2-氨基-6，7-二羟基-4-硫杂庚酸衍生物、其制备及应用的制作方法

专利名称：2-氨基-6，7-二羟基-4-硫杂庚酸衍生物、其制备及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及2-氨基-6，7-二羟基-4-硫杂庚酸衍生物，所说衍生物可用作由于各种原因引起的白细胞减少症、由于白细胞降低引起的疾病，从治疗观点看需要增加骨髓细胞或白细胞的疾病的治疗剂，及由于各种原因引起的血小板减少症、由于血小板降低引起的疾病、或从治疗观点看需要增加血小板的疾病的治疗剂。
在Hoppe-Seyler的Zeitschrift fur Physiologiche Chemie 364第593-606(1983)页中，披露了一种由E.Coli制备的脂蛋白得到的合成肽，其具有如下结构式
在JPA H4(1992)-046194中披露了WS1279A物质，其具有如下结构式
Achiwa等人曾经合成了作为旋光活性化合物的那些化合物[参见JPA H4(1992)-099796，CHem. Pharm. Bull. 39，第2590(1991)页和Peptide Chemistry，第361(1991)页]。
然而，本发明的化合物在这些参考文献中并没有描述。
顺便说一下，用于本发明的氨基酸、肽等的缩略语是基于根据IUPAC-IUB委员会关于生物化学术语定义的那些缩略语或在相关领域常用的那些缩略语，并且，除非另有说明，氨基酸的可能的旋光异构体是L-异构体。
癌症的化学疗法或放射疗法引起了严重的白细胞减少症或严重的血小板减少症。前者导致抵抗感染或其它各种疾病能力的降低而没有达到足够的治疗效果。后者造成不充分的止血机理也没有足够的治疗效果。这些在癌症领域中已引起认真的关注。在这样的情况下，强烈期望研究那些减轻由于这些治疗方法引起的造血功能的抑制的药物和能够提高恢复白细胞数量或血小板数量的药物。而且，在骨髓移植治疗中，迫切期望提高被移植的骨髓细胞的增殖能力的药物和迅速恢复白细胞数量的能力的药物。更进一步地，这些药物可用作在骨髓移植后的血小板减少症的治疗剂或伴随有血小板减少症如再生障碍性贫血和阵发性血小板减少症紫癜的自体免疫疾病的治疗剂。
由于考虑到上述现有的情况，本发明的发明者根据最新观点，正从事于对具有增加白细胞数量作用的化合物的研究。结果，本发明者发现新的2-氨基-6，7-二羟基-4-硫杂庚酸衍生物提高了小鼠骨髓细胞的增殖能力和增加了周围白细胞的数量。而且，所说化合物也刺激了小鼠骨髓细胞从而促进了巨核细胞的增殖和分化。基于这些发现，本发明者进行了进一步的研究从而完成了本发明。
本发明提供了1)结构式(Ⅰ)的化合物或其盐
其中R1和R2的每一个是氢或脂肪族酰基，A是可被保护的氨基，X是由1-10个氨基酸残基构成的氨基酸序列，其中至少含有一个具有增加水溶性基团的氨基酸残基。
2)根据1)的化合物，其中A是氨基。
3)根据1)的化合物，其中A是可用取代的氧羰基取代的氨基。
4)根据1)的化合物，其中具有增加水溶性基团的氨基酸残基是酸性氨基酸残基。
5)根据1)的化合物，其中具有增加水溶性基团的氨基酸残基是碱性氨基酸残基。
6)根据1)的化合物，其中脂肪族酰基是C2-30脂肪族酰基。
7)根据1)的化合物，其中至少R1和R2中的一个是脂肪族酰基。
8)根据1)的化合物，其中R1是脂肪族酰基。
9)根据1)的化合物，其中R2是脂肪族酰基。
10)根据1)的化合物，其中所说化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰-甘氨酰-谷氨酰-谷氨酸。
11)根据1)化合物，其中所说化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰-甘氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
12)根据1)化合物，其中所说化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰-谷氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
13)根据1)的化合物，其中所说化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰-甘氨酰-D-谷氨酸。
14)一种具有增加白细胞作用的刺激免疫组合物，其含有1)中定义的化合物或其盐。
15)根据14)的一种刺激免疫组合物，其中至少R1和R2中的一个是脂肪族酰基。
16)一种用于治疗血小板减少症的组合物，其中包括1)中所定义的化合物或其盐。
17)一种制备1)中所定义的化合物或其盐的方法，其中包括使结构式(Ⅱ)的化合物或其盐经过脱保护反应
其中R1和R2的每一个是氢或脂肪族酰基，R3是保护基，A是可被保护的氨基，X′是由1-10任意保护的氨基酸残基构成的氨基酸序列，其至少含有一个具有增加水溶性基团的任意保护的氨基酸残基。
关于结构式(Ⅰ)和(Ⅱ)，用R1和R2所示的脂肪族酰基包括由脂肪族羧酸衍生得到的脂肪族酰基。所说的脂肪族酰基的例子包括饱和的或不饱和具有最多34个碳原子的脂肪族酰基(例如，甲酰、乙酰、丙酰、丁酰、异丁酰、戊酰、异戊酰、己酰、庚酰、辛酰、癸酰、十二酰、十三酰、十四酰、十五酰、十六酰、十七酰、十八酰、十九酰、二十四酰、二十六酰、二十酰、二十一酰、二十二酰、二十四酰、二十六酰、乙基十二酰、甲基十三酰、乙基十三酰、甲基十四酰、乙基十四酰、甲基十五酰、乙基十五酰、乙基十六酰、乙基十六酰、甲基十七酰、乙基十七酰、甲基十八酰、乙基十八酰、二十八酰、三十酰、三十二酰、三十四酰、丙烯酰、丙炔酰、异丁烯酰、丁烯酰、异丁烯酰、十四油酰、油酰、棕榈油酰、反油酰、顺，顺-9，12-十八三烯酰、9，12，15-十八三烯酰、9，11，13-十八三烯酰、5，8，11，14-二十烷四烯酰、顺-15-二十四烯酰，等等。)脂肪族酰基的优选例子包括C2-30饱和的或不饱和的脂肪族酰基(例如乙酰、丙酰、丁酰、异丁酰、戊酰、异戊酰、己酰、庚酰、辛酰、癸酰、十二酰、十三酰、十四酰、十五酰、十六酰、十七酰、十八酰、十九酰、二十酰、二十一酰、二十二酰、乙基十二酰、甲基十三酰、乙基十三酰、甲基十四酰、乙基十四酰、甲基十五酰、乙基十五酰、甲基十六酰、乙基十六酰、甲基十七酰、乙基十七酰、甲基十八酰、乙基十八酰、二十四酰、二十六酰、二十八酰、三十酰、十四油酰、油酰、棕榈油酰、反油酰、顺，顺-9，12-十八三烯酰、9，12，15-十八三烯酰、9，11，13-十八三烯酰、5，8，11，14-二十烷四烯酰、顺-15-二十四烯酰，等等。)用R1和R2所示的脂肪族酰基的特别优选的例子包括C2-16饱和的或不饱和的脂肪族酰基。
优选地，至少R1和R2中的一个是脂肪族酰基。
最好R1和R2都是脂肪族酰基。
在上述结构(Ⅰ)和(Ⅱ)中，用A所示的任意保护的氨基中的保护基的例子包括甲酰基、C7-10芳羰基(例如苯基羰基)，取代的氧羰基[例如C1-6烷氧基羰基(例如甲氧基羰基，乙氧基羰基，等)，C7-10芳氧基羰基(例如苯氧基羰基，等)，9-芴基甲氧基羰基，C7-10芳烷氧基羰基(例如苄氧基羰基，等)，金刚烷基氧羰基等]，C7-10芳烷基羰基(例如苄基羰基，等)，三苯甲基和邻苯二甲酰基。这些保护基中除甲酰基外都可被取代。所说取代基的例子包括卤原子(例如氟代、氯代、溴代和碘代)，C1-5烷基羰基(例如乙酰，乙基羰基，丁基羰基，等)和硝基。取代基的数量可在1-3范围内变化。
当R1和R2都是脂肪族酰基时，A优选具有上述意义。
优选地，A是可被取代的氧羰基保护的氨基。A最好是氨基。
在结构式(Ⅰ)中，在由X所示的氨基酸序列中的氨基酸意义为在其分子中具有氨基和酸基(例如羧基、磺酸基)的化合物。氨基酸的优选的例子包括那些在Dr.Munio Kotake管理下编辑的，由日本Asakura Shoten 1960年出版的Dai Yuhki Kagaku(Encyclopedia of Organic Chemistry)第21卷“天然聚合物Ⅲ”中和由J.S.Davies编辑1985年美国出版，Chapman和Hall的“氨基酸和肽”中所述的氨基酸。
为了进一步具体阐明，例如，可以提及组成蛋白质的氨基酸[例如，脂肪一元氨基一元羧酸如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等，脂肪羟基氨基酸如丝氨酸、苏氨酸等，酸性氨基酸如门冬氨酸、谷氨酸等;酸性氨基酸酰胺如天冬酰胺、谷氨酰胺等，芳香氨基酸如苯基丙氨酸、酪氨酸、色氨酸等，亚氨基羧酸如脯氨酸、羟基脯氨酸等，碱性氨基酸如精氨酸、赖氨酸、组氨酸等，和含硫氨基酸如蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸等]，由天然物质得到的氨基酸，例如微生物的代谢物或动物和植物成分[例如脂肪一元氨基一元羧酸如L-α-氨基丁酸、γ-氨酸丁酸、β-氨基异丁酸、β-丙氨酸、高丝氨酸、α-甲基-D-丝氨酸、O-氨基甲酰-D-丝氨酸、δ-羟基-γ-氧代正缬氨酸等，一元氨基二羧酸如L-α-氨基己二酸、L-β-氨基己二酸、L-茶氨酸、L-γ-亚甲基谷氨酸、L-γ-甲基谷氨酸等，二氨基-羧酸如L-鸟氨酸、β-赖氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，等，二氨基二羧酸如二氨基庚二酸等，含磺酸一元氨基一元羧酸如磺基丙氨酸等，含磺酸氨基酸如牛磺酸等，芳香氨基酸如犬尿氨酸、3，4-二氧代苯基-L-丙氨酸等，杂环氨基酸如2，3-二羧酸氮丙啶，[S]-2-氨基-3-(异噁唑啉基-5-酮-4-基)丙酸，抗羊膜菌素等，碱性氨基酸如L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine、[3R，5R]-3，6-二氨基-5-羟基己酸，等，含硫氨基酸如羊毛硫氨酸、S-甲基-L-半胱氨酸等，环状氨基酸如哌啶酸、氮杂环丁烷-2-羧酸，[1R，2S]-2-氨基环戊烷-1-羧酸等，用特殊官能团取代的氨基酸如瓜氨酸、亚硝基羟基丙氨酸、L-重氮丝氨酸等]，和由有机合成得到的氨基酸[例如6-氨基己酸、8-氨基辛酸、12-氨基十二酸、4-氨基苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、4-(N-羧基甲基)氨基甲基苯甲酸等]。
氨基酸残基的意义为由氨基酸得到的二价基并具有与氨基和酸基分别相连的键。
顺便说说，即使该基团作为氨基酸是不稳定的，在氨基被酰化或酸基具有酰胺键的情况下，该基团仍可用作氨基残基。这样的氨基的例子包括(6-氨基己基)氨基甲酸。
关于结构式(Ⅰ)，在用X表示的氨基酸序列中的具有水溶性增强基的氨基酸的例子包括上述酸性氨基酸和碱性氨基酸，优选酸性氨基酸。
酸性氨基酸的例子包括除羧基和氨基外还具有一个或多个酸性官能团(例如羧基，磺酸基等)的化合物。优选的酸性氨基酸的例子包括具有一个氨基和两个或多个羧基的化合物。为了更具体地阐述，例如，可以提及氨基二羧酸(例如，门冬氨酸、谷氨酸、L-α-氨基己二酸、L-β-氨基己二酸、2，3-二羧酸氮丙啶，等)，较优选α-氨基二羧酸(如门冬氨酸、谷氨酸、L-α-氨基己二酸等)，在这些当中，最优选门冬氨酸和谷氨酸。
碱性氨基酸的例子包括具有一个或多个碱性官能团(例如氨基、含碱性氮的杂环基如咪唑基、吲哚基等，胍基，等等)的化合物。碱性氨基酸的优选的例子包括具有一个氨基，一个羧基和一个或多个所说碱性官能团的化合物。
为了进一步具体阐明，例如，可以提及组成蛋白质的碱性氨基酸(如精氨酸、赖氨酸、组氨酸等)和由天然物质如微生物的代谢物或动物和植物成分得到的碱性氨基酸[例如二氨基羧酸如L-鸟氨酸、β-赖氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，等，L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine、[3R、5R]-3，6-二氨基-5-羟基己酸，等)，较优选组成蛋白质的碱性氨基酸(如精氨酸、赖氨酸、组氨酸等)和由天然物质如微生物的代谢物或动物和植物成分得到的碱性α-氨基酸(例如L-鸟氨酸、β-赖氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine，等)，在这些当中最优选赖氨酸、精氨酸、组氨酸。
在结构式(Ⅱ)中，由R3表示的保护基优选利用如下所述的羧基保护基。
在结构式(Ⅱ)中，在由Ⅹ′表示的氨基酸序列中的任意保护的氨基酸残基中的氨基酸与在上述由Ⅹ表示的氨基酸序列中的氨基酸残基中的氨基酸具有相同的意义。
在结构式(Ⅱ)中，在由Ⅹ′表示的具有增强氨基酸序列的水溶性的基团的任意保护的氨基酸残基中的氨基酸与在上述由Ⅹ表示的具有增强氨基酸序列的水溶性的基团的氨基酸残基中的氨基酸具有相同的意义。
在肽合成中使用的保护氨基、羧基或羟基的已知的保护基可提及用作保护基。这些是可被除去的保护基，例如，通过水解、氢解、还原、氨解、或肼解。
氨基保护基的例子包括尿烷-型保护基(例如，苄氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙氧基羰基、叔戊氧基羰基、异冰片基氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、2-氯代苄氧基羰基、金刚烷基氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、2，2，2-三氯代乙氧基羰基)，酰基型保护基(例如，任意地具有象卤素那样的取代基的C1-6低级脂肪酸残基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、三氯代乙酰基、氯代乙酰基，等，邻苯二甲酰、甲苯磺酰、2-硝基亚氧硫酰、4-甲氧基-2-硝基亚氧硫酰、苯甲酰，等)和烷基型保护基(例如三苯甲基、苄基等)。
在这些当中，最优选尿烷型保护基。
羧基可通过将它们转化成，例如，酰氨基、酰肼基或酯来保护。优选的酰氨基或酰肼基是用适当取代基取代的那些。优选的酰氨基是用C7-19芳烷基取代的那些，该芳烷基任意地用，例如，烷氧基取代(例如3，4-二甲氧基苄基或双-(对-甲氧基苯基)-甲基)。优选的酰肼基是用，例如，C1-6烷氧基羰基取代的那些。该烷氧基羰基任意地用卤素(例如，氟、氯、溴，等)，C6-12芳基(例如，苯基、对联苯基，等)取代(例如，苄氧基羰基、三氯代乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-(对-联苯基)-异丙氧基羰基，等)。卤代C2-6链烷酰基(例如三氟乙酰基，等)和C7-19芳烷基(例如三苯甲基，等)也在其中。此外，羧基可作为酯用任意取代的低级醇(例如，甲醇、乙醇、氰基甲基醇、苯甲酰甲基醇、叔丁醇，等)，芳烷醇[例如，任意地用，例如，低级烷基、低级烷氧基或卤原子取代的苄基醇或二苯基甲醇(如，二苯基甲醇、对硝基苄基醇、对甲氧基苄基醇、2，4，6-三甲基苄基醇，等)]，任意用吸电子基团取代的酚和苯硫酚(例如，苯硫酚、甲苯硫酚、对硝基苯硫酚，2，4，5-和2，4，6-三氯代苯酚，对氰基苯酚、对甲磺酰苯酚，等)来保护，此外，还可用N-羟基亚胺(例如，N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基苯邻二甲酰亚胺，等)，N-羟基哌啶、8-羟基喹啉等来保护。
作为特殊的羧基保护基，其可在中性反应条件下被除去，可以提及的有烃基-甲硅烷基-乙基，例如，2-(三甲基甲硅烷基)-乙基(在公开的德国专利号2，706，490中已描述)。
羟基可通过，例如，酰基化或醚化来保护。
在酰基化中特别优选的酰基是用碳酸衍生得到的基(例如，苄氧基羰基或乙氧基羰基)。对于醚化，例如，优选苄基。四氢呋喃或叔丁基。对于羟基的保护，优选使用2，2，2-三氟-1-叔丁氧基羰基氨基乙基或2，2，2-三氟-1-苄氧基羰基氨基乙基[Chem.Ber.，第100(1967)卷，第3838-3849页]。
在结构式(Ⅰ)中，在氨基残基可能是光学活性异构体的情况下，其可以是任意的L-，D-和DL-形式。
化合物(Ⅰ)或其盐的优选的实例包括(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰基氧基)-4-硫杂庚酰-Gly-Glu-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰基氧基)-4-硫杂庚酰-Gly-Gly-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰基氧基)-4-硫杂庚酰-Glu-Gly-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰基氧基)-4-硫杂庚酰-Gly-D-Glu-OH，或其盐。
下面，描述制备上述化合物的方法。
常常使用的保护基和反应剂在后面的叙述中被缩写为如下的形式
Fmoc9-芴基甲氧基羰基Z苄氧基羰基tBu叔丁基OtBu叔丁氧基TFA三氟乙酸TEA三乙胺DMFN，N-二甲基甲酰胺DCCN，N′-二环己基碳化二亚胺BOP苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓·六氟磷酸盐DICN，N′-二异丙基碳化二亚胺HONBN-羟基-5-降冰片烯-2，3-二羧酸酰亚胺DEPC二乙基偶磷氰酸盐HOBT1-羟基苯并三唑DCM二氯甲烷MeOH甲醇THF四氢呋喃WSC水溶性碳化二亚胺·盐酸盐DMAP4-二甲基氨基吡啶Boc叔丁氧基羰基R-R-构型S-S-构型作为本说明书基本骨架的化合物是2-氨基-6，7-二羟基-4-硫杂庚酸
在本说明书中，硫杂庚酰被缩写成TFT，硫杂庚酸被缩写成TFT-OH。十八酰基被缩写成Ste，十六酰被缩写成Pam，十四酰被缩写成Myr，和十八酰氧基被缩写成SteO，十六酰氧基被缩写成PamO，十四酰氧基被缩写成MyrO。
用结构式(Ⅰ)表示的化合物或其盐可通过使用结构式(Ⅱ)表示的化合物或其盐进行脱保护基反应来制备。
实际上，脱保护基反应可通过用已知的方法来进行，例如，通常用在肽化学领域常用的方法。[参见合成化学丛书，肽合成，作者IZUMIYA Nobuo，UNO Motonori，KATO Tetsuo & AOYAGI Haruhiko;由Maruzen有限公司出版，1975，日本]。
用尿烷型保护基保护的氨基上的脱保护反应通过在无溶剂或在溶剂中使氨基与酸接触来进行，所说溶剂对反应不起副作用。对于所说的溶剂，可使用卤化烃(例如，二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷，等)，醇(例如，甲醇;乙醇，等)，水和这些溶剂的适当比例的混合物。该反应通过使化合物(Ⅱ)或其盐与一种酸接触来进行。所说的酸，例如，可使用卤代乙酸(例如三氟乙酸，等)，氢卤酸(例如，氢氯酸、氢溴酸，等)也在其中。N-苄氧基羰基和N-4-甲氧基苄氧基羰基通过催化剂进行催化氢代除去是有利的，所说催化剂，例如，有钯催化剂(例如，钯-碳、钯-硫酸钡、钯黑等)或铑催化剂。在这种情况下，可使用已知的溶剂，例如，环状醚(例如，四氢呋喃，等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，或者，根据情况，一种环状醚和其它惰性溶剂[例如，低级脂肪酸酰胺(例如，二甲基甲酰胺，等)等]的混合物。
N-9-芴基甲氧基羰基可使用有机胺有利地除去，有机胺的例子有二乙胺、哌啶、吗啉、4-二甲基氨基吡啶或二环己基胺。该反应在对反应不引起副使用的溶剂中进行。作为溶剂，例如，可以使用酰胺(例如，二甲基甲酰胺、乙酰胺等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，卤代烃(例如氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷，等)，等，或这些溶剂以适当比例的混合物。
有利的是，N-2，2，2-三氯代乙氧基羰基通过使用金属(如锌，等)与有机羧酸(例如，乙酸、丙酸，等)一起来除去。该反应在对反应不引起副作用的溶剂中进行。作为溶剂，例如，可以使用上述羧酸，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，水或这些溶剂以适当比例的混合物。
酰化羟基的脱保护基反应(脱酰化反应)可通过在溶剂中将其与酸接触来进行，所说溶剂不在反应中起副作用。对于所说的溶剂，可使用卤代烃(例如，二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷，等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，水和这些溶剂以适当比例的混合物。该反应通过使化合物(Ⅱ)或其盐与一种酸接触来进行。所说的酸，例如，使用卤代乙酸(例如三氟乙酸，等)，氢卤酸(例如，氢氯酸、氢溴酸，等)等。
O-苄基的消去优选通过使用催化剂进行催化氢化反应来完成，所说催化剂，例如，有钯催化剂，例如，钯-碳、钯/硫酸钡和钯黑等，或铑催化剂，在这种情况下，可使用已知的溶剂，例如，环状醚(例如，四氢呋喃，等)和其它惰性溶剂[例如，低级脂肪酸酰胺(例如，二甲基甲酰胺，等)等]的混合物。
O-四氢呋喃基或O-叔丁基的消去可通过用酸水解(象上述脱酰化一样)来完成。
羧酸保护基的消去可通过用酸水解(象上述脱酸化一样)来完成。苄基酯，例如，可用在象上述O-苄基消去保护基中的情况一样通过催化氢化反应来脱保护。上述2-(三甲基甲硅烷基)-乙基的消去可在中性条件下和适当溶剂中，例如，通过氢氟酸的一种盐，如，尤其是季氮碱与氢氟酸的盐(例如，四乙胺氟化物，等)的作用来进行。
用于制备上述通式(Ⅰ)或其盐的起始化合物即用通式(Ⅱ)表示的化合物或其盐可通过使用在肽合成中常用的方法，使相应于在肽键任意位置上断开的两个碎片中的一个具有一个活性羧基的物质和相应于另一碎片的具有一个活性氨基的物质进行缩合来制备。
上述作为在肽合成中常用的方法，例如，可使用液相合成方法和固相合成方法中的任意一个。这样的上述肽合成方法包括，例如，在“肽合成”[由M.Bondosky和M.Ondetti所著，边缘科学(Interscience)，New York 1966)];“蛋白质”第二卷(由F.M.Finn和K.Hoffmann所著，H.Nenrath和R.L.Hill编辑，Academic Press Inc.New York，1976);“肽合成的基础和实验”(由IZUMIYA Nobuo所著，Maruzen Co.Ltd.，1985);“Seikagaku Jikken Koza 1”(由YAJIMA Haruaki，SAKAKIBARA Shunpei等人所著，日本生化学会编辑，Tokyo Kagaku Dojin，1977);“Zoku Seikagaku Jikken Koza 2”(由KIMURA Shun等人所著，日本生化学会编辑，Tokyo Kagaku Dojin 1987);“固相肽合成”(由J.M.Slewart和J.D.Young所著，Pizs化学公司，Illinois，1984)所述的方法，或与这些相类似的方法。上面这些方法的实际例子包括，例如，叠氮化物方法，氯化物方法，酸酐方法，混合酸酐方法，DCC方法，活性酯方法，使用Woodword试剂K的方法，羰基咪唑方法，redoc方法，DCC/HONB方法，DIC/HONB方法，DCC/HONB方法，使用BOP试剂的方法，使用DEPC试剂的方法等等。
对于一个起始碎片的优选的实际的例子，在制备上述化合物(Ⅱ)或其盐的情况中，可以有，例如，用结构式(Ⅲ)表示的化合物或其盐
其中，X′和R3具有与上述相同的意义。
化合物(Ⅲ)或其盐可通过，例如，上述常用的肽合成方法来制备。
化合物(Ⅲ)的优选实例包括如下化合物。
化合物编号结构式P-1 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBuP-2 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBuP-3 H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-4 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-5 H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-6 H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-7 H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-8 H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBuP-9 H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-10 H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-11 H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBuP-12 H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-13 H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-14 H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-15 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBuP-16 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-17 NH2(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBuP-18 NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu
化合物编号结构式P-19 4－氨基苯甲酰基－Glu(OtBu)-OtBuP-20 4－(甘氨酰氨基)苯甲酰基－Glu(OtBu)-OtBuP-21 NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBuP-22 NH2(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBuP-23 4－(氨基甲基)苯甲酰基－Glu(OtBu)-OtBu氢氯化物P-244-(N-(t-丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酰基－Glu(OtBu)-OtBuP-25 H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu作为通过与上述化合物(Ⅲ)化合制备化合物(Ⅱ)的起始碎片，可使用用结构式(Ⅳ)表示的化合物
其中，Y表示氨基保护基;R1和R2与上述具有相同的定义。
在上述通式(Ⅳ)中用Y表示的氨基保护基与上述氨基保护基具有相同的定义。
化合物(Ⅳ)或其盐，其中R1和R2代表一个且相同的基，可通过适当使用本身已知的方法制备[例如，肽和蛋白质研究国际期刊，38，1991第545-554页;化学和药物公报，39第2590-2596页]。
在R1和R2是相互不同的基团的情况下，最通用的制备方法描述如下。
首先，制备甘油衍生物的一元酰基化合物，例如，缩水甘油或表氯醇。另一方面，胱氨酸的二硫化物键(其中氨基和羧基被保护)被还原打开从而得到半胱氨酸衍生物。
通过将该半胱氨酸衍生物与上述一元甘油衍生物进行加成反应，得到2-氨基-6-羟基-7-酰基氧基-4-硫杂庚酸(其中已将氨基和羧基保护)。
在这个反应中，R-(+)-缩水甘油的使用得到了(6R)-2-氨基-6-羟基-7-酰基氧基-4-硫杂庚酸衍生物，而S-(-)-缩水甘油的使用得到了(6S)-2-氨基-6-羟基-7-酰基氧基-4-硫杂庚酸衍生物。
通过上述反应得到的2-氨基-6-羟基-7-酰基氧基-4-硫杂庚酸在6位上的羟基进行常规的酰化，可以得到具有不同O-酰基的2-氨基-6，7-双(酰基氧基)-4-硫杂庚酸衍生物。
例如，通过直接使用缩水甘油而不是使用酰基甘油衍生物，得到了2-氨基-6，7-二羟基-4-硫杂庚酸衍生物，以及，通过使用常规方法将该产物酰化方便地得到了具有相同O-酰基的2-氨基-6，7-双(酰基氧基)-4-硫杂庚酸衍生物。
在上述方法中，通过除去如此得到的2-氨基-6，7-双(酰基氧基)-4-硫杂庚酸衍生物的羧基的保护基，可制备具有保护氨基的2-氨基-6，7-双(酰基氧基)-4-硫杂庚酸衍生物。
化合物(Ⅳ)的优选实施例包括具有保护氨基的2-氨基-6，7-双(酰基氧基)-4-硫杂庚酸衍生物其它的实例表示如下化合物编号 结构式GC-1 (2R,6S)-2-Fmoc-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-OHGC-2 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-OHGC-3 (2S,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-OHGC-4 (2S,6S)-2-Fmoc-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-OHGC-5 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OHGC-6 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-双(SteO)-4-THT-OHGC-7 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-双(MyrO)-4-THT-OH将这样得到的起始碎片用下列方法缩合，然后，如果需要的话，除去用Y表示的氨基保护基得到化合物(Ⅱ)或其盐。
至于通过活化起始化合物的羧基得到的化合物，例如，可以使用相应的酸酐，叠氮化物，活性酯[例如，与醇(例如，五氯苯酚、2，4，5-三氯苯酚、2，4-二硝基苯酚、氰甲基醇、对-硝基苯酚、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二羧酸酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基邻苯二甲酰亚胺、N-羟基苯并三唑)形成的酯]。对于氨基被活化的起始化合物，例如，可以使用相应的磷酸酰胺。
所说的缩合可在溶剂的存在下进行。所说溶剂选自在肽缩合反应中使用的那些已知的溶剂。所说的溶剂的例子包括酰胺，例如无水或含水甲酰胺、二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等，亚砜如二甲基亚砜，等，芳香胺如吡啶，等，卤代烃如氯仿、二氯甲烷，等，醚如四氢呋喃、二噁烷，等，腈如乙腈，等，酯如乙酸乙酯、甲酸乙酯，等，或这些物质以适当比例的混合物。
反应温度可适当地从用于肽键形成反应的已知范围选择，尤其是，例如，通常在约-20℃至40℃的范围内。
反应时间可适当地从用于肽键形成反应的所需的已知范围内选择，尤其是，例如，在约几分钟至48小时的范围内。
除去用Y表示的氨基保护基基本上用与上述相同的方法进行。
在完成该反应后，这样得到的化合物(Ⅰ)或其盐可用分离肽的方法来回收，例如，萃取、分配、再沉淀、结晶、各种色谱方法、高效液相色谱方法，等。
可用本身已知的方法得到本发明化合物(Ⅰ)与一种碱，尤其是药物上可接受的碱的盐。所说碱的例子包括碱金属如钠、钾，等，碱土金属如钙、镁，等，有机碱如三乙胺、吡啶。等。可用自身已知的方法得到化合物(Ⅰ)与一种酸，尤其是药物上可接受的酸的盐。所说酸的例子包括无机酸(例如，盐酸、硫酸、磷酸，等)，有机酸(例如，乙酸、丙酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、草酸，等)等等。
化合物(Ⅱ)至(Ⅳ)的盐使用那些实际上与化合物(Ⅰ)所用的相同的盐。
化合物(Ⅰ)或其盐具有显著改善造血机能不足的状态的显著活性，其可用作在哺乳动物(例如，狗、猪、牛、马、猴、人，等)中癌的放射治疗或化学治疗引起的白细胞减少的治疗或预防剂，在骨髓移植情况中造血刺激剂，用作具有增加白细胞作用的刺激免疫剂，以及还可作为血小板减少症的治疗剂。
化合物(Ⅰ)或其盐是低毒性的，并可安全地使用。
在将化合物(Ⅰ)或其盐给药，例如，给人用药的情况中，其可安全地单独口服或非口服给药，或通过与适当的药物上可接受的形体，赋形剂或稀释剂混合作为药物组合物来使用。
上述药物组合物的例子包括注射剂、口服给药组合物(例如，粉末颗粒、胶囊、片剂)，局部药(例如，transnasal剂，经皮肤的药剂，等)栓剂(例如，直肠栓剂、阴道栓剂)。
这些药物组合物一般可用在药物制备方法中所用的自身已知的方法来制备。
例如，本发明的化合物(Ⅰ)或其盐可与分散剂[例如，Tween 80(由Atlas Powder公司，U.S.A.制造)，HCO60(由Nikko Chemicals制造)，聚乙二醇、羧甲基纤维素、藻酸钠等]，防腐剂(例如羟苯甲酸甲酯、羟苯甲酸丙酯、苄基醇、氯代丁醇等]和等渗剂(例如，氯化钠、甘油、山梨糖醇、葡萄糖等)一起制备成含水注射剂，或通过在植物油(如橄榄油、芝麻油、花生油、棉花籽油、玉米油等)，丙二醇等中溶解、悬浮或乳化制备成含油注射液。
为将本发明的化合物(Ⅰ)或其盐制备成口服给药的组合物，根据自身已知的方法，将其与赋形剂(例如乳糖、蔗糖、淀粉等)，崩解剂(例如，淀粉、碳酸钙等)，粘合剂(例如，淀粉、阿拉伯胶、羧甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙基纤维素等)或润滑剂(例如，滑石、硬脂酯镁、聚乙二醇6000)等，一起压缩模塑，接着，如果需要的话，用本身已知的方法隐蔽药味或覆盖，从而得到肠溶衣或制备成持续释放的组合物。包衣剂的例子包括羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧亚乙基二醇、Tween 80、Brulonick F68、邻苯二甲酸乙酸纤维素酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素酯、琥珀酸乙酯羟甲基纤维素酯、Eudragit(由德国的Rohm制造，异丁烯酸·丙烯酸共聚物)和色素如二氧化钛、三氧化二铁等。根据本身已知的方法可在肠溶及和核之间提供包底衣。
为将化合物(Ⅰ)或其盐制备成局部应用的固体、半固体或液体组合物，可采用本身已知的方法。例如，为制备固体组合物将化合物(Ⅰ)或其盐制备成单一的粉末组合物或与赋形剂(例如，乙二醇、甘露糖醇、淀粉、微晶纤维素等)，稠化剂(例如，天然橡胶、纤维素衍生物、丙烯酸聚合物等)掺合。作为上述液体组合物，几乎与注射液的情况一样，包括含油或含水悬浮液。作为半固体组合物，优选考虑含水或含油胶状组合物或软膏。这些组合物可以添加PH调节剂(例如，碳酸、磷酸、柠檬酸、盐酸、氢氧化钠，等)，防腐剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、氯化苯甲烃铵，等)。
在制备栓剂的情况中，例如，本发明的化合物(Ⅰ)或其盐可制备成含油或水溶性固体、半固体或液体栓剂。作为上述组合物的含油基质，可使用任意一个不溶解化合物(Ⅰ)或其盐的基质，其例子为高级脂肪酸甘油酯[例如，可可酯、Wittepsols(由Dynamite Nobel，Inc.制造)，等]，中级脂肪酸甘油酯[例如，Migliols(由Dynamite Nobel Inc.制造)，等]或植物油(例如，芝麻油、大豆油、棉花籽油，等)。水溶性碱的例子包括聚乙二醇和丙二醇，水溶性凝胶基质的例子包括天然橡胶、纤维素衍生物、乙烯基聚合物、丙烯酸聚合物，等。
化合物(Ⅰ)或其盐作为注射液用于人类治疗时其剂量随疾病，给药途径、病人的年龄和疾病情况而变化，在通常成年病人(50Kg体重)的情况中，其有效组分在约0.01μg至20mg，优选0.1μg至0.2mg，最好在约0.5μg至50μg范围内。通过下面的参考例、加工例、实验例和制剂例，将更详细地描述本发明，但不是以任何方法限制本发明。在混合溶剂中，所示的混合比的数量均为每一个溶剂的体积比。百分数(%)意义，除非特殊说明，为重量百分数(W/W%)。
1H-NMR光谱通过使用四甲基硅烷作内标，用Varian Gemini 200(200MHz)型光谱仪来测定，所有的δ值均以ppm表示。
在参考例和加工例中所用的符号具有如下意义。s单峰，d双重峰，t三重峰，q四重峰，dd二重双重峰，dt二重三重峰，m多重峰，br宽带。
参考例1H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thrt(Bu)-COtBu(P-1)的制备将H-Gly-Gly-Gly-OH(10.0g，52.9mmol，由肽研究实验室制备)溶于4N氢氧化钠水溶液(13.3ml)中。在冰冷却下，向该溶液中加入4N氢氧化钠水溶液(15.9ml)和苄氧基羰基氯(9.31ml)，然后，在20℃下，将该混合物搅拌隔夜。用醚洗涤该反应混合物。在冰冷却下，向该含水层中加入5M HCl从而调节PH值至3，并在冷的地方，将其静置隔夜。用过滤收集得到的结晶沉淀。用冷水洗涤并干燥。这样得到的晶体不用提纯即可使用，产量为13.4g(78.5%)。
将上面得到的Z-Gly-Gly-Gly-OH(3.04g，9.41mmol)溶于DMF(200ml)中。在冰冷却下，向该溶液中加入HONB(1.86g，10.4mmol)和DCC(2.14g，10.4mmol)。在冰冷却下，将该混合物搅拌2小时，过滤掉不溶物质。
将Z-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(6.66g，9.41mmol)溶于甲醇(300ml)中。向该溶液中加入10%(W/W，下文同)钯-碳。在氢气流下，在常温常压下，将该混合物搅拌2小时。过滤掉催化剂，蒸馏掉溶剂，将剩余物溶于DMF(150ml)。在冰冷却下，向该溶液中加入二异丙基乙胺(1.80ml，10.4mmol)。将该混合物搅拌，并向其中加入上述制备的溶液，在20℃下将该混合物搅拌隔夜，然后蒸发掉溶剂。向残余物中加入氯仿和水，并用氯仿萃取。氯仿层用10%(W/V)柠檬酸的水溶液、水、饱和碳酸氢钠水溶液和水连续洗涤，然后在无水硫酸钠上干燥。蒸馏掉溶剂。残余物用硅胶柱色谱法[5%(V/V甲醇-氯仿]纯化，接着用乙酸乙酯-乙腈重结晶得到结晶状的Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu。产量是5.74g(75.4%)。
m.p.167.5-168.0℃[α]25D+7.28°(c＝1.03，在DMF中)对C43H70N5O13的元素分析计算值C，58.75;H，8.03;N，9.56实测值C，58.52;H，7.78;N，9.35氨基酸分析[6N HCl，110℃，水解24小时;括号中的值表示理论值]Glu1.00(1);Thr1.81(2);Gly2.84(3)上述得到的Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1.97g，2.24mmol)溶于甲醇(60ml)中。向该溶液中加入10%钯-碳(120mg)。在氢气流下，在常温常压下，将该混合物搅拌2小时。除去催化剂，蒸馏掉溶剂留下固体产物P-1，产量是1.64g(98%)。
FAB-MS(M+H)＝879(理论值＝879)参考例2H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(P-2)的制备a)将H-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(1.27g，3.05mmol)和Z-Gly-Gly-Gly-OH(0.99g，3.05mmol)溶解在DMF(20ml)中。向该溶液中加入HOBT(453mg，3.35mmol)和WSC(643mg，3.35mmol)。在20℃下，将该混合物搅拌8小时。将该反应混合物浓缩，并将其悬浮在0.2M柠檬酸水溶液(70ml)中，接着用乙酸乙酯(100ml，7.0ml)萃取。合并乙酸乙酯层，并用10%(W/V)氯化铵水溶液、5%(W/V)碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水溶液连续洗涤，然后在无水硫酸钠上干燥，并接着浓缩。向该浓缩物中加入醚-己烷。用过滤收集得到的沉淀，从而得到白色粉末产物(1.87g，85%)Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(Z-P-2)。23D+6.9°(c＝0.55，在氯仿中)对C35H55N5O11的元素分析计算值C，58.24;H，7.68;N，9.70实测值C，57.87;H，7.64;N，9.97b)将该粉末产物(1.09g)溶解在甲醇(36ml)中，向其中加入10%钯-碳(109ml)。在氢气流下，在常温常压下，将该混合物搅拌2小时。除去催化剂，蒸馏掉溶剂留下粉末产物P-2(861mg)。23D+9.1°(c＝0.53，在氯仿中)对C27H49N5O9的元素分析计算值C，55.18;H，8.40;N，11.92实测值C，54.88;H，8.57;N，11.68参考例3H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-3)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-3)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH DCC 287mg Z-P-3(568mg) HOBT 188mg (550mg)OMF 25ml2)H-Gly-Glu(OtBu)- 20℃ 16hGly-D-Glu(OtBu)-OtBu(710mg)b)Z-P-3 10%Pd-C 100mg P-3(550mg) MeOH 18mg (470mg)20℃ 4h化合物Z-P-3[α]20D+5.0°(c＝0.54，在氯仿中)对C43H67N5O14的元素分析计算值C，58.82;H，7.69;N，7.98实测值C，58.67;H，7.67;N，8.26化合物P-3[α]20D-6.1°(c＝0.51，在氯仿中)对C35H61N5O12的元素分析计算值C，56.51;H，8.27;N，9.42实测值C，56.66;H，8.30;N，9.63
参考例4H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-4)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Gly-Gly-Gly-Glu-(OtBu)-OtBu(P-4)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 548mg Z-P-4(0.84g) HOBT 386mg (0.81g)DMF 15ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 18h(0.68g)b)Z-P-4 10%Pd-C 73mg P-4(735mg) MeOH 25mg (543mg)20℃ 2h化合物Z-P-4[α]23D+9.6°(c＝0.56，在氯仿中)对C27H40N4O9的元素分析计算值C，57.43;H，7.14;N，9.92实测值C，57.60;H，7.12;N，9.88化合物P-4[α]23D+13.1°(c＝0.51，在氯仿中)对C19H34N4O7·0.5H2O的元素分析计算值C，51.92;H，8.03;N，12.75实测值C，52.09;H，7.89;N，12.56
参考例5H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-5)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-5)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 1.06g Z-P-5(1.62g) HOBT 744mg (1.93g)DMF 25ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.30g)b)Z-P-5 10%Pd-C 192mg P-5(1.92g) MeOH 64mg (1.53g)20℃ 1.3h化合物Z-P-5[α]23D+9.1°(c＝0.54，在氯仿中)对C27H40N4O9的元素分析计算值C，57.43;H，7.14;N，9.92实测值C，57.38;H，7.06;N，10.02化合物P-5[α]23D-13.5°(c＝0.54，在氯仿中)对C19H34N4O7·0.5H2O的元素分析计算值C，51.92;H，8.03;N，12.75实测值C，51.98;H，7.93;N，12.68
参考例6H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-6)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-6)。
原料 反应条件 产物a)1)Fmoc-Glu(OtBu)-OH WSC 1.24g Fmoc-P-6(2.78g) HOBT 876mg (3.73g)DCM 85ml2)H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.86g)[α]23D-12°(c＝0.54，在氯仿中)对C39H53N3O10的元素分析计算值C，64.71;H，7.38;N，5.80实测值C，64.55;H，7.43;N，6.09c)将该粉末产物(2.10g)溶解在二氯甲烷(63ml)中，并向其中加入哌啶(7.0ml)，在室温下将该混合物搅拌1小时。向该反应混合物中加入乙酸乙酯(300ml)，并用1N HCl(70ml)和0.03N HCl(100ml×2)萃取。将含水层调节PH值至6.0，并用己烷∶乙醚(1∶1)的混合物洗涤(100ml×5)。然后，将PH值调节至8.6，接着用乙酸乙酯(150ml×2)萃取。然后在无水硫酸钠上干燥，浓缩得到无色油状产物P-6。23D-17°(c＝0.47，在氯仿中)对C24H43N3O8的元素分析计算值C，57.47;H，8.64;N，8.38实测值C，57.40;H，8.73;N，8.60参考例7H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-7)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-7)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-Gly-OH WSC 1.63g Z-P-7(2.05g) HOBT 1.15g (3.34g)DMF 40ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 17h(2.00g)b)Z-P-7 10%Pd-C 200mg P-7(无色油状产物)(2.00g) MeOH 60mg (1.45g)20℃ 3h化合物Z-P-7对C25H37N3O8·0.5H2O的元素分析计算值C，58.13;H，7.41;N，8.13实测值C，58.44;H，7.37;N，8.33
参考例8H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(P-8)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(P-8)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 3.44g Z-P-8(6.67g) HOBT 2.42g (8.30g)DMF 100ml2)H-Asp(OtBu)-OtBu 20℃ 15h(4.00g)b)Z-P-8 10%Pd-C 187mg P-8(1.87g) MeOH 60mg (1.35g)20℃ 2h化合物Z-P-8对C39H38N4O9的元素分析计算值C，56.72;H，6.96;N，10.18实测值C，56.48;H，6.88;N，10.23化合物P-8对C18H32N4O7的元素分析计算值C，51.91;H，7.74;N，13.45实测值C，51.80;H，8.11;N，13.50
参考例9H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-9)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-9)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-Gly-OH WSC 569mg Z-P-9(790mg) HOBT 401mg (1.18g)DMF 23ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(700mg)b)Z-P-9 10%Pd-C 110mg P-9(1.10g) MeOH 40ml (850mg)20℃ 2h化合物Z-P-9[α]24D-9.3°(c＝0.53，在氯仿中)对C25H37N3O8·0.5H2O的元素分析计算值C，58.13;H，7.41;N，8.13实测值C，58.31;H，7.42;N，8.24化合物P-9[α]23D-11.9°(c＝0.37，在氯仿中)对C17H31N3O6·0.25H2O的元素分析计算值C，54.02;H，8.40;N，11.12实测值C，53.84;H，8.85;N，11.24
参考例10H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-10)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Glu-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-10)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-OH WSC 569mg Z-P-10(620mg) HOBT 401mg (1.23g)DCM 23ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(700mg)b)Z-P-10 10%Pd-C 120mg P-10(1.23g) MeOH 40mg (830mg)20℃ 1.5h化合物Z-P-10[α]20D-10.3°(c＝0.52，在氯仿中)对C23H34N2O7·0.25H2O的元素分析计算值C，60.71;H，7.64;N，6.16实测值C，60.79;H，7.68;N，6.28化合物P-10[α]20D-17.9°(c＝0.52，在氯仿中)对C15H28N2O5的元素分析计算值C，56.94;H，8.92;N，8.85实测值C，56.81;H，8.95;N，9.04
参考例11H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-11)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-11)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-OH WSC 318mg Z-P-11(347mg) HOBT 224mg (930mg)DCM 22ml2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(670mg)b)Z-P-11 10%Pd-C 90mg P-11(870mg) MeOH 30mg (650mg)20℃ 2h化合物Z-P-11熔点92.4-92.7℃[α]24D-3.5°(c＝0.51，在氯仿中)对C32H49N3O10·0.25H2O的元素分析计算值C，60.03;H，7.79;N，6.56实测值C，60.18;H，7.81;N，6.26化合物P-11[α]24D-6.8°(c＝0.54，在氯仿中)对C24H43N3O8·0.25H2O的元素分析计算值C，56.95;H，8.66;N，8.30实测值C，56.92;H，8.74;N，8.06
参考例12H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-12)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-12)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-OH WSC 334mg Z-P-12(364mg) HOBT 235mg (760mg)DCM 23ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(700mg)b)Z-P-12 10%Pd-C 70mg P-12(700mg) MeOH 23mg (550mg)20℃ 2h化合物Z-P-12[α]23D-11.5°(c＝0.53，在氯仿中)对C32H49N3O10的元素分析计算值C，60.46;H，7.77;N，6.61实测值C，60.47;H，7.88;N，6.53化合物P-12[α]23D-19.8°(c＝0.51，在氯仿中)对C24H43N3O8·0.5H2O的元素分析
计算值C，56.45;H，8.69;N，8.23实测值C，56.52;H，8.77;N，8.25参考例13H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-13)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-13)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 447mg Z-P-13(785mg) HOBT 315mg (1.20g)DCM 22ml2)H-Gly-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(670mg)b)Z-P-13 10%Pd-C 110mg P-13(1.10g) MeOH 40mg (840mg)20℃ 2h化合物Z-P-13[α]24D+4.2°(c＝0.53，在氯仿中)对C32H49N3O10的元素分析计算值C，60.46;H，7.77;N，6.61实测值C，60.48;H，7.78;N，6.88
化合物P-13[α]24D+7.0°(c＝0.52，在氯仿中)对C24H43N3O8·0.25H2O的元素分析计算值C，56.95;H，8.66;N，8.30实测值C，56.94;H，8.60;N，8.04参考例14H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-14)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-14)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 1.06g Z-P-14(1.86g) HOBT 746mg (3.09g)DCM 43ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.30g)b)Z-P-14 10%Pd-C 500mg P-14(3.00g) MeOH 67mg (2.24g)20℃ 3h化合物Z-P-14[α]23D-7.9°(c＝0.56，在氯仿中)对C30H46N2O9的元素分析
计算值C，62.27;H，8.01;N，4.84实测值C，62.49;H，8.14;N，5.07化合物P-14[α]23D+2.3°(c＝0.61，在氯仿中)对C22H40N2O7·1.5H2O的元素分析计算值C，56.03;H，9.19;N，5.94实测值C，56.04;H，8.96;N，5.92参考例15H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-15)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-15)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 318mg Z-P-15(559mg) HOBT 224mg (1.06g)DCM 22ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(670mg)b)Z-P-15 10%Pd-C 100mg P-15(1.00g) MeOH 33ml (800mg)20℃ 2h
化合物Z-P-15[α]24D-11.7°(c＝0.53，在氯仿中)对C39H61N3O12的元素分析计算值C，61.32;H，8.05;N，5.50实测值C，61.40;H，8.13;N，5.28化合物P-15[α]24D-13.9°(c＝0.49，在氯仿中)对C31H55N3O10的元素分析计算值C，59.12;H，8.80;N，6.67实测值C，58.96;H，8.91;N，6.80参考例16H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-16)的制备用基本上与参考例2相同的方法，制备H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-16)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 334mg Z-P-16(586mg) HOBT 235mg (880mg)DCM 23ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(700mg)
b)Z-P-16 10%Pd-C 80mg P-16(800mg) MeOH 27ml (640mg)20℃ 2h化合物Z-P-16[α]24D-20.6°(c＝0.52，在氯仿中)对C39H61N3O12的元素分析计算值C，61.32;H，8.05;N，5.50实测值C，61.20;H，8.26;N，5.31化合物P-16[α]24D-25.5°(c＝0.54，在氯仿中)对C31H55N3O10·0.25H2O的元素分析计算值C，58.70;H，8.82;N，6.63实测值C，58.76;H，8.91;N，6.45参考例17NH2(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-17)的制备a)向溶于DMF(50ml)中的8-(苄氧基羰基氨基)-辛酸(1.55g)和H-Glu(OtBu)-OtBu盐酸盐(1.88g)溶液中加入TEA(1.70ml)和DEPC(1.29g)，在20℃下，将该反应混合物搅拌24小时，向该反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%(W/V，下文同)柠檬酸的水溶液、碳酸氢钠饱和水溶液和饮和食盐水溶液洗涤，然后在无水硫酸钠上干燥。蒸馏掉溶剂。残余物用硅胶色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化得到无色油状产物Z-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(Z-P-17)(2.40g，收率85%)。
IR(纯)ν3310，1720，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.37(8H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.48-2.43(8H，m)，3.18(2H，q，J＝6.6Hz)，4.41-4.54(1H，m)，4.70-4.88(1H，m)，5.10(2H，s)，6.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.27-7.37(5H，m)b)上述得到的化合物Z-P-17(1.19g)的乙醇(20ml)溶液中加入10%钯-碳(100mg)。在20℃和氢气流下，将该混合物搅拌2小时。将反应混合物过滤得到无色油状产物P-17(739mg，收率83%)。
IR(纯)ν3280，1720，1660cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.20-1.40(6H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.52-2.38(10H，m)，2.38-2.65(2H，m)，2.73(2H，t，J＝7.0Hz)，4.42-4.55(1H，m)，6.21(1H，d，J＝8.2Hz)参考例18NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-18)的制备用基本上与参考例17相同的方法，制备NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-18)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-NH(CH2)11COOH DEPC 2.45g Z-P-18(3.49g) TEAT 3.5ml (2.32g)DMF 100ml2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu).HCl 20℃ 24h
(2.96g)b)Z-P-18 10%Pd-C 230mg P-18(2.31mg) EtOH 50ml (1.78g)20℃ 2h化合物 Z-P-18IR(纯)ν3310，1725，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.41(16H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.41-2.44(8H，m)，3.19(2H，dt，J＝7.0，7.0Hz)，4.42-4.56(1H，m)，5.10(2H，s)，6.13(1H，d，J＝7.6Hz)，7.23-7.40(5H，m)化合物 P-18IR(纯)ν3280，1730，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.05-1.40(16H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.55-1.72(4H，m)，1.72-2.50(10H，m)，2.68(2H，t，J＝7.0Hz)，3.19(2H，t，J＝7.6Hz)，4.43-4.57(1H，m)，6.14(1H，d，J＝7.8Hz)参考例194-氨基苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(P-19)的制备向溶于DMF(200ml)中的4-氨基苯甲酸(6.86g)和H-Glu(OtBu)-OtBu盐酸盐(14.8g)溶液中加入TEA(17ml)和DEPC(12.2g)。在20℃下将混合物搅拌48小时，向该反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%柠檬酸的水溶液，碳酸氢钠饱和水溶液和饱和食盐水溶液洗涤，然后在无水硫酸钠上干燥。蒸馏掉溶剂。残余物用醚洗涤得到白色粉末产物化合物P-19(16.2g，收率86%)。
IR(KBr)ν3450，3390，3370，1715，1625，1610cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.53(4H，m)，3.99(2H，br s)，4.60-4.73(1H，m)，6.61-6.72(2H，m)，6.76(1H，d，J＝7.6Hz)，7.60-7.71(2H，m)参考例204-(甘氨酰氨基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(P-20)的制备a)向溶于吡啶(2ml)中的在参考例19中得到的化合物P-19的溶液中加入三氯化磷(0.087ml)，在室温下，将该混合物搅拌2小时。向该混合物中再加入Z-甘氨酸(209mg)，并在20℃搅拌18小时。向该反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取，然后在无水硫酸钠上干燥。蒸馏掉溶剂。残余物用硅胶柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)提纯得到白色粉末产物化合物Z-P-20(414mg，收率73%)。
IR(KBr)ν3310，1700，1640，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.95-2.55(4H，m)，4.02(2H，d，J＝5.8Hz)，4.59-4.72(1H，m)，5.17(2H，s)，5.59-5.75(1H，m)，7.09(1H，d，J＝7.8Hz)，7.30-7.42(5H，m)，7.53(2H，d，J＝8.0Hz)，7.77(2H，d，J＝8.0Hz)，8.30-8.50(1H，m)b)向溶于乙醇(4ml)的化合物Z-P-20(414mg)的溶液中加入10%钯-碳(40mg)。在20℃下和氢气流中，将该混合物搅拌2小时。将反应混合物过滤得到白色粉末产物P-20(296mg，收率94%)。
IR(KBr)ν3425，3400，1740，1720，1680，1640，1610cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ1.41(9H，s)，1.48(9H，s)，1.90-2.55(4H，m)，3.59(2H，br s)，4.58-4.72(1H，m)，7.02-7.15(1H，m)，7.65(2H，d，J＝8.8Hz)，7.77(2H，d，J＝8.8Hz)，9.65-9.77(1H，m)参考例21NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-21)的制备用基本上与参考例17相同的方法，合成NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-21)原料 反应条件 产物a)1)Z-NH(CH2)5COOH DEPC 2.45g Z-P-21(2.92g) TEA 4.9ml (5.30g)DMF 50ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu.HCl 0℃ 30min(2.95g)b)Z-P-21 10%Pd/C 0.5g P-21(5.30g) MeOH 100ml (3.89g)20℃ 2h
化合物 P-211H-NMR(CDCl3)δ1.389(2H，m)，1.444(9H，s)，1.50-1.75(4H，m)，1.75-2.15(2H，m)，2.15-2.38(4H，m)，2.796(2H，t，J＝6.6Hz)，3.320(2H，bs)，4.460(1H，m)，6.400(1H，d，J＝7.4Hz)IR(纯)ν3270，3040，2970，2920，2855，1725，1645.1540，1470，1450，1390，1360，1320，1290，1250，1220，1150cm-1参考例22NH2(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(P-22)的制备a)将六亚甲基二胺(2.32g，20mmol)溶于甲醇(20ml)中。向该溶液同时加入1N氢氧化钠水溶液(22ml)和溶于THF(20ml)中的苄酯基氯(3.4g，20mmol)。在20℃下将混合物搅拌1小时。将反应混合物浓缩至干燥，将浓缩液溶于氯仿(100ml)中。该溶液用水和饱和食盐水溶液洗涤。将有机相在无水硫酸钠上干燥，并在减压下浓缩至干燥。使浓缩液在用氨处理的硅胶柱(20g)上吸收。用氯仿-甲醇-水(65∶25∶4)进行洗脱得到无色油状产物。将该产物溶于TEA(1.34ml，9.64mmol)和DCM(10ml)中，在冰冷却下，向该溶液中加入氯甲酸4-硝基苯酯(971mg，4.82mmol)，将该混合物搅拌1小时。向反应混合物中加入氯仿(20ml)，并用水和饱和食盐水溶液洗涤。有机相在无水硫酸钠上干燥，并在减压下浓缩至干燥。用乙酸乙酯洗涤浓缩液得到无色晶体状的6-苄氧基羰基氨基-1-(对硝基苯氧基羰基)氨基己烷(1.16g，收率14.5%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25-2.70(8H，m)，3.225(4H，m)，4.742(1H，br s)，5.099(2H，s)，5.25(1H，br s)，7.284(2H，d，J＝9.0Hz)，8.237(2H，d，J＝9.0Hz)b)将上面得到的化合物(1.16g，2.79mmol)和H-Glu(OtBu)-OtBu盐酸盐(825mg，2.79mmol)溶于DCM(10ml)中。向该溶液中加入DMAP(680mg，5.58mmol)和TEA(0.77ml，5.58mmol)，并在20℃下将该混合物搅拌2小时。向该反应混合物中加入氯仿(20ml)。在PH为3.5时用水洗涤该混合物，接着，用碳酸氯钠的饱和水溶液洗涤。有机相在无水硫酸钠上干燥，并在减压下浓缩。用硅胶柱[20g，乙酸乙酯-正己烷(2∶3)]提纯浓缩物得到白色固体产物Z-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(Z-P-22)(1.50g，收率100%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.20-1.38(8H，m)，1.436(9H，s)，1.453(9H，s)，1.70-2.22(2H，m)，2.326(2H，m)，3.169(4H，m)，4.340(1H，m)，4.626(1H，br s)，4.869(1H，br s)，5.045(1H，d，J＝7.6Hz)，5.103(2H，s)，7.352(5H，s)IR(纯)ν3350，2980，2940，2855，1730，1640，1560，1455，1395，1370，1330，1255，1150，1100，1030，850，750，735，700cm-1c)将10%钯-碳(250mg)悬浮在甲醇(20ml)中。在氢气流中将悬浮液搅拌30分钟，并向其中加入化合物Z-P-22(1.50g，2.79mmol)，接着在20℃下和氢气流中，将其搅拌1.5小时。过滤从反应混合物中除去不溶物质。在减压下将滤液浓缩至干燥得到无色固体产物P-22(1.12g，收率100%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.391(10H，m)，1.431(9H，s)，1.451(9H，s)，1.747(2H，m)，1.60-2.15(2H，m)，2.90-3.20(4H，m)，4.321(1H，m)，6.013(2H，m)IR(纯)ν3350，2980，2930，2860，1730，1640，1560，1500，1475，1455，1390，1365，1250，1150cm-1参考例23制备4-(氨基甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu盐酸盐(P-23)a)在冰冷却的同时，向4-(氨基甲基)苯甲酸(25g)在2N氢氧化钠水溶液(100ml)中的溶液滴加含苄氧基羰基氯(33.8g)的THF(50ml)溶液，将该混合物搅拌2小时。过滤收集得到的沉淀，该沉淀用水、1N HCl和乙醚洗涤，接着在减压下干燥，得到白色粉末状的4-(乙-氨基甲基)苯甲酸产物(10.5g，收率22%)。
IR(纯)ν3313，1684，1612，1529，1430，1322，1292，1253，1054，761，696cm-11H-NMR(CDCl3)δ4.26(2H，d，J＝6.2Hz)，5.05(2H，s)，7.31(2H，d，J＝8.0Hz)，7.36(5H，s)，7.87(2H，d，J＝8.0Hz)b)向在DMF(20ml)中的如上合成的4-(Z-氨基甲基)苯甲酸(1.0g)、H-Glu(OtBu)-OtBu盐酸盐(1.15g)和DEPC(860mg)溶液中滴加TEA(1.06g)。将该混合物在20℃搅拌1小时。减压下蒸去溶剂，剩余物用硅胶柱(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化，得到无色蜡状的4-(Z-氨基甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu产物(1.86g，收率100%)。
IR(纯)ν1720，1700，1640，1530，1500，1360，1250，1145cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.55(4H，m)，4.43(2H，d，J＝6.0Hz)，4.66(1H，m)，5.15(3H，s)，7.01(1H，d，J＝7.0Hz)，7.30-7.40(7H，m)，7.79(2H，d，J＝8.4Hz)c)使如上得到的化合物(1.85g)和10%钯-碳(200mg)的甲醇(13ml)悬浮液催化还原，共消耗氢气80ml。滤去催化剂，向滤液中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(0.88ml)。该溶液浓缩得到无定形产物4-(氨基甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu盐酸盐(P-23)。
IR(纯)ν3400，3000，1731，1650，1540，1506，1369，1235，1151cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.41(9H，s)，1.48(9H，s)，1.90-2.40(4H，m)，4.13(2H，s)，4.59(1H，m)，7.48(2H，d，J＝8.0Hz)，7.69(3H，d，J＝8.0Hz)参考例24制备4-(N-(叔丁氧基羰甲基)氨基甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(P-24)a)在冰冷却的同时，向对甲醛基苯甲酸甲酯(3.0g)、H-Gly-OtBu盐酸盐(3.0g)、TEA(1.81g)和乙酸(1.08g)的溶液加入氰基硼氢化钠(1.15g)，将该混合物在20℃下搅拌1小时。浓缩反应混合物，然后使其溶于乙酸乙酯中。溶液用碳酸氢钠的饱和水溶液洗涤，接着进行干燥。浓缩得到的混合物，浓缩液用硅胶柱(正己烷∶乙酸乙酯＝9∶1-5∶1)纯化，得到4-(N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酸甲酯(1.98g，收率39%)。
IR(纯)ν2975，1720，1605，1455，1430，1410，1390，1360，1280，1225，1150，1100cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.47(9H，s)，3.30(2H，s)，3.85(2H，s)，3.91(3H，s)，7.41(2H，d，J＝8.4Hz)，8.00(2H，d，J＝8.4Hz)b)在冰冷却的同时，向在DCM(20ml)中的如上合成的化合物(1.03g)和TEA(445mg)溶液中加入苄氧基羰基氯(690mg)。将该混合物搅拌2小时。减压蒸去溶剂，将剩余物溶解在THF(6ml)-MeOH(10ml)-H2O(1ml)混合物中。向该溶液中加入LiOH·H2O(400mg)，将混合物在20℃下搅拌4小时。减压蒸去溶剂，用5%的KHSO4水溶液使剩余物呈酸性，接着用氯仿萃取。干燥萃取液，然后在减压下蒸去溶剂，剩余物用硅胶柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)纯化，得到4-(N-苄氧基羰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酸(337mg，收率23%)。
IR(纯)ν1735，1705，1700，1450，1410，1360，1290，1230，1220，1150cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(1/2x9H，s)，1.45(1/2x9H，s)，3.81(1/2x2H，s)，3.92(1/2x2H，s)，4.60-4.75(2H，m)，5.20(2H，s)，7.25-7.45(7H，m)，8.05(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)，8.08(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)c)将在DMF(8ml)中的如上得到的化合物(335mg)、H-Glu(OtBu)-OtBu盐酸盐(273mg)、DEPC(205mg)和TEA(255mg)溶液在20℃下搅拌1小时。减压蒸去溶剂，剩余物用硅胶柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化，得到4-(N-苄氧基羰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(504mg，收率94%)。
IR(纯)ν3350，2970，1730，1710，1660，1530，1495，1450，1360，1240，1220，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.37(1/2x9H，s)，1.42(9H，s)，1.45(1/2x9H，s)，1.50(9H，s)，1.95-2.50(4H，m)，3.77(1/2x2H，s)，3.88(1/2x2H，s)，4.60-4.75(3H，m)，5.20(2H，s)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.20-7.40(7H，m)，7.77(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)，7.80(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)d)对如上得到的化合物(500mg)和10%Pd-C(200mg)在甲醇(8ml)中的溶液进行催化还原，使其消耗20ml氢气。除去催化剂，然后减压蒸去溶剂，剩余物用正己烷∶乙酸乙酯(3∶1)研磨，得到化合物P-24(265mg，收率67%)，为白色粉末状产物。
IR(纯)ν3400，2970，1730，1650，1535，1525，1360，1245，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.43(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.50(4H，m)，3.53(2H，s)，4.41(2H，s)，4.65(1H，m)，7.18(1H，d，J＝7.2Hz)，7.70(2H，d，J＝8.0Hz)，7.88(2H，d，J＝8.0Hz)参考例25制备H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(P-25)按照基本上与参考例2相同的方法制备H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(P-25)。
原料 反应条件 产物a)1)Z-Gly-OH WSC 745mg Z-P-25(813mg) HOBT 525mg (1.90g)DMF 20ml2)H-Lys(Boc)-Gly-OtBu 20℃ 13h(1.27g)b)Z-P-25 10%Pd/C 154mg P-25(1.54g) MeOH 40ml (1.15g)化合物Z-P-25[α]24D-13.4°(c＝0.58，在氯仿中)对C27H42N4O8·0.5H2O的元素分析计算值C，57.95;H，7.74;N，10.01实测值C，57.73;H，7.44;N，10.03
化合物P-25[α]24D-23.8°(c＝0.58，在氯仿中)对C19H36N4O6·H2O的元素分析计算值C，52.52;H，8.81;N，12.89实测值C，52.72;H，8.81;N，12.86实施例1制备(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)2将D-胱氨酸(5.00g，20.8mmol)溶于60%高氯酸(10.2ml)中，在冰冷却的同时，向该溶液中加入乙酸叔丁酯(117ml)，将该混合物在20℃搅拌2天。对反应混合物过滤，收集晶体。晶体用乙醚(150ml)洗涤，然后悬浮在碳酸氢钠的饱和水溶液(100ml)中;该悬浮液用乙酸乙酯(2×150ml)萃取，合并乙酸乙酯层，用水洗涤，并用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到无色油状产物(4.16g)。该油状产物溶解在THF(60ml)中，在冰冷却的同时，向该溶液中加入N-(9-芴基甲氧基羰氧基)琥珀酰亚胺(8.16g，24.2mmol)和N-乙基吗啉(3.08ml，24.2mmol)的THF(10ml)溶液，混合物在室温下搅拌2.5小时。浓缩反应混合物，浓缩物悬浮在柠檬酸的10%水溶液(200ml)中。悬浮液用氯仿(2×200ml)萃取，合并氯仿层，用水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，接着浓缩。浓缩物用乙酸乙酯结晶得到无色晶体状的(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)2(8.68g，收率52%)，m.p.149.5-150℃。23D+5.9°(c＝0.52，在氯仿中)对C44H48N2O8S2的元素分析计算值C，66.31;H，6.07;N，3.51;S，8.05实测值C，66.55;H，6.13;N，3.43;S，7.97实施例2制备(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OH(GC-1)a)将参考文献(J.W.Metzger等人，Int.J.Peptide Protein Res.38，P545，1991)所述方法制备的(Fmoc-(R)-Cys-OtBu)2(10.0g，12.5mmol)溶于DCM(80ml)中，在冰冷却的同时，向该溶液中加入粉末状锌(3.27g，50.0mmol)和MeOH-36%HCl-浓H2SO4(100∶7∶1)混合物(下文简称为“酸混合物溶液”)(40ml)。将得到的混合物在20℃下搅拌30分钟。向该反应混合物中加入(S)-(-)-缩水甘油(8.29ml，125mmol)，混合物在40℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物直至其体积下降为40ml，然后滤去不溶物。向滤液中加入饱和盐水溶液(200ml)，混合物用DCM(2×300ml)萃取，合并DCM层，用无水硫酸钠干燥，然后浓缩。浓缩物用硅胶柱色谱纯化，以乙酸乙酯-己烷(1∶1，2∶1)洗脱，合并含有目标化合物的部分并浓缩得到白色粉末状产物(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羟基-4-THT-OtBu(GC-1a)(10.9g，收率92%)。21D+6.7°(c＝0.56，在氯仿中)对C25H31NO6·H2O的元素分析计算值C，61.08;H，6.77;N，2.85;S，6.52实测值C，60.95;H，6.62;N，2.70;S，6.31b)将化合物GC-1a(11.0，23.2mmol)溶于THF(200ml)中，向该溶液中加入棕榈酸(19.1g，74.3mmol)、DIC(11.6ml，74.3mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP，1.13g，9.26mmol)，将混合物在20℃下搅拌12小时。浓缩反应混合物，浓缩物悬浮在10%(W/V)的柠檬酸水溶液(400ml)中。用乙酸乙酯(800ml)萃取悬浮液，乙酸乙酯层用水洗涤，然后浓缩。浓缩物用硅胶柱色谱纯化，连续用乙酸乙酯-己烷(1∶20，1∶10)洗脱，合并含目标化合物的部分并浓缩。浓缩物用己烷结晶得到无色晶体状的(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-1b(14.4g，收率65%)。m.p.62.5-63.5℃对C57H91NO8S的元素分析计算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37实测值C，71.94;H，9.85;N，1.51;S，3.23c)将化合物GC-1b(14.4g，15.2mmol)溶于TFA(200ml)中，该溶液在20℃下放置30分钟。浓缩反应混合物，浓缩液溶于乙酸乙酯(500ml)中。该溶液用水洗涤，用无水硫酸钠干燥，接着再浓缩。得到的晶体用乙酸乙酯-己烷重结晶，得到了无色晶体状的GC-1(12.4g，收率91%)。
m.p.82.5-83.5℃[α]23D+14.9°(c＝0.55，在氯仿中)对C53H83NO8S的元素分析计算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59实测值C，70.96;H，9.36;N，1.57;S，3.58实施例3制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羟基-4-THT-OtBu(GC-2a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-2b)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OH(GC-2)。
按照基本上与实施例2相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羟基-4-THT-OtBu(GC-2a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-2b)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OH(GC-2)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a)(Fmoc-(R)-Cys-OtBu)21)锌 3.27g GC-2a(10.0) 酸混合物溶液40ml (10.9)DCM 80ml20℃ 20min2)补充R-(+)-缩水甘油8.29ml40℃ 2.5hb)GC-2a 棕榈酸 6.33g GC-2b(3.90) DIC 3.87ml (4.76)DMAP 402mgTHF 70ml20℃ 13hc)GC-2b TFA 50ml GC-2(2.50) 20℃ 1.5h (2.20)化合物GC-2a[α]21D-8.8°(c＝0.65，在氯仿中)对C25H31NO6S·0.5H2O的元素分析计算值C，62.22;H，6.68;N，2.90;S，6.64实测值C，62.14;H，6.66;N，2.81;S，6.54化合物GC-2bm.p.58.0℃对C57H91NO8S的元素分析
计算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37实测值C，71.94;H，9.58;N，1.43;S，3.36化合物GC-2m.p.90.0℃[α]20D+12.9°(c＝0.73，在氯仿中)对C53H63NO8S的元素分析计算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59实测值C，71.23;H，9.12;N，1.54;S，3.47实施例4制备(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3a)，(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3b)，和(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OH(GC-3)按照基本上与实施例2相同的方法制备(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3a)，(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3b)，和(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OH(GC-3)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a)(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)21)锌 656mg GC-3a(2.00) 酸混合物溶液8.0ml (2.18)DCM 16ml20℃ 30min2)补充(S)-(-)-缩水甘油0.67ml40℃ 5hb)GC-3a 棕榈酸 2.60g GC-3b(1.50) DIC 1.59ml (2.44)DMAP 154mgTHF 30ml20℃ 13hc)GC-3b TFA 40ml GC-3(2.00) 20℃ 1.5h (1.80)化合物GC-3a[α]23D-7.6°(c＝0.67，在氯仿中)对C25H31NO6S的元素分析计算值C，63.40;H，6.60;N，2.96;S，6.67实测值C，63.12;H，6.55;N，2.90;S，6.81化合物GC-3bm.p.62.5-63.0℃对C57H91NO8S的元素分析
计算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37实测值C，72.04;H，9.78;N，1.49;S，3.38化合物GC-3m.p.82.5-83.0℃[α]23D-16.0°(c＝0.51，在氯仿中)对C53H83NO8S的元素分析计算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59实测值C，71.20;H，9.38;N，1.45;S，3.53实施例5制备(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羟基-4-THT-OtBu(GC-4a)，(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-4b)，和(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OH(GC-4)按照基本上与实施例2相同的方法制备(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羟基-4-THT-OtBu(GC-4a)，(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OtBu(GC-4b)，和(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-OH(GC-4)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a)(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)21)锌 1.31g GC-4a(4.00) 酸混合物溶液 16ml (4.01)DCM 32ml20℃ 20min2)补充(S)-(-)-缩水甘油3.33ml40℃ 2.5hb)GC-4a 棕榈酸 4.78g GC-4b(2.94) DIC 2.92ml (4.22)DMAP 303mgTHF 50ml20℃ 15hc)GC-4b TFA 50ml GC-4(2.50) 20℃ 1.5h (2.24)化合物GC-4a[α]23D+8.4°(c＝0.67，在氯仿中)对C25H31NO6S的元素分析计算值C，63.40;H，6.60;N，2.96;S，6.77实测值C，63.15;H，6.47;N，2.88;S，6.67化合物GC-4bm.p.58.0℃对C57H91NO8S的元素分析
计算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37实测值C，72.01;H，9.55;N，1.34;S，3.36化合物GC-4m.p.88.5-89.0℃[α]23D-13.1°(c＝0.56，在氯仿中)对C53H83NO8S的元素分析计算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59实测值C，71.20;H，9.23;N，1.46;S，3.56实施例6制备(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物1)a)将化合物2中合成的化合物GC-1(1.79g)溶于DMF(20ml)中，在冰冷却的同时，向该溶液中加入HONB(394mg)、DIC(344μl)和参考例1中得到的H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(P-1)(1.64g)，将混合物在20℃下搅拌24小时。浓缩反应混合物，然后将其溶于氯仿中。该溶液依次用10%(W/V)的柠檬酸水溶液、水、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，氯仿层用无水硫酸钠干燥，然后浓缩。向浓缩物中加入乙腈，过滤收集生成的沉淀得到白色粉末状产物(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1a)(3.16g，收率97%)。18D+6.5°(c＝0.54，在氯仿中)对C88H145N7O18S的元素分析计算值C，65.20;H，9.02;N，6.05;S，1.98实测值C，64.90;H，8.83;N，5.86;S，1.78氨基酸分析[6N HCl，110℃，水解20小时;括号中的数值表示理论值]Glu1.00(1);Thr1.93(2);Gly2.95(3)FAB-MS(M+Na)＝1643(理论值1643)b)将化合物1a(2.70g)溶于DMF(27ml)中，向该溶液中加入哌啶(2.7ml)，混合物在20℃下搅拌1小时。浓缩反应混合物，并用硅胶柱色谱纯化，依次用氯仿-甲醇(50∶1，20∶1)洗脱，合并含有目标化合物的部分，浓缩得到白色粉末状产物(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1b)(2.10g，收率90%)。18D+7.1°(c＝0.49，在氯仿中)对C73H135N7O16S的元素分析
计算值C，62.67;H，9.73;N，7.01;S，2.29实测值C，62.55;H，9.85;N，6.95;S，2.21氨基酸分析[6N HCl，110℃，水解20小时;括号中的数值表示理论值]Glu1.00(1);Thr1.92(2);Gly2.95(3)FAB-MS(M+Na)＝1399(理论值1399)c)将化合物1b(200mg)溶于TFA(2.0ml)中，该溶液在20℃下放置1.5小时。浓缩反应混合物，向浓缩中加入乙腈，过滤收集生成的沉淀得到白色粉末状产物化合物1(164mg)。
对C57H103N7O16S·1.5H2O的元素分析计算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67实测值C，57.04;H，8.80;N，8.11;S，2.72实施例7制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物2)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(2a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(2b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物2)。
原料(mg) 反应条件 产物(mg)a) GC-2 P-1 458mg 2a(500) HONB 110mg (873)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 2a 哌啶 0.70ml 2b(770) DMF 7.0ml (623)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 2b TFA 1.5ml 2(150) 20℃ 1.5h (125)化合物2a[α]20D+3.4°(c＝0.66，在氯仿中)对C88H145N7O18S·0.5H2O的元素分析计算值C，64.84;H，9.03;N，6.01;S，1.97实测值C，64.88;H，9.18;N，6.08;S，1.95
化合物2b[α]20D+4.9°(c＝0.55，在氯仿中)对C73H135N7O16S·0.5H2O的元素分析计算值C，62.27;H，9.74;N，6.96;S，2.28实测值C，62.31;H，9.73;N，6.99;S，2.19化合物2[α]21D-2.3°(c＝0.58，在5%TFA-氯仿中)对C53H103N7O16S·1.5H2O的元素分析计算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67实测值C，56.72;H，8.62;N，8.11;S，2.63实施例8制备(2S，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物3)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(3a)，(2S，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(3b)，和(2S，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物3)。
原料(mg) 反应条件 产物(mg)a) GC-3 P-1 458mg 3a(500) HONB 110mg (885)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 3a 哌啶 0.80ml 3b(830) DMF 8.0ml (624)20℃ 1.5h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 3b TFA 1.6ml 3(160) 20℃ 1.5h (130)化合物3a[α]20D+15.9°(c＝0.51，在氯仿中)对C88H145N7O18S·0.5H2O的元素分析计算值C，64.84;H，9.03;N，6.01;S，1.97实测值C，64.63;H，9.07;N，5.80;S，2.21
化合物3b[α]20D+21.4°(c＝0.64，在氯仿中)对C73H135N7O16S的元素分析计算值C，62.68;H，9.73;N，7.01;S，2.29实测值C，62.75;H，9.41;N，7.05;S，2.40化合物2[α]21D-21.7°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)对C57H103N7O16S·H2O的元素分析计算值C，57.41;H，8.88;N，8.22;S，2.69实测值C，57.38;H，8.66;N，8.27;S，2.59实施例9制备(2S，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物4)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(4a)，(2S，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(4b)，和(2S，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物4)。
原料(mg) 反应条件 产物(mg)a) GC-4 P-1 458mg 4a(500) HONB 110mg (879)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 4a 哌啶 0.80ml 4b(820) DMF 8.0ml (651)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 4b TFA 1.6ml 4(160) 20℃ 1.5h (131)化合物4a[α]20D+15.3°(c＝0.65，在氯仿中)对C88H145N7O18S的元素分析计算值C，65.20;H，9.02;N，6.05;S，1.98实测值C，65.05;H，9.05;N，6.07;S，1.86
化合物4b[α]20D+24.4°(c＝0.62，在氯仿中)对C73H135N7O16S的元素分析计算值C，62.68;H，9.73;N，7.01;S，2.29实测值C，62.53;H，9.48;N，6.93;S，2.31化合物4[α]21D-15.6°(c＝0.5，在5%TFA-氯仿中)对C53H103N7O16S·1.5H2O的元素分析计算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67实测值C，56.74;H，8.57;N，8.03;S，2.72实施例10制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH(化合物5)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(5a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(5b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH(化合物5)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-2 809mg 5a(1.23) HONB 271mg (1.91)DIC 0.24mlDMF 20ml20℃ 19hb) 5a 哌啶 1.3ml 5b(1.30) DCM 13ml (0.99)20℃ 1.3h硅胶(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 5b TFA 2ml 5(0.49) 20℃ 2h (0.43)化合物5a[α]23D-6.9°(c＝0.51，在氯仿中)对C80H130N6O16S的元素分析计算值C，65.63;H，8.95;N，5.74;S，2.19实测值C，65.59;H，9.16;N，5.94;S，2.27化合物5b[α]23D-6.9°(c＝0.50，在氯仿中)
对C65H120N6O14S的元素分析计算值C，62.87;H，9.74;N，6.77;S，2.58实测值C，62.96;H，9.57;N，6.89;S，2.42化合物5[α]23D+4.9°(c＝0.49，在5%TFA-氯仿中)对C53H96N6O14S·0.5H2O的元素分析计算值C，58.81;H，9.03;N，7.76;S，2.96实测值C，58.94;H，8.82;N，7.70;S，2.99实施例11制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物6)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(6a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(6b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物6)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-3 470mg 6a(0.51) HONB 113mg (0.71)DIC 0.10mlDMF 5ml20℃ 16hb) 6a 哌啶 0.7ml 6b(0.66) DCM 6.3ml (0.56)20℃ 1.0h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 6b TFA 3.0ml 6(0.25) 20℃ 3h (0.20)化合物6a[α]23D+1.8°(c＝0.50，在氯仿中)对C88H142N6O19S的元素分析计算值C，65.24;H，8.83;N，5.19;S，1.98实测值C，65.05;H，8.87;N，5.15;S，1.91化合物6b[α]23D+1.0°(c＝0.50，在氯仿中)对C73H132N6O17S·0.5H2O的元素分析
计算值C，62.32;H，9.53;N，5.97;S，2.28实测值C，62.30;H，9.53;N，5.77;S，2.19化合物6[α]21D+3.8°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)对C50H90N4O13S·H2O的元素分析计算值C，57.46;H，8.63;N，7.05;S，2.69实测值C，57.56;H，8.60;N，7.24;S，2.54实施例12制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物7)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(7a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(7b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物7)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-4 630mg 7a(1.31) HONB 288mg (1.64)DIC 0.25mlDCM 19ml20℃ 15hb) 7a 哌啶 1.2ml 7b(1.18) DCM 12ml (0.92)20℃ 1.3h硅胶(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 7b TFA 2ml 7(0.45) 20℃ 2h (0.38)化合物7a[α]23D-6.4°(c＝0.50，在氯仿中)对C72H115N5O14S的元素分析计算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45实测值C，66.03;H，8.87;N，5.31;S，2.22化合物7b[α]23D-6.7°(c＝0.63，在氯仿中)对C57H105N5O12S·H2O的元素分析
计算值C，62.09;H，9.78;N，6.35;S，2.91实测值C，62.12;H，9.59;N，6.36;S，2.87化合物7[α]23D+8.3°(c＝0.60，在5%TFA-氯仿中)对C49H89N5O12S·H2O的元素分析计算值C，59.43;H，9.26;N，7.07;S，3.24实测值C，59.19;H，8.96;N，6.96;S，3.26实施例13制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物8)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(8a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(8b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物8)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-5 1.53g 8a(1.92) HONB 684mg (3.93)DIC 0.59mlDMF 33ml20℃ 15hb) 8a 哌啶 0.82ml 8b(0.82) DCM 8.2ml (0.64)20℃ 2h硅胶(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 8b TFA 2ml 8(0.58) 20℃ 2h (0.45)化合物8a[α]23D-7.1°(c＝0.49，在氯仿中)对C72H115N5O14S的元素分析计算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45实测值C，66.12;H，8.77;N，5.52;S，2.45化合物8b[α]23D-14.5°(c＝0.53，在氯仿中)对C57H105N5O12S的元素分析
计算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96实测值C，63.10;H，9.83;N，6.44;S，2.77化合物8[α]23D+8.1°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)对C49H89N5O12S·0.5H2O的元素分析计算值C，59.97;H，9.24;N，7.14;S，3.27实测值C，59.82;H，9.14;N，6.96;S，3.38实施例14制备(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物9)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(9a)，(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(9b)，和(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物9)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-1 P-4 490mg 9a(1.02) HONB 229mg (1.25)DIC 0.20mlDMF 15ml20℃ 18hb) 9a 哌啶 1.10ml 9b(1.10) DCM 11ml (0.777)20℃ 1.5h硅胶(氯仿-甲醇)49:1,19:1,c) 9b TFA 3.0ml 9(0.300) 20℃ 1.5h (0.266)化合物9a[α]24D-3.3°(c＝0.51，在氯仿中)对C72H115N5O14S·H2O的元素分析计算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45实测值C，66.10;H，8.89;N，5.46;S，2.58化合物9b[α]21D-5.5°(c＝0.73，在氯仿中)对C57H105N5O12S的元素分析
计算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96实测值C，62.84;H，9.61;N，6.42;S，2.96化合物9[α]21D+13.5°(c＝0.67，在5%TFA-氯仿中)对C49H89N5O12S·2.5H2O的元素分析计算值C，57.85;H，9.31;N，6.88;S，3.15实测值C，57.89;H，8.82;N，6.88;S，3.05实施例15制备(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物10)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(10a)，(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(10b)和(2R，6S)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物10)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-1 P-5 1.61g 10a(2.41) HONB 541mg (3.45)DIC 0.47mlDMF 25ml20℃ 19hb) 10a 哌啶 1.10ml 10b(1.10) DMF 11ml (0.783)20℃ 1.5h硅胶(氯仿-甲醇)49:1,19:1,c) 9b TFA 3.0ml 10(0.300) 20℃ 1.5h (0.262)化合物10a[α]24D-5.1°(c＝0.57，在氯仿中)对C72H115N5O14S·H2O的元素分析计算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45实测值C，66.07;H，8.94;N，5.48;S，2.49化合物10b[α]21D-10.7°(c＝0.57，在氯仿中)对C57H105N5O12S的元素分析
计算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96实测值C，63.13;H，9.51;N，6.46;S，2.96化合物10[α]21D+13.2°(c＝0.67，在5%TFA-氯仿中)对C49H89N5O12S·2H2O的元素分析计算值C，58.36;H，9.29;N，6.95;S，3.18实测值C，58.30;H，8.90;N，6.76;S，3.25实施例16制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物11)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(11a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(11b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物11)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-6 1.31g 11a(2.04) HONB 453mg (2.72)DIC 0.40mlDMF 20ml20℃ 16hb) 11a 哌啶 2.0ml 11b(2.00) DCM 18ml (1.75)20℃ 1h硅胶(乙酸乙酯-甲醇)10:0,9:1,c) 11b TFA 8.0ml(0.80) 20℃ 2h (0.56)化合物11a[α]23D-7.0°(c＝0.56，在氯仿中)对C77H124N4O15S的元素分析计算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33实测值C，67.01;H，9.19;N，4.01;S，2.31化合物11b[α]23D-18°(c＝0.53，在氯仿中)对C62H114N4O13S的元素分析
计算值C，64.44;H，9.94;N，4.85;S，2.77实测值C，64.23;H，9.95;N，4.94;S，2.64化合物11[α]21D+2.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)对C50H90N4O13S·H2O的元素分析计算值C，59.73;H，9.22;N，5.57;S，3.19实测值C，59.56;H，9.05;N，5.48;S，3.15实施例17制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH(化合物12)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(12a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(12b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH(化合物12)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-7 918mg 12a(2.00) HONB 441mg (1.81)DIC 0.39mlDMF 20ml20℃ 15hb) 12a 哌啶 1.8ml 12b(1.75) DCM 18ml (1.32)20℃ 1.5h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 12b TFA 5ml 12(0.60) 20℃ 2h (0.52)化合物12a[α]23D-5.2°(c＝0.58，在氯仿中)对C70H112N4O13S的元素分析计算值C，67.28;H，9.03;N，4.48;S，2.57实测值C，67.22;H，8.84;N，4.55;S，2.51化合物12b[α]23D-7.9°(c＝0.60，在氯仿中)对C55H102N4O11S·0.5H2O的元素分析
计算值C，63.73;H，10.02;N，5.41;S，3.09实测值C，63.88;H，10.22;N，5.48;S，3.09化合物12[α]23D+14.8°(c＝0.68，在5%TFA-氯仿中)对C47H86N4O11S·2.5H2O的元素分析计算值C，58.78;H，9.55;N，5.83;S，3.34实测值C，58.91;H，8.83;N，5.67;S，3.06实施例18制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OH(化合物13)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OtBu(13a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OtBu(13b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OH(化合物13)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-Gly-Gly-Gly-OtBu 660mg 13a(2.18) HONB 482mg (2.50)DIC 0.42mlDMF 20ml20℃ 17hb) 13a 哌啶 1.8ml 13b(1.80) DCM 18ml (1.30)20℃ 1.3h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 13b TFA 5ml 13(0.60) 20℃ 2h (0.55)化合物13a[α]23D-11.0°(c＝0.60，在氯仿中)对C63H100N4O11S的元素分析计算值C，67.47;H，8.99;N，5.00;S，2.86实测值C，67.47;H，8.86;N，4.92;S，2.89化合物13b[α]23D-14.3°(c＝0.48，在氯仿中)对C48H90N4O9S的元素分析
计算值C，64.11;H，10.09;N，6.23;S，3.57实测值C，63.97;H，10.01;N，6.21;S，3.44化合物13[α]23D+12.2°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)对C44H82N4O9S·2.5H2O的元素分析计算值C，59.50;H，9.87;N，6.31;S，3.61实测值C，59.21;H，9.17;N，6.16;S，3.34实施例19制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH(化合物14)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(14a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(14b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH(化合物14)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-Gly-Glu(OtBu)-OtBu 777mg 14a(2.03) HONB 441mg (2.20)DIC 0.39mlDMF 20ml20℃ 16hb) 14a 哌啶 1.4ml 14b(1.40) DCM 14ml (0.90)20℃ 1.0h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 14b TFA 4.0ml 14(0.40) 20℃ 2h (0.29)化合物14a[α]23D-2.0°(c＝0.50，在氯仿中)对C68H109N3O12S的元素分析计算值C，68.48;H，9.21;N，3.52;S，2.69实测值C，68.62;H，9.26;N，3.60;S，2.68化合物14b[α]23D-5.6°(c＝0.57，在氯仿中)对C53H99N3O10S的元素分析
计算值C，65.60;H，10.28;N，4.33;S，3.30实测值C，65.51;H，10.31;N，4.20;S，3.25化合物14[α]21D+2.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)对C45H83N3O10S·0.5H2O的元素分析计算值C，62.32;H，9.76;N，4.85;S，3.70实测值C，62.16;H，9.64;N，4.61;S，3.67实施例20制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-OH(化合物15)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-OtBu(15a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-OtBu(15b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-OH(化合物15)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-Glu(OtBu)-OtBu 1.27g 15a(4.00) HONB 882mg (4.80)DIC 0.77mlDMF 30ml20℃ 17hb) 15a 哌啶 2.3ml 15b(2.30) DCM 23ml (1.14)20℃ 1.3h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 15b TFA 5ml 15(0.48) 20℃ 2h (0.41)化合物15a[α]23D-2.0°(c＝0.58，在氯仿中)对C66H106N2O11S的元素分析计算值C，69.81;H，9.41;N，2.47;S，2.82实测值C，69.79;H，9.26;N，2.44;S，2.74化合物15b[α]23D-10.1°(c＝0.56，在氯仿中)对C51H96N2O9S的元素分析
计算值C，67.06;H，10.59;N，3.07;S，3.51实测值C，67.04;H，10.36;N，3.09;S，3.45化合物15[α]23D+3.7°(c＝0.60，在5%TFA-氯仿中)对C43H80N2O9S·0.5H2O的元素分析计算值C，63.75;H，10.08;N，3.46;S，3.96实测值C，63.70;H，9.75;N，3.31;S，3.88实施例21制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH(化合物6)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(16a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(16b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH(化合物16)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-8 1.17g 16a(2.28) HONB 502mg (3.13)DIC 0.44mlDMF 20ml20℃ 15hb) 16a 哌啶 3.0ml 16b(2.94) DCM 30ml (1.83)20℃ 2h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 16b TFA 9ml 16(0.83) 20℃ 2h (0.74)化合物16a[α]22D+3.7°(c＝0.61，在氯仿中)对C71H113N5O14S的元素分析计算值C，65.97;H，8.81;N，5.42;S，2.48实测值C，65.61;H，9.13;N，5.90;S，2.24化合物16b[α]22D-1.5°(c＝0.55，在氯仿中)对C56H103N5O12S的元素分析
计算值C，62.83;H，9.70;N，6.54;S，3.00实测值C，62.77;H，9.92;N，6.75;S，3.94化合物16[α]25D+19.2°(c＝0.64，在5%TFA-氯仿中)对C48H87N5O12S·1.5H2O的元素分析计算值C，58.51;H，9.21;N，6.87;S，3.25实测值C，58.68;H，9.00;N，6.87;S，3.25实施例22制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物17)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(17a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(17b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物17)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-9 780mg 17a(1.68) HONB 374mg (1.97)DIC 327μlDMF 18ml20℃ 16hb) 17a 哌啶 2.0ml 17b(1.80) DCM 18ml (1.52)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)25:1,c) 17b TFA 10.0ml 17(1.00) 20℃ 3h (0.76)化合物17a[α]24D-10.0°(c＝0.54，在氯仿中)对C70H112N4O13S·0.5H2O的元素分析计算值C，66.79;H，9.05;N，4.45;S，2.55实测值C，66.59;H，8.75;N，4.75;S，2.53化合物17b[α]24D-15.7°(c＝0.49，在氯仿中)对C55H102N4O11S·0.5H2O的元素分析
计算值C，63.73;H，10.02;N，5.41;S，3.09实测值C，63.67;H，10.23;N，5.28;S，3.07化合物17[α]24D+6.0°(c＝0.51，在5%TFA-氯仿中)对C47H86N4O11S·2H2O的元素分析计算值C，59.34;H，9.54;N，5.89;S，3.37实测值C，59.01;H，9.17;N，5.92;S，3.08实施例23制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH(化合物18)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OtBu(18a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OtBu(18b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH(化合物18)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-Gly-Gly-OtBu 580mg 18a(2.50) HONB 552mg (2.42)DIC 482μlDMF 20ml20℃ 13hb) 18a 哌啶 2.2ml 18b(2.20) DCM 22ml (1.59)20℃ 1.5h硅胶(氯仿-甲醇)20:1,c) 18b TFA 6.0ml 18(0.60) 20℃ 1h (0.56)化合物18a[α]24D-7.6°(c＝0.52，在氯仿中)对C61H97N3O10S的元素分析计算值C，68.83;H，9.18;N，3.95;S，3.01实测值C，69.06;H，9.28;N，4.09;S，2.88化合物18b[α]24D-13.4°(c＝0.52，在氯仿中)对C46H87N3O8S·0.5H2O的元素分析
计算值C，64.90;H，10.42;N，4.94;S，3.77实测值C，64.99;H，10.45;N，4.82;S，3.49化合物18[α]25D+10.7°(c＝0.51，在5%TFA-氯仿中)对C42H79N3O8S·1.5H2O的元素分析计算值C，62.03;H，10.16;N，5.17;S，3.94实测值C，61.80;H，9.97;N，4.85;S，4.04实施例24制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu-OH(化合物19)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(19a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(19b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu-OH(化合物19)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-10 830mg 19a(2.12) HONB 471mg (2.18)DIC 412μlDMF 21ml20℃ 16hb) 19a 哌啶 2.0ml 19b(2.00) DCM 18ml (1.72)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 19b TFA 10ml 19(1.00) 20℃ 3h (0.70)化合物19a[α]24D-12.5°(c＝0.55，在氯仿中)对C68H109N3O12S的元素分析计算值C，68.43;H，9.21;N，3.52;S，2.69实测值C，68.31;H，9.25;N，3.72;S，2.48化合物19b[α]24D-16.4°(c＝0.53，在氯仿中)对C53H99N3O10S·0.8H2O的元素分析
计算值C，64.64;H，10.30;N，4.27;S，3.26实测值C，64.62;H，10.25;N，4.08;S，3.22化合物19[α]24D+14.2°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)对C45H83N3O10S·2.2H2O的元素分析计算值C，60.19;H，9.81;N，4.68;S，3.57实测值C，60.05;H，9.44;N，4.35;S，3.61实施例25制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Glu-OH(化合物20)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Glu(OtBu)-OtBu(20a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Glu(OtBu)-OtBu(20b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Glu-OH(化合物20)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-D-Glu(OtBu)-OtBu 0.75g 20a(2.35) HONB 518mg (2.35)DIC 0.45mlDMF 20ml20℃ 17hb) 20a 哌啶 2.0ml 20b(2.23) DCM 20ml (1.76)20℃硅胶(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 20b TFA 10ml 20(0.77) 20℃ 2h (0.64)化合物20a[α]22D-7.4°(c＝0.60，在氯仿中)对C66H106N2O11S的元素分析计算值C，69.81;H，9.41;N，2.47;S，2.82实测值C，69.66;H，9.52;N，2.85;S，2.53化合物20b[α]22D-15.9°(c＝0.66，在氯仿中)对C51H96N2O9S·0.5H2O的元素分析
计算值C，66.41;H，10.60;N，3.04;S，3.48实测值C，66.42;H，10.42;N，3.25;S，3.21化合物20[α]25D-1.5°(c＝0.55，在5%TFA-氯仿中)对C43H80N2O9S的元素分析计算值C，64.46;H，10.06;N，3.50;S，4.00实测值C，64.56;H，9.92;N，3.42;S，3.90实施例26制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Asp-OH(化合物21)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Asp(OtBu)-OtBu(21a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Asp(OtBu)-OtBu(21b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Asp-OH(化合物21)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-Asp(OtBu)-OtBu 0.69g 21a(2.30) HONB 507mg (2.67)DIC 0.44mlDMF 20ml20℃ 17hb) 21a 哌啶 2.5ml 21b(2.56) DCM 25ml (1.80)20℃ 1h硅胶(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 21b TFA 10ml 21(0.86) 20℃ 2h (0.73)化合物21a[α]22D+5.2°(c＝0.65，在氯仿中)对C65H104N2O11S的元素分析计算值C，69.61;H，9.35;N，2.50;S，2.86实测值C，69.38;H，9.49;N，2.77;S，2.69化合物21b[α]22D-1.1°(c＝0.70，在氯仿中)对C50H94N2O9S的元素分析
计算值C，66.76;H，10.54;N，3.11;S，3.57实测值C，66.87;H，10.55;N，3.36;S，3.30化合物21[α]25D+5.5°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)对C42H78N2O9S的元素分析计算值C，64.09;H，9.99;N，3.56;S，4.07实测值C，64.23;H，9.74;N，3.44;S，4.02实施例27制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Asp-OH(化合物22)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Asp(OtBu)-OtBu(22a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Asp(OtBu)-OtBu(22b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-D-Asp-OH(化合物22)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-D-Asp(OtBu)-OtBu 0.70g 22a(2.32) HONB 511mg (2.84)DIC 0.45mlDMF 20ml20℃ 17hb) 22a 哌啶 2.5ml 22b(2.64) DCM 25ml (1.87)20℃ 1h硅胶(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 22b TFA 10ml 22(0.95) 20℃ 2h (0.82)化合物22a[α]22D-12.7°(c＝0.51，在氯仿中)对C65H104N2O11S的元素分析计算值C，69.61;H，9.35;N，2.50;S，2.86实测值C，69.82;H，9.48;N，2.98;S，2.53化合物22b[α]22D-22.7°(c＝0.67，在氯仿中)对C50H94N2O9S·0.5H2O的元素分析
计算值C，66.11;H，10.54;N，3.08;S，3.53实测值C，65.83;H，10.38;N，2.93;S，3.40化合物22[α]25D-10.8°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)对C42H78N2O9S的元素分析计算值C，64.09;H，9.99;N，3.56;S，4.07实测值C，64.13;H，9.60;N，3.47;S，4.06实施例28制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物23)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(23a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(23b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物23)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-11 590mg 23a(0.95) HONB 210mg (1.22)DIC 185μlDMF 9.5ml20℃ 16hb) 23a 哌啶 1.1ml 23b(1.10) DCM 9.9ml (0.97)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 23b TFA 4.8ml 23(0.48) 20℃ 3h (0.36)化合物23a[α]24D-7.0°(c＝0.50，在氯仿中)对C77H124N4O15S的元素分析计算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33实测值C，67.16;H，9.05;N，4.10;S，2.40化合物23b[α]24D-10.6°(c＝0.50，在氯仿中)对C62H114N4O13S·0.5H2O的元素分析
计算值C，63.94;H，9.95;N，4.81;S，2.75实测值C，63.91;H，9.80;N，4.74;S，2.71化合物23[α]21D+13.0°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)对C50H90N4O13S·1.5H2O的元素分析计算值C，59.20;H，9.24;N，5.52;S，3.16实测值C，59.15;H，9.09;N，5.50;S，3.41实施例29制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D-Glu-OH(化合物24)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(24a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(24b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D-Glu-OH(化合物24)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-12 500mg 24a(0.81) HONB 178mg (0.98)DIC 157μlDMF 8.0ml20℃ 16hb) 24a 哌啶 0.9ml 24b(0.90) DCM 8.1ml (0.80)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 24b TFA 4.0ml 24(0.40) 20℃ 3h (0.29)化合物24a[α]24D-12.3°(c＝0.52，在氯仿中)对C77H124N4O15S·0.5H2O的元素分析计算值C，66.68;H，9.08;N，4.04;S，2.31实测值C，66.82;H，8.83;N，4.34;S，2.33化合物24b[α]24D-15.9°(c＝0.49，在氯仿中)对C62H114N4O13S·0.5H2O的元素分析
计算值C，63.94;H，9.95;N，4.81;S，2.75实测值C，64.04;H，9.84;N，4.86;S，2.76化合物24[α]24D+5.0°(c＝0.47，在5%TFA-氯仿中)对C50H90N4O13S·H2O的元素分析计算值C，59.73;H，9.22;N，5.57;S，3.19实测值C，59.73;H，9.25;N，5.48;S，3.18实施例30制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-OH(化合物25)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(25a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(25b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-OH(化合物25)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-13 770mg 25a(1.24) HONB 274mg (1.63)DIC 241μlDMF 12.0ml20℃ 16hb) 25a 哌啶 1.5ml 25b(1.50) DCM 13.5ml (1.34)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 25b TFA 6.7ml 25(0.67) 20℃ 3h (0.50)化合物25a[α]24D-1.7°(c＝0.51，在氯仿中)对C77H124N4O15S的元素分析计算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33实测值C，66.97;H，9.12;N，4.06;S，2.25化合物25b[α]24D-9.6°(c＝0.53，在氯仿中)对C62H114N4O13S·H2O的元素分析
计算值C，63.45;H，9.96;N，4.77;S，2.73实测值C，63.31;H，9.81;N，4.82;S，2.65化合物25[α]24D+8.7°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)对C50H90N4O13S·1.5H2O的元素分析计算值C，59.20;H，9.24;N，5.52;S，3.16实测值C，59.34;H，9.13;N，5.53;S，3.21实施例31制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH(化合物26)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(26a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(26b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH(化合物26)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu 26a(1.20) 660mg (1.63)HONB 265mgDIC 233μlDMF 12.0ml20℃ 16hb) 26a 哌啶 1.5ml 26b(1.50) DCM 13.5ml (1.32)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 26b TFA 6.6ml 26(0.66) 20℃ 3h (0.47)化合物26a[α]24D-7.4°(c＝0.51，在氯仿中)对C75H121N4O14S的元素分析计算值C，68.20;H，9.23;N，3.18;S，2.43实测值C，68.26;H，9.09;N，2.95;S，2.57化合物26b[α]24D-17.7°(c＝0.53，在氯仿中)对C60H111N3O12S·0.5H2O的元素分析
计算值C，65.06;H，10.19;N，3.79;S，2.89实测值C，64.88;H，10.29;N，3.81;S，2.95化合物26[α]24D-0.9°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)对C48H87N3O12S·H2O的元素分析计算值C，60.79;H，9.46;N，4.43;S，3.38实测值C，60.89;H，9.40;N，4.41;S，3.38实施例32制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(Pam0)-4-THT-Glu-D-Glu-OH(化合物27)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(27a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(27b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-D-Glu-OH(化合物27)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-14 700mg 27a(1.27) HONB 282mg (1.45)DIC 247μlDMF 12.7ml20℃ 16hb) 27a 哌啶 1.4ml 27b(1.33) DCM 12.6ml (1.12)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 27b TFA 5.5ml 27(0.55) 20℃ 3h (0.45)化合物27a[α]24D-12.6°(c＝0.52，在氯仿中)对C75H121N3O14S的元素分析计算值C，68.20;H，9.23;N，3.18;S，2.43实测值C，68.27;H，9.46;N，3.14;S，2.30化合物27b[α]24D-21.3°(c＝0.51，在氯仿中)对C60H111N3O12S·0.5H2O的元素分析
计算值C，65.06;H，10.19;N，3.79;S，2.89实测值C，65.05;H，10.33;N，3.65;S，2.88化合物27[α]24D-5.9°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)对C48H87N3O12S·H2O的元素分析计算值C，60.79;H，9.46;N，4.43;S，3.38实测值C，60.88;H，9.25;N，4.43;S，3.19实施例33制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH(化合物28)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(28a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(28b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH(化合物28)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-15 715mg 28a(0.91) HONB 201mg (1.48)DIC 177μlDMF 9.1ml20℃ 16hb) 28a 哌啶 1.3ml 28b(1.35) DCM 11.7ml (1.20)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 28b TFA 6.0ml 28(0.60) 20℃ 3h (0.44)化合物28a[α]24D-13.2°(c＝0.52，在氯仿中)对C84H136N4O17S的元素分析计算值C，66.99;H，9.10;N，3.72;S，2.18实测值C，67.08;H，9.14;N，3.78;S，2.16化合物28b[α]24D-19.5°(c＝0.53，在氯仿中)对C69H126N4O15S·0.5H2O的元素分析
计算值C，64.10;H，9.90;N，4.33;S，2.48实测值C，64.28;H，9.92;N，4.21;S，2.47化合物28[α]24D-5.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)对C53H94N4O15S·0.5H2O的元素分析计算值C，59.58;H，8.96;N，5.24;S，3.00实测值C，59.36;H，8.91;N，5.20;S，2.95实施例34制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH(化合物29)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(29a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(29b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH(化合物29)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-16 590mg 29a(0.75) HONB 166mg (1.27)DIC 146μlDMF 7.5ml20℃ 16hb) 29a 哌啶 1.2ml 29b(1.15) DCM 10.8ml (0.99)20℃ 1h硅胶(氯仿-甲醇)97:3,c) 29b TFA 5.0ml 29(0.50) 20℃ 3h (0.36)化合物29a[α]24D-12.7°(c＝0.49，在氯仿中)对C84H136N4O17S的元素分析计算值C，66.99;H，9.10;N，3.72;S，2.13实测值C，66.80;H，9.15;N，3.65;S，2.15化合物29b[α]24D-20.7°(c＝0.51，在氯仿中)对C69H126N4O15S·H2O的元素分析
计算值C，63.66;H，9.91;N，4.30;S，2.46实测值C，63.67;H，9.88;N，4.26;S，2.48化合物29[α]24D-16.1°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)对C53H94N4O15S·H2O的元素分析计算值C，59.08;H，8.98;N，5.20;S，2.98实测值C，58.85;H，8.90;N，5.17;S，2.81实施例35制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-羟基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5b)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OH(GC-5)按照基本上与实施例2相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-羟基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5b)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OH(GC-5)
原料(g) 反应条件 产物(g)a) (Fmoc-(R)-Cys-OtBu)21)锌 1.25g GC-5a(3.83) 酸混合物 13ml (5.07)溶液DCM 25ml20℃ 30min2)补充的(S)-O-棕榈酰基缩水甘油12.0g50℃ 8hb) GC-5a 己酸 1.96g GC-5b(4.80) DIC 2.64ml (5.23)DMAP 329mgTHF 90ml20℃ 17hc) GC-5b TFA 20ml GC-5(5.08) 20℃ 1.5h (4.72)化合物GC-5am.p.57.5-58.8℃[α]20D-2.9°(c＝0.55，在氯仿中)对C41H61N4O7S的元素分析计算值C，69.16;H，8.64;N，1.97;S，4.50实测值C，68.95;H，8.67;N，1.83;S，4.48
化合物GC-5b[α]20D+1.1°(c＝0.52，在氯仿中)对C47H71N4O8S的元素分析计算值C，69.68;H，8.83;N，1.73;S，3.96实测值C，69.78;H，8.90;N，1.78;S，3.80化合物GC-5[α]20D+14.0°(c＝0.56，在氯仿中)对C43H63N4O8S的元素分析计算值C，68.49;H，8.42;N，1.86;S，4.25实测值C，68.27;H，8.34;N，1.83;S，4.26实施例36制备(2R，6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物30)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(30a)，(2R，6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(30b)and(2R，6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物30)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-5 P-4 1.88g 30a(3.00) HONB 784mg (3.32)DIC 0.69mlDMF 25ml20℃ 16hb) 30a 哌啶 3.0ml 30b(3.20) DCM 30ml (2.26)20℃ 2h硅胶(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 30b TFA 5ml 30(0.53) 20℃ 2h (0.46)化合物30a[α]22D-6.4°(c＝0.53，在氯仿中)对C62H95N5O14S的元素分析计算值C，63.84;H，8.21;N，6.00;S，2.75实测值C，63.67;H，8.09;N，5.89;S，2.84
化合物30b[α]22D-8.2°(c＝0.56，在氯仿中)对C47H85N5O12S的元素分析计算值C，59.78;H，9.07;N，7.42;S，3.40实测值C，59.64;H，8.87;N，7.42;S，3.37化合物30[α]22D+9.5°(c＝0.57，在5%TFA-氯仿中)对C39H69N5O12S·1.5H2O的元素分析计算值C，54.53;H，8.45;N，8.15;S，3.73实测值C，54.56;H，8.09;N，8.21;S，3.69实施例37制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物31)将化合物11a(600mg)溶于TFA(6.0ml)中，该溶液在20℃下放置2小时。浓缩反应混合物，浓缩物悬浮在乙腈中，过滤悬浮液，收集到白色粉末状化合物31，(517mg，收率98%)。25D-16.5°(c＝0.58，在5%TFA-氯仿中)对C65H100N4O15S·H2O的元素分析
计算值C，63.60;H，8.38;N，4.56;S，2.61实测值C，63.83;H，8.47;N，4.46;S，2.52实施例38制备(2R，6R)-2-乙酰氨基-6，7-双(Pamo)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物32)以化合物11b为起始物，通过(2R，6R)-2-乙酰氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(32a)制得了(2R，6R)-2-乙酰氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物32)。
a)将化合物11b(700mg)溶于DCM(7.0ml)中，向该溶液中加入乙酸酐(86μl)，所得混合物在20℃下搅拌1小时。浓缩反应混合物，浓缩物悬浮在乙腈中，过滤悬浮液，收集到白色粉末状产物化合物32a(580mg)。24D-12.8°(c＝0.49，在氯仿中)对C64H116N4O14S·0.5H2O的元素分析计算值C，63.70;H，9.77;N，4.64;S，2.66实测值C，63.80;H，9.79;N，4.54;S，2.55b)按照基本上与实施例37中的去保护基反应相同的方法处理化合物32a(530mg)的TFA溶液(5.3ml)，得到白色粉本状产物化合物32(455mg)。25D-16.6°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)对C52H92N4O14S·H2O的元素分析计算值C，59.63;H，9.05;N，5.35;S，3.06实测值C，59.59;H，8.99;N，5.15;S，2.91实施例39制备(2R，6R)-2-己酰氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物33)以化合物30b为起始物，通过(2R，6R)-2-己酰氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(33a)制得了(2R，6R)-2-己酰氨基-6-己酰氨基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物33)。
a)将化合物30b(550mg)溶于DCM(10ml)中，在冰冷却同时，向该溶液中加入HOBT(87mg)、WSC(123mg)和己酸(80μl)。将混合物在20℃下搅拌18小时。浓缩反应混合物，浓缩物溶于乙酸乙酯中，接着依次用10%氯化铵水溶液、2%碳酸氢钠水溶液和水洗涤。乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，然后再浓缩。将浓缩物悬浮在乙腈中，过滤悬浮液，收集到白色粉末状产物(2R，6R)-2-己酰氧基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(33a)(534mg，收率88%)。
化合物33a[α]22D-8.0°(c＝0.56，在氯仿中)对C53H95N5O13S的元素分析计算值C，61.07;H，9.19;N，6.72;S，3.08实测值C，61.02;H，9.10;N，6.71;S，3.05b)将化合物33a(480mg)溶于TFA(5.0ml)中，将该溶液在20℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物，将浓缩物悬浮在乙腈中，过滤悬浮液，收集化合物33(408mg，收率95%)。
化合物33[α]22D-12.7°(c＝0.64，在5%TFA-氯仿中)对C45H79N5O13S·0.5H2O的元素分析计算值C，57.55;H，8.59;N，7.46;S，3.41实测值C，57.74;H，8.54;N，7.41;S，3.43实施例40制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-OtBu(GC-6a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-OH(GC-6)
按照基本上与实施例2相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-OtBu(GC-6a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-OH(GC-6)。
原料 反应条件 产物a) GC-2a 硬脂酸 5.58g GC-6a(2.65g) DIC 3.07mg (3.20g)DMAP 275mgTHF 45ml20℃ 14hb) GC-6a TFA 15ml GC6(3.00g) 20℃ 2.0ml (2.75g)化合物GC-6am.p.64.2-65.9℃[α]22D+0.2°(c＝0.92，在氯仿中)对C61H99NO8S的元素分析计算值C，72.79;H，9.91;N，1.39;S，3.19实测值C，72.60;H，10.10;N，1.66;S，3.37化合物GC-6m.p.92.0-92.8℃[α]24D+11.0°(c＝0.67，在氯仿中)对C57H91NO8S的元素分析
计算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37实测值C，72.21;H，10.05;N，1.57;S，3.24实施例41制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-OtBu(GC-7a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-OH(GC-7)按照基本上与实施例2相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-OtBu(GC-7a)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-OH(GC-7)。
原料 反应条件 产物a) GC-2a 肉豆蔻酸 4.22g GC-7a(2.50g) DIC 2.89ml (2.58g)DMAP 258mgTHF 45ml20℃ 14hb) GC-7a TFA 20ml GC-7(3.00g) 20℃ 2.0h (1.93g)化合物GC-7am.p.49.2-50.9℃[α]22D+0.5°(c＝0.83，在氯仿中)对C53H83NO8S的元素分析
计算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59实测值C，70.97;H，9.24;N，1.62;S，3.52化合物GC-7m.p.82.8-83.5℃[α]22D+12.7°(c＝0.58，在氯仿中)对C49H75NO8S·0.25H2O元素分析计算值C，69.84;H，9.03;N，1.66;S，3.81实测值C，69.85;H，9.09;N，1.62;S，3.78实施例42制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物34)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(34a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(34b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(SteO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-Glu-OH(化合物34)。
原料 反应条件 产物a) GC-6 P-11 1.47g 34a(2.53g) HONB 525mg (3.75g)DIC 459μlDMF 20ml20℃ 16hb) 34a 哌啶 3.6ml 34b(3.56g) DCM 30ml (2.78g)20℃ 2.0h (1.93g)硅胶(氯仿-甲醇)20:1c) 34b TFA 6.0ml 34(0.59g) 20℃ 2.0h (0.51g)化合物34a[α]24D-6.6°(c＝0.62，在氯仿中)对C81H132N4O15S的元素分析计算值C，67.84;H，9.28;N，3.91;S，2.24实测值C，67.59;H，9.54;N，4.27;S，2.46化合物34b[α]24D-10.7°(c＝0.75，在氯仿中)对C66H122N4O13S·H2O元素分析
计算值C，64.46;H，10.16;N，4.56;S，2.61实测值C，64.46;H，10.07;N，4.83;S，2.64化合物34[α]24D+10.8°(c＝0.65，在5%TFA-氯仿中)对C54H98N4O13S·4H2O的元素分析计算值C，58.14;H，9.58;N，5.02;S，2.87实测值C，58.48;H，9.20;N，5.20;S，2.72实施例43制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物35)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(35a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(35b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物35)。
原料 反应条件 产物a) GC-7 P-11 1.21g 35a(1.83g) HONB 432mg (2.22g)DIC 378μgDMF 20ml20℃ 18hb) 35a 哌啶 3.6ml 35b(2.10g) DCM 30ml (1.58g)20℃ 2.0h硅胶(氯仿-甲醇)20:1c) 35b TFA 10ml 35(1.00g) 20℃ 2.0h (0.85g)化合物35a[α]22D-7.6°(c＝0.71，在氯仿中)对C73H116N4O15S的元素分析计算值C，66.33;H，8.85;N，4.24;S，2.43实测值C，66.30;H，8.97;N，4.38;S，2.42化合物35b[α]22D-12.0°(c＝1.11，在氯仿中)对C58H106N4O13S元素分析
计算值C，63.36;H，9.72;N，5.10;S，2.92实测值C，63.14;H，9.69;N，5.21;S，2.81化合物35[α]22D+10.9°(c＝0.86，在5%TFA-氯仿中)对C46H82N4O13S·4H2O的元素分析计算值C，55.07;H，9.04;N，5.58;S，3.20实测值C，54.96;H，9.12;N，5.25;S，2.94实施例44制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(Pamo)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH盐酸盐(化合物36)a)向在DMF(4ml)中的实施例3中全合成的GC-2(179mg)和参考例17中合成的P-17(80mg)溶液中加入TEA(0.033ml)和DEPC(49mg)，将混合物在20℃下搅拌90分钟。向反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%的柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水溶液洗涤，接着用无水硫酸钠干燥。蒸去溶剂，剩余物用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)纯化，得到无色蜡状化合物(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(36a)(105mg，收率41%)，。
IR(KBr)ν3300，1730，1685，1660，1645cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.03-1.38(56H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49-2.40(12H，m)，2.79(2H，d，J＝5.2Hz)，2.93(2H，d，J＝7.0Hz)，3.17-3.32(2H，m)，4.00-4.56(7H，m)，5.17-5.32(1H，m)，5.78-5.90(1H，m)，6.19(1H，d，J＝8.0Hz)，6.44-6.56(1H，m)，7.26-7.46(4H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.78(2H，d，J＝7.4Hz)b)向如上获得的化合物36a(104mg)中加入哌啶(2ml)，将混合物在室温下搅拌30分钟，然后浓缩反应混合物。浓缩物用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1～氯仿∶甲醇＝19∶1)纯化，得到无色蜡状化合物(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(36b)(80mg，收率93%)。
IR(KBr)ν3320，1735，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.38(52H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49-2.43(12H，m)，2.20(2H，t，H＝7.8Hz)，2.31(2H，t，J＝7.8Hz)，2.33(2H，t，J＝7.4Hz)，2.72(1H，dd，J＝8.8，13.6Hz)，2.75(2H，d，J＝6.0Hz)，3.12(1H，dd，J＝3.8，13.6Hz)，3.15-3.29(2H，m)，3.48(1H，dd，J＝3.8，8.8Hz)，4.14(1H，dd，J＝6.0，11.8Hz)，4.35(1H，dd，J＝3.6，11.8Hz)，4.41-4.55(1H，m)，5.09-5.22(1H，m)，6.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.40(1H，t，J＝5.8Hz).
c)向如上获得的化合物36b(80mg)中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(4ml)，将所得混合物在20℃下搅拌4小时。蒸去溶剂得到(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH盐酸盐(36)(74mg，收率100%)，其为白色粉末状产物，m.p.53-56℃。23D-6.0°(c＝0.50，在氯仿中)对C52H89N4O11SCl·2H2O元素分析计算值C，59.49;H，8.93;N，5.34;S，3.05实测值C，59.62;H，8.77;N，5.37;S，3.14IR(KBr)ν3250，1740，1715，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.50(56H，m)，1.50-1.80(6H，m)，1.80-3.55(16H，m)，4.03-4.70(4H，m)，5.10-5.35(1H，m)实施例45制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH盐酸盐(化合物37)按照基本上与实施例44相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(37a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(37b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH盐酸盐(化合物37)。
原料 反应条件 产物a) GC-2 P-18 91mg 37a(179mg) DEPC 49mg (52mg)TEA 33μlDMF 4ml20℃ 90minb) 37a 哌啶 2ml 37b(104mg) 20℃ 30min (31mg)c) 37b 4N HCl乙酸乙酯 37(31mg) 4ml (29mg)20℃ 4.0h化合物 37aIR(KBr)ν3280，1730，1685，1645cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，0.95-1.38(64H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.50-2.40(12H，m)，2.79(2H，d，J＝5.2Hz)，2.86-2.96(1H，m)，3.18-3.32(2H，m)，4.08-4.55(6H，m)，5.18-5.33(1H，m)，5.73-5.85(1H，m)，6.14(1H，d，J＝7.8Hz)，6.40-6.53(1H，m)，7.25-7.45(4H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.78(2H，d，J＝7.0Hz)
化合物 37bIR(KBr)ν3360，3310，1730，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.4Hz)，1.03-1.39(56H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.52-1.72(12H，m)，1.72-2.43(2H，m)，2.20(2H，t，J＝8.0Hz)，2.31(2H，t，J＝7.8Hz)，2.33(2H，t，J＝7.6Hz)，2.73(1H，dd，J＝8.7，13.0Hz)，2.75(2H，d，J＝7.4Hz)，3.11(1H，dd，J＝3.7，13.0Hz)，3.23(2H，dt，J＝7.4，7.4Hz)，3.48(1H，dd，J＝3.7，8.7Hz)，4.14(1H，dd，J＝6.2，12.0Hz)，4.35(1H，dd，J＝3.2，12.0Hz)，4.42-4.56(1H，m)，5.08-5.22(1H，m)，6.15(1H，d，J＝7.8Hz)，7.39(1H，t，J＝7.4Hz)化合物37m.p.61-64℃[α]23+4.2°(c＝0.50，在氯仿中)对C55H104N3O10SCl·2H2O的元素分析计算值C，61.68;H，10.16;N，3.92;S，2.99实测值C，62.02;H，9.33;N，3.73;S，2.64IR(KBr)ν3250，1740，1720，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.50(64H，m)，1.50-1.80(6H，m)，1.80-3.55(16H，m)，4.03-4.70(4H，m)，5.10-5.35(1H，m)实施例46制备(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-氨基)苯甲酰基-Glu-OH盐酸盐(化合物38)a)向化合物P-19(85mg)的哌啶(1.5ml)溶液中加入三氯化磷(0.01ml)。混合物在20℃下搅拌2小时，再加入化合物GC-2(100mg)，接着在20℃下搅拌3小时。向反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%的柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。蒸去溶剂，剩余物用硅胶柱色谱(氯仿∶己烷＝7∶1)纯化，得到无色蜡状化合物(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-氨基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(38a)(107mg，收率84%)。
IR(KBr)ν3300，1730，1685，1660，1640，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.10-1.38(48H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.55-1.83(4H，m)，1.90-2.58(8H，m)，2.75-2.86(2H，m)，3.02(2H，d，J＝6.6Hz)，4.21-4.72(8H，m)，5.24-5.49(1H，m)，5.74-5.86(1H，m)，7.01(2H，d，J＝7.6Hz)，7.32(2H，d，J＝7.6Hz)，7.35-7.87(8H，m)，8.70(1H，br s)b)向如上获得的化合物38a(107mg)中加入哌啶(2ml)，混合物在20℃下搅拌3小时，然后浓缩反应混合物。浓缩物用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝1∶7)纯化，得到无色蜡状产物(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-氨基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(38b)(66mg，收率68%)。
IR(KBr)ν3430，3380，1735，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.6Hz)，1.05-1.37(48H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.52-1.82(4H，m)，1.93-2.53(8H，m)，2.70-4.00(5H，m)，4.05-4.72(3H，m)，5.10-5.24(1H，m)，7.23-7.95(4H，m)，9.71(1H，br s)c)向如上获得的化合物38b(66mg)中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(3ml)，将所得混合物在20℃下搅拌4小时。蒸去溶剂，得到无色粉末状产物化合物38(61mg，收率100%)，m.p.94.0-96.0℃。23D+6.2°(c＝0.50，在氯仿中)对C50H86N3O10SCl·2H2O的元素分析计算值C，60.49;H，9.14;N，4.23;S，3.23实测值C，60.39;H，8.98;N，4.19，S，3.18IR(KBr)ν3400，1750，1630，1610cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.02-1.48(48H，m)，1.48-1.68(4H，m)，2.00-2.85(13H，m)，4.05-5.32(4H，m)，7.40-8.00(4H，m)实施例47制备(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲酰基-Glu-OH盐酸盐(化合物39)按照基本上与实施例44相同的方法制备(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(39a)，(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(39b)和(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲酰基-Glu-OH盐酸盐(化合物39)。
原料 反应条件 产物a) GC-2 P-20 87mg 39a(179mg) DEPC 49mg (146mg)TEA 33μlDMF 4ml20℃ 90minb) 39a 哌啶 3ml 39b(146mg) 20℃ 4.5h (87mg)c) 39b 4N HCl乙酸乙酯(87mg) 4ml 3920℃ 4.0h (78mg)化合物 39aIR(KBr)ν3300，1735，1730，1700，1655，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.6Hz)，1.02-1.84(64H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.84-3.15(13H，m)，4.00-4.73(9H，m)，5.15-5.28(1H，m)，5.80-5.92(1H，m)，6.92-7.13(2H，m)，7.26-7.83(12H，m)，8.53(1H，br s)
化合物 39bIR(KBr)ν3350，1735，1650，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.52-1.76(4H，m)，1.95-2.53(8H，m)，2.75(2H，d，J＝6.6Hz)，2.92(1H，dd，J＝7.8，13.6Hz)，3.11(1H，dd，J＝4.2，13.6Hz)，3.66(1H，dd，J＝4.2，7.8Hz)，4.01-4.24(3H，m)，4.37(1H，dd，J＝3.4，11.8Hz)，4.57-4.62(1H，m)，5.08-5.22(1H，m)，7.00(1H，d，J＝7.6Hz)，7.59(2H，d，J＝8.8Hz)，7.79(2H，d，J＝8.8Hz)，8.19(1H，t，J＝5.6Hz)，8.63(1H，s)化合物 39m.p.100-101℃IR(KBr)ν3400，1735cm-1对C51H96N3O10SCl·H2O的元素分析计算值C，61.44;H，9.91;N，4.41;S，3.22实测值C，61.17;H，9.81;N，4.26;S，3.211H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，0.93-1.47(48H，m)，1.47-1.70(4H，m)，1.70-3.32(16H，m)，3.70-4.60(4H，m)，4.60-4.78(1H，m)，5.17-5.32(1H，m)，7.47-7.90(4H，m)实施例48制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA盐(化合物40)按照基本上与实施例44相同的方法合成(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(40a)，然后制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(40b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA盐(化合物40)。
原料 反应条件 产物a) GC-2 P-21 64mg 40a(150mg) DEPC 35mg (112mg)TEA 44mgDMF 3ml0℃ 1h化合物 40a1H-NMR(CDCl3)δ0.878(6H，t，J＝6.0Hz)，1.247(52H，s)，1.433(9H，s)，1.463(9H，s)，1.465-1.720(6H，m)，1.72-2.15(2H，m)，2.15-2.40(16H，m)，2.785(2H，d，J＝5.8Hz)，2.927(2H，d，J＝6.2Hz)，3.265(2H，m)，4.05-4.55(7H，m)，5.232(1H，br s)，5.825(1H，d，J＝8.2Hz)，6.236(1H，d，J＝8.2Hz)，6.595(1H，br s)，7.366(4H，m)，7.600(2H，d，J＝7.0Hz)，7.766(2H，d，J＝7.0Hz)IR(纯)ν3300，2920，2850，1735，1650，1530，1440，1370，1255，1245，1225，1155cm-1b)将化合物40a(112mg)溶于DCM(0.2ml)中，向该溶液中加入哌啶(2ml)，混合物在20℃下搅拌2小时。减压浓缩反应混合物，使浓缩物吸附在用氨处理的硅胶柱(5g)上，用氯仿洗脱得到无色油状产物化合物40b(83mg，收率89.8%)。
1H-NMR(CDCl3)δ0.878(6H，t，J＝6.0Hz)，1.254(52H，s)，1.467(9H，s)，1.499(9H，s)，1.47-1.75(6H，m)，1.72-2.15(2H，m)，2.15-2.40(10H，m)，2.60-2.80(3H，m)，3.107(1H，dd，J＝3.8Hz，13.6Hz)，3.242(2H，q，J＝6.2Hz)，3.475(1H，dd，J＝4.0Hz，6.8Hz)，4.142(1H，dd，J＝6.0Hz，12.0Hz)，4.358(1H，dd，J＝3.4Hz，11.8Hz)，4.472(2H，m)，5.154(1H，m)，6.90(1H，d，J＝7.6Hz)，7.424(1H，t，J＝7.2Hz)IR(纯)ν3300，2920，2850，1735，1650，1530，1440，1370，1255，1245，1225，1155cm-1c)将化合物40b(83mg)溶于DCM(0.2ml)中，向该溶液中加入TFA(1ml)，混合物在20℃搅拌2小时。向反应混合物中加入甲苯(1ml)，减压下浓缩该混合物。重复该操作得到白色粉末状产物化合物40(83mg，收率100%)，m.p.62-63℃[α]23D+3.4°(c＝0.16，在氯仿中);
1H-NMR(CDCl3-TFA)δ0.879(6H，t，J＝6.6Hz)，1.256(52H，s)，1.567(6H，m)，1.90-2.20(2H，m)，2.374(8H，m)，2.597(2H，t，J＝6.4Hz)，2.744(2H，d，J＝7.0Hz)，3.100(2H，m)，4.130(1H，dd，J＝6.0Hz，12.0Hz)，4.28-4.50(2H，m)，4.650(1H，m)，5.170(1H，m)，7.080(1H，d，J＝7.5Hz)，7.420(1H，br s)IR(KBr)ν3320，3100，2920，2850，1740，1665，1550，1465，1200cm-1
对C51H92N3O12SF3·H2O的元素分析计算值C，58.54;H，9.05;N，4.02;S，3.06实测值C，58.35;H，8.91;N，4.06;S，2.76实施例49制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)5NHCO-Glu-OH TFA盐(化合物41)按照基本上与实施例48相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(41a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(41b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu-OH TFA盐(化合物41)。
原料 反应条件 产物a) GC-2 P-22 83mg 41a(150mg) DEPC 35mg (203mg)TEA 44mgDMF 3ml0℃ 1hb) 41a 哌啶 2ml 41b(203mg) DCM 0.2ml (137mg)20℃ 1.5hc) 41b TFA 1ml 41(137mg) 20℃ 2h (136mg)化合物 41a1H-NMR(CDCl3)δ0.879(6H，t，J＝7.0Hz)，1.254(52H，s)，1.430(9H，s)，1.448(9H，s)，1.727(8H，m)，1.75-2.20(2H，m)，2.325(6H，m)，2.780(2H，d，J＝5.0Hz)，2.944(2H，d，J＝5.2Hz)，3.05-3.50(4H，m)，4.00-4.50(9H，m)，4.860(1H，t，J＝6.0Hz)，5.249(2H，d，J＝8.2Hz)，6.08(1H，br s)，6.710(1H，br s)，7.260-7.55(4H，m)，7.612(2H，d，J＝8.0Hz)，7.767(2H，d，J＝8.0Hz)IR(纯)ν3300，2920，2850，1730，1685，1640，1560，1550，1530，1460，1445，1360，1250，1150，1100，1030cm-1化合物 41b1H-NMR(CDCl3)δ0.879(6H，t，J＝6.2Hz)，1.254(52H，s)，1.439(9H，s)，1.461(9H，s)，1.597(8H，m)，1.75-2.20(2H，m)，2.311(6H，m)，2.745(2H，m)，3.00-3.45(4H，m)，3.483(1H，m)，4.136(1H，dd，J＝6.4Hz，12.4Hz)，4.353(2H，m)，4.700(1H，t，J＝5.2Hz)，5.078(1H，d，J＝7.6Hz)，5.162(1H，br s)，7.440(1H，br s)
IR(纯)ν3350，2920，2850，1730，1640，1560，1460，1450，1390，1360，1250，1260，1150，1100，750，730cm-1化合物 41m.p.44-46℃[α]23D-2.9°(c＝0.415，在氯仿中);
1H-NMR(CDCl3)δ0.880(6H，t，J＝6.2Hz)，1.255(52H，s)，1.591(8H，m)，2.0-2.20(2H，m)，2.302(6H，m)，2.779(2H，m)，3.00-3.45(3H，m)，3.516(2H，m)，3.80-4.25(6H，m)，4.340(2H，m)，5.200(1H，br s)，7.57(1H，br s)，7.710(1H，br s)IR(KBr)ν3400，2920，2850，1740(sh.)，1700，1670(sh.)，1460，1420，1280，1260，1240，1200，1175，1130cm-1对C50H95N4O12SF3的元素分析计算值C，58.11;H，9.27;N，5.42;S，3.10实测值C，58.19;H，8.77;N，5.24;S，2.78实施例50制备(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH盐酸盐(化合物42)按照基本上与实施例44相同的方法制备(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(42a)，(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(42b)和(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH盐酸盐(化合物42)。
原料 反应条件 产物a) GC-2 P-23 106mg 42a(200mg) DEPC 55mg (247mg)TEA 70mgDMF 10ml20℃ 30minb) 42a 哌啶 2ml 42b(243mg) DCM 0.5ml (195mg)20℃ 30minc) 42b 4N HCl乙酸乙酯 4ml 42(112mg) 20℃ 2h (88mg)化合物 42aIR(纯)ν3300，2920，2850，1730，1660，1530，1500，1445，1360，1240，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.40-1.65(4H，m)，1.95-2.50(8H，m)，2.77(2H，d，J＝6.6Hz)，2.90-3.00(2H，m)，4.05-4.55(8H，m)，4.66(1H，m)，5.24(1H，m)，5.78(1H，br)，6.98(1H，br)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.25-7.45(6H，m)，7.58(2H，d，J＝7.4Hz)，7.76(2H，d，J＝7.2Hz)，7.78(2H，d，J＝8.4Hz)化合物 42bIR(纯)ν3350，2920，2850，1730，1650，1535，1520，1500，1460，1450，1360，1250，1150cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.45-1.65(4H，m)，1.73(2H，br s)，1.90-2.50(8H，m)，2.75(2H，d，J＝6.4Hz)，2.81(1H，dd，J＝13.4，8.4Hz)，3.14(1H，dd，J＝13.4，3.8Hz)，3.57(1H，dd，J＝8.4，4.0Hz)，4.14(1H，dd，J＝12.0，6.2Hz)，4.36(1H，dd，J＝12.0，3.2Hz)，4.49(2H，d，J＝6.2Hz)，4.66(1H，m)，5.16(1H，m)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.35(2H，d，J＝8.2Hz)，7.79(2H，d，J＝8.2Hz)，7.83(1H，br)化合物 42m.p.79-80℃[α]20D+15.1°(c＝0.305，在氯仿中);
IR(KBr)ν3450，2920，2850，1730，1710，1690，1670，1640，1630，1620，1560，1540，1500，1460cm-11H-NMR(CDCl3-TFA)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.40-1.65(4H，m)，2.00-3.30(12H，m)，4.00-4.80(6H，m)，5.22(1H，m)，7.00-8.10(6H，m).
对C51H87N3O10S·HCl·H2O的元素分析计算值C，61.95;H，9.17;N，4.25;S，3.24;Cl，3.59实测值C，61.66;H，8.93;N，4.24;S，3.44;Cl，3.79实施例51制备(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH(化合物43)按照基本上与实施例44相同的方法制备
(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT)-N-(t-丁氧基羰基甲基)氨甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(43a)，和(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH(化合物43)。
原料 反应条件 产物a) GC-2 P-24 62mg 43a(100mg) DEPC 30mg (134mg)TEA 48mgDMF 6ml20℃ 1hb) 43a TFA 1ml 43(110mg) DCM 0.5ml (70mg)化合物 43aIR(纯)ν2920，2850，1730，1650，1360，1250，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.40(1/2x9H，s)，1.42(9H，s)，1.44(1/2x9H，s)，1.49(9H，s)，1.45-1.70(4H，m)，2.00-2.50(8H，m)，2.65-3.20(4H，m)，3.70-4.50(8H，m)，4.60-4.80(3H，m)，5.17(1H，m)，5.70-5.80(1H，m)，7.00-7.10(1H，m)，7.25-7.45(6H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.75-7.90(4H，m)化合物 .43m.p.58-59℃[α]20D-12.6°(c＝0.25，在氯仿中);
IR(KBr)ν2921，2852，1739，1640，1540，1465，1450，1250，1220，1160cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ0.87(6H，t，J＝6.6Hz)，1.25(48H，s)，1.40-1.70(4H，m)，2.00-2.50(8H，m)，2.60-3.00(4H，m)，3.90-4.50(8H，m)，5.17(1H，m)，6.27(1H，m)，7.15-7.45(6H，m)，7.50-7.85(6H，m)对C68H100N3O14S·H2O的元素分析计算值C，66.21;H，8.33;N，3.41;S，2.60实测值C，66.44;H，8.32;N，3.21;S，2.66实施例52制备(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH 2TFA盐(化合物44)按照基本上与实施例6相同的方法制备(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(44a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(44b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH2TFA盐(化合物44)。
原料(g) 反应条件 产物(g)a) GC-2 P-25 1.01mg 44a(1.97) HONB 435mg (2.24)DIC 380μlDMF 30ml20℃ 13hb) 44a 哌啶 2.0ml 44b(2.00) DCM 20ml (1.23)20℃ 2h硅胶(氯仿-甲醇)50:1c) 44b TFA 6.0ml 44(0.25) 20℃ 2h (0.23)化合物44a[α]25D-10.0°(c＝0.66，在氯仿中)对C72H117N5O13S的元素分析计算值C，66.89;H，9.12;N，5.42;S，2.48实测值C，67.10;H，9.37;N，5.18;S，2.49化合物44b[α]25D-15.2°(c＝0.56，在氯仿中)对C57H107N5O11S的元素分析
计算值C，63.95;H，10.07;N，6.54;S，3.00实测值C，63.70;H，10.20;N，6.50;S，2.99化合物44[α]25D+5.5°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)对C48H91N5O9S·2TFA的元素分析计算值C，54.67;H，8.21;N，6.13;S，2.81实测值C，54.29;H，8.19;N，6.47;S，3.06实施例53制备钠盐1)在40℃下将化合物12(5.0g)溶于20%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氢钠水溶液(5L)中，在溶液的PH值调节为9.5后，溶液在Diaion HP-20(1.0L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上进行色谱分离，其中Diaion HP-20已事先用20%(v/v)含水乙腈溶液使其膨胀。树脂用20%(v/v)含水乙腈溶液(5L)洗涤，接着用40%(v/v)含水乙腈溶液(4L)和60%(v/v)含水乙腈溶液(5L)展开。浓缩洗脱液，然后冷冻干燥得到粉末状产物。将粉末状产物悬浮在丙酮(150ml)中，过滤收集不溶物质，得到为白色粉末状物质化合物12的二钠盐(4.5g)
FAB-MS(M+H)＝959对C47H84N4O11SNa2·3H2O的元素分析计算值C，55.71;H，8.95;N，5.53;S，3.16Na，4.54实测值C，55.90;H，9.39;N，5.34;S，3.16;Na，4.782)在40℃将化合物19(11.0g)溶于15%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氢钠水溶液(5L)中，在溶液的PH值调节为9.5后，在Diaion HP-20(1.0L，Mitsubish Kasei公司，日本)上对溶液进行色谱分离，其中Diaion HP-20已事先用15%(v/v)含水乙腈溶液膨胀。树脂用15%(v/v)含水乙腈溶液(5L)洗涤，接着用40%(v/v)含水乙腈溶液(12L)展开。浓缩洗脱液，然后冷冻干燥得到粉末状产物。将该产物悬浮在丙酮(200ml)中，过滤收集不溶物，得到化合物23的二钠盐(9.9g)，其为白色粉末状物质。
FAB-MS(M+H)＝902对C45H81N3O10SNa2·3H2O的元素分析计算值C，56.52;H，9.17;N，4.39;S，3.35;Na，4.81实测值C，56.61;H，9.14;N，4.26;S，3.35;Na，5.253)在40℃下将化合物23(14.0g)溶于5%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氢钠水溶液(7L)中。将溶液的PH值调节为9.5后，在Diaion HP-20(1.4L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上进行色谱分离，其中Diaion HP-20已事先用5%(v/v)含水乙腈溶液使其膨胀。树脂用5%(v/v)含水乙腈溶液(7L)洗涤，接着用40%(v/v)含水乙腈溶液(8.5L)展开。浓缩洗脱液，然后冷冻干燥得到粉末状产物。将该产物悬浮在丙酮(600ml)中，过滤收集不溶物得到化合物23的三钠盐(11.5g)，其为白色粉末状物质。
FAB-MS(M+H)＝1053对C50H87N4O13SNa3·4H2O的元素分析计算值C，53.37;H，8.51;N，4.98;S，2.85;Na，6.13实测值C，53.48;H，8.81;N，4.89;S，3.03;Na，6.04)在40℃将化合物25(8.0g)溶于5%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氢钠水溶液(4L)中，在溶液的PH值调节为9.5后，在Diaion HP-20(1.5L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上对溶液进行色谱分离，其中Diaion HP-20事先已用5%(v/v)含水乙腈溶液使其膨胀。树脂用5%(v/v)含水乙腈溶液(7.5L)洗涤，接着用40%(v/v)含水乙腈溶液(6L)展开。浓缩洗脱液，然后冷冻干燥得到白色粉末状产物。将该产物悬浮在丙酮(200ml)中，过滤收集不溶物质，得到化合物25的三钠盐(7.0g)，其为白色粉末状物质。
FAB-MS(M+H)＝1053对C50H87N4O13SNa3·2.5H2O的元素分析
计算值C，54.68;H，8.44;N，5.10;S，2.92;Na，6.28实测值C，54.48;H，8.64;N，5.09;S，2.79;Na，6.135)在40℃下将化合物7(200mg)溶于30%(v/v)甲醇-0.5%(w/v)碳酸氢钠水溶液(300ml)中，在溶液的PH值调节为9.5后，在Diaion HP-20(50ml，Mitsubishi Kasei公司，日本)上对溶液进行色谱分离，其中Diaion HP-20事先已用30%(v/v)含水甲醇溶液膨胀。树脂用30%(v/v)含水甲醇溶液(200ml)和50%(v/v)含水甲醇溶液(200ml)洗涤，接着用80%(v/v)含水甲醇溶液(600ml)展开。浓缩洗脱液，然后冷冻干燥得到白色粉末状产物。将该粉末状产物悬浮在丙酮(8ml)中，过滤收集不溶物，得到化合物7的二钠盐(75mg)，其为白色粉末状物质。
对C49H87N5O12SNa2·2.5H2O的元素分析计算值C，55.45;H，8.74;N，6.60;S，3.02;
实测值C，55.47;H，8.55;N，6.48;S，3.11;
上面实施例中所得到的化合物的结构式列在表1中。
表1化合物 实施例 结构式编号 编号1 6 (2R,6S)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH2 7 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Thr-Thr-OH3 8 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH4 9 (2S,6S)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH5 10 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH6 11 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH7 12 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-
Glu-OH8 13 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH9 14 (2R,6S)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH10 15 (2R,6S)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH11 16 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D--Glu-OH12 17 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH13 18 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly--OH14 19 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH15 20 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-OH16 21 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双
(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH17 22 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D--Glu-OH18 23 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH19 24 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu--OH20 25 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-D-Glu-OH21 26 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Asp-OH22 27 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-D-Asp-OH23 28 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH24 29 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D--Glu-OH25 30 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-
OH26 31 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH27 32 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-D-Glu-OH28 33 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH29 34 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH30 36 (2R,6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH31 37 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH32 38 (2R,6R)-2-乙酰氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D--Glu-OH33 39 (2R,6R)-2-己酰氨基-6-己酰氧基-7-(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH
34 42 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双-(SetO)-4-THT-Gly-Glu-GluOH35 43 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH36 44 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH盐酸盐37 45 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH盐酸盐38 46 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-氨基)苯甲酰基-Glu-OH盐酸盐39 47 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲酰基-Glu-OH盐酸盐40 48 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA 盐41 49 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu-OH TFA 盐
42 50 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH 盐酸盐43 51 (2R,6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH44 52 (2R,6R)-2-氨基-6,7-双(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH 2TFA 盐化合物1-15在高效液相色谱中的保留时间在下面给出柱YMC-Pack A-602 NH2(Yamamura Chemical Laboratories，日本)流动相85%甲醇/0.02M磷酸盐缓冲液(PH4.8)流速1.0ml/min.
检测方法UV，214nm保留时间(分钟)化合物2，17.1; 化合物1，17.3;
化合物4，15.8; 化合物3，15.9化合物7，20.7; 化合物5，18.5化合物9，20.7; 化合物8，19.7化合物12，19.4; 化合物10，19.8化合物15，18.4; 化合物14，9.4
化合物(Ⅰ)的生物活性在下面描述。
实施例1前述实施例中制备的化合物(Ⅰ)对小鼠骨髓细胞增生的促进作用见表2。
表 2对小鼠骨髓细胞增生的促进作用化合物 最小有效浓度编号 (MEC,ng/ml)*11 0.6252 <0.1568 <0.15612 <0.15614 0.15636 <0.15644 <0.156＊1 假定没有加入实验化合物的实验组的骨髓增生为1，当观察到骨髓增生为原来的1.3倍或更多时，记录下此时的化合物浓度。
测定方法向含有2×106/ml BALB/c小鼠骨髓细胞、2mML-谷氨酰胺、20μg/ml庆大霉素(Flow Laboratories Inc.，苏格兰)、10%胎儿腓肠血清(BW，USA)的RPMI1640培养介质[Bio-Wittaker Inc.，(简称BW)，USA]中加入适当浓度的实验化合物，该培养物在含有5%二氧化碳的空气中于37℃下保温3天，接着用MTT归纳法[Tada等人，Journal of Jmmunological Methods vol.93.P，157，1986]测定骨髓细胞的增生情况。
实施例2化合物(Ⅰ)增加小鼠脾细胞数目的作用见表3。
表 3增加脾细胞数目的作用药物剂量(mg/Kg/天) 脾细胞数(%)*1仅有环磷酰胺 33.4环磷酰胺+(化合物8) 0.1 78.6＊1 在腹膜内施以生理盐水溶液(含有2%阿拉伯树胶)的小鼠的脾细胞数定为100%。
测定方法以200mg/Kg的剂量用溶解在生理盐水溶液中的环磷酰胺对BALB/C小鼠进行腹膜内注射。从第三天开始，连续4天用悬浮在含有2%阿拉伯树胶的生理盐水溶液中实验化合物对小鼠进行腹膜内给药。在完成给药的第二天，数出脾的锥虫蓝发色细胞的数目。
实施例3化合物(Ⅰ)对增加小鼠白细胞数目的作用见表4。
表 4增加白细胞数目的作用化合物剂量(mg/Kg/天) 白细胞数(%)*1编号2 0.063 1027 0.031 12914 0.13 118＊1 给出的数值是相对于下面小鼠白细胞(假定为100%)的百分数，这些小鼠以相对于20g体重0.2ml的剂量口服生理盐水溶液(代替环磷酰胺)，然后从口服的第二天开始，连续5天、每天一次用5%葡萄糖皮下给药。顺便提一下，本实验自始至终，小鼠白细胞数目的平均值和标准偏差为41±11%，这些小鼠以150mg/Kg的剂量口服环磷酰胺，然后从第二天开始，连续5天、每天一次用相对于20g体重0.2ml5%葡萄糖的剂量皮下给药。
测定方法年龄为六周的雌CDF1/Crj小鼠(5只/组)用于该实验。以150mg/Kg的剂量使每只小鼠口服溶解在生理盐水溶液中的环磷酰胺。从第二天起，以下列剂量用悬浮在5%葡萄糖中的化合物每天一次(共5天)对每只小鼠皮下给药。完成给药的第二天，用EDTA处理的玻璃毛细管从周静脉中取出100μl外围血液，然后用自动细胞分析仪(Sysmex K-2000，Toa Medical Electronics，日本)数出白细胞数目。
实验例4前述实施例中制备的化合物(Ⅰ)促进巨核细胞群生长的作用见表5。
表 5实验化合物 浓度 巨核细胞群形成编号 (ng/ml) 的程度*112 0.4 1.824 2.01＊1 没有加入化合物(Ⅰ)的实验组的巨核细胞的数目定为1。
测定方法根据血浆凝块方法[Mizoguti等人，ExperimentalHematology Vol.7，PP，345-351，1979]研究巨核细胞群的形成。
以适当的浓度向含有5×106/ml BALB/c小鼠骨髓细胞、20%胎儿腓肠血清(BW，USA)、1%血清白蛋白、0.026mg/mlCaCl2、0.02mg/mlL一天冬酰胺、10%柠檬酸钠牛血浆的NCTC-109培养介质(Gibco BRL Inc.USA)中加入实验化合物，然后彻底混合。将0.4ml上述培养液的等分试样放置在35×10mm塑料盘(A/S Nunc，丹麦)的中央使其结块。向培养盘中加入0.6ml含有10%胎儿腓肠血清的α-MEM培养介质(BW，USA)，然后使培养液在含有5%CO2的空气中于37℃下保温7天。保温后，除去血浆结块周围的培养介质，向血浆结块表面放置一小块滤纸使其除去水分。然后，将1-2滴5%戊二醛滴在血块上面的滤纸上。10分钟后，撤去滤纸，并用0.1M磷酸盐缓冲液(PH6.0)洗涤血块。用乙酰胆碱酯酶(下文缩写为AchE)使血块染色。向含有碘化乙酰硫胆碱(30mg)的0.1M磷酸盐缓冲液(45ml)中依次加入30mM硫酸铜水溶液(6ml)和0.1M柠檬酸钠水溶液(3ml)以及5mM铁氰化钾水溶液(6ml)。每次得到的溶液都取出2ml加入盘中。在33℃下放置4-6小时后，数出巨核细胞群的数目。
实验例5前述实施例中制备的化合物(Ⅰ)促进AchE阳性细胞生长的作用见表6。
表 6实验化合物浓度(ng/ml) AchE阳性细胞活性程度*1编号7 0.1 1.5112 0.1 1.4323 0.1 1.67＊1没有加入实验化合物(Ⅰ)的实验组的AchE活性定为1。
测定方法根据荧光法(Ishibashi等人，Proceedings of the National Academy of Science U.S.A.，Vol.86，PP.5953-5957，1989)研究AchE活性。
将没有粘连的BALB c小鼠骨髓细胞(1×106细胞/ml)悬浮在含有1% Neutridoma-SP(Boheringer Mannhaim，德国)的Dulbecco介质(Gibco BRL Inc，USA)的Iscove变体中。25μl适当浓度的实验化合物溶液在96孔的平板中接种，向每个穴中的实验化合物溶液加入100μl非粘连骨髓细胞悬浮液。在37℃下保温5天后，向穴中加入25μl6%戊二醛水溶液。在4℃下静置30分钟后，该混合物在5℃下离心(850×g)，并弃去上清液。用100μl磷酸盐缓冲盐水洗涤孔中的沉淀后，向沉淀加入含有0.2%聚氧乙烯-10-辛基苯基醚(POPE)、1mM乙二胺四乙酸盐(EDTA)、0.12M氯化钠和50mMN-2-羟基乙基哌啶-N′-2-乙磺酸(HEPES)的100μl缓冲液(PH7.5)。再加入10μl碘化乙酰硫胆碱水溶液(浓度1.6mg/ml)。在33℃下保温3小时后，分出10μl得到的溶液。向该溶液中加入10μl10.4mM7-二乙氨基-3-(4′-马来酰亚氨基苯基)-4-甲基香豆素水溶液和含有0.2%POPE、1mMEDTA和50mM乙酸钠的100μl缓冲液(PH5.0)，并用荧光计测定荧光发射(激发波长365nm，荧光波长450nm)。
实验例6毒性实验没有发现以100mg/Kg剂量用化合物3腹膜内给药的小鼠死亡。
实施例7毒性实验没有发现以100mg/Kg剂量用化合物7的二钠盐皮下给药的小鼠死亡。
化合物(Ⅰ)或其盐是低毒性的，可以完全使用。
从前面的实验例可以清楚地看出，化合物(Ⅰ)或其盐对改善造血机能具有出色的活性，可用作治疗或预防由于放射治疗或化学治疗哺乳动物(如狗、猫、牛、马、猴、人等)的癌症引起的白细胞减少症的药物，可在骨髓移植情况下用作刺激造血的试剂，可用作具有增加白细胞作用的增强免疫试剂，以及用作血小板减少症的治疗试剂。
制剂例1将实施例8制得的化合物2(4g)和甘露醇(50g)溶于含有聚乙二醇400(30%w/w)的无菌蒸馏水(1l)中，在无菌条件下过滤上述溶液。然后将1ml该溶液装在一只安瓿(每只装1ml)中，从而制得每只安瓿含有4mg化合物2的静脉注射针剂。
制剂例2将实施例53制得的化合物23的三钠盐(40mg)和甘露醇(50g)溶于含有聚乙二醇400(30%w/w)的无菌蒸馏水(1l)，在无菌条件下过滤上述溶液，然后将1ml该溶液装在一只安瓿(每只装1ml)中，从而制得每只安瓿含有40μg化合物23的三钠盐的静脉注射针剂。
权利要求
1.下列通式的化合物或其盐
其中每个R1和R2是氢或脂酰基，A是可被保护的氨基，X是由1-10个氨基酸残基组成的氨基酸序列，这些氨基酸残基中至少有一个氨基酸残基带有增加水溶性的基团。
2.根据权利要求1的化合物，其中A是氨基。
3.根据权利要求1的化合物，其中A是可被取代氧羰基取代的氨基。
4.根据权利要求1的化合物，其中带有增加水溶性基团的氨基酸残基是酸性氨基酸残基。
5.根据权利要求1的化合物，其中带有增加水溶性基团的氨基酸残基是碱性氨基酸残基。
6.根据权利要求1的化合物，其中脂酰基是C2-30脂酰基。
7.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2中的至少一个基团是脂酰基。
8.根据权利要求1的化合物，其中R1是脂酰基。
9.根据权利要求1的化合物，其中R2是脂酰基。
10.根据权利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰基-甘氨酰-谷氨酰-谷氨酸。
11.根据权利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰基-甘氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
12.根据权利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰基-谷氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
13.根据权利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-双(十六烷酰氧基)-4-硫杂庚酰基-甘氨酰-D-谷氨酸。
14.一种具有增加白细胞作用的刺激免疫组合物，其包括权利要求1所要求保护的化合物或其盐。
15.根据权利要求14的刺激免疫组合物，其中R1和R2中的至少一个基团是脂酰基。
16.治疗血小板减少症的组合物，其包括权利要求1中所要求保护的化合物或其盐。
17.一种制备权利要求1所要求保护的化合物或其盐的方法，包括使下式的化合物或其盐进行去保护基反应
其中每个R1和R2是氢或脂酰基，R3是保护基，A是可被保护的氨基，X′是由1-10个任意保护的氨基酸残基组成的氨基酸序列，这些残基中至少有一个任意保护的氨基酸残基带有增加水溶性基团。
全文摘要
上式的化合物或其盐。具有出色的改善造血机能失调的活性并可用作刺激免疫试剂或治疗血小板减少症的药剂。通式中每个R
文档编号C07K5/103GK1094731SQ9312175
公开日1994年11月9日 申请日期1993年12月28日 优先权日1992年12月28日
发明者谷田清一, 飞田恒明, 胁舛光广, 原田节夫, 幸重浩一 申请人:武田药品工业株式会社

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