商标分类 
商标转让 
您当前的位置： 黄花倒水莲总皂苷及其药物组合物与制备方法
2021-02-01 13:02:17|
427|
起点商标网 专利名称：黄花倒水莲总皂苷及其药物组合物与制备方法
技术领域：
本发明涉及植物药黄花倒水莲有效部位及其提取分离方法，以及含有黄花倒水莲有效部位的药物组合物，具体为从黄花倒水莲中提取分离有降脂及心血管活性的有效部位，并制备成药物组合物。
背景技术：
黄花倒水莲是远志科远志属植物黄花倒水莲(Polygala fallax Hemsl.[PaureocaudaDunn.])的干燥根，为广西民间常用药。主产江西、湖南、广东、广西和云南，生于海拔1150-1650m的山谷林下，水旁阴湿处(参见中国科学院中国植物志，第四十三卷，第三分册.北京科学出版社，1997151-152.)。本品味甘、微苦，平。具有补益，强壮，祛湿，散瘀功效，主治虚弱虚肿，急慢性肝炎，腰腿酸痛，跌打损伤。黄胜光等报道了黄花倒水莲治疗高血脂症30例的临床观察(参见湖南中医杂志，1999，15(3)6-7)，但均未涉及黄花倒水莲具降脂作用及疗效的物质基础。
发明内容
本发明要解决的技术问题是如何以生物活性为导向，对黄花倒水莲的降脂活性进行有效部位的筛选，并研究有效部位的化学成分，以及含有该有效部位的药物组合物。
要解决的技术问题还包括研究黄花倒水莲的降脂有效部位可工业化生产的提取分离方法，其不但要求工艺相对简单，而且要达到注册药品规定的含量标准，同时要保证质量的稳定。因为只有含量符合标准才能达到临床疗效，质量稳定才能保证疗效稳定。
为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案。
一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷，其特征在于按如下方法制备将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
所述黄花倒水莲总皂苷的制备方法是将黄花倒水莲水提取液，上D101或AB8型号的大孔树脂柱，分别用水及30-40％乙醇洗脱后，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。而且，本发明是将黄花倒水莲水提取液，不经过浓缩，直接上树脂柱。
所述黄花倒水莲总皂苷的制备方法，用树脂柱分离时，上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计2～1∶1。用树脂柱分离时，较好的方式是上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计1.5∶1；收集65％乙醇洗脱液。
所述黄花倒水莲总皂苷更为理想的制备方法是取黄花倒水莲粗粉，加水浸泡3小时，提取3次，三次的加水量分别为10，8，6倍量，三次的提取时间分别为1.5，1.5，1小时；将黄花倒水莲水提取液，直接上D101大孔树脂柱，先用水洗树脂柱，再用40％乙醇洗，继用65％乙醇洗脱，收集65％乙醇部位，真空回收溶剂后，得黄花倒水莲总皂苷。
一种用于降脂的药物组合物，其中含有治疗有效量的前述任一项的黄花倒水莲总皂苷和药学上可接受的载体。
前述任意一项的黄花倒水莲总皂苷，在制备降脂药物中的应用。
下面分别详细介绍黄花倒水莲有效部位的筛选与总皂苷提取工艺研究。
一、黄花倒水莲有效部位的筛选本发明以生物活性为导向，对黄花倒水莲的降脂活性进行有效部位的筛选。从黄花倒水莲(PAD)水提物中分离出5个部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)，选用正常及腹腔注射75％蛋黄溶液形成的急性小鼠高脂血症模型进行调脂活性部位筛选研究。
Fr.1(12mg/kg)能显著升高高脂模型小鼠血清中TC含量，而对正常小鼠血清中TC含量与高脂模型小鼠肝中TC含量无明显作用。
Fr.2(44mg/kg)能显著降低正常小鼠血清中TC的含量，而升高高脂模型小鼠血清中TC含量，对高脂小鼠肝中TC含量也有一定的升高作用。
Fr.3(50mg/kg)部位能显著降低正常小鼠血清中TC的含量，也均能显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量P＜0.05。对高脂小鼠血清中TC含量无明显影响。
Fr.4(50mg/kg)部位可以极显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量，同时也对高脂模型小鼠肝血清中TC含量以及正常小鼠血清中TC含量也有一定的降低作用。其可能机理是抑制肝中TC的合成，或加速肝脏对TC代谢，排泄，生物利用。
Fr.5(4.8mg/kg)能显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量P＜0.05，对高脂模型小鼠血清中TC含量却能升高。而对正常小鼠血中TC含量无明显作用。
PAD调脂作用机理比较复杂，各部位可能是通过不同的调脂途径而起作用并且相互影响。其中Fr.4部位为PAD调节血脂的主要有效部位。
实验目的利用正常及腹腔注射75％蛋黄溶液形成的急性小鼠高脂血症模型筛选PAD调节血脂的有效部位，研究考查PAD各部位调脂作用，为开发二类新药及进一步深入研究提供实验依据。
受试药物黄花倒水莲水提物(简称PAD)和提取部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)提供单位中国药科大学中药复方研究室，批号20010805，配制方法为将各药物溶解于蒸馏水，配制成所需的浓度，小鼠ig 0.1ml/10g、大鼠ig1ml/100g。
血脂康(简称XZK)提供单位北京大学维信生物科技有限公司，批号20010203，规格为2g/胶囊。
总胆固醇(TC)试剂盒提供单位上海荣盛公司，批号20011103。
昆明种小鼠随机分组。总胆固醇(TC)试剂盒规格100ml/盒试验动物昆明种小鼠，雄性，体重18-22g，由青龙山饲养场提供。
黄花倒水莲水提物(简称PAD)和提取部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)的制备工艺 造模方法与TC测定连续给药5d，正常组和模型组分别给等量蒸馏水，第5d给药后禁食20hr，用毛细管经眼眶取血，在4℃下放置1hr，然后3000rpm离心15min，再将血清吸出测定TC含量，考查药物对正常小鼠的作用。第7d继续给药或水，第9d起连续禁食16hr后给药或水，2hr后，腹腔注射新鲜配制的75％蛋黄溶液0.5ml/只，造成小鼠高脂血症模型，造模后20hr内用毛细管经眼眶取血，测TC含量。然后将小鼠脱颈椎处死取肝脏，用肝左叶部分(200mg)，加抽提液(乙醇∶丙酮＝1∶1)2ml，在匀浆器中匀浆。匀浆液置冰箱4℃下12hr后离心(3000rpm)15min，取上清液，待测(参见杜冠华(Du GH)译H.G沃格尔编药理学实验指南-新药发现和药理学评价[M]科技出版社2001.785-787.)。
分组与给药剂量取90只雄性昆明种小鼠，标准体重，随机分成10组。正常组、模型组、阳性对照组(XZK 180mg/kg)、水提物组(733.5mg/kg)、Fr.1部位组(12mg/kg)、Fr.2部位组(44mg/kg)、Fr.3部位组(50mg/kg)、Fr.4部位组(50mg/kg)、Fr.5部位组(4.8mg/kg)。按1.项进行实验。
对正常小鼠血清中TC含量的影响由表1.可见Fr.2、Fr.3、Fr.4部位均能降低正常小鼠血清中TC含量。
表1.药物对正常小鼠血清中TC含量的影响(X±SD n＝10)组别剂量Content of TC in serum 变化率％(mg/kg) (mg/ml)正常组0.9193±0.1404XZK组180.00.8813±0.0580 -4.13水提物组 733.50.9295±0.1356 1.11Fr.1部位组 12.0 0.8980±0.9012 -2.32Fr.2部位组 44.0 0.7708±0.1239ΔΔ-16.15Fr.3部位组 50.0 0.7949±0.05880ΔΔ-13.53Fr.4部位组 50.0 0.7935±0.1792ΔΔ-13.68Fr.5部位组 4.8 0.9140±0.2632 -0.58Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01VS 正常组对高脂小鼠血清中TC含量的影响表2.可见小鼠高脂模型造模成功(p＜0.01)。XZK、Fr.4部位能降低TC含量，Fr.3部分也有一定的降低TC含量的趋势。表2.药物对高脂模型小鼠血清中TC含量的影响(X±SD n＝10)组别 剂量 Content of TC in serum 变化率％(mg/kg) (mg/ml)正常组 1.2762±0.02508138.46模型组 3.0432±0.01284ΔΔXZK组 1802.4092±0.8468*-20.83水提物组 733.5 1.7801±0.1883**-41.51Fr.1部位组12 3.1239±0.8337 2.65Fr.2部位组44 3.1161±0.5802 2.40Fr.3部位组50 2.4454±0.9406 -19.64Fr.4部位组50 2.1039±0.6332**-30.86Fr.5部位组4.83.1143±0.8352 2.34Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组，*p＜0.05，**p＜0.01 VS模型组表3.药物对高脂模型小鼠肝中TC含量的影响(X±SD n＝10)组剂量Content of TC in serum变化率％(mg/kg) (mg/mg)正常组0.005156±0.000706模型组0.006052±0.000582ΔΔ17.38XZK组 180 0.005354±0.000511**-11.53水提物组 733.5 0.005794±0.000552 -4.26Fr.1部位组12 0.005910±0.000476 -2.35Fr.2部位组44 0.006488±0.000506 7.20Fr.3部位组50 0.005368±0.000709*-11.30Fr.4部位组50 0.005309±0.000624*-12.28Fr.5部位组4.8 0.005117±0.000568**-15.45Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组，*p＜0.05，**p＜0.01 VS模型组对高脂模型小鼠肝中TC含量的影响由表3.可见小鼠急性高脂模型肝脏中TC显著升高(P＜0.05)。XZK能显著降低肝中含量(P＜0.05)；Fr.3、Fr.4、Fr.5也均能显著降低TC含量(P＜0.05)。水煎液有一定的降低作用(P＜0.05)。
实验结果(见表4.)表明PAD调脂作用机理比较复杂，各部位可能通过不同的调脂途径而起作用并且相互影响。其中Fr.4部位可能是PAD调节血脂的主要有效部位。
Fr.4(50mg/kg)部位可以极显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量，同时也对高脂模型小鼠肝血清中TC含量以及正常小鼠血清中TC含量也有一定的降低作用。其可能机理是抑制肝中TC的合成，或加速肝脏对TC代谢，排泄，生物利用。
表4.PAD各部位对TC含量的影响的结果分析组别 正常小鼠高脂小鼠血清中TC的含量血清中TC含量 肝中TC含量XZK 无明显作用 显著降低 显著降低水煎液 无明显作用 极显著降低降低Fr1部位 无明显作用 一定升高作用 无明显作用Fr.2部位 显著降低 一定升高作用 一定升高作用Fr.3部位 极显著降低 无明显作用显著降低Fr.4部位 降低 极显著降低显著降低Fr.5部位 无明显作用 一定升高作用 显著降低二、总皂苷提取工艺研究1、水提取后，合并三次水提取液，过滤或离心除去杂质，过D101(HP20，AB8)大孔树脂，上样量为药材(重量)∶大孔树脂(体积)为1.5∶1，待树脂充分吸附皂苷后，用蒸溜水洗，去除水溶性杂质，再用35-40％乙醇洗，进一步去除杂质，继用60-70％乙醇洗涤脱，收集60-70％乙醇部位，以黄花倒水莲中Tenuifolin为对照品，测定总皂苷含量，黄花倒水莲总皂苷含量达50％以上。
2、曾用不同浓度的醇溶液进行提取，醇提取物与水提取物用高脂血症模型小鼠进行降脂作用的药效学观察和比较，结果表明两者药效学无明显差异。
3、将醇提物过大孔树脂，由于醇提物提出的脂溶性成分较多，在大孔树脂上有极细的沉积物，致使提取液不能顺利被通过和吸附，所以后来采用水提工艺进行提取黄花倒水莲总皂苷。
4、在水提工艺中还进行了提取液的浓缩后，过大孔树脂的试验，结果表明，水提液浓缩后，再上大孔树脂，总皂苷的得率及含量均明显下降1)投料150kg，按最佳水提工艺提取，水提液浓缩至药材(重量)∶提取液(体积)1∶2，浓缩液过大孔树脂，经上述分离纯化工艺，总皂苷得率为0.46％；2)投料150kg，最佳水提工艺提取，水提液浓缩至药材(重量)∶提取液(体积)1∶2，浓缩液喷雾干燥成药粉，药粉溶于水后再过大孔树脂，经上述分离纯化工艺，总总皂苷得率为0.5％3)同样的药材，按前述1项下(即本发明的制备方法)所述提取，分离，总皂苷得率为2-2.3％，经研究可能是由于黄花倒水莲皂苷酸性所致，在加热浓缩过程中皂苷类成分不断被破坏而引起了皂苷得率和含量的下降。
具体实施例方式
实例1黄花倒水莲总皂苷的制备取黄花倒水莲150kg，粉碎成粗粉，加水浸泡3小时，采用药材重量10倍的去离子水煎煮三次，提取时间分别为1.5小时。合并三次水提取液，过滤或离心除去杂质，过HP20大孔树脂，上样量为药材(重量)∶大孔树脂(体积)为2∶1，待树脂充分吸附皂苷后，用500L蒸溜水洗，去除水溶性杂质，再用400L 40％乙醇洗，进一步去除杂质，继用500L 65％乙醇洗涤脱，收集65％乙醇部位，真空回收乙醇，真空干燥提取物，得黄花倒水莲总皂苷3.6kg(得率2.3％)以黄花倒水莲中Tenuifolin为对照品，比色法测定总皂苷含量，黄花倒水莲总皂苷含量达50％。(总皂甙含量测定方法参见刘友平，万德光，刘涛等；分光光度法测定不同产地远志总皂苷的含量《成都中医药大学学报》2000，23(1)26-28，下同)。
实例2黄花倒水莲总皂苷的制备取黄花倒水莲150kg，粉碎成粗粉，加水浸泡3小时，提取3次，三次的加水量分别为10，8，6倍量，三次的提取时间分别为1.5，1.5，1小时。
合并三次水提取液，过滤或离心除去杂质，过D101大孔树脂，上样量为药材(重量)∶大孔树脂(体积)为1.5∶1，待树脂充分吸附皂苷后，用400L蒸溜水洗，去除水溶性杂质(用斐林试剂测定，至无糖反应)，再用300L 40％乙醇洗，进一步去除杂质，继用400 65％乙醇洗涤脱，收集65％乙醇部位，真空回收乙醇，真空干燥提取物，得黄花倒水莲总皂苷3kg(得率2％)，以黄花倒水莲中Tenuifolin为对照品，比色法测定总皂苷含量，黄花倒水莲总皂苷含量达60％。
实例2总皂苷部位的调脂作用仪器与试药Beckman DU640核酸蛋白质分析仪，舒降之(SJZ)由杭州默沙东提供；TC、TG、LDL-C和HDL-C试剂盒为北京中生公司产品。MDA和SOD试剂盒为南京建成公司产品。实施1中制备的黄花倒水莲总皂苷(Total Saponins of PAD简称PTS)，临用前用水稀释。
SD雄性大鼠，180g-220g，由青龙山饲养场提供，动物合格证号SCXK(苏)2001-0010。
实验方法(参见佟继铭(Tong XM)刘玉玲(Liu YL)符景春(Fu JC).黄芩茎叶总黄酮调血脂作用研究[J].中草药(Chin Trad and Herb Drugs)，2000.31(3)196-199；蔡秀成(CaiXC)郭英(Guo Y)阎雁(Yan Y).琉璃苣油对脂质代谢和脂质过氧化的影响[J].中国药理学通报(Chin Pharm Bull)1996，12(6)551-553；杜冠华(Du GH)译H.G沃格尔编药理学实验指南-新药发现和药理学评价[M]科技出版社2001.785-787；.赵水平(Zhao SP)临床血脂学[M]湖南科学技术出版社1997，357)高脂饲料配方1.5％胆固醇、0.5％牛胆盐、0.2％甲基硫氧嘧啶、10％猪油、87.8％基础饲料。
造模方法雄性SD大鼠正常饲料喂养一周，测定血清TC含量，根据TC含量和体重进行分组正常对照组、模型对照组、阳性对照组(舒降之10mg/kg SJZ)、PTS低剂量组(25mg/kg)、中剂量组(50mg/kg)、高剂量组(100mg/kg)。预防性给药时除正常对照组外其余各组大鼠连续给高脂饲料造模同时各给药组连续给药，21d后改用正常饲料，并继续给药14d，正常对照组、模型对照组分别给等量蒸馏水。治疗性给药时除正常对照组外其余各组大鼠连续给高脂饲料造模，21d后停止造模改用正常饲料，同时各给药组连续给药14d，正常对照组和模型对照组分别给等量蒸馏水。
预防性给药60只大鼠随机分成6组每组10只。按2.2.项下造模与给药。分别于第21d、35d，连续禁食12hr，乙醚轻度麻醉后经眼眶取血，在4℃下放置1hr，然后3500rpm离心15min，取血清测定TC、TG及MDA含量。治疗性给药48只大鼠随机分成6组每组8只。按2.2.项下造模与给药。于第35d大鼠连续禁食12h，乙醚轻度麻醉后经眼眶取血，在4℃下放置1h，然后3500rpm离心15min，取血清测定TC、TG、LDL-C、HDL-C及MDA含量和SOD活性。然后将大鼠脱颈椎处死取肝脏，取肝左叶前缘部分(约200mg)加抽提液(乙醇∶丙酮＝1∶1)2ml匀浆。匀浆液4℃下放置12h后3500rpm离心15min，取上清液，测定TC及TG含量(参见12.蔡秀成(Cai XC)郭英(Guo Y)阎雁(Yan Y).琉璃苣油对脂质代谢和脂质过氧化的影响[J].中国药理学通报(Chin Pharm Bull)1996，12(6)551-553)。
统计学处理所有数据均以X±S形式表示，采用t检验进行统计学分析。
预防性给PTS对血清中TC、TG、MDA的影响由表5、表6可见，高脂饲料喂21d后模型组大鼠血清中TC、TG和MDA含量都显著升高。PTS对TC、TG和MDA含量有一定的降低趋势，尤其是高剂量具有显著性差异。停止造模继续给药14天后模型组TC、TG和MDA含量都有所下降，但与正常组相比具有显著性差异。与模型组相比PAD总皂苷高剂量仍能显著地降低血清中TC、TG和MDA含量。以上结果表明PTS有一定的预防作用。
表5总皂苷给药21天后对血清中TC和TG的作用(X±S，n＝10)组别剂量(mg/kg) TC(mmol/l) TG(mmol/l) MDA(mmol/l)正常组 - 2.11±0.70 0.26±0.064 4.78±0.68对照组 - 12.42±3.30ΔΔ0.53±0.22ΔΔ6.53±1.52ΔΔSJZ 10 11.36±2.800.36±0.155.51±1.30PTS 25 11.51±3.070.36±0.115.88±1.1350 10.87±3.540.34±0.087*5.68±1.051009.45±3.01*0.32±0.071**5.40±0.56*Δp＜0.01VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01VS对照组表6总皂苷给药35天后对血清中TC和TG的作用(X±S，n＝10)剂量组别TC(mmol/l) TG(mmol/l) MDA(mmol/l)(mg/kg)正常组 - 1.85±0.250.22±0.054 4.55±0.44对照组 - 2.61±0.48ΔΔ0.33±0.065Δ5.33±0.86ΔSJZ 10 2.21±0.35*0.25±0.038**4.45±0.33**PTS 25 2.43±0.310.31±0.062*4.74±0.4850 2.24±0.300.31±0.11 4.68±0.40*1002.21±0.28*0.25±0.049**4.53±0.42*Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01VS对照组治疗性给PTS对脂质与MDA、SOD的影响由表7可见高脂饲料喂大鼠21d后改喂正常饲料14d后模型组血清中TC、TG、LDL-C含量显著升高而HDL-C显著降低。但PTS组大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量明显低于模型组相，而HDL-C显著升高并有一定的剂量相关性。结果表明PTS对高脂血症大鼠的血脂有调节作用。
表7总皂苷对血脂的影响(X±S，n＝8)组别 剂量(mg/kg)TC(mmol/l) TG(mmol/l)LDL-C(mmol/l)HDL-C(mmol/l)正常组 - 1.74±0.23 0.46±0.13 0.63±0.26 0.70±0.089对照组 - 3.50±0.62ΔΔ0.58±0.084Δ1.85±0.57ΔΔ0.57±0.063ΔΔSJZ 10 2.85±0.48*0.48±0.085*1.28±0.32*0.66±0.12*PTS 25 3.07±0.67 0.52±0.084 1.41±0.41 0.61±0.1250 2.94±0.33*0.50±0.13 1.30±0.24*0.67±0.13*100 2.75±0.42**0.47±0.099*1.14±0.37**0.69±0.098**Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01 VS对照组对肝脏中脂质含量的影响由表8可见，模型对照组肝脏中TC和TG含量均明显高于正常组，PTS组TC含量明显低于模型组，尤其是PTS高剂量组(P＜0.05)。而PTS对肝脏TG含量无明显影响。结果表明PTS对肝脏脂质的作用与SJZ相似，能降低TC含量而对TG无明显作用。
表8总皂苷对肝中脂质的影响(X±S，n＝8)组别剂量(mg/kg)TC(μmol/mg) TG(μmol/mg)正常组 - 2.22±0.12 3.92±1.43对照组 - 3.74±0.54ΔΔ7.11±0.84ΔΔSJZ10 3.04±0.39**6.93±0.60PTS25 3.58±0.136.80±0.8950 3.23±0.537.08±0.62100 3.14±0.55*7.15±0.72Δp＜0.01 VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01 VS对照组PTS对血清中MDA和SOD的影响由表9可见与正常组相比模型组大鼠血清中MDA含量显著升高P＜0.01，SOD活性显著降低。各给药组与模型组比较，SJZ和PTS能显著降低血清MDA，且PTS能显著升高血清SOD活性，有一定的剂量相关性。结果表明PTS有一定的抗氧化能力，可能是通过提高SOD活性和降低血清中脂质含量而起作用。
表9总皂苷对血清中MDA和SOD的影响m(X±S，n＝8)剂量 MDA SOD组别(mg/kg)(mmol/l) (NU/ml)正常组 - 9.65±0.58300.77±26.95对照组 - 12.79±0.89ΔΔ266.97±19.70ΔΔSJZ 10 10.66±0.89**283.35±24.61PTS 25 11.33±1.37**296.06±23.31*50 10.66±1.26**297.24±26.99*100 10.51±1.20**300.67±20.54**ΔΔp＜0.01 VS正常组，*p＜0.05**p＜0.01 VS对照组
权利要求
1.一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷，其特征在于按如下方法制备，将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
2.一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
3.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，上D101或AB8型号的大孔树脂柱，分别用水及30-40％乙醇洗脱后，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
4.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，不经浓缩，直接上树脂柱。
5.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于用树脂柱分离时，上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计2～1∶1。
6.根据权利要求5所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于用树脂柱分离时，上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计1.5∶1。
7.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于收集65％乙醇洗脱液。
8.根据权利要求6所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于取黄花倒水莲粗粉，加水浸泡3小时，提取3次，三次的加水量分别为10，8，6倍量，三次的提取时间分别为1.5，1.5，1小时；将黄花倒水莲水提取液，直接上D101大孔树脂柱，先用水洗树脂柱，再用40％乙醇洗，继用65％乙醇洗脱，收集65％乙醇部位，真空回收溶剂后，得黄花倒水莲总皂苷。
9.用于降脂的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1-8任一项的黄花倒水莲总皂苷和药学上可接受的载体。
10.权利要求1-8中任意一项的黄花倒水莲总皂苷，在制备降脂药物中的应用。
全文摘要
具有降脂活性的黄花倒水莲总皂苷及其药物组合物与制备方法，本发明以生物活性为导向，用市售血脂康作为对照药，对黄花倒水莲降脂作用的有效部位进行筛选，结果表明，黄花倒水莲降脂作用的有效部位的主要化学成分为皂苷类化合物，将黄花倒水莲水提取液，直接上D101、HP20或AB8型号的树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60－70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
文档编号C07J63/00GK1431221SQ0311278
公开日2003年7月23日 申请日期2003年1月29日 优先权日2003年1月29日
发明者朱丹妮, 王秋娟, 高山林, 寇俊萍, 徐宏江, 李 浩 申请人:中国药科大学
技术领域：
本发明涉及植物药黄花倒水莲有效部位及其提取分离方法，以及含有黄花倒水莲有效部位的药物组合物，具体为从黄花倒水莲中提取分离有降脂及心血管活性的有效部位，并制备成药物组合物。
背景技术：
黄花倒水莲是远志科远志属植物黄花倒水莲(Polygala fallax Hemsl.[PaureocaudaDunn.])的干燥根，为广西民间常用药。主产江西、湖南、广东、广西和云南，生于海拔1150-1650m的山谷林下，水旁阴湿处(参见中国科学院中国植物志，第四十三卷，第三分册.北京科学出版社，1997151-152.)。本品味甘、微苦，平。具有补益，强壮，祛湿，散瘀功效，主治虚弱虚肿，急慢性肝炎，腰腿酸痛，跌打损伤。黄胜光等报道了黄花倒水莲治疗高血脂症30例的临床观察(参见湖南中医杂志，1999，15(3)6-7)，但均未涉及黄花倒水莲具降脂作用及疗效的物质基础。
发明内容
本发明要解决的技术问题是如何以生物活性为导向，对黄花倒水莲的降脂活性进行有效部位的筛选，并研究有效部位的化学成分，以及含有该有效部位的药物组合物。
要解决的技术问题还包括研究黄花倒水莲的降脂有效部位可工业化生产的提取分离方法，其不但要求工艺相对简单，而且要达到注册药品规定的含量标准，同时要保证质量的稳定。因为只有含量符合标准才能达到临床疗效，质量稳定才能保证疗效稳定。
为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案。
一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷，其特征在于按如下方法制备将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
所述黄花倒水莲总皂苷的制备方法是将黄花倒水莲水提取液，上D101或AB8型号的大孔树脂柱，分别用水及30-40％乙醇洗脱后，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。而且，本发明是将黄花倒水莲水提取液，不经过浓缩，直接上树脂柱。
所述黄花倒水莲总皂苷的制备方法，用树脂柱分离时，上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计2～1∶1。用树脂柱分离时，较好的方式是上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计1.5∶1；收集65％乙醇洗脱液。
所述黄花倒水莲总皂苷更为理想的制备方法是取黄花倒水莲粗粉，加水浸泡3小时，提取3次，三次的加水量分别为10，8，6倍量，三次的提取时间分别为1.5，1.5，1小时；将黄花倒水莲水提取液，直接上D101大孔树脂柱，先用水洗树脂柱，再用40％乙醇洗，继用65％乙醇洗脱，收集65％乙醇部位，真空回收溶剂后，得黄花倒水莲总皂苷。
一种用于降脂的药物组合物，其中含有治疗有效量的前述任一项的黄花倒水莲总皂苷和药学上可接受的载体。
前述任意一项的黄花倒水莲总皂苷，在制备降脂药物中的应用。
下面分别详细介绍黄花倒水莲有效部位的筛选与总皂苷提取工艺研究。
一、黄花倒水莲有效部位的筛选本发明以生物活性为导向，对黄花倒水莲的降脂活性进行有效部位的筛选。从黄花倒水莲(PAD)水提物中分离出5个部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)，选用正常及腹腔注射75％蛋黄溶液形成的急性小鼠高脂血症模型进行调脂活性部位筛选研究。
Fr.1(12mg/kg)能显著升高高脂模型小鼠血清中TC含量，而对正常小鼠血清中TC含量与高脂模型小鼠肝中TC含量无明显作用。
Fr.2(44mg/kg)能显著降低正常小鼠血清中TC的含量，而升高高脂模型小鼠血清中TC含量，对高脂小鼠肝中TC含量也有一定的升高作用。
Fr.3(50mg/kg)部位能显著降低正常小鼠血清中TC的含量，也均能显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量P＜0.05。对高脂小鼠血清中TC含量无明显影响。
Fr.4(50mg/kg)部位可以极显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量，同时也对高脂模型小鼠肝血清中TC含量以及正常小鼠血清中TC含量也有一定的降低作用。其可能机理是抑制肝中TC的合成，或加速肝脏对TC代谢，排泄，生物利用。
Fr.5(4.8mg/kg)能显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量P＜0.05，对高脂模型小鼠血清中TC含量却能升高。而对正常小鼠血中TC含量无明显作用。
PAD调脂作用机理比较复杂，各部位可能是通过不同的调脂途径而起作用并且相互影响。其中Fr.4部位为PAD调节血脂的主要有效部位。
实验目的利用正常及腹腔注射75％蛋黄溶液形成的急性小鼠高脂血症模型筛选PAD调节血脂的有效部位，研究考查PAD各部位调脂作用，为开发二类新药及进一步深入研究提供实验依据。
受试药物黄花倒水莲水提物(简称PAD)和提取部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)提供单位中国药科大学中药复方研究室，批号20010805，配制方法为将各药物溶解于蒸馏水，配制成所需的浓度，小鼠ig 0.1ml/10g、大鼠ig1ml/100g。
血脂康(简称XZK)提供单位北京大学维信生物科技有限公司，批号20010203，规格为2g/胶囊。
总胆固醇(TC)试剂盒提供单位上海荣盛公司，批号20011103。
昆明种小鼠随机分组。总胆固醇(TC)试剂盒规格100ml/盒试验动物昆明种小鼠，雄性，体重18-22g，由青龙山饲养场提供。
黄花倒水莲水提物(简称PAD)和提取部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)的制备工艺 造模方法与TC测定连续给药5d，正常组和模型组分别给等量蒸馏水，第5d给药后禁食20hr，用毛细管经眼眶取血，在4℃下放置1hr，然后3000rpm离心15min，再将血清吸出测定TC含量，考查药物对正常小鼠的作用。第7d继续给药或水，第9d起连续禁食16hr后给药或水，2hr后，腹腔注射新鲜配制的75％蛋黄溶液0.5ml/只，造成小鼠高脂血症模型，造模后20hr内用毛细管经眼眶取血，测TC含量。然后将小鼠脱颈椎处死取肝脏，用肝左叶部分(200mg)，加抽提液(乙醇∶丙酮＝1∶1)2ml，在匀浆器中匀浆。匀浆液置冰箱4℃下12hr后离心(3000rpm)15min，取上清液，待测(参见杜冠华(Du GH)译H.G沃格尔编药理学实验指南-新药发现和药理学评价[M]科技出版社2001.785-787.)。
分组与给药剂量取90只雄性昆明种小鼠，标准体重，随机分成10组。正常组、模型组、阳性对照组(XZK 180mg/kg)、水提物组(733.5mg/kg)、Fr.1部位组(12mg/kg)、Fr.2部位组(44mg/kg)、Fr.3部位组(50mg/kg)、Fr.4部位组(50mg/kg)、Fr.5部位组(4.8mg/kg)。按1.项进行实验。
对正常小鼠血清中TC含量的影响由表1.可见Fr.2、Fr.3、Fr.4部位均能降低正常小鼠血清中TC含量。
表1.药物对正常小鼠血清中TC含量的影响(X±SD n＝10)组别剂量Content of TC in serum 变化率％(mg/kg) (mg/ml)正常组0.9193±0.1404XZK组180.00.8813±0.0580 -4.13水提物组 733.50.9295±0.1356 1.11Fr.1部位组 12.0 0.8980±0.9012 -2.32Fr.2部位组 44.0 0.7708±0.1239ΔΔ-16.15Fr.3部位组 50.0 0.7949±0.05880ΔΔ-13.53Fr.4部位组 50.0 0.7935±0.1792ΔΔ-13.68Fr.5部位组 4.8 0.9140±0.2632 -0.58Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01VS 正常组对高脂小鼠血清中TC含量的影响表2.可见小鼠高脂模型造模成功(p＜0.01)。XZK、Fr.4部位能降低TC含量，Fr.3部分也有一定的降低TC含量的趋势。表2.药物对高脂模型小鼠血清中TC含量的影响(X±SD n＝10)组别 剂量 Content of TC in serum 变化率％(mg/kg) (mg/ml)正常组 1.2762±0.02508138.46模型组 3.0432±0.01284ΔΔXZK组 1802.4092±0.8468*-20.83水提物组 733.5 1.7801±0.1883**-41.51Fr.1部位组12 3.1239±0.8337 2.65Fr.2部位组44 3.1161±0.5802 2.40Fr.3部位组50 2.4454±0.9406 -19.64Fr.4部位组50 2.1039±0.6332**-30.86Fr.5部位组4.83.1143±0.8352 2.34Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组，*p＜0.05，**p＜0.01 VS模型组表3.药物对高脂模型小鼠肝中TC含量的影响(X±SD n＝10)组剂量Content of TC in serum变化率％(mg/kg) (mg/mg)正常组0.005156±0.000706模型组0.006052±0.000582ΔΔ17.38XZK组 180 0.005354±0.000511**-11.53水提物组 733.5 0.005794±0.000552 -4.26Fr.1部位组12 0.005910±0.000476 -2.35Fr.2部位组44 0.006488±0.000506 7.20Fr.3部位组50 0.005368±0.000709*-11.30Fr.4部位组50 0.005309±0.000624*-12.28Fr.5部位组4.8 0.005117±0.000568**-15.45Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组，*p＜0.05，**p＜0.01 VS模型组对高脂模型小鼠肝中TC含量的影响由表3.可见小鼠急性高脂模型肝脏中TC显著升高(P＜0.05)。XZK能显著降低肝中含量(P＜0.05)；Fr.3、Fr.4、Fr.5也均能显著降低TC含量(P＜0.05)。水煎液有一定的降低作用(P＜0.05)。
实验结果(见表4.)表明PAD调脂作用机理比较复杂，各部位可能通过不同的调脂途径而起作用并且相互影响。其中Fr.4部位可能是PAD调节血脂的主要有效部位。
Fr.4(50mg/kg)部位可以极显著降低高脂模型小鼠肝中TC含量，同时也对高脂模型小鼠肝血清中TC含量以及正常小鼠血清中TC含量也有一定的降低作用。其可能机理是抑制肝中TC的合成，或加速肝脏对TC代谢，排泄，生物利用。
表4.PAD各部位对TC含量的影响的结果分析组别 正常小鼠高脂小鼠血清中TC的含量血清中TC含量 肝中TC含量XZK 无明显作用 显著降低 显著降低水煎液 无明显作用 极显著降低降低Fr1部位 无明显作用 一定升高作用 无明显作用Fr.2部位 显著降低 一定升高作用 一定升高作用Fr.3部位 极显著降低 无明显作用显著降低Fr.4部位 降低 极显著降低显著降低Fr.5部位 无明显作用 一定升高作用 显著降低二、总皂苷提取工艺研究1、水提取后，合并三次水提取液，过滤或离心除去杂质，过D101(HP20，AB8)大孔树脂，上样量为药材(重量)∶大孔树脂(体积)为1.5∶1，待树脂充分吸附皂苷后，用蒸溜水洗，去除水溶性杂质，再用35-40％乙醇洗，进一步去除杂质，继用60-70％乙醇洗涤脱，收集60-70％乙醇部位，以黄花倒水莲中Tenuifolin为对照品，测定总皂苷含量，黄花倒水莲总皂苷含量达50％以上。
2、曾用不同浓度的醇溶液进行提取，醇提取物与水提取物用高脂血症模型小鼠进行降脂作用的药效学观察和比较，结果表明两者药效学无明显差异。
3、将醇提物过大孔树脂，由于醇提物提出的脂溶性成分较多，在大孔树脂上有极细的沉积物，致使提取液不能顺利被通过和吸附，所以后来采用水提工艺进行提取黄花倒水莲总皂苷。
4、在水提工艺中还进行了提取液的浓缩后，过大孔树脂的试验，结果表明，水提液浓缩后，再上大孔树脂，总皂苷的得率及含量均明显下降1)投料150kg，按最佳水提工艺提取，水提液浓缩至药材(重量)∶提取液(体积)1∶2，浓缩液过大孔树脂，经上述分离纯化工艺，总皂苷得率为0.46％；2)投料150kg，最佳水提工艺提取，水提液浓缩至药材(重量)∶提取液(体积)1∶2，浓缩液喷雾干燥成药粉，药粉溶于水后再过大孔树脂，经上述分离纯化工艺，总总皂苷得率为0.5％3)同样的药材，按前述1项下(即本发明的制备方法)所述提取，分离，总皂苷得率为2-2.3％，经研究可能是由于黄花倒水莲皂苷酸性所致，在加热浓缩过程中皂苷类成分不断被破坏而引起了皂苷得率和含量的下降。
具体实施例方式
实例1黄花倒水莲总皂苷的制备取黄花倒水莲150kg，粉碎成粗粉，加水浸泡3小时，采用药材重量10倍的去离子水煎煮三次，提取时间分别为1.5小时。合并三次水提取液，过滤或离心除去杂质，过HP20大孔树脂，上样量为药材(重量)∶大孔树脂(体积)为2∶1，待树脂充分吸附皂苷后，用500L蒸溜水洗，去除水溶性杂质，再用400L 40％乙醇洗，进一步去除杂质，继用500L 65％乙醇洗涤脱，收集65％乙醇部位，真空回收乙醇，真空干燥提取物，得黄花倒水莲总皂苷3.6kg(得率2.3％)以黄花倒水莲中Tenuifolin为对照品，比色法测定总皂苷含量，黄花倒水莲总皂苷含量达50％。(总皂甙含量测定方法参见刘友平，万德光，刘涛等；分光光度法测定不同产地远志总皂苷的含量《成都中医药大学学报》2000，23(1)26-28，下同)。
实例2黄花倒水莲总皂苷的制备取黄花倒水莲150kg，粉碎成粗粉，加水浸泡3小时，提取3次，三次的加水量分别为10，8，6倍量，三次的提取时间分别为1.5，1.5，1小时。
合并三次水提取液，过滤或离心除去杂质，过D101大孔树脂，上样量为药材(重量)∶大孔树脂(体积)为1.5∶1，待树脂充分吸附皂苷后，用400L蒸溜水洗，去除水溶性杂质(用斐林试剂测定，至无糖反应)，再用300L 40％乙醇洗，进一步去除杂质，继用400 65％乙醇洗涤脱，收集65％乙醇部位，真空回收乙醇，真空干燥提取物，得黄花倒水莲总皂苷3kg(得率2％)，以黄花倒水莲中Tenuifolin为对照品，比色法测定总皂苷含量，黄花倒水莲总皂苷含量达60％。
实例2总皂苷部位的调脂作用仪器与试药Beckman DU640核酸蛋白质分析仪，舒降之(SJZ)由杭州默沙东提供；TC、TG、LDL-C和HDL-C试剂盒为北京中生公司产品。MDA和SOD试剂盒为南京建成公司产品。实施1中制备的黄花倒水莲总皂苷(Total Saponins of PAD简称PTS)，临用前用水稀释。
SD雄性大鼠，180g-220g，由青龙山饲养场提供，动物合格证号SCXK(苏)2001-0010。
实验方法(参见佟继铭(Tong XM)刘玉玲(Liu YL)符景春(Fu JC).黄芩茎叶总黄酮调血脂作用研究[J].中草药(Chin Trad and Herb Drugs)，2000.31(3)196-199；蔡秀成(CaiXC)郭英(Guo Y)阎雁(Yan Y).琉璃苣油对脂质代谢和脂质过氧化的影响[J].中国药理学通报(Chin Pharm Bull)1996，12(6)551-553；杜冠华(Du GH)译H.G沃格尔编药理学实验指南-新药发现和药理学评价[M]科技出版社2001.785-787；.赵水平(Zhao SP)临床血脂学[M]湖南科学技术出版社1997，357)高脂饲料配方1.5％胆固醇、0.5％牛胆盐、0.2％甲基硫氧嘧啶、10％猪油、87.8％基础饲料。
造模方法雄性SD大鼠正常饲料喂养一周，测定血清TC含量，根据TC含量和体重进行分组正常对照组、模型对照组、阳性对照组(舒降之10mg/kg SJZ)、PTS低剂量组(25mg/kg)、中剂量组(50mg/kg)、高剂量组(100mg/kg)。预防性给药时除正常对照组外其余各组大鼠连续给高脂饲料造模同时各给药组连续给药，21d后改用正常饲料，并继续给药14d，正常对照组、模型对照组分别给等量蒸馏水。治疗性给药时除正常对照组外其余各组大鼠连续给高脂饲料造模，21d后停止造模改用正常饲料，同时各给药组连续给药14d，正常对照组和模型对照组分别给等量蒸馏水。
预防性给药60只大鼠随机分成6组每组10只。按2.2.项下造模与给药。分别于第21d、35d，连续禁食12hr，乙醚轻度麻醉后经眼眶取血，在4℃下放置1hr，然后3500rpm离心15min，取血清测定TC、TG及MDA含量。治疗性给药48只大鼠随机分成6组每组8只。按2.2.项下造模与给药。于第35d大鼠连续禁食12h，乙醚轻度麻醉后经眼眶取血，在4℃下放置1h，然后3500rpm离心15min，取血清测定TC、TG、LDL-C、HDL-C及MDA含量和SOD活性。然后将大鼠脱颈椎处死取肝脏，取肝左叶前缘部分(约200mg)加抽提液(乙醇∶丙酮＝1∶1)2ml匀浆。匀浆液4℃下放置12h后3500rpm离心15min，取上清液，测定TC及TG含量(参见12.蔡秀成(Cai XC)郭英(Guo Y)阎雁(Yan Y).琉璃苣油对脂质代谢和脂质过氧化的影响[J].中国药理学通报(Chin Pharm Bull)1996，12(6)551-553)。
统计学处理所有数据均以X±S形式表示，采用t检验进行统计学分析。
预防性给PTS对血清中TC、TG、MDA的影响由表5、表6可见，高脂饲料喂21d后模型组大鼠血清中TC、TG和MDA含量都显著升高。PTS对TC、TG和MDA含量有一定的降低趋势，尤其是高剂量具有显著性差异。停止造模继续给药14天后模型组TC、TG和MDA含量都有所下降，但与正常组相比具有显著性差异。与模型组相比PAD总皂苷高剂量仍能显著地降低血清中TC、TG和MDA含量。以上结果表明PTS有一定的预防作用。
表5总皂苷给药21天后对血清中TC和TG的作用(X±S，n＝10)组别剂量(mg/kg) TC(mmol/l) TG(mmol/l) MDA(mmol/l)正常组 - 2.11±0.70 0.26±0.064 4.78±0.68对照组 - 12.42±3.30ΔΔ0.53±0.22ΔΔ6.53±1.52ΔΔSJZ 10 11.36±2.800.36±0.155.51±1.30PTS 25 11.51±3.070.36±0.115.88±1.1350 10.87±3.540.34±0.087*5.68±1.051009.45±3.01*0.32±0.071**5.40±0.56*Δp＜0.01VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01VS对照组表6总皂苷给药35天后对血清中TC和TG的作用(X±S，n＝10)剂量组别TC(mmol/l) TG(mmol/l) MDA(mmol/l)(mg/kg)正常组 - 1.85±0.250.22±0.054 4.55±0.44对照组 - 2.61±0.48ΔΔ0.33±0.065Δ5.33±0.86ΔSJZ 10 2.21±0.35*0.25±0.038**4.45±0.33**PTS 25 2.43±0.310.31±0.062*4.74±0.4850 2.24±0.300.31±0.11 4.68±0.40*1002.21±0.28*0.25±0.049**4.53±0.42*Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01VS对照组治疗性给PTS对脂质与MDA、SOD的影响由表7可见高脂饲料喂大鼠21d后改喂正常饲料14d后模型组血清中TC、TG、LDL-C含量显著升高而HDL-C显著降低。但PTS组大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量明显低于模型组相，而HDL-C显著升高并有一定的剂量相关性。结果表明PTS对高脂血症大鼠的血脂有调节作用。
表7总皂苷对血脂的影响(X±S，n＝8)组别 剂量(mg/kg)TC(mmol/l) TG(mmol/l)LDL-C(mmol/l)HDL-C(mmol/l)正常组 - 1.74±0.23 0.46±0.13 0.63±0.26 0.70±0.089对照组 - 3.50±0.62ΔΔ0.58±0.084Δ1.85±0.57ΔΔ0.57±0.063ΔΔSJZ 10 2.85±0.48*0.48±0.085*1.28±0.32*0.66±0.12*PTS 25 3.07±0.67 0.52±0.084 1.41±0.41 0.61±0.1250 2.94±0.33*0.50±0.13 1.30±0.24*0.67±0.13*100 2.75±0.42**0.47±0.099*1.14±0.37**0.69±0.098**Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01 VS对照组对肝脏中脂质含量的影响由表8可见，模型对照组肝脏中TC和TG含量均明显高于正常组，PTS组TC含量明显低于模型组，尤其是PTS高剂量组(P＜0.05)。而PTS对肝脏TG含量无明显影响。结果表明PTS对肝脏脂质的作用与SJZ相似，能降低TC含量而对TG无明显作用。
表8总皂苷对肝中脂质的影响(X±S，n＝8)组别剂量(mg/kg)TC(μmol/mg) TG(μmol/mg)正常组 - 2.22±0.12 3.92±1.43对照组 - 3.74±0.54ΔΔ7.11±0.84ΔΔSJZ10 3.04±0.39**6.93±0.60PTS25 3.58±0.136.80±0.8950 3.23±0.537.08±0.62100 3.14±0.55*7.15±0.72Δp＜0.01 VS正常组；*p＜0.05，**p＜0.01 VS对照组PTS对血清中MDA和SOD的影响由表9可见与正常组相比模型组大鼠血清中MDA含量显著升高P＜0.01，SOD活性显著降低。各给药组与模型组比较，SJZ和PTS能显著降低血清MDA，且PTS能显著升高血清SOD活性，有一定的剂量相关性。结果表明PTS有一定的抗氧化能力，可能是通过提高SOD活性和降低血清中脂质含量而起作用。
表9总皂苷对血清中MDA和SOD的影响m(X±S，n＝8)剂量 MDA SOD组别(mg/kg)(mmol/l) (NU/ml)正常组 - 9.65±0.58300.77±26.95对照组 - 12.79±0.89ΔΔ266.97±19.70ΔΔSJZ 10 10.66±0.89**283.35±24.61PTS 25 11.33±1.37**296.06±23.31*50 10.66±1.26**297.24±26.99*100 10.51±1.20**300.67±20.54**ΔΔp＜0.01 VS正常组，*p＜0.05**p＜0.01 VS对照组
权利要求
1.一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷，其特征在于按如下方法制备，将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
2.一种具有降脂作用的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，上D101、HP20或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
3.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，上D101或AB8型号的大孔树脂柱，分别用水及30-40％乙醇洗脱后，收集60-70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
4.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于将黄花倒水莲水提取液，不经浓缩，直接上树脂柱。
5.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于用树脂柱分离时，上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计2～1∶1。
6.根据权利要求5所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于用树脂柱分离时，上样量约为按药材重量大孔树脂体积比计1.5∶1。
7.根据权利要求2所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于收集65％乙醇洗脱液。
8.根据权利要求6所述的黄花倒水莲总皂苷的制备方法，其特征在于取黄花倒水莲粗粉，加水浸泡3小时，提取3次，三次的加水量分别为10，8，6倍量，三次的提取时间分别为1.5，1.5，1小时；将黄花倒水莲水提取液，直接上D101大孔树脂柱，先用水洗树脂柱，再用40％乙醇洗，继用65％乙醇洗脱，收集65％乙醇部位，真空回收溶剂后，得黄花倒水莲总皂苷。
9.用于降脂的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1-8任一项的黄花倒水莲总皂苷和药学上可接受的载体。
10.权利要求1-8中任意一项的黄花倒水莲总皂苷，在制备降脂药物中的应用。
全文摘要
具有降脂活性的黄花倒水莲总皂苷及其药物组合物与制备方法，本发明以生物活性为导向，用市售血脂康作为对照药，对黄花倒水莲降脂作用的有效部位进行筛选，结果表明，黄花倒水莲降脂作用的有效部位的主要化学成分为皂苷类化合物，将黄花倒水莲水提取液，直接上D101、HP20或AB8型号的树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60－70％乙醇洗脱液，得黄花倒水莲总皂苷。
文档编号C07J63/00GK1431221SQ0311278
公开日2003年7月23日 申请日期2003年1月29日 优先权日2003年1月29日
发明者朱丹妮, 王秋娟, 高山林, 寇俊萍, 徐宏江, 李 浩 申请人:中国药科大学
起点商标作为专业知识产权交易平台，可以帮助大家解决很多问题，如果大家想要了解更多知产交易信息请点击 【在线咨询】或添加微信 【19522093243】
与客服一对一沟通，为大家解决相关问题。
此文章来源于网络,如有侵权,请联系删除
热门咨询
tips