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2021-02-01 16:02:27|
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起点商标网 专利名称：抗病毒肽类的制作方法
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本发明涉及某些含杂环基的肽衍生物，这些衍生物可用于治疗或预防人的还原病毒感染。
人免疫缺陷病毒(HIV)是一种还原病毒，它是许多种临床疾病的致病因子，这些疾病中最严重者俗称爱滋病(获得性免疫缺陷综合症)和爱滋病相关综合症。HIV感染的特征是免疫系统的进行性衰竭和中枢神经系统机能降碍。严重免疫缺陷患者易患范围广泛的机会性感染(例如卡氏肺囊虫、人细胞肥大病毒或念珠菌的感染)和癌症(如卡波济肉瘤)。HIV感染后细胞(特别是CD+4淋巴细胞)的损失在免疫功能的进行性损伤中是一个重要因素。HIV对单核细胞/巨噬细胞谱系统细胞的感染也与所观察到的病理现象有关。因此，HIV对CD+4细胞的成功感染是发病过程中的关键步骤。
HIV是一种还原病毒，它以RNA编码其遗传信息，病毒进入宿主细胞后，RNA则转化为DNA。还原病毒复制循环中的一个基本步骤是将初始多肽前体加工成成熟的结构蛋白和复制蛋白。这一加工过程是由病毒编码的蛋白酶进行的，如果缺少这一酶活性，则病毒复制受阻。
我们发现，某些连有杂环基的肽衍生物，无论是在无细胞测定还是在感染细胞中，都是还原病毒蛋白酶的强抑制剂，此外，这些衍生物在组织培养测定中显示出抗病毒活性。这一活性使这些化合物可用于治疗和预防还原病毒感染，特别是由HIV引起的感染。
因此，本发明提供具有下式的化合物及其可药用盐和生物前体
其中R1为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基、杂环基或CONR9R10;
R2为C1-C6烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基或杂环基(C1-C4)烷基;
R3为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基、芳基(C2-C4)烯基、杂环基(C1-C4)烷基或杂环基(C2-C4)烷基;
R4为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基或杂环基;
R5、R6、R7和R8都各自独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基;或者，R5和R6，或R7和R8，可连在一起形成三至八员碳环;
X为含有若干环碳原子和一个环氮原子的单环或双环四至十员杂环基，该基团通过环氮原子与相连的羰基连接;该基团可以是饱和的或部分未饱和的，而且，除-(CR7R8)m-Het取代基外，该基团可以被至多4个其它取代基取代，取代基都独立地选自F、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、OR11或NR9R10;
Het为咪唑基或三唑基，它们都可任选地被C1-C6烷基、C3-C8环烷基、NR9R10或CONR9R10取代;
R9或R10都独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基，或者，R9和R10可连在一起而与它们所连的氮原子一起形成四至八员含氮杂环基;
R11为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基;
n和m各自独立地为0、1或2;
上述定义中所包括的任何烷基或环烷基都可任选地被氟全取代或部分取代。
在R1、R2、R3和R4的上述定义中，杂环基是指四至六员杂环基，其中所含的杂原子是至多4个氮原子，或1个氧原子或硫原子加上任选的1个或2个氮原子。该环可以是芳香性的，也可以是全部或部分饱和的，可以任选地被苯稠合，或被下列基团取代C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C5烷酰基、C1-C4烷氧基、卤素、羟基、氧或芳基。优选的杂环基为吡啶基、嘧啶基、噻吩基、异喹啉基和四唑基。
在R1、R2、R3和R4的上述定义中，芳基指被1-3个取代基任选取代的苯基，取代基各自独立地选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C4烷氧基、C2-C5烷酰基、羟基、卤素、被氟全部或部分取代的C1-C4烷基、被氟全部或部分取代的C1-C4烷氧基、苯基、苯氧基、苄基、苯甲酰基、苯基SO2-、吡啶基、四唑基、苯基四唑基、NR9R10或CONR9R10;其中R9和R10如前面所限定。卤素指氟、氯、溴或碘。
咪唑基或三唑基(即Het)既可通过环碳原子连接，也可通过环氮原子连接，既可以是未取代的，也可以被单取代、二取代或三取代。三唑基既包括1，2，3-三唑基也包括1，2，4-三唑基。
含有3个或更多个碳原子的烷基和烷氧基可以是支链或直链的。上述定义中所包括的任何烷基、烷氧基或环烷基，都可任选地被氟全部或部分取代。
上述定义中的术语“生物前体”是指式(Ⅰ)化合物的可药用的、可生物降解的衍生物，该衍生物在给予动物或人时，在体内转化成式(Ⅰ)化合物，其实例包括在式(Ⅰ)化合物的游离羟基和(例如)氨基酸(如L-缬氨酸)间形成的酯衍生物。
应该认识到，式(Ⅰ)化合物有许多不对称碳原子，本发明包括所有可能的立体异构体，无论是经过分离的还是未经分离的。
本发明的一个特定而优选的方面提供具有以下立体化学构型的化合物
在上式中，用粗键表示该基团位于分子平面之上，用虚键表示该基团位于分子平面之下。
在R1的定义中，芳基优选为苯基，杂环基优选为氧杂环丁烷-3-基或1，1-二氧硫杂环丁烷-3-基。R1优选为叔丁基、异丙基、氧杂环丁烷-3-基或1，1-二氧硫杂环丁烷-3-基，(CR5R6)n不存在;或者，R1为苯基，(CR5R6)为CH2;或者，R1为H2NCO-、CH3NHCO-或(CH3)2NCO-，(CR5R6)n为CH2或CH(CH3)。特别优选的是其中R1为叔丁基、异丙基或氧杂环丁烷-3-基，n为0的化合物;最优选的是其中R1(CR5R6)n-为叔丁基的化合物。
在R2的定义中，芳基优选为苯基，杂环基为例如吡啶基、嘧啶基或噻吩基。R2优选为芳基(C1-C4)烷基;特别优选苄基。
在R4的定义中，芳基优选为苯基，杂环基优选为吡啶基、嘧啶基或噻吩基。R4优选为C1-C6烷基;特别优选的是异丙基和仲丁基(缬氨酸或异亮氨酸衍生物)。
杂环基X优选为四至六员饱和或单不饱和基团，最优选的是氮杂环丁烷、吡咯烷、四氢吡啶或哌啶基，特别优选的是哌啶。
R7和R8优选为H，m优选为0或1。
在R3的定义中，芳基是如前面在术语“芳基”中所限定的未取代或取代的苯基，杂环基为例如吡啶基、嘧啶基、异喹啉基或噻吩基。R3优选为芳基(C1-C4)烷基或芳基(C2-C4)烯基，最优选的是在苯环上被氟、氯、碘、甲基、三氟甲基或三氟甲氧基任选取代的苄基，或者R3为3-苯基丙-2-烯基或3-苯基丙基。
具体的优选化合物包括1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;
1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯-1-基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(R)-2-(4-氯苄基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
本发明的第二方面提供式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或生物前体作为药物的应用，尤其是作为用于治疗或预防人的还原病毒感染(特别是HIV感染)的药物的应用。本发明还包括式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或生物前体在制备一种药物中的应用，这种药物用于预防或治疗还原病毒感染。
本发明还包括一种药物组合物，该组合物包含一种式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或生物前体，以及一种可药用的稀释剂或载体。
通式(Ⅰ)化合物的抗病毒活性是利用体外测定体系来确定的。例如，式(Ⅰ)化合物能保护人T细胞系H9完全不受HIV感染的进行性作用7天。未经处理的病毒感染细胞则显示出典型的细胞病效应，如合胞体的形成和细胞死亡。此外，用式(Ⅰ)化合物处理过的病毒感染细胞所产生的病毒颗粒是非感染性的。
可以用式(Ⅰ)化合物治疗或预防的感染的例子包括由人或动物还原病毒尤其是HIV-1引起的感染。所以，可以治疗或预防的临床疾病包括爱滋病、爱滋病相关综合症和HIV相关性痴呆。这些化合物还可用来阻止无症状感染个体疾病的进行。
式(Ⅰ)化合物可以利用偶合和保护技术来制备，这些技术是肽化学领域的技术人员所熟悉的。
该方法可以用以下所示的制备式(Ⅰa)化合物的反应路线来举例说明反应式A所概括的步骤由受护内酯(Ⅱ)起始。利用(例如)正丁基锂或六甲基二硅烷基胺化锂使该内酯烷基化，然后加入式R3Br化合物，分离出所要的异构体，得到产物(Ⅲ)。然后用稀碱处理使内酯环打开，生成相应的羟基酸，随后对羟基进行保护，例如在N，N-二甲基甲酰胺中与叔丁基二甲基甲硅烷基氯反应制成叔丁基二甲基甲硅烷基衍生物，随后水解受护酯生成中间体(Ⅳ)。
反应式B说明了中间体(Ⅳ)与另一水解产物(Ⅷ)偶合生成式(Ⅰa)化合物。在该过程中，脱除了中间体(Ⅴ)上的保护基(在保护基是叔丁氧羰基时，通过用HCl处理脱除)，利用酰胺偶合试剂使所得化合物(Ⅵ)与N-受护氨基酸Boc-NHCH(R4)CO2H反应，生成中间体(Ⅶ)。然后脱除(Ⅶ)上的N-保护基，使胺产物(Ⅷ)与中间体(Ⅳ)偶合生成中间体(Ⅸ)。然后从(Ⅸ)上脱除羟基保护基X1，生成式(Ⅰa)终产物。另一种方法，可以由中间体(Ⅹ)与中间体(Ⅵ)偶合生成中间体(Ⅸ)。中间体(Ⅹ)则可由中间体(Ⅳ)来制备，即，使中间体(Ⅳ)与羧基保护氨基酸H2NCH(R4)CO2R反应，随后进行碱水解。
保护基，X′优选叔丁基二甲基甲硅烷基R1-(CR5R6)n优选叔丁基或苄基。
酰胺偶合剂如1-(3-二甲基丙基)-3-乙基碳二亚胺保护基P，优选叔丁氧羰基或苄氧羰基;
X′，优选叔丁基二甲基甲硅烷基R，优选甲基或乙基反应式C说明了另一个可替代的方法，通过用酸(如三氟乙酸)处理脱除中间体(Ⅺ)上的叔丁氧羰基，随后与式(Ⅻ)的碳酸酯衍生物反应生成式(ⅩⅢ)产物，其中R1(CR5R6)n基团不为叔丁基。例如，式(Ⅺ)产物与3-氧杂环丁烷氧羰氧基琥珀酰亚胺反应生成产物(ⅩⅢ)，其中R1为3-氧杂环丁烷基，n为0。
X′或者为H，或者为一个保护基，如叔丁基二甲基甲硅烷基。
Y为一个易发生亲核取代的基团，优选琥珀酰亚胺氧基。
上述步骤所需的式(Ⅴ)原料在某些情况下是文献化合物，或者可以用常规合成法由易得的原料来制备。例如，使1-(N-叔丁氧羰基)-3-羟基氮杂环丁烷与甲磺酰氯反应，然后在碱存在下与式Het-H化合物反应，生成所需的式(Ⅴ)化合物，其中X为氯杂环丁烷环。或者，在乙酸铵存在下使1-(N-苄氧羰基)-4-酮哌啶与氰基硼氢化钠反应，使前者转化为4-氨基衍生物，随后再与连氮二甲基甲酰胺反应生成4-(1，2，4-三唑-4-基)衍生物。
1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮基哌啶与由1-(二乙氧基甲基)咪唑与正丁基锂反应生成的阴离子反应，然后在碱存在下用甲磺酰氯处理所生成的产物，生成N-受护-4-咪唑-2-基(1，2，5，6-四氢吡啶)中间体。催化氢化后生成相应的N-受护-4-(咪唑-2-基)哌啶。上述羰基化合物在亚硫酰氯存在下直接与杂环化合物如咪唑反应，生成X为四氢吡啶基的式(Ⅴ)化合物，再次还原后生成哌啶生物。
反应式B中m不等于0的式(Ⅴ)中间体可以利用标准的转化方法由适当的前体来制备，并利用(例如)环氧基的亲核开环作用引入Het基团。例如，1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮基哌啶在碱存在下与三甲基碘化铳反应，生成4-螺-2′-环氧乙烷。该产物与咪唑反应，而后消除4-羟基，生成1-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)甲基-1，2，5，6-四氢吡啶，还原后生成相应的哌啶衍生物。
式(Ⅶ)化合物的合成中使用的天然存在的氨基酸的N-叔丁氧基(BOC)衍生物，在市场上可以买到，其羟基琥珀酰亚胺酯也可以买到。由非天然氨基酸衍生的相应中间体可以用标准方法制备(参见例如M.J.O′Donnell等，J.Amer.Chem.Soc.，1112353，1989)。式(Ⅱ)化合物可以由相应的叔丁氧羰基保护的氨基醛(参见D.H.Rich等，J.Org.Chem.，433624，1978和Y.Hamada等，Chem.Pharm.Bull.，30(5)1921，1982)与丙炔酸乙酯(参见A.H.Fray等，J.Org.Chem.，514828，1986)反应来制备，随后还原成5-叔丁氧羰氨基-4-羟基-6-苯基己酸酯。然后在甲苯中回流使其环化，生成式(Ⅱ)内酯，为非对映异构体的混合物，这些非对映异构体可用标准方法分离。
在上述合成路线和本文所提出的具体实施例中，需要一些羟基和氨基保护基及羧基活化基。本领域技术人员将会了解，所述的偶合和保护方法可以用任何标准肽合成法来进行，因此，这些方法包括在本发明范围内。特定保护基的选择在很大程度上取决于必要试剂的可得性、它对所保护化合物溶解度的影响、是否容易脱除、以及是否存在由于使用该保护基而可能受到影响的其他基团。例如，有必要在上述过程中对特定氨基进行保护和脱保护，以使再生出的氨基能发生进一步的反应。对指定的氨基而言，保护基的选择将取决于所述氨基在整个反应式中的作用。可以使用活泼程度不同的各种氨基保护基。这些基团是本领域内已知的，请注意以下综述Bodansky等人《肽合成》第二版(John Wiley & Sons，N.Y.，1976);Greene《有机合成中的保护基》(John Wiley & Sons，N.Y.，1981);McOmie《有机化学中的保护基》(Plenum Press，N.Y.，1973);以及Sheppard在E.Haslam编《综合有机化学有机化合物的合成和反应》中的文章(第23.6节第321-339页，Pergamon Press，N.Y.，1979)。
有代表性的氨基保护基包括(但不限于)芳氧羰基，如苄氧羰基;取代或来取代的芳烷基，如苄基，三苯甲基，二苯甲基，4-硝基苄基;苯亚甲基;芳硫基，如苯硫基、硝基苯硫基和三氯苯硫基;磷酰基衍生物，如二甲基磷酰基和0，0-二苄基磷酰基;三烷基甲硅烷基衍生物，如三甲基甲硅烷基，以及如美国专利4，322，341所述的其他保护基。优选用于上述反应路线的氨基保护基为叔丁氧羰基。在给定氨基上取代上述基团的方法是公知的。一般来说，这些方法包括在反应惰性溶剂如水、二氯甲烷或四氢呋喃中，用相应的羰基氯或酸酐使适当的氨基化合物酰化。用水作溶剂时，要有碱(酸受体)存在，如氢氧化钠或氢氧化钾;使用有机溶剂时，则要有叔胺存在，如三乙胺或吡啶。使用水性溶剂体系时，反应的pH一般保持在约pH8-10，优选pH9。
用本领域技术人员认为适于所采用的特定基团的方法，将受护氨基转化为非受护氨基。例如，用饱和有氯化氢气体的二氯甲烷进行处理，很容易脱除叔丁氧羰基。
各种不同的羟基保护基也是已知的，并描述于前面已引用过的文献中。优选的羟基保护基为叔丁基二甲基甲硅烷基。该基团可以如前所述引入，在室温下用四正丁基氟化铵的四氢呋喃溶液处理时易于脱除。
羧基的活化作为加快给定酰化反应的手段也是本领域技术人员已知的方法。本文所述反应路线中特别有用的是使用酸酐和活化酯，特别是那些由N-羟基苯二甲酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或1-羟基苯并三唑衍生的酯，所有这些化合物都在肽合成中使用。
使用脱水偶合剂来形成活化酯。这类偶合剂中有代表性的有1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)碳二亚胺、N，N′-二环己基碳二亚胺、N，N′-羰基二咪唑、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、乙氧基乙炔、二苯基乙烯酮和N-乙基-5-苯基异噁唑啉-3′-磺酸酯。使用这些偶合剂的反应条件在文献中有充分的描述。一般来说，这些条件包括采用反应惰性溶剂和室温至100℃范围的温度。优选前面提到的碳二亚胺试剂，因为这些试剂允许采用室温反应温度，并能使所要的酯达到满意的收率。
偶合反应完成和生成终产物后，可以用以上讨论的适当技术脱除各种保护基，并可用常规方法如重结晶法或柱色谱法分离纯化式(Ⅰ)化合物。
上述反应路线可以修改，使其通过适当选择原料，对R1至R8、X和Het所要求保护的任何变式都适于采用。
于是，本发明的另一方面包括一种制备式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括脱除式(Ⅸ)化合物的保护基，分离出式(Ⅰ)化合物，并任选地形成其可药用盐。
其中X1是一个可选择性脱除的羟基保护基。
优选的X1保护基为叔丁基二甲基甲硅烷基，该保护基通过在有机溶剂(优选四氢呋喃)中用正四丁基氟化铵处理来脱除。
式(Ⅷ)、(Ⅸ)、(Ⅹ)的新中间体也构成本发明的一部分。
式(Ⅰ)化合物的可药用盐的实例有酸加成盐，如硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐和葡萄糖酸盐。
在对患有还原病毒(尤其是HIV)感染的患者进行治疗时，化合物(Ⅰ)可以以任何合适的途径施用，例如口服、肠胃外(例如皮下、静脉内、肌内或皮内)、直肠、经鼻、局部(包括颊部和舌下)或阴道途径。可以按照制药业中公知的常规技术配制出制剂，这些制剂将含有本发明的抗病毒剂和一种或更多种可药用的载体，以及任选的其他治疗剂。口服剂型具体包括糖浆剂、片剂和胶囊剂，这些剂型中除含有惰性载体外还可含有调味剂。片剂可以用常规压片或模塑技术，通过压制适当成分(如抗病毒剂及粘合剂、稀释剂、润滑剂和表面活性剂)的粉末来制备。直肠制剂将为栓剂形式，阴道制剂将为(例如)填塞剂、霜剂或泡沫剂形式。肠胃外制剂将为无菌形式，例如小瓶注射剂，其中含有为使制剂与血液等渗而加入的水性或非水性稀释剂、缓冲剂和抗氧化剂。一般来说，式(Ⅰ)抗还原病毒剂的适当剂量将为1-50mg/kg/天，优选1-25mg/kg/天，每天至多分六个分次剂量给药。当然，根据患者的年龄、体重、疾病严重程度和反应，有些情况下可能需要更高或更低的剂量，而适当的治疗方案将由临床医生来确定。
式(Ⅰ)化合物可以与其它药物配伍使用，其中有些药物可能会增强式(Ⅰ)化合物的活性。这类药物包括如下药物(a)反转录酶抑制剂，如AZT、ddI、ddC、foscarnet、TIBO化合物、dipyridodiazepinones或6-取代无环嘧啶(HEPT)衍生物;
(b)gp120-CD4阻断剂，如硫酸葡聚糖和可溶性CD4，包括它与毒性药剂如假单胞菌毒素的组合物;
(c)tat拮抗剂，如D-青霉胺;
(d)其他还原病毒蛋白酶抑制剂，如Ro 31-8959;
(e)生物反应调节剂，包括干扰素、白细胞介素或集落刺激因子(如GM-CSF)。
用下列方法评估本发明化合物的抗病毒活性将受试化合物溶解于50μl DMSO中，并在RPMI 1640(pH为7.2的一种复合盐溶液)中稀释至1mg/ml。以0.001、0.01、0.1、1和10μg/ml的浓度，在人T细胞系(H9)中进行抗HIV1(ⅢB株)测试。与此同时开始进行来处理的对照感染。
感染七天后，对组织培养上清液进行滴定以检查C8166(人T细胞系)上是否存在感染性病毒。于第3、5和7天检查培养物中是否出现合胞体。未用药物处理的对照感染显示出典型的病毒性细胞致病作用，包括合胞体的形成和细胞的死亡。所引用的IC100是以对培养物提供完全保护的最低测试浓度。采用这一测试方法，化合物的IC100值在0.1-10.0μg/ml的范围。
现在将提出下列实验实施例以更具体地说明某些原料和式(Ⅰ)化合物的制备。使用Merck Kieselgel 60F254硅胶板以薄层色谱法对化合物的纯度进行常规监测。1H核磁共振谱用Nicolet QE-300型或Bruker AC-300型光谱仪记录，在所有情况下都与所推测的结构一致。化学位移用四甲基硅烷作内标以低场ppm表示，主要光谱峰用常规缩写来表示s，单峰;d，双峰;t，三重峰;m，多重峰;b，宽峰。除非另外指明，旋光度在25℃下以0.1%的浓度在甲醇中测定。所有温度都为摄氏度。
原料和中间体的制备制备1(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯a)(4S，5S)和(4R，5S)-5-叔丁氧羰氨基-4-羟基-6-苯基己-2-炔酸乙酯于-25℃下，将二异丙胺(6.4ml)在无水四氢呋喃(25ml)中的溶液在氮气下搅拌，经5分钟加入1.6M正丁基锂的己烷溶液(24.4ml)，其间保持温度低于-20℃。在-20℃下再过15分钟后，将溶液冷却至-70℃，经10分钟滴加丙炔酸乙酯(3.8g)，其间保护温度低于-65℃。在-70℃下将所得的黄色悬浮液再搅拌20分钟，然后经10分钟滴加N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨醛(6.5g，见J.R.Luly等，J.Org.Chem.，521487，1987)在无水四氢呋喃(15ml)中的溶液进行处理，其间仍保持温度低于-65℃。将澄清的黄色溶液于-70℃下搅拌2小时，然后用乙酸(4ml)处理。移走冷却浴，使混合物温热至-30℃，在-30℃时于剧热搅拌下加入水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)。分离有机层，然后依次用1M盐酸(50ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和饱和盐水(50ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发溶剂后得到油状粗产物。该油状物用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-己烷(1∶4)作洗脱剂。蒸发含产物级分得到一种油状物，经放置过夜而固化。用乙醚-己烷重结晶得到标题化合物，为两种非对映体约2∶1的混合物(4S，5S∶4R，5S)(4.3g)。
m.p.98-99°。实测值C，65.62;H，7.42;N，4.33.C19H25NO5计算值 C，65.70;H，7.20;N，4.03%.
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.30-1.39(m，3H);1.43(s，9H);2.90-3.11(m，2H);3.37-3.38 and 4.16-4.19(2x brm，1H);3.93-4.04(m，1H);4.22-4.33(m，2H);4.51-4.56(m，1H);4.77-4.79 and 4.87-4.90(2 x brm，1H);7.24-7.35(m，5H).
b)(4S，5S)和(4R，5S)-5-叔丁氧羰氨基-4-羟基-6-苯基己酸乙酯将上述产物(1.17g)溶于乙醇(50mg)中，加入5%Pd-BaSO4催化剂。然后使混合物在50磅/英寸2(344.7千帕)下氢化2小时。过滤后真空蒸发溶剂，得到白色固体状的标题化合物(1.18g)(两种非对映体约2∶1的混合物)。
m.p.125-126°实测值C，64.91;H，8.40;N，3.98，C19H29NO5计算值 C，64.95;H，8.26;N，3.98%.
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.24-1.33(m，3H);1.39 and 1.42(2 x s，9H);1.72-1.95(m，2H);2.38-2.62(m，2H);2.77-2.98(m，2H);3.02-3.04和3.40-3.42(2 x m，1H可与D2O交换);3.59-3.91(m，2H);4.08-4.22(m，2H);4.58-4.61和d 4.86-4.89(2 x m，1H);7.22-7.37(m，5H).
C)(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯将由上述(b)得到的γ-羟基酯溶于2.5%乙酸-甲苯(35ml)中，将该溶液加热回流2小时，冷却并真空蒸发至干后，残余物用硅胶色谱法纯化，用乙醚-己烷(40∶60)洗脱，得到标题化合物(0.4g)。
m.p.98-99°.实测值C，66.77;H，7.78;N，4.38.C17H23NO4计算值C，66.88;H，7.54;N，4.59%.m/e＝306(MH+).
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.42(s，9H);2.11-2.19(m，2H);2.51-2.58(m，2H);2.87-3.02(m，2H);4.00-4.07(m，1H);4.47-4.52(m，1H);4.63(d，J＝10，NH);7.26-7.36(m，5H).25D-22.6°(c＝1，MeOH).
I.R.(KBr)1775，1690，1525cm-1.
制备2(R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酸a)(R)-3-苄基-(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯将六甲基二硅烷基胺(7.9ml)在四氢呋喃(15ml)中的冷(-10℃)溶液，用1.6M正丁基锂的己烷溶液(23ml)处理3分钟，其间保持温度低于0℃。0℃下再过5分钟后，将溶液冷却到-70℃，加入(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯(5g)在四氢呋喃(38ml)中的溶液，其间保持温度低于-65℃。将该溶液在-70℃下搅拌15分钟，然后经1分钟加入苄基溴(1.95ml)在四氢呋喃(12.5ml)中的溶液，将溶液在-70℃下再搅拌10分钟，然后用乙酸(6.5ml)处理，移走冷却浴。加入水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)，使混合物温热室温。分离有机层，然后干燥(MgSO4)并真空蒸发溶剂，得到油状粗产物。用硅胶色谱法纯化，用乙醚-己烷(50∶50)洗脱，得到澄清油状的标题化合物(3.52g)。实测值
C，73.22;H，7.50;N，3.50.C24H29NO4计算值C，72.91;H，7.34;N，3.54%.25D-14°(C＝0.1%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝1.37(s，9H);1.95-2.30(m，2H);2.79-3.20(m，5H);3.92-4.01(m，1H)，4.21-4.25(m，1H);4.52-4.56(m，1H);7.21-7.36(m，10H).
b)(R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酸在室温下，用氢氧化钠(1N，53.5ml)处理(a)中产物(17.63g)在二噁烷(120ml)和水(60ml)中的悬浮液。将反应物搅拌3小时，然后加入乙酸将其酸化至pH5。再放置30分钟后，滤出沉淀物并用水洗涤。将此固体溶于乙酸乙酯，干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到的白色固体用己烷研制，过滤并干燥，得到中间体羟基酸(17.85g)。将此羟基酸在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液，用咪唑(29.38g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(32.53g)在室温下处理。搅拌18小时后，真空蒸发溶剂，残余物用冰水处理，用10%柠檬酸酸化至pH4，并和2×400ml乙酸乙酯萃取。萃取液合并后干燥(MgSO4)，真空蒸发得到灰色油状物(29.2g)。将此油状物在四氢呋喃(240ml)中的溶液用乙酸(240ml)和水(80ml)在室温下处理。在室温下搅拌2小时，在4℃下搅拌18小时，然后真空蒸发溶液，残余物在水(400ml)和乙酸乙酯(400ml)之间分配。分出有机层，用水(2×400ml)、饱和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)后真空蒸发，得到灰色油状物，用硅胶色谱法纯化，用乙醚-己烷(70∶30)洗脱，得到白色玻璃状的标题化合物(22.4g)。
m/e 528(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.10(s，6H);0.95(s，9H);1.30(m，10H);1.35(m，1H);1.95(m，1H);2.40(m，1H);2.72(m，2H);2.85(m，1H);3.60(m，1H);3.75(m，1H);6.88(d，1H);7.22(m，10H).
制备35-溴甲基异喹啉在-70℃下，用1.6M正丁基锂的己烷溶液(3.3ml)处理5-溴异喹啉和7-溴异喹啉异构体混合物(5∶7，40∶60;1.0g;见Glyde和Taylor，J.Chem.Soc.Perkin Trans 2∶1783，1975)在无水四氢呋喃(15ml)中的溶液。将反应物维持在此温度30分钟，然后加入无水二甲基甲酰胺(0.74ml)在无水四氢呋喃(5ml)中的溶液。再过15分钟后，用乙醇(5ml)急停反应，并使反应物温热至升温。然后依次加入饱和氯化铵溶液(10ml)和乙醚(15ml)，分出有机相，用饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法进行纯化，用己烷-乙酸乙酯(50∶50)洗脱，分离出先洗脱出的醛，得到5-甲酰基异硅啉，为不稳定的黄色固体(0.05g)。Rf0.3(己烷-乙酸乙酯50∶50)。
将该产物(0.88g)在无水甲醇(20ml)中的溶液用硼氢化钠(0.53g)在5℃下处理，使所得混合物温热至室温，并保持此温度1小时。将该溶液用乙醚(20ml)稀释，然后加水(10ml)。将两相分开，水相用乙醚(20ml)萃取。合并两份有机相，用饱和氯化钠溶液(20ml)洗涤，干燥(MgSO4)，真空蒸发，得到浅黄色粉末状的5-羟甲基异喹啉(0.37g)。
m.p.71-72℃.实测值C，75.06;H，5.72;N，8.66.
C10H9NO 计算值 C，75.45;H，5.70;N，8.80%.
将上述产物(1.11g)在冰乙酸(15ml)中的溶液用49%氢溴酸水溶液(30ml)处理，所得混合物加热回流2小时。然后将反应物真空浓缩，残余物悬浮于二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠水溶液碱化。将两相分开，水相用二氯甲烷萃取。有机相合并后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)0.5小时，室温下真空蒸发，得到无色固体状的标题产物。使该固体与甲苯共沸，然后直接使用(1.28g)。
N.M.R.(CDCl3)δ＝4.90(s，2H);7.50(t，1H);7.70(d，1H);7.90(m，2H);8.65(d，1H);9.25(s，1H).
制备47-溴甲基异喹啉由制备3的初始步骤，作为从硅胶柱中后流出的产物得到7-甲酰基异喹啉，并以黄色固体分离出来(0.08g)。Rf0.25(己烷-乙酸乙酯50∶50)。如上所述与硼氢化钠反应，得到7-羟甲基异喹啉，m.p.129-130℃。
将上述产物的盐酸盐(0.05g)在亚硫酰溴(0.5ml)中的溶液加热到60℃，并保持45分钟。然后用冰冷却反应物，小心加入过量的水，而后加入乙醚(15ml)。然后加入浓氨水至pH9，分出醚相，用水洗涤并干燥(MgSO4)。然后加入氯化氢在异丙醇中的溶液(0.06ml，5.9N)，所得的混浊悬浮液在室温下真空蒸发。使残余物与甲苯共沸，得到无色固体状的产物盐酸盐(0.04g)。
m/e(MH)+222N.M.R.(DMSO-d6)δ＝5.05(s，2H);8.10(d，1H);8.25(d，1H);8.30(d，1H);8.45(s，1H);8.65(d，1H);9.70(s，1H).
制备5-13用制备2所述的方法制备下列式(Ⅳ)化合物，但在步骤(a)中使用适当的取代苄基溴或溴甲基异哇啉使γ-丁内酯烷基化，随后如步骤(b)所述开环并与叔丁基二甲基甲硅烷基氯反应。
制备141-(N-叔丁氧羰基)-3-甲磺酰氧基氮杂环丁烷a)在二氯甲烷(40ml)中搅拌氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(2.10g)，加入二异丙基乙基胺(2.59g)，随后加入二碳酸二叔丁酯(4.36g)。该混合物在室温下搅拌4小时，真空蒸发溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(200ml)中，用1.5M盐酸(50ml)、饱和碳酸氢钠溶液(25ml)和盐水(25ml)洗涤。干燥有机层(MgSO4)，过滤并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-己烷(50∶50)洗脱，得到白色固体状的1-(N-叔丁氧羰基)-3-羟基氮杂环丁烷(2.57g)，m.p.51-53℃。
实测值C，55.29;H，8.70;N，7.98.C8H15NO3计算值C，55.47;H，8.73;N，8.09%.
b)将上述产物(1.0g)在二氯甲烷(35ml)中的溶液用甲磺酰氯(0.75ml)和吡啶(1.5ml)处理，并将该混合物在室温下搅拌3天。将溶液用二氯甲烷(75ml)稀释，用柠檬酸水溶液(5%，100ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到无色油状的标题产物(1.4g)。
实测值C，43.00;H，6.80;N，5.50.C9H17NO5S计算值 C，43.03;H，6.77;N，5.58%.m/e 269(MH4)+.
N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.37(s，H);3.24(s，3H);3.88-3.96(m，2H);4.17-4.28(m，2H);5.25(m，1H).
制备151-(N-苄氧羰基)-(R)-3-甲磺酰氧基吡咯烷利用前面制备4所述的方法，但使用三乙胺代替吡啶作为碱，由1-(N-苄氧羰基)-(R)-3-羟基吡咯烷(J.Med.Chem.，35∶1764，1992)制备标题化合物，得到油状产物。
实测值C，51.60;H，5.80;N，4.30.C13H17NO5S 1/6 H2O 计算值C，51.63;H，5.78;N，4.63%.m/e MH+300.
N.M.R.(CDCl3)δ＝2.15(m，1H);2.55(m，1H);3.0(s，3H);3.45-3.80(m，4H);5.10(s，2H);5.25(m，1H);7.30(m，5H).
制备161-(N-苄氧羰基)-(S)-3-对甲磺酰氧基吡咯烷在氮气下，向1-(N-苄氧羰基)-(R)-3-羟基吡咯烷(7.90g)在无水四氢呋喃(100ml)中的溶液中，加入三苯膦(13.58g)。将所得溶液冷却到-30℃，加入甲苯磺酸甲酯(10.06g)，然后经0.5小时加入偶氮二甲酸二乙酯(10.41g)。再过1小时后，使反应物温热至室温，并保持65小时。真空蒸发反应物，残余物溶于二氯甲烷，用水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发成油状。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇(98∶2至96∶6)洗脱，然后再进行一次色谱纯化，用己烷-乙酸乙酯(80∶20至50∶50)洗脱，得到金色油状产物(10.22g)。
实测值C，60.59;H，5.68;N，3.67.C19H21NO5S计算值 C，60.78;H，5.64;N，3.73%.25D+9°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝1.85-2.25(m，2H);2.45(s，3H);3.40-3.65(m，4H);4.95-5.15(m，3H);7.20-7.35(m，7H);7.75(d，2H).
制备171-(N-叔丁氧羰基)-4-甲磺酰氧基哌啶按照制备14所述的方法，由1-(N-叔丁氧羰基)-4-羟基哌啶制备标题化合物，m.p.85-86℃。
实测值C，47.2;H，7.66;N，4.91.C11H21NO5S计算值C，47.3;H，7.58;N，5.02%.
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.5(s，9H);1.85(m，2H);2.0(m，2H);3.08(s，3H);3.35(m，2H);3.75(m，2H);4.9(m，1H).
制备181-(N-叔丁氧羰基)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷用氢化钠(60%，0.24g)处理咪唑(0.41g)在N，N-二甲基甲酰胺(30ml)中的溶液，将该混合物在室温下搅拌1小时。加入1-(N-叔丁氧羰基)-3-甲磺酰氧基氮杂环丁烷(见制备14，1.4g)，混合物于75℃下加热3天。然后减压除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯(50ml)中，用水(2×50ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到无色油状物。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(93∶7∶1)洗脱，得到油状标题化合物(0.72g)。
m/e 224(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.40(s，9H);3.95-4.06(m，2H);4.26-4.35(m，2H);5.12(m，1H);6.96(s，1H);7.43(s，1H);7.79(s，1H).
制备19-25按照前面制备18所述的方法制备下列式(Ⅴ)化合物，但使用由制备14-17制得的适当原料，并与适当的取代未取代的咪唑或三唑反应。
制备26(a)1-(N-叔丁氧羰基)-4-(4-甲基咪唑-1-基)哌啶4-甲基咪唑与1-(N-叔丁氧羰基)-4-甲磺酰氧基哌啶反应，得到两种区域异构体产物(regioisomeric products)，用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(96∶3.5∶0.5)洗脱。主要异构体，Rf0.47。m/e265.9(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.43(s，9H);1.7(dq，2H);1.93(bd，2H);2.07(s，3H);2.83(m，2H);4.05(m，3H);6.95(s，1H);7.55(s，1H).
(b)1-(N-叔丁氧羰基)-4-(5-甲基咪唑-1-基)哌啶次要异构体，Rf 0.52.m/e265.9(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.43(s，9H);1.7(dq，2H);1.9(bd，2H);2.05(s，3H);2.88(m，2H);4.05(m，3H);6.6(s，1H);7.65(s，1H).
制备271-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-2-基)-1，2，5，6-四氢吡啶(a)在-40℃和氮气下，在无水四氢呋喃(50ml)中搅拌1-(二乙氧基甲基)咪唑(6.8g)。以一定的速度加入正丁基锂(25ml，1.6N己烷溶液)，使温度保持低于-35℃。经10分钟滴加1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮-哌啶(2.65g)在无水四氢呋喃(10ml)中的溶液，其间保持温度低于-40℃，所得混合物于-40℃下搅拌2小时。将反应混合物与盐酸(50ml，0.1N)一起搅拌15分钟，然后加入乙酸乙酯(50ml)，所得混合物搅拌5分钟。分出有机层，水层用乙酸乙酯(1×50ml)萃取。合并有机萃取液，用饱和碳酸氢钠溶液(1×50ml)洗涤，再用饱和氯化钠溶液洗涤。然后将有机层干燥(MgSO4)并蒸发成黄色油状物(8.0g)。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯∶甲醇∶浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到奶油色固体状的1-(N-叔丁氧羰基)-4-羟基-4-咪唑-2-基哌啶(2.2g)。m/e 268.0(MH)+。
(b)在0℃下，将上述产物(267mg)与二异丙胺(350ml)一起在无水二甲基甲酰胺(2ml)中搅拌。一次加入甲磺酰氯(155ml)，将反应混合物在0℃下搅拌2小时。然后再分次加入二异丙胺(350ml)和甲磺酰氯(155ml)，反应混合物于室温下搅拌16小时。所得混合物用水(4ml)稀释，用1M氢氧化钠溶液调至pH9，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。合并有机萃取液，干燥(MgSO4)并蒸发成胶状物(260mg)。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(95∶5∶1)洗脱，得到黄色胶状的标题产物(144mg)。m/e250.1(MH)+。
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.46(s，9H);2.6(bs，2H);3.53(t，2H);4.0(bs，2H);6.3(m，1H);7.0(s，2H);9.4(bs，1H).
制备281-(N-叔丁氧羰基)-4-咪唑-2-基哌啶将中间体制备27的产物(0.55g)溶于乙醇(30ml)中，在30磅/英寸2(2.0巴)下用钯/碳催化剂(200mg，10%)氢化。滤掉催化剂并除去溶剂，得到泡沫状物(0.55g)。m/e 252.1(MH)+。
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.4(s，9H);1.68(qd，2H);1.95(bd，2H);2.75(bt，2H);2.92(bt，1H);4.1(bd，2H);6.9(s，2H);8.77(bs，1H).
制备29
1-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)甲基-1，2，5，6-四氢吡啶(a)取氢化钠(4g)在无水二甲亚砜(100ml)中的60%油分散液，用己烷洗去油液，然后在70℃下搅拌加热1小时。加入无水四氢呋喃(100ml)，将反应物冷却到-20℃。然后加入三甲基碘化铳(20.4g)在二甲亚砜(80ml)中的溶液，随后加入1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮哌啶(19.9g)在无水四氢呋喃(100ml)中的溶液，将反应物在-10℃下搅拌0.5小时，再在室温下搅拌1小时。然后加入水(500ml)，用乙酸乙酯(3×250ml)萃取混合物。合并萃取液，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用环己烷-乙醚-异丙醇(60∶40∶1)洗脱，得到无色固体状的1-(N-叔丁氧羰基)哌啶-4-螺-2′-环氧乙烷(19.6g)。
m.p.65-66℃.实测值C，62.11;H，9.06;N，6.55.C11H19NO3计算值 C，61.97;H，8.92;N，6.57%.
(b)在氮气和搅拌下，用80%氢化钠(0.84g)的油分散液处理咪唑(1.91g)在无水乙腈(30ml)中的溶液，所得混合物加热至60℃直至溶解。15分钟后加入步骤(a)的产物(2.0g)，维持反应5小时。使反应物在室温下放置过夜后，真空蒸发溶剂，油状残余物在二氯甲烷(40ml)和水(20ml)之间分配。分出有机相，用水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓880氨水(95∶4∶1)洗脱，得到无色粉末状的1-(N-叔丁氧羰基)-4-羟基-4-(咪唑-1-基)甲基哌啶(2.13g)。
实测值C，58.35;H，8.30;N，14.52.C13H23N3O3
1/10 CH2Cl2计算值 C，58.43;H，8.07;N，14.50%.
m/e 282(MH)+.
(c)在0-5℃和搅拌下，用甲磺酰氯(2.20ml)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液，处理步骤(b)产物(2.0g)和三乙胺(5.44ml)在无水二氯甲烷(80ml)中的溶液，使所得混合物温热至室温并保持14小时。然后用水洗涤反应混合物，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化残余物，用二氯甲烷-甲醇-浓880氨水(96∶4∶0至95∶4∶1)洗脱，得到金色油状产物(1.36g)。
实测值C，59.93;H，7.60;N，14.79.C13H21N3O21/4 CH2Cl2计算值C，60.14;H，7.61;N，14.77%.
m/e(MH)+264N.M.R.(CDCl3)δ＝1.45(s，9H);1.97(m，2H);3.50(t，2H);3.90(s，2H);4.50(s，2H);5.50(s，1H);6.90(s，1H);7.10(s，1H);7.55(s，1H).
制备301-(N-正丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)甲基哌啶在50磅/英寸(3.5巴)和室温下，用10%钯/炭(0.3g)作催化剂，在搅拌下使制备29产物(1.33g)在无水乙醇(25ml)中的溶液氢化4小时。然后将反应混合物过滤并真空蒸发，与二氯甲烷共沸。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇(96∶4)洗脱，得到无色油状产物(1.09g)。
实测值C，63.08;H，8.60;N，15.50.C13H23N3O21/4 CH2Cl2计算值C，63.36;H，8.74;N，15.84%.m/e(MH)+266N.M.R.(CDCl3)δ＝1.15(m，2H);1.45(s，9H);1.58(m，2H);1.85(m，1H);2.65(t，2H);3.80(d，2H);4.10(m，2H);6.90(s，1H);7.10(s，1H);7.45(s，1H).
制备31
1-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)-1，2，5，6-四氢吡啶在-10℃下，在无水二氯甲烷(30ml)中搅拌咪唑(8.20g)，并加入亚硫酰氯(4.8ml)在无水二氯甲烷(30ml)中的溶液。使所得浆液温热至室温，2小时后滴加1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮哌啶(6.0g)在无水二氯甲烷(50ml)中的溶液。反应混合物搅拌过夜，然后真空蒸发。在油状残余物中加入碳酸钾(6.0g)在水(30ml)中的溶液，用二氯甲烷(2×60ml)萃取产物。合并萃取液并用水(40ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇(100∶0至90∶10)洗脱，得到油状产物(1.0g)。
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.50(s，9H);2.55(s，2H);3.70(t，2H);4.05(s，2H);5.80(s，1H);7.10(s，2H);7.65(s，1H).
制备321-(N-苄氧羰基)-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶向1-(N-苄氧羰基)-4-酮哌啶(5.0g)在甲醇(25ml)中的溶液中，加入乙酸铵(16.5g)和氰基硼氢化钠(0.94g)，混合物在室温下搅拌24小时。然后减压除去溶剂，残余物在乙酸乙酯和1M氢氧化钠溶液之间分配。分出乙酸乙酯层，用硫酸镁干燥，减压蒸发，得到黄色油状物。该残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(95∶5∶1)洗脱，得到黄色油状的4-氨基-1-(N-苄氧羰基)哌啶。将该产物(1.5g)在甲苯(20ml)中的溶液用二甲基甲酰胺连氮(1.0g)和对甲苯磺酸(1.0g)处理，混合物加热回流24小时。然后减压除去溶剂，残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(93∶7∶1)洗脱，得到无色油状的标题化合物。
m/e(MH+)287N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.82(m，2H);2.01(m，2H);2.83-3.09(m，2H);4.12(m，2H);4.40(m，1H);5.11(s，2H);7.28-7.45(m，5H);8.65(s，2H).
制备331-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷将1-(N-叔丁氧羰基)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷(得自制备18)(0.72g)在二氯甲烷(30ml)中的溶液在0℃下用氯化氢饱和，再保持此温度1小时。真空除去溶剂，得到胺盐酸盐，将其溶于N，N-二甲基甲酰胺(25ml)中，该溶液在室温下用N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(1.01g)和N，N-二异丙基乙胺(1.7ml)处理)。反应混合物在室温下搅拌18小时，然后真空除去溶剂。残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(97∶7∶1)洗脱，得到无色泡沫状标题化合物(0.79g)。
m/e 323(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.89(m，6H);1.38(s，9H);1.90(m，1H)∶3.61-3.78(m，1H);3.92-4.10(m，1H);4.24-4.80(m，3H);5.19(m，1H);6.98(s，1H);7.06(dd，1H);7.38(s，1H);7.77(s，1H).
制备34-43按照制备33的方法，使用由制备18-32得到的适当中间体，并与N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯偶合，制备下列式(Ⅶ)化合物，其中R4为(S)-异丙基，R7和R8为氢。
制备44-48按照制备33的制备方法，在偶合步骤中使用N-叔丁氧羰基-(S)-异亮氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯，制备下列式(Ⅶ)化合物，其中R4为仲丁基，m为0。
制备491-(N-叔丁氧羰基-(S)-异亮氨酰)-4-酮基哌啶利用与制备33所述相同的方法，但使用4-酮基哌啶盐酸盐水合物(代替3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷盐酸盐)和(S)-异亮氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯，制备标题化合物。m/e 313(MH)+。25D-16℃(c＝0.34%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝0.9(m，6H);1.2(m，1H);1.4(s，9H);1.6(m，1H);1.75(m，1H);2.5(m，4H);3.7(m，2H);4.15(m，2H);4.55(m，1H);5.2(d，2H).
制备50N-((R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酸用S.J.deSolms等人(J.Med.Chem.，34∶2852，1991)所述的方法制备标题化合物。
制备511-异氰基-3-甲基-1-对甲苯磺酰基-丁-1-烯用Van leusen、Schaart和Leusen(Recueil，98(5)∶258，1979)的方法，由对甲苯磺酰甲基异氰化物和异丁醛制备标题化合物。I.R.(液体石蜡)2100cm-1。
m/e 267(MH+NH3)+N.M.R.(CDCl3)δ＝1.15(d，6H);2.5(s，3H);2.84(m，1H);6.88(d，1H);7.4(d，2H);7.85(d，2H).
制备523-氧杂环丁烷氧羰基琥珀酰亚胺将氧杂环丁-3-醇(2.0g)和N，N-二异丙基乙胺(7.76g)溶于二氯甲烷(50ml)中，在氮气氛下，在维持-20℃的条件下，经15分钟将上述溶液滴加到碳酸二(三氯甲基)酯(2.69g)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中。然后将溶液在-20℃下再搅拌15分钟，一次加入N-羟基琥珀酰亚胺(3.45g)。使该溶液经2小时温热至室温，然后用水(50ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(25ml)洗涤。然后将有机层干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到浅棕色油状标题化合物(4.65g)。
N.M.R.(CDCl3)δ＝2.83(s，4H);4.75(m，2H);4.90(m，2H);5.58(m，1H).
实施例11-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷a)1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷在0℃下，用氯化氢使1-(N-叔丁氧羰基)-(S)-缬氨酰)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷(由制备33制得，0.79g在二氯甲烷(50ml)中的溶液饱和，并在此温度下再保持1小时。真空蒸发溶剂，得到无色固体状的胺。将该产物在二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液加到预先配制好的一种活化酯溶液中，该活化酯溶液的配制方法是将(R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酸(得自制备2，1.32g)、1-羟基苯并三唑(0.36g)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g)和N，N-二异丙基乙胺(1.75ml)在二甲基甲酰胺(75ml)中一起搅拌20分钟。再搅拌24小时后，真空除去溶剂，残余物在乙酸乙酯和水之间分配。分出乙酸乙酯层，干燥(MgSO4)，真空除去溶剂，得到无色油状物。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到无色泡沫状标题化合物(1.1g)。
实测值C，66.04;H，8.26;N，9.61.C41H61N5OsSi.1/2 H2O计算值 C，66.39;H，8.36;N，9.44%.
m/e 733(MH)+[α]25D-6°(c＝0.29%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.12(m，6H);0.90(m，15H);1.25-1.29(2 x s，9H);1.96(m，1H);2.32-2.77(m，4H);2.89(m，1H);3.48-3.74(m，2H);3.88-4.06(m，3H);4.18-4.66(m，4H);5.12(m，1H);6.77(t，1H);6.98(s，1H);7.07-7.32(m，10H);7.40-7.82(2 x s，1H);7.76-7.96(2 x s，1H);8.0-8.20(2 x d，1H).
b)1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氮基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷将步骤(a)的产物(1.19g)溶于四氢呋喃中，在室温下用1M四正丁基氟化铵的四氢呋喃溶液处理。48小时后，真空除去溶剂，产物在乙酸乙酯中吸收，用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，用MgSO4干燥，真空蒸发溶剂。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(93∶7∶1)洗脱，然后用乙酸乙酯/己烷重结晶，得到无色固体状产物(0.52g)，m.p.124-126℃。
实测值C，67.99;H，8.01;N，11.06.C35H47N5O5计算值C，68.05;H，7.67;N，11.34%.m/e 618(MH)+[α]25D-3°(c＝0.14%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.80(m，6H);1.21-1.47(m，1H);1.27(s，9H);1.58-1.71(m，1H);1.81-1.98(m，1H);2.44-2.62(m，2H);2.68-2.92(m，3H);3.37-3.61(m，2H);3.85-4.02(m，2H);4.13-4.36(m，2H);4.41-4.56(m，2H);5.18(m，1H);6.43(d，1H);6.98(s，1H);7.05-7.30(m，10H);7.26-7.77(2 x s，1H);7.38-7.82(2 x s，1H);7.88-7.98(2 x d，1H).
实施例2-10按照实施例1所述的一般方法制备下列化合物，但在偶合步骤(a)中使用适当的式(Ⅳ)受护羧酸中间体和适当的式(Ⅷ)胺，然后如步骤(b)所述脱除叔丁基二甲基甲硅烷基保护基。
实施例111-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰]-(S)-3-(咪唑-1-基)吡咯烷采用实施例1的方法，在偶合步骤中使用1-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰)-3-(S)咪唑-1-基)吡咯烷(制备36)，然后如实施例1(b)所述脱除叔丁基二甲基甲硅烷基，得到标题化合物。
m.p.111-112℃.实测值C，61.90;H，6.85;N，9.61.
C37H48F3N5O6计算值C，62.08;H，6.76;N，9.78%.
m/e(MH)+716[α]25D+2°(c＝0.1%，MeOH)[α]25365+14°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.65-0.90(m，6H);1.15-1.35(m，10H);1.60(m，1H);1.85(m，1H);2.05-2.90(m，7H);3.20-4.10(m，6H);4.20(m，1H);4.55(m，1H);4.85(m，1H);6.40(d，1H);6.90-6.95(2 x s，1H);7.10-7.30(m，10H);7.70-7.80(2 x s，1H);7.90-8.0(2 x d，1H).
实施例121-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰]-(R)-3-(咪唑-1-基)吡咯烷采用上述方法，但以1-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰-3-(R)-咪唑-1-基)吡咯烷起始，得到标题产物，m.p.109℃。
实测值C，61.44;H，7.05;N，9.71.C37H48F3N5O62/5 H2O计算值C，61.47;H，6.80;N，9.69%.m/e(MH)+716[α]25D-23°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.70-0.85(m，6H);1.15-1.40(m，10H);1.60(m，1H);1.85(m，1H);2.00-2.90(m，7H);3.25-3.70(m，5H);3.95(m，1H);4.20(m，1H);4.45-4.65(m，1H);4.75-4.95(2 x m，1H);6.40(m，1H);6.90(s，1H);7.05-7.25(m，10H);7.70-7.75(2 x s，1H);7.90-8.05(2 x d，1H).
实施例131-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶a)1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶利用与实施例1步骤(a)所述相同的方法，由1-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰-4-咪唑-1-基哌啶和(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-(R)-2-苄基-6-苯基己酸制备标题化合物。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到无色泡沫状产物(0.71g)。
实测值C，67.32;H，8.44;N，9.22.C43H65N5O5Si.
1/4 H2O 计算值C，67.54;H，8.56;N，9.15%.
m/e 760(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.12(m，6H);0.91(m，15H);1.13-1.30(m，2H);1.26(s，9H);1.47-1.76(m，2H);1.89-2.08(m，4H);2.36-2.97(m，6H);3.50-3.75(m，2H);3.99-4.61(m，4H);6.79(m，1H);6.90(d，1H);7.07-7.29(m，11H);7.68-7.73(2 x s，1H);7.93-7.99(2 x d，1H).
b)1-[N-(R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶用与实施例1步骤b)所述相同的方法，由上述步骤a)的产物制备标题化合物。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水洗脱，然后用乙酸乙酯/己烷重结晶，得到无色固体状产物，m.p.121-123℃(0.48g)。
实测值C，68.38;H，7.96;N，10.59.C37H51N5O5.1/4 H2O计算值C，68.30;H，7.92;N，10.77%.
m/e 646(MH)+[α]25-10°(c＝0.1，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.77(m，6H);1.19-1.37(m，1H);1.28(s，9H);1.48-1.72(m，3H);1.82-2.04(m，3H);2.42-2.94(m，7H);3.38-3.60(m，2H)0;3.96-4.15(m，1H);4.28(m，1H);4.37-4.58(m，3H);6.43(d，1H);6.88(s，1H);7.04-7.29(m，11H);7.65-7.69(2 x s，1H);7.84-7.88(2 x d，1H).
实施例14-37按实施例13所述的方法制备下列化合物，但在偶合步骤(a)使用适当的式(Ⅳ)受护羧酸中间体和适当的式(Ⅷ)缬氨酸或异亮氨酸衍生物，随后如步骤(b)所述脱除叔丁基二甲基甲硅烷基保护基。
实施例311-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶用催化氢化法从1-(N-苄氧羰基)-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶(制备32)上脱除苄氧羰基保护基，按实施例1步骤(a)所述方法使所得胺产物与N-((R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酸偶合，生成1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶，m/e 761(MH+)。
按实施例1步骤(b)的方法，用四正丁基氟化铵处理上述产物，生成标题产物。
实测值C，64.90;H，7.93;N，12.48.C36H50N6O5.H2O 计算值C，65.06;H，7.83;N，12.65%.m/e 647(MH)+[α]25D-9°(c＝0.12 MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.70-0.92(m，6H);1.15-1.41(m，10H);1.46-1.76(m，3H);1.81-2.16(m，3H);2.53-2.96(m，7H);3.38-3.64(m，2H);3.95-4.15(m，1H);4.27-4.61(m，4H);6.36-6.44(m，1H);7.01-7.12(m，10H);7.78-7.91(m，1H);8.54(s，1H);8.60(s，1H).
实施例321-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)-1，2，5，6-四氢吡啶酒石酸盐
a)按实施例1(a)的方法，使(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)-6-苯基己酸与由1-(N-叔丁氧羰基)-4-咪唑-2-基-(1，2，5，6-四氢吡啶)脱保护而制得的胺反应，生成1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)-1，2，5，6-四氢吡啶。
实测值C，62.19;H，7.39;N，8.38.C33H62F3N5O6Si 1/10 CH2Cl2计算值C，62.27;H，7.37;N，8.23%.
m/e 842(M)+[α]25D-10°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝0.10(m，6H);0.80(d，6H);0.90(s，9H);1.35(s，9H);1.20-1.95(m，5H);2.35-2.55(m，3H);2.70(m，2H);3.41-4.10(m，6H);4.55(m，1H);4.65(d，1H);5.60-5.80(2 x s，1H);6.25(d，1H);6.90-7.30(m，11H);7.65(s，1H).
b)按实施例1(b)的方法通过与四正丁基氟化铵反应而脱保护，生成游离碱形式的标题产物。将该产物溶于无水乙醇中，用1-酒石酸(0.14g)在无水乙醇中的溶液处理。加入乙醚后生成沉淀物，将沉淀物过滤并干燥，得到无色固体状的1-酒石酸盐(0.61g)，m.p.92-152℃.
实测值C，57.40;H，6.64;N，7.51.C38H38F3N5O6.CH16O61/3 H2O 计算值C，57.11;H，6.23;N，7.93%.
m/e(MH)+728[α]25D+6.7°(c＝0.1%，MeOH)[α]25365-6.7°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.75(m，6H);1.25(s，9H);0.95-1.40(m，1H);1.50(m，1H);1.90(m，1H);2.35-2.95(m，7H);3.0-3.85(m，4H);4.0(m，1H);4.10(m，1H);4.25(s，2H);4.40-4.60(m，2H);6.0(m，1H);6.40(d，1H);7.0(s，1H);7.10-7.30(m，9H);7.50(s，1H);7.95(m，2H).
实施例331-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-(5-异丙基咪唑-1-基)哌啶a)使1-(N-叔丁氧羰基-(S)-异亮氨酰)-4-酮基哌啶(制备49)脱保护，然后与(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酸(制备10)反应，生成1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-酮基哌啶。
实测值C，62.50;H，8.00;N，5.20.C42H62F33O7Si 计算值C，62.60;H，7.80;N，5.20%.m/e 806.5(MH)+.[α]25D-5.30(c＝0.1%，MeOH).
b)在30磅/英寸2(2.0巴)下，用钯/碳(5%，100mg)作催化剂，使上述产物(2.0g)和氨水(比重0.88)在乙醇(25ml)中氢化4小时。滤掉催化剂并蒸发溶剂，得到2.0g无色泡沫状物，用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(90∶10∶1)洗脱，将适当的级分浓缩后，得到无色玻璃状的1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-氨基哌啶(1.53g)。
c)将上述步骤b)的产物(404mg)和1-异氰基-3-甲基-1-对甲苯磺酰基-丁-1-烯(得自制备51，150mg)与二异丙基乙胺(100mg)一起在甲醇(15ml)中搅拌16小时。于40℃下除去溶剂，残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(98∶2∶0.4)洗脱，得到无色玻璃状的1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-(5-异丙基咪唑-1-基)哌啶(380mg)。m/e 900(MH+)。
d)按实施例1(b)的方法，通过用四正丁基氟化铵处理使上述步骤c)的产物脱保护，生成标题产物。
实测值C，63.5;H，7.70;N，8.70.C42H58F3N5O6.1/2H2O计算值C，63.5;H，7.48;N，8.81%.
m/e 785.9(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.8(m，6H);1.05(m，1H);1.2(m，6H);1.3(s，9H);1.3-2.0(m，7H);2.5-3.0(m，6.5H);3.2(bt，0.5H);3.3(m，1H);3.58(m，1H);4.13(m，3H);4.4-4.65(m，4H);6.43(m，1H);6.63(s，1H);7.1-7.3(m，9H);7.47，7.6(s，s，1H);7.95(bt，1H).
实施例341-[N-((S)-4-羟基-(S)-5-(氧杂环丁烷-3-基氧羰氨基)-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶将实施例16的产物(4.0g)溶于二氯甲烷(40ml)中，并在冰浴中冷却。经5分钟滴加三氟乙酸(10ml)，溶液在0℃下搅拌1.5小时。真空蒸发溶剂，残余物用乙酸乙酯(250ml)吸收，用1M氢氧化钠(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，过滤，真空蒸发溶剂。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到白色固体状的1-[N-(S)-5-氨基-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶(2.98g)。m/e 630(MH)+。
N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.78(m，6H);1.34-1.75(m，4H);1.81-2.07(m，3H);2.37-2.93(m，8H);3.05-3.29(m，3H);4.05-4.56(m，5H);6.88(s，1H);7.10-7.27(m，10H);7.67(d，1H);7.95(m，1H);
b)将步骤a)的产物(0.818g)溶于二氯甲烷(30ml)中。加入3-氧杂环丁烷基羰氧基琥珀酰亚胺(0.344g)，溶液在室温下搅拌1小时。然后将溶液用0.5M氢氧化钠(15ml)和盐水(15ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发。所得固体用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体状的标题化合物，m.p.201-203℃。
实测值C，60.32;H，6.22;N，9.15;C37H46F3N5O71/2 H2O 计算值C，60.15;H，6.41;N，9.48%.
m/e 730(MH)+[α]25D+3°(c＝0.1%，MeOH)，[α]25365+32°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.77(m，6H);1.22-2.05(m，7H);2.50-2.93(m，8H);3.42-3.60(m，2H);4.08(d，1H);4.22-4.73(m，7H);5.12(m，1H);6.89(s，1H);7.11-7.28(m，1H);7.67(d，1H);7.86(d，1H).
实施例351-[N-((S)-4-羟基-(S)-5-(氧杂环丁烷-3-基氧羰氨基)-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶在0-5℃下，用无水三氟乙酸(4ml)处理实施例18产物(0.45g)在二氯甲烷(20ml)中的溶液5小时。然后将反应液真空浓缩，残余胶状物与甲苯(×3)共沸并干燥。然后将粗制胺产物与二异丙基乙胺(0.82ml)在二氯甲烷(25ml)中的溶液冷却到5℃，滴加3-氧杂环丁烷氧羰氧基琥珀酰亚胺(0.22g)在二氯甲烷(5ml)中的溶液。使反应液温热至室温，保持17小时，然后用水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(95∶4∶1)洗脱，得到无色泡沫状产物(0.26g)，m.p.157-160℃.
实测值C，66.45;H，7.49;N，10.22.C38H49N5O63/4H2O计算值C，66.60;H，7.43;N，10.22%.25D+32°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.75(m，6H);1.25-2.95(m，12H);3.05-3.65(m，4H);3.95-4.75(m，10H);5.05(m，1H);6.10(m，1H);6.30(d，1H);6.80-6.85(2 x s，1H);6.95-7.35(m，11H);7.55-7.65(2 x s，1H);7.95(d，1H).
实施例361-[N-((S)-4-羟基-(S)-5-(异丙氧羰氨基)-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶酒石酸盐按实施例35所述的方法制备标题化合物，但使用氯甲酸异丙酯与胺中间体反应。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(97∶2∶1至95∶4∶1)洗脱，得到无色粉末状产物，用乙酸乙酯-己烷重结晶。将该游离碱溶解在乙醇中，用1-酒石酸处理。加入乙醚，得到无色粉末状酒石酸盐，m.p.156-157℃。
实测值C，61.60;H，6.87;N，8.38.C38H51N5O5C4H6O61/2 H2Oreq计算值C，61.75;H，7.16;N，8.57%.
m/e 658(MH)+25D+26°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.75(m，6H);1.0(m，6H);1.25-3.65(m，14H);3.95-4.70(m，10H);6.10(m，1H);6.30(d，1H);6.65(d，1H);6.85-6.90(2 x s，1H);7.05-7.35(m，1H);7.65-7.75(2 x s，1H);7.90(d，1H).
实施例371-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)-4-((S)-缬氨酰氧基)己酰基)-(S)-(缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶酒石酸盐a)将N-苄氧羰基-L-缬氨酸(1.03g)和二环己基碳二亚胺(0.51g)溶解在二氯甲烷(25ml)中，并将该混合物搅拌3小时。滤除沉淀出的二环己基脲，蒸发滤液得到白色泡沫状物。将此白色泡沫状物与实施例16的产物合并在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中，加入4-二甲氨基吡啶(0.025g)。室温下搅拌5天后，使混合物在乙酸乙酯和水之间分配。干燥有机萃取液(MgSO4)并蒸发溶剂，然后用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯∶甲醇(0-10%)洗脱，得到白色泡沫状的1-[N-(S)-4-(N-苄氧羰基-(S)-缬氨酰氧基)-(S)-5-叔丁氧羰氨基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶。
实测值C，62.63;H，6.73;N，8.37.C51H65F3N6O9.H2O req计算值C，62.43;H，6.88;N，8.56%.
m/e 963(MH)+b)将上述步骤a)的产物(0.95g)溶解于无水乙醇(50ml)中，将该溶液用10%钯/碳(0.1g)处理，并在60磅/英寸2(4.1巴)和室温下氢化4小时。滤除催化剂后，将滤液蒸发至干。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氧水(97∶3∶0.5)洗脱，得到白色泡沫状产物。将此泡沫状物溶解在乙酸乙酯(6ml)中，加入酒石酸(0.089g)在10%甲醇/乙酸乙酯(10ml)中的溶液。蒸发溶剂并用乙醚研制，得到白色玻璃状产物(0.48g)。
m.p.122℃.实测值C，56.74;H，6.78;N，8.56.C43H59F3N6O7∶C4H6O6∶H2O req计算值 C，56.61;H，6.77;N，8.43%.
N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.8-0.95(m，12H);1.2(s，11H);1.35-1.77(m，2H);1.8-2.15(m，4H);2.4-3.2(m，8H);3.51(m，1H);3.8(m，1H);4.1(m，1H);4.3(m，1H);4.4-4.65(m，2H);4.81(m，1H);6.83(s，1H);7.0-7.32(m，12H);7.66(d，1H);7.73-8.0(m，1H).
权利要求
1.一种具有下式的化合物及其可药用盐和生物前体
其中R1为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基、杂环基或CONR9R10；R2为C1-C6烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基或杂环基(C1-C4)烷基；R3为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基、芳基(C2-C4)烯基、杂环基(C1-C4)烷基或杂环基(C2-C4)烯基；R4为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基或杂环基；R5、R6、R7和R8都各自独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基；或者，R5和R6，或R7和R8，可连在一起形成三至八员碳环；X为含有若干环碳原子和一个环氮原子的单环或双环四至十员杂环基，该基团通过环氮原子与相连的羰基连接；该基团可以是饱和的或部分未饱和的，而且，除-(CR7R8)m-Het取代基外，该基团可以被至多4个其它取代基取代，取代基都独立地选自F、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、OR11或NR9R10；Het为咪唑基或三唑基，它们都可任选地被C1-C6烷基、C3-C8环烷基、NR9R10或CONR9R10取代；R9或R10都独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基，或者，R9和R10可连在一起而与它们所连的氮原子一起形成四至八员含氮杂环基；R11为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基；n和m各自独立地为0、1或2；上述定义中所包括的任何烷基或环烷基都可任选地被氟全取代或部分取代。
2.如权利要求1所述的化合物，该化合物具有下列立体化学构型
其中R1至R8、n、m、X为Het如前面权利要求1中所限定。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中R1为叔丁基、异丙基或氧杂环丁烷基，n为0。
4.如权利要求3所述的化合物，其中R2为苄基。
5.如权利要求3或4所述的化合物，其中R4为异丙基或仲丁基。
6.如权利要求3-5中任一项所述的化合物，其中R3为在苯环上被甲基、氟、氯、碘、CF3或OCF3任选取代的苄基，或者为R3为3-苯基丙基或3-苯基丙-2-烯基。
7.如权利要求3-6中任一项所述的化合物，其中R5、R6、R7和R8都为H。
8.如权利要求3-7中任一项所述的化合物，其中m为0或1。
9.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯-1-基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(R)-2-(4-氯苄基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶。
10.一种制备如权利要求1所述的式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括从式(Ⅸ)化合物上脱除保护基，分离出式(Ⅰ)化合物，并任选地形成其可药用盐
其中X1为一个可选择性脱除的羟基保护基，R1至R8、X和Het如权利要求1所限定。
11.一种药物组合物，该组合物包含如权利要求1-9中任一项所述的式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物或其可药用盐或生物前体，以及一种可药用的稀释剂或载体。
12.如权利要求1-9中任一项所述的式(Ⅰ)或式(Ⅰa)化合物或其可药用盐或生物前体在药物中的应用，尤其是在用于治疗或预防人还原病毒感染的药物中的应用。
13.如权利要求1-9中任一项所述的式(Ⅰ)或式(Ⅰa)化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防人还原病毒感染的药物中的应用。
全文摘要
下式化合物及其可药用盐和生物前体是还原病毒蛋白酶的抑制剂，可用于治疗和预防人的还原病毒感染。上式中，各取代基和字母的含义如说明书中所述。
文档编号C07D401/00GK1077716SQ9310320
公开日1993年10月27日 申请日期1993年3月23日 优先权日1992年3月25日
发明者C·W·格林格拉斯, S·D·A·施特里特 申请人:美国辉瑞有限公司
技术领域：
本发明涉及某些含杂环基的肽衍生物，这些衍生物可用于治疗或预防人的还原病毒感染。
人免疫缺陷病毒(HIV)是一种还原病毒，它是许多种临床疾病的致病因子，这些疾病中最严重者俗称爱滋病(获得性免疫缺陷综合症)和爱滋病相关综合症。HIV感染的特征是免疫系统的进行性衰竭和中枢神经系统机能降碍。严重免疫缺陷患者易患范围广泛的机会性感染(例如卡氏肺囊虫、人细胞肥大病毒或念珠菌的感染)和癌症(如卡波济肉瘤)。HIV感染后细胞(特别是CD+4淋巴细胞)的损失在免疫功能的进行性损伤中是一个重要因素。HIV对单核细胞/巨噬细胞谱系统细胞的感染也与所观察到的病理现象有关。因此，HIV对CD+4细胞的成功感染是发病过程中的关键步骤。
HIV是一种还原病毒，它以RNA编码其遗传信息，病毒进入宿主细胞后，RNA则转化为DNA。还原病毒复制循环中的一个基本步骤是将初始多肽前体加工成成熟的结构蛋白和复制蛋白。这一加工过程是由病毒编码的蛋白酶进行的，如果缺少这一酶活性，则病毒复制受阻。
我们发现，某些连有杂环基的肽衍生物，无论是在无细胞测定还是在感染细胞中，都是还原病毒蛋白酶的强抑制剂，此外，这些衍生物在组织培养测定中显示出抗病毒活性。这一活性使这些化合物可用于治疗和预防还原病毒感染，特别是由HIV引起的感染。
因此，本发明提供具有下式的化合物及其可药用盐和生物前体
其中R1为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基、杂环基或CONR9R10;
R2为C1-C6烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基或杂环基(C1-C4)烷基;
R3为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基、芳基(C2-C4)烯基、杂环基(C1-C4)烷基或杂环基(C2-C4)烷基;
R4为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基或杂环基;
R5、R6、R7和R8都各自独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基;或者，R5和R6，或R7和R8，可连在一起形成三至八员碳环;
X为含有若干环碳原子和一个环氮原子的单环或双环四至十员杂环基，该基团通过环氮原子与相连的羰基连接;该基团可以是饱和的或部分未饱和的，而且，除-(CR7R8)m-Het取代基外，该基团可以被至多4个其它取代基取代，取代基都独立地选自F、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、OR11或NR9R10;
Het为咪唑基或三唑基，它们都可任选地被C1-C6烷基、C3-C8环烷基、NR9R10或CONR9R10取代;
R9或R10都独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基，或者，R9和R10可连在一起而与它们所连的氮原子一起形成四至八员含氮杂环基;
R11为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基;
n和m各自独立地为0、1或2;
上述定义中所包括的任何烷基或环烷基都可任选地被氟全取代或部分取代。
在R1、R2、R3和R4的上述定义中，杂环基是指四至六员杂环基，其中所含的杂原子是至多4个氮原子，或1个氧原子或硫原子加上任选的1个或2个氮原子。该环可以是芳香性的，也可以是全部或部分饱和的，可以任选地被苯稠合，或被下列基团取代C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C5烷酰基、C1-C4烷氧基、卤素、羟基、氧或芳基。优选的杂环基为吡啶基、嘧啶基、噻吩基、异喹啉基和四唑基。
在R1、R2、R3和R4的上述定义中，芳基指被1-3个取代基任选取代的苯基，取代基各自独立地选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C4烷氧基、C2-C5烷酰基、羟基、卤素、被氟全部或部分取代的C1-C4烷基、被氟全部或部分取代的C1-C4烷氧基、苯基、苯氧基、苄基、苯甲酰基、苯基SO2-、吡啶基、四唑基、苯基四唑基、NR9R10或CONR9R10;其中R9和R10如前面所限定。卤素指氟、氯、溴或碘。
咪唑基或三唑基(即Het)既可通过环碳原子连接，也可通过环氮原子连接，既可以是未取代的，也可以被单取代、二取代或三取代。三唑基既包括1，2，3-三唑基也包括1，2，4-三唑基。
含有3个或更多个碳原子的烷基和烷氧基可以是支链或直链的。上述定义中所包括的任何烷基、烷氧基或环烷基，都可任选地被氟全部或部分取代。
上述定义中的术语“生物前体”是指式(Ⅰ)化合物的可药用的、可生物降解的衍生物，该衍生物在给予动物或人时，在体内转化成式(Ⅰ)化合物，其实例包括在式(Ⅰ)化合物的游离羟基和(例如)氨基酸(如L-缬氨酸)间形成的酯衍生物。
应该认识到，式(Ⅰ)化合物有许多不对称碳原子，本发明包括所有可能的立体异构体，无论是经过分离的还是未经分离的。
本发明的一个特定而优选的方面提供具有以下立体化学构型的化合物
在上式中，用粗键表示该基团位于分子平面之上，用虚键表示该基团位于分子平面之下。
在R1的定义中，芳基优选为苯基，杂环基优选为氧杂环丁烷-3-基或1，1-二氧硫杂环丁烷-3-基。R1优选为叔丁基、异丙基、氧杂环丁烷-3-基或1，1-二氧硫杂环丁烷-3-基，(CR5R6)n不存在;或者，R1为苯基，(CR5R6)为CH2;或者，R1为H2NCO-、CH3NHCO-或(CH3)2NCO-，(CR5R6)n为CH2或CH(CH3)。特别优选的是其中R1为叔丁基、异丙基或氧杂环丁烷-3-基，n为0的化合物;最优选的是其中R1(CR5R6)n-为叔丁基的化合物。
在R2的定义中，芳基优选为苯基，杂环基为例如吡啶基、嘧啶基或噻吩基。R2优选为芳基(C1-C4)烷基;特别优选苄基。
在R4的定义中，芳基优选为苯基，杂环基优选为吡啶基、嘧啶基或噻吩基。R4优选为C1-C6烷基;特别优选的是异丙基和仲丁基(缬氨酸或异亮氨酸衍生物)。
杂环基X优选为四至六员饱和或单不饱和基团，最优选的是氮杂环丁烷、吡咯烷、四氢吡啶或哌啶基，特别优选的是哌啶。
R7和R8优选为H，m优选为0或1。
在R3的定义中，芳基是如前面在术语“芳基”中所限定的未取代或取代的苯基，杂环基为例如吡啶基、嘧啶基、异喹啉基或噻吩基。R3优选为芳基(C1-C4)烷基或芳基(C2-C4)烯基，最优选的是在苯环上被氟、氯、碘、甲基、三氟甲基或三氟甲氧基任选取代的苄基，或者R3为3-苯基丙-2-烯基或3-苯基丙基。
具体的优选化合物包括1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;
1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯-1-基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(R)-2-(4-氯苄基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;
1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;
本发明的第二方面提供式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或生物前体作为药物的应用，尤其是作为用于治疗或预防人的还原病毒感染(特别是HIV感染)的药物的应用。本发明还包括式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或生物前体在制备一种药物中的应用，这种药物用于预防或治疗还原病毒感染。
本发明还包括一种药物组合物，该组合物包含一种式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或生物前体，以及一种可药用的稀释剂或载体。
通式(Ⅰ)化合物的抗病毒活性是利用体外测定体系来确定的。例如，式(Ⅰ)化合物能保护人T细胞系H9完全不受HIV感染的进行性作用7天。未经处理的病毒感染细胞则显示出典型的细胞病效应，如合胞体的形成和细胞死亡。此外，用式(Ⅰ)化合物处理过的病毒感染细胞所产生的病毒颗粒是非感染性的。
可以用式(Ⅰ)化合物治疗或预防的感染的例子包括由人或动物还原病毒尤其是HIV-1引起的感染。所以，可以治疗或预防的临床疾病包括爱滋病、爱滋病相关综合症和HIV相关性痴呆。这些化合物还可用来阻止无症状感染个体疾病的进行。
式(Ⅰ)化合物可以利用偶合和保护技术来制备，这些技术是肽化学领域的技术人员所熟悉的。
该方法可以用以下所示的制备式(Ⅰa)化合物的反应路线来举例说明反应式A所概括的步骤由受护内酯(Ⅱ)起始。利用(例如)正丁基锂或六甲基二硅烷基胺化锂使该内酯烷基化，然后加入式R3Br化合物，分离出所要的异构体，得到产物(Ⅲ)。然后用稀碱处理使内酯环打开，生成相应的羟基酸，随后对羟基进行保护，例如在N，N-二甲基甲酰胺中与叔丁基二甲基甲硅烷基氯反应制成叔丁基二甲基甲硅烷基衍生物，随后水解受护酯生成中间体(Ⅳ)。
反应式B说明了中间体(Ⅳ)与另一水解产物(Ⅷ)偶合生成式(Ⅰa)化合物。在该过程中，脱除了中间体(Ⅴ)上的保护基(在保护基是叔丁氧羰基时，通过用HCl处理脱除)，利用酰胺偶合试剂使所得化合物(Ⅵ)与N-受护氨基酸Boc-NHCH(R4)CO2H反应，生成中间体(Ⅶ)。然后脱除(Ⅶ)上的N-保护基，使胺产物(Ⅷ)与中间体(Ⅳ)偶合生成中间体(Ⅸ)。然后从(Ⅸ)上脱除羟基保护基X1，生成式(Ⅰa)终产物。另一种方法，可以由中间体(Ⅹ)与中间体(Ⅵ)偶合生成中间体(Ⅸ)。中间体(Ⅹ)则可由中间体(Ⅳ)来制备，即，使中间体(Ⅳ)与羧基保护氨基酸H2NCH(R4)CO2R反应，随后进行碱水解。
保护基，X′优选叔丁基二甲基甲硅烷基R1-(CR5R6)n优选叔丁基或苄基。
酰胺偶合剂如1-(3-二甲基丙基)-3-乙基碳二亚胺保护基P，优选叔丁氧羰基或苄氧羰基;
X′，优选叔丁基二甲基甲硅烷基R，优选甲基或乙基反应式C说明了另一个可替代的方法，通过用酸(如三氟乙酸)处理脱除中间体(Ⅺ)上的叔丁氧羰基，随后与式(Ⅻ)的碳酸酯衍生物反应生成式(ⅩⅢ)产物，其中R1(CR5R6)n基团不为叔丁基。例如，式(Ⅺ)产物与3-氧杂环丁烷氧羰氧基琥珀酰亚胺反应生成产物(ⅩⅢ)，其中R1为3-氧杂环丁烷基，n为0。
X′或者为H，或者为一个保护基，如叔丁基二甲基甲硅烷基。
Y为一个易发生亲核取代的基团，优选琥珀酰亚胺氧基。
上述步骤所需的式(Ⅴ)原料在某些情况下是文献化合物，或者可以用常规合成法由易得的原料来制备。例如，使1-(N-叔丁氧羰基)-3-羟基氮杂环丁烷与甲磺酰氯反应，然后在碱存在下与式Het-H化合物反应，生成所需的式(Ⅴ)化合物，其中X为氯杂环丁烷环。或者，在乙酸铵存在下使1-(N-苄氧羰基)-4-酮哌啶与氰基硼氢化钠反应，使前者转化为4-氨基衍生物，随后再与连氮二甲基甲酰胺反应生成4-(1，2，4-三唑-4-基)衍生物。
1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮基哌啶与由1-(二乙氧基甲基)咪唑与正丁基锂反应生成的阴离子反应，然后在碱存在下用甲磺酰氯处理所生成的产物，生成N-受护-4-咪唑-2-基(1，2，5，6-四氢吡啶)中间体。催化氢化后生成相应的N-受护-4-(咪唑-2-基)哌啶。上述羰基化合物在亚硫酰氯存在下直接与杂环化合物如咪唑反应，生成X为四氢吡啶基的式(Ⅴ)化合物，再次还原后生成哌啶生物。
反应式B中m不等于0的式(Ⅴ)中间体可以利用标准的转化方法由适当的前体来制备，并利用(例如)环氧基的亲核开环作用引入Het基团。例如，1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮基哌啶在碱存在下与三甲基碘化铳反应，生成4-螺-2′-环氧乙烷。该产物与咪唑反应，而后消除4-羟基，生成1-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)甲基-1，2，5，6-四氢吡啶，还原后生成相应的哌啶衍生物。
式(Ⅶ)化合物的合成中使用的天然存在的氨基酸的N-叔丁氧基(BOC)衍生物，在市场上可以买到，其羟基琥珀酰亚胺酯也可以买到。由非天然氨基酸衍生的相应中间体可以用标准方法制备(参见例如M.J.O′Donnell等，J.Amer.Chem.Soc.，1112353，1989)。式(Ⅱ)化合物可以由相应的叔丁氧羰基保护的氨基醛(参见D.H.Rich等，J.Org.Chem.，433624，1978和Y.Hamada等，Chem.Pharm.Bull.，30(5)1921，1982)与丙炔酸乙酯(参见A.H.Fray等，J.Org.Chem.，514828，1986)反应来制备，随后还原成5-叔丁氧羰氨基-4-羟基-6-苯基己酸酯。然后在甲苯中回流使其环化，生成式(Ⅱ)内酯，为非对映异构体的混合物，这些非对映异构体可用标准方法分离。
在上述合成路线和本文所提出的具体实施例中，需要一些羟基和氨基保护基及羧基活化基。本领域技术人员将会了解，所述的偶合和保护方法可以用任何标准肽合成法来进行，因此，这些方法包括在本发明范围内。特定保护基的选择在很大程度上取决于必要试剂的可得性、它对所保护化合物溶解度的影响、是否容易脱除、以及是否存在由于使用该保护基而可能受到影响的其他基团。例如，有必要在上述过程中对特定氨基进行保护和脱保护，以使再生出的氨基能发生进一步的反应。对指定的氨基而言，保护基的选择将取决于所述氨基在整个反应式中的作用。可以使用活泼程度不同的各种氨基保护基。这些基团是本领域内已知的，请注意以下综述Bodansky等人《肽合成》第二版(John Wiley & Sons，N.Y.，1976);Greene《有机合成中的保护基》(John Wiley & Sons，N.Y.，1981);McOmie《有机化学中的保护基》(Plenum Press，N.Y.，1973);以及Sheppard在E.Haslam编《综合有机化学有机化合物的合成和反应》中的文章(第23.6节第321-339页，Pergamon Press，N.Y.，1979)。
有代表性的氨基保护基包括(但不限于)芳氧羰基，如苄氧羰基;取代或来取代的芳烷基，如苄基，三苯甲基，二苯甲基，4-硝基苄基;苯亚甲基;芳硫基，如苯硫基、硝基苯硫基和三氯苯硫基;磷酰基衍生物，如二甲基磷酰基和0，0-二苄基磷酰基;三烷基甲硅烷基衍生物，如三甲基甲硅烷基，以及如美国专利4，322，341所述的其他保护基。优选用于上述反应路线的氨基保护基为叔丁氧羰基。在给定氨基上取代上述基团的方法是公知的。一般来说，这些方法包括在反应惰性溶剂如水、二氯甲烷或四氢呋喃中，用相应的羰基氯或酸酐使适当的氨基化合物酰化。用水作溶剂时，要有碱(酸受体)存在，如氢氧化钠或氢氧化钾;使用有机溶剂时，则要有叔胺存在，如三乙胺或吡啶。使用水性溶剂体系时，反应的pH一般保持在约pH8-10，优选pH9。
用本领域技术人员认为适于所采用的特定基团的方法，将受护氨基转化为非受护氨基。例如，用饱和有氯化氢气体的二氯甲烷进行处理，很容易脱除叔丁氧羰基。
各种不同的羟基保护基也是已知的，并描述于前面已引用过的文献中。优选的羟基保护基为叔丁基二甲基甲硅烷基。该基团可以如前所述引入，在室温下用四正丁基氟化铵的四氢呋喃溶液处理时易于脱除。
羧基的活化作为加快给定酰化反应的手段也是本领域技术人员已知的方法。本文所述反应路线中特别有用的是使用酸酐和活化酯，特别是那些由N-羟基苯二甲酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或1-羟基苯并三唑衍生的酯，所有这些化合物都在肽合成中使用。
使用脱水偶合剂来形成活化酯。这类偶合剂中有代表性的有1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)碳二亚胺、N，N′-二环己基碳二亚胺、N，N′-羰基二咪唑、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、乙氧基乙炔、二苯基乙烯酮和N-乙基-5-苯基异噁唑啉-3′-磺酸酯。使用这些偶合剂的反应条件在文献中有充分的描述。一般来说，这些条件包括采用反应惰性溶剂和室温至100℃范围的温度。优选前面提到的碳二亚胺试剂，因为这些试剂允许采用室温反应温度，并能使所要的酯达到满意的收率。
偶合反应完成和生成终产物后，可以用以上讨论的适当技术脱除各种保护基，并可用常规方法如重结晶法或柱色谱法分离纯化式(Ⅰ)化合物。
上述反应路线可以修改，使其通过适当选择原料，对R1至R8、X和Het所要求保护的任何变式都适于采用。
于是，本发明的另一方面包括一种制备式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括脱除式(Ⅸ)化合物的保护基，分离出式(Ⅰ)化合物，并任选地形成其可药用盐。
其中X1是一个可选择性脱除的羟基保护基。
优选的X1保护基为叔丁基二甲基甲硅烷基，该保护基通过在有机溶剂(优选四氢呋喃)中用正四丁基氟化铵处理来脱除。
式(Ⅷ)、(Ⅸ)、(Ⅹ)的新中间体也构成本发明的一部分。
式(Ⅰ)化合物的可药用盐的实例有酸加成盐，如硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐和葡萄糖酸盐。
在对患有还原病毒(尤其是HIV)感染的患者进行治疗时，化合物(Ⅰ)可以以任何合适的途径施用，例如口服、肠胃外(例如皮下、静脉内、肌内或皮内)、直肠、经鼻、局部(包括颊部和舌下)或阴道途径。可以按照制药业中公知的常规技术配制出制剂，这些制剂将含有本发明的抗病毒剂和一种或更多种可药用的载体，以及任选的其他治疗剂。口服剂型具体包括糖浆剂、片剂和胶囊剂，这些剂型中除含有惰性载体外还可含有调味剂。片剂可以用常规压片或模塑技术，通过压制适当成分(如抗病毒剂及粘合剂、稀释剂、润滑剂和表面活性剂)的粉末来制备。直肠制剂将为栓剂形式，阴道制剂将为(例如)填塞剂、霜剂或泡沫剂形式。肠胃外制剂将为无菌形式，例如小瓶注射剂，其中含有为使制剂与血液等渗而加入的水性或非水性稀释剂、缓冲剂和抗氧化剂。一般来说，式(Ⅰ)抗还原病毒剂的适当剂量将为1-50mg/kg/天，优选1-25mg/kg/天，每天至多分六个分次剂量给药。当然，根据患者的年龄、体重、疾病严重程度和反应，有些情况下可能需要更高或更低的剂量，而适当的治疗方案将由临床医生来确定。
式(Ⅰ)化合物可以与其它药物配伍使用，其中有些药物可能会增强式(Ⅰ)化合物的活性。这类药物包括如下药物(a)反转录酶抑制剂，如AZT、ddI、ddC、foscarnet、TIBO化合物、dipyridodiazepinones或6-取代无环嘧啶(HEPT)衍生物;
(b)gp120-CD4阻断剂，如硫酸葡聚糖和可溶性CD4，包括它与毒性药剂如假单胞菌毒素的组合物;
(c)tat拮抗剂，如D-青霉胺;
(d)其他还原病毒蛋白酶抑制剂，如Ro 31-8959;
(e)生物反应调节剂，包括干扰素、白细胞介素或集落刺激因子(如GM-CSF)。
用下列方法评估本发明化合物的抗病毒活性将受试化合物溶解于50μl DMSO中，并在RPMI 1640(pH为7.2的一种复合盐溶液)中稀释至1mg/ml。以0.001、0.01、0.1、1和10μg/ml的浓度，在人T细胞系(H9)中进行抗HIV1(ⅢB株)测试。与此同时开始进行来处理的对照感染。
感染七天后，对组织培养上清液进行滴定以检查C8166(人T细胞系)上是否存在感染性病毒。于第3、5和7天检查培养物中是否出现合胞体。未用药物处理的对照感染显示出典型的病毒性细胞致病作用，包括合胞体的形成和细胞的死亡。所引用的IC100是以对培养物提供完全保护的最低测试浓度。采用这一测试方法，化合物的IC100值在0.1-10.0μg/ml的范围。
现在将提出下列实验实施例以更具体地说明某些原料和式(Ⅰ)化合物的制备。使用Merck Kieselgel 60F254硅胶板以薄层色谱法对化合物的纯度进行常规监测。1H核磁共振谱用Nicolet QE-300型或Bruker AC-300型光谱仪记录，在所有情况下都与所推测的结构一致。化学位移用四甲基硅烷作内标以低场ppm表示，主要光谱峰用常规缩写来表示s，单峰;d，双峰;t，三重峰;m，多重峰;b，宽峰。除非另外指明，旋光度在25℃下以0.1%的浓度在甲醇中测定。所有温度都为摄氏度。
原料和中间体的制备制备1(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯a)(4S，5S)和(4R，5S)-5-叔丁氧羰氨基-4-羟基-6-苯基己-2-炔酸乙酯于-25℃下，将二异丙胺(6.4ml)在无水四氢呋喃(25ml)中的溶液在氮气下搅拌，经5分钟加入1.6M正丁基锂的己烷溶液(24.4ml)，其间保持温度低于-20℃。在-20℃下再过15分钟后，将溶液冷却至-70℃，经10分钟滴加丙炔酸乙酯(3.8g)，其间保护温度低于-65℃。在-70℃下将所得的黄色悬浮液再搅拌20分钟，然后经10分钟滴加N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨醛(6.5g，见J.R.Luly等，J.Org.Chem.，521487，1987)在无水四氢呋喃(15ml)中的溶液进行处理，其间仍保持温度低于-65℃。将澄清的黄色溶液于-70℃下搅拌2小时，然后用乙酸(4ml)处理。移走冷却浴，使混合物温热至-30℃，在-30℃时于剧热搅拌下加入水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)。分离有机层，然后依次用1M盐酸(50ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和饱和盐水(50ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发溶剂后得到油状粗产物。该油状物用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-己烷(1∶4)作洗脱剂。蒸发含产物级分得到一种油状物，经放置过夜而固化。用乙醚-己烷重结晶得到标题化合物，为两种非对映体约2∶1的混合物(4S，5S∶4R，5S)(4.3g)。
m.p.98-99°。实测值C，65.62;H，7.42;N，4.33.C19H25NO5计算值 C，65.70;H，7.20;N，4.03%.
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.30-1.39(m，3H);1.43(s，9H);2.90-3.11(m，2H);3.37-3.38 and 4.16-4.19(2x brm，1H);3.93-4.04(m，1H);4.22-4.33(m，2H);4.51-4.56(m，1H);4.77-4.79 and 4.87-4.90(2 x brm，1H);7.24-7.35(m，5H).
b)(4S，5S)和(4R，5S)-5-叔丁氧羰氨基-4-羟基-6-苯基己酸乙酯将上述产物(1.17g)溶于乙醇(50mg)中，加入5%Pd-BaSO4催化剂。然后使混合物在50磅/英寸2(344.7千帕)下氢化2小时。过滤后真空蒸发溶剂，得到白色固体状的标题化合物(1.18g)(两种非对映体约2∶1的混合物)。
m.p.125-126°实测值C，64.91;H，8.40;N，3.98，C19H29NO5计算值 C，64.95;H，8.26;N，3.98%.
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.24-1.33(m，3H);1.39 and 1.42(2 x s，9H);1.72-1.95(m，2H);2.38-2.62(m，2H);2.77-2.98(m，2H);3.02-3.04和3.40-3.42(2 x m，1H可与D2O交换);3.59-3.91(m，2H);4.08-4.22(m，2H);4.58-4.61和d 4.86-4.89(2 x m，1H);7.22-7.37(m，5H).
C)(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯将由上述(b)得到的γ-羟基酯溶于2.5%乙酸-甲苯(35ml)中，将该溶液加热回流2小时，冷却并真空蒸发至干后，残余物用硅胶色谱法纯化，用乙醚-己烷(40∶60)洗脱，得到标题化合物(0.4g)。
m.p.98-99°.实测值C，66.77;H，7.78;N，4.38.C17H23NO4计算值C，66.88;H，7.54;N，4.59%.m/e＝306(MH+).
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.42(s，9H);2.11-2.19(m，2H);2.51-2.58(m，2H);2.87-3.02(m，2H);4.00-4.07(m，1H);4.47-4.52(m，1H);4.63(d，J＝10，NH);7.26-7.36(m，5H).25D-22.6°(c＝1，MeOH).
I.R.(KBr)1775，1690，1525cm-1.
制备2(R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酸a)(R)-3-苄基-(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯将六甲基二硅烷基胺(7.9ml)在四氢呋喃(15ml)中的冷(-10℃)溶液，用1.6M正丁基锂的己烷溶液(23ml)处理3分钟，其间保持温度低于0℃。0℃下再过5分钟后，将溶液冷却到-70℃，加入(S)-5-[(S)-1-叔丁氧羰氨基-2-苯基乙基]-γ-丁内酯(5g)在四氢呋喃(38ml)中的溶液，其间保持温度低于-65℃。将该溶液在-70℃下搅拌15分钟，然后经1分钟加入苄基溴(1.95ml)在四氢呋喃(12.5ml)中的溶液，将溶液在-70℃下再搅拌10分钟，然后用乙酸(6.5ml)处理，移走冷却浴。加入水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)，使混合物温热室温。分离有机层，然后干燥(MgSO4)并真空蒸发溶剂，得到油状粗产物。用硅胶色谱法纯化，用乙醚-己烷(50∶50)洗脱，得到澄清油状的标题化合物(3.52g)。实测值
C，73.22;H，7.50;N，3.50.C24H29NO4计算值C，72.91;H，7.34;N，3.54%.25D-14°(C＝0.1%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝1.37(s，9H);1.95-2.30(m，2H);2.79-3.20(m，5H);3.92-4.01(m，1H)，4.21-4.25(m，1H);4.52-4.56(m，1H);7.21-7.36(m，10H).
b)(R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酸在室温下，用氢氧化钠(1N，53.5ml)处理(a)中产物(17.63g)在二噁烷(120ml)和水(60ml)中的悬浮液。将反应物搅拌3小时，然后加入乙酸将其酸化至pH5。再放置30分钟后，滤出沉淀物并用水洗涤。将此固体溶于乙酸乙酯，干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到的白色固体用己烷研制，过滤并干燥，得到中间体羟基酸(17.85g)。将此羟基酸在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液，用咪唑(29.38g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(32.53g)在室温下处理。搅拌18小时后，真空蒸发溶剂，残余物用冰水处理，用10%柠檬酸酸化至pH4，并和2×400ml乙酸乙酯萃取。萃取液合并后干燥(MgSO4)，真空蒸发得到灰色油状物(29.2g)。将此油状物在四氢呋喃(240ml)中的溶液用乙酸(240ml)和水(80ml)在室温下处理。在室温下搅拌2小时，在4℃下搅拌18小时，然后真空蒸发溶液，残余物在水(400ml)和乙酸乙酯(400ml)之间分配。分出有机层，用水(2×400ml)、饱和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)后真空蒸发，得到灰色油状物，用硅胶色谱法纯化，用乙醚-己烷(70∶30)洗脱，得到白色玻璃状的标题化合物(22.4g)。
m/e 528(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.10(s，6H);0.95(s，9H);1.30(m，10H);1.35(m，1H);1.95(m，1H);2.40(m，1H);2.72(m，2H);2.85(m，1H);3.60(m，1H);3.75(m，1H);6.88(d，1H);7.22(m，10H).
制备35-溴甲基异喹啉在-70℃下，用1.6M正丁基锂的己烷溶液(3.3ml)处理5-溴异喹啉和7-溴异喹啉异构体混合物(5∶7，40∶60;1.0g;见Glyde和Taylor，J.Chem.Soc.Perkin Trans 2∶1783，1975)在无水四氢呋喃(15ml)中的溶液。将反应物维持在此温度30分钟，然后加入无水二甲基甲酰胺(0.74ml)在无水四氢呋喃(5ml)中的溶液。再过15分钟后，用乙醇(5ml)急停反应，并使反应物温热至升温。然后依次加入饱和氯化铵溶液(10ml)和乙醚(15ml)，分出有机相，用饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法进行纯化，用己烷-乙酸乙酯(50∶50)洗脱，分离出先洗脱出的醛，得到5-甲酰基异硅啉，为不稳定的黄色固体(0.05g)。Rf0.3(己烷-乙酸乙酯50∶50)。
将该产物(0.88g)在无水甲醇(20ml)中的溶液用硼氢化钠(0.53g)在5℃下处理，使所得混合物温热至室温，并保持此温度1小时。将该溶液用乙醚(20ml)稀释，然后加水(10ml)。将两相分开，水相用乙醚(20ml)萃取。合并两份有机相，用饱和氯化钠溶液(20ml)洗涤，干燥(MgSO4)，真空蒸发，得到浅黄色粉末状的5-羟甲基异喹啉(0.37g)。
m.p.71-72℃.实测值C，75.06;H，5.72;N，8.66.
C10H9NO 计算值 C，75.45;H，5.70;N，8.80%.
将上述产物(1.11g)在冰乙酸(15ml)中的溶液用49%氢溴酸水溶液(30ml)处理，所得混合物加热回流2小时。然后将反应物真空浓缩，残余物悬浮于二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠水溶液碱化。将两相分开，水相用二氯甲烷萃取。有机相合并后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)0.5小时，室温下真空蒸发，得到无色固体状的标题产物。使该固体与甲苯共沸，然后直接使用(1.28g)。
N.M.R.(CDCl3)δ＝4.90(s，2H);7.50(t，1H);7.70(d，1H);7.90(m，2H);8.65(d，1H);9.25(s，1H).
制备47-溴甲基异喹啉由制备3的初始步骤，作为从硅胶柱中后流出的产物得到7-甲酰基异喹啉，并以黄色固体分离出来(0.08g)。Rf0.25(己烷-乙酸乙酯50∶50)。如上所述与硼氢化钠反应，得到7-羟甲基异喹啉，m.p.129-130℃。
将上述产物的盐酸盐(0.05g)在亚硫酰溴(0.5ml)中的溶液加热到60℃，并保持45分钟。然后用冰冷却反应物，小心加入过量的水，而后加入乙醚(15ml)。然后加入浓氨水至pH9，分出醚相，用水洗涤并干燥(MgSO4)。然后加入氯化氢在异丙醇中的溶液(0.06ml，5.9N)，所得的混浊悬浮液在室温下真空蒸发。使残余物与甲苯共沸，得到无色固体状的产物盐酸盐(0.04g)。
m/e(MH)+222N.M.R.(DMSO-d6)δ＝5.05(s，2H);8.10(d，1H);8.25(d，1H);8.30(d，1H);8.45(s，1H);8.65(d，1H);9.70(s，1H).
制备5-13用制备2所述的方法制备下列式(Ⅳ)化合物，但在步骤(a)中使用适当的取代苄基溴或溴甲基异哇啉使γ-丁内酯烷基化，随后如步骤(b)所述开环并与叔丁基二甲基甲硅烷基氯反应。
制备141-(N-叔丁氧羰基)-3-甲磺酰氧基氮杂环丁烷a)在二氯甲烷(40ml)中搅拌氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(2.10g)，加入二异丙基乙基胺(2.59g)，随后加入二碳酸二叔丁酯(4.36g)。该混合物在室温下搅拌4小时，真空蒸发溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(200ml)中，用1.5M盐酸(50ml)、饱和碳酸氢钠溶液(25ml)和盐水(25ml)洗涤。干燥有机层(MgSO4)，过滤并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-己烷(50∶50)洗脱，得到白色固体状的1-(N-叔丁氧羰基)-3-羟基氮杂环丁烷(2.57g)，m.p.51-53℃。
实测值C，55.29;H，8.70;N，7.98.C8H15NO3计算值C，55.47;H，8.73;N，8.09%.
b)将上述产物(1.0g)在二氯甲烷(35ml)中的溶液用甲磺酰氯(0.75ml)和吡啶(1.5ml)处理，并将该混合物在室温下搅拌3天。将溶液用二氯甲烷(75ml)稀释，用柠檬酸水溶液(5%，100ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到无色油状的标题产物(1.4g)。
实测值C，43.00;H，6.80;N，5.50.C9H17NO5S计算值 C，43.03;H，6.77;N，5.58%.m/e 269(MH4)+.
N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.37(s，H);3.24(s，3H);3.88-3.96(m，2H);4.17-4.28(m，2H);5.25(m，1H).
制备151-(N-苄氧羰基)-(R)-3-甲磺酰氧基吡咯烷利用前面制备4所述的方法，但使用三乙胺代替吡啶作为碱，由1-(N-苄氧羰基)-(R)-3-羟基吡咯烷(J.Med.Chem.，35∶1764，1992)制备标题化合物，得到油状产物。
实测值C，51.60;H，5.80;N，4.30.C13H17NO5S 1/6 H2O 计算值C，51.63;H，5.78;N，4.63%.m/e MH+300.
N.M.R.(CDCl3)δ＝2.15(m，1H);2.55(m，1H);3.0(s，3H);3.45-3.80(m，4H);5.10(s，2H);5.25(m，1H);7.30(m，5H).
制备161-(N-苄氧羰基)-(S)-3-对甲磺酰氧基吡咯烷在氮气下，向1-(N-苄氧羰基)-(R)-3-羟基吡咯烷(7.90g)在无水四氢呋喃(100ml)中的溶液中，加入三苯膦(13.58g)。将所得溶液冷却到-30℃，加入甲苯磺酸甲酯(10.06g)，然后经0.5小时加入偶氮二甲酸二乙酯(10.41g)。再过1小时后，使反应物温热至室温，并保持65小时。真空蒸发反应物，残余物溶于二氯甲烷，用水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发成油状。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇(98∶2至96∶6)洗脱，然后再进行一次色谱纯化，用己烷-乙酸乙酯(80∶20至50∶50)洗脱，得到金色油状产物(10.22g)。
实测值C，60.59;H，5.68;N，3.67.C19H21NO5S计算值 C，60.78;H，5.64;N，3.73%.25D+9°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝1.85-2.25(m，2H);2.45(s，3H);3.40-3.65(m，4H);4.95-5.15(m，3H);7.20-7.35(m，7H);7.75(d，2H).
制备171-(N-叔丁氧羰基)-4-甲磺酰氧基哌啶按照制备14所述的方法，由1-(N-叔丁氧羰基)-4-羟基哌啶制备标题化合物，m.p.85-86℃。
实测值C，47.2;H，7.66;N，4.91.C11H21NO5S计算值C，47.3;H，7.58;N，5.02%.
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.5(s，9H);1.85(m，2H);2.0(m，2H);3.08(s，3H);3.35(m，2H);3.75(m，2H);4.9(m，1H).
制备181-(N-叔丁氧羰基)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷用氢化钠(60%，0.24g)处理咪唑(0.41g)在N，N-二甲基甲酰胺(30ml)中的溶液，将该混合物在室温下搅拌1小时。加入1-(N-叔丁氧羰基)-3-甲磺酰氧基氮杂环丁烷(见制备14，1.4g)，混合物于75℃下加热3天。然后减压除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯(50ml)中，用水(2×50ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到无色油状物。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(93∶7∶1)洗脱，得到油状标题化合物(0.72g)。
m/e 224(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.40(s，9H);3.95-4.06(m，2H);4.26-4.35(m，2H);5.12(m，1H);6.96(s，1H);7.43(s，1H);7.79(s，1H).
制备19-25按照前面制备18所述的方法制备下列式(Ⅴ)化合物，但使用由制备14-17制得的适当原料，并与适当的取代未取代的咪唑或三唑反应。
制备26(a)1-(N-叔丁氧羰基)-4-(4-甲基咪唑-1-基)哌啶4-甲基咪唑与1-(N-叔丁氧羰基)-4-甲磺酰氧基哌啶反应，得到两种区域异构体产物(regioisomeric products)，用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(96∶3.5∶0.5)洗脱。主要异构体，Rf0.47。m/e265.9(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.43(s，9H);1.7(dq，2H);1.93(bd，2H);2.07(s，3H);2.83(m，2H);4.05(m，3H);6.95(s，1H);7.55(s，1H).
(b)1-(N-叔丁氧羰基)-4-(5-甲基咪唑-1-基)哌啶次要异构体，Rf 0.52.m/e265.9(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.43(s，9H);1.7(dq，2H);1.9(bd，2H);2.05(s，3H);2.88(m，2H);4.05(m，3H);6.6(s，1H);7.65(s，1H).
制备271-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-2-基)-1，2，5，6-四氢吡啶(a)在-40℃和氮气下，在无水四氢呋喃(50ml)中搅拌1-(二乙氧基甲基)咪唑(6.8g)。以一定的速度加入正丁基锂(25ml，1.6N己烷溶液)，使温度保持低于-35℃。经10分钟滴加1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮-哌啶(2.65g)在无水四氢呋喃(10ml)中的溶液，其间保持温度低于-40℃，所得混合物于-40℃下搅拌2小时。将反应混合物与盐酸(50ml，0.1N)一起搅拌15分钟，然后加入乙酸乙酯(50ml)，所得混合物搅拌5分钟。分出有机层，水层用乙酸乙酯(1×50ml)萃取。合并有机萃取液，用饱和碳酸氢钠溶液(1×50ml)洗涤，再用饱和氯化钠溶液洗涤。然后将有机层干燥(MgSO4)并蒸发成黄色油状物(8.0g)。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯∶甲醇∶浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到奶油色固体状的1-(N-叔丁氧羰基)-4-羟基-4-咪唑-2-基哌啶(2.2g)。m/e 268.0(MH)+。
(b)在0℃下，将上述产物(267mg)与二异丙胺(350ml)一起在无水二甲基甲酰胺(2ml)中搅拌。一次加入甲磺酰氯(155ml)，将反应混合物在0℃下搅拌2小时。然后再分次加入二异丙胺(350ml)和甲磺酰氯(155ml)，反应混合物于室温下搅拌16小时。所得混合物用水(4ml)稀释，用1M氢氧化钠溶液调至pH9，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。合并有机萃取液，干燥(MgSO4)并蒸发成胶状物(260mg)。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(95∶5∶1)洗脱，得到黄色胶状的标题产物(144mg)。m/e250.1(MH)+。
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.46(s，9H);2.6(bs，2H);3.53(t，2H);4.0(bs，2H);6.3(m，1H);7.0(s，2H);9.4(bs，1H).
制备281-(N-叔丁氧羰基)-4-咪唑-2-基哌啶将中间体制备27的产物(0.55g)溶于乙醇(30ml)中，在30磅/英寸2(2.0巴)下用钯/碳催化剂(200mg，10%)氢化。滤掉催化剂并除去溶剂，得到泡沫状物(0.55g)。m/e 252.1(MH)+。
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.4(s，9H);1.68(qd，2H);1.95(bd，2H);2.75(bt，2H);2.92(bt，1H);4.1(bd，2H);6.9(s，2H);8.77(bs，1H).
制备29
1-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)甲基-1，2，5，6-四氢吡啶(a)取氢化钠(4g)在无水二甲亚砜(100ml)中的60%油分散液，用己烷洗去油液，然后在70℃下搅拌加热1小时。加入无水四氢呋喃(100ml)，将反应物冷却到-20℃。然后加入三甲基碘化铳(20.4g)在二甲亚砜(80ml)中的溶液，随后加入1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮哌啶(19.9g)在无水四氢呋喃(100ml)中的溶液，将反应物在-10℃下搅拌0.5小时，再在室温下搅拌1小时。然后加入水(500ml)，用乙酸乙酯(3×250ml)萃取混合物。合并萃取液，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用环己烷-乙醚-异丙醇(60∶40∶1)洗脱，得到无色固体状的1-(N-叔丁氧羰基)哌啶-4-螺-2′-环氧乙烷(19.6g)。
m.p.65-66℃.实测值C，62.11;H，9.06;N，6.55.C11H19NO3计算值 C，61.97;H，8.92;N，6.57%.
(b)在氮气和搅拌下，用80%氢化钠(0.84g)的油分散液处理咪唑(1.91g)在无水乙腈(30ml)中的溶液，所得混合物加热至60℃直至溶解。15分钟后加入步骤(a)的产物(2.0g)，维持反应5小时。使反应物在室温下放置过夜后，真空蒸发溶剂，油状残余物在二氯甲烷(40ml)和水(20ml)之间分配。分出有机相，用水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓880氨水(95∶4∶1)洗脱，得到无色粉末状的1-(N-叔丁氧羰基)-4-羟基-4-(咪唑-1-基)甲基哌啶(2.13g)。
实测值C，58.35;H，8.30;N，14.52.C13H23N3O3
1/10 CH2Cl2计算值 C，58.43;H，8.07;N，14.50%.
m/e 282(MH)+.
(c)在0-5℃和搅拌下，用甲磺酰氯(2.20ml)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液，处理步骤(b)产物(2.0g)和三乙胺(5.44ml)在无水二氯甲烷(80ml)中的溶液，使所得混合物温热至室温并保持14小时。然后用水洗涤反应混合物，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化残余物，用二氯甲烷-甲醇-浓880氨水(96∶4∶0至95∶4∶1)洗脱，得到金色油状产物(1.36g)。
实测值C，59.93;H，7.60;N，14.79.C13H21N3O21/4 CH2Cl2计算值C，60.14;H，7.61;N，14.77%.
m/e(MH)+264N.M.R.(CDCl3)δ＝1.45(s，9H);1.97(m，2H);3.50(t，2H);3.90(s，2H);4.50(s，2H);5.50(s，1H);6.90(s，1H);7.10(s，1H);7.55(s，1H).
制备301-(N-正丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)甲基哌啶在50磅/英寸(3.5巴)和室温下，用10%钯/炭(0.3g)作催化剂，在搅拌下使制备29产物(1.33g)在无水乙醇(25ml)中的溶液氢化4小时。然后将反应混合物过滤并真空蒸发，与二氯甲烷共沸。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇(96∶4)洗脱，得到无色油状产物(1.09g)。
实测值C，63.08;H，8.60;N，15.50.C13H23N3O21/4 CH2Cl2计算值C，63.36;H，8.74;N，15.84%.m/e(MH)+266N.M.R.(CDCl3)δ＝1.15(m，2H);1.45(s，9H);1.58(m，2H);1.85(m，1H);2.65(t，2H);3.80(d，2H);4.10(m，2H);6.90(s，1H);7.10(s，1H);7.45(s，1H).
制备31
1-(N-叔丁氧羰基)-4-(咪唑-1-基)-1，2，5，6-四氢吡啶在-10℃下，在无水二氯甲烷(30ml)中搅拌咪唑(8.20g)，并加入亚硫酰氯(4.8ml)在无水二氯甲烷(30ml)中的溶液。使所得浆液温热至室温，2小时后滴加1-(N-叔丁氧羰基)-4-酮哌啶(6.0g)在无水二氯甲烷(50ml)中的溶液。反应混合物搅拌过夜，然后真空蒸发。在油状残余物中加入碳酸钾(6.0g)在水(30ml)中的溶液，用二氯甲烷(2×60ml)萃取产物。合并萃取液并用水(40ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇(100∶0至90∶10)洗脱，得到油状产物(1.0g)。
N.M.R.(CDCl3)δ＝1.50(s，9H);2.55(s，2H);3.70(t，2H);4.05(s，2H);5.80(s，1H);7.10(s，2H);7.65(s，1H).
制备321-(N-苄氧羰基)-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶向1-(N-苄氧羰基)-4-酮哌啶(5.0g)在甲醇(25ml)中的溶液中，加入乙酸铵(16.5g)和氰基硼氢化钠(0.94g)，混合物在室温下搅拌24小时。然后减压除去溶剂，残余物在乙酸乙酯和1M氢氧化钠溶液之间分配。分出乙酸乙酯层，用硫酸镁干燥，减压蒸发，得到黄色油状物。该残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(95∶5∶1)洗脱，得到黄色油状的4-氨基-1-(N-苄氧羰基)哌啶。将该产物(1.5g)在甲苯(20ml)中的溶液用二甲基甲酰胺连氮(1.0g)和对甲苯磺酸(1.0g)处理，混合物加热回流24小时。然后减压除去溶剂，残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(93∶7∶1)洗脱，得到无色油状的标题化合物。
m/e(MH+)287N.M.R.(DMSO-d6)δ＝1.82(m，2H);2.01(m，2H);2.83-3.09(m，2H);4.12(m，2H);4.40(m，1H);5.11(s，2H);7.28-7.45(m，5H);8.65(s，2H).
制备331-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷将1-(N-叔丁氧羰基)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷(得自制备18)(0.72g)在二氯甲烷(30ml)中的溶液在0℃下用氯化氢饱和，再保持此温度1小时。真空除去溶剂，得到胺盐酸盐，将其溶于N，N-二甲基甲酰胺(25ml)中，该溶液在室温下用N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(1.01g)和N，N-二异丙基乙胺(1.7ml)处理)。反应混合物在室温下搅拌18小时，然后真空除去溶剂。残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(97∶7∶1)洗脱，得到无色泡沫状标题化合物(0.79g)。
m/e 323(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.89(m，6H);1.38(s，9H);1.90(m，1H)∶3.61-3.78(m，1H);3.92-4.10(m，1H);4.24-4.80(m，3H);5.19(m，1H);6.98(s，1H);7.06(dd，1H);7.38(s，1H);7.77(s，1H).
制备34-43按照制备33的方法，使用由制备18-32得到的适当中间体，并与N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯偶合，制备下列式(Ⅶ)化合物，其中R4为(S)-异丙基，R7和R8为氢。
制备44-48按照制备33的制备方法，在偶合步骤中使用N-叔丁氧羰基-(S)-异亮氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯，制备下列式(Ⅶ)化合物，其中R4为仲丁基，m为0。
制备491-(N-叔丁氧羰基-(S)-异亮氨酰)-4-酮基哌啶利用与制备33所述相同的方法，但使用4-酮基哌啶盐酸盐水合物(代替3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷盐酸盐)和(S)-异亮氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯，制备标题化合物。m/e 313(MH)+。25D-16℃(c＝0.34%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝0.9(m，6H);1.2(m，1H);1.4(s，9H);1.6(m，1H);1.75(m，1H);2.5(m，4H);3.7(m，2H);4.15(m，2H);4.55(m，1H);5.2(d，2H).
制备50N-((R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酸用S.J.deSolms等人(J.Med.Chem.，34∶2852，1991)所述的方法制备标题化合物。
制备511-异氰基-3-甲基-1-对甲苯磺酰基-丁-1-烯用Van leusen、Schaart和Leusen(Recueil，98(5)∶258，1979)的方法，由对甲苯磺酰甲基异氰化物和异丁醛制备标题化合物。I.R.(液体石蜡)2100cm-1。
m/e 267(MH+NH3)+N.M.R.(CDCl3)δ＝1.15(d，6H);2.5(s，3H);2.84(m，1H);6.88(d，1H);7.4(d，2H);7.85(d，2H).
制备523-氧杂环丁烷氧羰基琥珀酰亚胺将氧杂环丁-3-醇(2.0g)和N，N-二异丙基乙胺(7.76g)溶于二氯甲烷(50ml)中，在氮气氛下，在维持-20℃的条件下，经15分钟将上述溶液滴加到碳酸二(三氯甲基)酯(2.69g)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中。然后将溶液在-20℃下再搅拌15分钟，一次加入N-羟基琥珀酰亚胺(3.45g)。使该溶液经2小时温热至室温，然后用水(50ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(25ml)洗涤。然后将有机层干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到浅棕色油状标题化合物(4.65g)。
N.M.R.(CDCl3)δ＝2.83(s，4H);4.75(m，2H);4.90(m，2H);5.58(m，1H).
实施例11-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷a)1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷在0℃下，用氯化氢使1-(N-叔丁氧羰基)-(S)-缬氨酰)-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷(由制备33制得，0.79g在二氯甲烷(50ml)中的溶液饱和，并在此温度下再保持1小时。真空蒸发溶剂，得到无色固体状的胺。将该产物在二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液加到预先配制好的一种活化酯溶液中，该活化酯溶液的配制方法是将(R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基己酸(得自制备2，1.32g)、1-羟基苯并三唑(0.36g)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.58g)和N，N-二异丙基乙胺(1.75ml)在二甲基甲酰胺(75ml)中一起搅拌20分钟。再搅拌24小时后，真空除去溶剂，残余物在乙酸乙酯和水之间分配。分出乙酸乙酯层，干燥(MgSO4)，真空除去溶剂，得到无色油状物。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到无色泡沫状标题化合物(1.1g)。
实测值C，66.04;H，8.26;N，9.61.C41H61N5OsSi.1/2 H2O计算值 C，66.39;H，8.36;N，9.44%.
m/e 733(MH)+[α]25D-6°(c＝0.29%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.12(m，6H);0.90(m，15H);1.25-1.29(2 x s，9H);1.96(m，1H);2.32-2.77(m，4H);2.89(m，1H);3.48-3.74(m，2H);3.88-4.06(m，3H);4.18-4.66(m，4H);5.12(m，1H);6.77(t，1H);6.98(s，1H);7.07-7.32(m，10H);7.40-7.82(2 x s，1H);7.76-7.96(2 x s，1H);8.0-8.20(2 x d，1H).
b)1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氮基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷将步骤(a)的产物(1.19g)溶于四氢呋喃中，在室温下用1M四正丁基氟化铵的四氢呋喃溶液处理。48小时后，真空除去溶剂，产物在乙酸乙酯中吸收，用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，用MgSO4干燥，真空蒸发溶剂。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(93∶7∶1)洗脱，然后用乙酸乙酯/己烷重结晶，得到无色固体状产物(0.52g)，m.p.124-126℃。
实测值C，67.99;H，8.01;N，11.06.C35H47N5O5计算值C，68.05;H，7.67;N，11.34%.m/e 618(MH)+[α]25D-3°(c＝0.14%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.80(m，6H);1.21-1.47(m，1H);1.27(s，9H);1.58-1.71(m，1H);1.81-1.98(m，1H);2.44-2.62(m，2H);2.68-2.92(m，3H);3.37-3.61(m，2H);3.85-4.02(m，2H);4.13-4.36(m，2H);4.41-4.56(m，2H);5.18(m，1H);6.43(d，1H);6.98(s，1H);7.05-7.30(m，10H);7.26-7.77(2 x s，1H);7.38-7.82(2 x s，1H);7.88-7.98(2 x d，1H).
实施例2-10按照实施例1所述的一般方法制备下列化合物，但在偶合步骤(a)中使用适当的式(Ⅳ)受护羧酸中间体和适当的式(Ⅷ)胺，然后如步骤(b)所述脱除叔丁基二甲基甲硅烷基保护基。
实施例111-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰]-(S)-3-(咪唑-1-基)吡咯烷采用实施例1的方法，在偶合步骤中使用1-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰)-3-(S)咪唑-1-基)吡咯烷(制备36)，然后如实施例1(b)所述脱除叔丁基二甲基甲硅烷基，得到标题化合物。
m.p.111-112℃.实测值C，61.90;H，6.85;N，9.61.
C37H48F3N5O6计算值C，62.08;H，6.76;N，9.78%.
m/e(MH)+716[α]25D+2°(c＝0.1%，MeOH)[α]25365+14°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.65-0.90(m，6H);1.15-1.35(m，10H);1.60(m，1H);1.85(m，1H);2.05-2.90(m，7H);3.20-4.10(m，6H);4.20(m，1H);4.55(m，1H);4.85(m，1H);6.40(d，1H);6.90-6.95(2 x s，1H);7.10-7.30(m，10H);7.70-7.80(2 x s，1H);7.90-8.0(2 x d，1H).
实施例121-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰]-(R)-3-(咪唑-1-基)吡咯烷采用上述方法，但以1-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰-3-(R)-咪唑-1-基)吡咯烷起始，得到标题产物，m.p.109℃。
实测值C，61.44;H，7.05;N，9.71.C37H48F3N5O62/5 H2O计算值C，61.47;H，6.80;N，9.69%.m/e(MH)+716[α]25D-23°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.70-0.85(m，6H);1.15-1.40(m，10H);1.60(m，1H);1.85(m，1H);2.00-2.90(m，7H);3.25-3.70(m，5H);3.95(m，1H);4.20(m，1H);4.45-4.65(m，1H);4.75-4.95(2 x m，1H);6.40(m，1H);6.90(s，1H);7.05-7.25(m，10H);7.70-7.75(2 x s，1H);7.90-8.05(2 x d，1H).
实施例131-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶a)1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶利用与实施例1步骤(a)所述相同的方法，由1-(N-叔丁氧羰基-(S)-缬氨酰-4-咪唑-1-基哌啶和(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-(R)-2-苄基-6-苯基己酸制备标题化合物。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到无色泡沫状产物(0.71g)。
实测值C，67.32;H，8.44;N，9.22.C43H65N5O5Si.
1/4 H2O 计算值C，67.54;H，8.56;N，9.15%.
m/e 760(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.12(m，6H);0.91(m，15H);1.13-1.30(m，2H);1.26(s，9H);1.47-1.76(m，2H);1.89-2.08(m，4H);2.36-2.97(m，6H);3.50-3.75(m，2H);3.99-4.61(m，4H);6.79(m，1H);6.90(d，1H);7.07-7.29(m，11H);7.68-7.73(2 x s，1H);7.93-7.99(2 x d，1H).
b)1-[N-(R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶用与实施例1步骤b)所述相同的方法，由上述步骤a)的产物制备标题化合物。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水洗脱，然后用乙酸乙酯/己烷重结晶，得到无色固体状产物，m.p.121-123℃(0.48g)。
实测值C，68.38;H，7.96;N，10.59.C37H51N5O5.1/4 H2O计算值C，68.30;H，7.92;N，10.77%.
m/e 646(MH)+[α]25-10°(c＝0.1，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.77(m，6H);1.19-1.37(m，1H);1.28(s，9H);1.48-1.72(m，3H);1.82-2.04(m，3H);2.42-2.94(m，7H);3.38-3.60(m，2H)0;3.96-4.15(m，1H);4.28(m，1H);4.37-4.58(m，3H);6.43(d，1H);6.88(s，1H);7.04-7.29(m，11H);7.65-7.69(2 x s，1H);7.84-7.88(2 x d，1H).
实施例14-37按实施例13所述的方法制备下列化合物，但在偶合步骤(a)使用适当的式(Ⅳ)受护羧酸中间体和适当的式(Ⅷ)缬氨酸或异亮氨酸衍生物，随后如步骤(b)所述脱除叔丁基二甲基甲硅烷基保护基。
实施例311-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶用催化氢化法从1-(N-苄氧羰基)-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶(制备32)上脱除苄氧羰基保护基，按实施例1步骤(a)所述方法使所得胺产物与N-((R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酸偶合，生成1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(1，2，4-三唑-4-基)哌啶，m/e 761(MH+)。
按实施例1步骤(b)的方法，用四正丁基氟化铵处理上述产物，生成标题产物。
实测值C，64.90;H，7.93;N，12.48.C36H50N6O5.H2O 计算值C，65.06;H，7.83;N，12.65%.m/e 647(MH)+[α]25D-9°(c＝0.12 MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.70-0.92(m，6H);1.15-1.41(m，10H);1.46-1.76(m，3H);1.81-2.16(m，3H);2.53-2.96(m，7H);3.38-3.64(m，2H);3.95-4.15(m，1H);4.27-4.61(m，4H);6.36-6.44(m，1H);7.01-7.12(m，10H);7.78-7.91(m，1H);8.54(s，1H);8.60(s，1H).
实施例321-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)-1，2，5，6-四氢吡啶酒石酸盐
a)按实施例1(a)的方法，使(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)-6-苯基己酸与由1-(N-叔丁氧羰基)-4-咪唑-2-基-(1，2，5，6-四氢吡啶)脱保护而制得的胺反应，生成1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)-1，2，5，6-四氢吡啶。
实测值C，62.19;H，7.39;N，8.38.C33H62F3N5O6Si 1/10 CH2Cl2计算值C，62.27;H，7.37;N，8.23%.
m/e 842(M)+[α]25D-10°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(CDCl3)δ＝0.10(m，6H);0.80(d，6H);0.90(s，9H);1.35(s，9H);1.20-1.95(m，5H);2.35-2.55(m，3H);2.70(m，2H);3.41-4.10(m，6H);4.55(m，1H);4.65(d，1H);5.60-5.80(2 x s，1H);6.25(d，1H);6.90-7.30(m，11H);7.65(s，1H).
b)按实施例1(b)的方法通过与四正丁基氟化铵反应而脱保护，生成游离碱形式的标题产物。将该产物溶于无水乙醇中，用1-酒石酸(0.14g)在无水乙醇中的溶液处理。加入乙醚后生成沉淀物，将沉淀物过滤并干燥，得到无色固体状的1-酒石酸盐(0.61g)，m.p.92-152℃.
实测值C，57.40;H，6.64;N，7.51.C38H38F3N5O6.CH16O61/3 H2O 计算值C，57.11;H，6.23;N，7.93%.
m/e(MH)+728[α]25D+6.7°(c＝0.1%，MeOH)[α]25365-6.7°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.75(m，6H);1.25(s，9H);0.95-1.40(m，1H);1.50(m，1H);1.90(m，1H);2.35-2.95(m，7H);3.0-3.85(m，4H);4.0(m，1H);4.10(m，1H);4.25(s，2H);4.40-4.60(m，2H);6.0(m，1H);6.40(d，1H);7.0(s，1H);7.10-7.30(m，9H);7.50(s，1H);7.95(m，2H).
实施例331-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-(5-异丙基咪唑-1-基)哌啶a)使1-(N-叔丁氧羰基-(S)-异亮氨酰)-4-酮基哌啶(制备49)脱保护，然后与(S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酸(制备10)反应，生成1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-酮基哌啶。
实测值C，62.50;H，8.00;N，5.20.C42H62F33O7Si 计算值C，62.60;H，7.80;N，5.20%.m/e 806.5(MH)+.[α]25D-5.30(c＝0.1%，MeOH).
b)在30磅/英寸2(2.0巴)下，用钯/碳(5%，100mg)作催化剂，使上述产物(2.0g)和氨水(比重0.88)在乙醇(25ml)中氢化4小时。滤掉催化剂并蒸发溶剂，得到2.0g无色泡沫状物，用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(90∶10∶1)洗脱，将适当的级分浓缩后，得到无色玻璃状的1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-氨基哌啶(1.53g)。
c)将上述步骤b)的产物(404mg)和1-异氰基-3-甲基-1-对甲苯磺酰基-丁-1-烯(得自制备51，150mg)与二异丙基乙胺(100mg)一起在甲醇(15ml)中搅拌16小时。于40℃下除去溶剂，残余物用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水(98∶2∶0.4)洗脱，得到无色玻璃状的1-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-(S)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-(5-异丙基咪唑-1-基)哌啶(380mg)。m/e 900(MH+)。
d)按实施例1(b)的方法，通过用四正丁基氟化铵处理使上述步骤c)的产物脱保护，生成标题产物。
实测值C，63.5;H，7.70;N，8.70.C42H58F3N5O6.1/2H2O计算值C，63.5;H，7.48;N，8.81%.
m/e 785.9(MH)+N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.8(m，6H);1.05(m，1H);1.2(m，6H);1.3(s，9H);1.3-2.0(m，7H);2.5-3.0(m，6.5H);3.2(bt，0.5H);3.3(m，1H);3.58(m，1H);4.13(m，3H);4.4-4.65(m，4H);6.43(m，1H);6.63(s，1H);7.1-7.3(m，9H);7.47，7.6(s，s，1H);7.95(bt，1H).
实施例341-[N-((S)-4-羟基-(S)-5-(氧杂环丁烷-3-基氧羰氨基)-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶将实施例16的产物(4.0g)溶于二氯甲烷(40ml)中，并在冰浴中冷却。经5分钟滴加三氟乙酸(10ml)，溶液在0℃下搅拌1.5小时。真空蒸发溶剂，残余物用乙酸乙酯(250ml)吸收，用1M氢氧化钠(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，过滤，真空蒸发溶剂。用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(90∶10∶1)洗脱，得到白色固体状的1-[N-(S)-5-氨基-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶(2.98g)。m/e 630(MH)+。
N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.78(m，6H);1.34-1.75(m，4H);1.81-2.07(m，3H);2.37-2.93(m，8H);3.05-3.29(m，3H);4.05-4.56(m，5H);6.88(s，1H);7.10-7.27(m，10H);7.67(d，1H);7.95(m，1H);
b)将步骤a)的产物(0.818g)溶于二氯甲烷(30ml)中。加入3-氧杂环丁烷基羰氧基琥珀酰亚胺(0.344g)，溶液在室温下搅拌1小时。然后将溶液用0.5M氢氧化钠(15ml)和盐水(15ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发。所得固体用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体状的标题化合物，m.p.201-203℃。
实测值C，60.32;H，6.22;N，9.15;C37H46F3N5O71/2 H2O 计算值C，60.15;H，6.41;N，9.48%.
m/e 730(MH)+[α]25D+3°(c＝0.1%，MeOH)，[α]25365+32°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.77(m，6H);1.22-2.05(m，7H);2.50-2.93(m，8H);3.42-3.60(m，2H);4.08(d，1H);4.22-4.73(m，7H);5.12(m，1H);6.89(s，1H);7.11-7.28(m，1H);7.67(d，1H);7.86(d，1H).
实施例351-[N-((S)-4-羟基-(S)-5-(氧杂环丁烷-3-基氧羰氨基)-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶在0-5℃下，用无水三氟乙酸(4ml)处理实施例18产物(0.45g)在二氯甲烷(20ml)中的溶液5小时。然后将反应液真空浓缩，残余胶状物与甲苯(×3)共沸并干燥。然后将粗制胺产物与二异丙基乙胺(0.82ml)在二氯甲烷(25ml)中的溶液冷却到5℃，滴加3-氧杂环丁烷氧羰氧基琥珀酰亚胺(0.22g)在二氯甲烷(5ml)中的溶液。使反应液温热至室温，保持17小时，然后用水洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(95∶4∶1)洗脱，得到无色泡沫状产物(0.26g)，m.p.157-160℃.
实测值C，66.45;H，7.49;N，10.22.C38H49N5O63/4H2O计算值C，66.60;H，7.43;N，10.22%.25D+32°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.75(m，6H);1.25-2.95(m，12H);3.05-3.65(m，4H);3.95-4.75(m，10H);5.05(m，1H);6.10(m，1H);6.30(d，1H);6.80-6.85(2 x s，1H);6.95-7.35(m，11H);7.55-7.65(2 x s，1H);7.95(d，1H).
实施例361-[N-((S)-4-羟基-(S)-5-(异丙氧羰氨基)-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯基)己酰基)-(S)-异亮氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶酒石酸盐按实施例35所述的方法制备标题化合物，但使用氯甲酸异丙酯与胺中间体反应。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氨水(97∶2∶1至95∶4∶1)洗脱，得到无色粉末状产物，用乙酸乙酯-己烷重结晶。将该游离碱溶解在乙醇中，用1-酒石酸处理。加入乙醚，得到无色粉末状酒石酸盐，m.p.156-157℃。
实测值C，61.60;H，6.87;N，8.38.C38H51N5O5C4H6O61/2 H2Oreq计算值C，61.75;H，7.16;N，8.57%.
m/e 658(MH)+25D+26°(c＝0.1%，MeOH)N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.75(m，6H);1.0(m，6H);1.25-3.65(m，14H);3.95-4.70(m，10H);6.10(m，1H);6.30(d，1H);6.65(d，1H);6.85-6.90(2 x s，1H);7.05-7.35(m，1H);7.65-7.75(2 x s，1H);7.90(d，1H).
实施例371-[N-((S)-5-叔丁氧羰氨基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)-4-((S)-缬氨酰氧基)己酰基)-(S)-(缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶酒石酸盐a)将N-苄氧羰基-L-缬氨酸(1.03g)和二环己基碳二亚胺(0.51g)溶解在二氯甲烷(25ml)中，并将该混合物搅拌3小时。滤除沉淀出的二环己基脲，蒸发滤液得到白色泡沫状物。将此白色泡沫状物与实施例16的产物合并在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中，加入4-二甲氨基吡啶(0.025g)。室温下搅拌5天后，使混合物在乙酸乙酯和水之间分配。干燥有机萃取液(MgSO4)并蒸发溶剂，然后用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯∶甲醇(0-10%)洗脱，得到白色泡沫状的1-[N-(S)-4-(N-苄氧羰基-(S)-缬氨酰氧基)-(S)-5-叔丁氧羰氨基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基-(S)-缬氨酰基]-4-(咪唑-1-基)哌啶。
实测值C，62.63;H，6.73;N，8.37.C51H65F3N6O9.H2O req计算值C，62.43;H，6.88;N，8.56%.
m/e 963(MH)+b)将上述步骤a)的产物(0.95g)溶解于无水乙醇(50ml)中，将该溶液用10%钯/碳(0.1g)处理，并在60磅/英寸2(4.1巴)和室温下氢化4小时。滤除催化剂后，将滤液蒸发至干。用硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷-甲醇-浓氧水(97∶3∶0.5)洗脱，得到白色泡沫状产物。将此泡沫状物溶解在乙酸乙酯(6ml)中，加入酒石酸(0.089g)在10%甲醇/乙酸乙酯(10ml)中的溶液。蒸发溶剂并用乙醚研制，得到白色玻璃状产物(0.48g)。
m.p.122℃.实测值C，56.74;H，6.78;N，8.56.C43H59F3N6O7∶C4H6O6∶H2O req计算值 C，56.61;H，6.77;N，8.43%.
N.M.R.(DMSO-d6)δ＝0.8-0.95(m，12H);1.2(s，11H);1.35-1.77(m，2H);1.8-2.15(m，4H);2.4-3.2(m，8H);3.51(m，1H);3.8(m，1H);4.1(m，1H);4.3(m，1H);4.4-4.65(m，2H);4.81(m，1H);6.83(s，1H);7.0-7.32(m，12H);7.66(d，1H);7.73-8.0(m，1H).
权利要求
1.一种具有下式的化合物及其可药用盐和生物前体
其中R1为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基、杂环基或CONR9R10；R2为C1-C6烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基或杂环基(C1-C4)烷基；R3为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基(C1-C4)烷基、芳基(C1-C4)烷基、芳基(C2-C4)烯基、杂环基(C1-C4)烷基或杂环基(C2-C4)烯基；R4为C1-C6烷基、C3-C8环烷基、芳基或杂环基；R5、R6、R7和R8都各自独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基；或者，R5和R6，或R7和R8，可连在一起形成三至八员碳环；X为含有若干环碳原子和一个环氮原子的单环或双环四至十员杂环基，该基团通过环氮原子与相连的羰基连接；该基团可以是饱和的或部分未饱和的，而且，除-(CR7R8)m-Het取代基外，该基团可以被至多4个其它取代基取代，取代基都独立地选自F、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、OR11或NR9R10；Het为咪唑基或三唑基，它们都可任选地被C1-C6烷基、C3-C8环烷基、NR9R10或CONR9R10取代；R9或R10都独立地为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基，或者，R9和R10可连在一起而与它们所连的氮原子一起形成四至八员含氮杂环基；R11为H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基；n和m各自独立地为0、1或2；上述定义中所包括的任何烷基或环烷基都可任选地被氟全取代或部分取代。
2.如权利要求1所述的化合物，该化合物具有下列立体化学构型
其中R1至R8、n、m、X为Het如前面权利要求1中所限定。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中R1为叔丁基、异丙基或氧杂环丁烷基，n为0。
4.如权利要求3所述的化合物，其中R2为苄基。
5.如权利要求3或4所述的化合物，其中R4为异丙基或仲丁基。
6.如权利要求3-5中任一项所述的化合物，其中R3为在苯环上被甲基、氟、氯、碘、CF3或OCF3任选取代的苄基，或者为R3为3-苯基丙基或3-苯基丙-2-烯基。
7.如权利要求3-6中任一项所述的化合物，其中R5、R6、R7和R8都为H。
8.如权利要求3-7中任一项所述的化合物，其中m为0或1。
9.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;1-[N-((R)-2-苄基-(S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(3-苯基丙-2-烯-1-基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-缬氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(R)-2-(4-氯苄基)-(S)-4-羟基-6-苯基己酰基)-(S)-缬氨酰]-3-(咪唑-1-基)氮杂环丁烷;1-[N-((S)-5-(叔丁氧羰氨基)-(S)-4-羟基-6-苯基-(R)-2-(4-三氟甲氧基苄基)己酰基)-(S)-异亮氨酰]-4-(咪唑-1-基)哌啶。
10.一种制备如权利要求1所述的式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括从式(Ⅸ)化合物上脱除保护基，分离出式(Ⅰ)化合物，并任选地形成其可药用盐
其中X1为一个可选择性脱除的羟基保护基，R1至R8、X和Het如权利要求1所限定。
11.一种药物组合物，该组合物包含如权利要求1-9中任一项所述的式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物或其可药用盐或生物前体，以及一种可药用的稀释剂或载体。
12.如权利要求1-9中任一项所述的式(Ⅰ)或式(Ⅰa)化合物或其可药用盐或生物前体在药物中的应用，尤其是在用于治疗或预防人还原病毒感染的药物中的应用。
13.如权利要求1-9中任一项所述的式(Ⅰ)或式(Ⅰa)化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防人还原病毒感染的药物中的应用。
全文摘要
下式化合物及其可药用盐和生物前体是还原病毒蛋白酶的抑制剂，可用于治疗和预防人的还原病毒感染。上式中，各取代基和字母的含义如说明书中所述。
文档编号C07D401/00GK1077716SQ9310320
公开日1993年10月27日 申请日期1993年3月23日 优先权日1992年3月25日
发明者C·W·格林格拉斯, S·D·A·施特里特 申请人:美国辉瑞有限公司
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