)哌嗪(a201的中间体)
[0521]
1-(3-氟-4-甲氧基苯基)哌嗪(a202的中间体)
[0522]
1-(2-氯-4-氟苯基)哌嗪(a206的中间体)
[0523]
(s)-1-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪(a194的中间体)
[0524]
(r)-1-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪(a195的中间体)
[0525]
(2s,6r)-1-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2,6-二甲基哌嗪(a197的中间体)
[0526]
(2r,6r)-1-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2,6-二甲基哌嗪(a200的中间体)
[0527]
分析法
[0528]
dox诱导的pd1-ss-gluc的测定
[0529]
将flp-in 293t-rex
tm
细胞用pcdna
tm
5/frt/to质体转染，该质体插入有编码gaussia荧光素酶的cdna，且其融合到编码pd1信号序列的cdna的3
’
端加10个氨基酸(n-mqipqapwpvvwavlqlgwrpgwfldspdr-c)(seq id no:1)。选择对筛选标记物潮霉素和杀稻瘟菌素有抗性的经转染细胞，以建立含有pd1-ss+10aa/gaussia荧光素酶cdna插入物且可在t-rex
tm
系统中调控其表现的稳定细胞株。在测定前一天，将细胞用胰蛋白酶消化并接种在384孔组织培养板中。第二天，将在含有脱氧羟四环素的dmso/培养液中的化合物稀释液加入该孔中并在37℃和5％co
2
下培养。在24小时后，将腔肠素底物加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定效力。
[0530]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表1中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0531]
dox诱导的pd1-fl-gluc的测定
[0532]
将flp-in 293t-rex
tm
细胞用pcdna
tm
5/frt/to质体转染，该质体插入有编码萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)的cdna，且其融合到编码pd1全部长度的cdna的3
’
端(氨基酸1-288)。选择对筛选标记物潮霉素和杀稻瘟菌素有抗性的经转染细胞，以建立含有pd1-fl/萤火虫荧光素酶cdna插入物且可在t-rex
tm
系统中调控其表现的稳定细胞株。在测定前一天，将细胞用胰蛋白酶消化并接种在384孔组织培养板中。第二天，将在含有脱氧羟四环素的dmso/培养液中的化合物稀释液加入该孔中并在37℃和5％co
2
下培养。在24小时后，将腔肠素底物加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定效力。
[0533]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表1中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0534]
dox诱导的tnfα-fl-gluc的测定
[0535]
将flp-in 293t-rex
tm
细胞用pcdna
tm
5/frt/to质体转染，该质体插入有编码gaussia荧光素酶的cdna，且其融合到编码tnfα全部长度的cdna的3
’
端(氨基酸1-233)。选择对筛选标记物潮霉素和杀稻瘟菌素有抗性的经转染细胞，以建立含有tnfα-fl/gaussia荧光素酶cdna插入物且可在t-rex
tm
系统中调控其表现的稳定细胞株。在测定前一天，将细胞用胰蛋白酶消化并接种在384孔组织培养板中。第二天，将在含有脱氧羟四环素的dmso/培养液中的化合物稀释液加入该孔中并在37℃和5％co
2
下培养。在24小时后，将腔肠素底
物加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定效力。
[0536]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表1中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0537]
dox诱导的il2-fl-gluc的测定
[0538]
将flp-in 293t-rex
tm
细胞用pcdna
tm
5/frt/to质体转染，该质体插入有编码gaussia荧光素酶的cdna，且其融合到编码il-2全部长度的cdna的3
’
端(氨基酸1-153)。选择对筛选标记物潮霉素和杀稻瘟菌素有抗性的经转染细胞，以建立含有il-2-fl/gaussia荧光素酶cdna插入物且可在t-rex
tm
系统中调控其表现的稳定细胞株。在测定前一天，将细胞用胰蛋白酶消化并接种在384孔组织培养板中。第二天，将在含有脱氧羟四环素的dmso/培养液中的化合物稀释液加入该孔中并在37℃和5％co
2
下培养。在24小时后，将腔肠素底物加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定效力。
[0539]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表1中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0540]
dox诱导的her3-ss-gluc的测定
[0541]
将flp-in 293t-rex
tm
细胞用pcdna
tm
5/frt/to质体转染，该质体插入有编码gaussia荧光素酶的cdna，且其融合到编码her3信号序列加4个氨基酸的cdna的3
’
端(n-mrandalqvlgllfslargsevg-c)(seq id no:2)。选择对筛选标记物潮霉素和杀稻瘟菌素有抗性的经转染细胞，以建立含有her3-ss+4aa/gaussia荧光素酶cdna插入物且可在t-rex
tm
系统中调控其表现的稳定细胞株。在测定前一天，将细胞用胰蛋白酶消化并接种在384孔组织培养板中。第二天，将在含有脱氧羟四环素的dmso/培养液中的化合物稀释液加入该孔中并在37℃和5％co
2
下培养。在24小时后，将腔肠素底物加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定效力。
[0542]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0543]
her3活性的表
[0544]
[0545][0546]
h929细胞存活率测定
[0547]
将人多发性骨髓瘤细胞株nci-h929培养在advanced rpmi 1640培养液中，该培养液补充有6％胎牛血清、2mm谷氨酰胺和1x青霉素/链霉素。在测定当天，使细胞再悬浮于补充有10％胎牛血清、2mm谷氨酰胺和1x青霉素/链霉素的rpmi 1640培养液中且接种于384孔组织培养板中，并用在dmso/培养液中的化合物稀释液处理。使培养板在37℃和5％co
2
下培养48小时。在48小时后，将(promega)加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定细胞存活率。
[0548]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表1中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0549]
u266细胞存活率测定
[0550]
将人多发性骨髓瘤细胞株u266b1培养在补充有10％胎牛血清、2mm谷氨酰胺和1x青霉素/链霉素的rpmi 1640培养液中。将细胞接种于384孔组织培养板中，并用在dmso/培养液中的化合物稀释液处理。使培养板在37℃和5％co
2
下培养48小时。在48小时后，将(promega)加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定细胞存活率。
[0551]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表1中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0552]
活体外微粒体稳定性的测定
[0553]
将磷酸钾(423μl的0.1m溶液)添加至8连排深孔管且随后添加人类、小鼠、大鼠或猴子微粒体(25μl的20mg/ml溶液)。将着将此类深孔管置于冰上且添加测试对象(2μl的于
dmso中的0.25mm溶液)。在37℃下将该混合物预培养3至5分钟(以150rpm摇动)，接着添加50μl nadph而开始反应。在0和30分钟时间点收集100μl的等份样本，且添加200μl含有is(化合物914)的乙腈混合物以使反应物淬灭。以4000rpm离心10分钟后，注射20μl的含有上清液(20μl)与100μlacn/h
2
o(1:1)的混合溶液以用于lc-ms/ms分析。肝微粒体稳定性通过在30分钟时的剩余化合物％来评估，其使用以下方程式计算：[(auc分析物t＝30/aucis)/(auc分析物t＝0/aucis)]*100。
[0554]
本文提供的所选化合物的结果显示在下表1中。对于包含一种或多种立体异构体而未示出立体化学的化学结构，该测定数据是指立体异构体的混合物。
[0555]
瞬时表现dox诱导的信号序列-gluc测定
[0556]
将flp-in 293t-rex
tm
细胞用500ng的pcdna
tm
5/frt/to质体转染，该质体插入有编码gaussia荧光素酶的cdna，且其融合到编码靶定信号序列加10个氨基酸的cdna的3
’
端。将经转染细胞培养隔夜，接着将细胞用胰蛋白酶消化并接种在384孔组织培养板中。第二天，将在含有脱氧羟四环素的dmso/培养液中的化合物稀释液加入该孔中并在37℃和5％co
2
下培养。在24小时后，将腔肠素底物加入各孔中，并使用tecan infinite m1000 pro定量荧光素酶讯号以确定效力。
[0557]
[0558]
[0559]
[0560]
[0561][0562]
人周边血液单核球细胞(pbmc)细胞介素的测定
[0563]
将人pbmc从3个正常供体的全血收集物中使用密度梯度离心且随后裂解红血球细胞而新鲜分离出。来自每个供体的pbmc单独测定。使细胞悬浮于补充有5％胎牛血清、2mm谷氨酰胺、10mm hepes和1x青霉素/链霉素的rpmi1640培养液中。以200000个细胞/孔将pbmc接种于96孔圆底培养板中，不给予其刺激或者给予酯多醣体(lps,1μg/ml)或针对人类cd3(板结合的,2μg/ml)与人类cd28(可溶的,2μg/ml)的抗体进行刺激。同时添加于dmso/培养液中的化合物连续稀释液，且将pbmc在37℃,5％co
2
下培养24小时。在24小时后，将培养板离心且移出一半的上清液体积用电化学发光免疫测定法(biomarker multiplex,meso scale discovery)进行细胞介素分析。对于存活率分析，将(promega)添加至各孔中的剩余物质中并经由发光板读取仪进行定量。
[0564]
[0565][0566]
功效研究：在b16f10模型中与抗pd-1疗法相比的化合物a87对于肿瘤生长和体重的效果。
[0567]
在第0天将雌性c57bl/6小鼠(7-8周龄)在侧腹皮下注射0.1ml的5x10
6
b16f10细胞。在第3天，将配制在10％etoh/10％kolliphor el中的化合物a87以静脉注射(iv)施用30mg/kg qw、iv 10mg/kg d1d2或ip 15mg/kg qod。以qodx3的剂量时间表腹部注射(i.p.)施用抗pd1抗体处理(获自bioxcell的rmp1-14,200μg)。每隔2-3天用数位卡尺(fowler)监测肿瘤大小，直至达到1.5-2.0cm的大小并用体积表示(长
×
宽
×
高)。黑色素瘤细胞株b16f10获自atcc。c57/bl6小鼠购自查尔斯里弗斯实验室(charles rivers laboratories)。
[0568]
表1.化合物活性
[0569]
[0570]
[0571]
[0572]
[0573]
[0574]
[0575]
[0576]
[0577]
[0578]
[0579]
[0580]
[0581]
[0582]
[0583]
[0584]
[0585]
[0586]
[0587]
[0588]
[0589][0590]
*i.a.表示ic50或ec50大于25μm

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