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2021-02-01 10:02:52|
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起点商标网 专利名称：维生素d3类似物的制作方法
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本发明涉及通式Ⅰ的化合物，其中R为氢、 羟基或氟，X为两个氢原子或亚甲基，23，24位双键为E或Z。这些化合物是治疗皮肤增生亢进性疾病，例如牛皮癣;治疗和预防癌症，例如白血病;治疗和预防肿瘤，以及治疗皮脂腺疾病，例如粉刺和脂溢性皮炎的有效药物。
通式Ⅰ的化合物可以高度有效地促进人角化细胞分化并减少增生。这样，这些化合物是皮肤增生性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化疾患和角化失调等疾病的有效治疗药物。这些化合物也是预防和治疗癌症，例如白血病的有用药物。此外，它们还是抗肿瘤药，可以治疗和预防肿瘤，例如乳腺瘤。它们也可以用来治疗皮脂腺疾病，例如脂溢性皮炎。
本发明还涉及药用组合物，该组合物含有效量的通式Ⅰ化合物，或含有效量通式Ⅰ的两种或更多化合物的混合物，也涉及使用通式Ⅰ的化合物制造治疗和预防上述疾病的药物制剂。
本发明的通式Ⅰ的例证性化合物有26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-双烯-19-去甲基胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23Z-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-25-羟基-16，23Z-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23Z-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23Z-双烯-19-去甲基胆钙化甾醇;
在通式Ⅰ中，R最好是羟基或氟。
通式Ⅰ的优选的化合物有26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23E-双烯胆钙化甾醇;和26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二烃基-16，23E-双烯-19-去甲基胆钙化甾醇。
通式Ⅰ的化合物按后面描述的方法制备，以下面的反应路线作为特定参考，从对应的用硅烷基保护羟基的化合物中除去硅烷保护基。
在路线1中，已知的通式Ⅱ的化合物在甲醇钠一类的碱催化下用氢化锂铝一类的还原剂还原，转变为通式Ⅲ的反式类似物。该反应在醚类溶剂，例如四氢呋喃、于大约0℃至100℃下进行。在Lindlar催化剂催化下，在乙酸乙酯、己烷和乙醇的混合溶剂中，通式Ⅱ化合物被氧化转变为通式Ⅲ的顺式类似物。
在氯代烷类溶剂，例如二氯甲烷中，在室温下，通式Ⅲ的顺式或反式类似物与吡啶铬酸盐反应，分别生成通式Ⅳ的顺式或反式类似物。
在四氢呋喃和己烷的混合溶剂中，在-75℃下，通式Ⅳ的反式类似物与正丁基锂及通式Ⅴ或通式Ⅵ的化合物反应，然后以四氢呋喃作溶剂，用氟化四丁基铵脱硅烷保持基，得到反式的通式Ⅰa的化合物。
在路线Ⅱ中，其中23，24位双键或为E或为Z的通式Ⅳ的化合物在二氯甲烷中，于室温下与三甲基硅烷咪唑反应，得到通式Ⅶ的化合物，其中23，24位双键或为对应的E或为对应的Z。
在己烷和四氢呋喃的混合溶剂中，在-75℃下，通式Ⅶ的顺式或反式化合物与正丁基锂及通式Ⅷ的已知化合物反应，然后在四氢呋喃中用氟化四丁基铵脱硅烷保护基，分别得到顺式的通式Ⅰc或反式的通式Ⅰd的化合物。
在路线Ⅲ中，在己烷和四氢呋喃的混合溶剂中，在-75℃下，通式Ⅶ的化合物的顺式类似物与正丁基锂及通式Ⅴ的化合物反应，然后在四氢呋喃中用氟化四丁基铵脱硅烷保护基，得到通式Ⅰe或Ⅰf的化合物，Ⅰe是通式Ⅰa化合物的顺式类似物，Ⅰf是通式Ⅰb化合物的顺式类似物。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以口服，用来治疗治疗癌症，例如白血病，以及用来治疗肿瘤，例如乳腺癌、子宫颈癌、以及黑色素瘤。凡是需要这类治疗的患者均可服用。更特别的是，在治疗白血病一类的癌症和治疗乳腺癌、子宫颈癌及黑色素瘤一类的肿瘤时，上面描述的通式Ⅰ的化合物的人口服剂量范围是每天大约0.1至100μg。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以有效量口服，用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣，基底细胞癌，角化细胞疾患以及角质化，凡是需要这类治疗的患者均可服用。在治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化细胞疾患以及角质化时，人的口服剂量范围最好是每天大约0.001至100μg。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以局部使用有效量，用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化细胞异常如角化疾病，凡是需要这类治疗的患者均可使用。在治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化细胞异常和角化疾病时，人局部给药的最佳剂量范围是大约每天每克局部剂型含0.01至100μg通式Ⅰ的化合物。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以使用有效量局部使用，用来治疗皮脂腺疾病，例如粉刺以及脂溢性皮炎，凡是需要这类治疗的患者均可使用。在治疗皮脂腺疾病，例如粉刺以及脂溢性皮炎时，人局部给药的最佳剂量范围是大约第天每克局部剂型含0.1至1000μg通式Ⅰ的化合物。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以有效量口服，用来治疗皮脂腺疾病，例如脂溢性皮炎，凡是需要这类治疗的患者均可服用。在治疗皮脂腺疾病，例如粉刺时，人口服给药的最佳剂量范围大约是每天0.07至770μg，每天0.7至70μg则更好。
通式Ⅰ的化合物作为肿瘤治疗药，特别是治疗乳腺癌的有用活性，可以用下述测定方法加以证实，这些测定方法都是文献已知的。
四唑MTT试验T47-O(乳腺导管癌)细胞在用10μg/ml牛胰岛素和10%胎牛血清(FBS)补充的RPMI-1640介质中培养。
MCF-7(乳腺癌)细胞在用人体不必须的氨式酸，1mM丙酮酸钠，10μg/ml牛胰岛素和10%FBS补充的介质中生长。
细胞在适宜的介质中生长至log后期(大约80%融合)。然后T47-O或MCF-7细胞胰蛋白酶化并接种至分别为4000或2000个细胞/孔上。
接种24小时后，在相同介质中制备溶有药物的乙醇的系列稀释液，并且每种浓度加至三个相同的皿中，终浓度为1.000至0.1nM和0.1%乙醇。加药后的第3至第7天，往各皿中加入50μl 5mg/mlMTT溶液[溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑的磷酸盐-缓冲的生理盐水溶液]，并于37℃继续培养2.5小时。然后接种皿在离心机中以800×g转速简短旋转5分钟，从皿中吸走介质，并加入50μl EtoH/孔以溶解用MTT培养期间形成的甲 。振摇15分钟后，在570和660nm波长下用自动读极仪测定每块皿的表面密度。通过比较用待测化合物和仅用0.1%乙醇处理的细胞的表面密度，计算细胞生长的百分抑制率。以Reed和Muench公式(Am.J.Hyg.27493-497，1938)确定IC50值，下面给出两套独立的实验结果
表中数据表明被测化合物对人乳腺癌细胞株有抗增殖活性。
通式1化合物治疗皮肤增生亢进性疾患的活性通过下述测定方法证实，这种测定方法的文献已知，亦为Holuk等阐明，见于The Society for Investigative Dermatology，p，708-714(1986)。
人角化细胞抗增生测定细胞人体新生角化细胞的初级或第一代亚融合培养物在接需用抗菌素或氯化钙补充的角化细胞生长介质(KGM 改进的MCDB153，Clonetics，Inc.目录号CC3001)中生长。采用标准方法由新生包皮上皮角化细胞制得培养物。
培养条件通过包皮切割手术收集人新生包皮，置入含10%血清的Dulbecco′s最小必须介质的管中。到达实验室后，用机械方法修整去除过量的真皮，并用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)(0.05%/0.02%)溶液于4℃处理过夜。从真皮上剥离表真皮，在缓冲生理盐水中搅以除去基底角化细胞，随后除去角质层。分离的细胞离心、再悬浮到介质中，计数，并按Boyce和Ham发展的方法把细胞植入到塑料培养盘或板上的KGM介质中(见In vitro Models for Cancer Research Ⅲ，246-274，(1986)for MCDB153Media)。培养物在含5%CO2的加湿室中于37℃培养，每周更换介质2至3次。在融合完成前，培养的细胞再植入(称1期)到六孔为一组的盘中的KGM介质中，植入数为25000个细胞/每孔。
抗增生实验记录传代24小时后，细胞再供给含有试验化合物或赋形剂的1.5mMCaCl2补充的新鲜KGM介质。试验化合物的溶液按下法制备放1mg样品于琥珀玻璃小瓶中于-20℃储存。直接往小瓶中加足够量乙醇制成毫摩尔的溶液，然后分装到小的琥珀瓶中，上方充氩气，并于-20℃储存。每份溶液熔融1次，用后弃去。每份溶液于4至6周内使用。从每份溶液中分出的等份溶液直接稀释到介质中，然后连续地由微摩尔浓度稀释为微微摩尔浓度。典型测试是化合物在三份一组的孔中，测定4种不同的浓度。对照孔只用最高浓度赋形剂，例如0.1%乙醇补充。在细胞达到融合前的实验末尾，细胞按以下方法计数。盘子用磷酸盐缓冲的生理盐水洗，然后用胰蛋白酶/EDTA溶液培养30分钟。细胞悬浮后等份地放入等渗的缓冲生理盐水中，在电子颗粒计数器上计数。计数器定期校正角化细胞的正确体积。每孔都按3份计数。按照使用的稀释因子计算细胞数/孔，结果用对照实验得到的细胞数的百分抑制率表示。结果列入表Ⅱ。
1，25-二羟基-胆钙化甾醇抑制的平均ED50(与对照比较抑制50%细胞数所需的剂量)为300nM。1α，25-二羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟-胆钙化甾醇抑制的平均ED50的2nM。
通式Ⅰ化合物作为抗癌药，例如抗白血病药物的活性可用下述实验阐明。
HL-60分化实验HL-60肿瘤细胞株原始来自早幼粒细胞白血病病人，自American Type Culture(ATCC CCL240)。该细胞用以谷氨酰胺、抗菌素和20%加热失活的新生牛血清(FBS)补充的RPMI1640介质(Gibco目录＃320-1875)保持悬浮。用于实验的细胞在25cm2的器皿中接种，0.9×106个细胞/25cm2，器皿中的介质用0.25mM维生素C钠盐补充。加入待测化合物，总共培养4天，典型的测试是使用5种不同浓度，每种浓度都重复两个器皿。所有化合物都按下述方法操作。每份溶液都用乙醇配制成10-3M，存于琥珀玻璃小瓶，充氩气，-20℃保存。每份溶液都用介质稀释成指定的浓度。所有的器皿都用0.1%乙醇作为赋形剂加以补充。对照器皿仅用0.1%乙醇作为赋形剂加以补充。器皿在5%CO2中37℃直接培养4天。第4天，1ml等份的细胞由器皿中取出离心10分钟，除去介质后细胞再悬浮于含0.2ml氮兰四唑/佛波醇12-肉豆冠酸酯13-乙酸盐的溶液(NTB/TPA)的介质中，该介质于计数之日按下法配制。将氮兰四唑溶于介质中，使成1mg/ml。往该溶液中加TPA，使终浓度为100mg/ml。该溶液保存在用冰冷却的带益小瓶中。在转移到冰中之前，细胞悬浮并于37℃培养30分钟。除去等份溶液后，细胞用血细胞计数器计数。不含色素颗粒的细胞视为未分化细胞，而含兰黑甲 (指示NBT转化)颗粒的细胞视为分化细胞。计算计数细胞总数中黑细胞数占的百分数，作为百分分化率，结果见于表Ⅲ。
表Ⅲ阳性百分数近似化合物剂量细胞 ED50对照,0.01%乙醇3.01,25-二羟基胆钙化甾醇0.1nM2.00.3nM5.01.0nM3.510.0nM26.025nM100.0nM84.01α,25-二羟基-16,23E-二烯-26,27-六氟一胆钙化甾醇0.1nM6.00.3nM30.51.0nM63.00.6nM10.0nM79.0100.0nM89.5
通式Ⅰ化合物作为治疗皮脂腺疾患，例如粉刺和脂溢性皮炎的药物的有用活性，可以用下述实验方法阐明。
从成人皮脂腺分离皮脂细胞，皮脂腺来自整容手术切除的脸部皮肤。该方法见于Doran et.al，J.Invest.Dermatol，96341-348，1991。获得的细胞在含10%胎牛血清和4μg/ml地塞米松的介质中培养，介质置于停止长生的3T3小鼠成纤细胞层上。
将细胞植入不含试验化合物的介质，在植入后的24-28小时给于含试验化合物的新鲜介质。每48小时都往培养物中给予含试验化合物的新鲜介质。收取细胞之日。培养物用0.03%乙二胺四乙酸(EDTA)的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，仅除去3T3成纤细胞。保留的皮脂细胞群在0.05%胰蛋白酶/0.03%EDTA介质中培养，以便生成皮脂细胞的单细胞悬浮液。细胞稀释，巨烈混合以便保持单细胞悬浮，并用血细胞计数器计数。
所有的化合物均接下述方法操作。每份溶液都用脱气的乙醇制成10-2M溶液，并在黑暗处-20℃保存。不要使用保存超过一月的溶液。实验时将已经分成等份的溶液熔融一次，通过直接稀释到完全的介质中使成合适的浓度而使用。
试验化合物使用下述浓度测体外的皮脂细胞增生抑制作用10-9、10-8、10-7和10-6M。结果列入表Ⅳ，化合物的量与对照比较，抑制50%皮脂细胞增生必需的量(ED50)，以μM表示，对照组仅用赋形剂处理后培养。
表
口服剂型含本发明的通式Ⅰ的化合物，可以装入胶囊，压成片或做成类似剂型，并含有可以药用的载体物质。可以装入胶囊和掺入类似剂型中的可以药用的载体物质可以表述如下粘合剂，例如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶;赋形剂，例如磷酸二钙;崩解剂、例如玉米淀粉，土豆淀粉、藻酸及类似物料;润滑剂，例如硬脂酸镁;甜味剂，例如蔗糖、乳糖或糖精;芳香剂，例如薄荷油、冬青油或樱桃油。各种其它物料可以作为包衣物使用，或者用于修饰剂量单元的物理形态。例如，片剂可以用虫胶、糖，或二者兼用。糖浆剂或酏剂可以含活性化合物，用糖作为甜味剂，用仲斑酸甲酯或丙酯作防腐剂，并使用染料以及芳香剂，例如樱桃或橙香。
由本发明的通式Ⅰ化合物的局部剂型包括软膏和霜剂，它们含有配方中有的油脂性的、可吸收的、水溶性的和无乳化的基质，例如吸水性软石蜡、羊毛脂、聚乙二醇及类似物料。洗剂是液体制剂，可以从简单的溶液变至水性的或水化醇性制剂，并含有高度分散的化合物。洗剂可以含有悬浮剂或分散剂，例如纤维素衍生物，甲基纤维素、乙基纤维素以及类似物料;明胶或树胶，它们掺入列由水、醇或甘油组成的赋形剂中的活性组分内。若把载体赋形剂中的活性组分的悬浮液或溶液凝冻，则得到凝胶，凝胶是半固体制品。赋形剂可以是水性的，也可以无水的，可使用凝胶剂把它们制成凝胶，使用的凝胶剂可以是例如经中和成适宜凝胶稠度的聚亚甲基羧酸，中和用的碱为氢氧化钠和胺类，例如聚乙烯椰子胺。这里使用的“局部”一词是指把掺入到适当的的药用载体中的活性成份应用到炎症部位以发挥局部作用。由此，局部组合物应包括那些能直接与皮肤接触使化合物外用的剂型。局部剂型包括凝胶剂、霜剂、洗剂、软膏剂、粉剂、气雾剂以及其它惯常的用于治疗皮肤病的剂型，这类剂型可通过把通式Ⅰ的化合物与已知的药用局部载体软质混合制得。除用于治疗皮肤病外，本发明的局部组合物还可用于治疗粘液粘膜炎症，这些粘膜只要可与局部应用的药物接触即可生效。例如本发明的局部组合物可用于口腔粘膜或下端结肠。
实施例1[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酚在烧瓶中放入148mg氢化锂铝和6ml无水四氢呋喃。在氩气保护下，搅拌该悬浮液并加入211mg甲醇钠。得到的混合物在冰浴中冷至0℃，然后往里滴加300mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3-炔基]-4H-茚-4-酚与10mml四氢呋喃制备的溶液。加完之后反应混合物加热回流2小时45分钟，然后室温搅拌过夜。反应混合物中加入5ml乙醚后，在冰浴中冷却，并加入0.5ml水和0.5ml10%氢氧化钠溶液进行水解。升温至室温，加入硫酸钠和硫酸镁晶体，反应混合物过滤，滤渣用乙酸乙酯洗。合并滤液，蒸发至干。粗产物用闪式硅胶柱纯化，己烷-乙酸乙酯(3∶1)洗脱。得275mg标题化合物。1H-NMR(CDCl3)d0.98(d，J＝6Hz，3H)，0.99(s，3H)，4.17(s，1H)，5.33(bs，1H)，5.57(d，J＝16Hz，1H)，6.22(dt，J＝7 and 16Hz，1H).
实施例2]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮267mg[3aR-[1(RX)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-醇与8ml无水二氯甲烷制备的溶液与830mg吡啶铬酸盐及42mg吡啶对甲苯磺酸盐反应。混合物搅拌2小时后，再加入260mg吡啶铬酸盐和吡啶对甲苯磺酸盐，反应混合物再反应1.5小时。搅拌期间，加入20ml乙醚，混合物搅拌20分钟，过滤，滤渣用乙醚洗。合并滤液，并依次用冰冷却的1NHCl，水、50ml 2N KHCO3和饱和食盐水洗。水层再用乙醚-乙酸乙酯混合溶剂(1∶1)洗。有机层干燥并蒸发干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，己烷-乙酸乙酯洗脱，得233mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)d0.80(s，3H)，1.08(d，J＝6Hz，3H)，2.84(dd，J＝6 and 11Hz，1H)，5.32(bs，1H)，5.58(d，J＝16Hz，1H)，6.22(dt，J＝7 and 16Hz，1H).
实施例3[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮.
426mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与8ml无水二氯甲烷配制的溶液与1.2ml三甲基硅烷基咪唑反应。反应液在氩气保护下搅拌17小时后加入5ml水，再搅拌20分钟，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥并蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯洗脱，得462mg标题化合物。
实施例41，25-二羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇2.04g[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3，5-双[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与20ml无水四氢呋喃配制的溶液在干冰浴中冷至-78℃，然后在氩气保护下往里滴加2.19ml浓度为1.6M的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，再往里滴加540mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与7ml四氢呋喃配制的溶液，反应混合物搅拌2小时。反应混合物在加入15ml2NRochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1混合物后，使温度降至室温。再加入30ml Rochelle盐/KHCO3混合物后，用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干，得到的2.4g粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(8∶1)洗脱，得410mg1，3二硅烷基氧中间体。该中间体与5ml无水四氢呋喃配制成溶液，在氩气保护下往该溶液中加入4.5ml1N氟化四丁基铵的四氢呋喃溶液，并室温搅拌18小时。往反应混合物中再加2.5ml氟化四丁基铵之后，继续搅拌22小时。加5ml水，搅拌20分钟，然后加25ml饱和食盐水，并用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水洗，干燥并蒸发至干燥。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，己烷-乙酸乙酯洗脱(1∶3)，得270mg白色泡沫状标题化合物。[α]25D+24°(c0.2%，EtoH);UVλmax(EtOH)204nm(ε18200)，262-263nm(ε15900);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.04(d，J＝6.5Hz，3H)，2.61(dd，J＝3 and 13Hz，1H)，2.83(dd，J＝4.5 and 12Hz，1H)，4.24(bs，1H)，4.45(bs，1H)，5.02(s，1H)，5.34(bs，2H)，5.58(d，J＝15.5Hz，1H)，6.11(d，J＝11.5Hz，1H)，6.23(dt，J＝7 and 15.5Hz，1H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H).
元素分析C27H34F6O3理论值C62.30，H6.58;
实测值C62.55，H6.70。
实施例5
25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇按照实施例4中描述的相同方法，使用[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦代替[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3，5-双[[1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦作为A-环前体，可以制得标题化合物。
实施例61α-氟-25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇490mg[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3-氟-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与6ml无水四氢呋喃的溶液在干冰浴中冷至-78℃，然后在氩气保护下往里滴加0.65ml 1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，往里滴加290mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与4.5ml无水四氢呋喃配成的溶液。反应混合物在-78℃搅拌1小时50分钟，然后加10ml 2N Rochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1混合物以终止反应。升温至室温后，加入3ml Rochelle盐/KHCO3，并用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯洗脱(20∶1)，得260mg无定型二硅烷化的中间体。将该260mg二硅烷化中间体溶于4ml无水四氢呋喃中，然后在氩气保护下加入3.5ml 1M浓度的氟化四丁铵的四氢呋喃溶液。反应混合物搅拌23小时。加入5ml水后，再搅拌20分钟，然后加25ml饱和食盐水，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(2∶1)洗脱，并用硅胶柱的HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(3∶2)洗脱，得140mg无定型的标题化合物。[α]25D+22°(c0.2，EtOH);UV(EtOH)λmax241nm(ε13600)，267/268nm(ε13350);1H-NMR(CDCl3)δ0.69(s，3H)，1.04(d，J＝6.5Hz，3H)，2.63(dd，J＝3 and 13.5Hz，1H)，4.23(bs，1H)，5.12(s，1H)，5.16(ddd，J＝50，5 and 7Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.41(s，1H)，5.58(d，J＝15.5Hz，1H)，6.12(d，J＝11.5Hz，1H)，6.23(dt，J＝15.5 and 7Hz，1H)，6.40(d，J＝11.5Hz，1H).
元素分析C27H33F7O2理论值C62.06，H6.37实测值C61.59，H5.89。
实施例71，25-二羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟-19-去甲基胆钙化甾醇
654mg[3R-(3α，5β，Z)-3，5-双[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与9ml无水四氢呋喃配制的溶液在干冰浴中冷至-78℃，然后在氩气保护下往里滴加0.937ml 1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，在10分钟的间隔里往里滴加414mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与5ml无水四氢呋喃配成的溶液。反应混合物在-78℃搅拌1小时45分钟后，加入15ml 2N Rochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1混合物以终止反应，使升温至室温。再加30ml Rochelle盐/KHCO3混合物，并用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，己烷-乙酸乙酯(1∶3)洗脱，得430mg三硅烷化中间体。将该三硅烷化中间体溶于4.5ml无水四氢呋喃，然后在氩气保护下加入4.5ml 1M浓度的氟化四丁铵的无水四氢呋喃溶液。搅拌24小时后，补加2.5ml氟化四丁铵溶液，再搅拌23小时。加5ml水后搅拌20分钟，加25ml饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取。有机层用水饱和食盐水混合物洗，干燥，蒸发至干。粗产品先用闪式硅胶层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(1∶4)洗脱，再用硅胶柱的HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(1∶8)洗脱。得260mg无定型标题化合物。25D+23.5°(c2，EtOH);
UV(EtOH)λmaxsh234/235nm(ε20，600);242nm(ε29，100)，250/251nm(ε34，100)，260nm(ε22，750);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.05(d，J＝6.5Hz，3H)，2.49(dd，J＝2 and 12Hz，1H)，2.77(J＝3 and 12Hz，1H)，2.80(dd，J＝4and12Hz，1H)，4.06(m，1H)，4.13(m，1H)，5.35(s，1H)，5.58(d，J＝16Hz，1H)，5.95(f，J＝11Hz，1H)，6.23(dt，J＝7 and 16Hz，1H)，6.31(d，J＝11Hz，1H).
实施例8[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-醇1.6g[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酚、16ml乙酸乙酯、40ml己烷、1.6ml无水乙醇、80μl喹啉和320mg Lindlar催化剂的混合物通氩气搅拌70分钟。反应混合物过滤，并用乙酸乙酯洗。滤液用1N盐酸及水和饱和食盐水的混合物洗。水层用乙酸乙酯萃取，有机层合并，干燥，蒸发至干。粗产品选用闪式硅胶柱层析纯化，再用HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(3∶1)洗脱，得1.58g无定型标题化合物。
实施例9[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮采用实施例2中描述的相同方法，用[3aR-[1(RX)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酚作原料代替反式类似物，氧化后得到标题化合物，为无定型固体。
实施例10[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷基氧-1-甲基-5-(三氟甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮采用实施例3中描述的相同方法，用[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮为原料代替反式类似物，得到标题化合物，为无定型固体。
实施例111，25-二羟基-16，23Z-二烯-26，27-六氟-19-去甲基胆钙化甾醇采用实施例7中描述的相同方法，用[3aR-[1(R＊)，3aα，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧-1-甲基-5-(三氟甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮为原料代替对应的反式类似物，得到标题化合物。
实施例121，25-二烃基-16，23Z-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇552mg[3s(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3，5-双[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与6ml无水四氢呋喃配制的溶液冷至-78℃，然后在氩气保护下滴加0.578ml1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌数分钟后在10分钟的间隔内往该红色溶液中滴加256mg[3aR-[1(R＊)，3aα，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧-1-甲基-5-(三氟甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮与4.5ml无水四氢呋喃配制的溶液。反应混合物在-78℃搅拌90分钟后，加10ml2NRochelle盐和2N KHCO3溶液1∶1的混合物以终止反应，升温至室温。补加25ml Rochelle盐/KHCO3溶液后，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水混合物洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(20∶1)洗脱，得335mg硅烷化标题化合物。335mg硅烷化中间体与6ml无水四氢呋喃的溶液用3.7ml1M浓度的氟化四丁铵的四氢呋喃溶液处理。反应混合物在氩气保护下搅拌22.5小时。加5ml无水终止反应，搅拌30分钟，蒸去四氢呋喃后加10ml水，用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水混合液洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(1∶2.5)洗脱，得206mg标题化合物。25D+23.5°(c0.2%，EtOH);UV(EtOH)λmax206nm(ε16720)，263nm(ε14690);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.06(d，J＝6.9Hz，3H)，4.24(brm，1H)，4.45(brm，1H)，5.01(s，1H)，5.34(s，1H)，5.42(d，J＝12.5Hz，1H)，5.97(dt，J＝12.5 and 7Hz，1H)，6.11(d，J＝11.4Hz，1H)，6.38(d，J＝11.4Hz，1H).
实施例1325-羟基-16，23Z-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇452mg[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与6ml无水四氢呋喃配制的溶液冷至-78℃，然后在氩气保护下滴加0.625ml1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，在10分钟的间隔里滴加276mg[3aR-[1(R＊)，3aα，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮与4ml无水四氢呋喃配制的溶液。反应混合物在78℃搅拌1小时45分钟，然后加10ml2NRochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1的混合物以终止反应，反应混合物的温度升温至室温。补加30ml Rochelle盐/KHCO3溶液后，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(10∶1)洗脱，得364mg硅烷化的标题化合物。将该364mg硅烷化的中间体溶于4.5ml无水四氢呋喃中，然后在氩气保护下加3.9mg 1M浓度的氟化四丁基铵的四氢呋喃溶液。搅拌18小时，然后加5ml水以终止反应，再搅拌15分钟。加入25ml饱和食盐水后，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用水和饱和食盐水的混合物洗，干燥并蒸发至干。粗产品先用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(5∶2)洗脱，再用HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(2∶1)洗脱。得228mg标题化合物，为无定型固体。
UV(EtOH)λmax204/205nm(ε19800)，263nm(ε17600);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.06(d，J＝6.9Hz，3H)，3.97(brm，1H)，4.83(brm，1H)，5.06(s，1H)，5.37(s，1H)，5.42(d，J＝12.1Hz，1H)，5.97(dt，J＝12.1 and 7Hz，1H)，6.13(d，J＝11Hz，1H)，6.23(d，J＝11Hz，1H)实施例14软质明胶胶囊口服剂型配方mg/胶囊25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇0.0001～0.010丁基化羟基甲苯(BHT)0.016丁基化羟基甲醚(BHA)0.016
精制椰子油(Neobee M-5)160.0实施例15局部用霜剂mg25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇0.001～1.0十六烷醇1.5十八烷醇2.5司盘60(脱水山梨醇单油酸酯)2.0Arlacel 165(单油酸甘油酯和聚氧乙烯基乙二醇油酸酯的掺合物)4.0吐温60(缩聚山梨醇油酸酯60)1.0矿物油4.0丙二醇5.0尼泊索0.05BHA0.05山梨醇溶液2.0依地酸二钠盐0.01尼帕净M0.18重蒸馏水加至100g
权利要求
1.通式Ⅰ的化合物 其中R为氢、羟基或氟，X为H2或=CH2，23，24位双键为E或Z。
2.权利要求1中的化合物，其中R为氢或氟，23，24位双键为E。
3.权利要求1中的化合物为26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-二烯-胆钙化甾醇，26，26，26，27，27，27-六氟-25-二羟基-16，23E-二烯-胆钙化甾醇，26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23E-二烯-胆钙化甾醇，26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-二烯-19-去甲基-胆钙化甾醇。
4.权利要求1、2或3中的化合物用作治疗的活性化合物用于治疗皮肤增生亢进性疾患，例如治疗牛皮癣，治疗癌症，例如治疗白血病，治疗肿瘤，例如治疗乳腺癌，或治疗皮脂腺疾患，例如治疗粉刺。
5.权利要求1中化合物的制备方法，该法包括从对应的羟基用硅烷基保护的化合物中脱去硅烷保护基。
6.药用组合物，特别是用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如治疗牛皮癣，治疗癌症，例如治疗白血病，治疗肿瘤，例如治疗乳腺癌，或治疗皮脂腺疾患，例如治疗粉刺，该类组合物含有效量权力要求1，2或3的化合物和惰性载体。
7.使用权利要求1的化合物制备药用组合物，该组合物用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如治疗牛皮癣，治疗癌症，例如治疗白血病，治疗肿瘤，例如治疗乳腺癌，或治疗皮脂腺疾患，例如治疗粉刺。
全文摘要
通式1的化合物，其中R为氢、羟基或氟，X为H这些化合物通过从对应的羟基用硅烷基保护的化合物中脱去硅烷保护基制备。
文档编号C07C401/00GK1108245SQ9411893
公开日1995年9月13日 申请日期1994年11月23日 优先权日1993年11月24日
发明者T·I·多兰, B·M·亨尼西, J·A·麦克莱恩, G·皮昭拉陶, F·塞达拉逖, M·R·厄斯科卡威 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司
技术领域：
本发明涉及通式Ⅰ的化合物，其中R为氢、 羟基或氟，X为两个氢原子或亚甲基，23，24位双键为E或Z。这些化合物是治疗皮肤增生亢进性疾病，例如牛皮癣;治疗和预防癌症，例如白血病;治疗和预防肿瘤，以及治疗皮脂腺疾病，例如粉刺和脂溢性皮炎的有效药物。
通式Ⅰ的化合物可以高度有效地促进人角化细胞分化并减少增生。这样，这些化合物是皮肤增生性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化疾患和角化失调等疾病的有效治疗药物。这些化合物也是预防和治疗癌症，例如白血病的有用药物。此外，它们还是抗肿瘤药，可以治疗和预防肿瘤，例如乳腺瘤。它们也可以用来治疗皮脂腺疾病，例如脂溢性皮炎。
本发明还涉及药用组合物，该组合物含有效量的通式Ⅰ化合物，或含有效量通式Ⅰ的两种或更多化合物的混合物，也涉及使用通式Ⅰ的化合物制造治疗和预防上述疾病的药物制剂。
本发明的通式Ⅰ的例证性化合物有26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-双烯-19-去甲基胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23Z-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-25-羟基-16，23Z-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23Z-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23Z-双烯-19-去甲基胆钙化甾醇;
在通式Ⅰ中，R最好是羟基或氟。
通式Ⅰ的优选的化合物有26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-双烯胆钙化甾醇;
26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23E-双烯胆钙化甾醇;和26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二烃基-16，23E-双烯-19-去甲基胆钙化甾醇。
通式Ⅰ的化合物按后面描述的方法制备，以下面的反应路线作为特定参考，从对应的用硅烷基保护羟基的化合物中除去硅烷保护基。
在路线1中，已知的通式Ⅱ的化合物在甲醇钠一类的碱催化下用氢化锂铝一类的还原剂还原，转变为通式Ⅲ的反式类似物。该反应在醚类溶剂，例如四氢呋喃、于大约0℃至100℃下进行。在Lindlar催化剂催化下，在乙酸乙酯、己烷和乙醇的混合溶剂中，通式Ⅱ化合物被氧化转变为通式Ⅲ的顺式类似物。
在氯代烷类溶剂，例如二氯甲烷中，在室温下，通式Ⅲ的顺式或反式类似物与吡啶铬酸盐反应，分别生成通式Ⅳ的顺式或反式类似物。
在四氢呋喃和己烷的混合溶剂中，在-75℃下，通式Ⅳ的反式类似物与正丁基锂及通式Ⅴ或通式Ⅵ的化合物反应，然后以四氢呋喃作溶剂，用氟化四丁基铵脱硅烷保持基，得到反式的通式Ⅰa的化合物。
在路线Ⅱ中，其中23，24位双键或为E或为Z的通式Ⅳ的化合物在二氯甲烷中，于室温下与三甲基硅烷咪唑反应，得到通式Ⅶ的化合物，其中23，24位双键或为对应的E或为对应的Z。
在己烷和四氢呋喃的混合溶剂中，在-75℃下，通式Ⅶ的顺式或反式化合物与正丁基锂及通式Ⅷ的已知化合物反应，然后在四氢呋喃中用氟化四丁基铵脱硅烷保护基，分别得到顺式的通式Ⅰc或反式的通式Ⅰd的化合物。
在路线Ⅲ中，在己烷和四氢呋喃的混合溶剂中，在-75℃下，通式Ⅶ的化合物的顺式类似物与正丁基锂及通式Ⅴ的化合物反应，然后在四氢呋喃中用氟化四丁基铵脱硅烷保护基，得到通式Ⅰe或Ⅰf的化合物，Ⅰe是通式Ⅰa化合物的顺式类似物，Ⅰf是通式Ⅰb化合物的顺式类似物。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以口服，用来治疗治疗癌症，例如白血病，以及用来治疗肿瘤，例如乳腺癌、子宫颈癌、以及黑色素瘤。凡是需要这类治疗的患者均可服用。更特别的是，在治疗白血病一类的癌症和治疗乳腺癌、子宫颈癌及黑色素瘤一类的肿瘤时，上面描述的通式Ⅰ的化合物的人口服剂量范围是每天大约0.1至100μg。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以有效量口服，用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣，基底细胞癌，角化细胞疾患以及角质化，凡是需要这类治疗的患者均可服用。在治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化细胞疾患以及角质化时，人的口服剂量范围最好是每天大约0.001至100μg。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以局部使用有效量，用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化细胞异常如角化疾病，凡是需要这类治疗的患者均可使用。在治疗皮肤增生亢进性疾患，例如牛皮癣、基底细胞癌、角化细胞异常和角化疾病时，人局部给药的最佳剂量范围是大约每天每克局部剂型含0.01至100μg通式Ⅰ的化合物。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以使用有效量局部使用，用来治疗皮脂腺疾病，例如粉刺以及脂溢性皮炎，凡是需要这类治疗的患者均可使用。在治疗皮脂腺疾病，例如粉刺以及脂溢性皮炎时，人局部给药的最佳剂量范围是大约第天每克局部剂型含0.1至1000μg通式Ⅰ的化合物。
上面描述的通式Ⅰ的化合物可以有效量口服，用来治疗皮脂腺疾病，例如脂溢性皮炎，凡是需要这类治疗的患者均可服用。在治疗皮脂腺疾病，例如粉刺时，人口服给药的最佳剂量范围大约是每天0.07至770μg，每天0.7至70μg则更好。
通式Ⅰ的化合物作为肿瘤治疗药，特别是治疗乳腺癌的有用活性，可以用下述测定方法加以证实，这些测定方法都是文献已知的。
四唑MTT试验T47-O(乳腺导管癌)细胞在用10μg/ml牛胰岛素和10%胎牛血清(FBS)补充的RPMI-1640介质中培养。
MCF-7(乳腺癌)细胞在用人体不必须的氨式酸，1mM丙酮酸钠，10μg/ml牛胰岛素和10%FBS补充的介质中生长。
细胞在适宜的介质中生长至log后期(大约80%融合)。然后T47-O或MCF-7细胞胰蛋白酶化并接种至分别为4000或2000个细胞/孔上。
接种24小时后，在相同介质中制备溶有药物的乙醇的系列稀释液，并且每种浓度加至三个相同的皿中，终浓度为1.000至0.1nM和0.1%乙醇。加药后的第3至第7天，往各皿中加入50μl 5mg/mlMTT溶液[溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑的磷酸盐-缓冲的生理盐水溶液]，并于37℃继续培养2.5小时。然后接种皿在离心机中以800×g转速简短旋转5分钟，从皿中吸走介质，并加入50μl EtoH/孔以溶解用MTT培养期间形成的甲 。振摇15分钟后，在570和660nm波长下用自动读极仪测定每块皿的表面密度。通过比较用待测化合物和仅用0.1%乙醇处理的细胞的表面密度，计算细胞生长的百分抑制率。以Reed和Muench公式(Am.J.Hyg.27493-497，1938)确定IC50值，下面给出两套独立的实验结果
表中数据表明被测化合物对人乳腺癌细胞株有抗增殖活性。
通式1化合物治疗皮肤增生亢进性疾患的活性通过下述测定方法证实，这种测定方法的文献已知，亦为Holuk等阐明，见于The Society for Investigative Dermatology，p，708-714(1986)。
人角化细胞抗增生测定细胞人体新生角化细胞的初级或第一代亚融合培养物在接需用抗菌素或氯化钙补充的角化细胞生长介质(KGM 改进的MCDB153，Clonetics，Inc.目录号CC3001)中生长。采用标准方法由新生包皮上皮角化细胞制得培养物。
培养条件通过包皮切割手术收集人新生包皮，置入含10%血清的Dulbecco′s最小必须介质的管中。到达实验室后，用机械方法修整去除过量的真皮，并用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)(0.05%/0.02%)溶液于4℃处理过夜。从真皮上剥离表真皮，在缓冲生理盐水中搅以除去基底角化细胞，随后除去角质层。分离的细胞离心、再悬浮到介质中，计数，并按Boyce和Ham发展的方法把细胞植入到塑料培养盘或板上的KGM介质中(见In vitro Models for Cancer Research Ⅲ，246-274，(1986)for MCDB153Media)。培养物在含5%CO2的加湿室中于37℃培养，每周更换介质2至3次。在融合完成前，培养的细胞再植入(称1期)到六孔为一组的盘中的KGM介质中，植入数为25000个细胞/每孔。
抗增生实验记录传代24小时后，细胞再供给含有试验化合物或赋形剂的1.5mMCaCl2补充的新鲜KGM介质。试验化合物的溶液按下法制备放1mg样品于琥珀玻璃小瓶中于-20℃储存。直接往小瓶中加足够量乙醇制成毫摩尔的溶液，然后分装到小的琥珀瓶中，上方充氩气，并于-20℃储存。每份溶液熔融1次，用后弃去。每份溶液于4至6周内使用。从每份溶液中分出的等份溶液直接稀释到介质中，然后连续地由微摩尔浓度稀释为微微摩尔浓度。典型测试是化合物在三份一组的孔中，测定4种不同的浓度。对照孔只用最高浓度赋形剂，例如0.1%乙醇补充。在细胞达到融合前的实验末尾，细胞按以下方法计数。盘子用磷酸盐缓冲的生理盐水洗，然后用胰蛋白酶/EDTA溶液培养30分钟。细胞悬浮后等份地放入等渗的缓冲生理盐水中，在电子颗粒计数器上计数。计数器定期校正角化细胞的正确体积。每孔都按3份计数。按照使用的稀释因子计算细胞数/孔，结果用对照实验得到的细胞数的百分抑制率表示。结果列入表Ⅱ。
1，25-二羟基-胆钙化甾醇抑制的平均ED50(与对照比较抑制50%细胞数所需的剂量)为300nM。1α，25-二羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟-胆钙化甾醇抑制的平均ED50的2nM。
通式Ⅰ化合物作为抗癌药，例如抗白血病药物的活性可用下述实验阐明。
HL-60分化实验HL-60肿瘤细胞株原始来自早幼粒细胞白血病病人，自American Type Culture(ATCC CCL240)。该细胞用以谷氨酰胺、抗菌素和20%加热失活的新生牛血清(FBS)补充的RPMI1640介质(Gibco目录＃320-1875)保持悬浮。用于实验的细胞在25cm2的器皿中接种，0.9×106个细胞/25cm2，器皿中的介质用0.25mM维生素C钠盐补充。加入待测化合物，总共培养4天，典型的测试是使用5种不同浓度，每种浓度都重复两个器皿。所有化合物都按下述方法操作。每份溶液都用乙醇配制成10-3M，存于琥珀玻璃小瓶，充氩气，-20℃保存。每份溶液都用介质稀释成指定的浓度。所有的器皿都用0.1%乙醇作为赋形剂加以补充。对照器皿仅用0.1%乙醇作为赋形剂加以补充。器皿在5%CO2中37℃直接培养4天。第4天，1ml等份的细胞由器皿中取出离心10分钟，除去介质后细胞再悬浮于含0.2ml氮兰四唑/佛波醇12-肉豆冠酸酯13-乙酸盐的溶液(NTB/TPA)的介质中，该介质于计数之日按下法配制。将氮兰四唑溶于介质中，使成1mg/ml。往该溶液中加TPA，使终浓度为100mg/ml。该溶液保存在用冰冷却的带益小瓶中。在转移到冰中之前，细胞悬浮并于37℃培养30分钟。除去等份溶液后，细胞用血细胞计数器计数。不含色素颗粒的细胞视为未分化细胞，而含兰黑甲 (指示NBT转化)颗粒的细胞视为分化细胞。计算计数细胞总数中黑细胞数占的百分数，作为百分分化率，结果见于表Ⅲ。
表Ⅲ阳性百分数近似化合物剂量细胞 ED50对照,0.01%乙醇3.01,25-二羟基胆钙化甾醇0.1nM2.00.3nM5.01.0nM3.510.0nM26.025nM100.0nM84.01α,25-二羟基-16,23E-二烯-26,27-六氟一胆钙化甾醇0.1nM6.00.3nM30.51.0nM63.00.6nM10.0nM79.0100.0nM89.5
通式Ⅰ化合物作为治疗皮脂腺疾患，例如粉刺和脂溢性皮炎的药物的有用活性，可以用下述实验方法阐明。
从成人皮脂腺分离皮脂细胞，皮脂腺来自整容手术切除的脸部皮肤。该方法见于Doran et.al，J.Invest.Dermatol，96341-348，1991。获得的细胞在含10%胎牛血清和4μg/ml地塞米松的介质中培养，介质置于停止长生的3T3小鼠成纤细胞层上。
将细胞植入不含试验化合物的介质，在植入后的24-28小时给于含试验化合物的新鲜介质。每48小时都往培养物中给予含试验化合物的新鲜介质。收取细胞之日。培养物用0.03%乙二胺四乙酸(EDTA)的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，仅除去3T3成纤细胞。保留的皮脂细胞群在0.05%胰蛋白酶/0.03%EDTA介质中培养，以便生成皮脂细胞的单细胞悬浮液。细胞稀释，巨烈混合以便保持单细胞悬浮，并用血细胞计数器计数。
所有的化合物均接下述方法操作。每份溶液都用脱气的乙醇制成10-2M溶液，并在黑暗处-20℃保存。不要使用保存超过一月的溶液。实验时将已经分成等份的溶液熔融一次，通过直接稀释到完全的介质中使成合适的浓度而使用。
试验化合物使用下述浓度测体外的皮脂细胞增生抑制作用10-9、10-8、10-7和10-6M。结果列入表Ⅳ，化合物的量与对照比较，抑制50%皮脂细胞增生必需的量(ED50)，以μM表示，对照组仅用赋形剂处理后培养。
表
口服剂型含本发明的通式Ⅰ的化合物，可以装入胶囊，压成片或做成类似剂型，并含有可以药用的载体物质。可以装入胶囊和掺入类似剂型中的可以药用的载体物质可以表述如下粘合剂，例如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶;赋形剂，例如磷酸二钙;崩解剂、例如玉米淀粉，土豆淀粉、藻酸及类似物料;润滑剂，例如硬脂酸镁;甜味剂，例如蔗糖、乳糖或糖精;芳香剂，例如薄荷油、冬青油或樱桃油。各种其它物料可以作为包衣物使用，或者用于修饰剂量单元的物理形态。例如，片剂可以用虫胶、糖，或二者兼用。糖浆剂或酏剂可以含活性化合物，用糖作为甜味剂，用仲斑酸甲酯或丙酯作防腐剂，并使用染料以及芳香剂，例如樱桃或橙香。
由本发明的通式Ⅰ化合物的局部剂型包括软膏和霜剂，它们含有配方中有的油脂性的、可吸收的、水溶性的和无乳化的基质，例如吸水性软石蜡、羊毛脂、聚乙二醇及类似物料。洗剂是液体制剂，可以从简单的溶液变至水性的或水化醇性制剂，并含有高度分散的化合物。洗剂可以含有悬浮剂或分散剂，例如纤维素衍生物，甲基纤维素、乙基纤维素以及类似物料;明胶或树胶，它们掺入列由水、醇或甘油组成的赋形剂中的活性组分内。若把载体赋形剂中的活性组分的悬浮液或溶液凝冻，则得到凝胶，凝胶是半固体制品。赋形剂可以是水性的，也可以无水的，可使用凝胶剂把它们制成凝胶，使用的凝胶剂可以是例如经中和成适宜凝胶稠度的聚亚甲基羧酸，中和用的碱为氢氧化钠和胺类，例如聚乙烯椰子胺。这里使用的“局部”一词是指把掺入到适当的的药用载体中的活性成份应用到炎症部位以发挥局部作用。由此，局部组合物应包括那些能直接与皮肤接触使化合物外用的剂型。局部剂型包括凝胶剂、霜剂、洗剂、软膏剂、粉剂、气雾剂以及其它惯常的用于治疗皮肤病的剂型，这类剂型可通过把通式Ⅰ的化合物与已知的药用局部载体软质混合制得。除用于治疗皮肤病外，本发明的局部组合物还可用于治疗粘液粘膜炎症，这些粘膜只要可与局部应用的药物接触即可生效。例如本发明的局部组合物可用于口腔粘膜或下端结肠。
实施例1[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酚在烧瓶中放入148mg氢化锂铝和6ml无水四氢呋喃。在氩气保护下，搅拌该悬浮液并加入211mg甲醇钠。得到的混合物在冰浴中冷至0℃，然后往里滴加300mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3-炔基]-4H-茚-4-酚与10mml四氢呋喃制备的溶液。加完之后反应混合物加热回流2小时45分钟，然后室温搅拌过夜。反应混合物中加入5ml乙醚后，在冰浴中冷却，并加入0.5ml水和0.5ml10%氢氧化钠溶液进行水解。升温至室温，加入硫酸钠和硫酸镁晶体，反应混合物过滤，滤渣用乙酸乙酯洗。合并滤液，蒸发至干。粗产物用闪式硅胶柱纯化，己烷-乙酸乙酯(3∶1)洗脱。得275mg标题化合物。1H-NMR(CDCl3)d0.98(d，J＝6Hz，3H)，0.99(s，3H)，4.17(s，1H)，5.33(bs，1H)，5.57(d，J＝16Hz，1H)，6.22(dt，J＝7 and 16Hz，1H).
实施例2]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮267mg[3aR-[1(RX)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-醇与8ml无水二氯甲烷制备的溶液与830mg吡啶铬酸盐及42mg吡啶对甲苯磺酸盐反应。混合物搅拌2小时后，再加入260mg吡啶铬酸盐和吡啶对甲苯磺酸盐，反应混合物再反应1.5小时。搅拌期间，加入20ml乙醚，混合物搅拌20分钟，过滤，滤渣用乙醚洗。合并滤液，并依次用冰冷却的1NHCl，水、50ml 2N KHCO3和饱和食盐水洗。水层再用乙醚-乙酸乙酯混合溶剂(1∶1)洗。有机层干燥并蒸发干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，己烷-乙酸乙酯洗脱，得233mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)d0.80(s，3H)，1.08(d，J＝6Hz，3H)，2.84(dd，J＝6 and 11Hz，1H)，5.32(bs，1H)，5.58(d，J＝16Hz，1H)，6.22(dt，J＝7 and 16Hz，1H).
实施例3[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮.
426mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与8ml无水二氯甲烷配制的溶液与1.2ml三甲基硅烷基咪唑反应。反应液在氩气保护下搅拌17小时后加入5ml水，再搅拌20分钟，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥并蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯洗脱，得462mg标题化合物。
实施例41，25-二羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇2.04g[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3，5-双[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与20ml无水四氢呋喃配制的溶液在干冰浴中冷至-78℃，然后在氩气保护下往里滴加2.19ml浓度为1.6M的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，再往里滴加540mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与7ml四氢呋喃配制的溶液，反应混合物搅拌2小时。反应混合物在加入15ml2NRochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1混合物后，使温度降至室温。再加入30ml Rochelle盐/KHCO3混合物后，用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干，得到的2.4g粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(8∶1)洗脱，得410mg1，3二硅烷基氧中间体。该中间体与5ml无水四氢呋喃配制成溶液，在氩气保护下往该溶液中加入4.5ml1N氟化四丁基铵的四氢呋喃溶液，并室温搅拌18小时。往反应混合物中再加2.5ml氟化四丁基铵之后，继续搅拌22小时。加5ml水，搅拌20分钟，然后加25ml饱和食盐水，并用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水洗，干燥并蒸发至干燥。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，己烷-乙酸乙酯洗脱(1∶3)，得270mg白色泡沫状标题化合物。[α]25D+24°(c0.2%，EtoH);UVλmax(EtOH)204nm(ε18200)，262-263nm(ε15900);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.04(d，J＝6.5Hz，3H)，2.61(dd，J＝3 and 13Hz，1H)，2.83(dd，J＝4.5 and 12Hz，1H)，4.24(bs，1H)，4.45(bs，1H)，5.02(s，1H)，5.34(bs，2H)，5.58(d，J＝15.5Hz，1H)，6.11(d，J＝11.5Hz，1H)，6.23(dt，J＝7 and 15.5Hz，1H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H).
元素分析C27H34F6O3理论值C62.30，H6.58;
实测值C62.55，H6.70。
实施例5
25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇按照实施例4中描述的相同方法，使用[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦代替[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3，5-双[[1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦作为A-环前体，可以制得标题化合物。
实施例61α-氟-25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇490mg[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3-氟-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与6ml无水四氢呋喃的溶液在干冰浴中冷至-78℃，然后在氩气保护下往里滴加0.65ml 1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，往里滴加290mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与4.5ml无水四氢呋喃配成的溶液。反应混合物在-78℃搅拌1小时50分钟，然后加10ml 2N Rochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1混合物以终止反应。升温至室温后，加入3ml Rochelle盐/KHCO3，并用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯洗脱(20∶1)，得260mg无定型二硅烷化的中间体。将该260mg二硅烷化中间体溶于4ml无水四氢呋喃中，然后在氩气保护下加入3.5ml 1M浓度的氟化四丁铵的四氢呋喃溶液。反应混合物搅拌23小时。加入5ml水后，再搅拌20分钟，然后加25ml饱和食盐水，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(2∶1)洗脱，并用硅胶柱的HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(3∶2)洗脱，得140mg无定型的标题化合物。[α]25D+22°(c0.2，EtOH);UV(EtOH)λmax241nm(ε13600)，267/268nm(ε13350);1H-NMR(CDCl3)δ0.69(s，3H)，1.04(d，J＝6.5Hz，3H)，2.63(dd，J＝3 and 13.5Hz，1H)，4.23(bs，1H)，5.12(s，1H)，5.16(ddd，J＝50，5 and 7Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.41(s，1H)，5.58(d，J＝15.5Hz，1H)，6.12(d，J＝11.5Hz，1H)，6.23(dt，J＝15.5 and 7Hz，1H)，6.40(d，J＝11.5Hz，1H).
元素分析C27H33F7O2理论值C62.06，H6.37实测值C61.59，H5.89。
实施例71，25-二羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟-19-去甲基胆钙化甾醇
654mg[3R-(3α，5β，Z)-3，5-双[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与9ml无水四氢呋喃配制的溶液在干冰浴中冷至-78℃，然后在氩气保护下往里滴加0.937ml 1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，在10分钟的间隔里往里滴加414mg[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酮与5ml无水四氢呋喃配成的溶液。反应混合物在-78℃搅拌1小时45分钟后，加入15ml 2N Rochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1混合物以终止反应，使升温至室温。再加30ml Rochelle盐/KHCO3混合物，并用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，己烷-乙酸乙酯(1∶3)洗脱，得430mg三硅烷化中间体。将该三硅烷化中间体溶于4.5ml无水四氢呋喃，然后在氩气保护下加入4.5ml 1M浓度的氟化四丁铵的无水四氢呋喃溶液。搅拌24小时后，补加2.5ml氟化四丁铵溶液，再搅拌23小时。加5ml水后搅拌20分钟，加25ml饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取。有机层用水饱和食盐水混合物洗，干燥，蒸发至干。粗产品先用闪式硅胶层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(1∶4)洗脱，再用硅胶柱的HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(1∶8)洗脱。得260mg无定型标题化合物。25D+23.5°(c2，EtOH);
UV(EtOH)λmaxsh234/235nm(ε20，600);242nm(ε29，100)，250/251nm(ε34，100)，260nm(ε22，750);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.05(d，J＝6.5Hz，3H)，2.49(dd，J＝2 and 12Hz，1H)，2.77(J＝3 and 12Hz，1H)，2.80(dd，J＝4and12Hz，1H)，4.06(m，1H)，4.13(m，1H)，5.35(s，1H)，5.58(d，J＝16Hz，1H)，5.95(f，J＝11Hz，1H)，6.23(dt，J＝7 and 16Hz，1H)，6.31(d，J＝11Hz，1H).
实施例8[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-醇1.6g[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3E-己烯基]-4H-茚-4-酚、16ml乙酸乙酯、40ml己烷、1.6ml无水乙醇、80μl喹啉和320mg Lindlar催化剂的混合物通氩气搅拌70分钟。反应混合物过滤，并用乙酸乙酯洗。滤液用1N盐酸及水和饱和食盐水的混合物洗。水层用乙酸乙酯萃取，有机层合并，干燥，蒸发至干。粗产品选用闪式硅胶柱层析纯化，再用HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(3∶1)洗脱，得1.58g无定型标题化合物。
实施例9[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮采用实施例2中描述的相同方法，用[3aR-[1(RX)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酚作原料代替反式类似物，氧化后得到标题化合物，为无定型固体。
实施例10[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷基氧-1-甲基-5-(三氟甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮采用实施例3中描述的相同方法，用[3aR-[1(R＊)，3aα，4β，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-羟基-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮为原料代替反式类似物，得到标题化合物，为无定型固体。
实施例111，25-二羟基-16，23Z-二烯-26，27-六氟-19-去甲基胆钙化甾醇采用实施例7中描述的相同方法，用[3aR-[1(R＊)，3aα，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧-1-甲基-5-(三氟甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮为原料代替对应的反式类似物，得到标题化合物。
实施例121，25-二烃基-16，23Z-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇552mg[3s(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-3，5-双[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与6ml无水四氢呋喃配制的溶液冷至-78℃，然后在氩气保护下滴加0.578ml1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌数分钟后在10分钟的间隔内往该红色溶液中滴加256mg[3aR-[1(R＊)，3aα，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧-1-甲基-5-(三氟甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮与4.5ml无水四氢呋喃配制的溶液。反应混合物在-78℃搅拌90分钟后，加10ml2NRochelle盐和2N KHCO3溶液1∶1的混合物以终止反应，升温至室温。补加25ml Rochelle盐/KHCO3溶液后，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水混合物洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(20∶1)洗脱，得335mg硅烷化标题化合物。335mg硅烷化中间体与6ml无水四氢呋喃的溶液用3.7ml1M浓度的氟化四丁铵的四氢呋喃溶液处理。反应混合物在氩气保护下搅拌22.5小时。加5ml无水终止反应，搅拌30分钟，蒸去四氢呋喃后加10ml水，用乙酸乙酯萃取。有机层用水-饱和食盐水混合液洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(1∶2.5)洗脱，得206mg标题化合物。25D+23.5°(c0.2%，EtOH);UV(EtOH)λmax206nm(ε16720)，263nm(ε14690);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.06(d，J＝6.9Hz，3H)，4.24(brm，1H)，4.45(brm，1H)，5.01(s，1H)，5.34(s，1H)，5.42(d，J＝12.5Hz，1H)，5.97(dt，J＝12.5 and 7Hz，1H)，6.11(d，J＝11.4Hz，1H)，6.38(d，J＝11.4Hz，1H).
实施例1325-羟基-16，23Z-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇452mg[3s-(3α，5β，Z)]-2-[2-[2-亚甲基-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基硅烷基]氧]环己基亚基]乙基]二苯基氧化膦与6ml无水四氢呋喃配制的溶液冷至-78℃，然后在氩气保护下滴加0.625ml1.6M浓度的正丁基锂的己烷溶液。搅拌5分钟后，在10分钟的间隔里滴加276mg[3aR-[1(R＊)，3aα，7aβ]]-3，3a，5，6，7，7a-六氢-7a-甲基-1-[6，6，6-三氟-5-三甲基硅烷氧-1-甲基-5-(三氯甲基)-3Z-己烯基]-4H-茚-4-酮与4ml无水四氢呋喃配制的溶液。反应混合物在78℃搅拌1小时45分钟，然后加10ml2NRochelle盐和2N KHCO3溶液的1∶1的混合物以终止反应，反应混合物的温度升温至室温。补加30ml Rochelle盐/KHCO3溶液后，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，干燥，蒸发至干。粗产品用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(10∶1)洗脱，得364mg硅烷化的标题化合物。将该364mg硅烷化的中间体溶于4.5ml无水四氢呋喃中，然后在氩气保护下加3.9mg 1M浓度的氟化四丁基铵的四氢呋喃溶液。搅拌18小时，然后加5ml水以终止反应，再搅拌15分钟。加入25ml饱和食盐水后，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用水和饱和食盐水的混合物洗，干燥并蒸发至干。粗产品先用闪式硅胶柱层析纯化，用己烷-乙酸乙酯(5∶2)洗脱，再用HPLC纯化，用己烷-乙酸乙酯(2∶1)洗脱。得228mg标题化合物，为无定型固体。
UV(EtOH)λmax204/205nm(ε19800)，263nm(ε17600);1H-NMR(CDCl3)δ0.68(s，3H)，1.06(d，J＝6.9Hz，3H)，3.97(brm，1H)，4.83(brm，1H)，5.06(s，1H)，5.37(s，1H)，5.42(d，J＝12.1Hz，1H)，5.97(dt，J＝12.1 and 7Hz，1H)，6.13(d，J＝11Hz，1H)，6.23(d，J＝11Hz，1H)实施例14软质明胶胶囊口服剂型配方mg/胶囊25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇0.0001～0.010丁基化羟基甲苯(BHT)0.016丁基化羟基甲醚(BHA)0.016
精制椰子油(Neobee M-5)160.0实施例15局部用霜剂mg25-羟基-16，23E-二烯-26，27-六氟胆钙化甾醇0.001～1.0十六烷醇1.5十八烷醇2.5司盘60(脱水山梨醇单油酸酯)2.0Arlacel 165(单油酸甘油酯和聚氧乙烯基乙二醇油酸酯的掺合物)4.0吐温60(缩聚山梨醇油酸酯60)1.0矿物油4.0丙二醇5.0尼泊索0.05BHA0.05山梨醇溶液2.0依地酸二钠盐0.01尼帕净M0.18重蒸馏水加至100g
权利要求
1.通式Ⅰ的化合物 其中R为氢、羟基或氟，X为H2或=CH2，23，24位双键为E或Z。
2.权利要求1中的化合物，其中R为氢或氟，23，24位双键为E。
3.权利要求1中的化合物为26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-二烯-胆钙化甾醇，26，26，26，27，27，27-六氟-25-二羟基-16，23E-二烯-胆钙化甾醇，26，26，26，27，27，27-六氟-1α-氟-25-羟基-16，23E-二烯-胆钙化甾醇，26，26，26，27，27，27-六氟-1α，25-二羟基-16，23E-二烯-19-去甲基-胆钙化甾醇。
4.权利要求1、2或3中的化合物用作治疗的活性化合物用于治疗皮肤增生亢进性疾患，例如治疗牛皮癣，治疗癌症，例如治疗白血病，治疗肿瘤，例如治疗乳腺癌，或治疗皮脂腺疾患，例如治疗粉刺。
5.权利要求1中化合物的制备方法，该法包括从对应的羟基用硅烷基保护的化合物中脱去硅烷保护基。
6.药用组合物，特别是用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如治疗牛皮癣，治疗癌症，例如治疗白血病，治疗肿瘤，例如治疗乳腺癌，或治疗皮脂腺疾患，例如治疗粉刺，该类组合物含有效量权力要求1，2或3的化合物和惰性载体。
7.使用权利要求1的化合物制备药用组合物，该组合物用来治疗皮肤增生亢进性疾患，例如治疗牛皮癣，治疗癌症，例如治疗白血病，治疗肿瘤，例如治疗乳腺癌，或治疗皮脂腺疾患，例如治疗粉刺。
全文摘要
通式1的化合物，其中R为氢、羟基或氟，X为H这些化合物通过从对应的羟基用硅烷基保护的化合物中脱去硅烷保护基制备。
文档编号C07C401/00GK1108245SQ9411893
公开日1995年9月13日 申请日期1994年11月23日 优先权日1993年11月24日
发明者T·I·多兰, B·M·亨尼西, J·A·麦克莱恩, G·皮昭拉陶, F·塞达拉逖, M·R·厄斯科卡威 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司
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