化合物euphorinF及其在制备抗番茄黄化曲叶病毒药中的应用的制作方法

化合物euphorinf及其在制备抗番茄黄化曲叶病毒药中的应用
技术领域：
：[0001]本发明属于农药
技术领域：
：，具体地，涉及化合物euphorinf(化合物6)及其在制备抗番茄黄化曲叶病毒药中的应用。
背景技术：
：：[0002]植物病毒是仅次于真菌和细菌的一类植物病害，危害大且很难防治，有“植物癌症”之称。抗番茄黄化曲叶病毒是番茄生产的主要病害之一，每年抗番茄黄化曲叶病毒(tylcv)会使很多番茄产区大量减产甚至绝收，给广大农民带来巨大损失。目前市场上销售的大多数抗番茄黄化曲叶病毒制剂只能预防病毒的侵染及延缓或减轻症状的发展，植株一旦发病很难从根本上减少给生产上造成的损失，且成分一般为由植物中萃取的粗提物混配而成，具体抗病毒机制并不明确。市售的化学合成药剂虽然化学成分明确且具有比较好的抑制病毒复制的作用，但当喷施浓度稍高时同样会对植物本身产生毒害作用，所以仍不能对解决番茄黄化曲叶病毒给生产上带来的问题。技术实现要素：[0003]本发明的目的是提供化合物euphorinf(化合物6)及其在制备抗番茄黄化曲叶病毒药中的应用。提供化合物euphorinf在制备抗tylcv活性产品中的应用，在制备tylcv抑制剂中的应用，在制备tylcv防控剂中的应用，在制备tylcv预防剂中的应用。并提供含有化合物euphorinf的防治番茄黄化曲叶病毒引起的番茄黄化曲叶病毒病的制剂，及其该制剂的配制方法。[0004]为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：[0005].如下结构式所示的化合物6，[0006][0007]化合物6在制备抗番茄黄化曲叶病毒药中的应用。[0008]化合物6在制备抗番茄黄化曲叶病毒抑制剂、防控剂、预防剂中的应用。[0009]如所述的应用，其中所述的化合物6浓度为40μg/ml。[0010]化合物6的制备方法，该方法包括下述步骤：中药大戟脂用甲醇回流三次，分别为4、3和3小时，提取液在真空浓缩，提取物悬浮在水中，依次用石油乙醚和乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯部分用硅胶柱层析，用石油乙醚︰乙酸乙酯梯度洗脱(从1︰0到0︰1)，被划分为七个部分fr.1-7，第5部分再用c18反相硅胶柱层析(ch3oh-h2o从3︰7到9︰1)分离分为12部分，本段第二部分fr.5b再进行甲醇凝胶(sephadexlh-20)分离，得到两部分fr.5b1-fr.5b2，从fr.5b2，通过半制备hplc，得到化合物6。[0011]含有化合物6为活性成分的抗番茄黄化曲叶病毒的农药组合物。[0012]所述农药组合物在制备抗番茄黄化曲叶病毒药中的应用，在制备抗番茄黄化曲叶病毒抑制剂、防控剂、预防剂中的应用，如所述的应用，其中化合物6浓度为40μg/ml。[0013]含有化合物6为活性成分的抗番茄黄化曲叶病毒抑制剂。[0014]含有化合物6为活性成分的抗番茄黄化曲叶病毒防控剂。[0015]含有化合物6为活性成分的抗番茄黄化曲叶病毒预防剂。[0016]本发明化合物6用作农药时，可以直接使用，或者以农药组合物的形式使用。该农药组合物含有0.1—99％，优选为0.5-90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型，如液体制剂(混悬剂、乳剂、溶液剂等)、固体制剂、喷剂、气雾剂等。附图说明：[0017]图1为本发明化合物6的结构示意图；[0018]图2为本发明化合物6的提取分离流程图；[0019]图3为本发明化合物6与对照宁南霉素在心叶烟上对tylcv侵染抑制率的比较。具体实施方式：[0020]下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。[0021]实施例1[0022]化合物6的提取和分离：[0023]分离方法如图2所示。[0024]购买于新疆乌鲁木齐药材市场的中药大戟脂(10千克)用甲醇回流三次(分别为4、3和3小时)提取液在真空浓缩，提取物悬浮在水中，依次用石油乙醚和乙酸乙酯进行萃取。乙酸乙酯部分(2.3kg)用硅胶柱层析，用石油乙醚：乙酸乙酯梯度洗脱(从1：0到0：1)，被划分为七个部分(fr.1-7)，第5部分(175g)再用c18反相硅胶柱层析(ch3oh-h2o从3：7到9：1)分离分为12部分，本段第二部分fr.5b(8g)再进行甲醇凝胶(sephadexlh-20)分离。得到两部分(fr.5b1-fr.5b2)。从fr.5b2(0.8g)，通过半制备hplc，得到化合物6(11.3mg)。结构式如图1所示。[0025]euphorinf(6):白色无定型粉末；[a]25d+6.1(c0.1,meoh)；uv(meoh)xmax(loge):200(3.62),252(3.97)nm；ir(kbr)vmax3515,2969,2928,1727,1647,1586,1372,1037cm-1；1hand13cnmrdata(cdcl3,500and125mhz),seetables2and3；hresimsm/z367.2234[m+na]+(calcdforc22h32o3na,367.2244).[0026]化合物6作为白色粉末获得，分子公式通过高分分辨质谱被指定为c22h32o3。化合物6和4的1h和13cnmr数据的比较表明，碳-12共振信号向低场位移了20.5转移，表明化合物6中的c-11中缺少一个羰基，而化合物6中多了一个亚甲基，这个结论被hmbc二维谱证实。因此，化合物(6)的结构被确定为4,4,14β,-ꢀ三甲基-5α-pregn-8-ene-3β-ol-7,17-dione。且被命名为euphorinf，为一个新化合物。[0027]实施例2[0028]抗tylcv活性测定方法：[0029]化合物6配成溶液，用4-6片叶龄的本生烟(n.benthamiana)植株作为实验对象，药物溶液喷涂在烟叶6个小时后，再接入tylcv病毒。并在10天后对系统感染叶片中的病毒量通过ctab(溴化乙酰甲基溴)方法进行评估。感染的本生烟叶片中的病毒dna通过实时定量pcr检测。化合物和阳性对照均重复三次。对化合物6的抗番茄黄化曲叶病毒(tylcv)活性进行了评价，发现化合物6在浓度为40mol/ml时，具有显著的抗番茄黄叶病毒活性，抑制率为72.0％。阳性对照宁南霉素抑制率为57.1％。本发明化合物6与宁南霉素在心叶烟上对tylcv侵染抑制率的比较见图3。[0030]实施例3[0031]化合物制剂的制备[0032]化合物6用二甲基亚砜(dmso)溶解，浓度为10mg/ml，再用无菌水稀释成40μg/ml进行活性筛选，宁南霉素按照说明书用无菌水稀释成浓度80μg/ml。当前第1页1 2 3 当前第1页1 2 3 

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