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2021-02-01 19:02:23|
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起点商标网 专利名称：N－取代苯环的3，5－吡唑二酮化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属药物化学合成领域，涉及保泰松类衍生物，具体涉及具有抗肿瘤活 性的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物、其合成方法及其用途。
背景技术：
保泰松属于非甾体抗炎药的一种，具有3， 5-吡唑二烷酮的结构，于1952 年问世，其具有有很好的消炎镇痛作用，用于治疗风湿性关节炎，类风湿性关节 炎，但对肝、造血系统有毒害，应用日益减少。随着分子药理学的深入研究，逐 步发现保泰松类衍生物又有新的用途和疗效，具有抗病毒和抗菌等生物活性。但 目前未见有此类含3， 5-吡唑二垸酮化合物抗肿瘤的文献报道。
发明内容
为开发利用现有的临床药物资源，本发明目的在于提供一类含N-取代苯环 的3， 5-吡唑二酮化合物，从而为寻找新的抗肿瘤活性化合物开辟一条新途径； 本发明另一 目的在于提供其制备方法；又一 目的在于提供其在制备抗肿瘤药物中 的应用。
本发明所述保泰松类似物化学结构通式如下
I
式中，^为氢、间位Cl-4烷基、对位Cl-4烷基或对位卤素取代；R2为对 位苄氧基、对位羟基或对位卤素取代；R3为Cl- 4烷基、环丙烷甲基或苄基取代； R4为氢或羟基。卤素为氟、氯或溴原子。
优选R为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位苄氧基、对位 羟基、对位氯或对位溴；R3为正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为氢或羟基。
本发明所述N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的制备方法，其特征在于 当Ri为氢、间甲基、对甲基、对位氯、对位溴；R2为对位苄氧基；R3为正 丁基、异丁基、环丙甲基、苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将苯胺或 取代苯胺与亚硝酸钠发生重氮化反应，再与苯酚偶合得到对羟基偶氮苯或苯环取 代物。b.将对羟基偶氮苯或苯环取代物与氯化苄反应生成对苄氧基偶氮苯或苯 环取代物。C.将对苄氧基偶氮苯或其苯环取代物与锌粉发生还原反应生成对苄 氧基氢化偶氮苯或其苯环取代物。d.将对苄氧基氢化偶氮苯或其苯环取代物与 取代的丙二酸二乙酯在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物。取代苯胺为间甲基苯胺、对甲基苯胺、对氯苯胺或对溴苯胺；
取代的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙酯、异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙 二酸二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
当R,为氢、间甲基、对甲基、对位氯、对位溴；R2选自对位苄氧基、对位 羟基；R3选自正丁基、异丁基、环丙甲基、苄基；R4为羟基时，包含如下合成 步骤将上述制得的N-取代苯环4-位单取代的吡唑二酮化合物氢化再与过氧化
氢发生氧化反应生成N-取代苯环的4-位羟基取代的3， 5-吡唑二酮化合物。
当Ri为对位氯、对位溴；R2为对位氯、对位溴；R3选自正丁基、异丁基、 环丙甲基、苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将对位取代苯胺与二氧化 锰反应生成苯环取代的偶氮苯。b.将苯环取代的偶氮苯与锌粉发生还原反应生 产苯环取代的氢化偶氮苯。c.将苯环取代的氢化偶氮苯与取代的丙二酸二乙酯 在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物。对位 卤代苯胺为对氯苯胺或对溴苯胺；取代的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙酯、
异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙二酸二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
本发明所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物对肝癌细胞(HepG-2)、肺 癌细胞(SPCA1)、食管鳞癌细胞(Ec9706)和子宫颈癌细胞(Hela)有很好的抑制作 用。其中有些化合物对肝癌细胞(HepG-2)、食管鳞癌细胞(Ec9706)和子宫颈癌细 胞(Hela)的ICso值约为3.8 73.17ng/ml,与临床上己使用的抗肿瘤药物5-氟尿嘧 啶和顺铂作对照，与其活性相当。因此，本发明提供的此类保泰松类似物为开发 新型抗肿瘤药物开辟了另一有效途径，该类化合物的合成反应设计合理，反应条件温和，操作简单，反应收率高，如能开发成为新药将有良好的市场应用前景。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应当理解，这些实施例仅用于说 明本发明而不用于限制本发明要求保护的范围。
合成化合物表征使用的仪器熔点使用X5型显微数字熔点测定仪，温度未
经校正；NMR谱使用瑞典Bruker DPX-400型超导核磁共振仪测定，TMS为内 标；高分辨质谱使用Waters-Micromass公司Q-Tof质谱仪测定；IR谱用Nicolet IR 200型红外吸收光谱仪，KBr压片。 实施例1
l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮的制备 将适量碎冰及盐酸加入50ml反应瓶中，在搅拌下加入苯胺5.0g(53.8mmo1)， 于5 10'C缓慢加入亚硝酸钠3.88g(56.2mmo1)，加毕，以淀粉碘化钾试纸测试反 应液，如试纸呈深蓝色，即示重氮化反应已达终点。在另一反应瓶中投入适量碎 冰、苯酚5.0g(53.2mmol)及30%氢氧化钠溶液100ml，在搅拌下缓慢加入上述重 氮盐溶液，反应温度控制在0 1(TC，加毕，继续搅拌20分钟，然后用盐酸调 节pH值为2 3，过滤，水洗至中性，干燥，得化合物对羟基偶氮苯。
将乙醇20ml、对羟基偶氮苯4.0g(20mmol)及氢氧化钠0.86g(21.5mmol)依次 投入反应瓶中，搅拌溶解1小时，加入氯化苄2.8ml(22.1mmol),然后升温至80'C， 加热回流2小时，冷却至20 25。C，过滤，适量的乙醇洗涤，干燥，即得化合 物对苄氧偶氮苯。
将乙醇25ml、对苄氧基偶氮苯4.0g(13.9mmol)及40%氢氧化钠溶液6.5ml 依次投入反应瓶中，在搅拌下升温至75 8(KC，加入锌粉2.8g(43.0mmo1),加热 回流至反应混合物由红棕色变为灰白色，即达到终点。搅拌下冷却至20 25'C, 并继续搅拌4小时，过滤，水洗至中性，少量的乙醇洗，干燥，即得对苄氧基氢 化偶氮苯，直接用于下一步反应。
将金属钠0.8g(34.8mmol)加入反应瓶中，搅拌下慢慢加入绝对无水乙醇17 ml，待金属钠溶解完毕，加入正丁基丙二酸二乙酯5.0ml(22.7mmo1)，无水亚硫 酸钠0.25g(2.0mmol)升温至60 70°C，加入对苄氧氢化偶氮苯(含锌粉)6.0g，继 续升温至回流，在回流条件下反应8 10小时，蒸出乙醇，冷却至40 50。C,
7，过滤，滤液用15mlx3的氯仿萃取，水层用盐酸调 pH值3 4，得到粘稠状固体。将该固体用甲醇重结晶，得到化合物l-(4-苄氧基 苯基)-2-苯基-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮。
产品为白色粉末。m.p.l30-134。C.!H NMR(400Hz，CDCl3): S0.91(t, 3H， -CH3)， 1.37(m， 2H， -CH2-), 1.46~1.52(m, 2H, -CH2-)， 2.08(m, 2H,陽CH2-)， 3.37(t， 1H， H-4)， 4.98(s, 2H, -CH2-)， 6.90(d, 2H， J=8.9Hz, H-Ph)， 7.30(m, 12H， H-Ph); MS:[M+H]、415.2022,实测值[M+H]^415.2007。 IR(KBr):2959,2858， 1755， 1726，。 实施例2
1-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-异丁基-3, 5-吡唑烷二酮的制备 用异丁基丙二酸二乙酯替代正丁基丙二酸二乙酯，制备方法同实施例1。 产物为白色粉末。m.p.l29-13rC. ^NMR(400Hz,CDCl3):50.96(s，3H，-CH3)，
0.98(s, 3H, -CHs), 1.94(d, 2H， J=6.79Hz， -CH2-)， 2.10~2.17(m， 1H，陽CH)， 3.39(m,lH，
H陽4)， 4.98(s， 2H， -QJa-), 6.90(d, 2H， J=8.90, H-Ph)， 7.17~7.38(m， 12H,H-Ph);
MS:[M+H]+=415.2022,实测值[M+H]、415.2018。 IR(KBr):2948，2864， 1753,1719。
实施例3
l-(4-苄氧基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑烷二酮的制备 用环丙甲基丙二酸二乙酯替代正丁基丙二酸二乙酯，制备方法同实施例1。 产物为淡黄色粉末。m.p.l35-137°C. NMR(400Hz, CDC13): S0.23(m， 2H, -CH2-)， 0.46(m， 2H， -CH2-)， 0.92(m， 1H， -CH)， 2.06(t， 2H， -CH2-)， 3.42(t， 1H， J=5.16Hz， H-4)， 4.98(s， 2H, -CH2-)， 6.90(d， 2H, J=8.88Hz， H-Ph)， 7.17~7.25(m， 3H, H隱Ph)， 7.31~7.37(m，8H,H-Ph)， MS:[M+H]+=413.1865,实测值[M+H]、413.2。 IR(KBr): 3064,2927， 1718,應。 实施例4
1-(4-节氧基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑烷二酮的制备 用间甲基苯胺替代苯胺，制备方法同实施例l。
产品为类白色粉末。m.p.l23-124。C.'H NMR(400Hz， CDC13): S0.91(t， 3H， J=7.24Hz, -CH3)，1.37(m，2H，CH2-)， 1.48(m,2H，- CH2-)，2.07(m，2H，-CH2-),2.31(s，3H: -CH3), 3.36(m， 1H， ， H-4), 4.98(s， 2H, -CH2-)， 6.91(m， 2H， J=8.88Hz, H-Ph), 7.01(m， 2H， H-Ph)，7.16~7.25(m，4H，H-Ph)，7.33~7.38(m，5H，H-Ph); MS:[M+H]+=429.2100，实测值[M+H]^429.2178。 IR(KBr):32949,2861， 1754， 1717。
实施例5
l-(4-苄氧基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮的制备 用对甲基苯胺替代苯胺，制备方法同实施例l。
产品为白色粉末。m.p. 148-149°C. 'H NMR(400Hz, CDC13): S0.91(t, 3H, J=3.16Hz， -CH3)， 1.37(m， 2H, -CH2-)， 1.49(m， 2H， -CH2-)， 2.07(m, 2H, -CHa-), 2.28(s， 3H， -CHs), 3.36(m， 1H H-4), 4.98(s， 2H, -CH2-)， 6.90(d, 2H， J=8.96Hz, H-Ph)， 7.1 l(d， 2H, J=8.28Hz， H-Ph), 7.16~7.25(m, 4H， H-Ph)， 7.32~7.38(m， 5H, H-Ph); MS:[M+H]+=429.2100，实测值[M+H]、429.2180。 IR(KBr): 2951 ，2847， 1751， 1715。 实施例6
l-(4-节氧基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮的制备 用对氯苯胺替代苯胺，制备方法同实施例l。
产品为白色粉末。m.p. 168-169°C. 'H NMR(400Hz， CDC13): S0.91(t， 3H， J=14.4Hz， -CH3), L38(m， 2H, -CH2-)， 1,48(m， 2H， -CH2-)， 2.08(m， 2H， -CH2-)， 3.37(t, 1H， H-4), 4.99(s， 2H， -CH2-)， 6.91(d， 2H， J=8.87Hz， H-Ph)， 7.19~7.38(m， 11H, H-Ph); MS: [M+Na]+=449.1632，实测值[M+Na]^449.1623; IR(KBr): 2949， 2855， 1755, 1605。 实施例7
1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3, 5-吡唑垸二酮的制备 1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3,5-吡唑烷二酮制备方法实施例5。 将l-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3，5-吡唑烷二酮5.0g(12.9mmo1)、 甲醇25ml和2mol/L氢氧化钠0.75ml加入反应瓶中，搅拌下加入30%过氧化氢 9.0ml(79.4mmo1)，常温反应24小时。往反应液中加水50ml，以25mlx3的乙酸 乙酯萃取，然后将乙酸乙酯层用饱和碳酸氢钠水洗3次，分出有机层，减压蒸干， 加入乙醚20ml重结晶，过滤，少量的乙醚洗涤，晾干，得1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑烷二酮。
产品为白色粉末。m.p. 195-198°C. NMR(400Hz， d-Acetone): S0.87(t, 3H, J=7.18Hz， -CH3)，1.32~1.41(m, 4H， -CH2-)， 1.95(m， 2H， -CH2-)， 2.24(s, 3H, -CH3)，6.76~6.80(m, 2H， H-Ph), 7.12~7.24(m, 6H， H-Ph); MS:[M+Na〗+=377.1477，实
9测值[M+Na〗、377.1479 。
IR(KBr): 3338,2961,, 2865， 1736,1692 。 实施例8
l-(4-羟基苯萄-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑垸二酮的制备 l-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮制备方法实施例4。 以l-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮为原料，制备方 法同实施例7。
产品为白色粉末。m.p, 172-175°C. NMR(400Hz， d墨DMSO): S0.88(t， 3H， J=7.04Hz, -CH3)， 0.90~1.43(m， 4H, -CJ^-), 1.97(m， 2H, -CH2-)， 2.04~ 2.09 (m, 1H, 4陽OH)， 2.28(s， 3H, -CH3), 6.80(m, 2H，H-Ph), 7.02(m, 1H， H-Ph), 7.13(m， 1H, H誦Ph)， 7.22(m,4H,H-Ph);MS:[M+H]+=377.1477,实测值[M+H]、377.1476。IR(KBr):3345， 3062,2963，1737,1688。 实施例9
l-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑烷二酮的制备 1-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑垸二酮制备方法实施例6。 以l-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮为原料，制备方法 类同实施例7。
产品为白色粉末。m.p. 147-149°C. & NMR S(400Hz， DMSO): 0.86(t， 3H， J=7.10Hz， -CH3), 1.26~1.41(m, 4H， -CH2-)， 1.95(m, 2H, -CH2-)， 6.65(m， 2H, H-Ph)， 7.05(m， 2H， H-Ph), 7.19~7.26(m, 4H, H-Ph); MS:[M+Na]+=399.1088，实测值 [M+Na]+-399.1086。 IR(KBr): 3422,2960， 1702， 1597， 实施例10
1-(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-4-羟基-3, 5-吡唑烷二酮的制备 l-(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑垸二酮制备方法实施例3。 以l-(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑烷二酮为原料制备方法同实 施例7。
产品为白色粉末。m.p. 107-109°C. & NMR(400Hz,d-DMSO): S0.13 0.15(m， 2H， -CHr)，0.42~0.66(m, 2H, -CH2-)， 0.66(m， 1H, -CH-)， 1.93(m， 2H, -CH2-)， 6.79(m, 2H, H-Ph)， 7.19~7.24(m, 3H, H-Ph)， 7.32~7.40(m, 4H, H-Ph); MS: [M+Na]+=361.1164，实测值[M+Na]^361.1170。 IR(KBr):3410，3063,1696， 1596。实施例11
1， 2-二 (4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮的制备
往250ml的单口瓶中加入对氯苯胺5g G9.4mmo1)和甲苯160ml，搅拌使对 氯苯胺溶解，然后加入二氧化锰17g (195.4mmo1)，加热回流，反应至体系中无 水生成为止。反应完全后，降温至70 8(TC左右，趁热过滤，母液减压浓縮至 大约一半，放入冰箱静置5小时，过滤，用少量冷的甲苯洗涤，烘干，得黄色结 晶4'， 4-二氯偶氮苯。
将加入4'， 4-二氯偶氮苯2.9g (11.6mmo1)，丙酮60ml加入250ml的单口瓶 中，搅拌下加入饱和氯化铵溶液5ml，再加入锌粉6g，常温下反应5小时，过滤， 丙酮洗，母液减压浓縮至约20ml时，倒入80ml的冰水中，搅匀后放入冰箱，静 置5小时，过滤，用50%的丙酮洗，真空下干燥，得淡黄色固体4'， 4-二氯氢化 偶氮苯。
往50ml的三口烧瓶中加入金属钠0.5g (21.7mmo1)、慢慢加入绝对无水乙 醇llml，搅拌下溶解后加入正丁基丙二酸二乙酯1.3ml(5.9mmo1)，升温至50。C， 加入4'， 4-二氯氢化偶氮苯lg(4.0mmo1)，继续加热，回流反应8小时，常用蒸 馏至120'C，降温至8(TC，加水50ml，搅拌20分钟，过滤，滤液用氯仿15ml X3萃取，分出水层，用稀盐酸调pH值为6 7，析出固体，过滤，得粗品，以 20ml乙醇重结晶得l， 2-二(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮。
产品为白色结晶。m.p.l33-135。C. 'H NMR(400Hz， CDC13): S0.91(t, 3H， J=7.13Hz， -CH3)， 1.34-1.48(m, 4H, -CH2-)， 2.06-2.19(m, 2H， -CH2-)， 3.14(t， 1H， J=5.76Hz, H-4)， 7.24~7.28(m， 4H， H-Ph)， 7.30~7.33(m， 4H， H-Ph); MS:[M+H]+=377.0824，实测值[M+H]^377.0822。 IR(KBr): 3061， 2928， 1759, 1714。 实施例12
1， 2-二 (4-溴苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑二酮的制备 用对溴苯胺替代对氯苯胺，制备方法同实施例ll。
产品为淡黄色粉末。m.p.l65 166。C. NMR (400Hz， CDC13): S0.90(t， 3H， J=7.20Hz， -CH3)， 1.33~1.46(m， 4H, -CH2-)， 2.05~2.17(m， 2H, -Qi2-)， 3J9(t， 1H, J= 5.74Hz,H-4)，7.16~7.26(m，4H，H-Ph)，7.44~7.48(m,4H， H-Ph); —MS: [M+H]+=46.9813，实测值[M+H]、 46.9813 。 IR(KBr): 2966，- 2855,1757， 1717.。 应用例1
l-(4-苄氧基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮(实施例4的化 合物)体外抗肿瘤活性测试以MTT法采用四种细胞系，分别为肝癌细胞 (HepG-2)、肺癌细胞(SPCA1)、食管鳞癌细胞(Ec9706)和子宫颈癌细胞(Hela)。
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入200ul，铺板使待测细胞调 密度至6000个/孔，(边缘孔用无菌PBS填充)。5^02下37。C孵育，至细胞单 层铺满孔底(96孔平底板)，加入浓度梯度本发明合成的药物(实施例4的化 合物)，培养24小时后，即可加药， 一般设9个梯度，每孔200ul，设6个复孔。 5%002下37。C孵育24小时，倒置显微镜下观察，每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml， 即0.5WMTT)，继续培养4h。终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150ul 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪 0D490nm处测量各孔的吸光值。用SPSS软件对实验结果进行统计并计算1<:5()值。 IC50 (pg/ml)值测试结果肺癌(SPCA1)， 38.75;子宫颈癌(Hela)， 38.48;食管 鳞癌(Ec9706)， 83.32;肝癌(HepG-2)， 46.41。 应用例2
1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3, 5-吡唑烷二酮(实施例7 合成的化合物)体外抗肿瘤泠性测试同应用例1。
IC50 (吗/ml)值测试结果肺癌(SPCA1)， 10.42;子宫颈癌(Hela), 5.29; 食管鳞癌(Ec9706)， 5.07;肝癌(HepG-2)， 3.75。 应用例3
1-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3, 5-吡唑垸二酮(实施例8 合成的化合物)体外抗肿瘤活性测试同应用例l。
IC50 (吗/ml)值测试结果肺癌(SPCA1), 19.96;子宫颈癌(Hela)， 11.31; 食管鳞癌(Ec9706)， 6.88;肝癌(HepG-2)， 16.96。 应用例4
1， 2-二 (4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮(实施例11合成的化合物) 体外抗肿瘤活性测试同应用例1 。
IC50 (pg/ml)值测试结果肺癌(SPCA1)， 61.19;子宫颈癌(Hela)， 73.17:
12食管鳞癌(Ec9706)， 65.77;肝癌(HepG-2)， 33.85。 应用例5
1， 2_二 (4-溴苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑二酮(实施例12合成的化合物) 体外抗肿瘤活性测试同应用例1。
IC50 (吗/ml)值测试结果月市癌(SPCA1)， 25.13;子宫颈癌(Hela)， 20.61; 食管鳞癌(Ec9706)， 11.91;肝癌(HepG-2)， 11.22。 对比例
5-氟尿嘧啶体外抗肿瘤活性测试同应用例1。
IC50 (ng/ml)值测试结果月市癌(SPCA1)， 32.50;子宫颈癌(Hela)， 25.39; 食管鳞癌(Ec9706)， 37.74;肝癌(HepG-2)， 18.26。
权利要求
1.N-取代苯环的3，5-吡唑二酮化合物，其特征在于，具有通式I所述结构R1为氢、间位C1-4烷基、对位C1-4烷基或对位卤素取代；R2为对位苄氧基、对位羟基或对位卤素取代；R3为C1-4烷基、环丙烷甲基或苄基取代；R4为氢或羟基。
2. 根据权利要求l所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物，其特征在于， 所述的卤素为氟、氯或溴原子。
3. 根据权利要求2所述的N-取代苯环的3, 5-吡唑二酮化合物，其特征在于，R, 为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位苄氧基、对位羟基、对位 氯或对位溴；R3为正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为氢或羟基。
4. 根据权利要求3所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物，其特征在于，其 中该化合物是以下化合物之一l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-异丁基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮； l-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑烷二酮； l-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-4-羟基-3 ， 5-吡唑烷二酮； 1 -(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-4-羟基-3 ， 5-吡唑垸二酮； 1， 2-二 (4-溴苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑二酮; 1， 2-二 (4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮。
5. 如权利3要求所述的制备N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的方法，其特 征在于当为&为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位苄氧基； R3为正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将 苯胺或取代苯胺与亚硝酸钠发生重氮化反应，再与苯酚偶合得到对羟基偶氮苯或 对羟基偶氮苯环取代物；b.将对羟基偶氮苯或对羟基偶氮苯环取代物与氯化苄 反应生成对苄氧基偶氮苯或对苄氧基偶氮苯环取代物；C.将对苄氧基偶氮苯或 对苄氧基偶氮苯环取代物与锌粉发生还原反应生成对苄氧基氢化偶氮苯或对苄 氧基氢化偶氮苯环取代物；d.将对苄氧基氢化偶氮苯或对苄氧基氢化偶氮与取 代的丙二酸二乙酯在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡唑 二酮化合物；取代苯胺为间甲基苯胺、对甲基苯胺、对氯苯胺或对溴苯胺；取代 的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙酯、异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙二酸 二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
6. 如权利要求3所述的制备N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的方法，其特 征在于当R为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位节氧基或对 位羟基；R3选自正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为羟基时，包含如下合 成步骤将权利要求5制备的N-取代苯环4-位单取代-3， 5-吡唑二酮化合物经氢 化再与过氧化氢发生氧化反应生成N-取代苯环-4-位羟基取代-3， 5-吡唑二酮化 合物。
7. 如权利要求3所述的制备N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的方法，其特 征在于当R,为对位氯或对位溴；R2为对位氯或对位溴；R3选自正丁基、异丁 基、环丙甲基或苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将对位卤代苯胺与二 氧化锰反应生成苯环卤代的偶氮苯；b.将苯环卤代的偶氮苯与锌粉发生还原反 应生成苯环卤代的氢化偶氮苯；C.将苯环卤代的氢化偶氮苯与取代的丙二酸二 乙酯在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡哇二酮化合物； 对位卤代苯胺为对氯苯胺或对溴苯胺；取代的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙 酯、异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙二酸二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
8. 如权利要求l-4任何一种所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物在药物制备中的应用，其特征在于作为活性成分用于制备抗肿瘤药物。
9. 如权利要求8所述的N-取代苯环的3， 5-吡哇二酮化合物在药物制备中的应用，其特征在于作为活性成分用于制备抗肝癌、肺癌、食管癌或子宫颈癌药物。
全文摘要
本发明属于药物化学合成技术领域，公开了具有抗肿瘤活性的N-取代苯环的3，5-吡唑二酮化合物、其合成方法及其用途。本发明化合物具有通式I结构，式中R<sub>1</sub>为氢、间甲基、对甲基、对位氯、对位溴；R<sub>2</sub>为对位苄氧基、对位羟基、对位氯、对位溴；R<sub>3</sub>为正丁基、异丁基、环丙甲基、苄基；R<sub>4</sub>为氢或羟基。该化合物用于治疗肿瘤疾病，经体外抗癌活性实验证明，该类化合物对多种肿瘤细胞具有明显的抑制和杀伤作用，开发成为新药后可作为活性成分可应用于临床预防和治疗癌症。
文档编号C07D231/32GK101602728SQ20091006545
公开日2009年12月16日 申请日期2009年7月16日 优先权日2009年7月16日
发明者侯桂琴, 刘宏民, 张秋荣, 曹云峰, 丽 王, 王俊魏 申请人:郑州大学
技术领域：
本发明属药物化学合成领域，涉及保泰松类衍生物，具体涉及具有抗肿瘤活 性的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物、其合成方法及其用途。
背景技术：
保泰松属于非甾体抗炎药的一种，具有3， 5-吡唑二烷酮的结构，于1952 年问世，其具有有很好的消炎镇痛作用，用于治疗风湿性关节炎，类风湿性关节 炎，但对肝、造血系统有毒害，应用日益减少。随着分子药理学的深入研究，逐 步发现保泰松类衍生物又有新的用途和疗效，具有抗病毒和抗菌等生物活性。但 目前未见有此类含3， 5-吡唑二垸酮化合物抗肿瘤的文献报道。
发明内容
为开发利用现有的临床药物资源，本发明目的在于提供一类含N-取代苯环 的3， 5-吡唑二酮化合物，从而为寻找新的抗肿瘤活性化合物开辟一条新途径； 本发明另一 目的在于提供其制备方法；又一 目的在于提供其在制备抗肿瘤药物中 的应用。
本发明所述保泰松类似物化学结构通式如下
I
式中，^为氢、间位Cl-4烷基、对位Cl-4烷基或对位卤素取代；R2为对 位苄氧基、对位羟基或对位卤素取代；R3为Cl- 4烷基、环丙烷甲基或苄基取代； R4为氢或羟基。卤素为氟、氯或溴原子。
优选R为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位苄氧基、对位 羟基、对位氯或对位溴；R3为正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为氢或羟基。
本发明所述N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的制备方法，其特征在于 当Ri为氢、间甲基、对甲基、对位氯、对位溴；R2为对位苄氧基；R3为正 丁基、异丁基、环丙甲基、苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将苯胺或 取代苯胺与亚硝酸钠发生重氮化反应，再与苯酚偶合得到对羟基偶氮苯或苯环取 代物。b.将对羟基偶氮苯或苯环取代物与氯化苄反应生成对苄氧基偶氮苯或苯 环取代物。C.将对苄氧基偶氮苯或其苯环取代物与锌粉发生还原反应生成对苄 氧基氢化偶氮苯或其苯环取代物。d.将对苄氧基氢化偶氮苯或其苯环取代物与 取代的丙二酸二乙酯在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物。取代苯胺为间甲基苯胺、对甲基苯胺、对氯苯胺或对溴苯胺；
取代的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙酯、异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙 二酸二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
当R,为氢、间甲基、对甲基、对位氯、对位溴；R2选自对位苄氧基、对位 羟基；R3选自正丁基、异丁基、环丙甲基、苄基；R4为羟基时，包含如下合成 步骤将上述制得的N-取代苯环4-位单取代的吡唑二酮化合物氢化再与过氧化
氢发生氧化反应生成N-取代苯环的4-位羟基取代的3， 5-吡唑二酮化合物。
当Ri为对位氯、对位溴；R2为对位氯、对位溴；R3选自正丁基、异丁基、 环丙甲基、苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将对位取代苯胺与二氧化 锰反应生成苯环取代的偶氮苯。b.将苯环取代的偶氮苯与锌粉发生还原反应生 产苯环取代的氢化偶氮苯。c.将苯环取代的氢化偶氮苯与取代的丙二酸二乙酯 在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物。对位 卤代苯胺为对氯苯胺或对溴苯胺；取代的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙酯、
异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙二酸二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
本发明所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物对肝癌细胞(HepG-2)、肺 癌细胞(SPCA1)、食管鳞癌细胞(Ec9706)和子宫颈癌细胞(Hela)有很好的抑制作 用。其中有些化合物对肝癌细胞(HepG-2)、食管鳞癌细胞(Ec9706)和子宫颈癌细 胞(Hela)的ICso值约为3.8 73.17ng/ml,与临床上己使用的抗肿瘤药物5-氟尿嘧 啶和顺铂作对照，与其活性相当。因此，本发明提供的此类保泰松类似物为开发 新型抗肿瘤药物开辟了另一有效途径，该类化合物的合成反应设计合理，反应条件温和，操作简单，反应收率高，如能开发成为新药将有良好的市场应用前景。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应当理解，这些实施例仅用于说 明本发明而不用于限制本发明要求保护的范围。
合成化合物表征使用的仪器熔点使用X5型显微数字熔点测定仪，温度未
经校正；NMR谱使用瑞典Bruker DPX-400型超导核磁共振仪测定，TMS为内 标；高分辨质谱使用Waters-Micromass公司Q-Tof质谱仪测定；IR谱用Nicolet IR 200型红外吸收光谱仪，KBr压片。 实施例1
l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮的制备 将适量碎冰及盐酸加入50ml反应瓶中，在搅拌下加入苯胺5.0g(53.8mmo1)， 于5 10'C缓慢加入亚硝酸钠3.88g(56.2mmo1)，加毕，以淀粉碘化钾试纸测试反 应液，如试纸呈深蓝色，即示重氮化反应已达终点。在另一反应瓶中投入适量碎 冰、苯酚5.0g(53.2mmol)及30%氢氧化钠溶液100ml，在搅拌下缓慢加入上述重 氮盐溶液，反应温度控制在0 1(TC，加毕，继续搅拌20分钟，然后用盐酸调 节pH值为2 3，过滤，水洗至中性，干燥，得化合物对羟基偶氮苯。
将乙醇20ml、对羟基偶氮苯4.0g(20mmol)及氢氧化钠0.86g(21.5mmol)依次 投入反应瓶中，搅拌溶解1小时，加入氯化苄2.8ml(22.1mmol),然后升温至80'C， 加热回流2小时，冷却至20 25。C，过滤，适量的乙醇洗涤，干燥，即得化合 物对苄氧偶氮苯。
将乙醇25ml、对苄氧基偶氮苯4.0g(13.9mmol)及40%氢氧化钠溶液6.5ml 依次投入反应瓶中，在搅拌下升温至75 8(KC，加入锌粉2.8g(43.0mmo1),加热 回流至反应混合物由红棕色变为灰白色，即达到终点。搅拌下冷却至20 25'C, 并继续搅拌4小时，过滤，水洗至中性，少量的乙醇洗，干燥，即得对苄氧基氢 化偶氮苯，直接用于下一步反应。
将金属钠0.8g(34.8mmol)加入反应瓶中，搅拌下慢慢加入绝对无水乙醇17 ml，待金属钠溶解完毕，加入正丁基丙二酸二乙酯5.0ml(22.7mmo1)，无水亚硫 酸钠0.25g(2.0mmol)升温至60 70°C，加入对苄氧氢化偶氮苯(含锌粉)6.0g，继 续升温至回流，在回流条件下反应8 10小时，蒸出乙醇，冷却至40 50。C,
7，过滤，滤液用15mlx3的氯仿萃取，水层用盐酸调 pH值3 4，得到粘稠状固体。将该固体用甲醇重结晶，得到化合物l-(4-苄氧基 苯基)-2-苯基-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮。
产品为白色粉末。m.p.l30-134。C.!H NMR(400Hz，CDCl3): S0.91(t, 3H， -CH3)， 1.37(m， 2H， -CH2-), 1.46~1.52(m, 2H, -CH2-)， 2.08(m, 2H,陽CH2-)， 3.37(t， 1H， H-4)， 4.98(s, 2H, -CH2-)， 6.90(d, 2H， J=8.9Hz, H-Ph)， 7.30(m, 12H， H-Ph); MS:[M+H]、415.2022,实测值[M+H]^415.2007。 IR(KBr):2959,2858， 1755， 1726，。 实施例2
1-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-异丁基-3, 5-吡唑烷二酮的制备 用异丁基丙二酸二乙酯替代正丁基丙二酸二乙酯，制备方法同实施例1。 产物为白色粉末。m.p.l29-13rC. ^NMR(400Hz,CDCl3):50.96(s，3H，-CH3)，
0.98(s, 3H, -CHs), 1.94(d, 2H， J=6.79Hz， -CH2-)， 2.10~2.17(m， 1H，陽CH)， 3.39(m,lH，
H陽4)， 4.98(s， 2H， -QJa-), 6.90(d, 2H， J=8.90, H-Ph)， 7.17~7.38(m， 12H,H-Ph);
MS:[M+H]+=415.2022,实测值[M+H]、415.2018。 IR(KBr):2948，2864， 1753,1719。
实施例3
l-(4-苄氧基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑烷二酮的制备 用环丙甲基丙二酸二乙酯替代正丁基丙二酸二乙酯，制备方法同实施例1。 产物为淡黄色粉末。m.p.l35-137°C. NMR(400Hz, CDC13): S0.23(m， 2H, -CH2-)， 0.46(m， 2H， -CH2-)， 0.92(m， 1H， -CH)， 2.06(t， 2H， -CH2-)， 3.42(t， 1H， J=5.16Hz， H-4)， 4.98(s， 2H, -CH2-)， 6.90(d， 2H, J=8.88Hz， H-Ph)， 7.17~7.25(m， 3H, H隱Ph)， 7.31~7.37(m，8H,H-Ph)， MS:[M+H]+=413.1865,实测值[M+H]、413.2。 IR(KBr): 3064,2927， 1718,應。 实施例4
1-(4-节氧基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑烷二酮的制备 用间甲基苯胺替代苯胺，制备方法同实施例l。
产品为类白色粉末。m.p.l23-124。C.'H NMR(400Hz， CDC13): S0.91(t， 3H， J=7.24Hz, -CH3)，1.37(m，2H，CH2-)， 1.48(m,2H，- CH2-)，2.07(m，2H，-CH2-),2.31(s，3H: -CH3), 3.36(m， 1H， ， H-4), 4.98(s， 2H, -CH2-)， 6.91(m， 2H， J=8.88Hz, H-Ph), 7.01(m， 2H， H-Ph)，7.16~7.25(m，4H，H-Ph)，7.33~7.38(m，5H，H-Ph); MS:[M+H]+=429.2100，实测值[M+H]^429.2178。 IR(KBr):32949,2861， 1754， 1717。
实施例5
l-(4-苄氧基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮的制备 用对甲基苯胺替代苯胺，制备方法同实施例l。
产品为白色粉末。m.p. 148-149°C. 'H NMR(400Hz, CDC13): S0.91(t, 3H, J=3.16Hz， -CH3)， 1.37(m， 2H, -CH2-)， 1.49(m， 2H， -CH2-)， 2.07(m, 2H, -CHa-), 2.28(s， 3H， -CHs), 3.36(m， 1H H-4), 4.98(s， 2H, -CH2-)， 6.90(d, 2H， J=8.96Hz, H-Ph)， 7.1 l(d， 2H, J=8.28Hz， H-Ph), 7.16~7.25(m, 4H， H-Ph)， 7.32~7.38(m， 5H, H-Ph); MS:[M+H]+=429.2100，实测值[M+H]、429.2180。 IR(KBr): 2951 ，2847， 1751， 1715。 实施例6
l-(4-节氧基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮的制备 用对氯苯胺替代苯胺，制备方法同实施例l。
产品为白色粉末。m.p. 168-169°C. 'H NMR(400Hz， CDC13): S0.91(t， 3H， J=14.4Hz， -CH3), L38(m， 2H, -CH2-)， 1,48(m， 2H， -CH2-)， 2.08(m， 2H， -CH2-)， 3.37(t, 1H， H-4), 4.99(s， 2H， -CH2-)， 6.91(d， 2H， J=8.87Hz， H-Ph)， 7.19~7.38(m， 11H, H-Ph); MS: [M+Na]+=449.1632，实测值[M+Na]^449.1623; IR(KBr): 2949， 2855， 1755, 1605。 实施例7
1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3, 5-吡唑垸二酮的制备 1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3,5-吡唑烷二酮制备方法实施例5。 将l-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3，5-吡唑烷二酮5.0g(12.9mmo1)、 甲醇25ml和2mol/L氢氧化钠0.75ml加入反应瓶中，搅拌下加入30%过氧化氢 9.0ml(79.4mmo1)，常温反应24小时。往反应液中加水50ml，以25mlx3的乙酸 乙酯萃取，然后将乙酸乙酯层用饱和碳酸氢钠水洗3次，分出有机层，减压蒸干， 加入乙醚20ml重结晶，过滤，少量的乙醚洗涤，晾干，得1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑烷二酮。
产品为白色粉末。m.p. 195-198°C. NMR(400Hz， d-Acetone): S0.87(t, 3H, J=7.18Hz， -CH3)，1.32~1.41(m, 4H， -CH2-)， 1.95(m， 2H， -CH2-)， 2.24(s, 3H, -CH3)，6.76~6.80(m, 2H， H-Ph), 7.12~7.24(m, 6H， H-Ph); MS:[M+Na〗+=377.1477，实
9测值[M+Na〗、377.1479 。
IR(KBr): 3338,2961,, 2865， 1736,1692 。 实施例8
l-(4-羟基苯萄-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑垸二酮的制备 l-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮制备方法实施例4。 以l-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮为原料，制备方 法同实施例7。
产品为白色粉末。m.p, 172-175°C. NMR(400Hz， d墨DMSO): S0.88(t， 3H， J=7.04Hz, -CH3)， 0.90~1.43(m， 4H, -CJ^-), 1.97(m， 2H, -CH2-)， 2.04~ 2.09 (m, 1H, 4陽OH)， 2.28(s， 3H, -CH3), 6.80(m, 2H，H-Ph), 7.02(m, 1H， H-Ph), 7.13(m， 1H, H誦Ph)， 7.22(m,4H,H-Ph);MS:[M+H]+=377.1477,实测值[M+H]、377.1476。IR(KBr):3345， 3062,2963，1737,1688。 实施例9
l-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑烷二酮的制备 1-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑垸二酮制备方法实施例6。 以l-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮为原料，制备方法 类同实施例7。
产品为白色粉末。m.p. 147-149°C. & NMR S(400Hz， DMSO): 0.86(t， 3H， J=7.10Hz， -CH3), 1.26~1.41(m, 4H， -CH2-)， 1.95(m, 2H, -CH2-)， 6.65(m， 2H, H-Ph)， 7.05(m， 2H， H-Ph), 7.19~7.26(m, 4H, H-Ph); MS:[M+Na]+=399.1088，实测值 [M+Na]+-399.1086。 IR(KBr): 3422,2960， 1702， 1597， 实施例10
1-(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-4-羟基-3, 5-吡唑烷二酮的制备 l-(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑垸二酮制备方法实施例3。 以l-(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑烷二酮为原料制备方法同实 施例7。
产品为白色粉末。m.p. 107-109°C. & NMR(400Hz,d-DMSO): S0.13 0.15(m， 2H， -CHr)，0.42~0.66(m, 2H, -CH2-)， 0.66(m， 1H, -CH-)， 1.93(m， 2H, -CH2-)， 6.79(m, 2H, H-Ph)， 7.19~7.24(m, 3H, H-Ph)， 7.32~7.40(m, 4H, H-Ph); MS: [M+Na]+=361.1164，实测值[M+Na]^361.1170。 IR(KBr):3410，3063,1696， 1596。实施例11
1， 2-二 (4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮的制备
往250ml的单口瓶中加入对氯苯胺5g G9.4mmo1)和甲苯160ml，搅拌使对 氯苯胺溶解，然后加入二氧化锰17g (195.4mmo1)，加热回流，反应至体系中无 水生成为止。反应完全后，降温至70 8(TC左右，趁热过滤，母液减压浓縮至 大约一半，放入冰箱静置5小时，过滤，用少量冷的甲苯洗涤，烘干，得黄色结 晶4'， 4-二氯偶氮苯。
将加入4'， 4-二氯偶氮苯2.9g (11.6mmo1)，丙酮60ml加入250ml的单口瓶 中，搅拌下加入饱和氯化铵溶液5ml，再加入锌粉6g，常温下反应5小时，过滤， 丙酮洗，母液减压浓縮至约20ml时，倒入80ml的冰水中，搅匀后放入冰箱，静 置5小时，过滤，用50%的丙酮洗，真空下干燥，得淡黄色固体4'， 4-二氯氢化 偶氮苯。
往50ml的三口烧瓶中加入金属钠0.5g (21.7mmo1)、慢慢加入绝对无水乙 醇llml，搅拌下溶解后加入正丁基丙二酸二乙酯1.3ml(5.9mmo1)，升温至50。C， 加入4'， 4-二氯氢化偶氮苯lg(4.0mmo1)，继续加热，回流反应8小时，常用蒸 馏至120'C，降温至8(TC，加水50ml，搅拌20分钟，过滤，滤液用氯仿15ml X3萃取，分出水层，用稀盐酸调pH值为6 7，析出固体，过滤，得粗品，以 20ml乙醇重结晶得l， 2-二(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮。
产品为白色结晶。m.p.l33-135。C. 'H NMR(400Hz， CDC13): S0.91(t, 3H， J=7.13Hz， -CH3)， 1.34-1.48(m, 4H, -CH2-)， 2.06-2.19(m, 2H， -CH2-)， 3.14(t， 1H， J=5.76Hz, H-4)， 7.24~7.28(m， 4H， H-Ph)， 7.30~7.33(m， 4H， H-Ph); MS:[M+H]+=377.0824，实测值[M+H]^377.0822。 IR(KBr): 3061， 2928， 1759, 1714。 实施例12
1， 2-二 (4-溴苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑二酮的制备 用对溴苯胺替代对氯苯胺，制备方法同实施例ll。
产品为淡黄色粉末。m.p.l65 166。C. NMR (400Hz， CDC13): S0.90(t， 3H， J=7.20Hz， -CH3)， 1.33~1.46(m， 4H, -CH2-)， 2.05~2.17(m， 2H, -Qi2-)， 3J9(t， 1H, J= 5.74Hz,H-4)，7.16~7.26(m，4H，H-Ph)，7.44~7.48(m,4H， H-Ph); —MS: [M+H]+=46.9813，实测值[M+H]、 46.9813 。 IR(KBr): 2966，- 2855,1757， 1717.。 应用例1
l-(4-苄氧基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮(实施例4的化 合物)体外抗肿瘤活性测试以MTT法采用四种细胞系，分别为肝癌细胞 (HepG-2)、肺癌细胞(SPCA1)、食管鳞癌细胞(Ec9706)和子宫颈癌细胞(Hela)。
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入200ul，铺板使待测细胞调 密度至6000个/孔，(边缘孔用无菌PBS填充)。5^02下37。C孵育，至细胞单 层铺满孔底(96孔平底板)，加入浓度梯度本发明合成的药物(实施例4的化 合物)，培养24小时后，即可加药， 一般设9个梯度，每孔200ul，设6个复孔。 5%002下37。C孵育24小时，倒置显微镜下观察，每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml， 即0.5WMTT)，继续培养4h。终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150ul 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪 0D490nm处测量各孔的吸光值。用SPSS软件对实验结果进行统计并计算1<:5()值。 IC50 (pg/ml)值测试结果肺癌(SPCA1)， 38.75;子宫颈癌(Hela)， 38.48;食管 鳞癌(Ec9706)， 83.32;肝癌(HepG-2)， 46.41。 应用例2
1-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3, 5-吡唑烷二酮(实施例7 合成的化合物)体外抗肿瘤泠性测试同应用例1。
IC50 (吗/ml)值测试结果肺癌(SPCA1)， 10.42;子宫颈癌(Hela), 5.29; 食管鳞癌(Ec9706)， 5.07;肝癌(HepG-2)， 3.75。 应用例3
1-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3, 5-吡唑垸二酮(实施例8 合成的化合物)体外抗肿瘤活性测试同应用例l。
IC50 (吗/ml)值测试结果肺癌(SPCA1), 19.96;子宫颈癌(Hela)， 11.31; 食管鳞癌(Ec9706)， 6.88;肝癌(HepG-2)， 16.96。 应用例4
1， 2-二 (4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮(实施例11合成的化合物) 体外抗肿瘤活性测试同应用例1 。
IC50 (pg/ml)值测试结果肺癌(SPCA1)， 61.19;子宫颈癌(Hela)， 73.17:
12食管鳞癌(Ec9706)， 65.77;肝癌(HepG-2)， 33.85。 应用例5
1， 2_二 (4-溴苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑二酮(实施例12合成的化合物) 体外抗肿瘤活性测试同应用例1。
IC50 (吗/ml)值测试结果月市癌(SPCA1)， 25.13;子宫颈癌(Hela)， 20.61; 食管鳞癌(Ec9706)， 11.91;肝癌(HepG-2)， 11.22。 对比例
5-氟尿嘧啶体外抗肿瘤活性测试同应用例1。
IC50 (ng/ml)值测试结果月市癌(SPCA1)， 32.50;子宫颈癌(Hela)， 25.39; 食管鳞癌(Ec9706)， 37.74;肝癌(HepG-2)， 18.26。
权利要求
1.N-取代苯环的3，5-吡唑二酮化合物，其特征在于，具有通式I所述结构R1为氢、间位C1-4烷基、对位C1-4烷基或对位卤素取代；R2为对位苄氧基、对位羟基或对位卤素取代；R3为C1-4烷基、环丙烷甲基或苄基取代；R4为氢或羟基。
2. 根据权利要求l所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物，其特征在于， 所述的卤素为氟、氯或溴原子。
3. 根据权利要求2所述的N-取代苯环的3, 5-吡唑二酮化合物，其特征在于，R, 为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位苄氧基、对位羟基、对位 氯或对位溴；R3为正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为氢或羟基。
4. 根据权利要求3所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物，其特征在于，其 中该化合物是以下化合物之一l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-异丁基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮； l-(4-节氧基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑烷二酮； l-(4-羟基苯基)-2-(3-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑烷二酮； l-(4-羟基苯基)-2-(4-甲基苯基)-4-正丁基-4-羟基-3， 5-吡唑垸二酮； l-(4-羟基苯基)-2-(4-氯苯基)-4-正丁基-4-羟基-3 ， 5-吡唑烷二酮； 1 -(4-羟基苯基)-2-苯基-4-环丙甲基-4-羟基-3 ， 5-吡唑垸二酮； 1， 2-二 (4-溴苯基)-4-正丁基-3, 5-吡唑二酮; 1， 2-二 (4-氯苯基)-4-正丁基-3， 5-吡唑二酮。
5. 如权利3要求所述的制备N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的方法，其特 征在于当为&为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位苄氧基； R3为正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将 苯胺或取代苯胺与亚硝酸钠发生重氮化反应，再与苯酚偶合得到对羟基偶氮苯或 对羟基偶氮苯环取代物；b.将对羟基偶氮苯或对羟基偶氮苯环取代物与氯化苄 反应生成对苄氧基偶氮苯或对苄氧基偶氮苯环取代物；C.将对苄氧基偶氮苯或 对苄氧基偶氮苯环取代物与锌粉发生还原反应生成对苄氧基氢化偶氮苯或对苄 氧基氢化偶氮苯环取代物；d.将对苄氧基氢化偶氮苯或对苄氧基氢化偶氮与取 代的丙二酸二乙酯在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡唑 二酮化合物；取代苯胺为间甲基苯胺、对甲基苯胺、对氯苯胺或对溴苯胺；取代 的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙酯、异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙二酸 二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
6. 如权利要求3所述的制备N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的方法，其特 征在于当R为氢、间甲基、对甲基、对位氯或对位溴；R2为对位节氧基或对 位羟基；R3选自正丁基、异丁基、环丙甲基或苄基；R4为羟基时，包含如下合 成步骤将权利要求5制备的N-取代苯环4-位单取代-3， 5-吡唑二酮化合物经氢 化再与过氧化氢发生氧化反应生成N-取代苯环-4-位羟基取代-3， 5-吡唑二酮化 合物。
7. 如权利要求3所述的制备N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物的方法，其特 征在于当R,为对位氯或对位溴；R2为对位氯或对位溴；R3选自正丁基、异丁 基、环丙甲基或苄基；R4为氢时，包含如下合成步骤a.将对位卤代苯胺与二 氧化锰反应生成苯环卤代的偶氮苯；b.将苯环卤代的偶氮苯与锌粉发生还原反 应生成苯环卤代的氢化偶氮苯；C.将苯环卤代的氢化偶氮苯与取代的丙二酸二 乙酯在乙醇钠的作用下发生环合反应生成N-取代苯环的3， 5-吡哇二酮化合物； 对位卤代苯胺为对氯苯胺或对溴苯胺；取代的丙二酸二乙酯为正丁基丙二酸二乙 酯、异丁基丙二酸二乙酯、环丙甲基丙二酸二乙酯或苄基丙二酸二乙酯。
8. 如权利要求l-4任何一种所述的N-取代苯环的3， 5-吡唑二酮化合物在药物制备中的应用，其特征在于作为活性成分用于制备抗肿瘤药物。
9. 如权利要求8所述的N-取代苯环的3， 5-吡哇二酮化合物在药物制备中的应用，其特征在于作为活性成分用于制备抗肝癌、肺癌、食管癌或子宫颈癌药物。
全文摘要
本发明属于药物化学合成技术领域，公开了具有抗肿瘤活性的N-取代苯环的3，5-吡唑二酮化合物、其合成方法及其用途。本发明化合物具有通式I结构，式中R<sub>1</sub>为氢、间甲基、对甲基、对位氯、对位溴；R<sub>2</sub>为对位苄氧基、对位羟基、对位氯、对位溴；R<sub>3</sub>为正丁基、异丁基、环丙甲基、苄基；R<sub>4</sub>为氢或羟基。该化合物用于治疗肿瘤疾病，经体外抗癌活性实验证明，该类化合物对多种肿瘤细胞具有明显的抑制和杀伤作用，开发成为新药后可作为活性成分可应用于临床预防和治疗癌症。
文档编号C07D231/32GK101602728SQ20091006545
公开日2009年12月16日 申请日期2009年7月16日 优先权日2009年7月16日
发明者侯桂琴, 刘宏民, 张秋荣, 曹云峰, 丽 王, 王俊魏 申请人:郑州大学
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