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2021-02-01 16:02:40|
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起点商标网 专利名称：具有脲基n-端的抗疱疹肽衍生物的制作方法
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本发明是关于具有抗病毒性质的肽衍生物及使用这些衍生物治疗病毒感染的方法。更明确地说，本发明关于具有抗疱疹病毒活性的肽衍生物(下文简称“肽”)，和含这种肽的药物组合物，以及使用该肽以抑制疱疹病毒复制和治疗疱疹感染的方法。
疱疹病毒对人类和动物能引发多种疾病。例如，单纯性疱疹病毒，1型和2型(HSV-1和HSV-2)是分别造成唇疱疹和生殖器损伤的原因;水痘带状疱疹病毒(VZV)可引起水痘和带状疱疹;非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)引发感染性单核细胞增多症。
在过去二十年中，一类称嘌呤和嘧啶核苷类似物已得到研究人员的重视，被用来作新治疗剂研究以治疗疱疹病毒感染。结果，已有多种核苷类似物被发展为抗病毒剂。至今最成功的是无环鸟苷(acyclovir)，它选用为治疗生殖器单纯性疱疹病毒感染。
尽管有了某些明显的进展，但对治疗疱疹病毒有效的和安全的治疗药剂的需求依然存在。为了对此领域目前的治疗药剂作一研究可见M.C.Nahata专论，“抗病毒药物医学动力学，副作用和治疗使用”，J.Pharm.Technol.，3，100(1987)。
本申请公开了一类具有抗疱疹病毒活性的肽衍生物。这些肽对疱疹病毒有相当的选择作用，并结合大幅度的安全性，使其成为抗疱疹病毒感染所需的制剂。
下列文献公开了与抗疱疹活性有关系的一些肽和肽衍生物B.A.Dutia等人，Nature，321，439(1986)，E.A.Cohen等人，Nature，321，441(1986)，J.H.Subak-Sharpe等人，英国专利GB 2185024(1987年7月8日)，P.Gaudreau等人，J.Biol.Chem.，262，12413(1987)，E.A.Cohen等人，美国专利US 4795740(1989年1月3日)，R.Freidinger等人，美国专利US 4，814，432(1989年3月21日)，V.M.Garskey等人，美国专利US 4，837，304(1989年6月6日)，R.Colonno等人，美国专利US 4，845，195(1989年7月4日)，P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，33，723(1990)，J.Adams等人，欧洲专利EP 408，973(1991年1月23日)，P.L.Beaulieu等人，欧洲专利EP 411，332(1991年2月6日)，J.Adams等人，欧洲专利EP 411，333(1991年2月6日)，J.Adams等人，欧洲专利EP 411，334(1991年2月6日)，R.L.Tolman等人，欧洲专利EP 412，595(1991年2月13日)，W.T.Ashton等人，欧洲专利EP 438，873(1991年7月31日)，P.L.Beaulieu等，欧洲专利EP 461，546(1991年12月18日)和P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，35，346(1992)。
上述报告中的主题肽从其特征性的结构和生物学差异能与本申请的肽进行区别。
下文所使用的缩写和符号将在本申请书中“发明细节”部分中定义。
本发明的肽或其治疗上可接受的盐类由通式1代表
其中，A是R4NHC(O)，其中R4是(ⅰ)(2-10C)烷基;
(ⅱ)不饱和的烷基，它选自1-(2-丙烯基)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基;
(ⅲ)苯基(低级)烷基或以低级烷基、卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基单取代的苯基(低级)烷基;
(ⅳ)1-(低级烷基)-(低级环烷基);
B是氨基酸残基或通式NHCHR5C(O)衍生的氨基酸残基，其中R5是1-三环｛3.3.1.13.7｝癸基，低级烷基或以羧基、羟基、巯基或苄氧基单取代的低级烷基;
R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级烷基)或NR6R7，其中R6为氢或低级烷基而R7是低级烷基，或R6和R7经和它们相连的氮原子连接共同形成吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基;
R2是氢或低级烷基而R3是低级烷基，或R2为氢和R3是苯基-(1-4C)烷基，或R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成低级环烷基;而D是NHR8其中R8为(4-9C)烷基，或D是NHCH(R9)-Z，其中R9是(4-9C)烷基、低级环烷基或(低级环烷基)-(低级烷基);
Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10，其中R10是低级烷基。
本发明的肽的优选类或其治疗上可接受的盐类，是以通式1代表，其中A是(2-10C)烷基氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、苄基氨羰基、(1-丙基环戊基)氨羰基、(1-乙基环己基)氨羰基或(1-丙基环己基)-氨羰基;B是NHCHR5C(O)，其中R5为1-三环-｛3.3.1.13.7｝癸基，低级烷基或用羧基、羟基或巯基单取代的低级烷基;而R1、R2、R3和D如上所定义。
由式1代表的肽的更优选的类或其治疗上可接受的盐类，其中A是丙基氨羰基、(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)氨羰基、(1-甲丙基)氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基、(1，1-二甲丁基)氨羰基、(1，1，3，3-四甲丁基)氨羰基、(1-乙丁基)-氨羰基、(1-丙丁基)氨羰基、(1-乙戊基-氨羰基、(2-丙戊基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基-氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙环戊基)氨羰基、(1-乙环己基)氨羰基、(1-丙环己基)氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基，或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;B是如下氨基酸的残基(S)-α-氨基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸、(S)-2-氨基-3-羟基-3-甲基-丁酸，或(R)-2-氨基-3-巯基-3-甲丁酸，或选自Tbg，Val，Asp{(R)-Me}和Asp(diMe)的氨基酸残基;R1是低级烷基、低级环烷基、N，N-二甲氨基、N，N-二乙氨基、吡咯烷基或哌啶子基;R2是氢而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基或苄基，而且含有R2和R3的碳原子具有(R)-构型，或R2和R3分别为甲基或乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子共同形成环丁基、环戊基或环己基;而D是NHR8，其中R8是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基及2，2-二甲戊基，或D是NHCH(R9)-Z，其中含有R9的碳原子有(S)-构型，R9是1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或环己丙基，而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10其中R10是甲基、乙基或丙基。
最优选的肽类或其在治疗上可接受的盐类，是由通式1代表的，其中A是(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)-氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基。(1-丙丁基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基或(1-丙环戊基)氨羰基;B、R1、R2和R3如上述所定义;而D是NHR8其中R8为2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲-丙基、2，2-二甲丁基或3，3-二甲丁基或D为NHCH(R9)-Z，其中含有R9的碳原子有(S)-构型。R9是2，2-二甲丙基，Z为CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10，其中R10是甲基、乙基或丙基。
本发明范围也包括药物组合物，它含有抗疱疹病毒有效剂量的式1肽，或其在治疗上可接受的盐类，和医药上或兽医上可接受的载体。
本发明范围还包括化妆组合物，它含有式1的肽，或其治疗上可接受的盐类，和适用于局部施用的生理学上可接受的载体。
本发明一重要方面包含给予哺乳动物以抗疱疹病毒有效量的式1肽，或其在治疗学上可接受的盐类，以治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法。
本发明另一重要方面，包含用疱疹病毒核糖核苷酸还原酶的抑制剂量的式1肽或其治疗上可接受的盐类与病毒相接触而抑制疱疹病毒复制的方法。
又一个方面，包含对哺乳动物以抗疱疹病毒有效量的式1肽，或其治疗学上可接受的盐类，与抗病毒核苷类似物的结合物而给药，用来治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法。含有该结合物的药物组合物亦属本发明范围之内。
制造式1的肽的工艺描述于下文。
另外，通式1可描述为
涉及氨基酸或氨基酸衍生物的术语“残基”，意味从相应的α-氨基酸通过除去羧基上的羟基和α-氨基上的氢而衍生的基团。
一般，本申请用于表示氨基酸和保护基团的缩写是根据生物化学国际协会(IUB)和理论与应用化学国际协会(IUPAC)生物化学命名委员会的推荐，参见欧洲生物化学杂志Eur.J.Biochem，138，9(1984)。例如，Val，Ile，Asp，和Leu分别代表L-缬氨酸、L-异亮氨酸、L-天门冬氨酸的残基。
位于式1肽的主要线性轴(即主链)上的不对称碳原子，除了末端基A和(D的)Z但包括当D是前文定义为NHCH(R9)-Z时则会有R9的碳原子，具有S-构型。但是，有一例外，当B是含有2-巯基烷基支链的氨基酸残基时，则位于含有该支链的主链上的碳原子，优选地有R-构型。位于氨基酸或衍生物的氨基酸残基支链上的，或位于末端基A，或当D代表如上定义为NHR8时之末端基D中则不对称碳原子，可以有S-或R-构型。
符号“Tbg”代表(S)-2-氨基-3，3-二甲丁酸的氨基酸残基，符号“γMeLeu”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊酸的氨基酸残基，符号“γMe亮氨醇”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊酸但从α-氨基团除去一个氢。
符号“Me”、“Et”、“Pr”及“Bu”分别代表甲基、乙基、丙基和丁基的烷基基团。
例如，符号“MePr2C”和“PrMe2C”分别代表1-甲基-1-丙丁基和1，1-二甲丁基。
本文所用的其他符号是Asp(CyBu)代表(S)-α-氨基-1-羧环丁烷乙酸残基;Asp(CyPn)代表(S)-α-氨基-1-羧环戊烷乙酸残基。符号“Asp(diMe)”代表2(S)-氨基-3，3-二甲丁二酸，即3，3-二甲基-L-天门冬酸的残基。类似地，Asp(diEt)、Asp｛(R)-Me}和Asp{(R)-iPr｝分别代表3，3-二乙基-L-天门冬酸，3(R)-甲基-L-天门冬酸即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-甲基丁二酸和3(R)-(1-甲乙基)-L-天门冬酸的残基。
本文所用的术语“卤素”是指选自溴、氯、氟或碘的卤素基。
本文所用的术语“金刚烷基”是指“1-三环｛3.3.1.13.7｝癸基”。
本文所用术语“(2-10C)烷基”，不论单独或与其他基结合时，都表示含有2至10个碳原子的直链或支链烷基，包括乙基、丁基、1-甲丙基、1-乙丙基、1-丙丁基、2-丙戊基等等。
本文所用术语“(4-9C)”烷基，意指含有4至9个碳原子的直链或支链烷基，例如，包括1-甲丙基、2-甲丙基、1，2，2-三甲丙基、3，3-二甲丁基、1-乙基-2，2-二甲丁基及4，4-二甲戊基。
本文所用术语“低级烷基”，不论单独或与另外基结合，意谓含有1于6个碳原子的直链烷基及含有3至6个碳原子的支链烷基，包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基及1，1-二甲乙基。
本文所用术语“1-(低级烷基)-(低级环烷基)”，意谓在碳1位置上含有低级烷基取代的低级环烷基，例如，1-乙环丙基、1-乙环己基、1-丙环戊基及1-丙环己基。
本文所用术语“低级环烷基”，不论单独或与其他基相结合，是指含有3至6个碳原子的饱和环烃类基，包括环丙基、环丁基、环戊基及环己基。
本文所用术语“低级烷氧基”，是指含1至4个碳原子的直链烷氧基和含有3至4个碳原子的支链烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲乙氧基、丁氧基及1，1-二甲乙氧基。后者的基通常又称做叔-丁氧基。
本文所用术语“苯基-(1-4C)烷基”，意谓苯烷基，其中烷基部分是含1至4个碳原子的直链或支链烷基，包括苄基、2-苯乙基、3-苯丙基、2-甲基-2-苯乙基｛PhCH(CH3)CH2｝、1-乙基-2-苯乙基｛PhCH2CH(C2H5)｝等等。
本文所用术语“苯基(低级)烷酰基”，不论单独或与其他基相结合的，是指以苯基取代的1-氧烷基，其中1-氧烷基部分是含有2-6个碳原子的直链或支链1-氧烷基;例如，1-氧-3-苯丙基及1-氧-5-甲基-6-苯己基。
本文所用术语“药物学上可接受的载体”或兽医上可接受的载体”，意谓无毒的一般的用于有效组份的惰性载体，它对有效成分无不良的效应。
本文所用术语“生理学上可接受的载体”，是指一种或多种无毒赋形剂的可用的化妆品赋形剂，它不会与其中所含的有效成分反应或降低其效果。
本文所用术语“兽医学上可接受的载体”，是指对家畜给药物用的、生理学上可接受的赋形剂，它含有一种或多种无毒的药物学上可接受的赋形剂，它不与药物反应或降低药物效应。
本文所用术语“有效量”意谓对抗病毒剂预先测定的抗病毒量，即一种足以有效地对抗体内病毒有机体的剂量。
本文所用术语“偶合剂”，是指一种能使一氨基酸或肽的游离羧基与另一氨基酸或肽的游离氨基进行脱水偶联反应而在反应物间生成酰胺键的试剂。同样地，这种试剂可使酸与醇进行偶合而生成相应的酯类。此试剂能增进或便于通过活化羧基而进行脱水偶联反应。这种偶合剂和活性基肽化学的普通教科书中有论述;例如E.Schroeder和K.L.Lübkr的《肽(The Peptides)，Vol.1，Academic Press，New York，N.Y.，1965，pp.2-128，和K.D.Kopple的“肽和氨基酸(Peptides and Amino acids)，W.A.Benjamin，Inc.，New York，N.Y.1966，pp.33-51。偶合剂的实例，如二苯膦酰基叠氮化物、1，1′-羰基二咪唑、二环己基碳化二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺，或在二环己基碳化二亚胺存在下的1-羟基苯并三唑。一种很实用的偶合剂是(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲氨基)-鏻六氟磷酸盐，此试剂描述于B.Castro等人的“四面体快报(Tetrahedron Letters)，1219(1975)和D.Hudson的J.Org.Chem.，53，617(1988)中。可单独或在有1-羟苯并三唑存在下使用。另一种很实用的偶合剂是在市场上可买到的2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基
四氟硼酸盐。
通式1代表的肽的制备可结合使用普通用于肽合成中的方法，例如经典的氨基酸残基和/或肽碎片的溶液偶联反应。例如这种方法描述于上述的E.Schroeder和K.Lübke论著在教课书中也有，如E.Gross等人的“肽分析，合析，生物学”(The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology)，Academic Press，New York，N.Y.，1979-1987，卷1至卷8，及J.M.Stewart和J.D..Young的“固相肽合成”(Solid Phase Peptide Synthesis)，2nd ed.，Pierce Chem.Co.，Rockford，IL，USA，1984。
前述肽制备方法的共同特点，是使用合适的保护基对各种氨基酸残基或衍生的氨基酸残基(或依据需求，也对肽的非肽碎片)的反应支链基团进行保护，以避免在该位点发生化学反应，直至最终地除去该保护基团为止。另外，共同点是当本体在羧酸基团反应时，对氨基酸或碎片上的α-氨基要保护，之后，再选择性除去α-氨基保护基团以便在该位点发生后续的反应。再一个共同特点，是用合适的保护基团对氨基酸残基或肽碎片的C-端的羧基作初期的保护(若有，则将成为肽C-端的功能团)，以避免在该位点发生化学反应直至所需的肽序列已合成，再除去此保护基团。
一般说来，式1的肽可依肽的适当的氨基酸的或衍生物的氨基酸残基的，和肽的非肽的片段的(如肽的N-端脲基残基A)顺序的序列逐步偶合来制备，若需要也以适当保护，并于完成逐步偶合得到式1的肽后再除去所有的保护基团(若存在时)。
一种用于结合式1中的N-端脲基残基“A”的方便偶合方法，是依据制备尿素的经典方法｛参见，例如，P.A.S.Smith，Org.Reactions，Ⅲ，376-377(1946)｝，由此将欲结合的相对应的残基的异氰酸酯与合适保护的片段(例如，被保护的H-B-OH或H-B-NHCH{CH2C(O)R1｝C(O)-D片段，其中B、R1和D的定义见上述)的末端α-氨基，在逐步装配过程中进行反应。另外，所需的异氰酸酯可从市场购买或由其易得的相应的酸，依据J.Weinstock的方法(J.Org.Chem.，26，3511(1961)｝来制备。
比较特殊的方法将于后述之实施例中说明。
本发明式1的肽可以按治疗学上可接受的盐形式制得。当特定的肽具有作为碱功能的残基的情况下则这类盐的实例，是与有机酸，例如乙酸、乳酸、丁二酸、甲磺酸或对-甲苯磺酸以及多元酸如单宁酸或羧甲基纤维素，以及还有与无机酸如氢卤酸，如盐酸，或硫酸，或磷酸所生成的盐类。若需要，某特定酸加成盐可以转换成为另一种酸加成盐，例如，转为无毒的、药物学上可接受的盐，依据R.A.Boissonnas等描述的方法(Helv.Chim.Acta，43，1849(1960)｝，用适当的离子交换树脂处理而得到。
当特定的肽，具有一个或多个游离羧基基团的情况下，这种羧基盐的实例，是与钠、钾或钙阳离子，或与有机碱例如三乙胺或N-甲基吗啉所生成的盐。
抗疱疹活性式1的肽的抗病毒活性，可通过生化、微生物学和生物学的方法，根据化合物对单纯性疱疹病毒，1型和2型(HSV-1及HSV-2)和其他疱疹病毒，例如水痘带状疱疹病毒(VZV)及非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)的复制的抑制效果来说明。
在下述的实施例中，指出了式1代表性的肽，对疱疹核糖核苷酸还原酶的抑制效应。值得注意的是，与疱疹核糖核苷酸还原酶的特异性的抑制作用有关的，这些肽对正常细胞复制所需要的细胞核糖核苷酸还原酶活性的这种影响是相当小的或没有影响。
证明式1肽对病毒复制的抑制效应的方法是细胞培养技术;参见，例如T.Spector等人的论文(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，4254(1985)｝。
这些肽的疗效可用实验动物来证明，例如，可用一种基于单纯性疱疹病毒-引发的眼病的老鼠模样的检测来试验抗病毒药，参见C.R.Brandt等人报道｛J.Virol.Meth.，36 209(1992)｝。
使用本发明肽，或其在治疗学上可接受的盐作为抗病毒剂时，它是按在含一种或多种药物学上可接受的载体的赋形剂中的形式，以局部或全身性地施用于温血动物例如人类、猪或马，其组成的比例是由肽的溶解性和化学性质，所选用给药途径和标准生物实验来决定。作局部给药时，肽在药物学上可接受的赋形剂中配制成含有效制剂量为0.1至5%优选的为0.5至2%。这种制剂可呈溶液、霜剂或洗剂。
当作全身性给药时，式1的肽可用药物学上可接受的赋形剂或载体配制成以静脉内、皮下或肌肉内注射方式给药。以注射方式给药时，最好将肽溶在灭菌水赋形剂中。赋形剂也可含有其他溶质例如缓冲剂或防腐剂以及足量的药物学上可接受的盐类或葡萄糖以制成等渗溶液。
适用于上述制剂的赋形剂或载体，描述于标准的药物教科书中。例如，在Remington的Pharmaceutical Sciences，18th ed，Mack Publishing Company，Easton，Penn.，1990中。
肽的剂量随给药方式和选用的特定有效剂而改变。而且，它也随治疗中的特定宿主而变化。通常，治疗是以小增量开始直到在该治疗状况下达到最佳效果。一般而言，肽的最佳给药量是达到可得到抗病毒有效结果而不引起任何伤害或毒害的副作用的浓度。
关于局部使用，肽是按适合局部用制剂的方式对受感染的体部位皮肤给药，例如对皮肤或口腔或生殖腔，以其足以覆盖感染面积的量给药。治疗必须重复，如每4-6小时一次，直到伤害治愈。
关于全身投药，式1的肽的给药剂量虽然会有上述变化，但可按体重每公斤每天以10微克至500微克的剂量给药。但是，为了得到有效的结果，最好以每天每公斤以约10微克至200微克范围内给药。
本发明的另一方面包括一种化妆品组合物，它含有疱疹病毒预防量的式1肽，或其治疗学上可接受的盐类，与生理学上可接受的化妆品的载体。在这种制剂中也可含有其他成分，例如皮肤软化剂。本发明的化妆制剂是用于预防地避免皮肤疱疹伤害的发生。该制剂可于夜间施用于皮肤的易感染区。通常，化妆品组合物比用于局部使用的有关药物组合物含有更少的肽。在化妆品组合物中肽的较佳用量范围是重量的0.01至0.2%。
虽然上述公开的制剂对治疗疱疹病毒感染表明是有效的且相对安全的药疗法，但不排除这些制剂与其他抗病毒药疗法或药剂共同使用以获得良好的效果。此种其他抗病毒药疗法或制剂包括抗病毒核苷类，例如无环鸟苷及抗病毒表面活性剂或抗病毒干扰素，这类药物公开于S.S.Asculai和F.Rapp的美国专利US 4507281(1985年3月26日)中。
明确地说，有关同时给药以治疗疱疹病毒感染，业已发现通过与式1的肽结合使用一种抗病毒核苷类似物，可以协同地提高抗病毒核苷类似物的抗疱疹有效性，但不同时增强其毒性效果。由此，本文提供一种用于治疗哺乳动物的疱疹感染的药物组合物，它含有药物学上或兽医上可接受的载体以及一种抗病毒核苷类似物或其药物学上可接受的盐，和抑制核糖核苷酸还原酶的式1肽或其药物学上可接受的盐的有效量的结合物。
本发明也提供治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法。该方法包括对哺乳动物给药以抗疱疹病毒有效量的由式1化合物或其药物学上可接受的盐类和抗病毒核苷类似物或其药物学上可接受的盐类的结合物。
用于这种结合的抗病毒核苷类似物是一种可酶催化(体内)转变为疱疹DNA聚合酶的病毒DNA聚合酶抑制剂，和/或用于疱疹DNA聚合酶的另一酶作用物。此种抗病毒核苷类似物可选自已知的核苷类似物。本发明中优选的核苷类似物包含无环鸟苷及其类似物，例如，式2的化合物或其治疗学上可接受的盐。
其中，R11是氢、羟基或氨基。(式2中，R11是羟基时，则为无环鸟苷)。
其他用于本发明的优选抗病毒核苷类似物包括阿糖腺苷(Vidarabine)、碘苷(Idoxuridine)、三氟胸苷(Trifluridine)、羟甲无环鸟苷(Ganciclovir)、伊多西啶(Edoxudine)、布罗瓦维(Brovavir)、弗西它平(Fiacitabine)、潘西克罗维(Penciclovir)、法西克罗维(Fanciclovir)及洛西克罗维(Rociclovir)。
当用于上述定义的核苷类似物和式1肽的结合物的抗病毒或抗疱疹活性时，术语“协同效应”是指抗病毒或抗疱疹效应大于该结合的二种单独成分的预测效果之和。
当使用本发明的结合物来治疗疱疹感染时，将是在一种或多种药物学上可接受的载体中的结合物形式，对温血动物，例如人类、猪或马给药，其比例将决定于核苷类似物及式1肽的溶解性和化学性质，选用的给药途径，标准生物实施，及这两种活性成分相对量以达到协同的抗病毒效应。优选地，结合物是局部给药。例如，此两种活性制剂(即抗病毒核苷类似物及式1肽，或其治疗上可接受的盐)可在药物学上可接受的赋形剂中配制成溶液、乳剂、霜剂或洗剂。这种制剂可含有0.01至1.0%(以重量计)的核苷类似物或其治疗学上可接受的盐，和约0.05至1%(以重量计)或1肽或其治疗学上可接受的盐。
在任何情况下在药物组合物中这两种活性成分的用量要达到协同抗疱疹效应。
下列实施例将进一步阐明本发明。温度以摄氏度表示。溶液百分率或比例，除非特别指明，是体积对体积之比的关系。核磁共振谱(NMR)用Bruker 200MHz光谱仪记录，化学位移(δ)按ppm(百万分之一)报导。在实施例中所用的缩写有Boc叔-丁基氧羰基;Bzl是苄基，Et是乙基;EtOH是乙醇;EtOAc是乙酸乙酯;Et2O是乙醚;Me是甲基;MeOH是甲醇;Pr是丙基;TLC是薄层色谱，THF是四氢呋喃。
实施例1异氰酸1-乙丙酯的制备标题化合物的制备是按照J.Weinstock的改进法(J.Org.Chem.，26 3511(1961)。2-乙基丁酸(10.0克，0.086摩尔)先悬浮于水中，再加入足够量的丙酮以完全溶解。这溶液冷却至0℃后加入在丙酮(175毫升)中的三乙胺(10.2克，14毫升，0.10摩尔)溶液。其后，保持反应温度0℃，慢慢加入在丙酮(45毫升)中的氯甲酸乙酯(12.5克，0.11摩尔)溶液。这混合物在0℃搅拌30分钟后，滴加H2O(30毫升)中的叠氮化钠(8.6克，0.13摩尔)溶液。在0℃搅拌1小时后，倒入过量冰水中，用甲苯(30毫升)萃取水相混合物。有机相用MgSO4干燥，然后过滤。将滤液保持20℃至N2气停止释放为止。用1H NMR测定在甲苯液中的异氰酸1-乙丙酯的浓度是290毫克/毫升(8.4克，产率86%)。将这产品的甲苯液在室温(20-22℃)氩气下贮存至使用。
依据本实施例的方法，用当量2-丙戊酸代替2-乙丁酸，则得到异氰酸1-丙丁酯。
实施例2d，1-α(叔-丁氧羰氨基)三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸苄酯(Boc-NH-(R，S)-CH(金刚烷基)C(O)-OBzl)的制备在隋性气氛下，将三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸(美国Aldrich化学公司Inc，Milwaukee，WI)在1，8-二氮杂双环｛5.4.0｝十一碳-7-烯存在下，在乙腈和4℃时，与苄基溴(1摩尔当量)反应而转化为其相应的苄基酯，产率98%。
后者苄基酯经下列步骤而转化为标题化合物在氩气氛和搅拌下，将1.4M丁基锂(6.5毫升，9.1毫摩尔)的己烷溶液加到冷却的(0℃)的二异丙胺(1.08克，1.5毫升，10.7摩尔)的THF(15毫升)溶液中。得到的溶液在0℃搅拌15分钟后，将其滴加入在-78℃温度下的上述的苄基酯(2.0克，7.04mmol)的无水THF(15毫升)溶液中。将这混合物在-20℃搅拌30分钟，再冷却至-78℃。将2，4，6-三异丙基苯磺酸基叠氮化物(2.38克，7.69mmol)的无水THF(15毫升)溶液一次加入该冷却混合物里。将此混合物于20℃搅拌15分钟后，用冰醋酸(2毫升)骤冷。之后，在25℃搅拌16小时。在减压下除去溶剂。残留物溶于EtoAc中。这溶液用1.0当量HCl水溶液、10%NaHCO3水溶液和盐水依次洗涤，用MgSO4干燥，然后减压下蒸发至干。残留物用色层分离法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，99∶1)纯化，得到d，1-α-叠氮基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸苄酯(251毫克)。
将后者化合物，按照N.Maiti等人的方法(Tetrahedro Letters 27，1423(1986))，在甲醇中用氯化锡(Ⅱ)还原，得到d，1-α-氨基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸苄酯。再将该氨基酸苄酯与重碳酸二-叔丁酯(1.05摩尔当量)和三乙胺(1.05当量)在无水THF中在4℃，氩气氛下反应15分钟，再在室温反应4小时，接着用一般操作(参考下文实施例6(b)段)，得到标题化合物，H1NMR(CDCl3)δ1.45(s，9H)，1.5-2.0(m，15H)，4.05(d，J＝9Hz，1H)，5.12(d，J＝9Hz，1H)，5.18(m，2H)，7.38(m，5H)。
实施例3中间体Boc-Asp(吡咯烷基)-OH的制备将N，N′-羰基二咪唑(24.32克，0.15摩尔)以少量分次加入在搅拌的Boc-Asp-OBzl(47.60克，0.147摩尔)的乙腈(500毫升)溶液中。45分钟后，将反应混合物冷却至0℃，再滴入吡咯烷(13.4毫升，0.16摩尔)。再将此混合物在室温下搅拌以完成反应(由TLC检测，约需3小时)。在减压下除去溶剂，而残留物溶于EtOAc(500毫升)。用10% HCl水溶液(3×100毫升)、1N NaOH(2×100ml)洗涤有机相，再用MgSO4干燥。在减压下使有机相蒸发，得无色油，使其放置固化。将该产品在乙醇(200毫升)溶液中，用200毫克20%(重量)Pd(OH)/碳作催化剂在大气压下进行氢解20小时。反应混合物通过硅藻土过滤。滤液经蒸发得残留物，从己烷/乙醚重结晶，纯化而得所需产品(37.10克，收率88%)，熔点114-116℃。该产品结构用NMR证实。
在本实例的方法中用合适的胺(如二乙胺或吗啉)代替吡咯烷便可得到相应的N-取代的天冬酰胺类似物。
实施例4中间体Boc-2(S)-氨基-5-环戊基-4-氧戊酸的制备将Boc-2(S)-氨基-4-酮基-1，6-己二酸1-苄酯6-(4-硝苯基)甲酯(4.8克，9.6毫摩尔)溶于DMF(100毫升)。在溶液中加入Na2CO3(4.07克，38.4毫摩尔)和1，4-二碘丁烷(3.59克，11.6毫摩尔)。在室温将此混合物搅拌18小时，再于50℃加热3小时。使溶剂蒸发后，得到残留物用EtOAc溶解，用1N HCl水溶液和水洗涤所得溶液，用MgSO4干燥和蒸发得粗产品。用色层法｛SiO2，洗脱剂己烷-EtOAc(4∶1)｝纯化此粗产品，得标题化合物的相应的苄酯(4.3克)。将此苄酯进行氢解作用(20% Pd(OH)2/C，在甲醇中，18小时)和进一步处理(见下文实施例8(d)段)而得到标题化合物(140毫克)。产品的NMR和质谱与预测结构相一致。
按本实施例所述相似方法，用合适的烷基碘可制得在其支链上有酮基的类似衍生的氨基酸中间体。
实施例53-烷基-或3，3-二烷基-L天门冬酸中间体及2(S)-氨基-3-(1-羧环烷基)乙酸中间体的制备这些中间体，可用于制备式1化合物，其中R2和R3如本文所定义。其制备可依据M.Bochenska和J.F.Biernat的方法(Rocz.Chem.，50 1195(1976);见Chem.Abstr，86 43990r，(1977))。
例如，(±)-Boc-Asp(cyPn)(OBzl)-OH的制备如下将氢化钠(4.5克，60%分散在矿物油中，122毫摩尔)按少量，在5小时内加入(1-溴环戊烷)羧酸乙酯(17.1克，77.3毫摩尔)，制备描述于D.N.Harpp等人的J.Org.Chem.，46 3420(1975))和新鲜蒸馏的异氰乙酸乙酯(12.7克，122毫摩尔)在二甲亚砜及乙醚(1∶1，120毫升)混合物中的溶液内。所得红色浆料在室温搅拌16小时后，用氯化铵饱和的水液(5毫升)处理。所得混合物用水(500毫升)稀释，并用EtOAc提取二次，合并EtOAc层液，用水洗二次后再用盐水洗。干燥(用MgSO4)，过滤和浓缩提取液得暗红色油。这油状物通过5×25厘米硅胶柱快速色层(洗脱液∶EtOAc-己烷，1∶10)。浓缩适当的馏份便得α-氰基-1-羧环戊乙酸二乙酯，为清洁无色粘性液体(13克，66%)。
将后者化合物(13克，51毫摩尔)与6N盐酸水溶液(60毫升)在0℃混合。溶解后，反应混合物在油浴中于120℃加热24小时。之后用干冰旋转蒸发器去除水份。得到的白色固体在高真空下干燥18小时。干燥物溶解在二噁烷(50毫升)和3N NaOH水液(52毫升)的混合物中。将重碳酸二(叔丁)酯(14.6克，67毫摩尔)在二噁烷(25毫升)中的溶液加入该溶液中。混合物在室温搅拌16小时。在其期间再加入3N NaOH水液使混合物pH保持约10。混合物用水(500毫升)稀释并用乙醚(200毫升)萃取二次。用固体柠檬酸使水相呈酸性(pH＝3)并用EtOAc萃取(2×300毫升)。合并的EtOAc提取液用水(3×)和盐水洗，干燥，过滤。浓缩提取液，得到Boc-Asp(cyPn)-OH，为白色固体(14克，96%)。
在后者化合物(7.2克，25毫摩尔)的无水DMF(50毫升)溶液中，加入K2CO3(7.6克，55毫摩尔)和苄基溴(6.6毫升，55毫摩尔)。这反应混合物在室温搅拌约7小时。然后将反应混合物注入水(500毫升)和EtOAc(350毫升)的混合物里。用水(2×)和盐水洗涤有机层液。干燥，过滤及浓缩萃取液，得浅黄色粘性液体。这液体进行快速色层(SiO2，洗脱剂己烷-EtOAc，12 1)。将合适的收集液浓缩得到Boc-Asp-(cyPn)-OH的二苄基衍生物，它是低熔点白色固体(11克，94%)。该二苄基产品溶解在THF(100毫升)中并加入LiOH水液(1N，23.5毫升)。4小时后，反应混合物倒入水中用乙醚萃取3次。用10%柠檬酸水液使水相呈酸性，再用EtOAc萃取2次。合并EtOAc层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到(+)-Boc-Asp(cyPn)(OBzl)-OH，是清彻无色胶质(7.3克，82%)。
实施例6偶合反应的一般步骤(也参见R.Knorr等人报道，Tetrahedron Letters.，30，1927(1989))。
将第一个反应物，即游离胺(或它的盐酸盐)溶解在CH2Cl2或乙腈中，溶液冷却至4℃。在氮气氛下，将4当量的N-甲基吗啉加入搅拌的溶液中。20分钟后，加入1当量的第二个反应物即游离羧酸，和1.05当量的偶合剂。(为此目的、实用且有效的偶合剂是(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐或更佳的是2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基
四氟硼酸盐。)反应用TLC进行监测。反应完成后，减压下蒸去CH2Cl2(或乙腈)。残留物溶于EtOAc。用1N柠檬酸水液，10% Na2CO3水溶液及盐水依次洗涤。用MgSO4干燥有机层液，过滤及在减压下浓缩至干。残留物再在硅胶上按Still的快速色层技术(W.C.Still等人，J.Org.Chem.43，2923(1978))进行纯化。
实施例7中间体H-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3｛CH2OBzl的制备(a)(S)-α-叠氮基-1-｛(苯甲氧基)羰基｝-环戊烷乙酸此化合物从2-氧杂螺｛4.4｝壬烷-1，3-二酮[描述于M.N.Aboul-Enein等人的Pharm.Acta Helv.，55，50(1980)]，根据使用Evan助剂的不对称重氮化方法来制备，参见D.A.Evans等人，J.Amer.Chem.Soc.，112，4011(1990)。化合物的H1NMR(CDCl3)表明δ4.55(s，1H)，5.12(s，2H)及7.4(m，5H)。此化合物将用于本实施例之(c)节。
(b)NH2-(S)-CH{CH2C(CH3)3｝CH2OBzl根据A.Giannis和K.Sandhoff的方法(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，28，218(1989))将H-γMeLeu-OH用LiBH4/Me3SiCl还原，得氨基醇NH2-(S)-CH{CH2-C(CH3)3}CH2OH。该氨基醇(812毫克，6.2毫摩尔)、三乙胺(659毫克，6.51毫摩尔)和二-叔丁基碳酸酯(1.42克，6.51毫摩尔)的混合物在无水THF(15毫升)中在氮气氛和4℃下搅拌15分钟。再在室温搅拌4小时。减压下蒸去THF。残留物溶于EtOAc。用10%柠檬酸水液，5% NaHCO3水液及盐水洗涤溶液。有机相用MgSO4干燥再在减压下浓缩至干。用快速色层分离法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，2∶1)纯化残留物，得Boc-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3｝CH2OH。
在Boc-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OH的苄基氯(13毫升)的溶液中，依次加入四丁铵硫酸氢化合物(106毫克)和50% NaOH水溶液(3ml)。所得混合物在35-40℃搅拌90分钟，用EtOAc稀释，并用水和盐水洗涤。用MgSO4干燥有机层后，减压下浓缩至干。残留物溶于己烷。此溶液倒入SiO2，用己烷洗脱柱以去除苄基氯，再用己烷-EtOAc(2∶1)洗脱而得Boc-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OBzl。后者化合物的1H NMR(CDCl3)表明δ1.0(s，9H)，1.42(s，10H)，3.42(d，J＝4Hz，2H)，3.88(宽，1H)，4.54(t，3H)，7.23-7.4(m，5H)。该化合物(1.28克，3.99毫摩尔)溶在6N HCl/二噁烷(10毫升)中。在4℃，氮气氛下搅拌溶液45分钟。溶液蒸发后，得所需化合物的盐酸盐(1.05克)。此化合物不需再纯化而直接用于本实施例下节步骤中。
(c)本实施例的标题化合物按照实施例6的偶联步骤，使用上节中的NH2-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OBzl的盐酸盐作为第一反应物，本实施例(a)节制得的(S)-α-叠氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝环戊烷乙酸作为第二个反应物，可得N-｛(S)-1-苄氧甲基-3，3-二甲丁基｝-(S)-α-叠氮基-1-｛(苯甲氧基)羰基｝环戊烷乙酰胺。依据N.Maiti等人方法(Tetrahedron Letters，27，1423(1986))，将后者化合物经氯化锡(Ⅱ)在甲醇中还原，得到本实施例标题化合物。此化合物之H1NMR(CDCl3)表明，δ0.98(s，9H)，1.22-1.9(m，2H)，3.4(d，J＝4Hz，2H)，3.64(s，1H)，4.18(宽m，1H)，4.52(s，2H)，5.12(s，2H)，7.1-7.38(宽m，10H)。
实施例8Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇的制备(a)在1，8-二氮杂双环｛5.4.0｝十一碳-7-烯存在下，在乙腈中和氩气氛下，将Boc-Tbg-OH(7.5克，32.5毫摩尔)与苄基溴(1.2摩尔当量)，在室温反应16小时，而将其转化为对应的苄酯。产物用一般方法分离，用快速色层法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，9∶1)纯化，便得无色油状的苄酯(8.83克，产率85%)。
(b)后者苄酯(242毫克，0.75毫摩尔)在6.3N HCl/二噁烷(4毫升)中的溶液，在氮气下，0℃搅拌45分钟，然后减压浓缩制得相应的N-去保护的氨基酸衍生物H-Tbg-OBzl，按其盐酸盐形式存在。
(c)将后者盐(7.71克，30毫摩尔)和三乙胺(6.5克，9.06毫升，65毫摩尔)的溶液在0℃搅拌5分钟。加入(1-丙丁基)异氰酸酯(65毫摩尔)的甲苯溶液(浓度＝250毫克/毫升，制备见实施例1)。其后，该反应混合物在室温搅拌16小时。减压下浓缩反应混合物。残留物溶于EtOAc。再用1N盐酸水液、5% Na2CO3水液和盐水洗涤溶液，干燥(MgSO4)后，减压蒸发至干。残留物用快速色层法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，4∶1)纯化，得Pr2CHNHC(O)-Tbg-OBzl(8.33克，76%)。
(d)将后者化合物(8.33克，23毫摩尔)进行氢解作用(10% Pd/C，EtOH，1atm H2，4小时)。反应完成后，通过45μm滤膜除去催化剂。滤液在减压下浓缩，得白色固体Pr2CHNHC(O)-Tbg-OH(5.94克，95%)。
(e)按照实施例6的偶联方法并用实施例7的化合物H-Asp(cyPn)-(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OBzl作为第一反应物，而实施例3的Boc-Asp(吡咯烷基)-OH为第二反应物，得到Boc-Asp(吡咯烷基)-Asn(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3｝CH2OBzl。按照本实施例节(b)的方法，将后者化合物进行去保护作用而得到H-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3}CH2OBzl。
(f)按照实施例6的偶联方法并使用后者化合物作第一反应物，用本实施例(d)节的Pr2CHNHC(O)-Tbg-OH为第二反应物，得到Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3｝CH2OBzl。
(g)将后者化合物(102毫克，0.11毫摩尔)进行氢解作用(10% Pb/C，MeOH，1大气压H2，1小时)。反应完成后，通过45μm滤膜除去该催化剂，滤液在减压下浓缩而得标题化合物，是白色固体(69毫克，85%)。1NMR(DMSO-D6)δ1.8(2s，18H)，1.1-2.0(m，28H)，2.6-3.8(m，12H)，4.1(d，1H)，4.6(m，1H)，4.9(d，1H)，5.9(d，1H)，5.95(d，1H)，7.60(d，1H)，8.1(d，1H)，8.4(d，1H)。质谱723(M+H)+。
使用适当的中间体，实施例6至8的系列偶联及去保护基的方法，可用于制备式1的其他化合物，例如下面实施例中各表所列示的化合物。在某些情况下，最终产物进行沉淀并不能得到纯的物质。在这种情况下可以用半制备的高效液体色谱(HPLC)，在C-18反相分离柱上用各含0.06% TFA的乙腈和水的梯度液洗脱来纯化。为此，在纯化前，要将粗产物溶解在0.1M NH4OH水液中，用0.1摩尔乙酸调整溶液的pH值反回到约7。使用时，按这种方式分离非对映异构的混合物。
实施例9单纯性疱疹病毒(HSV-1)核糖核苷酸还原酶的抑制(a)酶的制备HSV-1核糖核苷酸还原酶(部分纯化)是按E.A.Cohen等人描述(J.Gen.Virol.66，733(1985))的方法，从经HSV-1病毒菌株F(生成10噬菌斑单位/细胞)感染的休眠BHK-21/C13细胞中得到。
(b)对例示肽的测定及结果按P.Gaudreau等人报道(J.Biol.Chem.262 12413(1987))的方法得到在下表中所列化合物测定结果。对每个式1例示化合物的测定结果，是以该化合物能引起50%酶活性的最大抑制时的浓度来表示(IC50)。每次测定中所用酶制剂的单位数量依据酶制剂的比活度是恒定的。所有结果都是相对于没有试验化合物的对比试验所得的活性，并以4次测定的平均值表示其间误差小于10%。
表式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μM实施例8的标题化合物 723*0.08Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 731 0.10Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 717 0.098Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇MeNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 661 0.89Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Me2CHNC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 689 0.07Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇PhNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 723 0.71Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇BzlNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 715*0.41Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 687 0.20Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3
表(续)式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μMMe3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 681*0.10Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 787*0.082C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 795 0.16C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 705 0.57Asp{(R)-iPr}-Leu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 651*0.13Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 705 0.10Asp{(R)-iPr}-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 697*0.072Asp{(R)-iPr}-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 637*0.60Asp(cyPn)-NHCH2CHMe2Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 737*0.096Asp(cyPn)-γMeLeu-OH
表(续)式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μMPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 679*0.18Asp(cyPn)-NHCH2CMe3(1-丙基环戊基)-NHC(O)-Tbg- 799 0.2Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OEtPr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯 753*0.2烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(P吡咯烷基)- 715 0.18Asp(cyPn)-NHCH(CH3)CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2- 702 0.4氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-c环己基- 714 0.142-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2- 700 0.20环戊基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH{C(CH3)2OH}- 761 0.1C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)γMe 亮氨醇表(续)式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μMPr2CHNHC(O)-NH-(R)-CH{C(CH3)2SH}CO- 777 0.15Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 723*0.10Asp(cyPn)-γMeLeu-OH(1-丙环戊基)-NHC(O)-Tbg- 771 0.13Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2- 686 0.25环丁基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Me3CCH2CMe2HNC(O)-Tbg-Asp- 773 0.18(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et 693*0.24MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 693*0.16Asp(cyPn)-NHCH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基) 735*0.14Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3* FAB/MS (M+H)+
实施例10细胞培养中单纯性疱疹病毒(HSV-2)复制的抑制作用测定BHK-21/C13细胞(ATCC CCL 10)是在含加有8%(V/V)胎牛血清(FBS，加拿大Gibco公司)的α-MEM培养基(加拿大Gibco公司，Burlington，Ontario，Canada)的150 cm2T-培养瓶(每个瓶有1.5×106个细胞)中培养2天。将细胞经胰酶消化后转24孔培养板的新鲜培养基中得到每孔在750微升培养基里含2.5×105个细胞。在37℃保温6小时使细胞附着在板上。其后，用加有0.5%(V/V)FBS的α-MEM培养基洗涤细胞一次，再用750μl同样培养基(低血清)使细胞保温3天。经过这段血清饥饿期后，除去这种低血清培养基，并将细胞在500微升BBMT中保温2-3小时(BBMT培养基描述于P.Brazeau等人的报道，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，79，7909(1982))。之后，这些细胞在100微升BBMT培养基中经用HSV-2感染(感染复数＝0.02 PFU/细胞)[注所用的HSV-2是菌株HG-52，见Y.Langelier和G.Buttin的报道(J.Gen.Virol.，57，21(1981))，病毒在-80℃保存]。待病毒在37℃吸附1小时后，除去培养基，再用BBMT洗细胞(3×250微升)。每个孔中的细胞以含有或没有(对照组)适当浓度的溶于200微升BBMT培养基的要试验试剂进行培养。在37℃保温29小时后，首先在-80℃冰冻培养板而收集被感染的细胞，接着解冻。于每个孔中的细胞借助溶解的碎冰片，从表面刮下。待融冰完毕，收集细胞悬浮液，并用150μl BBMT培养液漂洗每个孔。病毒样品(悬浮液加洗液)在4℃下轻轻地用声处理4分钟。离心(在4℃，1000×g 10分钟)除去细胞碎片。收集上清液并在-80℃存放直到测定病毒滴定度。
病毒滴定是用M.Langlois等人改进的比色测定法(见Journal of Biological Standardization，14，201(1986))来完成的。
更明确地说，按上述相似方法。将BHK-21/C13细胞经胰酶消化后转入96孔的微滴定板的新鲜培养基内得到每孔100微升培养基中含20，000个细胞。在准备好的培养板中的细胞在37℃保温2小时。在该时间内将病毒样品解冻并轻轻地声处理15秒，病毒样品便进行对数稀释(1/5序列稀释50微升样品加上200微升BBMT培养基，用多道吸液管制成系列稀释液)。
待BHK-21/C13细胞完成上述保温2小时后，培养基换为加有3%(V/V)FBS的α-MEM培养基。该细胞已可准备用以不同稀释的病毒液来感染。用等分(50微升)的各种稀释病毒液移入培养板的适当小孔中。将所得的感染细胞在37℃保温2天。然后在每孔中加入50微升含0.15%(V/V)中性红染料的汉克平衡盐溶液(Hank′s Balanced Salt Solution，pH7.3，加拿大Gibco公司)。制备好的培养板在37℃保温45分钟，将每孔中的培养基吸出，并用200微升Hank平衡盐溶液洗涤细胞一次。洗涤后，加入100微升0.1摩尔Sorensen柠檬酸盐缓冲液(pH4.2)和乙醇的混合物(1∶1)使细胞中的染料释放出来。｛Sorensen柠檬酸盐缓冲液的制备如下首先，将一水合柠檬酸(21克)溶解在1N NaOH水液(200毫升)，并加入足量的过滤水配成1升而制备0.1M柠檬酸二钠溶液。其次，将0.1摩尔柠檬酸二钠溶液(61.2毫升)与0.1当量HCl水液(38.8毫升)的水液混合。若有需要，调整其pH值至4.2。｝板孔中的混合物轻轻旋转使确保混合均匀。用分光光度计板式计数器，在540μm波长扫描培养板孔以评定存活的细胞数目。按这种方法，能测定各种浓度的测试制剂对病毒生长的抑制百分比，并能计算出影响病毒复制的50%抑制时所用试验制剂的浓度，即EC50。
结果下表提供的示例，是根据本实施例的细胞培养测定法来评定式1肽时所获得的结果。
表式1的化合物 EC50μM实施例8的标题化合物 75Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 180Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 170Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Me2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 700Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 350Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3Me3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 300Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 170C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 170C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇表(续)式1的化合物 EC50μMEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 300Asp{(R)-iPr}-Leu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 270Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 140Asp{(R)-iPr}-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 190Asp{(R)-iPr}-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 80Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 150Asp(cyPn)-NHCH2CMe3(1-丙环戊基)-NHC(O)-Tbg- 45Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OEtPr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯烷 170基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 55Asp(cyPn)-NHCH-(R)-CH(Me)CMe3
表(续)式1的化合物 EC50μMPr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2- 25氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环己基 1402-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环戊基 90-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH{C(CH3)2OH}- 210C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-NH-(R)-CH{C(CH3)2SH}CO- 290Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 110Asp(cyPn)-γMeLeu-OH(1-丙环戊基)NHCO-Tbg-Asp- 190(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2-环丁基 160-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3
表(续)式1的化合物 EC50μMMe3CCH2CMe2NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 110Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 106Asp(cyPn)-NHCH2CMe2EtMePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 84Asp(cyPn)-NHCH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 7Asp(cyPn)NH-(R)-CH(Et)CMe3式1中的其他化合物包括:
Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CH2CMe权利要求
1.一种式1的肽，或其治疗上可接受的盐，其中，A是R4NHC(O)，其中R4是(i)(2-10C)烷基；(ii)一种选自1-(2-丙烯基)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基，和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基的不饱和烷基；(iii)苯基(低级)烷基，或以低级烷基、卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基单取代的苯基(低级)烷基；或(iv)1-(低级烷基)-(低级环烷基)；B是氨基酸残基，或通式NHCHR5C(O)衍生的氨基酸残基，其中R5是1-三环{3.3.1.13、7}癸基，低级烷基或以羧基、羟基、巯基或苄氧基单取代的低级烷基；R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级烷基)或NR6R7，其中R6为氢或低级烷基而R7是低级烷基，或R6和R7经和它们相连的氮原子共同连接形成吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基；R2是氢或低级烷基而R3为低级烷基，或R2为氢和R3为苯基-(1-4C)烷基，或R2和R3与和它们相连的碳原子共同连接生成低级环烷基；D是NHR8其中R8为(4-9C)烷基，或D是NHCH(R9)-Z，其中R9是(4-9C)烷基、低级环烷基或(低级环烷基)-(低级烷基)；和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10，其中R10是低级烷基。
2.根据权利要求1限定的肽，或其治疗学上可接受的盐，其中A是(2-10C)烷基氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-乙基-1-(2-(丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、苄基氨羰基、(1-丙环戊基)氨羰基、1-乙环己基)氨羰基，或(1-丙环己基)-氨羰基;B是NHCHR5C(O)，其中R5为1-三环-｛3.3.1.13.7｝癸基，低级烷基或以羧基、羟基或巯基单取代的低级烷基;而R1、R2、R3和D如上所限定。
3.根据权利要求2所限定的肽，或其治疗学上可接受的盐，其中A是丙基氨羰基、(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)氨羰基、(1-甲丙基)氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基、(1，1-二甲丁基)氨羰基、(1，1，3，3-四甲丁基)氨羰基、(1-乙丁基)-氨羰基、(1-丙丁基)氨羰基、(1-乙戊基-氨羰基、(2-丙戊基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基-氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙基环戊基)氨羰基、(1-乙环己基)氨羰基、(1-丙环己基)氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基，或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基，B是如下氨基酸的残基(S)-2-氨基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸、(S)-α-氨基-3-羟基-3-甲基-丁酸，或(R)-2-氨基-3-巯基-3-甲丁酸;或选自Tbg，Val，Asp{(R)-Me}和Asp(diMe)的氨基酸残基，R1是低级烷基、低级环烷基、N，N-二甲氨基、N，N-二乙氨基、吡咯烷基，哌啶子基，R2是氢;而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基或苄基，而且含有R2和R3的碳原子具有(R)-构型，或R2和R3各分别为甲基、乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子共同形成环丁基、环戊基或环己基;而D是NHR8，其中R8是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基及2，2-二甲戊基，或D是NHCH(R9)-Z，其中含有R9的碳原子有(S)-构型，R9是1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或环己丙基，而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10其中R10是甲基、乙基或丙基。
4.根据权利要求3所限定的肽或其治疗学上可接受的盐，其中A为(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)-氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基。(1-丙丁基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基或(1-丙环戊基)氨羰基;B、R1、R2和R3如上面最后情况下所定义的;而D是NHR8，其中R8是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲-丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或3，3-二甲丁基，或D是NHCH(R9)-Z，其中含R9的碳原子有(S)-构型，R9是2，2-二甲丙基，而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10其中R10是甲基、乙基或丙基。
5.权利要求1所限定的肽是选以发下化合物Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Et2CHNHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，MeNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Me2CHNHC(O)-Tbg-Asp(pyrrolidino)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，PhNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，BzlNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3，Me3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(Pyrrolidino)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-Leu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CHMe2，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(1-丙基环戊基)-NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OEt，Pr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2-氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环己基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环戊基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH{C(CH3)2OH}C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)yMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-NH-(R)-CH｛C(CH3)2SH｝CO-Asp(P吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，(1-丙环戊基)NHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2-环丁基-2-氧乙基)-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Me3CCH2CMe2NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe2Et，MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，及MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)NH-(R)-CH(Et)CH2CMe3.
6.一种药物组合物，它含有抗疱疹病毒有效量的权利要求1定义的肽，或其治疗学上可接受的盐，和药物学上或兽医学上可接受的载体。
7.一种化妆组合物，它含有权利要求1所定义的肽，或其治疗学上可接受的盐，和用于局部给药的生理学上可接受的载体。
8.一种治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法，它包括以抗疱疹病毒有效量的权利要求1定义的肽，或其治疗学上可接受的盐对哺乳动物给药。
9.一种抑制疱疹病毒复制的方法，它是用疱疹病毒核糖核苷酸还原酶抑制量的式1肽，或其治疗学上可接受的盐，与病毒相接触。
10.一种药物组合物，它含有药物学上或兽医学上可接受的载体，和有效量的抗病毒核苷类似物或其药物学上可接受的盐，和权利要求1定义的核糖核苷酸还原酶抑制肽或其治疗学上可接受盐类的结合物。
11.按权利要求10的药物组合物，其中核苷类似物是通式2的化合物或其治疗上可接受的盐。
其中R11为氢、羟基或氨基。
12.按权利要求10的药物组合物，其中抗病毒核苷类似物是选自阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羟甲无环鸟苷、依多西啶、布罗瓦维、弗西它平、潘西克罗维、法西克罗维和洛西克罗维。
13.一种治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法，包括对哺乳动物以有效量的抗病毒核苷类似物或其治疗学上可接受的盐，和权利要求1的式1的核糖核苷酸还原酶的抑制肽或其治疗学上可接受的盐的结合物给药。
14.按权利要求13的方法，其中核苷类似物和式1的肽可依次地或同时给药。
15.按权利要求13的方法，其中结合物是以局部给药。
16.权利要求13的方法，其中抗病毒核苷类似物选自无环鸟苷、6-去氧无环鸟苷、2，6-二氨基-9-｛(2-羟乙氧基)甲基｝嘌呤、阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羟甲无环鸟苷、依多西啶、布罗瓦维、弗西它平、潘西克罗维、法西克罗维和洛西克罗维。
17.一种治疗哺乳动物1型或2型单纯性疱疹病毒感染的方法，包括以有效量的权利要求6的药物组合物给药，其中式1的肽选自以下化合物Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Et2CHNHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，MeNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Me2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，PhNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，BzlNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CH2(CH3)3，Me3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp-(cyPn)-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-Leu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CH(CH3)2，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，(1-丙环戊基)-NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OEt，Pr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH(CH3)C(CH3)3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2-氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环己基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环戊基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，andPr2CHNHC(O)-NH(S)-CH{C(CH3)2OH}C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)yMe亮氨醇.PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，(1-丙环戊基)NHCO-Tbq-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NH(S)-CH(2-环丁基-2-氧乙基)-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Me3CCH2CMe2NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe2Et，MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，andMePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，and
18.一种制备权利要求1所限定的肽，或其治疗学上可接受的盐的方法，包括(a)逐步偶联，按照肽，氨基酸或衍生氨基酸的残基，和肽的非肽片段的顺序进行，其中(ⅰ)用适当的保护基将残基或片段的支链上反应性的基团进行保护以避免在该位点上发生化学反应，直至逐步偶联完成后最后除去保护基团;(ⅱ)偶合反应物的α-氨基用α-氨基保护基进行保护，而该反应物的游离羧基与第2个反应物的游离的α-氨基进行偶联;该α-氨基保护基是可选择性地被除去以便在该α-氨基上产生其后的偶联步骤和(ⅲ)氨基酸残基或肽片段的C-端的羧基，若将成为被保护的肽的C-端功能团，就要用合适的保护基进行保护以避免在该位点发生化学反应，直至肽所需的氨基酸序列装配完毕。(b)待偶联反应完成，除去所有的保护基团，若需要，实施标准变换以得到权利要求1的肽;而且如有要求，可将肽转变为治疗学上可接受的盐。
全文摘要
本发明公开了以下通式的肽衍生物A-B-NHCH{CH
文档编号C07K5/04GK1096299SQ9310679
公开日1994年12月14日 申请日期1993年6月8日 优先权日1993年6月8日
发明者罗伯特·德泽尔, 雷蒙德·普兰特, 尼尔·莫斯 申请人:比奥·梅加·贝林格尔·英格海姆研究公司
技术领域：
本发明是关于具有抗病毒性质的肽衍生物及使用这些衍生物治疗病毒感染的方法。更明确地说，本发明关于具有抗疱疹病毒活性的肽衍生物(下文简称“肽”)，和含这种肽的药物组合物，以及使用该肽以抑制疱疹病毒复制和治疗疱疹感染的方法。
疱疹病毒对人类和动物能引发多种疾病。例如，单纯性疱疹病毒，1型和2型(HSV-1和HSV-2)是分别造成唇疱疹和生殖器损伤的原因;水痘带状疱疹病毒(VZV)可引起水痘和带状疱疹;非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)引发感染性单核细胞增多症。
在过去二十年中，一类称嘌呤和嘧啶核苷类似物已得到研究人员的重视，被用来作新治疗剂研究以治疗疱疹病毒感染。结果，已有多种核苷类似物被发展为抗病毒剂。至今最成功的是无环鸟苷(acyclovir)，它选用为治疗生殖器单纯性疱疹病毒感染。
尽管有了某些明显的进展，但对治疗疱疹病毒有效的和安全的治疗药剂的需求依然存在。为了对此领域目前的治疗药剂作一研究可见M.C.Nahata专论，“抗病毒药物医学动力学，副作用和治疗使用”，J.Pharm.Technol.，3，100(1987)。
本申请公开了一类具有抗疱疹病毒活性的肽衍生物。这些肽对疱疹病毒有相当的选择作用，并结合大幅度的安全性，使其成为抗疱疹病毒感染所需的制剂。
下列文献公开了与抗疱疹活性有关系的一些肽和肽衍生物B.A.Dutia等人，Nature，321，439(1986)，E.A.Cohen等人，Nature，321，441(1986)，J.H.Subak-Sharpe等人，英国专利GB 2185024(1987年7月8日)，P.Gaudreau等人，J.Biol.Chem.，262，12413(1987)，E.A.Cohen等人，美国专利US 4795740(1989年1月3日)，R.Freidinger等人，美国专利US 4，814，432(1989年3月21日)，V.M.Garskey等人，美国专利US 4，837，304(1989年6月6日)，R.Colonno等人，美国专利US 4，845，195(1989年7月4日)，P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，33，723(1990)，J.Adams等人，欧洲专利EP 408，973(1991年1月23日)，P.L.Beaulieu等人，欧洲专利EP 411，332(1991年2月6日)，J.Adams等人，欧洲专利EP 411，333(1991年2月6日)，J.Adams等人，欧洲专利EP 411，334(1991年2月6日)，R.L.Tolman等人，欧洲专利EP 412，595(1991年2月13日)，W.T.Ashton等人，欧洲专利EP 438，873(1991年7月31日)，P.L.Beaulieu等，欧洲专利EP 461，546(1991年12月18日)和P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，35，346(1992)。
上述报告中的主题肽从其特征性的结构和生物学差异能与本申请的肽进行区别。
下文所使用的缩写和符号将在本申请书中“发明细节”部分中定义。
本发明的肽或其治疗上可接受的盐类由通式1代表
其中，A是R4NHC(O)，其中R4是(ⅰ)(2-10C)烷基;
(ⅱ)不饱和的烷基，它选自1-(2-丙烯基)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基;
(ⅲ)苯基(低级)烷基或以低级烷基、卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基单取代的苯基(低级)烷基;
(ⅳ)1-(低级烷基)-(低级环烷基);
B是氨基酸残基或通式NHCHR5C(O)衍生的氨基酸残基，其中R5是1-三环｛3.3.1.13.7｝癸基，低级烷基或以羧基、羟基、巯基或苄氧基单取代的低级烷基;
R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级烷基)或NR6R7，其中R6为氢或低级烷基而R7是低级烷基，或R6和R7经和它们相连的氮原子连接共同形成吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基;
R2是氢或低级烷基而R3是低级烷基，或R2为氢和R3是苯基-(1-4C)烷基，或R2和R3与和它们相连的碳原子一起形成低级环烷基;而D是NHR8其中R8为(4-9C)烷基，或D是NHCH(R9)-Z，其中R9是(4-9C)烷基、低级环烷基或(低级环烷基)-(低级烷基);
Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10，其中R10是低级烷基。
本发明的肽的优选类或其治疗上可接受的盐类，是以通式1代表，其中A是(2-10C)烷基氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、苄基氨羰基、(1-丙基环戊基)氨羰基、(1-乙基环己基)氨羰基或(1-丙基环己基)-氨羰基;B是NHCHR5C(O)，其中R5为1-三环-｛3.3.1.13.7｝癸基，低级烷基或用羧基、羟基或巯基单取代的低级烷基;而R1、R2、R3和D如上所定义。
由式1代表的肽的更优选的类或其治疗上可接受的盐类，其中A是丙基氨羰基、(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)氨羰基、(1-甲丙基)氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基、(1，1-二甲丁基)氨羰基、(1，1，3，3-四甲丁基)氨羰基、(1-乙丁基)-氨羰基、(1-丙丁基)氨羰基、(1-乙戊基-氨羰基、(2-丙戊基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基-氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙环戊基)氨羰基、(1-乙环己基)氨羰基、(1-丙环己基)氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基，或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;B是如下氨基酸的残基(S)-α-氨基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸、(S)-2-氨基-3-羟基-3-甲基-丁酸，或(R)-2-氨基-3-巯基-3-甲丁酸，或选自Tbg，Val，Asp{(R)-Me}和Asp(diMe)的氨基酸残基;R1是低级烷基、低级环烷基、N，N-二甲氨基、N，N-二乙氨基、吡咯烷基或哌啶子基;R2是氢而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基或苄基，而且含有R2和R3的碳原子具有(R)-构型，或R2和R3分别为甲基或乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子共同形成环丁基、环戊基或环己基;而D是NHR8，其中R8是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基及2，2-二甲戊基，或D是NHCH(R9)-Z，其中含有R9的碳原子有(S)-构型，R9是1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或环己丙基，而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10其中R10是甲基、乙基或丙基。
最优选的肽类或其在治疗上可接受的盐类，是由通式1代表的，其中A是(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)-氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基。(1-丙丁基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基或(1-丙环戊基)氨羰基;B、R1、R2和R3如上述所定义;而D是NHR8其中R8为2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲-丙基、2，2-二甲丁基或3，3-二甲丁基或D为NHCH(R9)-Z，其中含有R9的碳原子有(S)-构型。R9是2，2-二甲丙基，Z为CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10，其中R10是甲基、乙基或丙基。
本发明范围也包括药物组合物，它含有抗疱疹病毒有效剂量的式1肽，或其在治疗上可接受的盐类，和医药上或兽医上可接受的载体。
本发明范围还包括化妆组合物，它含有式1的肽，或其治疗上可接受的盐类，和适用于局部施用的生理学上可接受的载体。
本发明一重要方面包含给予哺乳动物以抗疱疹病毒有效量的式1肽，或其在治疗学上可接受的盐类，以治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法。
本发明另一重要方面，包含用疱疹病毒核糖核苷酸还原酶的抑制剂量的式1肽或其治疗上可接受的盐类与病毒相接触而抑制疱疹病毒复制的方法。
又一个方面，包含对哺乳动物以抗疱疹病毒有效量的式1肽，或其治疗学上可接受的盐类，与抗病毒核苷类似物的结合物而给药，用来治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法。含有该结合物的药物组合物亦属本发明范围之内。
制造式1的肽的工艺描述于下文。
另外，通式1可描述为
涉及氨基酸或氨基酸衍生物的术语“残基”，意味从相应的α-氨基酸通过除去羧基上的羟基和α-氨基上的氢而衍生的基团。
一般，本申请用于表示氨基酸和保护基团的缩写是根据生物化学国际协会(IUB)和理论与应用化学国际协会(IUPAC)生物化学命名委员会的推荐，参见欧洲生物化学杂志Eur.J.Biochem，138，9(1984)。例如，Val，Ile，Asp，和Leu分别代表L-缬氨酸、L-异亮氨酸、L-天门冬氨酸的残基。
位于式1肽的主要线性轴(即主链)上的不对称碳原子，除了末端基A和(D的)Z但包括当D是前文定义为NHCH(R9)-Z时则会有R9的碳原子，具有S-构型。但是，有一例外，当B是含有2-巯基烷基支链的氨基酸残基时，则位于含有该支链的主链上的碳原子，优选地有R-构型。位于氨基酸或衍生物的氨基酸残基支链上的，或位于末端基A，或当D代表如上定义为NHR8时之末端基D中则不对称碳原子，可以有S-或R-构型。
符号“Tbg”代表(S)-2-氨基-3，3-二甲丁酸的氨基酸残基，符号“γMeLeu”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊酸的氨基酸残基，符号“γMe亮氨醇”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊酸但从α-氨基团除去一个氢。
符号“Me”、“Et”、“Pr”及“Bu”分别代表甲基、乙基、丙基和丁基的烷基基团。
例如，符号“MePr2C”和“PrMe2C”分别代表1-甲基-1-丙丁基和1，1-二甲丁基。
本文所用的其他符号是Asp(CyBu)代表(S)-α-氨基-1-羧环丁烷乙酸残基;Asp(CyPn)代表(S)-α-氨基-1-羧环戊烷乙酸残基。符号“Asp(diMe)”代表2(S)-氨基-3，3-二甲丁二酸，即3，3-二甲基-L-天门冬酸的残基。类似地，Asp(diEt)、Asp｛(R)-Me}和Asp{(R)-iPr｝分别代表3，3-二乙基-L-天门冬酸，3(R)-甲基-L-天门冬酸即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-甲基丁二酸和3(R)-(1-甲乙基)-L-天门冬酸的残基。
本文所用的术语“卤素”是指选自溴、氯、氟或碘的卤素基。
本文所用的术语“金刚烷基”是指“1-三环｛3.3.1.13.7｝癸基”。
本文所用术语“(2-10C)烷基”，不论单独或与其他基结合时，都表示含有2至10个碳原子的直链或支链烷基，包括乙基、丁基、1-甲丙基、1-乙丙基、1-丙丁基、2-丙戊基等等。
本文所用术语“(4-9C)”烷基，意指含有4至9个碳原子的直链或支链烷基，例如，包括1-甲丙基、2-甲丙基、1，2，2-三甲丙基、3，3-二甲丁基、1-乙基-2，2-二甲丁基及4，4-二甲戊基。
本文所用术语“低级烷基”，不论单独或与另外基结合，意谓含有1于6个碳原子的直链烷基及含有3至6个碳原子的支链烷基，包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基及1，1-二甲乙基。
本文所用术语“1-(低级烷基)-(低级环烷基)”，意谓在碳1位置上含有低级烷基取代的低级环烷基，例如，1-乙环丙基、1-乙环己基、1-丙环戊基及1-丙环己基。
本文所用术语“低级环烷基”，不论单独或与其他基相结合，是指含有3至6个碳原子的饱和环烃类基，包括环丙基、环丁基、环戊基及环己基。
本文所用术语“低级烷氧基”，是指含1至4个碳原子的直链烷氧基和含有3至4个碳原子的支链烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲乙氧基、丁氧基及1，1-二甲乙氧基。后者的基通常又称做叔-丁氧基。
本文所用术语“苯基-(1-4C)烷基”，意谓苯烷基，其中烷基部分是含1至4个碳原子的直链或支链烷基，包括苄基、2-苯乙基、3-苯丙基、2-甲基-2-苯乙基｛PhCH(CH3)CH2｝、1-乙基-2-苯乙基｛PhCH2CH(C2H5)｝等等。
本文所用术语“苯基(低级)烷酰基”，不论单独或与其他基相结合的，是指以苯基取代的1-氧烷基，其中1-氧烷基部分是含有2-6个碳原子的直链或支链1-氧烷基;例如，1-氧-3-苯丙基及1-氧-5-甲基-6-苯己基。
本文所用术语“药物学上可接受的载体”或兽医上可接受的载体”，意谓无毒的一般的用于有效组份的惰性载体，它对有效成分无不良的效应。
本文所用术语“生理学上可接受的载体”，是指一种或多种无毒赋形剂的可用的化妆品赋形剂，它不会与其中所含的有效成分反应或降低其效果。
本文所用术语“兽医学上可接受的载体”，是指对家畜给药物用的、生理学上可接受的赋形剂，它含有一种或多种无毒的药物学上可接受的赋形剂，它不与药物反应或降低药物效应。
本文所用术语“有效量”意谓对抗病毒剂预先测定的抗病毒量，即一种足以有效地对抗体内病毒有机体的剂量。
本文所用术语“偶合剂”，是指一种能使一氨基酸或肽的游离羧基与另一氨基酸或肽的游离氨基进行脱水偶联反应而在反应物间生成酰胺键的试剂。同样地，这种试剂可使酸与醇进行偶合而生成相应的酯类。此试剂能增进或便于通过活化羧基而进行脱水偶联反应。这种偶合剂和活性基肽化学的普通教科书中有论述;例如E.Schroeder和K.L.Lübkr的《肽(The Peptides)，Vol.1，Academic Press，New York，N.Y.，1965，pp.2-128，和K.D.Kopple的“肽和氨基酸(Peptides and Amino acids)，W.A.Benjamin，Inc.，New York，N.Y.1966，pp.33-51。偶合剂的实例，如二苯膦酰基叠氮化物、1，1′-羰基二咪唑、二环己基碳化二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺，或在二环己基碳化二亚胺存在下的1-羟基苯并三唑。一种很实用的偶合剂是(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲氨基)-鏻六氟磷酸盐，此试剂描述于B.Castro等人的“四面体快报(Tetrahedron Letters)，1219(1975)和D.Hudson的J.Org.Chem.，53，617(1988)中。可单独或在有1-羟苯并三唑存在下使用。另一种很实用的偶合剂是在市场上可买到的2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基
四氟硼酸盐。
通式1代表的肽的制备可结合使用普通用于肽合成中的方法，例如经典的氨基酸残基和/或肽碎片的溶液偶联反应。例如这种方法描述于上述的E.Schroeder和K.Lübke论著在教课书中也有，如E.Gross等人的“肽分析，合析，生物学”(The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology)，Academic Press，New York，N.Y.，1979-1987，卷1至卷8，及J.M.Stewart和J.D..Young的“固相肽合成”(Solid Phase Peptide Synthesis)，2nd ed.，Pierce Chem.Co.，Rockford，IL，USA，1984。
前述肽制备方法的共同特点，是使用合适的保护基对各种氨基酸残基或衍生的氨基酸残基(或依据需求，也对肽的非肽碎片)的反应支链基团进行保护，以避免在该位点发生化学反应，直至最终地除去该保护基团为止。另外，共同点是当本体在羧酸基团反应时，对氨基酸或碎片上的α-氨基要保护，之后，再选择性除去α-氨基保护基团以便在该位点发生后续的反应。再一个共同特点，是用合适的保护基团对氨基酸残基或肽碎片的C-端的羧基作初期的保护(若有，则将成为肽C-端的功能团)，以避免在该位点发生化学反应直至所需的肽序列已合成，再除去此保护基团。
一般说来，式1的肽可依肽的适当的氨基酸的或衍生物的氨基酸残基的，和肽的非肽的片段的(如肽的N-端脲基残基A)顺序的序列逐步偶合来制备，若需要也以适当保护，并于完成逐步偶合得到式1的肽后再除去所有的保护基团(若存在时)。
一种用于结合式1中的N-端脲基残基“A”的方便偶合方法，是依据制备尿素的经典方法｛参见，例如，P.A.S.Smith，Org.Reactions，Ⅲ，376-377(1946)｝，由此将欲结合的相对应的残基的异氰酸酯与合适保护的片段(例如，被保护的H-B-OH或H-B-NHCH{CH2C(O)R1｝C(O)-D片段，其中B、R1和D的定义见上述)的末端α-氨基，在逐步装配过程中进行反应。另外，所需的异氰酸酯可从市场购买或由其易得的相应的酸，依据J.Weinstock的方法(J.Org.Chem.，26，3511(1961)｝来制备。
比较特殊的方法将于后述之实施例中说明。
本发明式1的肽可以按治疗学上可接受的盐形式制得。当特定的肽具有作为碱功能的残基的情况下则这类盐的实例，是与有机酸，例如乙酸、乳酸、丁二酸、甲磺酸或对-甲苯磺酸以及多元酸如单宁酸或羧甲基纤维素，以及还有与无机酸如氢卤酸，如盐酸，或硫酸，或磷酸所生成的盐类。若需要，某特定酸加成盐可以转换成为另一种酸加成盐，例如，转为无毒的、药物学上可接受的盐，依据R.A.Boissonnas等描述的方法(Helv.Chim.Acta，43，1849(1960)｝，用适当的离子交换树脂处理而得到。
当特定的肽，具有一个或多个游离羧基基团的情况下，这种羧基盐的实例，是与钠、钾或钙阳离子，或与有机碱例如三乙胺或N-甲基吗啉所生成的盐。
抗疱疹活性式1的肽的抗病毒活性，可通过生化、微生物学和生物学的方法，根据化合物对单纯性疱疹病毒，1型和2型(HSV-1及HSV-2)和其他疱疹病毒，例如水痘带状疱疹病毒(VZV)及非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)的复制的抑制效果来说明。
在下述的实施例中，指出了式1代表性的肽，对疱疹核糖核苷酸还原酶的抑制效应。值得注意的是，与疱疹核糖核苷酸还原酶的特异性的抑制作用有关的，这些肽对正常细胞复制所需要的细胞核糖核苷酸还原酶活性的这种影响是相当小的或没有影响。
证明式1肽对病毒复制的抑制效应的方法是细胞培养技术;参见，例如T.Spector等人的论文(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，4254(1985)｝。
这些肽的疗效可用实验动物来证明，例如，可用一种基于单纯性疱疹病毒-引发的眼病的老鼠模样的检测来试验抗病毒药，参见C.R.Brandt等人报道｛J.Virol.Meth.，36 209(1992)｝。
使用本发明肽，或其在治疗学上可接受的盐作为抗病毒剂时，它是按在含一种或多种药物学上可接受的载体的赋形剂中的形式，以局部或全身性地施用于温血动物例如人类、猪或马，其组成的比例是由肽的溶解性和化学性质，所选用给药途径和标准生物实验来决定。作局部给药时，肽在药物学上可接受的赋形剂中配制成含有效制剂量为0.1至5%优选的为0.5至2%。这种制剂可呈溶液、霜剂或洗剂。
当作全身性给药时，式1的肽可用药物学上可接受的赋形剂或载体配制成以静脉内、皮下或肌肉内注射方式给药。以注射方式给药时，最好将肽溶在灭菌水赋形剂中。赋形剂也可含有其他溶质例如缓冲剂或防腐剂以及足量的药物学上可接受的盐类或葡萄糖以制成等渗溶液。
适用于上述制剂的赋形剂或载体，描述于标准的药物教科书中。例如，在Remington的Pharmaceutical Sciences，18th ed，Mack Publishing Company，Easton，Penn.，1990中。
肽的剂量随给药方式和选用的特定有效剂而改变。而且，它也随治疗中的特定宿主而变化。通常，治疗是以小增量开始直到在该治疗状况下达到最佳效果。一般而言，肽的最佳给药量是达到可得到抗病毒有效结果而不引起任何伤害或毒害的副作用的浓度。
关于局部使用，肽是按适合局部用制剂的方式对受感染的体部位皮肤给药，例如对皮肤或口腔或生殖腔，以其足以覆盖感染面积的量给药。治疗必须重复，如每4-6小时一次，直到伤害治愈。
关于全身投药，式1的肽的给药剂量虽然会有上述变化，但可按体重每公斤每天以10微克至500微克的剂量给药。但是，为了得到有效的结果，最好以每天每公斤以约10微克至200微克范围内给药。
本发明的另一方面包括一种化妆品组合物，它含有疱疹病毒预防量的式1肽，或其治疗学上可接受的盐类，与生理学上可接受的化妆品的载体。在这种制剂中也可含有其他成分，例如皮肤软化剂。本发明的化妆制剂是用于预防地避免皮肤疱疹伤害的发生。该制剂可于夜间施用于皮肤的易感染区。通常，化妆品组合物比用于局部使用的有关药物组合物含有更少的肽。在化妆品组合物中肽的较佳用量范围是重量的0.01至0.2%。
虽然上述公开的制剂对治疗疱疹病毒感染表明是有效的且相对安全的药疗法，但不排除这些制剂与其他抗病毒药疗法或药剂共同使用以获得良好的效果。此种其他抗病毒药疗法或制剂包括抗病毒核苷类，例如无环鸟苷及抗病毒表面活性剂或抗病毒干扰素，这类药物公开于S.S.Asculai和F.Rapp的美国专利US 4507281(1985年3月26日)中。
明确地说，有关同时给药以治疗疱疹病毒感染，业已发现通过与式1的肽结合使用一种抗病毒核苷类似物，可以协同地提高抗病毒核苷类似物的抗疱疹有效性，但不同时增强其毒性效果。由此，本文提供一种用于治疗哺乳动物的疱疹感染的药物组合物，它含有药物学上或兽医上可接受的载体以及一种抗病毒核苷类似物或其药物学上可接受的盐，和抑制核糖核苷酸还原酶的式1肽或其药物学上可接受的盐的有效量的结合物。
本发明也提供治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法。该方法包括对哺乳动物给药以抗疱疹病毒有效量的由式1化合物或其药物学上可接受的盐类和抗病毒核苷类似物或其药物学上可接受的盐类的结合物。
用于这种结合的抗病毒核苷类似物是一种可酶催化(体内)转变为疱疹DNA聚合酶的病毒DNA聚合酶抑制剂，和/或用于疱疹DNA聚合酶的另一酶作用物。此种抗病毒核苷类似物可选自已知的核苷类似物。本发明中优选的核苷类似物包含无环鸟苷及其类似物，例如，式2的化合物或其治疗学上可接受的盐。
其中，R11是氢、羟基或氨基。(式2中，R11是羟基时，则为无环鸟苷)。
其他用于本发明的优选抗病毒核苷类似物包括阿糖腺苷(Vidarabine)、碘苷(Idoxuridine)、三氟胸苷(Trifluridine)、羟甲无环鸟苷(Ganciclovir)、伊多西啶(Edoxudine)、布罗瓦维(Brovavir)、弗西它平(Fiacitabine)、潘西克罗维(Penciclovir)、法西克罗维(Fanciclovir)及洛西克罗维(Rociclovir)。
当用于上述定义的核苷类似物和式1肽的结合物的抗病毒或抗疱疹活性时，术语“协同效应”是指抗病毒或抗疱疹效应大于该结合的二种单独成分的预测效果之和。
当使用本发明的结合物来治疗疱疹感染时，将是在一种或多种药物学上可接受的载体中的结合物形式，对温血动物，例如人类、猪或马给药，其比例将决定于核苷类似物及式1肽的溶解性和化学性质，选用的给药途径，标准生物实施，及这两种活性成分相对量以达到协同的抗病毒效应。优选地，结合物是局部给药。例如，此两种活性制剂(即抗病毒核苷类似物及式1肽，或其治疗上可接受的盐)可在药物学上可接受的赋形剂中配制成溶液、乳剂、霜剂或洗剂。这种制剂可含有0.01至1.0%(以重量计)的核苷类似物或其治疗学上可接受的盐，和约0.05至1%(以重量计)或1肽或其治疗学上可接受的盐。
在任何情况下在药物组合物中这两种活性成分的用量要达到协同抗疱疹效应。
下列实施例将进一步阐明本发明。温度以摄氏度表示。溶液百分率或比例，除非特别指明，是体积对体积之比的关系。核磁共振谱(NMR)用Bruker 200MHz光谱仪记录，化学位移(δ)按ppm(百万分之一)报导。在实施例中所用的缩写有Boc叔-丁基氧羰基;Bzl是苄基，Et是乙基;EtOH是乙醇;EtOAc是乙酸乙酯;Et2O是乙醚;Me是甲基;MeOH是甲醇;Pr是丙基;TLC是薄层色谱，THF是四氢呋喃。
实施例1异氰酸1-乙丙酯的制备标题化合物的制备是按照J.Weinstock的改进法(J.Org.Chem.，26 3511(1961)。2-乙基丁酸(10.0克，0.086摩尔)先悬浮于水中，再加入足够量的丙酮以完全溶解。这溶液冷却至0℃后加入在丙酮(175毫升)中的三乙胺(10.2克，14毫升，0.10摩尔)溶液。其后，保持反应温度0℃，慢慢加入在丙酮(45毫升)中的氯甲酸乙酯(12.5克，0.11摩尔)溶液。这混合物在0℃搅拌30分钟后，滴加H2O(30毫升)中的叠氮化钠(8.6克，0.13摩尔)溶液。在0℃搅拌1小时后，倒入过量冰水中，用甲苯(30毫升)萃取水相混合物。有机相用MgSO4干燥，然后过滤。将滤液保持20℃至N2气停止释放为止。用1H NMR测定在甲苯液中的异氰酸1-乙丙酯的浓度是290毫克/毫升(8.4克，产率86%)。将这产品的甲苯液在室温(20-22℃)氩气下贮存至使用。
依据本实施例的方法，用当量2-丙戊酸代替2-乙丁酸，则得到异氰酸1-丙丁酯。
实施例2d，1-α(叔-丁氧羰氨基)三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸苄酯(Boc-NH-(R，S)-CH(金刚烷基)C(O)-OBzl)的制备在隋性气氛下，将三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸(美国Aldrich化学公司Inc，Milwaukee，WI)在1，8-二氮杂双环｛5.4.0｝十一碳-7-烯存在下，在乙腈和4℃时，与苄基溴(1摩尔当量)反应而转化为其相应的苄基酯，产率98%。
后者苄基酯经下列步骤而转化为标题化合物在氩气氛和搅拌下，将1.4M丁基锂(6.5毫升，9.1毫摩尔)的己烷溶液加到冷却的(0℃)的二异丙胺(1.08克，1.5毫升，10.7摩尔)的THF(15毫升)溶液中。得到的溶液在0℃搅拌15分钟后，将其滴加入在-78℃温度下的上述的苄基酯(2.0克，7.04mmol)的无水THF(15毫升)溶液中。将这混合物在-20℃搅拌30分钟，再冷却至-78℃。将2，4，6-三异丙基苯磺酸基叠氮化物(2.38克，7.69mmol)的无水THF(15毫升)溶液一次加入该冷却混合物里。将此混合物于20℃搅拌15分钟后，用冰醋酸(2毫升)骤冷。之后，在25℃搅拌16小时。在减压下除去溶剂。残留物溶于EtoAc中。这溶液用1.0当量HCl水溶液、10%NaHCO3水溶液和盐水依次洗涤，用MgSO4干燥，然后减压下蒸发至干。残留物用色层分离法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，99∶1)纯化，得到d，1-α-叠氮基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸苄酯(251毫克)。
将后者化合物，按照N.Maiti等人的方法(Tetrahedro Letters 27，1423(1986))，在甲醇中用氯化锡(Ⅱ)还原，得到d，1-α-氨基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸苄酯。再将该氨基酸苄酯与重碳酸二-叔丁酯(1.05摩尔当量)和三乙胺(1.05当量)在无水THF中在4℃，氩气氛下反应15分钟，再在室温反应4小时，接着用一般操作(参考下文实施例6(b)段)，得到标题化合物，H1NMR(CDCl3)δ1.45(s，9H)，1.5-2.0(m，15H)，4.05(d，J＝9Hz，1H)，5.12(d，J＝9Hz，1H)，5.18(m，2H)，7.38(m，5H)。
实施例3中间体Boc-Asp(吡咯烷基)-OH的制备将N，N′-羰基二咪唑(24.32克，0.15摩尔)以少量分次加入在搅拌的Boc-Asp-OBzl(47.60克，0.147摩尔)的乙腈(500毫升)溶液中。45分钟后，将反应混合物冷却至0℃，再滴入吡咯烷(13.4毫升，0.16摩尔)。再将此混合物在室温下搅拌以完成反应(由TLC检测，约需3小时)。在减压下除去溶剂，而残留物溶于EtOAc(500毫升)。用10% HCl水溶液(3×100毫升)、1N NaOH(2×100ml)洗涤有机相，再用MgSO4干燥。在减压下使有机相蒸发，得无色油，使其放置固化。将该产品在乙醇(200毫升)溶液中，用200毫克20%(重量)Pd(OH)/碳作催化剂在大气压下进行氢解20小时。反应混合物通过硅藻土过滤。滤液经蒸发得残留物，从己烷/乙醚重结晶，纯化而得所需产品(37.10克，收率88%)，熔点114-116℃。该产品结构用NMR证实。
在本实例的方法中用合适的胺(如二乙胺或吗啉)代替吡咯烷便可得到相应的N-取代的天冬酰胺类似物。
实施例4中间体Boc-2(S)-氨基-5-环戊基-4-氧戊酸的制备将Boc-2(S)-氨基-4-酮基-1，6-己二酸1-苄酯6-(4-硝苯基)甲酯(4.8克，9.6毫摩尔)溶于DMF(100毫升)。在溶液中加入Na2CO3(4.07克，38.4毫摩尔)和1，4-二碘丁烷(3.59克，11.6毫摩尔)。在室温将此混合物搅拌18小时，再于50℃加热3小时。使溶剂蒸发后，得到残留物用EtOAc溶解，用1N HCl水溶液和水洗涤所得溶液，用MgSO4干燥和蒸发得粗产品。用色层法｛SiO2，洗脱剂己烷-EtOAc(4∶1)｝纯化此粗产品，得标题化合物的相应的苄酯(4.3克)。将此苄酯进行氢解作用(20% Pd(OH)2/C，在甲醇中，18小时)和进一步处理(见下文实施例8(d)段)而得到标题化合物(140毫克)。产品的NMR和质谱与预测结构相一致。
按本实施例所述相似方法，用合适的烷基碘可制得在其支链上有酮基的类似衍生的氨基酸中间体。
实施例53-烷基-或3，3-二烷基-L天门冬酸中间体及2(S)-氨基-3-(1-羧环烷基)乙酸中间体的制备这些中间体，可用于制备式1化合物，其中R2和R3如本文所定义。其制备可依据M.Bochenska和J.F.Biernat的方法(Rocz.Chem.，50 1195(1976);见Chem.Abstr，86 43990r，(1977))。
例如，(±)-Boc-Asp(cyPn)(OBzl)-OH的制备如下将氢化钠(4.5克，60%分散在矿物油中，122毫摩尔)按少量，在5小时内加入(1-溴环戊烷)羧酸乙酯(17.1克，77.3毫摩尔)，制备描述于D.N.Harpp等人的J.Org.Chem.，46 3420(1975))和新鲜蒸馏的异氰乙酸乙酯(12.7克，122毫摩尔)在二甲亚砜及乙醚(1∶1，120毫升)混合物中的溶液内。所得红色浆料在室温搅拌16小时后，用氯化铵饱和的水液(5毫升)处理。所得混合物用水(500毫升)稀释，并用EtOAc提取二次，合并EtOAc层液，用水洗二次后再用盐水洗。干燥(用MgSO4)，过滤和浓缩提取液得暗红色油。这油状物通过5×25厘米硅胶柱快速色层(洗脱液∶EtOAc-己烷，1∶10)。浓缩适当的馏份便得α-氰基-1-羧环戊乙酸二乙酯，为清洁无色粘性液体(13克，66%)。
将后者化合物(13克，51毫摩尔)与6N盐酸水溶液(60毫升)在0℃混合。溶解后，反应混合物在油浴中于120℃加热24小时。之后用干冰旋转蒸发器去除水份。得到的白色固体在高真空下干燥18小时。干燥物溶解在二噁烷(50毫升)和3N NaOH水液(52毫升)的混合物中。将重碳酸二(叔丁)酯(14.6克，67毫摩尔)在二噁烷(25毫升)中的溶液加入该溶液中。混合物在室温搅拌16小时。在其期间再加入3N NaOH水液使混合物pH保持约10。混合物用水(500毫升)稀释并用乙醚(200毫升)萃取二次。用固体柠檬酸使水相呈酸性(pH＝3)并用EtOAc萃取(2×300毫升)。合并的EtOAc提取液用水(3×)和盐水洗，干燥，过滤。浓缩提取液，得到Boc-Asp(cyPn)-OH，为白色固体(14克，96%)。
在后者化合物(7.2克，25毫摩尔)的无水DMF(50毫升)溶液中，加入K2CO3(7.6克，55毫摩尔)和苄基溴(6.6毫升，55毫摩尔)。这反应混合物在室温搅拌约7小时。然后将反应混合物注入水(500毫升)和EtOAc(350毫升)的混合物里。用水(2×)和盐水洗涤有机层液。干燥，过滤及浓缩萃取液，得浅黄色粘性液体。这液体进行快速色层(SiO2，洗脱剂己烷-EtOAc，12 1)。将合适的收集液浓缩得到Boc-Asp-(cyPn)-OH的二苄基衍生物，它是低熔点白色固体(11克，94%)。该二苄基产品溶解在THF(100毫升)中并加入LiOH水液(1N，23.5毫升)。4小时后，反应混合物倒入水中用乙醚萃取3次。用10%柠檬酸水液使水相呈酸性，再用EtOAc萃取2次。合并EtOAc层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到(+)-Boc-Asp(cyPn)(OBzl)-OH，是清彻无色胶质(7.3克，82%)。
实施例6偶合反应的一般步骤(也参见R.Knorr等人报道，Tetrahedron Letters.，30，1927(1989))。
将第一个反应物，即游离胺(或它的盐酸盐)溶解在CH2Cl2或乙腈中，溶液冷却至4℃。在氮气氛下，将4当量的N-甲基吗啉加入搅拌的溶液中。20分钟后，加入1当量的第二个反应物即游离羧酸，和1.05当量的偶合剂。(为此目的、实用且有效的偶合剂是(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐或更佳的是2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基
四氟硼酸盐。)反应用TLC进行监测。反应完成后，减压下蒸去CH2Cl2(或乙腈)。残留物溶于EtOAc。用1N柠檬酸水液，10% Na2CO3水溶液及盐水依次洗涤。用MgSO4干燥有机层液，过滤及在减压下浓缩至干。残留物再在硅胶上按Still的快速色层技术(W.C.Still等人，J.Org.Chem.43，2923(1978))进行纯化。
实施例7中间体H-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3｛CH2OBzl的制备(a)(S)-α-叠氮基-1-｛(苯甲氧基)羰基｝-环戊烷乙酸此化合物从2-氧杂螺｛4.4｝壬烷-1，3-二酮[描述于M.N.Aboul-Enein等人的Pharm.Acta Helv.，55，50(1980)]，根据使用Evan助剂的不对称重氮化方法来制备，参见D.A.Evans等人，J.Amer.Chem.Soc.，112，4011(1990)。化合物的H1NMR(CDCl3)表明δ4.55(s，1H)，5.12(s，2H)及7.4(m，5H)。此化合物将用于本实施例之(c)节。
(b)NH2-(S)-CH{CH2C(CH3)3｝CH2OBzl根据A.Giannis和K.Sandhoff的方法(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，28，218(1989))将H-γMeLeu-OH用LiBH4/Me3SiCl还原，得氨基醇NH2-(S)-CH{CH2-C(CH3)3}CH2OH。该氨基醇(812毫克，6.2毫摩尔)、三乙胺(659毫克，6.51毫摩尔)和二-叔丁基碳酸酯(1.42克，6.51毫摩尔)的混合物在无水THF(15毫升)中在氮气氛和4℃下搅拌15分钟。再在室温搅拌4小时。减压下蒸去THF。残留物溶于EtOAc。用10%柠檬酸水液，5% NaHCO3水液及盐水洗涤溶液。有机相用MgSO4干燥再在减压下浓缩至干。用快速色层分离法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，2∶1)纯化残留物，得Boc-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3｝CH2OH。
在Boc-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OH的苄基氯(13毫升)的溶液中，依次加入四丁铵硫酸氢化合物(106毫克)和50% NaOH水溶液(3ml)。所得混合物在35-40℃搅拌90分钟，用EtOAc稀释，并用水和盐水洗涤。用MgSO4干燥有机层后，减压下浓缩至干。残留物溶于己烷。此溶液倒入SiO2，用己烷洗脱柱以去除苄基氯，再用己烷-EtOAc(2∶1)洗脱而得Boc-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OBzl。后者化合物的1H NMR(CDCl3)表明δ1.0(s，9H)，1.42(s，10H)，3.42(d，J＝4Hz，2H)，3.88(宽，1H)，4.54(t，3H)，7.23-7.4(m，5H)。该化合物(1.28克，3.99毫摩尔)溶在6N HCl/二噁烷(10毫升)中。在4℃，氮气氛下搅拌溶液45分钟。溶液蒸发后，得所需化合物的盐酸盐(1.05克)。此化合物不需再纯化而直接用于本实施例下节步骤中。
(c)本实施例的标题化合物按照实施例6的偶联步骤，使用上节中的NH2-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OBzl的盐酸盐作为第一反应物，本实施例(a)节制得的(S)-α-叠氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝环戊烷乙酸作为第二个反应物，可得N-｛(S)-1-苄氧甲基-3，3-二甲丁基｝-(S)-α-叠氮基-1-｛(苯甲氧基)羰基｝环戊烷乙酰胺。依据N.Maiti等人方法(Tetrahedron Letters，27，1423(1986))，将后者化合物经氯化锡(Ⅱ)在甲醇中还原，得到本实施例标题化合物。此化合物之H1NMR(CDCl3)表明，δ0.98(s，9H)，1.22-1.9(m，2H)，3.4(d，J＝4Hz，2H)，3.64(s，1H)，4.18(宽m，1H)，4.52(s，2H)，5.12(s，2H)，7.1-7.38(宽m，10H)。
实施例8Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇的制备(a)在1，8-二氮杂双环｛5.4.0｝十一碳-7-烯存在下，在乙腈中和氩气氛下，将Boc-Tbg-OH(7.5克，32.5毫摩尔)与苄基溴(1.2摩尔当量)，在室温反应16小时，而将其转化为对应的苄酯。产物用一般方法分离，用快速色层法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，9∶1)纯化，便得无色油状的苄酯(8.83克，产率85%)。
(b)后者苄酯(242毫克，0.75毫摩尔)在6.3N HCl/二噁烷(4毫升)中的溶液，在氮气下，0℃搅拌45分钟，然后减压浓缩制得相应的N-去保护的氨基酸衍生物H-Tbg-OBzl，按其盐酸盐形式存在。
(c)将后者盐(7.71克，30毫摩尔)和三乙胺(6.5克，9.06毫升，65毫摩尔)的溶液在0℃搅拌5分钟。加入(1-丙丁基)异氰酸酯(65毫摩尔)的甲苯溶液(浓度＝250毫克/毫升，制备见实施例1)。其后，该反应混合物在室温搅拌16小时。减压下浓缩反应混合物。残留物溶于EtOAc。再用1N盐酸水液、5% Na2CO3水液和盐水洗涤溶液，干燥(MgSO4)后，减压蒸发至干。残留物用快速色层法(SiO2，洗脱剂∶己烷-EtOAc，4∶1)纯化，得Pr2CHNHC(O)-Tbg-OBzl(8.33克，76%)。
(d)将后者化合物(8.33克，23毫摩尔)进行氢解作用(10% Pd/C，EtOH，1atm H2，4小时)。反应完成后，通过45μm滤膜除去催化剂。滤液在减压下浓缩，得白色固体Pr2CHNHC(O)-Tbg-OH(5.94克，95%)。
(e)按照实施例6的偶联方法并用实施例7的化合物H-Asp(cyPn)-(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C-(CH3)3}CH2OBzl作为第一反应物，而实施例3的Boc-Asp(吡咯烷基)-OH为第二反应物，得到Boc-Asp(吡咯烷基)-Asn(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3｝CH2OBzl。按照本实施例节(b)的方法，将后者化合物进行去保护作用而得到H-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3}CH2OBzl。
(f)按照实施例6的偶联方法并使用后者化合物作第一反应物，用本实施例(d)节的Pr2CHNHC(O)-Tbg-OH为第二反应物，得到Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH{CH2C(CH3)3｝CH2OBzl。
(g)将后者化合物(102毫克，0.11毫摩尔)进行氢解作用(10% Pb/C，MeOH，1大气压H2，1小时)。反应完成后，通过45μm滤膜除去该催化剂，滤液在减压下浓缩而得标题化合物，是白色固体(69毫克，85%)。1NMR(DMSO-D6)δ1.8(2s，18H)，1.1-2.0(m，28H)，2.6-3.8(m，12H)，4.1(d，1H)，4.6(m，1H)，4.9(d，1H)，5.9(d，1H)，5.95(d，1H)，7.60(d，1H)，8.1(d，1H)，8.4(d，1H)。质谱723(M+H)+。
使用适当的中间体，实施例6至8的系列偶联及去保护基的方法，可用于制备式1的其他化合物，例如下面实施例中各表所列示的化合物。在某些情况下，最终产物进行沉淀并不能得到纯的物质。在这种情况下可以用半制备的高效液体色谱(HPLC)，在C-18反相分离柱上用各含0.06% TFA的乙腈和水的梯度液洗脱来纯化。为此，在纯化前，要将粗产物溶解在0.1M NH4OH水液中，用0.1摩尔乙酸调整溶液的pH值反回到约7。使用时，按这种方式分离非对映异构的混合物。
实施例9单纯性疱疹病毒(HSV-1)核糖核苷酸还原酶的抑制(a)酶的制备HSV-1核糖核苷酸还原酶(部分纯化)是按E.A.Cohen等人描述(J.Gen.Virol.66，733(1985))的方法，从经HSV-1病毒菌株F(生成10噬菌斑单位/细胞)感染的休眠BHK-21/C13细胞中得到。
(b)对例示肽的测定及结果按P.Gaudreau等人报道(J.Biol.Chem.262 12413(1987))的方法得到在下表中所列化合物测定结果。对每个式1例示化合物的测定结果，是以该化合物能引起50%酶活性的最大抑制时的浓度来表示(IC50)。每次测定中所用酶制剂的单位数量依据酶制剂的比活度是恒定的。所有结果都是相对于没有试验化合物的对比试验所得的活性，并以4次测定的平均值表示其间误差小于10%。
表式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μM实施例8的标题化合物 723*0.08Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 731 0.10Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 717 0.098Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇MeNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 661 0.89Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Me2CHNC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 689 0.07Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇PhNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 723 0.71Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇BzlNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 715*0.41Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 687 0.20Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3
表(续)式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μMMe3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 681*0.10Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 787*0.082C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 795 0.16C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 705 0.57Asp{(R)-iPr}-Leu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 651*0.13Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 705 0.10Asp{(R)-iPr}-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 697*0.072Asp{(R)-iPr}-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 637*0.60Asp(cyPn)-NHCH2CHMe2Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 737*0.096Asp(cyPn)-γMeLeu-OH
表(续)式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μMPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 679*0.18Asp(cyPn)-NHCH2CMe3(1-丙基环戊基)-NHC(O)-Tbg- 799 0.2Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OEtPr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯 753*0.2烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(P吡咯烷基)- 715 0.18Asp(cyPn)-NHCH(CH3)CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2- 702 0.4氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-c环己基- 714 0.142-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2- 700 0.20环戊基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH{C(CH3)2OH}- 761 0.1C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)γMe 亮氨醇表(续)式1的化合物 FAB/MS IC50(M+Na)+μMPr2CHNHC(O)-NH-(R)-CH{C(CH3)2SH}CO- 777 0.15Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 723*0.10Asp(cyPn)-γMeLeu-OH(1-丙环戊基)-NHC(O)-Tbg- 771 0.13Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2- 686 0.25环丁基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Me3CCH2CMe2HNC(O)-Tbg-Asp- 773 0.18(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et 693*0.24MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 693*0.16Asp(cyPn)-NHCH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基) 735*0.14Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3* FAB/MS (M+H)+
实施例10细胞培养中单纯性疱疹病毒(HSV-2)复制的抑制作用测定BHK-21/C13细胞(ATCC CCL 10)是在含加有8%(V/V)胎牛血清(FBS，加拿大Gibco公司)的α-MEM培养基(加拿大Gibco公司，Burlington，Ontario，Canada)的150 cm2T-培养瓶(每个瓶有1.5×106个细胞)中培养2天。将细胞经胰酶消化后转24孔培养板的新鲜培养基中得到每孔在750微升培养基里含2.5×105个细胞。在37℃保温6小时使细胞附着在板上。其后，用加有0.5%(V/V)FBS的α-MEM培养基洗涤细胞一次，再用750μl同样培养基(低血清)使细胞保温3天。经过这段血清饥饿期后，除去这种低血清培养基，并将细胞在500微升BBMT中保温2-3小时(BBMT培养基描述于P.Brazeau等人的报道，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，79，7909(1982))。之后，这些细胞在100微升BBMT培养基中经用HSV-2感染(感染复数＝0.02 PFU/细胞)[注所用的HSV-2是菌株HG-52，见Y.Langelier和G.Buttin的报道(J.Gen.Virol.，57，21(1981))，病毒在-80℃保存]。待病毒在37℃吸附1小时后，除去培养基，再用BBMT洗细胞(3×250微升)。每个孔中的细胞以含有或没有(对照组)适当浓度的溶于200微升BBMT培养基的要试验试剂进行培养。在37℃保温29小时后，首先在-80℃冰冻培养板而收集被感染的细胞，接着解冻。于每个孔中的细胞借助溶解的碎冰片，从表面刮下。待融冰完毕，收集细胞悬浮液，并用150μl BBMT培养液漂洗每个孔。病毒样品(悬浮液加洗液)在4℃下轻轻地用声处理4分钟。离心(在4℃，1000×g 10分钟)除去细胞碎片。收集上清液并在-80℃存放直到测定病毒滴定度。
病毒滴定是用M.Langlois等人改进的比色测定法(见Journal of Biological Standardization，14，201(1986))来完成的。
更明确地说，按上述相似方法。将BHK-21/C13细胞经胰酶消化后转入96孔的微滴定板的新鲜培养基内得到每孔100微升培养基中含20，000个细胞。在准备好的培养板中的细胞在37℃保温2小时。在该时间内将病毒样品解冻并轻轻地声处理15秒，病毒样品便进行对数稀释(1/5序列稀释50微升样品加上200微升BBMT培养基，用多道吸液管制成系列稀释液)。
待BHK-21/C13细胞完成上述保温2小时后，培养基换为加有3%(V/V)FBS的α-MEM培养基。该细胞已可准备用以不同稀释的病毒液来感染。用等分(50微升)的各种稀释病毒液移入培养板的适当小孔中。将所得的感染细胞在37℃保温2天。然后在每孔中加入50微升含0.15%(V/V)中性红染料的汉克平衡盐溶液(Hank′s Balanced Salt Solution，pH7.3，加拿大Gibco公司)。制备好的培养板在37℃保温45分钟，将每孔中的培养基吸出，并用200微升Hank平衡盐溶液洗涤细胞一次。洗涤后，加入100微升0.1摩尔Sorensen柠檬酸盐缓冲液(pH4.2)和乙醇的混合物(1∶1)使细胞中的染料释放出来。｛Sorensen柠檬酸盐缓冲液的制备如下首先，将一水合柠檬酸(21克)溶解在1N NaOH水液(200毫升)，并加入足量的过滤水配成1升而制备0.1M柠檬酸二钠溶液。其次，将0.1摩尔柠檬酸二钠溶液(61.2毫升)与0.1当量HCl水液(38.8毫升)的水液混合。若有需要，调整其pH值至4.2。｝板孔中的混合物轻轻旋转使确保混合均匀。用分光光度计板式计数器，在540μm波长扫描培养板孔以评定存活的细胞数目。按这种方法，能测定各种浓度的测试制剂对病毒生长的抑制百分比，并能计算出影响病毒复制的50%抑制时所用试验制剂的浓度，即EC50。
结果下表提供的示例，是根据本实施例的细胞培养测定法来评定式1肽时所获得的结果。
表式1的化合物 EC50μM实施例8的标题化合物 75Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 180Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 170Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Me2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 700Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 350Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3Me3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 300Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 170C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)- 170C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇表(续)式1的化合物 EC50μMEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 300Asp{(R)-iPr}-Leu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 270Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 140Asp{(R)-iPr}-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 190Asp{(R)-iPr}-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 80Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 150Asp(cyPn)-NHCH2CMe3(1-丙环戊基)-NHC(O)-Tbg- 45Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OEtPr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯烷 170基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 55Asp(cyPn)-NHCH-(R)-CH(Me)CMe3
表(续)式1的化合物 EC50μMPr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2- 25氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环己基 1402-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环戊基 90-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH{C(CH3)2OH}- 210C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-NH-(R)-CH{C(CH3)2SH}CO- 290Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 110Asp(cyPn)-γMeLeu-OH(1-丙环戊基)NHCO-Tbg-Asp- 190(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2-环丁基 160-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3
表(续)式1的化合物 EC50μMMe3CCH2CMe2NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 110Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 106Asp(cyPn)-NHCH2CMe2EtMePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 84Asp(cyPn)-NHCH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)- 7Asp(cyPn)NH-(R)-CH(Et)CMe3式1中的其他化合物包括:
Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CH2CMe3EtPr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CH2CMe权利要求
1.一种式1的肽，或其治疗上可接受的盐，其中，A是R4NHC(O)，其中R4是(i)(2-10C)烷基；(ii)一种选自1-(2-丙烯基)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基，和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基的不饱和烷基；(iii)苯基(低级)烷基，或以低级烷基、卤素、羟基、低级烷基或低级烷氧基单取代的苯基(低级)烷基；或(iv)1-(低级烷基)-(低级环烷基)；B是氨基酸残基，或通式NHCHR5C(O)衍生的氨基酸残基，其中R5是1-三环{3.3.1.13、7}癸基，低级烷基或以羧基、羟基、巯基或苄氧基单取代的低级烷基；R1是低级烷基、低级环烷基、1-(低级烷基)-(低级烷基)或NR6R7，其中R6为氢或低级烷基而R7是低级烷基，或R6和R7经和它们相连的氮原子共同连接形成吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基；R2是氢或低级烷基而R3为低级烷基，或R2为氢和R3为苯基-(1-4C)烷基，或R2和R3与和它们相连的碳原子共同连接生成低级环烷基；D是NHR8其中R8为(4-9C)烷基，或D是NHCH(R9)-Z，其中R9是(4-9C)烷基、低级环烷基或(低级环烷基)-(低级烷基)；和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10，其中R10是低级烷基。
2.根据权利要求1限定的肽，或其治疗学上可接受的盐，其中A是(2-10C)烷基氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-乙基-1-(2-(丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、苄基氨羰基、(1-丙环戊基)氨羰基、1-乙环己基)氨羰基，或(1-丙环己基)-氨羰基;B是NHCHR5C(O)，其中R5为1-三环-｛3.3.1.13.7｝癸基，低级烷基或以羧基、羟基或巯基单取代的低级烷基;而R1、R2、R3和D如上所限定。
3.根据权利要求2所限定的肽，或其治疗学上可接受的盐，其中A是丙基氨羰基、(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)氨羰基、(1-甲丙基)氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基、(1，1-二甲丁基)氨羰基、(1，1，3，3-四甲丁基)氨羰基、(1-乙丁基)-氨羰基、(1-丙丁基)氨羰基、(1-乙戊基-氨羰基、(2-丙戊基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基-氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙基环戊基)氨羰基、(1-乙环己基)氨羰基、(1-丙环己基)氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基，或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基，B是如下氨基酸的残基(S)-2-氨基三环｛3.3.1.13.7｝癸烷-1-乙酸、(S)-α-氨基-3-羟基-3-甲基-丁酸，或(R)-2-氨基-3-巯基-3-甲丁酸;或选自Tbg，Val，Asp{(R)-Me}和Asp(diMe)的氨基酸残基，R1是低级烷基、低级环烷基、N，N-二甲氨基、N，N-二乙氨基、吡咯烷基，哌啶子基，R2是氢;而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基或苄基，而且含有R2和R3的碳原子具有(R)-构型，或R2和R3各分别为甲基、乙基，或R2和R3与和它们相连的碳原子共同形成环丁基、环戊基或环己基;而D是NHR8，其中R8是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基及2，2-二甲戊基，或D是NHCH(R9)-Z，其中含有R9的碳原子有(S)-构型，R9是1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或环己丙基，而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10其中R10是甲基、乙基或丙基。
4.根据权利要求3所限定的肽或其治疗学上可接受的盐，其中A为(1-甲乙基)氨羰基、(1，1-二甲乙基)-氨羰基、(1-乙丙基)氨羰基。(1-丙丁基)氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基或(1-丙环戊基)氨羰基;B、R1、R2和R3如上面最后情况下所定义的;而D是NHR8，其中R8是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲-丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或3，3-二甲丁基，或D是NHCH(R9)-Z，其中含R9的碳原子有(S)-构型，R9是2，2-二甲丙基，而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR10其中R10是甲基、乙基或丙基。
5.权利要求1所限定的肽是选以发下化合物Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Et2CHNHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，MeNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Me2CHNHC(O)-Tbg-Asp(pyrrolidino)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，PhNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，BzlNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3，Me3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(Pyrrolidino)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-Leu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CHMe2，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(1-丙基环戊基)-NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OEt，Pr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2-氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环己基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环戊基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH{C(CH3)2OH}C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)yMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-NH-(R)-CH｛C(CH3)2SH｝CO-Asp(P吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，(1-丙环戊基)NHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NH-(S)-CH(2-环丁基-2-氧乙基)-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Me3CCH2CMe2NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe2Et，MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，及MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)NH-(R)-CH(Et)CH2CMe3.
6.一种药物组合物，它含有抗疱疹病毒有效量的权利要求1定义的肽，或其治疗学上可接受的盐，和药物学上或兽医学上可接受的载体。
7.一种化妆组合物，它含有权利要求1所定义的肽，或其治疗学上可接受的盐，和用于局部给药的生理学上可接受的载体。
8.一种治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法，它包括以抗疱疹病毒有效量的权利要求1定义的肽，或其治疗学上可接受的盐对哺乳动物给药。
9.一种抑制疱疹病毒复制的方法，它是用疱疹病毒核糖核苷酸还原酶抑制量的式1肽，或其治疗学上可接受的盐，与病毒相接触。
10.一种药物组合物，它含有药物学上或兽医学上可接受的载体，和有效量的抗病毒核苷类似物或其药物学上可接受的盐，和权利要求1定义的核糖核苷酸还原酶抑制肽或其治疗学上可接受盐类的结合物。
11.按权利要求10的药物组合物，其中核苷类似物是通式2的化合物或其治疗上可接受的盐。
其中R11为氢、羟基或氨基。
12.按权利要求10的药物组合物，其中抗病毒核苷类似物是选自阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羟甲无环鸟苷、依多西啶、布罗瓦维、弗西它平、潘西克罗维、法西克罗维和洛西克罗维。
13.一种治疗哺乳动物疱疹病毒感染的方法，包括对哺乳动物以有效量的抗病毒核苷类似物或其治疗学上可接受的盐，和权利要求1的式1的核糖核苷酸还原酶的抑制肽或其治疗学上可接受的盐的结合物给药。
14.按权利要求13的方法，其中核苷类似物和式1的肽可依次地或同时给药。
15.按权利要求13的方法，其中结合物是以局部给药。
16.权利要求13的方法，其中抗病毒核苷类似物选自无环鸟苷、6-去氧无环鸟苷、2，6-二氨基-9-｛(2-羟乙氧基)甲基｝嘌呤、阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羟甲无环鸟苷、依多西啶、布罗瓦维、弗西它平、潘西克罗维、法西克罗维和洛西克罗维。
17.一种治疗哺乳动物1型或2型单纯性疱疹病毒感染的方法，包括以有效量的权利要求6的药物组合物给药，其中式1的肽选自以下化合物Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Et2CHNHCO-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，MeNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Me2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，PhNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，BzlNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CH2(CH3)3，Me3CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp-(cyPn)-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(金刚烷基)-C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-Leu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp{(R)-iPr}-yMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CH(CH3)2，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，(1-丙环戊基)-NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OEt，Pr2CHNHC(O)-Asp(diMe)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH(CH3)C(CH3)3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(3-乙基-2-氧戊基)CO-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环己基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NHCH(2-环戊基-2-氧乙基)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2C(CH3)3，andPr2CHNHC(O)-NH(S)-CH{C(CH3)2OH}C(O)-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)yMe亮氨醇.PrMe2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，(1-丙环戊基)NHCO-Tbq-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-NH(S)-CH(2-环丁基-2-氧乙基)-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Me3CCH2CMe2NHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-yMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe2Et，MePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，andMePr2CNHC(O)-Tbg-Asp(吡咯烷基)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，and
18.一种制备权利要求1所限定的肽，或其治疗学上可接受的盐的方法，包括(a)逐步偶联，按照肽，氨基酸或衍生氨基酸的残基，和肽的非肽片段的顺序进行，其中(ⅰ)用适当的保护基将残基或片段的支链上反应性的基团进行保护以避免在该位点上发生化学反应，直至逐步偶联完成后最后除去保护基团;(ⅱ)偶合反应物的α-氨基用α-氨基保护基进行保护，而该反应物的游离羧基与第2个反应物的游离的α-氨基进行偶联;该α-氨基保护基是可选择性地被除去以便在该α-氨基上产生其后的偶联步骤和(ⅲ)氨基酸残基或肽片段的C-端的羧基，若将成为被保护的肽的C-端功能团，就要用合适的保护基进行保护以避免在该位点发生化学反应，直至肽所需的氨基酸序列装配完毕。(b)待偶联反应完成，除去所有的保护基团，若需要，实施标准变换以得到权利要求1的肽;而且如有要求，可将肽转变为治疗学上可接受的盐。
全文摘要
本发明公开了以下通式的肽衍生物A-B-NHCH{CH
文档编号C07K5/04GK1096299SQ9310679
公开日1994年12月14日 申请日期1993年6月8日 优先权日1993年6月8日
发明者罗伯特·德泽尔, 雷蒙德·普兰特, 尼尔·莫斯 申请人:比奥·梅加·贝林格尔·英格海姆研究公司
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