一种分离家蚕有核精子和无核精子的装置的制作方法

[0001]
本实用新型属于鳞翅目昆虫二型性精细胞的分离装置技术领域，具体涉及一种分离家蚕有核精子和无核精子的装置。


背景技术：

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家蚕属于鳞翅昆虫的一种，其精子具有二型性，即有核精子和无核精子，有核精子可以使卵受精并发育成个体；无核精子则不能使卵受精，先于有核精子进入交配的雌蛾体内在有核精子受精的过程中起到辅助作用。二型精子在亚细胞形态结构和形成时期上具有明显差异，但目前并不清楚什么样的机制导致了家蚕有核和无核精子的分化。
[0003]
家蚕的精巢是雄蚕的内部生殖器官，精子形成的场所。家蚕精巢表面有众多器官丛的分布。精巢的解剖结构最外层有一层薄膜，称作外膜。内面为一层扁平细胞组成的内膜，内膜向内衍生成三个隔膜，将精巢分成四个室，精子在四个精室内发生、成熟和形成。
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为了揭示精子二型性的分化机制，需要将有核精子和无核精子单独分开进行研究。1992年minoru osanai、梁振中等人利用percoll密度梯度离心法从家蚕雄蛾精液中分离出有核精子和无核精子。该方法需进行密度梯度离心，获得精子数量很少，且分离效果并不好，因此没有得到广泛应用。2015年timothy l.karr等人用淘洗法分离了美洲帝王蝶成虫的有核精子和无核精子，但该法在家蚕中效果并不理想。


技术实现要素：

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本实用新型提供一种分离家蚕有核精子和无核精子的装置，以解决现有技术中家蚕有核精子和无核精子不能有效分离的技术问题。
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本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置采用如下技术方案：一种分离家蚕有核精子和无核精子的装置，其特征在于，包括细胞筛和设置在所述细胞筛下方、用于承接样品的样品收集装置，所述样品收集装置一端开口且所述细胞筛与所述样品收集装置的开口端相连，所述细胞筛的筛网的孔径为70-100μm。
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优选的，所述样品收集装置内盛装有tc-100完全培养基；所述tc-100完全培养基中还包括质量浓度为10%的fbs。
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优选的，所述筛网的孔径为70μm。
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优选的，所述细胞筛的个数大于等于2。
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优选的，所述细胞筛倒置于所述样品收集装置上方以使被截留于细胞筛筛网上的样品可通过将细胞筛置于溶液中蘸洗的方式从细胞筛中转移出去。通过把细胞筛倒置在样品收集装置上方，经过所述细胞筛的筛网并被截留于筛网上的有核精子就可以直接通过将细胞筛倒过来在溶液（例如，tc-100培养基）中沾一沾就可以将有核精子从筛网上转移出来。如果是把细胞筛正着放置的话，过滤在上层的有核精子如果想溶解下来还需要用培养基从底部冲洗，这样需要消耗大量的溶液，且不易冲洗，另外也容易造成精子浓度低需要大体积浓缩，造成后续步骤不便。正常情况下，在过滤时，筛网是位于细胞筛整体的底端（或靠
近底端）的位置处；上述中的“倒置”是指在采用细胞筛过滤时，细胞筛的筛网位于细胞筛整体顶端的位置处，翻转细胞筛180度使细胞筛正置时，筛网上的样品更容易被转移出去，将其浸入含有tc-100完全培养基（液体，含10wt%fbs）的容器中时，更容易与液体接触，便于将样品转移出去，无需消耗大量溶剂且有助于维持样品的浓度。
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优选的，所述细胞筛上还设有手柄。
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本实用新型的有益效果是：本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置采用
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70-100μm的细胞筛对家蚕精巢细胞进行分离，可使有核精子富集于细胞筛的筛网上方，增大筛网上样品中有核精子的比例或收集到的滤液中无核精子的比例。
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采用含有孔径为70μm筛网的细胞筛对家蚕精巢细胞进行分离，分离效果较好。当设置2层孔径为70μm筛网（细胞筛）时，可得到无核精子比例为95%的样品，分离效果好。
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通过将细胞筛倒置于样品收集装置上方，可方便的实现截留在细胞筛筛网上的样品的转移，有助于节省用于冲洗筛网的溶液，也可有效避免样品被稀释。
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样品收集装置内盛装的tc-100完全培养基有助于维持样品中有核精子和无核精子的活性，避免对样品造成损伤。
附图说明
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为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
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图1为本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置的其中一种具体实施方式的结构分解示意图；
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图2为本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置的其中一种具体实施方式的细胞筛的俯视图；
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图3为本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置的其中一种具体实施方式的剖面结构示意图；
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图中：1-细胞筛，11-细胞筛上表面，12-细胞筛下表面，13-筛网，14-手柄，21-凸沿。
具体实施方式
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下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
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实施例1
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如图1-2所示，本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置包括细胞筛1和设置在细胞筛1下方、用于承接样品的样品收集装置2，样品收集装置2一端开口且所述细胞筛1与所述样品收集装置2的开口端相连，细胞筛1的筛网13的孔径为70-100μm。
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细胞筛的底面和侧面均设有筛网13，以提高样品分离的效率（也可为仅在细胞筛1的底部设有筛网的结构）。
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在实际使用时，本领域技术人员可根据需要选择培养皿（例如35mm的小培养皿）或离心管等作为样品收集装置2，使样品收集装置2的尺寸与细胞筛1的匹配（以能使细胞筛固定于样品收集装置2上方为准，也可借助于本领域常见的支架或固定连接结构，此处不再赘述）即可。为了方便细胞筛1的拿取、抓握等，还可在细胞筛1上设置手柄12。此外，为了提高细胞筛与样品收集装置之间连接的紧密型还可采用紧固带、卡扣（紧固带或卡扣等紧固部件采用市售部件即可）等对连接处进行加固。
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本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置的使用原理：取从家蚕精巢中解剖得到的样品（使包括有核精子和无核精子的细胞分散于溶液中，此处选用tc-100完全培养基分散家蚕精细胞），将样品倒入细胞筛1中，样品经细胞筛1过滤后，将细胞筛1的筛网13上截留的样品转移到tc-100培养基中，离心，弃去多余上清，留50μl-100μl用剪过的枪头轻轻吹打均匀点在载玻片上，晾干后使用4%的多聚甲醛pbs溶液固定5min，10 μg/ml的dapi水溶液染色1 min，盖上盖玻片，甘油封片，正置荧光显微镜拍照观察样品中的有核精子和无核精子的分离效果。
[0028]
类似的，取样品收集装置2中的样品离心，弃去多余上清，留50μl-100μl用剪过的枪头轻轻吹打均匀点在载玻片上，晾干后使用4%的多聚甲醛pbs溶液固定5min，10 μg/ml的dapi水溶液染色1 min，盖上盖玻片，甘油封片，正置荧光显微镜拍照可以得到滤液中有核精子和无核精子的分离情况。
[0029]
实验结果表明：当选用的细胞筛1的筛网13的孔径为70μm时，留存于筛网13上方的样品中含有78%的有核精子；当选用的细胞筛1的筛网11的孔径为100μm时，样品收集装置2中收集得到的滤液中含有85%的无核精子（采用本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置分离前，家蚕精巢中的有核精子和无核精子的比例接近1:1）。
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实施例2
[0031]
在实施例1的基础上，本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置包括2个细胞筛1和设置在细胞筛1下方、用于承接样品的样品收集装置2，样品收集装置2一端开口且所述细胞筛1与所述样品收集装置2的开口端相连，细胞筛1的筛网的孔径为70-100μm。
[0032]
实验结果表明，当采用2层细胞筛1时，若细胞筛1的筛网13的孔径为70μm（2层细胞筛的筛网孔径均为70μm），则样品收集装置2中收集得到的滤液中无核精子的比例可达到95%；若细胞筛1的筛网13的孔径为100μm（2层细胞筛的筛网孔径均为100μm），则留存于筛网11上的样品中仅含有66%的有核精子；当本实用新型的含分离家蚕有核精子和无核精子的装置具有2层筛分孔径为70μm的细胞筛1时，可分离得到无核精子比例为95%的样品，分离效果好。
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实施例3
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在实施例1或2的基础上，如说明书附图图3所示，可将细胞筛1倒置于样品收集装置2的上方（使细胞筛1的上表面11与样品收集装置2的上表面接触；则细胞筛的下表面12位于整个装置的上方），则采用本实用新型的分离家蚕有核精子和无核精子的装置对样品处理后，将细胞筛1翻转180度，并将细胞筛的下表面12浸入盛有tc-100完全培养基中，在上述液体中轻微蘸取或晃动，即可使截留于筛网13位置处的样品方便的进入tc-100完全培养基
（含有质量浓度为10%的fbs）中，无需再使用大量液体（例如，含有10%fbs的tc-100完全培养基）冲洗，且可有效避免造成样品的稀释，增大后续操作的难度。
[0035]
如图3所示，为增强细胞筛1与样品收集装置2之间连接的稳定性，可选择具有向外突出的凸沿21的样品收集装置2，使细胞筛1的上表面11与样品收集装置2的上表面的接触面积更大，增强稳定性。
[0036]
以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

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