商标分类 
商标转让 
您当前的位置： 甲肝病毒减毒活疫苗株的互补脱氧核糖核酸序列的制作方法
2021-02-01 11:02:01|
168|
起点商标网 专利名称：甲肝病毒减毒活疫苗株的互补脱氧核糖核酸序列的制作方法
技术领域：
本发明是一种甲肝病毒的核苷酸序列，特别是用于预防人类甲型肝炎的减毒活疫苗株(H2减毒株)的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，命名为HAV-H2。
甲型肝炎是世界性传染病，它是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的，全世界约40亿人受到威胁。在中国，35岁以上成年人中，甲肝受染率达90％，常引起季节性流行。由于该病的高发病率及较长的病程，给人民健康及经济发展带来严重影响。根据我国现实情况，控制甲肝流行的有效和根本的措施在于发展疫苗，而疫苗的关键是良好的减毒株。
美国MERCK公司Provost等人于1986年曾报告获得甲肝病毒F’减毒株，美国NIH的Purcell等人也于1987年报告获得甲肝病毒HM175/7MK-5减毒株，但人试结果证明，免疫效果很差，故至今未有进一步扩大人试的工作。
浙江省医学科学院病毒病研究所经过多年努力，成功地研制出甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)，并经大量人群接种证明确可用于预防甲肝的传染，为控制该病流行提供最有效的措施，该甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)已于1993年获得中国专利。
本发明的目的是搞清疫苗株(H2减毒株)的全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，通过与现有的甲肝病毒cDNA序列相比较，从而搞清疫苗株序列的突变位点，为用人工突变等基因工程方法研制新型甲肝疫苗创造条件。该疫苗株cDNA序列的阐明，还有利于对疫苗株遗传稳定性的掌握及指导疫苗株的选育，还有利于了解疫苗株与野毒株病毒基因的特异性区别，为疫苗的遗传稳定性研究提供分析方法。另外，通过比较分析研究，还有利于对甲肝病毒减毒机理的了解，为今后用基因工程手段研制快速生长、高滴度、高抗原性的新型、优良的甲肝病毒减毒活疫苗提供科学依据。
本发明是在成功地研制成甲肝减毒活疫苗(H2减毒株)的基础上，对该疫苗株进行分子生物学研究。
采用疫苗株(H2减毒株)为毒种，接种到已基本长满的单层人胚肺二倍体细胞(KMB17)。在35℃～36℃培养增殖28天后，收获细胞，再经冻融，超声，氯化铯超速离心等，获得纯化的甲肝减毒株(H2减毒株)病毒，该病毒再经胍盐/热酚法提取病毒核糖核酸(RNA)，用cDNA合成药盒配合多聚酶链反应(PCR)技术，以及分子克隆技术获得甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的cDNA基因库。最后用DNA序列分析药盒，双脱氧末端终止法，对已有的cDNA克隆进行序列分析，再通过拼接，从而获得完整的H2减毒株cDNA序列(RAV-H2)，它由7473个核苷酸的基因组和一个多聚腺嘌呤核苷酸(PolyA)尾组成。
疫苗株(H2减毒株)的基因组由7473个核苷酸组成，与美国HM175野毒株cDNA序列[Journal of Virology 1987；61(1)50～59]相比，其5’-非编码区有两处缺失，可能与病毒减毒有关，另外，两者还存在一些散在的核苷酸变异，分布于整个基因组，这也可能与病毒减毒有关。
因为甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)是世界上第一株经大量人群接种证明安全有效的疫苗株，因此，该疫苗株全长cDNA序列的阐明，有利于搞清疫苗株的突变位点，有利于对其遗传稳定性的掌握和疫苗的鉴别区分，有利于了解疫苗株与野毒株病毒基因的特异性区别，为疫苗的减毒提供理论依据。另外，通过比较分析研究，还有利于对甲肝病毒减毒机理了解，为今后用人工诱变等基因工程方法获得甲肝病毒减毒活疫苗提供理论依据，因而具有很大的社会效益和经济效益。
实施例采用甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)为毒种，接种到已基本长满的单层人胚肺二倍体细胞(KMB17)，在35℃培养增殖28天后，收获细胞，含病毒的细胞经冻融、超声、氯化铯、超速离心，获得纯化的甲肝减毒株(H2减毒株)病毒，该减毒株病毒再经胍盐热酚法提取病毒RNA，用cDNA合成药盒，多聚酶链反应(PCR)技术以及分子克隆技术获得甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的cDNA基因库。最后用DNA序列分析药盒，双脱氧末端终止法，对已有的cDNA克隆进行序列分析，再通过拼接，从而获得完整的甲型肝炎减毒活疫苗毒株(H2减毒株)的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，命名为HAV-H2，全长如下………………HAV-H2 Length7494 September 23，1994 11:46 TypeN Check802 ..5’1 TTCAAGAGGG GTCTCCGGGA ATTTCCGGAG TCCCTCTTGG AAGTCCATGG51 TGAGGGGACT TGATACCTCA CCGCCGTTTG CCTAGGCTAT AGGCTAAATT101 TTCCCTTTCC CTTTTCCCTT TCCCATTCCC TTTTGCTTGT AAATATTGAT151 TCCTGCAGGT TCAGGGTTCT TAAATCTGTT TCTCTATAAG AACACTCATT201 TTCACGCTTT CTGTCTTCTT TCTTCCAGGG CTCTCCCCTT GCCCTAGGCT251 CTGGCCGTTG CGCCCGGCGG GGTCAACTCC ATGATTAGCA TGGAGCTGTA301 GGAGTCTAAA TTGGGGACAC AGATGTTTGG AACGTCACCT TGCAGTGTTA351 ACTTGGCTTT CATGAATCTC TTTGATCTTC CACAAGGGGT AGGCTACGGG401 TGAAACCTCT TAGGCTAATA CTTCTATGAA GAGATGCCTT GGATAGGGTA451 ACAGCGGCGG ATATTGGTGA GTTGTTAAGA CAAAAACCAT TCAACGCCGG501 AGGACTGACT CTCATCCAGT GGATGCATTG AGTGGATTGA CTGTCAGGGC551 TGTCTTTAGG CTTAATTCCA GACCTCTCTG TGCTTAGGGC AAACATCATT601 TGGCCTTAAA TGGGATTCTG TGAGAGGGGA TCCCTCCATT AACAGCTGGA651 CTGTTCTTTG GGGCCTTATG TGGTGTTTGC CGCTGAGGTA CTCAGGGGCA701 TTTAGGTTTT TCCTCATTCT TAAATAATAA TGAACATGTC TAGACAAGGT751 ATTTTCCAGA CTGTTGGGAG TGGTCTTGAC CACATCCTGT CTTTGGCAGA801 CATTGAGGAA GAGCAAATGA TTCAATCAGT TGATAGGACT GCAGTGACTG851 GTGCTTCTTA TTTTACTTCT GTGGATCAAT GTTCAGTTCA TACAGCTGAG901 GTTGGATCAC ACCAGGTTGA ACCTTTGAGA ACCTCTGTTG ATAAACCCGG951 TTCAAAGAGG ACTCAGGGAG AGAAATTTTT CTTGATTCAT TCTGCAGATT1001 GGCTTACTAC ACATGCTCTT TTCCATGAAG TTGCAAAATT GGATGTGGTG1051 AAATTATTAT ACAATGAGCA GTTTGCTGTT CAAGGGTTGT TGAGATACCA1101 TACATATGCA AGATTTGGCA TTGAAATTCA AGTTCAGATA AACCCTACAC1151 CTTTCCAACA GGGGGGATTG ATCTGTGCTA TGGTTCCTGG TGACCAGAGC1201 TATGGTTCTA TAGCATCATT GACTGTTTAT CCTCATGGTT TGTTAAATTG1251 CAATATTAAC AATGTGGTTA GAATAAAGGT TCCATTTATT TACACAAGAG1301 GTGCTTACCA CTTTAAAGAT CCACAATACC CAGTTTGGGA ATTGACAATT1351 AGAGTTTGGT CAGAATTAAA TATTGGGACA GGAACTTCAG CTTATACTTC1401 ACTCAATGTT TTAGCTAGAT TTACAGATTT GGAGTTGCAT GGATTAACTC1451 CTCTTTCTAC ACAAATGATG AGAAATGAAT TTAGGGTCAG TACTACTGAG1501 AATGTGGTGA ATCTGTCAAA TTATGAAGAT GCAAGAGCAA AGATGTCTTT1551 TGCTTTGGAT CAGGAAGATT GGAAATCTGA TCCGTCCCAG GGTGGTGGGA1601 TCAAAATTAC TCATTTTACT ACTTGGACAT CTATTCCAAC TTTGGCTGCT1651 CAGTTTCCAT TTAATGCTTC AGACTCAGTT GGTCAACAAA TTAAAGTTAT1701 TCCAGTTGAC CCATATTTTT TCCAAATGAC AAATACAAAT CCTGACCAAA1751 AATGTATAAC TGCTTTGGCT TCTATTTGTC AGATGTTTTG TTTTTGGAGA1801 GGAGATCTTG TCTTTGATTT TCAAGTTTTT CCCACCAAAT ATCATTCAGG1851 TAGATTACTG TTTTGTTTTG TTCCTGGCAA TGAGCTAATA GATGTTTCTG1901 GAATCACATT AAAGCAAGCA ACTACTGCTC CTTGTGCAGT AATGGATATT1951 ACAGGAGTGC AGTCAACTTT GAGATTTCGT GTTCCCTGGA TTTCTGACAC2001 TCCTTACAGA GTGAACAGGT ATACAAAGTC AGCACATCAG AAAGGTGAGT2051 ACACTGCCAT TGGGAAGCTT ATTGTGTATT GTTATAACAG ATTGACCTCT2101 CCTTCTAACG TTGCTTCCCA TGTCAGAGTG AATGTTTATC TTTCAGCAAT2151 TAACTTGGAA TGTTTTGCTC CTCTTTATCA TGCTATGGAT GTTACTACAC2201 AAGTTGGAGA TGATTCTGGA GGTTTTTCAA CAACAGTTTC TACAGAACAG2251 AATGTTCCAG ATCCCCAAGT TGGTATAACA ACCATGAAAG ATTTGAAAGG2301 AAAAGCTAAC AGAGGGAAAA TGGATGTTTC AGGAGTACAA GCACCTGTGG2351 GAGCTATCAC AACAATTGAG GATCCAGTTT TAGCAAAGAA AGTACCTGAG2401 ACATTTCCTG AATTGAAACC TGGAGAATCC AGACATACAT CAGATCATAT2451 GTCCATCTAC AAGTTTATGG GAAGGTCTCA TTTCTTGTGC ACTTTTACAT2501 TCAATTCAAA TAATAAAGAG TACACATTTC CTATAACCTT GTCTTCAACC2551 TCTAATCCTC CTCATGGTTT GCCATCAACA CTGAGGTGGT TTTTCAACTT2601 GTTTCAGTTG TATAGAGGGC CTTTAGATCT GACAATTATT ATTACAGGAG2651 CAACTGATGT AGATGGCATG GCCTGGTTCA CTCCAGTAGG TCTTGCCGTT2701 GATACTCCTT GGGTAGAGAA GGAGTCAGCT TTGTCTATTG ACTACAAAAC2751 TGCTCTTGGA GCTGTCAGAT TTAACACAAG GAGAACAGGG AACATTCAGA2801 TTAGATTACC ATGGTATTCT TATTTATATG CTGTGTCTGG AGCACTGGAT2851 GGTTTGGGAG ACAAGACAGA TTCTACATTT GGATTGGTTT CTATTCAGAT2901 TGCAAATTAC AATCATTCTG ATGAATACTT GTCTTTTAGT TGTTATTTGT2951 CTGTCACAGA ACAATCAGAG TTTTATTTTC CCAGAGCTCC ATTGAACTCA3001 AATGCCATGT TATCCACTGT ATCAATGATG AGCAGAATTG CAGCTGGAGA3051 CTTGGAGTCA TCAGTGGATG ATCCTAGATC AGAGGAAGAT AAAAGATTTG3101 AGAGTCATAT AGAATGCAGG AAGCCATATA AAGAACTGAG GTTAGAAGTT3151 GGGAAACAAA GACTCAAGTA TGCTCAGGAA GAATTGTCAA GTGAAGTACT3201 TCCACCCCCT AGGAAAATGA AGGGACTGTT TTCACAAGCC AAAATTTCTC3251 TTTTTTATAC TGAGGAGCAT GAAATAATGA AGTTTTCCTG GAGAGGTGTG3301 ACTGCTGATA CTAGAGCTTT AAGGAGGTTT GGATTCTCTT TGGCCGCAGG3351 CAGAAGTGTG TGGACTCTTG AAATGGATGC TGGGGTTCTT ACTGGGAGAC3401 TGATTAGATT GAATGATGAG AAATGGACAG AAATGAAGGA TGACAAGATT3451 GTTTCATTGA TTGAAAAGTT TACAAGTAAC AAATATTGGT CCAAAGTGAA3501 TTTCCCACAT GGGATGTTGG ATCTTGAAGA AATTGCTGCC AATTCTAAGG3551 ATTTTCCTAA CATATCTGAA ACGGATTTGT GTTTCTTGCT GCATTGGTTA3601 AATCCAAAGA AAATTAATTT AGCAGATAGA ATGCTTGGAT TGTCTGGAGT3651 TCAGGAAATT AAAGAACAAG GTGTTGGATT AATAGCAGAG TGTAGAACTT3701 TCTTAGATTC TATTGCTGGA ACTTTAAAAT CTATGATGTT TGGATTTCAT3751 CATTCTGTGA CTGTTGAAAT TATAAACACT GTGCTCTGTT TTGTTAAGAG3801 TGGAATTTTG CTTTATGTAA TACAACAATT GAATCAGGAT GAACATTCTC3851 ACATAATTGG TTTGTTGAGA GTCATGAATT ATGTAGATAT TGGTTGTTCA3901 GTTATTTCAT GTGCCAAAGT TTTTTCCAAA ATGCTGGAAA CAGTCTTTAA3951 TTGGCAAATG GACTCCAGAA TGATGGAGTT AAGGACTCAG AGTTTTTCCA4001 ACTGGTTAAG AGATATTTGT TCTGGGATCA CCATTTTCAA AAACTTCAAG4051 GATGCAATTT ATTGGCTTTA TACAAAATTA ATGGACTTTT ATGAAGTGAA4101 TTATGGCAAG AAGAAGGACA TTTTAAATAT TCTTAAAGAT AACCAACAAA4151 AAATAGAGAA AGCCATTGAG GAAGCCGATA AATTTTGCAT TTTGCAAATC4201 CAAGATGTGG AAAAATCTGA ACAGTATCAG AAAGGGGTTG ACTTGATACA4251 AAAATTGAGA ACTGTTCATT CAATGGCTCA GGTTGATCCA AATTTAATGG4301 TTCATTTGTC ACCTTTGAGA GATTGTATAG CAAGAGTTCA TCAGAAACTT4351 AAAAACCTTG GATCTATAAA TCAGGCAATG GTAACGAGAT GTGAGCCAGT4401 TCTTTGTTAT TTATATGGCA AAAGAGGGGG AGGAAAGAGC TTAACATCAA4451 TTGCATTGGC AACCAAAATT TGTAAACATT ATGGTGTTGA GCCTGAAAAG4501 AATATCTATA CTAAACCTGT GGCTTCAGAT TACTGGGATG GATATAGTGG4551 ACAATTAATT TGCATCATTG ATGATATTGG CCAAAACACA ACAGATGAGG4601 ATTGGTCAGA TTTTTGTCAG TTAGTGTCAG GATGTCCAAT GAGATTAAAC4651 ATGGCCTCTC TTGAGGAGAA GGGTAGGCAT TTTTCTTCTC CTTTTATAAT4701 AGCAACTTCA AATTGGTCAA ATCCGAGTCC AAAAACAGTT TATGTTAAGG4751 AAGCAATTGA CCGCAGACTC CATTTCAAGG TTGAAGTTAA ACCTGCTTCA4801 TTTTTCAAAA ATCCTCACAA TGATATGTTG AATGTTAATT TAGCTAAAAC4851 AAATGATGCA ATCAAAGATA TGTCTTGTGT TGATTTGATA ATGGATGGAC4901 ATAATGTTTC ATTGATGGAT TTGCTCAGTT CTTTAGTCAT GACAGTTGAA4951 ATTAGAAAAC AAAACATGAC TGAATTCATG GAGTTGTGGT CTCAGGGAAT5001 TTCAGATGAT GATAATGATA GTGCAGTAGC TGAGTTTTTC CAGTCTTTTC5051 CATCTGGTGA ACCATCGAAC TCTAAATTAT TTGGCTTTTT CCAATCCGTT5101 ACTAATCACA AGTGGGTTGC TGTGGGAGCT GCAGTTGGCA TTCTTGGAGT5151 GCTCGTTGGA GGATGGTTTG TGTATAAGCA TTTCTCCTGC AAAGAGGAAG5201 AACCAATCCC AGCTGAAGGG GTATATTATG GTGTAACTAA GCCCAAGCAA5251 GTGATTAAAT TAGATGCAGA TCCAGTAGAA TCTCAGTCAA CTTTGGAAAT5301 AGCAGGACTG GTTAGGAAGA ACTTGGTTCA GTTTGGAGTT GGAGAGAAGA5351 ATGGATGTGT GAGATGGGTT ATGAATGCCT TGGGAGTGAA AGATGATTGG5401 CTGCTTGTGC CTTCCCATGC TTATAAATTT GAGAAAGATT ATGAAATGAT5451 GGAGTTTTAT TTTAATAGAG GTGGAACTTA CTATTCAATT TCAGCTGGTA5501 ATGTTGTTAT TCAATCTTTG GATGTGGGAT TCCAGGATGT TGTTCTGATG5551 AAGGTTCCTA CAATTCCTAA GTTTAGAGAT ATTACTCAGC ATTTTATTAA5601 GAAAGGGGAT GTGCCTAGAG CTTTGAATCG CCTGGCAACA TTAGTGACAA5651 CTGTAAATGG AACCCCTATG TTAATTTCTG AGGGCCCACT AAAGATGGAA5701 GAGAAAGCTA CTTATGTTCA TAAGAAAAAT GATGGTACAG CAGTTGATTT5751 AACTGTGGAT CAGGCATGGA GAGGAAAAGG CGAAGGTCTT CCTGGAATGT5801 GTGGTGGGGC CTTGGTTTCA TCGAATCAAT CTATACAGAA TGCAATCTTG5851 GGCATCCATG TTGCTGGAGG AAATTCAATT CTTGTTGCAA AATTGGTTAC5901 TCAAGAAATG TTCCAAAATA TTGATAAGAA AATTGAAAGT CAGAGAATTA5951 TGAAAGTGGA GTTTACTCAG TGTTCAATGA ATGTGGTCTC CAAAACGCTT6001 TTTAGAAAGA GTCCCATTTA TCATCACATT GATAAAACCA TGATTAATTT6051 TCCTGCAGTT ATGCCCTTTT ATAAAGCTGA AATTGATCCA ATGGCTGTGA6101 TGTTATCTAA GTATTCATTA CCTATTGTAG AAGAACCAGA GAATTATAAA6151 GAGGCTTCAA TTTTTTATCA AAATAAAATA GTGGGTAAGA CTCAGTTAGT6201 TGATGATTTT CTAGATCTTG ATATGGCCAT TACAGGGGCC CCAGGAATTG6251 ATGCTATCAA CATGGATTCA TCTCCTGGAT TTCCGTATGT CCAGGAGAAG6301 TTGACCAAAA GAGATTTAAT TTGGTTGGAT GAAAATGGTT TATTGCTGGG6351 AGTTCATCCA AGATTGGCTC AGAGAATCTT ATTCAATACT GTCATGATGG6401 AAAATTGTTC TGATTTGGAT GTTGTTTTTA CAACCTGTCC AAAAGATGAA6451 TTGAGACCAT TAGAGAAAAT GTTGGAATCA AAAACAAGAG CTATTGATGC6501 TTGTCCTCTG GATTACACAA TTTTGTGCCG AATGTATTGG GGTCCAGCTA6551 TTAGTTATTT TCATTTGAAT CCAGGTTTCC ATACAGGTGT TGCTATTGGC6601 ATAGATCCTG GTAGACAGTG GGATGAATTA TTTAAAACAA TGATAAGATT6651 CGGAGATGTT GGTCTTGATT TAGATTTCTC TGCTTTTGAT GCTAGTCTTA6701 GTCCATTTAT GATTAGAGAA GCAGGTAGAA TCATGAGTGA ACTATCTGGA6751 ACTCCATCCC ATTTTGGCAC AGCTCTTATC AATACTATCA TTTATTCCAA6801 GCATTCGCTG TATAACTGTT GTTACCATGT CTGTGGTTCA ATGCCCTCTG6851 GGTCTCCTTG TACAGCTTTG CTAAATTCAA TTATTAATAA TGTCAATTTG6901 TATTATGTGT TTTCCAAGAT ATTTGGAAAG TCTCCAGTTT TCTTTTGTCA6951 GGCTTTGAAG ATTCTCTGTT ATGGAGATGA TGTTTTAATA GTTTTCTCTC7001 GAGATGTTCA GATTGATAAT CTTGATCTGA TTGGACAAAA AATTGTAGAT7051 GAGTTTAAGA AACTTGGCAT GACAGCTACT TCTGCTGACA AGAATGTACC7101 TCAGCTGAAA CCAGTTTCGG AATTGACTTT TCTCAAAAGA TCTTTCAATT7151 TGGTAGAGGA TAGAATTAGA CCTGCAATTT CGGAAAAAAC AATTTGGTCT7201 TTAATAGCAT GGCAGAGAAG TAACACTGAG TTTGAGCAGA ATTTAGAAAT7251 TGCTCAGTGG TTTGCTTTTA TGCATGGCTA TGAGTTTTAT CAGAAATTTT7301 ATTATTTTGT TCAGTCCTGT TTGGAGAAAG AGATGATAGA ATACAGACTT7351 AAATCTTATG ATTGGTGGAG AATGAGATTT TATGACCAGT GTTTCATTTG7401 TGACCTTTCA TGATTTGTTT AAATGAATCT TCTTAAAATT TCTGAGGTTT7451 GTTTATTTCT TTTATTAGTA AATAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAA3’7473＞
权利要求
1.一种经人体大规模使用证明安全有效的甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，其特征是病毒经纯化，病毒核糖核酸(RNA)提取，cDNA合成，PCR，分子克隆，脱氧核糖核酸(DNA)序列分析，获得甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的cDNA序列，命名为HAV-H2。
2.根据权利要求1所述的序列，其特征是序列由7473个核苷酸的基因组和一个多聚腺嘌呤核苷酸(PolyA)尾组成。
3.根据权利要求1或2所述的序列，其特征互补脱氧核糖核酸序列如下HAV-H2 Length7494 September 23，1994 11:46 TypeN Check802 ..5’1 TTCAAGAGGG GTCTCCGGGA ATTTCCGGAG TCCCTCTTGG AAGTCCATGG51 TGAGGGGACT TGATACCTCA CCGCCGTTTG CCTAGGCTAT AGGCTAAATT101 TTCCCTTTCC CTTTTCCCTT TCCCATTCCG TTTTGCTTGT AAATATTGAT151 TCCTGCAGGT TCAGGGTTCT TAAATCTGTT TCTCTATAAG AACACTCATT201 TTCACGCTTT CTGTCTTCTT TCTTCCAGGG CTCTCCCCTT GCCCTAGGCT251 CTGGCCGTTG CGCCCGGCGG GGTCAACTCC ATGATTAGCA TGGAGCTGTA301 GGAGTCTAAA TTGGGGACAC AGATGTTTGG AACGTCACCT TGCAGTGTTA351 ACTTGGCTTT CATGAATCTC TTTGATCTTC CACAAGGGGT AGGCTACGGG401 TGAAACCTCT TAGGCTAATA CTTCTATGAA GAGATGCCTT GGATAGGGTA451 ACAGCGGCGG ATATTGGTGA GTTGTTAAGA CAAAAACCAT TCAACGCCGG501 AGGACTGACT CTCATCCAGT GGATGCATTG AGTGGATTGA CTGTCAGGGC551 TGTCTTTAGG CTTAATTCCA GACCTCTCTG TGCTTAGGGC AAACATCATT601 TGGCCTTAAA TGGGATTCTG TGAGAGGGGA TCCCTCCATT AACAGCTGGA651 CTGTTCTTTG GGGCCTTATG TGGTGTTTGC CGCTGAGGTA CTCAGGGGCA701 TTTAGGTTTT TCCTCATTCT TAAATAATAA TGAACATGTC TAGACAAGGT751 ATTTTCCAGA CTGTTGGGAG TGGTCTTGAC CACATCCTGT CTTTGGCAGA801 CATTGAGGAA GAGCAAATGA TTCAATCAGT TGATAGGACT GCAGTGACTG851 GTGCTTCTTA TTTTACTTCT GTGGATCAAT CTTCAGTTCA TACAGCTGAG901 GTTGGATCAC ACCAGGTTGA ACCTTTGAGA ACGTCTGTTG ATAAACCCGG951 TTCAAAGAGG ACTCAGGGAG AGAAATTTTT CTTGATTCAT TCTGCAGATT1001 GGCTTACTAG ACATGCTCTT TTCCATGAAG TTGCAAAATT GGATGTGGTG1051 AAATTATTAT ACAATGAGCA GTTTGCTGTT CAAGGGTTGT TGAGATACCA1101 TACATATGCA AGATTTGGCA TTGAAATTCA AGTTCAGATA AACCCTACAC1151 CTTTCCAACA GGGGGGATTG ATCTGTGCTA TGGTTCCTGG TGACCAGAGC1201 TATGGTTCTA TAGCATCATT GACTGTTTAT CCTCATGGTT TGTTAAATTG1251 CAATATTAAC AATGTGGTTA GAATAAAGGT TCCATTTATT TACACAAGAG1301 GTGCTTACCA CTTTAAAGAT CCACAATACC CAGTTTGGGA ATTGACAATT1351 AGAGTTTGGT CAGAATTAAA TATTGGGACA GGAACTTCAG CTTATACTTC1401 ACTCAATGTT TTAGCTAGAT TTACAGATTT GGAGTTGCAT GGATTAACTC1451 CTCTTTCTAC ACAAATGATG AGAAATGAAT TTAGGGTCAG TACTACTGAG1501 AATGTGGTGA ATCTGTCAAA TTATGAAGAT GCAAGAGCAA AGATGTCTTT1551 TGCTTTGGAT CAGGAAGATT GGAAATCTGA TCCGTCCCAG GGTGGTGGGA1601 TCAAAATTAC TCATTTTACT ACTTGGACAT CTATTCCAAC TTTGGCTGCT1651 CAGTTTCCAT TTAATGCTTC AGACTCAGTT GGTCAACAAA TTAAAGTTAT1701 TCCAGTTGAC CCATATTTTT TCCAAATGAC AAATACAAAT CCTGACCAAA1751 AATGTATAAC TGCTTTGGCT TCTATTTGTC AGATGTTTTG TTTTTGGAGA1801 GGAGATCTTG TCTTTGATTT TCAAGTTTTT CCCACCAAAT ATCATTCAGG1851 TAGATTACTG TTTTGTTTTG TTCCTGGCAA TGAGCTAATA GATGTTTCTG1901 GAATCACATT AAAGCAAGCA ACTACTGCTC CTTGTGCAGT AATGGATATT1951 ACAGGAGTGC AGTCAACTTT GAGATTTCGT GTTCCCTGGA TTTCTGACAC2001 TCCTTACAGA GTGAACAGGT ATACAAAGTC AGCACATCAG AAAGGTGAGT2051 ACACTGCCAT TGGGAAGCTT ATTGTGTATT GTTATAACAG ATTGACCTCT2101 CCTTCTAACG TTGCTTCCCA TGTCAGAGTG AATGTTTATC TTTCAGCAAT2151 TAACTTGGAA TGTTTTGCTC CTCTTTATCA TGCTATGGAT GTTACTACAC2201 AAGTTGGAGA TGATTCTGGA GGTTTTTCAA CAACAGTTTC TACAGAACAG2251 AATGTTCCAG ATCCCCAAGT TGGTATAACA ACCATGAAAG ATTTGAAAGG2301 AAAAGCTAAC AGAGGGAAAA TGGATGTTTC AGGAGTACAA GCACCTGTGG2351 GAGCTATCAC AACAATTGAG GATCCAGTTT TAGCAAAGAA AGTACCTGAG2401 ACATTTCCTG AATTGAAACC TGGAGAATCC AGACATACAT CAGATCATAT2451 GTCCATCTAC AAGTTTATGG GAAGGTCTCA TTTCTTGTGC ACTTTTACAT2501 TCAATTCAAA TAATAAAGAG TACACATTTC CTATAACCTT GTCTTCAACC2551 TCTAATCCTC CTCATGGTTT GCCATCAACA CTGAGGTGGT TTTTCAACTT2601 GTTTCAGTTG TATAGAGGGC CTTTAGATCT GACAATTATT ATTACAGGAG2651 CAACTGATGT AGATGGCATG GCCTGGTTCA CTCCAGTAGG TCTTGCCGTT2701 GATACTCCTT GGGTAGAGAA GGAGTCAGCT TTGTCTATTG ACTACAAAAC2751 TGCTCTTGGA GCTGTCAGAT TTAACACAAG GAGAACAGGG AACATTCAGA2801 TTAGATTACC ATGGTATTCT TATTTATATG CTGTGTCTGG AGCACTGGAT2851 GGTTTGGGAG ACAAGACAGA TTCTACATTT GGATTGGTTT CTATTCAGAT2901 TGCAAATTAC AATCATTCTG ATGAATACTT GTCTTTTAGT TGTTATTTGT2951 CTGTCACAGA ACAATCAGAG TTTTATTTTC CCAGAGCTCC ATTGAACTCA3001 AATGCCATGT TATCCACTGT ATCAATGATG AGCAGAATTG CAGCTGGAGA3051 CTTGGAGTCA TCAGTGGATG ATCCTAGATC AGAGGAAGAT AAAAGATTTG3101 AGAGTCATAT AGAATGCAGG AAGCCATATA AAGAACTGAG GTTAGAAGTT3151 GGGAAACAAA GACTCAAGTA TGCTCAGGAA GAATTGTCAA GTGAAGTACT3201 TCCACCCCCT AGGAAAATGA AGGGACTGTT TTCACAAGCC AAAATTTCTC3251 TTTTTTATAC TGAGGAGCAT GAAATAATGA AGTTTTCCTG GAGAGGTGTG3301 ACTGCTGATA CTAGAGCTTT AAGGAGGTTT GGATTCTCTT TGGCCGCAGG3351 CAGAAGTGTG TGGACTCTTG AAATGGATGC TGGGGTTCTT ACTGGGAGAC3401 TGATTAGATT GAATGATGAG AAATGGACAG AAATGAAGGA TGACAAGATT3451 GTTTCATTGA TTGAAAAGTT TACAAGTAAC AAATATTGGT CCAAAGTGAA3501 TTTCCCACAT GGGATGTTGG ATCTTGAAGA AATTGCTGCC AATTCTAAGG3551 ATTTTCCTAA CATATCTGAA ACGGATTTGT GTTTCTTGCT GCATTGGTTA3601 AATCCAAAGA AAATTAATTT AGCAGATAGA ATGCTTGGAT TGTCTGGAGT3651 TCAGGAAATT AAAGAACAAG GTGTTGGATT AATAGCAGAG TGTAGAACTT3701 TCTTAGATTC TATTGCTGGA ACTTTAAAAT CTATGATGTT TGGATTTCAT3751 CATTCTGTGA CTGTTGAAAT TATAAACACT GTGCTCTGTT TTGTTAAGAG3801 TGGAATTTTG CTTTATGTAA TACAACAATT GAATCAGGAT GAACATTCTC3851 ACATAATTGG TTTGTTGAGA GTCATGAATT ATGTAGATAT TGGTTGTTCA3901 GTTATTTCAT GTGCCAAAGT TTTTTCCAAA ATGCTGGAAA CAGTCTTTAA3951 TTGGCAAATG GACTCCAGAA TGATGGAGTT AAGGACTCAG AGTTTTTCCA4001 ACTGGTTAAG AGATATTTGT TCTGGGATCA CCATTTTCAA AAACTTCAAG4051 GATGCAATTT ATTGGCTTTA TACAAAATTA ATGGACTTTT ATGAAGTGAA4101 TTATGGCAAG AAGAAGGACA TTTTAAATAT TCTTAAAGAT AACCAACAAA4151 AAATAGAGAA AGCCATTGAG GAAGCCGATA AATTTTGCAT TTTGCAAATC4201 CAAGATGTGG AAAAATCTGA ACAGTATCAG AAAGGGGTTG ACTTGATACA4251 AAAATTGAGA ACTGTTCATT CAATGGCTCA GGTTGATCCA AATTTAATGG4301 TTCATTTGTC ACCTTTGAGA GATTGTATAG CAAGAGTTCA TCAGAAACTT4351 AAAAACCTTG GATCTATAAA TCAGGCAATG GTAACGAGAT GTGAGCCAGT4401 TCTTTGTTAT TTATATGGCA AAAGAGGGGG AGGAAAGAGC TTAACATCAA4451 TTGCATTGGC AACCAAAATT TGTAAACATT ATGGTGTTGA GCCTGAAAAG4501 AATATCTATA CTAAACCTGT GGCTTCAGAT TACTGGGATG GATATAGTGG4551 ACAATTAATT TGCATCATTG ATGATATTGG CCAAAACACA ACAGATGAGG4601 ATTGGTCAGA TTTTTGTCAG TTAGTGTCAG GATGTCCAAT GAGATTAAAC4651 ATGGCCTCTC TTGAGGAGAA GGGTAGGCAT TTTTCTTCTC CTTTTATAAT4701 AGCAACTTCA AATTGGTCAA ATCCGAGTCC AAAAACAGTT TATGTTAAGG4751 AAGCAATTGA CCGCAGACTC CATTTCAAGG TTGAAGTTAA ACCTGCTTCA4801 TTTTTCAAAA ATCCTCACAA TGATATGTTG AATGTTAATT TAGCTAAAAC4851 AAATGATGCA ATCAAAGATA TGTCTTGTGT TGATTTGATA ATGGATGGAC4901 ATAATGTTTC ATTGATGGAT TTGCTCAGTT CTTTAGTCAT GACAGTTGAA4951 ATTAGAAAAC AAAACATGAC TGAATTCATG GAGTTGTGGT CTCAGGGAAT5001 TTCAGATGAT GATAATGATA GTGCAGTAGC TGAGTTTTTC CAGTCTTTTC5051 CATCTGGTGA ACCATCGAAC TCTAAATTAT TTGGCTTTTT CCAATCCGTT5101 ACTAATCACA AGTGGGTTGC TGTGGGAGCT GCAGTTGGCA TTCTTGGAGT5151 GCTCGTTGGA GGATGGTTTG TGTATAAGCA TTTCTCCTGC AAAGAGGAAG5201 AACCAATCCC AGCTGAAGGG GTATATTATG GTGTAACTAA GCCCAAGCAA5251 GTGATTAAAT TAGATGCAGA TCCAGTAGAA TCTCAGTCAA CTTTGGAAAT5301 AGCAGGACTG GTTAGGAAGA ACTTGGTTCA GTTTGGAGTT GGAGAGAAGA5351 ATGGATGTGT GAGATGGGTT ATGAATGCCT TGGGAGTGAA AGATGATTGG5401 CTGCTTGTGC CTTCCCATGC TTATAAATTT GAGAAAGATT ATGAAATGAT5451 GGAGTTTTAT TTTAATAGAG GTGGAACTTA CTATTCAATT TCAGCTGGTA5501 ATGTTGTTAT TCAATCTTTG GATGTGGGAT TCCAGGATGT TGTTCTGATG5551 AAGGTTCCTA CAATTCCTAA GTTTAGAGAT ATTACTCAGC ATTTTATTAA5601 GAAAGGGGAT GTGCCTAGAG CTTTGAATCG CCTGGCAACA TTAGTGACAA5651 CTGTAAATGG AACCCCTATG TTAATTTCTG AGGGCCCACT AAAGATGGAA5701 GAGAAAGCTA CTTATGTTCA TAAGAAAAAT GATGGTACAG CAGTTGATTT5751 AACTGTGGAT CAGGCATGGA GAGGAAAAGG CGAAGGTCTT CCTGGAATGT5801 GTGGTGGGGC CTTGGTTTCA TCGAATCAAT CTATACAGAA TGCAATCTTG5851 GGCATCCATG TTGCTGGAGG AAATTCAATT CTTGTTGCAA AATTGGTTAC5901 TCAAGAAATG TTCCAAAATA TTGATAAGAA AATTGAAAGT CAGAGAATTA5951 TGAAAGTGGA GTTTACTCAG TGTTCAATGA ATGTGGTCTC CAAAACGCTT6001 TTTAGAAAGA GTCCCATTTA TCATCACATT GATAAAACCA TGATTAATTT6051 TCCTGCAGTT ATGCCCTTTT ATAAAGCTGA AATTGATCCA ATGGCTGTGA6101 TGTTATCTAA GTATTCATTA CCTATTGTAG AAGAACCAGA GAATTATAAA6151 GAGGCTTCAA TTTTTTATCA AAATAAAATA GTGGGTAAGA CTCAGTTAGT6201 TGATGATTTT CTAGATCTTG ATATGGCCAT TACAGGGGCC CCAGGAATTG6251 ATGCTATCAA CATGGATTCA TCTCCTGGAT TTCCGTATGT CCAGGAGAAG6301 TTGACCAAAA GAGATTTAAT TTGGTTGGAT GAAAATGGTT TATTGCTGGG6351 AGTTCATCCA AGATTGGCTC AGAGAATCTT ATTCAATACT GTCATGATGG6401 AAAATTGTTC TGATTTGGAT GTTGTTTTTA CAACCTGTCC AAAAGATGAA6451 TTGAGACCAT TAGAGAAAAT GTTGGAATCA AAAACAAGAG CTATTGATGC6501 TTGTCCTCTG GATTACACAA TTTTGTGCCG AATGTATTGG GGTCCAGCTA6551 TTAGTTATTT TCATTTGAAT CCAGGTTTCC ATACAGGTGT TGCTATTGGC6601 ATAGATCCTG GTAGACAGTG GGATGAATTA TTTAAAACAA TGATAAGATT6651 CGGAGATGTT GGTCTTGATT TAGATTTCTC TGCTTTTGAT GCTAGTCTTA6701 GTCCATTTAT GATTAGAGAA GCAGGTAGAA TCATGAGTGA ACTATCTGGA6751 ACTCCATCCC ATTTTGGCAC AGCTCTTATC AATACTATCA TTTATTCCAA6801 GCATTCGCTG TATAACTGTT GTTACCATGT CTGTGGTTCA ATGCCCTCTG6851 GGTCTCCTTG TACAGCTTTG CTAAATTCAA TTATTAATAA TGTCAATTTG6901 TATTATGTGT TTTCCAAGAT ATTTGGAAAG TCTCCAGTTT TCTTTTGTCA6951 GGCTTTGAAG ATTCTCTGTT ATGGAGATGA TGTTTTAATA GTTTTCTCTC7001 GAGATGTTCA GATTGATAAT CTTGATCTGA TTGGACAAAA AATTGTAGAT7051 GAGTTTAAGA AACTTGGCAT GACAGCTACT TCTGCTGACA AGAATGTACC7101 TCAGCTGAAA CCAGTTTCGG AATTGACTTT TCTCAAAAGA TCTTTCAATT7151 TGGTAGAGGA TAGAATTAGA CCTGCAATTT CGGAAAAA C AATTTGGTCT7201 TTAATAGCAT GGCAGAGAAG TAACACTGAG TTTGAGCAGA ATTTAGAAAT7251 TGCTCAGTGG TTTGCTTTTA TGCATGGCTA TGAGTTTTAT CAGAAATTTT7301 ATTATTTTGT TCAGTCCTGT TTGGAGAAAG AGATGATAGA ATACAGACTT7351 AAATCTTATG ATTGGTGGAG AATGAGATTT TATGACCAGT GTTTCATTTG7401 TGACCTTTCA TGATTTGTTT AAATGAATCT TCTTAAAATT TCTGAGGTTT7451 GTTTATTTCT TTTATTAGTA AATAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAA 3’7473＞
全文摘要
本发明是一种甲肝病毒的核苷酸序列，特别是用于预防人类甲型肝炎的减毒活疫苗株(H
文档编号C07H21/04GK1105668SQ94113640
公开日1995年7月26日 申请日期1994年11月18日 优先权日1994年11月18日
发明者陈勇, 毛江森, 柴少爱, 洪艳, 杨能宇 申请人:浙江省医学科学院
技术领域：
本发明是一种甲肝病毒的核苷酸序列，特别是用于预防人类甲型肝炎的减毒活疫苗株(H2减毒株)的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，命名为HAV-H2。
甲型肝炎是世界性传染病，它是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的，全世界约40亿人受到威胁。在中国，35岁以上成年人中，甲肝受染率达90％，常引起季节性流行。由于该病的高发病率及较长的病程，给人民健康及经济发展带来严重影响。根据我国现实情况，控制甲肝流行的有效和根本的措施在于发展疫苗，而疫苗的关键是良好的减毒株。
美国MERCK公司Provost等人于1986年曾报告获得甲肝病毒F’减毒株，美国NIH的Purcell等人也于1987年报告获得甲肝病毒HM175/7MK-5减毒株，但人试结果证明，免疫效果很差，故至今未有进一步扩大人试的工作。
浙江省医学科学院病毒病研究所经过多年努力，成功地研制出甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)，并经大量人群接种证明确可用于预防甲肝的传染，为控制该病流行提供最有效的措施，该甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)已于1993年获得中国专利。
本发明的目的是搞清疫苗株(H2减毒株)的全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，通过与现有的甲肝病毒cDNA序列相比较，从而搞清疫苗株序列的突变位点，为用人工突变等基因工程方法研制新型甲肝疫苗创造条件。该疫苗株cDNA序列的阐明，还有利于对疫苗株遗传稳定性的掌握及指导疫苗株的选育，还有利于了解疫苗株与野毒株病毒基因的特异性区别，为疫苗的遗传稳定性研究提供分析方法。另外，通过比较分析研究，还有利于对甲肝病毒减毒机理的了解，为今后用基因工程手段研制快速生长、高滴度、高抗原性的新型、优良的甲肝病毒减毒活疫苗提供科学依据。
本发明是在成功地研制成甲肝减毒活疫苗(H2减毒株)的基础上，对该疫苗株进行分子生物学研究。
采用疫苗株(H2减毒株)为毒种，接种到已基本长满的单层人胚肺二倍体细胞(KMB17)。在35℃～36℃培养增殖28天后，收获细胞，再经冻融，超声，氯化铯超速离心等，获得纯化的甲肝减毒株(H2减毒株)病毒，该病毒再经胍盐/热酚法提取病毒核糖核酸(RNA)，用cDNA合成药盒配合多聚酶链反应(PCR)技术，以及分子克隆技术获得甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的cDNA基因库。最后用DNA序列分析药盒，双脱氧末端终止法，对已有的cDNA克隆进行序列分析，再通过拼接，从而获得完整的H2减毒株cDNA序列(RAV-H2)，它由7473个核苷酸的基因组和一个多聚腺嘌呤核苷酸(PolyA)尾组成。
疫苗株(H2减毒株)的基因组由7473个核苷酸组成，与美国HM175野毒株cDNA序列[Journal of Virology 1987；61(1)50～59]相比，其5’-非编码区有两处缺失，可能与病毒减毒有关，另外，两者还存在一些散在的核苷酸变异，分布于整个基因组，这也可能与病毒减毒有关。
因为甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)是世界上第一株经大量人群接种证明安全有效的疫苗株，因此，该疫苗株全长cDNA序列的阐明，有利于搞清疫苗株的突变位点，有利于对其遗传稳定性的掌握和疫苗的鉴别区分，有利于了解疫苗株与野毒株病毒基因的特异性区别，为疫苗的减毒提供理论依据。另外，通过比较分析研究，还有利于对甲肝病毒减毒机理了解，为今后用人工诱变等基因工程方法获得甲肝病毒减毒活疫苗提供理论依据，因而具有很大的社会效益和经济效益。
实施例采用甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)为毒种，接种到已基本长满的单层人胚肺二倍体细胞(KMB17)，在35℃培养增殖28天后，收获细胞，含病毒的细胞经冻融、超声、氯化铯、超速离心，获得纯化的甲肝减毒株(H2减毒株)病毒，该减毒株病毒再经胍盐热酚法提取病毒RNA，用cDNA合成药盒，多聚酶链反应(PCR)技术以及分子克隆技术获得甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的cDNA基因库。最后用DNA序列分析药盒，双脱氧末端终止法，对已有的cDNA克隆进行序列分析，再通过拼接，从而获得完整的甲型肝炎减毒活疫苗毒株(H2减毒株)的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，命名为HAV-H2，全长如下………………HAV-H2 Length7494 September 23，1994 11:46 TypeN Check802 ..5’1 TTCAAGAGGG GTCTCCGGGA ATTTCCGGAG TCCCTCTTGG AAGTCCATGG51 TGAGGGGACT TGATACCTCA CCGCCGTTTG CCTAGGCTAT AGGCTAAATT101 TTCCCTTTCC CTTTTCCCTT TCCCATTCCC TTTTGCTTGT AAATATTGAT151 TCCTGCAGGT TCAGGGTTCT TAAATCTGTT TCTCTATAAG AACACTCATT201 TTCACGCTTT CTGTCTTCTT TCTTCCAGGG CTCTCCCCTT GCCCTAGGCT251 CTGGCCGTTG CGCCCGGCGG GGTCAACTCC ATGATTAGCA TGGAGCTGTA301 GGAGTCTAAA TTGGGGACAC AGATGTTTGG AACGTCACCT TGCAGTGTTA351 ACTTGGCTTT CATGAATCTC TTTGATCTTC CACAAGGGGT AGGCTACGGG401 TGAAACCTCT TAGGCTAATA CTTCTATGAA GAGATGCCTT GGATAGGGTA451 ACAGCGGCGG ATATTGGTGA GTTGTTAAGA CAAAAACCAT TCAACGCCGG501 AGGACTGACT CTCATCCAGT GGATGCATTG AGTGGATTGA CTGTCAGGGC551 TGTCTTTAGG CTTAATTCCA GACCTCTCTG TGCTTAGGGC AAACATCATT601 TGGCCTTAAA TGGGATTCTG TGAGAGGGGA TCCCTCCATT AACAGCTGGA651 CTGTTCTTTG GGGCCTTATG TGGTGTTTGC CGCTGAGGTA CTCAGGGGCA701 TTTAGGTTTT TCCTCATTCT TAAATAATAA TGAACATGTC TAGACAAGGT751 ATTTTCCAGA CTGTTGGGAG TGGTCTTGAC CACATCCTGT CTTTGGCAGA801 CATTGAGGAA GAGCAAATGA TTCAATCAGT TGATAGGACT GCAGTGACTG851 GTGCTTCTTA TTTTACTTCT GTGGATCAAT GTTCAGTTCA TACAGCTGAG901 GTTGGATCAC ACCAGGTTGA ACCTTTGAGA ACCTCTGTTG ATAAACCCGG951 TTCAAAGAGG ACTCAGGGAG AGAAATTTTT CTTGATTCAT TCTGCAGATT1001 GGCTTACTAC ACATGCTCTT TTCCATGAAG TTGCAAAATT GGATGTGGTG1051 AAATTATTAT ACAATGAGCA GTTTGCTGTT CAAGGGTTGT TGAGATACCA1101 TACATATGCA AGATTTGGCA TTGAAATTCA AGTTCAGATA AACCCTACAC1151 CTTTCCAACA GGGGGGATTG ATCTGTGCTA TGGTTCCTGG TGACCAGAGC1201 TATGGTTCTA TAGCATCATT GACTGTTTAT CCTCATGGTT TGTTAAATTG1251 CAATATTAAC AATGTGGTTA GAATAAAGGT TCCATTTATT TACACAAGAG1301 GTGCTTACCA CTTTAAAGAT CCACAATACC CAGTTTGGGA ATTGACAATT1351 AGAGTTTGGT CAGAATTAAA TATTGGGACA GGAACTTCAG CTTATACTTC1401 ACTCAATGTT TTAGCTAGAT TTACAGATTT GGAGTTGCAT GGATTAACTC1451 CTCTTTCTAC ACAAATGATG AGAAATGAAT TTAGGGTCAG TACTACTGAG1501 AATGTGGTGA ATCTGTCAAA TTATGAAGAT GCAAGAGCAA AGATGTCTTT1551 TGCTTTGGAT CAGGAAGATT GGAAATCTGA TCCGTCCCAG GGTGGTGGGA1601 TCAAAATTAC TCATTTTACT ACTTGGACAT CTATTCCAAC TTTGGCTGCT1651 CAGTTTCCAT TTAATGCTTC AGACTCAGTT GGTCAACAAA TTAAAGTTAT1701 TCCAGTTGAC CCATATTTTT TCCAAATGAC AAATACAAAT CCTGACCAAA1751 AATGTATAAC TGCTTTGGCT TCTATTTGTC AGATGTTTTG TTTTTGGAGA1801 GGAGATCTTG TCTTTGATTT TCAAGTTTTT CCCACCAAAT ATCATTCAGG1851 TAGATTACTG TTTTGTTTTG TTCCTGGCAA TGAGCTAATA GATGTTTCTG1901 GAATCACATT AAAGCAAGCA ACTACTGCTC CTTGTGCAGT AATGGATATT1951 ACAGGAGTGC AGTCAACTTT GAGATTTCGT GTTCCCTGGA TTTCTGACAC2001 TCCTTACAGA GTGAACAGGT ATACAAAGTC AGCACATCAG AAAGGTGAGT2051 ACACTGCCAT TGGGAAGCTT ATTGTGTATT GTTATAACAG ATTGACCTCT2101 CCTTCTAACG TTGCTTCCCA TGTCAGAGTG AATGTTTATC TTTCAGCAAT2151 TAACTTGGAA TGTTTTGCTC CTCTTTATCA TGCTATGGAT GTTACTACAC2201 AAGTTGGAGA TGATTCTGGA GGTTTTTCAA CAACAGTTTC TACAGAACAG2251 AATGTTCCAG ATCCCCAAGT TGGTATAACA ACCATGAAAG ATTTGAAAGG2301 AAAAGCTAAC AGAGGGAAAA TGGATGTTTC AGGAGTACAA GCACCTGTGG2351 GAGCTATCAC AACAATTGAG GATCCAGTTT TAGCAAAGAA AGTACCTGAG2401 ACATTTCCTG AATTGAAACC TGGAGAATCC AGACATACAT CAGATCATAT2451 GTCCATCTAC AAGTTTATGG GAAGGTCTCA TTTCTTGTGC ACTTTTACAT2501 TCAATTCAAA TAATAAAGAG TACACATTTC CTATAACCTT GTCTTCAACC2551 TCTAATCCTC CTCATGGTTT GCCATCAACA CTGAGGTGGT TTTTCAACTT2601 GTTTCAGTTG TATAGAGGGC CTTTAGATCT GACAATTATT ATTACAGGAG2651 CAACTGATGT AGATGGCATG GCCTGGTTCA CTCCAGTAGG TCTTGCCGTT2701 GATACTCCTT GGGTAGAGAA GGAGTCAGCT TTGTCTATTG ACTACAAAAC2751 TGCTCTTGGA GCTGTCAGAT TTAACACAAG GAGAACAGGG AACATTCAGA2801 TTAGATTACC ATGGTATTCT TATTTATATG CTGTGTCTGG AGCACTGGAT2851 GGTTTGGGAG ACAAGACAGA TTCTACATTT GGATTGGTTT CTATTCAGAT2901 TGCAAATTAC AATCATTCTG ATGAATACTT GTCTTTTAGT TGTTATTTGT2951 CTGTCACAGA ACAATCAGAG TTTTATTTTC CCAGAGCTCC ATTGAACTCA3001 AATGCCATGT TATCCACTGT ATCAATGATG AGCAGAATTG CAGCTGGAGA3051 CTTGGAGTCA TCAGTGGATG ATCCTAGATC AGAGGAAGAT AAAAGATTTG3101 AGAGTCATAT AGAATGCAGG AAGCCATATA AAGAACTGAG GTTAGAAGTT3151 GGGAAACAAA GACTCAAGTA TGCTCAGGAA GAATTGTCAA GTGAAGTACT3201 TCCACCCCCT AGGAAAATGA AGGGACTGTT TTCACAAGCC AAAATTTCTC3251 TTTTTTATAC TGAGGAGCAT GAAATAATGA AGTTTTCCTG GAGAGGTGTG3301 ACTGCTGATA CTAGAGCTTT AAGGAGGTTT GGATTCTCTT TGGCCGCAGG3351 CAGAAGTGTG TGGACTCTTG AAATGGATGC TGGGGTTCTT ACTGGGAGAC3401 TGATTAGATT GAATGATGAG AAATGGACAG AAATGAAGGA TGACAAGATT3451 GTTTCATTGA TTGAAAAGTT TACAAGTAAC AAATATTGGT CCAAAGTGAA3501 TTTCCCACAT GGGATGTTGG ATCTTGAAGA AATTGCTGCC AATTCTAAGG3551 ATTTTCCTAA CATATCTGAA ACGGATTTGT GTTTCTTGCT GCATTGGTTA3601 AATCCAAAGA AAATTAATTT AGCAGATAGA ATGCTTGGAT TGTCTGGAGT3651 TCAGGAAATT AAAGAACAAG GTGTTGGATT AATAGCAGAG TGTAGAACTT3701 TCTTAGATTC TATTGCTGGA ACTTTAAAAT CTATGATGTT TGGATTTCAT3751 CATTCTGTGA CTGTTGAAAT TATAAACACT GTGCTCTGTT TTGTTAAGAG3801 TGGAATTTTG CTTTATGTAA TACAACAATT GAATCAGGAT GAACATTCTC3851 ACATAATTGG TTTGTTGAGA GTCATGAATT ATGTAGATAT TGGTTGTTCA3901 GTTATTTCAT GTGCCAAAGT TTTTTCCAAA ATGCTGGAAA CAGTCTTTAA3951 TTGGCAAATG GACTCCAGAA TGATGGAGTT AAGGACTCAG AGTTTTTCCA4001 ACTGGTTAAG AGATATTTGT TCTGGGATCA CCATTTTCAA AAACTTCAAG4051 GATGCAATTT ATTGGCTTTA TACAAAATTA ATGGACTTTT ATGAAGTGAA4101 TTATGGCAAG AAGAAGGACA TTTTAAATAT TCTTAAAGAT AACCAACAAA4151 AAATAGAGAA AGCCATTGAG GAAGCCGATA AATTTTGCAT TTTGCAAATC4201 CAAGATGTGG AAAAATCTGA ACAGTATCAG AAAGGGGTTG ACTTGATACA4251 AAAATTGAGA ACTGTTCATT CAATGGCTCA GGTTGATCCA AATTTAATGG4301 TTCATTTGTC ACCTTTGAGA GATTGTATAG CAAGAGTTCA TCAGAAACTT4351 AAAAACCTTG GATCTATAAA TCAGGCAATG GTAACGAGAT GTGAGCCAGT4401 TCTTTGTTAT TTATATGGCA AAAGAGGGGG AGGAAAGAGC TTAACATCAA4451 TTGCATTGGC AACCAAAATT TGTAAACATT ATGGTGTTGA GCCTGAAAAG4501 AATATCTATA CTAAACCTGT GGCTTCAGAT TACTGGGATG GATATAGTGG4551 ACAATTAATT TGCATCATTG ATGATATTGG CCAAAACACA ACAGATGAGG4601 ATTGGTCAGA TTTTTGTCAG TTAGTGTCAG GATGTCCAAT GAGATTAAAC4651 ATGGCCTCTC TTGAGGAGAA GGGTAGGCAT TTTTCTTCTC CTTTTATAAT4701 AGCAACTTCA AATTGGTCAA ATCCGAGTCC AAAAACAGTT TATGTTAAGG4751 AAGCAATTGA CCGCAGACTC CATTTCAAGG TTGAAGTTAA ACCTGCTTCA4801 TTTTTCAAAA ATCCTCACAA TGATATGTTG AATGTTAATT TAGCTAAAAC4851 AAATGATGCA ATCAAAGATA TGTCTTGTGT TGATTTGATA ATGGATGGAC4901 ATAATGTTTC ATTGATGGAT TTGCTCAGTT CTTTAGTCAT GACAGTTGAA4951 ATTAGAAAAC AAAACATGAC TGAATTCATG GAGTTGTGGT CTCAGGGAAT5001 TTCAGATGAT GATAATGATA GTGCAGTAGC TGAGTTTTTC CAGTCTTTTC5051 CATCTGGTGA ACCATCGAAC TCTAAATTAT TTGGCTTTTT CCAATCCGTT5101 ACTAATCACA AGTGGGTTGC TGTGGGAGCT GCAGTTGGCA TTCTTGGAGT5151 GCTCGTTGGA GGATGGTTTG TGTATAAGCA TTTCTCCTGC AAAGAGGAAG5201 AACCAATCCC AGCTGAAGGG GTATATTATG GTGTAACTAA GCCCAAGCAA5251 GTGATTAAAT TAGATGCAGA TCCAGTAGAA TCTCAGTCAA CTTTGGAAAT5301 AGCAGGACTG GTTAGGAAGA ACTTGGTTCA GTTTGGAGTT GGAGAGAAGA5351 ATGGATGTGT GAGATGGGTT ATGAATGCCT TGGGAGTGAA AGATGATTGG5401 CTGCTTGTGC CTTCCCATGC TTATAAATTT GAGAAAGATT ATGAAATGAT5451 GGAGTTTTAT TTTAATAGAG GTGGAACTTA CTATTCAATT TCAGCTGGTA5501 ATGTTGTTAT TCAATCTTTG GATGTGGGAT TCCAGGATGT TGTTCTGATG5551 AAGGTTCCTA CAATTCCTAA GTTTAGAGAT ATTACTCAGC ATTTTATTAA5601 GAAAGGGGAT GTGCCTAGAG CTTTGAATCG CCTGGCAACA TTAGTGACAA5651 CTGTAAATGG AACCCCTATG TTAATTTCTG AGGGCCCACT AAAGATGGAA5701 GAGAAAGCTA CTTATGTTCA TAAGAAAAAT GATGGTACAG CAGTTGATTT5751 AACTGTGGAT CAGGCATGGA GAGGAAAAGG CGAAGGTCTT CCTGGAATGT5801 GTGGTGGGGC CTTGGTTTCA TCGAATCAAT CTATACAGAA TGCAATCTTG5851 GGCATCCATG TTGCTGGAGG AAATTCAATT CTTGTTGCAA AATTGGTTAC5901 TCAAGAAATG TTCCAAAATA TTGATAAGAA AATTGAAAGT CAGAGAATTA5951 TGAAAGTGGA GTTTACTCAG TGTTCAATGA ATGTGGTCTC CAAAACGCTT6001 TTTAGAAAGA GTCCCATTTA TCATCACATT GATAAAACCA TGATTAATTT6051 TCCTGCAGTT ATGCCCTTTT ATAAAGCTGA AATTGATCCA ATGGCTGTGA6101 TGTTATCTAA GTATTCATTA CCTATTGTAG AAGAACCAGA GAATTATAAA6151 GAGGCTTCAA TTTTTTATCA AAATAAAATA GTGGGTAAGA CTCAGTTAGT6201 TGATGATTTT CTAGATCTTG ATATGGCCAT TACAGGGGCC CCAGGAATTG6251 ATGCTATCAA CATGGATTCA TCTCCTGGAT TTCCGTATGT CCAGGAGAAG6301 TTGACCAAAA GAGATTTAAT TTGGTTGGAT GAAAATGGTT TATTGCTGGG6351 AGTTCATCCA AGATTGGCTC AGAGAATCTT ATTCAATACT GTCATGATGG6401 AAAATTGTTC TGATTTGGAT GTTGTTTTTA CAACCTGTCC AAAAGATGAA6451 TTGAGACCAT TAGAGAAAAT GTTGGAATCA AAAACAAGAG CTATTGATGC6501 TTGTCCTCTG GATTACACAA TTTTGTGCCG AATGTATTGG GGTCCAGCTA6551 TTAGTTATTT TCATTTGAAT CCAGGTTTCC ATACAGGTGT TGCTATTGGC6601 ATAGATCCTG GTAGACAGTG GGATGAATTA TTTAAAACAA TGATAAGATT6651 CGGAGATGTT GGTCTTGATT TAGATTTCTC TGCTTTTGAT GCTAGTCTTA6701 GTCCATTTAT GATTAGAGAA GCAGGTAGAA TCATGAGTGA ACTATCTGGA6751 ACTCCATCCC ATTTTGGCAC AGCTCTTATC AATACTATCA TTTATTCCAA6801 GCATTCGCTG TATAACTGTT GTTACCATGT CTGTGGTTCA ATGCCCTCTG6851 GGTCTCCTTG TACAGCTTTG CTAAATTCAA TTATTAATAA TGTCAATTTG6901 TATTATGTGT TTTCCAAGAT ATTTGGAAAG TCTCCAGTTT TCTTTTGTCA6951 GGCTTTGAAG ATTCTCTGTT ATGGAGATGA TGTTTTAATA GTTTTCTCTC7001 GAGATGTTCA GATTGATAAT CTTGATCTGA TTGGACAAAA AATTGTAGAT7051 GAGTTTAAGA AACTTGGCAT GACAGCTACT TCTGCTGACA AGAATGTACC7101 TCAGCTGAAA CCAGTTTCGG AATTGACTTT TCTCAAAAGA TCTTTCAATT7151 TGGTAGAGGA TAGAATTAGA CCTGCAATTT CGGAAAAAAC AATTTGGTCT7201 TTAATAGCAT GGCAGAGAAG TAACACTGAG TTTGAGCAGA ATTTAGAAAT7251 TGCTCAGTGG TTTGCTTTTA TGCATGGCTA TGAGTTTTAT CAGAAATTTT7301 ATTATTTTGT TCAGTCCTGT TTGGAGAAAG AGATGATAGA ATACAGACTT7351 AAATCTTATG ATTGGTGGAG AATGAGATTT TATGACCAGT GTTTCATTTG7401 TGACCTTTCA TGATTTGTTT AAATGAATCT TCTTAAAATT TCTGAGGTTT7451 GTTTATTTCT TTTATTAGTA AATAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAA3’7473＞
权利要求
1.一种经人体大规模使用证明安全有效的甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列，其特征是病毒经纯化，病毒核糖核酸(RNA)提取，cDNA合成，PCR，分子克隆，脱氧核糖核酸(DNA)序列分析，获得甲肝病毒减毒活疫苗株(H2减毒株)的cDNA序列，命名为HAV-H2。
2.根据权利要求1所述的序列，其特征是序列由7473个核苷酸的基因组和一个多聚腺嘌呤核苷酸(PolyA)尾组成。
3.根据权利要求1或2所述的序列，其特征互补脱氧核糖核酸序列如下HAV-H2 Length7494 September 23，1994 11:46 TypeN Check802 ..5’1 TTCAAGAGGG GTCTCCGGGA ATTTCCGGAG TCCCTCTTGG AAGTCCATGG51 TGAGGGGACT TGATACCTCA CCGCCGTTTG CCTAGGCTAT AGGCTAAATT101 TTCCCTTTCC CTTTTCCCTT TCCCATTCCG TTTTGCTTGT AAATATTGAT151 TCCTGCAGGT TCAGGGTTCT TAAATCTGTT TCTCTATAAG AACACTCATT201 TTCACGCTTT CTGTCTTCTT TCTTCCAGGG CTCTCCCCTT GCCCTAGGCT251 CTGGCCGTTG CGCCCGGCGG GGTCAACTCC ATGATTAGCA TGGAGCTGTA301 GGAGTCTAAA TTGGGGACAC AGATGTTTGG AACGTCACCT TGCAGTGTTA351 ACTTGGCTTT CATGAATCTC TTTGATCTTC CACAAGGGGT AGGCTACGGG401 TGAAACCTCT TAGGCTAATA CTTCTATGAA GAGATGCCTT GGATAGGGTA451 ACAGCGGCGG ATATTGGTGA GTTGTTAAGA CAAAAACCAT TCAACGCCGG501 AGGACTGACT CTCATCCAGT GGATGCATTG AGTGGATTGA CTGTCAGGGC551 TGTCTTTAGG CTTAATTCCA GACCTCTCTG TGCTTAGGGC AAACATCATT601 TGGCCTTAAA TGGGATTCTG TGAGAGGGGA TCCCTCCATT AACAGCTGGA651 CTGTTCTTTG GGGCCTTATG TGGTGTTTGC CGCTGAGGTA CTCAGGGGCA701 TTTAGGTTTT TCCTCATTCT TAAATAATAA TGAACATGTC TAGACAAGGT751 ATTTTCCAGA CTGTTGGGAG TGGTCTTGAC CACATCCTGT CTTTGGCAGA801 CATTGAGGAA GAGCAAATGA TTCAATCAGT TGATAGGACT GCAGTGACTG851 GTGCTTCTTA TTTTACTTCT GTGGATCAAT CTTCAGTTCA TACAGCTGAG901 GTTGGATCAC ACCAGGTTGA ACCTTTGAGA ACGTCTGTTG ATAAACCCGG951 TTCAAAGAGG ACTCAGGGAG AGAAATTTTT CTTGATTCAT TCTGCAGATT1001 GGCTTACTAG ACATGCTCTT TTCCATGAAG TTGCAAAATT GGATGTGGTG1051 AAATTATTAT ACAATGAGCA GTTTGCTGTT CAAGGGTTGT TGAGATACCA1101 TACATATGCA AGATTTGGCA TTGAAATTCA AGTTCAGATA AACCCTACAC1151 CTTTCCAACA GGGGGGATTG ATCTGTGCTA TGGTTCCTGG TGACCAGAGC1201 TATGGTTCTA TAGCATCATT GACTGTTTAT CCTCATGGTT TGTTAAATTG1251 CAATATTAAC AATGTGGTTA GAATAAAGGT TCCATTTATT TACACAAGAG1301 GTGCTTACCA CTTTAAAGAT CCACAATACC CAGTTTGGGA ATTGACAATT1351 AGAGTTTGGT CAGAATTAAA TATTGGGACA GGAACTTCAG CTTATACTTC1401 ACTCAATGTT TTAGCTAGAT TTACAGATTT GGAGTTGCAT GGATTAACTC1451 CTCTTTCTAC ACAAATGATG AGAAATGAAT TTAGGGTCAG TACTACTGAG1501 AATGTGGTGA ATCTGTCAAA TTATGAAGAT GCAAGAGCAA AGATGTCTTT1551 TGCTTTGGAT CAGGAAGATT GGAAATCTGA TCCGTCCCAG GGTGGTGGGA1601 TCAAAATTAC TCATTTTACT ACTTGGACAT CTATTCCAAC TTTGGCTGCT1651 CAGTTTCCAT TTAATGCTTC AGACTCAGTT GGTCAACAAA TTAAAGTTAT1701 TCCAGTTGAC CCATATTTTT TCCAAATGAC AAATACAAAT CCTGACCAAA1751 AATGTATAAC TGCTTTGGCT TCTATTTGTC AGATGTTTTG TTTTTGGAGA1801 GGAGATCTTG TCTTTGATTT TCAAGTTTTT CCCACCAAAT ATCATTCAGG1851 TAGATTACTG TTTTGTTTTG TTCCTGGCAA TGAGCTAATA GATGTTTCTG1901 GAATCACATT AAAGCAAGCA ACTACTGCTC CTTGTGCAGT AATGGATATT1951 ACAGGAGTGC AGTCAACTTT GAGATTTCGT GTTCCCTGGA TTTCTGACAC2001 TCCTTACAGA GTGAACAGGT ATACAAAGTC AGCACATCAG AAAGGTGAGT2051 ACACTGCCAT TGGGAAGCTT ATTGTGTATT GTTATAACAG ATTGACCTCT2101 CCTTCTAACG TTGCTTCCCA TGTCAGAGTG AATGTTTATC TTTCAGCAAT2151 TAACTTGGAA TGTTTTGCTC CTCTTTATCA TGCTATGGAT GTTACTACAC2201 AAGTTGGAGA TGATTCTGGA GGTTTTTCAA CAACAGTTTC TACAGAACAG2251 AATGTTCCAG ATCCCCAAGT TGGTATAACA ACCATGAAAG ATTTGAAAGG2301 AAAAGCTAAC AGAGGGAAAA TGGATGTTTC AGGAGTACAA GCACCTGTGG2351 GAGCTATCAC AACAATTGAG GATCCAGTTT TAGCAAAGAA AGTACCTGAG2401 ACATTTCCTG AATTGAAACC TGGAGAATCC AGACATACAT CAGATCATAT2451 GTCCATCTAC AAGTTTATGG GAAGGTCTCA TTTCTTGTGC ACTTTTACAT2501 TCAATTCAAA TAATAAAGAG TACACATTTC CTATAACCTT GTCTTCAACC2551 TCTAATCCTC CTCATGGTTT GCCATCAACA CTGAGGTGGT TTTTCAACTT2601 GTTTCAGTTG TATAGAGGGC CTTTAGATCT GACAATTATT ATTACAGGAG2651 CAACTGATGT AGATGGCATG GCCTGGTTCA CTCCAGTAGG TCTTGCCGTT2701 GATACTCCTT GGGTAGAGAA GGAGTCAGCT TTGTCTATTG ACTACAAAAC2751 TGCTCTTGGA GCTGTCAGAT TTAACACAAG GAGAACAGGG AACATTCAGA2801 TTAGATTACC ATGGTATTCT TATTTATATG CTGTGTCTGG AGCACTGGAT2851 GGTTTGGGAG ACAAGACAGA TTCTACATTT GGATTGGTTT CTATTCAGAT2901 TGCAAATTAC AATCATTCTG ATGAATACTT GTCTTTTAGT TGTTATTTGT2951 CTGTCACAGA ACAATCAGAG TTTTATTTTC CCAGAGCTCC ATTGAACTCA3001 AATGCCATGT TATCCACTGT ATCAATGATG AGCAGAATTG CAGCTGGAGA3051 CTTGGAGTCA TCAGTGGATG ATCCTAGATC AGAGGAAGAT AAAAGATTTG3101 AGAGTCATAT AGAATGCAGG AAGCCATATA AAGAACTGAG GTTAGAAGTT3151 GGGAAACAAA GACTCAAGTA TGCTCAGGAA GAATTGTCAA GTGAAGTACT3201 TCCACCCCCT AGGAAAATGA AGGGACTGTT TTCACAAGCC AAAATTTCTC3251 TTTTTTATAC TGAGGAGCAT GAAATAATGA AGTTTTCCTG GAGAGGTGTG3301 ACTGCTGATA CTAGAGCTTT AAGGAGGTTT GGATTCTCTT TGGCCGCAGG3351 CAGAAGTGTG TGGACTCTTG AAATGGATGC TGGGGTTCTT ACTGGGAGAC3401 TGATTAGATT GAATGATGAG AAATGGACAG AAATGAAGGA TGACAAGATT3451 GTTTCATTGA TTGAAAAGTT TACAAGTAAC AAATATTGGT CCAAAGTGAA3501 TTTCCCACAT GGGATGTTGG ATCTTGAAGA AATTGCTGCC AATTCTAAGG3551 ATTTTCCTAA CATATCTGAA ACGGATTTGT GTTTCTTGCT GCATTGGTTA3601 AATCCAAAGA AAATTAATTT AGCAGATAGA ATGCTTGGAT TGTCTGGAGT3651 TCAGGAAATT AAAGAACAAG GTGTTGGATT AATAGCAGAG TGTAGAACTT3701 TCTTAGATTC TATTGCTGGA ACTTTAAAAT CTATGATGTT TGGATTTCAT3751 CATTCTGTGA CTGTTGAAAT TATAAACACT GTGCTCTGTT TTGTTAAGAG3801 TGGAATTTTG CTTTATGTAA TACAACAATT GAATCAGGAT GAACATTCTC3851 ACATAATTGG TTTGTTGAGA GTCATGAATT ATGTAGATAT TGGTTGTTCA3901 GTTATTTCAT GTGCCAAAGT TTTTTCCAAA ATGCTGGAAA CAGTCTTTAA3951 TTGGCAAATG GACTCCAGAA TGATGGAGTT AAGGACTCAG AGTTTTTCCA4001 ACTGGTTAAG AGATATTTGT TCTGGGATCA CCATTTTCAA AAACTTCAAG4051 GATGCAATTT ATTGGCTTTA TACAAAATTA ATGGACTTTT ATGAAGTGAA4101 TTATGGCAAG AAGAAGGACA TTTTAAATAT TCTTAAAGAT AACCAACAAA4151 AAATAGAGAA AGCCATTGAG GAAGCCGATA AATTTTGCAT TTTGCAAATC4201 CAAGATGTGG AAAAATCTGA ACAGTATCAG AAAGGGGTTG ACTTGATACA4251 AAAATTGAGA ACTGTTCATT CAATGGCTCA GGTTGATCCA AATTTAATGG4301 TTCATTTGTC ACCTTTGAGA GATTGTATAG CAAGAGTTCA TCAGAAACTT4351 AAAAACCTTG GATCTATAAA TCAGGCAATG GTAACGAGAT GTGAGCCAGT4401 TCTTTGTTAT TTATATGGCA AAAGAGGGGG AGGAAAGAGC TTAACATCAA4451 TTGCATTGGC AACCAAAATT TGTAAACATT ATGGTGTTGA GCCTGAAAAG4501 AATATCTATA CTAAACCTGT GGCTTCAGAT TACTGGGATG GATATAGTGG4551 ACAATTAATT TGCATCATTG ATGATATTGG CCAAAACACA ACAGATGAGG4601 ATTGGTCAGA TTTTTGTCAG TTAGTGTCAG GATGTCCAAT GAGATTAAAC4651 ATGGCCTCTC TTGAGGAGAA GGGTAGGCAT TTTTCTTCTC CTTTTATAAT4701 AGCAACTTCA AATTGGTCAA ATCCGAGTCC AAAAACAGTT TATGTTAAGG4751 AAGCAATTGA CCGCAGACTC CATTTCAAGG TTGAAGTTAA ACCTGCTTCA4801 TTTTTCAAAA ATCCTCACAA TGATATGTTG AATGTTAATT TAGCTAAAAC4851 AAATGATGCA ATCAAAGATA TGTCTTGTGT TGATTTGATA ATGGATGGAC4901 ATAATGTTTC ATTGATGGAT TTGCTCAGTT CTTTAGTCAT GACAGTTGAA4951 ATTAGAAAAC AAAACATGAC TGAATTCATG GAGTTGTGGT CTCAGGGAAT5001 TTCAGATGAT GATAATGATA GTGCAGTAGC TGAGTTTTTC CAGTCTTTTC5051 CATCTGGTGA ACCATCGAAC TCTAAATTAT TTGGCTTTTT CCAATCCGTT5101 ACTAATCACA AGTGGGTTGC TGTGGGAGCT GCAGTTGGCA TTCTTGGAGT5151 GCTCGTTGGA GGATGGTTTG TGTATAAGCA TTTCTCCTGC AAAGAGGAAG5201 AACCAATCCC AGCTGAAGGG GTATATTATG GTGTAACTAA GCCCAAGCAA5251 GTGATTAAAT TAGATGCAGA TCCAGTAGAA TCTCAGTCAA CTTTGGAAAT5301 AGCAGGACTG GTTAGGAAGA ACTTGGTTCA GTTTGGAGTT GGAGAGAAGA5351 ATGGATGTGT GAGATGGGTT ATGAATGCCT TGGGAGTGAA AGATGATTGG5401 CTGCTTGTGC CTTCCCATGC TTATAAATTT GAGAAAGATT ATGAAATGAT5451 GGAGTTTTAT TTTAATAGAG GTGGAACTTA CTATTCAATT TCAGCTGGTA5501 ATGTTGTTAT TCAATCTTTG GATGTGGGAT TCCAGGATGT TGTTCTGATG5551 AAGGTTCCTA CAATTCCTAA GTTTAGAGAT ATTACTCAGC ATTTTATTAA5601 GAAAGGGGAT GTGCCTAGAG CTTTGAATCG CCTGGCAACA TTAGTGACAA5651 CTGTAAATGG AACCCCTATG TTAATTTCTG AGGGCCCACT AAAGATGGAA5701 GAGAAAGCTA CTTATGTTCA TAAGAAAAAT GATGGTACAG CAGTTGATTT5751 AACTGTGGAT CAGGCATGGA GAGGAAAAGG CGAAGGTCTT CCTGGAATGT5801 GTGGTGGGGC CTTGGTTTCA TCGAATCAAT CTATACAGAA TGCAATCTTG5851 GGCATCCATG TTGCTGGAGG AAATTCAATT CTTGTTGCAA AATTGGTTAC5901 TCAAGAAATG TTCCAAAATA TTGATAAGAA AATTGAAAGT CAGAGAATTA5951 TGAAAGTGGA GTTTACTCAG TGTTCAATGA ATGTGGTCTC CAAAACGCTT6001 TTTAGAAAGA GTCCCATTTA TCATCACATT GATAAAACCA TGATTAATTT6051 TCCTGCAGTT ATGCCCTTTT ATAAAGCTGA AATTGATCCA ATGGCTGTGA6101 TGTTATCTAA GTATTCATTA CCTATTGTAG AAGAACCAGA GAATTATAAA6151 GAGGCTTCAA TTTTTTATCA AAATAAAATA GTGGGTAAGA CTCAGTTAGT6201 TGATGATTTT CTAGATCTTG ATATGGCCAT TACAGGGGCC CCAGGAATTG6251 ATGCTATCAA CATGGATTCA TCTCCTGGAT TTCCGTATGT CCAGGAGAAG6301 TTGACCAAAA GAGATTTAAT TTGGTTGGAT GAAAATGGTT TATTGCTGGG6351 AGTTCATCCA AGATTGGCTC AGAGAATCTT ATTCAATACT GTCATGATGG6401 AAAATTGTTC TGATTTGGAT GTTGTTTTTA CAACCTGTCC AAAAGATGAA6451 TTGAGACCAT TAGAGAAAAT GTTGGAATCA AAAACAAGAG CTATTGATGC6501 TTGTCCTCTG GATTACACAA TTTTGTGCCG AATGTATTGG GGTCCAGCTA6551 TTAGTTATTT TCATTTGAAT CCAGGTTTCC ATACAGGTGT TGCTATTGGC6601 ATAGATCCTG GTAGACAGTG GGATGAATTA TTTAAAACAA TGATAAGATT6651 CGGAGATGTT GGTCTTGATT TAGATTTCTC TGCTTTTGAT GCTAGTCTTA6701 GTCCATTTAT GATTAGAGAA GCAGGTAGAA TCATGAGTGA ACTATCTGGA6751 ACTCCATCCC ATTTTGGCAC AGCTCTTATC AATACTATCA TTTATTCCAA6801 GCATTCGCTG TATAACTGTT GTTACCATGT CTGTGGTTCA ATGCCCTCTG6851 GGTCTCCTTG TACAGCTTTG CTAAATTCAA TTATTAATAA TGTCAATTTG6901 TATTATGTGT TTTCCAAGAT ATTTGGAAAG TCTCCAGTTT TCTTTTGTCA6951 GGCTTTGAAG ATTCTCTGTT ATGGAGATGA TGTTTTAATA GTTTTCTCTC7001 GAGATGTTCA GATTGATAAT CTTGATCTGA TTGGACAAAA AATTGTAGAT7051 GAGTTTAAGA AACTTGGCAT GACAGCTACT TCTGCTGACA AGAATGTACC7101 TCAGCTGAAA CCAGTTTCGG AATTGACTTT TCTCAAAAGA TCTTTCAATT7151 TGGTAGAGGA TAGAATTAGA CCTGCAATTT CGGAAAAA C AATTTGGTCT7201 TTAATAGCAT GGCAGAGAAG TAACACTGAG TTTGAGCAGA ATTTAGAAAT7251 TGCTCAGTGG TTTGCTTTTA TGCATGGCTA TGAGTTTTAT CAGAAATTTT7301 ATTATTTTGT TCAGTCCTGT TTGGAGAAAG AGATGATAGA ATACAGACTT7351 AAATCTTATG ATTGGTGGAG AATGAGATTT TATGACCAGT GTTTCATTTG7401 TGACCTTTCA TGATTTGTTT AAATGAATCT TCTTAAAATT TCTGAGGTTT7451 GTTTATTTCT TTTATTAGTA AATAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAA 3’7473＞
全文摘要
本发明是一种甲肝病毒的核苷酸序列，特别是用于预防人类甲型肝炎的减毒活疫苗株(H
文档编号C07H21/04GK1105668SQ94113640
公开日1995年7月26日 申请日期1994年11月18日 优先权日1994年11月18日
发明者陈勇, 毛江森, 柴少爱, 洪艳, 杨能宇 申请人:浙江省医学科学院
起点商标作为专业知识产权交易平台，可以帮助大家解决很多问题，如果大家想要了解更多知产交易信息请点击 【在线咨询】或添加微信 【19522093243】
与客服一对一沟通，为大家解决相关问题。
此文章来源于网络,如有侵权,请联系删除
热门咨询
tips