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2021-02-01 09:02:39|
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起点商标网 专利名称：新化合物的制作方法
发明的领域本发明涉及新的3-羟基氨茴酸(3-HANA即3-羟基-2-氨基苯甲酸)衍生物、其制备方法和中间体、新的药物组合物及其在抑制导致产生内源神经毒素喹啉酸(QUIN)的酶，3-羟基氨茴酸酯加氧酶(3-HAO)方面的应用。
发明的背景3-HAO是色氨酸分解代谢途径中的酶，能导致3-羟基氨茴酸转变成喹啉酸。QUIN及其生物合成酶3-HAO已被证实存在于啮齿动物及人类的脑组织中。QUIN是一种激发性氨基酸，它通过N-甲基-D-天门冬氨酸酯(NMDA)受体起作用，最近因被公认其作用是作为与神经变性病症如杭廷顿氏(Huntington)病、中风/大脑局部缺血、缺氧、早老性痴呆(Alzheimers)病和艾滋痴呆综合症及癫痫有关的一种内源神经毒素而倍受注目。3-HAO活性抑制剂对于治疗由于喹啉酸过多引起的疾病有显著的效果。
先有技术4-卤代类酶解物曾被认为是3-HAO活性的抑制剂。1980年，Parli CJ、Krieter P、Schmedt B在“6-氯色氨酸代谢为4-氯氨茴酸一种3-羟基氨茴酸加氧酶有效的抑制剂”(Arch Biochemand Biophys 203，pp 161-166，1980)一文中指出，6-氯色氨酸的代谢物4-氯-3-羟基氨茴酸是鼠和猪的肝和肾中3-HAO的有效抑制剂。不久，Heyes MP、Hutto B、Markey SP在“4-氯-3-羟基氨茴酸酯对脑中3-羟基氨茴酸酯加氧酶的抑制”(NeurochemInt 13，pp 405-408，1988)一文中证实，4-氯-3-羟基氨茴酸也是鼠脑中3-HAO的抑制剂。1989年，Todd WP、CarpenterBK和Schwarcz R在“4-卤代-3-羟基氨茴酸酯的制备方法及其对鼠类和人体脑组织中3-羟基氨茴酸酯加氧酶抑制作用的证明”(Prep Biochem 19，pp155-165，1989)一文中说明，4-氟-、4-氯-和4-溴-3-羟基氨茴酸对鼠类及人体脑中3-HAO具有非常相似的阻断效果。
发明的简述本发明涉及能抑制酶3-HAO的化合物，其IC50值(抑制50％的浓度)与先有技术化合物相似，但其稳定性更好。
因此，本发明涉及通式I的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
本发明的另一个目的是制备式I化合物的方法，通过A)在R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使下面式II的化合物还原 式中X、R3和R4的定义如上面A)中所述，B)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式III的化合物脱保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面B)中所述，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)，C)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IV的化合物脱除酯基 式中R、R2、X、R3和R4的定义如上面C)中所述，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，D)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式V的化合物脱除酯基和保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面D)中所述，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，E)在R1＝烷基，R2＝H或烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式VI的化合物烷基化 式中X、R3和R4的定义如上面E)中所述，F)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基的情况下，可使式VII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R4的定义如上面F)中所述，G)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，R4选自氯、溴和碘的情况下，可使式VIII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R3的定义如上面G)中所述，或者H)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IX的化合物卤化 式中R1、R2、R3和R4的定义如上面H)中所述。
本发明也涉及含有作为活性成分的式I化合物和药理上可接受的载体的药物组合物和所述化合物用于制造预防和治疗神经退化疾病药物的用途。
本发明进一步的目的是合成用来制备式I化合物的中间体，即下面通式II的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；下面通式III的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)；下面通式IV的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基；下面通式V的化合物
式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM；下面通式VI的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；下面通式VII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R4选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基；下面通式VIII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基；和下面通式IX的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
发明的详述下列定义适用于整个说明书及所附的权利要求书。
除非另有说明，术语“烷基”是指直链或支化的低级烷基，优选C1-C6烷基。所述低级烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基和直链及支链的戊基和己基。
除非另有说明，术语“芳基”是指苯基、呋喃基或噻吩基，其中的环任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素取代。
除非另有说明，术语“烷硫基”是指直链或支化的低级烷硫基，优选C1-C6烷硫基，所述低级烷硫基的实例包括甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基和直链及支链的戊硫基和己硫基。
除非另有说明，术语“芳硫基”是指苯硫基，其中苯环可任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素所取代。
除非另有说明，术语“芳氧基”是指苯氧基，其中苯环可任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素所取代。
除非另有说明，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
目前已知的实施本发明的最好方式是用4，6-二氯-5-甲基氨茴酸。
本发明的化合物可用于预防和治疗神经变性，特别是诸如中风、脑局部缺血、缺氧、癫痫和神经变性疾病如早老性痴呆病、多重梗塞痴呆、杭廷顿氏病和艾滋痴呆综合症等。
下面将详细描述式I化合物的制备方法。
制备方法式I的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；可用下列方法之一制备。
方法A式I的化合物，式中R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 其中R7＝H或烷基，可通过例如在大气压力或升高的压力下，在适当的溶剂如乙醇或乙酸乙酯中用H2和催化剂如Pd/C、阮内镍或PtS2使式II的化合物还原制得 式中X.R3和R4的定义如上面在方法A中的式I中所述。该还原反应也可通过在适当的溶剂如乙醇中与SnCl2、NH2NH2·H2O或Na2S2O5反应来完成。
方法B通式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由通式III的化合物 其中R1、R2、X、R3和R4与方法B中式I的定义相同，PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，通过用例如路易斯酸如BBr3或三甲基甲硅烷基碘或用烷基-或芳基SNa或烷基-或芳基SLi脱除保护基的方法制备，随后调节pH值以得到3-羟基-2-氨基-苯甲酸衍生物。在PG＝SEM的情况下，可在适当的溶剂如N，N-二甲基亚丙基脲(DMPU)或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，于高温下用氟化四丁铵(TBAF)或CsF进行脱除保护基的反应。苄基可用例如H2和Pd/C或PtS2作催化剂通过氢解除去。2，2，2-三氯乙基可用Zn在醋酸中除去。
方法C式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由IV的化合物 其中R1、R2、X、R3和R4与方法C中式I的定义相同，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，通过例如用碱如KOH，在适当的溶剂如甲醇中，于室温或高温下脱除酯基，或用烷基-或芳基SLi或烷基-或芳基SNa或用Me3SiI脱除酯基的方法制备，随后调节pH值得到3-羟基-2-氨基苯甲酸衍生物。在R6＝Bn的情况下，则可用例如H2和Pd/C或PtS2进行氢解得到该羧酸。2，2，2-三氯乙基酯可用例如Zn在乙酸中分解，而SEM-酯可用例如TBAF在DMPU中分解。方法D式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式V的化合物 其中R1、R2、X、R3和R4与方法D中式I的定义相同，PG和R6选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，通过用例如烷基-或芳基硫锂、烷基-或芳基硫钠或用Me3SiI脱除酯基和保护基的方法制备，随后调节PH值得到3-羟基-2-氨基苯甲酸衍生物。在PG和R6＝Bn的情况下，可用例如H2和Pd/C或PtS2进行氢解得到3-羟基-2-氨基苯甲酸衍生物；如果PG和R6＝SEM，则可用TBAF。方法E式I的化合物，X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式VI的化合物 其中X、R3和R4与方法E中式I的定义相同，通过用例如对应于R1的醛和还原剂如NaCNBH3和HCl在适当溶剂如CH3CN、H2O或甲醇中还原烷基化的方法制备。一-和二-N-烷基化衍生物可用例如色谱法分离。
方法F式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由式VII的化合物 式中R1、R2、X和R4与方法F中式I的定义相同，通过用例如Br2、Cl2或ICl在乙酸中，于室温或高温下进行卤化制得。或者，也可用Br2或I2和三氟乙酸汞在三氟乙酸中，于室温或高温下使式VII化合物卤化。
方法G式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，R4选自氯、溴和碘，可由式VIII的化合物 式中R1、R2、X和R3与方法G中式I的定义相同，通过例如按方法F进行卤化制得。
方法H式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式IX的化合物 式中R1、R2、R3和R4与方法H中式I的定义相同，通过例如按方法F进行卤化制得。
中间化合物方法IIa式II的化合物，其中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式X的化合物 式中X、R3和R4与方法IIa中式II的定义相同，通过用例如HNO3在诸如CH3NO2、CH2Cl2或H2O等溶剂中，或用HNO3和H2SO4的混合物进行硝化来制备。
方法IIb式II的化合物，其中X选自氯、溴或碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 R7，其中R7＝H或烷基，可由式XI的化合物 式中R3和R4与方法IIb中式II的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法来制备。
方法IIIa式III的化合物，其中R1和R2＝H；X选自卤素和芳氧基；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S和SO2，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，PG选自烷基、Bn、MEM和MOM，可由式XII的化合物 式中X、R3、R4和PG与方法IIIa中式III的定义相同，通过与例如H2O2和NaOH在适当的溶剂如水或二噁烷中进行反应来制备。然后调节pH值以得到3-羟基-氨茴酸衍生物。
方法IIIb式III的化合物，其中R1和R2＝H；X选自烷硫基、氯和氟；R3和R4可以相同或不同，且可选自氯、氟、甲基、氟烷基和Z-R5，其中Z选自CHn、N、O和S，其中n＝1或2，R5＝烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z的定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7是H或烷基；PG选自烷基、SEM、MEM和MOM，可由式XIII的化合物 式中X、R3、R4和PG与方法IIIb中式III的定义相同；DMG＝COtBu、CO2tBu或COCF3；W＝H或Br，通过例如与烷基锂在适当的溶剂如四氢呋喃(THF)中，在低温下进行反应来制备。然后使得到的芳基锂衍生物与CO2(S)反应，进行酸化，再在高温下用HCl水溶液脱除DMG基团。
方法IVa式IV的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，R6选自例如SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，可由式XIV的化合物 式中R1、R2、X、R4和R6与方法IVa中式IV的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法来制备。
方法IVb式IV的化合物，其中R1＝H或烷基；R2＝烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和-N-R7，其中R7＝H或烷基；R6选自SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，可由式XV的化合物 式中X、R3、R4和R6与方法IVb中式IV的定义相同，通过例如按照方法E的烷基化方法来制备。
方法V式V的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷基、芳硫基、芳氧基、氯、氟和氰基；R3和R4可以相同或不同，且选自氯、氟、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3、R4合在一起形成一个饱和或不饱和的环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；R6和PG选自烷基和Bn，可由式XVI的化合物 式中R1、R2、X、R3、R4和PG与方法V中式V的定义相同；W＝Br、I或OSO2CF3，通过在适当的溶剂如DMF或含碱如三乙胺的二噁烷中与例如Pd(OAc)2、CO、1，3-双(二苯膦基)丙烷和对应于R6的醇的混合物反应的方法制备。
方法VI式VI的化合物，其中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3、R4合在一起形成一个饱和或不饱和的环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式XVII的化合物 式中X、R3和R4与方法VI中式VI的定义相同，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM，通过例如按照方法D的脱除酯基和保护基的方法来制备。
方法VIIa式VII的化合物，其中R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R4＝RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由式XVIII的化合物 式中X和R4与方法VIIa中式VII的定义相同，通过例如按照方法A的还原法制备。
方法VIIb式VII的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R4＝RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由式XIX的化合物 式中R1、R2、X和R4与方法VIIb中式VII的定义相同，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM、和MOM，通过例如按照方法D的脱除酯基和保护基的方法制备。
方法VIII式VIII的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由XX的化合物 式中R1、R2和R3与方法VIII中式VIII的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法制备。
方法IXa式IX的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，可由式XXI的化合物 式中R1、R2和R4与方法IXa中式IX的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法制备。
方法IXb式IX的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3和R4可以相同或不同，且选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3、R4合在一起形成一个饱和或不饱和的环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式XXII的化合物 式中R1、R2、R3和R4与方法IXb中式IX的定义相同，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，通过例如按照方法C的脱除酯基的方法制备。
实施例实例1(方法B)4-氯-5，6-二甲基-3-羟基氨茴酸的制备2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯酚将4，5-二甲基-2-硝基苯酚1(7.00g，41.9mmol)溶解于CHCl3(300ml)中，并用氩气吹洗。加入溶于CHCl3的氯(84.8ml，0.99M，83.7mmol)，所得溶液在室温下搅拌26小时，避光。将溶剂、HCl和过量的Cl2蒸发出来(避光)，让残留物在CH2Cl2(400ml)和盐水(100ml)两相之间分配。用MgSO4干燥后蒸发出溶剂，得到8.9g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)得到标题化合物(6.47g)。Mp62-63℃；1H NMR(DMSO-d6)δ11.5(br，OH)，7.80(s，1H)，2.34(s，3H)，2.27(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ146.8 6，143.84，134.06，128.85，123.73，122.94，19.37，17.36；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)203/201(M+，37/100)，91(88).
1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯把2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯酚(6.44g，31.9mmol)溶解于无水DMF(105ml)中，并用氩气吹洗。加入苄基溴(4.17ml，35.1mmol)和K2CO3(13.24g，95.7mmol)。反应混合物在室温下搅拌8小时(避光)后过滤。加入水(5ml)，用二甲苯(2×150ml)和CH2Cl2(100ml)将溶剂共蒸发出来。残留物与CHCl3(100ml)混合后过滤，溶剂蒸发后留下10.8g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)得到标题化合物(8.44g)。Mp74-75℃；1H NMR(DMSO-d6)δ7.80(s，1H)，7.4 8-7.37(m，5H)，5.06(s，2H)，2.37(s，3H)，2.34(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ145.24，142.22，142.08，135.73，134.73，129.61，128.39，128.37，128.35，123.64，75.74，19.74，17.13；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)293/291(M+，0.08/0.37)，187/185(8/24)，91(100).
6-氨基-1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基苯将1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯(3.00g，10.3mmol)溶解于甲醇(420ml)中，并使之冷却到+2℃。加入氯化亚铜(6.11g，30.8mmol)，接着在1.5小时内，在2-4℃分批加入KBH4(3.88g，72.0mmol)。反应混合物在2℃搅拌1小时，再加入KBH4(400mg，7.41mmol)。在2℃保持1小时后再加入KBH4(120mg，2.22mmol)，并继续搅拌20分钟。过滤后蒸出溶剂，得到的残留物在乙酸乙酯(400ml)和水(75ml)两相之间进行萃取分配。经干燥(MgSO4)和蒸发后得到2.94g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，CHCl3)得到标题化合物(2.14g)。Mp57-58℃；1H NMR(DMSO-d6)δ7.54(d，J＝6.5Hz，2H)，7.42-7.34(m，3H)，6.52(s，1H)，4.83(s，2H)，4.79(s，2H)，2.12(s，6H)；13C NMR(DMSO-d6)δ140.00，138.91，137.30，133.00，128.27，128.22，127.91，127.33，121.23，115.35，72.73，20.24，15.45；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)286/284(M＋23，42/100).
1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6-(E/Z)-肟基乙酰氨基苯将6-氨基-1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基苯(2.14g，8.19mmol)溶解于DMF(60ml)和水(2ml)中。加入浓HCl(683μl，8.19mmol)和水合氯醛(1.49g，9.00mmol)，然后将烧瓶置于预热到105℃的油浴中。2分钟后加入溶解在水(4ml)中的NH2OH·HCl(2.28g，32.8mmol)，反应混合物在100℃搅拌1小时，注意避光，然后在室温下搅拌15分钟。经过蒸发及与二甲苯和CH2Cl2共蒸发后得到的残留物在乙酸乙酯和水两相之间进行萃取分配。有机相经干燥(MgSO4)后将溶剂蒸发，得到3.2g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，EtOAc-CHCl31∶10)得到E/Z混合的标题化合物(1.278g)。
1H NMR(DMSO-d6)δ12.33和9.71(2s，1H)，9.20和8.27(2s，1H)，7.91 and 7.83(2s，1H)，7.60(s，1H)，7.65-7.36(m，5H)，4.90和4.87(2s，2H)，2.26-2.23(m，6H)；13C NMR(DMSO-d6)δ160.18，159.99，143.40，143.06，136.55，136.08，133.40，133.26，130.97，130.39，129.70，129.44，128.69，128.40，128.36，128.28，128.19，128.11，128.03，127.37，127.25，121.51，121.21，74.66，74.18，20.32，16.08；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)334/332(M+，4/12)，172/170(12/51)，91(100).
7-苄氧基-6-氯-1H-4，5-二甲基苯并吲哚-2，3-二酮将浓H2SO4(6ml)加热至80℃后加入1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6(E/Z)-肟基乙酰氨基苯(700ml，2.10mmol)。反应混合物在80℃搅拌10分钟后倒入到冰水(200ml)中。用乙酸乙酯(200ml)萃取，经干燥(MgSO4)和蒸发后得到的残留物376mg溶解在无水DMF(5ml)和BnBr(275μl，2.30mmol)中，并加入K2CO3(318mg，2.30mmol)。反应混合物在室温避光搅拌30小时。过滤、加入乙酸(1ml)、与二甲苯(3×100ml)共蒸发、残留物与乙酸(500μl)和CH2Cl2-甲醇(50∶1，15ml)混合，再进行过滤和蒸发，得到741mg粗产物。通过反复快速柱色谱提纯(SiO2，CH2Cl2-甲醇梯度洗脱)得到标题化合物(13mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.42(s，1H)，7.57(d，J＝6.2Hz，2H)，7.42-7.35(m，3H)，4.92(s，2H)，2.44(s，3H)，2.22(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ184.30，159.33，141.87，137.02，136.98，136.26，135.41，130.15，128.84，128.28，128.18，115.64，74.63，15.26，14.20；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)317/315(M+，3/7)，91(100).
3-苄氧基-4-氯-5，6-二甲基氨茴酸将7-苄氧基-6-氯-1H-4，5-二甲基苯并吲哚-2，3-二酮(13mg，0.04mmol)与二噁烷(500μl)混合，并加入NaOH(200μl，0.68M，0.14mmol)。该溶液冷却到10℃后加入溶解于NaOH(410μl，0.68M，0.27mmol)的H2O2(4μl，30％，0.12mmol)。2分钟后再加入H2O2(1μl，0.03mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。加入H2O2(2μl，0.06mmol)，20分钟后用N2气流脱除部分溶剂，然后加入乙酸(38μl，0.66mmol)使橙色粗产物沉淀出来。尽可能多地脱除二噁烷，然后让浆状物于乙酸乙酯(3ml)和水(500μl)两相之间分配，水相用乙酸乙酯(500μl)萃取，合并后的有机相用盐水(500μl)洗涤后用MgSO4干燥。溶剂蒸发后将残留物溶解于二噁烷(100μl)和NaOH(200μl，0.68M，0.14mmol)中，冷却至10℃后令其在NaOH(400μl，0.27mmol)中在10℃至室温下与H2O2(4μl，0.12mmol)反应3小时。按前述方法进行后处理后得到标题化合物(11mg)。1HNMR(DMSO-d6)δ7.55(d，J＝7.0Hz，2H)，7.43-7.35(m，3H)，4.82(s，2H)，2.21(s，3H)，2.19(s，3H)；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)307/305(M+，7/19)，216/214(26/75)，198/196(14/44)，91(100).
4-氯-5，6-二甲基-3-羟基氨茴酸将3-苄氧基-4-氯-5，6-二甲基氨茴酸(10mg，0.03mmol)溶解于乙醇(1.5ml)中，并加入10％Pd/C(2mg)。在室温常压下加氢5小时后经过滤、蒸发得到7mg粗产物。用制备性高压液相色谱(HPLC)(Lichrosob-C18，甲醇-磷酸盐缓冲液(pH3)50∶50)提纯，用NaHCO3(水溶液)将pH调到5，用N2气流进行浓缩，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取，用盐水洗涤有机相，经干燥(MgSO4)和蒸发后得到标题化合物(3mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.3(br，OH)，3.16(s，2H)，2.16(s，3H)，2.15(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ169.92，137.87，135.16，126.38，123.51，121.39，117.31，17.72，15.95；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)217/215(M+，21/63)，199/197(20/59)，171/169(37/100).
实例2(方法B)7-氨基-5-氯-8-羧基-6-羟基四氢化萘的制备5-氯-6-羟基-7-硝基四氢化萘将6-羟基-7-硝基四氢化萘2(2.44g，12.6mmol)溶解在CHCl3(290ml)中，所得溶液用氩气吹洗。加入溶于CHCl3(25.6ml，0.99M，25.3mmol)的氯，在室温下将该溶液搅拌6小时，注意避光。在避光条件下使溶剂、HCl和过量的Cl2蒸发得到3.02g粗产物。通过快速柱色谱(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)提纯，得到标题化合物(2.29g)。1HNMP(DMSO-d6)δ10.62(br，1H)，7.71(s，1H)， 2.75-2.69(m，4H)，1.77-1.64(dm，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ146.30，143.58，134.59，129.68，123.42，122.79，28.26，27.91，21.69，21.62；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)229/227(M+，32/100，101/99(12/36)，117/115(23/50).
6-苄氧基-5-氯-7-硝基四氢化萘将5-氯-6-羟基-7-硝基四氢化萘(2.28g，10.0mmol)溶解在无水DMF(40ml)中，并用氩气吹洗。加入苄基氯(11.5ml，100.0mmol)、n-Bu4NI(95mg，0.25mmol)和K2CO3(41.5g，30.0mmol)。反应混合物在室温下搅拌24小时，避光。滤出生成的盐，溶剂及过量的BnCl与二甲苯(3×200ml)和CH2Cl2(200ml)一起进行共蒸发，然后真空干燥。粗产物(5.8g)用快速柱色谱(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)提纯，得到标题化合物(2.20g)。
Mp 80-82℃；1H NMR(DMSO-d6)δ7.73(s，1H)，7.48-7.37(m，5H)，5.06(s，2H)，2.79-2.75(m，4H)，1.79-1.69(dm，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ144.81，142.14，135.79，135.56，129.55，128.42，123.40，106.20，105.51，75.80，28.63，27.65，21.55，21.36；MS(TSP)m/z(相对强度)337/335(M＋NH4，30/100).
7-氨基-6-苄氧基-5-氯四氢化萘在6-苄氧基-5-氯-7-硝基四氢化萘(2.56g，8.33mmol)中加入甲醇(430ml)，所得混合物冷却到1℃。加入氯化亚铜(4.95g，25.0mmol)，接着在1小时零10分内在2℃分批加入KBH4(3.15g，58.3mmol)。过3.5小时后，再加入KBH4(100mg，1.85mmol)，在2℃经7.5小时后将反应混合物过滤，溶剂蒸发。让残留物在乙酸乙酯和水之间进行萃取分配，有机相用盐水(50ml)后用MgSO4干燥，经蒸发后得到2.47g粗产物。通过快速柱色谱(SiO2，CHCl3)提纯，得到标题化合物(1.82g)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.55(dd，J1＝1.6Hz，J2＝8.1Hz，2H)，7.41-7.34(m，3H)，6.42(s，1H)，4.84(s，2H)，4.79(s，2H)，2.58-2.52(m，4H)，1.71-1.60(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)d140.10，139.29，137.29，133.96，128.29，128.23，127.93，126.99，121.84，113.96，29.03，26.25，22.68，22.35；MS(TSP)m/z(相对强度)290/288(M＋1，27/100).
6-苄氧基-5-氯-7(E/Z)-肟基乙酰氨基四氢化萘将7-氨基-6-苄氧基-5-氯四氢化萘(1.84g，6.41mmol)溶解于DMF(80ml)和水(8ml)中。所得溶液用氩气吹洗，先后加入HCl(530μl，12M，6.41mmol)和水合氯醛(1.17g，7.05mmol)。将该烧瓶放入到预热到110℃的油浴中，在搅拌下加入NH2OH·HCl(1.78g，25.6mmol)的水(8ml)溶液。在100℃保持1小时，然后在室温保持1小时，溶剂与二甲苯(3×100ml)和CH2Cl2(100ml)一起进行共蒸发。让残留物在乙酸乙酯和水之间进行萃取分配，有机相用盐水(50ml)洗涤、用Na2SO4干燥，经蒸发后得到2.63g粗产物。通过柱色谱(SiO2，EtOAc-CHCl31∶5)提纯得到E/Z混合的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ12.33和9.72(2s，1H)，9.20和8.28(2s，1H)，7.84和7.72(2s，1H)，7.60(s，1H)，7.57-7.37(m，5H)，4.90和4.88(2s，2H)，2.71-2.65(m，4H)，1.75-1.68(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ160.26，160.02，143.45，143.00，136.60，136.13，134.37，134.26，131.20，130.63，129.81，129.52，128.75，128.33，128.16，128.09，127.04，120.68，120.33，74.75，74.28，29.13，26.74，22.17，22.00；MS(TSP)m/z(相对强度.)361/359(M＋1，28/100 ).
9-苄氧基-8-氯-1H-4，5，6，7-四氢[e]苯并吲哚-2，3-二酮将浓H2SO4(5ml)加热到60℃，然后在1分钟内分批加入6-苄氧基-5-氯-7-(E/Z)-肟基乙酰氨基四氢化萘(500mg，1.39mmol)。反应混合物在60℃搅拌10分钟后倒在粉碎的冰(50ml)上。用乙酸乙酯(200ml)萃取，经干燥(Na2SO4)和蒸发后，得到的残留物317mg溶解于无水DMF(3ml)中，用氩气冲洗。加入苄基溴(165μl，1.39mmol)和K2CO3(192mg，1.39mmol)，反应混合物在室温下搅拌18小时。加入甲醇(3ml)，滤出所生成的盐，溶剂与二甲苯(2×30ml)共蒸发，然后进行真空干燥。在所得粗产物中加入乙酸(0.3ml，5.2mmol)，通过SiO2过滤，用(EtOAc-MeOH20∶1)洗脱，接着将溶剂蒸发，得到暗色的残留物(330mg)。通过反复快速柱色谱(SiO2，CH2Cl2-MeOH50∶1)提纯得到标题化合物(56mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.40(s，1H)，7.58(d，J＝7.3Hz，2H)，7.42-7.36(m，3H)，4.90(s，2H)，2.92(t，J＝7.3Hz，2H)，2.63(t，J＝6.0Hz，2H)，1.74-1.66(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ183.83，159.39，142.27，137.26，137.05，136.25，136.20，129.90，128.76，128.22，128.13，114.74，74.63，26.68，25.42，21.71，20.77；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)343/341(M+，5/15)，91(100).
7-氨基-6-苄氧基-8-羧基-5-氯四氢化萘将9-苄氧基-8-氯-1H-4，5，6，7-四氢化[e]苯并吲哚-2，3-二酮(51mg，0.15mmol)与NaOH(水溶液)(890μl，0.68M，0.60mmol)混合，加入水(460μl)，使所得到的浆状物冷却到10℃。将过氧化氢(46μl，30％，0.45mmol)与NaOH(水溶液)(1.33ml，0.68M，0.90mmol)混合后加入到该浆状物中。2分钟后再加入H2O2(20μl，30％，0.20mmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时。在该浆状物中加入二噁烷(1.5ml)，接着再加入H2O2(20μl，30％，0.20mmol)，并再搅拌2小时。将溶液过滤，用水(2ml)稀释，加入乙酸(100μl，1.75mmol)使产物沉淀。将该浆状物搅拌3分钟后，加入乙酸乙酯(40ml)和水(10ml)。用乙酸乙酯(10ml)萃取水相，用盐水(10ml)洗涤合并的有机层，经干燥(Na2SO4)并蒸发后得到标题化合物(35mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.56(d，J＝7.0Hz，2H)，7.43-7.36(m，3H)，4.84(s，2H)3.3(br，NH，OH)，2.73(m，2H)，2.59(m，2H)，1.70-1.61(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ169.29，139.87，139.47，136.83，133.13，129.46，128.28，128.25，128.05，122.28，116.49，73.08，28.08，26.76，22.17，22.04；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)333/331(M+，7/18)，224/222(22/63)，91(100).
7-氨基-5-氯-8-羧基-6-羟基四氢化萘将7-氨基-6-苄氧基-8-羧基-5-氯四氢化萘(33mg，0.10mmol)溶解在乙醇(3ml)中，并加入5％Pd/C(4mg)。在常温常压下加氢2小时。经过滤、蒸发及真空干燥后得到标题化合物(21mg)，熔点147℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.9(br，NH，OH)，2.66(t，J＝6.0Hz，2H)，2.54(t，J＝6.7Hz，2H)，1.70-1.64(m，2H)，1.63-1.57(m，2H)；13C NMR(DMSO-d6)δ169.73，138.12，136.45，128.13，123.32，121.3 6，115.15，27.86，26.91，22.45，22.25；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)243/241(M+，21/65)，225/223(35/100)，197/195(61/100).
实例3(方法A)4，6-二氯-3-羟基-5-甲基氨茴酸的制备2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯基三氟甲磺酸酯(triflate)2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯酚3(7.73g，37.3mmol)溶解在CH2Cl2(180ml)中，并用氩气吹洗。加入三乙胺(10.4ml，74.7mmol)和DMAp(10mg，0.08mmol)。使溶液冷却到-78℃后在3分钟内滴加三氟甲磺酸酐(9.4ml，56.0mmol)。在-78℃保持10分钟后将反应容器放入到冰浴中，并继续搅拌10分钟。加入二氯甲烷(200ml)和水(150ml)。水相用CH2Cl2(150ml)萃取，合并后的有机相用盐水(100ml)洗涤，然后干燥(MgSO4)。溶剂蒸发后得到20g粗产品。通过SiO2过滤，用CH2Cl2洗脱，接着进行快速柱色谱(SiO2，EtOAc-己烷1∶3)提纯，得到12.3g纯的标题化合物。熔点74℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.30(s，1H)，3.92(s，3H)，249(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ154.23，143.90，136.95，122.78，118.07，118.04(q，d＝321Hz)，105.36，57.22，
18.01；MS(EI，70eV)；m/z(相对强度.)340/338(M+，47/64)，207/205(27/41)，179/177(64/100).
2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯甲酸甲酯将2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯基三氟甲磺酸酯(7.60g，22.4mmol)溶解于二噁烷(75ml)中，加入1，3-双(二苯膦基)丙烷(371mg，0.90mmol)和乙酸钯(202mg，0.90mmol)。用CO吹洗后加入三乙胺(6.9ml，49.4mmol)和甲醇(23ml)。在70℃于常压下与CO反应25分钟，经过滤、溶剂蒸发后，使残留物在乙醚(350ml)和3M NH3水(150ml)之间分配，水层水乙醚(2×150ml)萃取，合并的有机相用盐水(150ml)洗涤，经干燥(MgSO4)及溶剂蒸发后得到粗产物。通过SiO2过滤，用乙酸乙酯洗脱，得到5.2g产品。再经快速柱色谱(SiO2，EtOAc-己烷1∶3)提纯得到4.18g标题化合物。Mp74℃；1HNMR(DMSO-d6)δ7.33(s，1H)，3.88(s，3H)，3.86(s，3H)，2.45(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ165.69，153.26，136.09，130.46，125.22，122.95，110.78，56.64，52.72，17.86；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)250/248(M+，53/80)，219/217(66/100)，191/189(8/12).
2，4-二氯-5-羟基-3-甲基苯甲酸将2，4-二氯-5-羟基-3-甲基苯甲酸甲酯(238mg，0.96mmol)溶解在甲醇(30ml)中，并用氩气吹洗。加入KOH(208mg，4.78mmol)，反应混合物在50℃搅拌19小时。蒸发掉溶剂，残留物在真空下干燥。加入氢溴酸(30ml，48％水溶液)，将混合物加热到110℃。3天后用真空蒸馏脱除大部分HBr。将粗产物与水(10ml)混合，加入浓NH3(1ml)和乙酸乙酯(40ml)，水相pH＝1用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，合并的有机相用盐水(10ml)洗涤后用MgSO4干燥。经溶剂蒸发后得到202mg标题化合物。1H NMR(DMSO-D6)δ10.68(br，1H)，7.15(s，1H)，2.42(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ166.68，151.82，135.87，131.24，123.70，121.17，114.36，17.93；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)222/220(M+，56/100)，2 05/203(36/59)，185(26).
4，6-二氯-3-羟基-5-甲基-2-硝基苯甲酸将2，4-二氯-5-羟基-3-甲基苯甲酸(90mg，0.41mmol)与CH3NO2(9ml)混合，并加热到40℃。在该溶液中加入HNO3(20μl，90％，0.43mmol)，反应混合物在室温下搅拌4小时。经溶剂蒸发后在KOH上进行真空干燥，得到112mg粗产物。经快速柱色谱(SiO2，EtOAc-HOAc30∶1)提纯得到79mg标题化合物。熔点199℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ164.27，147.05，139.61，136.27，128.35，126.46，118.87，18.62；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)267/265(M+，66/100)，249/248(67/85)，205/203(28/54).
4，6-二氯-3-羟基-5-甲基氨茴酸将4，6-二氯-3-羟基-5-甲基-2-硝基苯甲酸(69mg，0.26mmol)溶解于乙酸(10ml)中，加入10％Pd/C(10mg)和浓HCl(33μl，0.39mmol)。在常温常压下加氢2小时后得到一种浆状物，向其中加入甲醇(5ml)，并滤出催化剂。经溶剂蒸发、与甲苯(10ml)共蒸发后在KOH上进行真空干燥，得到63mg粗产物。通过快速柱色谱(SiO2，EtOAc-HOAc45∶1)提纯得到55mg标题化合物，熔点192℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.27(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ167.43，139.25，136.01，122.90，121.26，120.37，116.89，16.96；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)237/235(M+，45/79)，219/217(37/64)，191/189(60/100).
参考文献1.Diepolder E Chem.Ber.42，2916，19092.Chudozilov L.K Collect.Czech.Commun1，304，19293.Calam CT，J.Chem.Soc.，280，282，1939药理学方法材料[羟基-14C]3-羟基氨茴酸(6mCi/mmol)由E.Shaskan博士和L.Spitznagle博士(康涅狄克大学，Farmington，CT，U.S.A)提供。[3H]QUIN由核研究中心(Negev，以色列)提供。所有其它化学品和试剂均由厂商供应。
组织液的制备对于常规测定，雄性Sprague-Dauley鼠(150-200g)用断头法杀死，迅速将其大脑解剖至冰上。整个前脑或单独的中框神经系统区在四份容量(重量/体积)的蒸馏水中进行超声处理，在4℃以50,000g离心20分钟，得到的上清液用于检测。对于亚细胞的分离，用Mena等人的方法(1980)，收集下列部分P1(核部分)、P2(粗同视体部分)、P3(微粒体部分)、可溶物(胞液部分)、髓磷脂、突触体和线粒体。所有不溶部分检测前均进行超声处理。
3-HAO活性的测定对于常规测定，20μl组织提取物(相当于湿重5mg的原始组织)在有或没有抑制剂(10μl)存在下，于37℃，在总体积为195μl的含0.3mM Fe(SO4)2、38mM 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)/NaOH缓冲液(pH6.0)和5μM[14C]3HANA的溶液中培养30分钟。空白值是在相同条件下用在沸水浴上加热5分钟的组织测定后得到的。加入50μl6％HClO4以终止培养，试管置于冰上冷却，通过在Beckman microfuge中离心2分钟以分离沉淀。把220μl上清液加入到Dowex 50W(200-400目)阳离子交换柱(0.5×2cm)中，用1ml蒸馏水洗涤以收集所产生的[14C]QUIN。洗脱物中加入5.5ml闪烁液体，通过液体闪烁谱仪测定其放射性。初步实验表明，90-95％的[14C]QUIN已被这种方法收集，而未反应的[14C]3HANA留在柱上。
药物制剂本发明的新治疗方法可以很方便地通过口服、直肠内或肠道外给药的方法进行，给药剂量，例如约1-3000mg/kg，较好约10-1000mg/kg，最好约25-250mg/kg，并且可按1-4小时/天的方式给药。剂量取决于给药途径，最优选的途径是用含式I化合物的水溶液进行静脉输注。应该理解的是，对某一特定的病人来说，其最适宜的具体服法和剂量将受疾病的严重程度、病人的年龄和负责治疗的医生通常考虑的其它因素的影响。
含有本发明化合物的药物制剂可以方便地制成片剂、丸剂、胶囊、糖浆、粉剂或粒剂，用于口服给药；无菌的肠道外溶液或悬浊液，用于肠道外给药或栓剂，用于直肠内给药。
生产含有本发明化合物的口服剂型药剂时，还要加入片剂赋形剂如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉、纤维素衍生物；粘结剂如明胶、聚乙烯基吡咯烷酮和润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酯钙、聚乙二醇、蜡、石蜡等，然后再压制成片剂。如果需要糖衣片剂，药芯按上述方法制备，外面可涂以例如阿拉伯树脂、明胶、滑石、二氧化钛等。或者，片剂也可涂敷本领域技术人员所熟知的聚合物，该聚合物溶于易挥发的有机溶剂或多种有机溶剂的混合物中。涂层中也可加入染料以便使含不同活性物质或不同量活性化合物的片剂之间易于区别。
制备软胶囊时，活性物质可以和例如植物油或聚乙二醇相混。硬胶囊可含有使用上述任何一种片剂赋形剂的活性物质颗粒，这些赋形剂的例子有乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉(例如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉)纤维素衍生物或者明胶。液体或半固体的药物也可填入硬胶囊内。
直肠内用药的剂型可以是溶液或悬浮液或可制成含有与中性脂肪碱相混的活性物质的栓剂形式，或含有与植物油或石蜡油相混的活性物质的直肠用胶囊的形式。
口服的液体制剂可以是糖浆或悬浮液的形式，例如含0.2％至约20％(重量)本发明所述的活性物质，余量是糖和乙醇、水、甘油和聚乙二醇的混合物。如果需要，这种液体制剂也可含有着色剂、香味剂、糖精和作为增稠剂的羧甲基纤维素或其它本领域技术人员知道的赋形剂。
肠道外注射用的溶液可以制成该活性物质药物上可接受的水溶性盐的水溶液，其浓度最好从约0.5％至约10％(重量)。这些溶液也可含有稳定剂和/或缓冲剂，并可方便地装入各种剂量单位的安瓿中。
权利要求
1.通式I的化合物及其药理上可接受的盐 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
2.按照权利要求1的化合物，其中当R1、R2和/或R5代表烷基时，当X代表烷硫基时，或当R3、R4和/或R5代表氟烷基时，其烷基是指直链或支链的低级烷基，优选的是C1-C5烷基。
3.按照权利要求1的化合物，其中代表卤素的X、R3和/或R4选自碘、氟、氯和溴。
4.按照权利要求1的化合物，其中当R5代表芳基时，或当X代表芳硫基或芳氧基时，其芳基是苯基、呋喃基或噻吩基，其中的芳环可任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素取代。
5.按照权利要求1的化合物，该化合物是4，6-二氯-5-甲基氨茴酸。
6.制备按照权利要求1所述的式I化合物的方法，包括通过A)在R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使下面式II的化合物还原 式中X、R3和R4的定义如上面A)中所述，B)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式III的化合物脱保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面B)中所述，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)，C)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IV的化合物脱除酯基 式中R、R2、X、R3和R4的定义如上面C)中所述，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，D)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式V的化合物脱除酯基和保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面D)中所述，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，E)在R1＝烷基，R2＝H或烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式VI的化合物烷基化 式中X、R3和R4的定义如上面E)中所述，F)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基的情况下，可使式VII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R4的定义如上面F)中所述，G)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，R4选自氯、溴和碘的情况下，可使式VIII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R3的定义如上面G)中所述，或者H)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IX的化合物卤化 式中R1、R2、R3和R4的定义如上面H)中所述。
7.一种含有作为活性成分的按照权利要求1的化合物和药理上可接受的载体的药物制剂。
8.用于治疗作用的按照权利要求1的化合物。
9.如权利要求8定义的化合物，用作预防和治疗神经变性疾病的药剂。
10.按照权利要求1的化合物用于制造预防和治疗神经变性疾病药物的用途。
11.预防和治疗神经变性的方法，包括对需要这种治疗的宿主施用足量的按照权利要求1的化合物。
12.通式II的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
13.通式III的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)。
14.通式IV的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基。
15.通式V的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM。
16.通式VI的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
17.通式VII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R4选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基。
18.通式VIII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基。
19.通式IX的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
全文摘要
本发明涉及通式(I)的新的3-羟基氨茴酸(3-HANA)衍生物，式中R
文档编号C07C315/04GK1121344SQ9419179
公开日1996年4月24日 申请日期1994年2月22日 优先权日1993年2月26日
发明者S·K·M·比约克, K·B·戈汉马, M·T·林德堡, P·J·卢思曼, K·M·I·佩森, R·许瓦兹 申请人:阿斯特拉公司, 马利兰州大学
发明的领域本发明涉及新的3-羟基氨茴酸(3-HANA即3-羟基-2-氨基苯甲酸)衍生物、其制备方法和中间体、新的药物组合物及其在抑制导致产生内源神经毒素喹啉酸(QUIN)的酶，3-羟基氨茴酸酯加氧酶(3-HAO)方面的应用。
发明的背景3-HAO是色氨酸分解代谢途径中的酶，能导致3-羟基氨茴酸转变成喹啉酸。QUIN及其生物合成酶3-HAO已被证实存在于啮齿动物及人类的脑组织中。QUIN是一种激发性氨基酸，它通过N-甲基-D-天门冬氨酸酯(NMDA)受体起作用，最近因被公认其作用是作为与神经变性病症如杭廷顿氏(Huntington)病、中风/大脑局部缺血、缺氧、早老性痴呆(Alzheimers)病和艾滋痴呆综合症及癫痫有关的一种内源神经毒素而倍受注目。3-HAO活性抑制剂对于治疗由于喹啉酸过多引起的疾病有显著的效果。
先有技术4-卤代类酶解物曾被认为是3-HAO活性的抑制剂。1980年，Parli CJ、Krieter P、Schmedt B在“6-氯色氨酸代谢为4-氯氨茴酸一种3-羟基氨茴酸加氧酶有效的抑制剂”(Arch Biochemand Biophys 203，pp 161-166，1980)一文中指出，6-氯色氨酸的代谢物4-氯-3-羟基氨茴酸是鼠和猪的肝和肾中3-HAO的有效抑制剂。不久，Heyes MP、Hutto B、Markey SP在“4-氯-3-羟基氨茴酸酯对脑中3-羟基氨茴酸酯加氧酶的抑制”(NeurochemInt 13，pp 405-408，1988)一文中证实，4-氯-3-羟基氨茴酸也是鼠脑中3-HAO的抑制剂。1989年，Todd WP、CarpenterBK和Schwarcz R在“4-卤代-3-羟基氨茴酸酯的制备方法及其对鼠类和人体脑组织中3-羟基氨茴酸酯加氧酶抑制作用的证明”(Prep Biochem 19，pp155-165，1989)一文中说明，4-氟-、4-氯-和4-溴-3-羟基氨茴酸对鼠类及人体脑中3-HAO具有非常相似的阻断效果。
发明的简述本发明涉及能抑制酶3-HAO的化合物，其IC50值(抑制50％的浓度)与先有技术化合物相似，但其稳定性更好。
因此，本发明涉及通式I的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
本发明的另一个目的是制备式I化合物的方法，通过A)在R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使下面式II的化合物还原 式中X、R3和R4的定义如上面A)中所述，B)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式III的化合物脱保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面B)中所述，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)，C)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IV的化合物脱除酯基 式中R、R2、X、R3和R4的定义如上面C)中所述，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，D)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式V的化合物脱除酯基和保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面D)中所述，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，E)在R1＝烷基，R2＝H或烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式VI的化合物烷基化 式中X、R3和R4的定义如上面E)中所述，F)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基的情况下，可使式VII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R4的定义如上面F)中所述，G)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，R4选自氯、溴和碘的情况下，可使式VIII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R3的定义如上面G)中所述，或者H)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IX的化合物卤化 式中R1、R2、R3和R4的定义如上面H)中所述。
本发明也涉及含有作为活性成分的式I化合物和药理上可接受的载体的药物组合物和所述化合物用于制造预防和治疗神经退化疾病药物的用途。
本发明进一步的目的是合成用来制备式I化合物的中间体，即下面通式II的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；下面通式III的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)；下面通式IV的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基；下面通式V的化合物
式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM；下面通式VI的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；下面通式VII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R4选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基；下面通式VIII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基；和下面通式IX的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
发明的详述下列定义适用于整个说明书及所附的权利要求书。
除非另有说明，术语“烷基”是指直链或支化的低级烷基，优选C1-C6烷基。所述低级烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基和直链及支链的戊基和己基。
除非另有说明，术语“芳基”是指苯基、呋喃基或噻吩基，其中的环任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素取代。
除非另有说明，术语“烷硫基”是指直链或支化的低级烷硫基，优选C1-C6烷硫基，所述低级烷硫基的实例包括甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基和直链及支链的戊硫基和己硫基。
除非另有说明，术语“芳硫基”是指苯硫基，其中苯环可任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素所取代。
除非另有说明，术语“芳氧基”是指苯氧基，其中苯环可任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素所取代。
除非另有说明，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
目前已知的实施本发明的最好方式是用4，6-二氯-5-甲基氨茴酸。
本发明的化合物可用于预防和治疗神经变性，特别是诸如中风、脑局部缺血、缺氧、癫痫和神经变性疾病如早老性痴呆病、多重梗塞痴呆、杭廷顿氏病和艾滋痴呆综合症等。
下面将详细描述式I化合物的制备方法。
制备方法式I的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；可用下列方法之一制备。
方法A式I的化合物，式中R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 其中R7＝H或烷基，可通过例如在大气压力或升高的压力下，在适当的溶剂如乙醇或乙酸乙酯中用H2和催化剂如Pd/C、阮内镍或PtS2使式II的化合物还原制得 式中X.R3和R4的定义如上面在方法A中的式I中所述。该还原反应也可通过在适当的溶剂如乙醇中与SnCl2、NH2NH2·H2O或Na2S2O5反应来完成。
方法B通式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由通式III的化合物 其中R1、R2、X、R3和R4与方法B中式I的定义相同，PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，通过用例如路易斯酸如BBr3或三甲基甲硅烷基碘或用烷基-或芳基SNa或烷基-或芳基SLi脱除保护基的方法制备，随后调节pH值以得到3-羟基-2-氨基-苯甲酸衍生物。在PG＝SEM的情况下，可在适当的溶剂如N，N-二甲基亚丙基脲(DMPU)或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，于高温下用氟化四丁铵(TBAF)或CsF进行脱除保护基的反应。苄基可用例如H2和Pd/C或PtS2作催化剂通过氢解除去。2，2，2-三氯乙基可用Zn在醋酸中除去。
方法C式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由IV的化合物 其中R1、R2、X、R3和R4与方法C中式I的定义相同，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，通过例如用碱如KOH，在适当的溶剂如甲醇中，于室温或高温下脱除酯基，或用烷基-或芳基SLi或烷基-或芳基SNa或用Me3SiI脱除酯基的方法制备，随后调节pH值得到3-羟基-2-氨基苯甲酸衍生物。在R6＝Bn的情况下，则可用例如H2和Pd/C或PtS2进行氢解得到该羧酸。2，2，2-三氯乙基酯可用例如Zn在乙酸中分解，而SEM-酯可用例如TBAF在DMPU中分解。方法D式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式V的化合物 其中R1、R2、X、R3和R4与方法D中式I的定义相同，PG和R6选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，通过用例如烷基-或芳基硫锂、烷基-或芳基硫钠或用Me3SiI脱除酯基和保护基的方法制备，随后调节PH值得到3-羟基-2-氨基苯甲酸衍生物。在PG和R6＝Bn的情况下，可用例如H2和Pd/C或PtS2进行氢解得到3-羟基-2-氨基苯甲酸衍生物；如果PG和R6＝SEM，则可用TBAF。方法E式I的化合物，X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式VI的化合物 其中X、R3和R4与方法E中式I的定义相同，通过用例如对应于R1的醛和还原剂如NaCNBH3和HCl在适当溶剂如CH3CN、H2O或甲醇中还原烷基化的方法制备。一-和二-N-烷基化衍生物可用例如色谱法分离。
方法F式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由式VII的化合物 式中R1、R2、X和R4与方法F中式I的定义相同，通过用例如Br2、Cl2或ICl在乙酸中，于室温或高温下进行卤化制得。或者，也可用Br2或I2和三氟乙酸汞在三氟乙酸中，于室温或高温下使式VII化合物卤化。
方法G式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，R4选自氯、溴和碘，可由式VIII的化合物 式中R1、R2、X和R3与方法G中式I的定义相同，通过例如按方法F进行卤化制得。
方法H式I的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式IX的化合物 式中R1、R2、R3和R4与方法H中式I的定义相同，通过例如按方法F进行卤化制得。
中间化合物方法IIa式II的化合物，其中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式X的化合物 式中X、R3和R4与方法IIa中式II的定义相同，通过用例如HNO3在诸如CH3NO2、CH2Cl2或H2O等溶剂中，或用HNO3和H2SO4的混合物进行硝化来制备。
方法IIb式II的化合物，其中X选自氯、溴或碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 R7，其中R7＝H或烷基，可由式XI的化合物 式中R3和R4与方法IIb中式II的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法来制备。
方法IIIa式III的化合物，其中R1和R2＝H；X选自卤素和芳氧基；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S和SO2，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，PG选自烷基、Bn、MEM和MOM，可由式XII的化合物 式中X、R3、R4和PG与方法IIIa中式III的定义相同，通过与例如H2O2和NaOH在适当的溶剂如水或二噁烷中进行反应来制备。然后调节pH值以得到3-羟基-氨茴酸衍生物。
方法IIIb式III的化合物，其中R1和R2＝H；X选自烷硫基、氯和氟；R3和R4可以相同或不同，且可选自氯、氟、甲基、氟烷基和Z-R5，其中Z选自CHn、N、O和S，其中n＝1或2，R5＝烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z的定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7是H或烷基；PG选自烷基、SEM、MEM和MOM，可由式XIII的化合物 式中X、R3、R4和PG与方法IIIb中式III的定义相同；DMG＝COtBu、CO2tBu或COCF3；W＝H或Br，通过例如与烷基锂在适当的溶剂如四氢呋喃(THF)中，在低温下进行反应来制备。然后使得到的芳基锂衍生物与CO2(S)反应，进行酸化，再在高温下用HCl水溶液脱除DMG基团。
方法IVa式IV的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，R6选自例如SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，可由式XIV的化合物 式中R1、R2、X、R4和R6与方法IVa中式IV的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法来制备。
方法IVb式IV的化合物，其中R1＝H或烷基；R2＝烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和-N-R7，其中R7＝H或烷基；R6选自SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，可由式XV的化合物 式中X、R3、R4和R6与方法IVb中式IV的定义相同，通过例如按照方法E的烷基化方法来制备。
方法V式V的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷基、芳硫基、芳氧基、氯、氟和氰基；R3和R4可以相同或不同，且选自氯、氟、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3、R4合在一起形成一个饱和或不饱和的环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基；R6和PG选自烷基和Bn，可由式XVI的化合物 式中R1、R2、X、R3、R4和PG与方法V中式V的定义相同；W＝Br、I或OSO2CF3，通过在适当的溶剂如DMF或含碱如三乙胺的二噁烷中与例如Pd(OAc)2、CO、1，3-双(二苯膦基)丙烷和对应于R6的醇的混合物反应的方法制备。
方法VI式VI的化合物，其中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3、R4合在一起形成一个饱和或不饱和的环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式XVII的化合物 式中X、R3和R4与方法VI中式VI的定义相同，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM，通过例如按照方法D的脱除酯基和保护基的方法来制备。
方法VIIa式VII的化合物，其中R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R4＝RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由式XVIII的化合物 式中X和R4与方法VIIa中式VII的定义相同，通过例如按照方法A的还原法制备。
方法VIIb式VII的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R4＝RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由式XIX的化合物 式中R1、R2、X和R4与方法VIIb中式VII的定义相同，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM、和MOM，通过例如按照方法D的脱除酯基和保护基的方法制备。
方法VIII式VIII的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，可由XX的化合物 式中R1、R2和R3与方法VIII中式VIII的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法制备。
方法IXa式IX的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3选自氯、溴和碘；R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，可由式XXI的化合物 式中R1、R2和R4与方法IXa中式IX的定义相同，通过例如按照方法F的卤化法制备。
方法IXb式IX的化合物，其中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3和R4可以相同或不同，且选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3、R4合在一起形成一个饱和或不饱和的环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上面Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，可由式XXII的化合物 式中R1、R2、R3和R4与方法IXb中式IX的定义相同，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，通过例如按照方法C的脱除酯基的方法制备。
实施例实例1(方法B)4-氯-5，6-二甲基-3-羟基氨茴酸的制备2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯酚将4，5-二甲基-2-硝基苯酚1(7.00g，41.9mmol)溶解于CHCl3(300ml)中，并用氩气吹洗。加入溶于CHCl3的氯(84.8ml，0.99M，83.7mmol)，所得溶液在室温下搅拌26小时，避光。将溶剂、HCl和过量的Cl2蒸发出来(避光)，让残留物在CH2Cl2(400ml)和盐水(100ml)两相之间分配。用MgSO4干燥后蒸发出溶剂，得到8.9g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)得到标题化合物(6.47g)。Mp62-63℃；1H NMR(DMSO-d6)δ11.5(br，OH)，7.80(s，1H)，2.34(s，3H)，2.27(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ146.8 6，143.84，134.06，128.85，123.73，122.94，19.37，17.36；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)203/201(M+，37/100)，91(88).
1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯把2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯酚(6.44g，31.9mmol)溶解于无水DMF(105ml)中，并用氩气吹洗。加入苄基溴(4.17ml，35.1mmol)和K2CO3(13.24g，95.7mmol)。反应混合物在室温下搅拌8小时(避光)后过滤。加入水(5ml)，用二甲苯(2×150ml)和CH2Cl2(100ml)将溶剂共蒸发出来。残留物与CHCl3(100ml)混合后过滤，溶剂蒸发后留下10.8g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)得到标题化合物(8.44g)。Mp74-75℃；1H NMR(DMSO-d6)δ7.80(s，1H)，7.4 8-7.37(m，5H)，5.06(s，2H)，2.37(s，3H)，2.34(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ145.24，142.22，142.08，135.73，134.73，129.61，128.39，128.37，128.35，123.64，75.74，19.74，17.13；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)293/291(M+，0.08/0.37)，187/185(8/24)，91(100).
6-氨基-1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基苯将1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6-硝基苯(3.00g，10.3mmol)溶解于甲醇(420ml)中，并使之冷却到+2℃。加入氯化亚铜(6.11g，30.8mmol)，接着在1.5小时内，在2-4℃分批加入KBH4(3.88g，72.0mmol)。反应混合物在2℃搅拌1小时，再加入KBH4(400mg，7.41mmol)。在2℃保持1小时后再加入KBH4(120mg，2.22mmol)，并继续搅拌20分钟。过滤后蒸出溶剂，得到的残留物在乙酸乙酯(400ml)和水(75ml)两相之间进行萃取分配。经干燥(MgSO4)和蒸发后得到2.94g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，CHCl3)得到标题化合物(2.14g)。Mp57-58℃；1H NMR(DMSO-d6)δ7.54(d，J＝6.5Hz，2H)，7.42-7.34(m，3H)，6.52(s，1H)，4.83(s，2H)，4.79(s，2H)，2.12(s，6H)；13C NMR(DMSO-d6)δ140.00，138.91，137.30，133.00，128.27，128.22，127.91，127.33，121.23，115.35，72.73，20.24，15.45；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)286/284(M＋23，42/100).
1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6-(E/Z)-肟基乙酰氨基苯将6-氨基-1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基苯(2.14g，8.19mmol)溶解于DMF(60ml)和水(2ml)中。加入浓HCl(683μl，8.19mmol)和水合氯醛(1.49g，9.00mmol)，然后将烧瓶置于预热到105℃的油浴中。2分钟后加入溶解在水(4ml)中的NH2OH·HCl(2.28g，32.8mmol)，反应混合物在100℃搅拌1小时，注意避光，然后在室温下搅拌15分钟。经过蒸发及与二甲苯和CH2Cl2共蒸发后得到的残留物在乙酸乙酯和水两相之间进行萃取分配。有机相经干燥(MgSO4)后将溶剂蒸发，得到3.2g粗产物。通过快速柱色谱提纯(SiO2，EtOAc-CHCl31∶10)得到E/Z混合的标题化合物(1.278g)。
1H NMR(DMSO-d6)δ12.33和9.71(2s，1H)，9.20和8.27(2s，1H)，7.91 and 7.83(2s，1H)，7.60(s，1H)，7.65-7.36(m，5H)，4.90和4.87(2s，2H)，2.26-2.23(m，6H)；13C NMR(DMSO-d6)δ160.18，159.99，143.40，143.06，136.55，136.08，133.40，133.26，130.97，130.39，129.70，129.44，128.69，128.40，128.36，128.28，128.19，128.11，128.03，127.37，127.25，121.51，121.21，74.66，74.18，20.32，16.08；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)334/332(M+，4/12)，172/170(12/51)，91(100).
7-苄氧基-6-氯-1H-4，5-二甲基苯并吲哚-2，3-二酮将浓H2SO4(6ml)加热至80℃后加入1-苄氧基-2-氯-3，4-二甲基-6(E/Z)-肟基乙酰氨基苯(700ml，2.10mmol)。反应混合物在80℃搅拌10分钟后倒入到冰水(200ml)中。用乙酸乙酯(200ml)萃取，经干燥(MgSO4)和蒸发后得到的残留物376mg溶解在无水DMF(5ml)和BnBr(275μl，2.30mmol)中，并加入K2CO3(318mg，2.30mmol)。反应混合物在室温避光搅拌30小时。过滤、加入乙酸(1ml)、与二甲苯(3×100ml)共蒸发、残留物与乙酸(500μl)和CH2Cl2-甲醇(50∶1，15ml)混合，再进行过滤和蒸发，得到741mg粗产物。通过反复快速柱色谱提纯(SiO2，CH2Cl2-甲醇梯度洗脱)得到标题化合物(13mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.42(s，1H)，7.57(d，J＝6.2Hz，2H)，7.42-7.35(m，3H)，4.92(s，2H)，2.44(s，3H)，2.22(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ184.30，159.33，141.87，137.02，136.98，136.26，135.41，130.15，128.84，128.28，128.18，115.64，74.63，15.26，14.20；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)317/315(M+，3/7)，91(100).
3-苄氧基-4-氯-5，6-二甲基氨茴酸将7-苄氧基-6-氯-1H-4，5-二甲基苯并吲哚-2，3-二酮(13mg，0.04mmol)与二噁烷(500μl)混合，并加入NaOH(200μl，0.68M，0.14mmol)。该溶液冷却到10℃后加入溶解于NaOH(410μl，0.68M，0.27mmol)的H2O2(4μl，30％，0.12mmol)。2分钟后再加入H2O2(1μl，0.03mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。加入H2O2(2μl，0.06mmol)，20分钟后用N2气流脱除部分溶剂，然后加入乙酸(38μl，0.66mmol)使橙色粗产物沉淀出来。尽可能多地脱除二噁烷，然后让浆状物于乙酸乙酯(3ml)和水(500μl)两相之间分配，水相用乙酸乙酯(500μl)萃取，合并后的有机相用盐水(500μl)洗涤后用MgSO4干燥。溶剂蒸发后将残留物溶解于二噁烷(100μl)和NaOH(200μl，0.68M，0.14mmol)中，冷却至10℃后令其在NaOH(400μl，0.27mmol)中在10℃至室温下与H2O2(4μl，0.12mmol)反应3小时。按前述方法进行后处理后得到标题化合物(11mg)。1HNMR(DMSO-d6)δ7.55(d，J＝7.0Hz，2H)，7.43-7.35(m，3H)，4.82(s，2H)，2.21(s，3H)，2.19(s，3H)；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)307/305(M+，7/19)，216/214(26/75)，198/196(14/44)，91(100).
4-氯-5，6-二甲基-3-羟基氨茴酸将3-苄氧基-4-氯-5，6-二甲基氨茴酸(10mg，0.03mmol)溶解于乙醇(1.5ml)中，并加入10％Pd/C(2mg)。在室温常压下加氢5小时后经过滤、蒸发得到7mg粗产物。用制备性高压液相色谱(HPLC)(Lichrosob-C18，甲醇-磷酸盐缓冲液(pH3)50∶50)提纯，用NaHCO3(水溶液)将pH调到5，用N2气流进行浓缩，用乙酸乙酯(3×5ml)萃取，用盐水洗涤有机相，经干燥(MgSO4)和蒸发后得到标题化合物(3mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.3(br，OH)，3.16(s，2H)，2.16(s，3H)，2.15(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ169.92，137.87，135.16，126.38，123.51，121.39，117.31，17.72，15.95；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)217/215(M+，21/63)，199/197(20/59)，171/169(37/100).
实例2(方法B)7-氨基-5-氯-8-羧基-6-羟基四氢化萘的制备5-氯-6-羟基-7-硝基四氢化萘将6-羟基-7-硝基四氢化萘2(2.44g，12.6mmol)溶解在CHCl3(290ml)中，所得溶液用氩气吹洗。加入溶于CHCl3(25.6ml，0.99M，25.3mmol)的氯，在室温下将该溶液搅拌6小时，注意避光。在避光条件下使溶剂、HCl和过量的Cl2蒸发得到3.02g粗产物。通过快速柱色谱(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)提纯，得到标题化合物(2.29g)。1HNMP(DMSO-d6)δ10.62(br，1H)，7.71(s，1H)， 2.75-2.69(m，4H)，1.77-1.64(dm，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ146.30，143.58，134.59，129.68，123.42，122.79，28.26，27.91，21.69，21.62；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)229/227(M+，32/100，101/99(12/36)，117/115(23/50).
6-苄氧基-5-氯-7-硝基四氢化萘将5-氯-6-羟基-7-硝基四氢化萘(2.28g，10.0mmol)溶解在无水DMF(40ml)中，并用氩气吹洗。加入苄基氯(11.5ml，100.0mmol)、n-Bu4NI(95mg，0.25mmol)和K2CO3(41.5g，30.0mmol)。反应混合物在室温下搅拌24小时，避光。滤出生成的盐，溶剂及过量的BnCl与二甲苯(3×200ml)和CH2Cl2(200ml)一起进行共蒸发，然后真空干燥。粗产物(5.8g)用快速柱色谱(SiO2，CHCl3-己烷1∶1)提纯，得到标题化合物(2.20g)。
Mp 80-82℃；1H NMR(DMSO-d6)δ7.73(s，1H)，7.48-7.37(m，5H)，5.06(s，2H)，2.79-2.75(m，4H)，1.79-1.69(dm，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ144.81，142.14，135.79，135.56，129.55，128.42，123.40，106.20，105.51，75.80，28.63，27.65，21.55，21.36；MS(TSP)m/z(相对强度)337/335(M＋NH4，30/100).
7-氨基-6-苄氧基-5-氯四氢化萘在6-苄氧基-5-氯-7-硝基四氢化萘(2.56g，8.33mmol)中加入甲醇(430ml)，所得混合物冷却到1℃。加入氯化亚铜(4.95g，25.0mmol)，接着在1小时零10分内在2℃分批加入KBH4(3.15g，58.3mmol)。过3.5小时后，再加入KBH4(100mg，1.85mmol)，在2℃经7.5小时后将反应混合物过滤，溶剂蒸发。让残留物在乙酸乙酯和水之间进行萃取分配，有机相用盐水(50ml)后用MgSO4干燥，经蒸发后得到2.47g粗产物。通过快速柱色谱(SiO2，CHCl3)提纯，得到标题化合物(1.82g)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.55(dd，J1＝1.6Hz，J2＝8.1Hz，2H)，7.41-7.34(m，3H)，6.42(s，1H)，4.84(s，2H)，4.79(s，2H)，2.58-2.52(m，4H)，1.71-1.60(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)d140.10，139.29，137.29，133.96，128.29，128.23，127.93，126.99，121.84，113.96，29.03，26.25，22.68，22.35；MS(TSP)m/z(相对强度)290/288(M＋1，27/100).
6-苄氧基-5-氯-7(E/Z)-肟基乙酰氨基四氢化萘将7-氨基-6-苄氧基-5-氯四氢化萘(1.84g，6.41mmol)溶解于DMF(80ml)和水(8ml)中。所得溶液用氩气吹洗，先后加入HCl(530μl，12M，6.41mmol)和水合氯醛(1.17g，7.05mmol)。将该烧瓶放入到预热到110℃的油浴中，在搅拌下加入NH2OH·HCl(1.78g，25.6mmol)的水(8ml)溶液。在100℃保持1小时，然后在室温保持1小时，溶剂与二甲苯(3×100ml)和CH2Cl2(100ml)一起进行共蒸发。让残留物在乙酸乙酯和水之间进行萃取分配，有机相用盐水(50ml)洗涤、用Na2SO4干燥，经蒸发后得到2.63g粗产物。通过柱色谱(SiO2，EtOAc-CHCl31∶5)提纯得到E/Z混合的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ12.33和9.72(2s，1H)，9.20和8.28(2s，1H)，7.84和7.72(2s，1H)，7.60(s，1H)，7.57-7.37(m，5H)，4.90和4.88(2s，2H)，2.71-2.65(m，4H)，1.75-1.68(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ160.26，160.02，143.45，143.00，136.60，136.13，134.37，134.26，131.20，130.63，129.81，129.52，128.75，128.33，128.16，128.09，127.04，120.68，120.33，74.75，74.28，29.13，26.74，22.17，22.00；MS(TSP)m/z(相对强度.)361/359(M＋1，28/100 ).
9-苄氧基-8-氯-1H-4，5，6，7-四氢[e]苯并吲哚-2，3-二酮将浓H2SO4(5ml)加热到60℃，然后在1分钟内分批加入6-苄氧基-5-氯-7-(E/Z)-肟基乙酰氨基四氢化萘(500mg，1.39mmol)。反应混合物在60℃搅拌10分钟后倒在粉碎的冰(50ml)上。用乙酸乙酯(200ml)萃取，经干燥(Na2SO4)和蒸发后，得到的残留物317mg溶解于无水DMF(3ml)中，用氩气冲洗。加入苄基溴(165μl，1.39mmol)和K2CO3(192mg，1.39mmol)，反应混合物在室温下搅拌18小时。加入甲醇(3ml)，滤出所生成的盐，溶剂与二甲苯(2×30ml)共蒸发，然后进行真空干燥。在所得粗产物中加入乙酸(0.3ml，5.2mmol)，通过SiO2过滤，用(EtOAc-MeOH20∶1)洗脱，接着将溶剂蒸发，得到暗色的残留物(330mg)。通过反复快速柱色谱(SiO2，CH2Cl2-MeOH50∶1)提纯得到标题化合物(56mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.40(s，1H)，7.58(d，J＝7.3Hz，2H)，7.42-7.36(m，3H)，4.90(s，2H)，2.92(t，J＝7.3Hz，2H)，2.63(t，J＝6.0Hz，2H)，1.74-1.66(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ183.83，159.39，142.27，137.26，137.05，136.25，136.20，129.90，128.76，128.22，128.13，114.74，74.63，26.68，25.42，21.71，20.77；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)343/341(M+，5/15)，91(100).
7-氨基-6-苄氧基-8-羧基-5-氯四氢化萘将9-苄氧基-8-氯-1H-4，5，6，7-四氢化[e]苯并吲哚-2，3-二酮(51mg，0.15mmol)与NaOH(水溶液)(890μl，0.68M，0.60mmol)混合，加入水(460μl)，使所得到的浆状物冷却到10℃。将过氧化氢(46μl，30％，0.45mmol)与NaOH(水溶液)(1.33ml，0.68M，0.90mmol)混合后加入到该浆状物中。2分钟后再加入H2O2(20μl，30％，0.20mmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时。在该浆状物中加入二噁烷(1.5ml)，接着再加入H2O2(20μl，30％，0.20mmol)，并再搅拌2小时。将溶液过滤，用水(2ml)稀释，加入乙酸(100μl，1.75mmol)使产物沉淀。将该浆状物搅拌3分钟后，加入乙酸乙酯(40ml)和水(10ml)。用乙酸乙酯(10ml)萃取水相，用盐水(10ml)洗涤合并的有机层，经干燥(Na2SO4)并蒸发后得到标题化合物(35mg)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.56(d，J＝7.0Hz，2H)，7.43-7.36(m，3H)，4.84(s，2H)3.3(br，NH，OH)，2.73(m，2H)，2.59(m，2H)，1.70-1.61(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ169.29，139.87，139.47，136.83，133.13，129.46，128.28，128.25，128.05，122.28，116.49，73.08，28.08，26.76，22.17，22.04；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)333/331(M+，7/18)，224/222(22/63)，91(100).
7-氨基-5-氯-8-羧基-6-羟基四氢化萘将7-氨基-6-苄氧基-8-羧基-5-氯四氢化萘(33mg，0.10mmol)溶解在乙醇(3ml)中，并加入5％Pd/C(4mg)。在常温常压下加氢2小时。经过滤、蒸发及真空干燥后得到标题化合物(21mg)，熔点147℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.9(br，NH，OH)，2.66(t，J＝6.0Hz，2H)，2.54(t，J＝6.7Hz，2H)，1.70-1.64(m，2H)，1.63-1.57(m，2H)；13C NMR(DMSO-d6)δ169.73，138.12，136.45，128.13，123.32，121.3 6，115.15，27.86，26.91，22.45，22.25；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)243/241(M+，21/65)，225/223(35/100)，197/195(61/100).
实例3(方法A)4，6-二氯-3-羟基-5-甲基氨茴酸的制备2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯基三氟甲磺酸酯(triflate)2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯酚3(7.73g，37.3mmol)溶解在CH2Cl2(180ml)中，并用氩气吹洗。加入三乙胺(10.4ml，74.7mmol)和DMAp(10mg，0.08mmol)。使溶液冷却到-78℃后在3分钟内滴加三氟甲磺酸酐(9.4ml，56.0mmol)。在-78℃保持10分钟后将反应容器放入到冰浴中，并继续搅拌10分钟。加入二氯甲烷(200ml)和水(150ml)。水相用CH2Cl2(150ml)萃取，合并后的有机相用盐水(100ml)洗涤，然后干燥(MgSO4)。溶剂蒸发后得到20g粗产品。通过SiO2过滤，用CH2Cl2洗脱，接着进行快速柱色谱(SiO2，EtOAc-己烷1∶3)提纯，得到12.3g纯的标题化合物。熔点74℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.30(s，1H)，3.92(s，3H)，249(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ154.23，143.90，136.95，122.78，118.07，118.04(q，d＝321Hz)，105.36，57.22，
18.01；MS(EI，70eV)；m/z(相对强度.)340/338(M+，47/64)，207/205(27/41)，179/177(64/100).
2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯甲酸甲酯将2，4-二氯-5-甲氧基-3-甲基苯基三氟甲磺酸酯(7.60g，22.4mmol)溶解于二噁烷(75ml)中，加入1，3-双(二苯膦基)丙烷(371mg，0.90mmol)和乙酸钯(202mg，0.90mmol)。用CO吹洗后加入三乙胺(6.9ml，49.4mmol)和甲醇(23ml)。在70℃于常压下与CO反应25分钟，经过滤、溶剂蒸发后，使残留物在乙醚(350ml)和3M NH3水(150ml)之间分配，水层水乙醚(2×150ml)萃取，合并的有机相用盐水(150ml)洗涤，经干燥(MgSO4)及溶剂蒸发后得到粗产物。通过SiO2过滤，用乙酸乙酯洗脱，得到5.2g产品。再经快速柱色谱(SiO2，EtOAc-己烷1∶3)提纯得到4.18g标题化合物。Mp74℃；1HNMR(DMSO-d6)δ7.33(s，1H)，3.88(s，3H)，3.86(s，3H)，2.45(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ165.69，153.26，136.09，130.46，125.22，122.95，110.78，56.64，52.72，17.86；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)250/248(M+，53/80)，219/217(66/100)，191/189(8/12).
2，4-二氯-5-羟基-3-甲基苯甲酸将2，4-二氯-5-羟基-3-甲基苯甲酸甲酯(238mg，0.96mmol)溶解在甲醇(30ml)中，并用氩气吹洗。加入KOH(208mg，4.78mmol)，反应混合物在50℃搅拌19小时。蒸发掉溶剂，残留物在真空下干燥。加入氢溴酸(30ml，48％水溶液)，将混合物加热到110℃。3天后用真空蒸馏脱除大部分HBr。将粗产物与水(10ml)混合，加入浓NH3(1ml)和乙酸乙酯(40ml)，水相pH＝1用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，合并的有机相用盐水(10ml)洗涤后用MgSO4干燥。经溶剂蒸发后得到202mg标题化合物。1H NMR(DMSO-D6)δ10.68(br，1H)，7.15(s，1H)，2.42(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ166.68，151.82，135.87，131.24，123.70，121.17，114.36，17.93；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)222/220(M+，56/100)，2 05/203(36/59)，185(26).
4，6-二氯-3-羟基-5-甲基-2-硝基苯甲酸将2，4-二氯-5-羟基-3-甲基苯甲酸(90mg，0.41mmol)与CH3NO2(9ml)混合，并加热到40℃。在该溶液中加入HNO3(20μl，90％，0.43mmol)，反应混合物在室温下搅拌4小时。经溶剂蒸发后在KOH上进行真空干燥，得到112mg粗产物。经快速柱色谱(SiO2，EtOAc-HOAc30∶1)提纯得到79mg标题化合物。熔点199℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ164.27，147.05，139.61，136.27，128.35，126.46，118.87，18.62；MS(EI，70eV)m/z(相对强度.)267/265(M+，66/100)，249/248(67/85)，205/203(28/54).
4，6-二氯-3-羟基-5-甲基氨茴酸将4，6-二氯-3-羟基-5-甲基-2-硝基苯甲酸(69mg，0.26mmol)溶解于乙酸(10ml)中，加入10％Pd/C(10mg)和浓HCl(33μl，0.39mmol)。在常温常压下加氢2小时后得到一种浆状物，向其中加入甲醇(5ml)，并滤出催化剂。经溶剂蒸发、与甲苯(10ml)共蒸发后在KOH上进行真空干燥，得到63mg粗产物。通过快速柱色谱(SiO2，EtOAc-HOAc45∶1)提纯得到55mg标题化合物，熔点192℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ2.27(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ167.43，139.25，136.01，122.90，121.26，120.37，116.89，16.96；MS(EI，70eV)m/z(相对强度)237/235(M+，45/79)，219/217(37/64)，191/189(60/100).
参考文献1.Diepolder E Chem.Ber.42，2916，19092.Chudozilov L.K Collect.Czech.Commun1，304，19293.Calam CT，J.Chem.Soc.，280，282，1939药理学方法材料[羟基-14C]3-羟基氨茴酸(6mCi/mmol)由E.Shaskan博士和L.Spitznagle博士(康涅狄克大学，Farmington，CT，U.S.A)提供。[3H]QUIN由核研究中心(Negev，以色列)提供。所有其它化学品和试剂均由厂商供应。
组织液的制备对于常规测定，雄性Sprague-Dauley鼠(150-200g)用断头法杀死，迅速将其大脑解剖至冰上。整个前脑或单独的中框神经系统区在四份容量(重量/体积)的蒸馏水中进行超声处理，在4℃以50,000g离心20分钟，得到的上清液用于检测。对于亚细胞的分离，用Mena等人的方法(1980)，收集下列部分P1(核部分)、P2(粗同视体部分)、P3(微粒体部分)、可溶物(胞液部分)、髓磷脂、突触体和线粒体。所有不溶部分检测前均进行超声处理。
3-HAO活性的测定对于常规测定，20μl组织提取物(相当于湿重5mg的原始组织)在有或没有抑制剂(10μl)存在下，于37℃，在总体积为195μl的含0.3mM Fe(SO4)2、38mM 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)/NaOH缓冲液(pH6.0)和5μM[14C]3HANA的溶液中培养30分钟。空白值是在相同条件下用在沸水浴上加热5分钟的组织测定后得到的。加入50μl6％HClO4以终止培养，试管置于冰上冷却，通过在Beckman microfuge中离心2分钟以分离沉淀。把220μl上清液加入到Dowex 50W(200-400目)阳离子交换柱(0.5×2cm)中，用1ml蒸馏水洗涤以收集所产生的[14C]QUIN。洗脱物中加入5.5ml闪烁液体，通过液体闪烁谱仪测定其放射性。初步实验表明，90-95％的[14C]QUIN已被这种方法收集，而未反应的[14C]3HANA留在柱上。
药物制剂本发明的新治疗方法可以很方便地通过口服、直肠内或肠道外给药的方法进行，给药剂量，例如约1-3000mg/kg，较好约10-1000mg/kg，最好约25-250mg/kg，并且可按1-4小时/天的方式给药。剂量取决于给药途径，最优选的途径是用含式I化合物的水溶液进行静脉输注。应该理解的是，对某一特定的病人来说，其最适宜的具体服法和剂量将受疾病的严重程度、病人的年龄和负责治疗的医生通常考虑的其它因素的影响。
含有本发明化合物的药物制剂可以方便地制成片剂、丸剂、胶囊、糖浆、粉剂或粒剂，用于口服给药；无菌的肠道外溶液或悬浊液，用于肠道外给药或栓剂，用于直肠内给药。
生产含有本发明化合物的口服剂型药剂时，还要加入片剂赋形剂如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉、纤维素衍生物；粘结剂如明胶、聚乙烯基吡咯烷酮和润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酯钙、聚乙二醇、蜡、石蜡等，然后再压制成片剂。如果需要糖衣片剂，药芯按上述方法制备，外面可涂以例如阿拉伯树脂、明胶、滑石、二氧化钛等。或者，片剂也可涂敷本领域技术人员所熟知的聚合物，该聚合物溶于易挥发的有机溶剂或多种有机溶剂的混合物中。涂层中也可加入染料以便使含不同活性物质或不同量活性化合物的片剂之间易于区别。
制备软胶囊时，活性物质可以和例如植物油或聚乙二醇相混。硬胶囊可含有使用上述任何一种片剂赋形剂的活性物质颗粒，这些赋形剂的例子有乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉(例如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉)纤维素衍生物或者明胶。液体或半固体的药物也可填入硬胶囊内。
直肠内用药的剂型可以是溶液或悬浮液或可制成含有与中性脂肪碱相混的活性物质的栓剂形式，或含有与植物油或石蜡油相混的活性物质的直肠用胶囊的形式。
口服的液体制剂可以是糖浆或悬浮液的形式，例如含0.2％至约20％(重量)本发明所述的活性物质，余量是糖和乙醇、水、甘油和聚乙二醇的混合物。如果需要，这种液体制剂也可含有着色剂、香味剂、糖精和作为增稠剂的羧甲基纤维素或其它本领域技术人员知道的赋形剂。
肠道外注射用的溶液可以制成该活性物质药物上可接受的水溶性盐的水溶液，其浓度最好从约0.5％至约10％(重量)。这些溶液也可含有稳定剂和/或缓冲剂，并可方便地装入各种剂量单位的安瓿中。
权利要求
1.通式I的化合物及其药理上可接受的盐 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
2.按照权利要求1的化合物，其中当R1、R2和/或R5代表烷基时，当X代表烷硫基时，或当R3、R4和/或R5代表氟烷基时，其烷基是指直链或支链的低级烷基，优选的是C1-C5烷基。
3.按照权利要求1的化合物，其中代表卤素的X、R3和/或R4选自碘、氟、氯和溴。
4.按照权利要求1的化合物，其中当R5代表芳基时，或当X代表芳硫基或芳氧基时，其芳基是苯基、呋喃基或噻吩基，其中的芳环可任选地进一步被低级烷基、低级烷氧基或卤素取代。
5.按照权利要求1的化合物，该化合物是4，6-二氯-5-甲基氨茴酸。
6.制备按照权利要求1所述的式I化合物的方法，包括通过A)在R1和R2＝H；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使下面式II的化合物还原 式中X、R3和R4的定义如上面A)中所述，B)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式III的化合物脱保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面B)中所述，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)，C)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IV的化合物脱除酯基 式中R、R2、X、R3和R4的定义如上面C)中所述，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基，D)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式V的化合物脱除酯基和保护基 式中R1、R2、X、R3和R4的定义如上面D)中所述，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM，E)在R1＝烷基，R2＝H或烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式VI的化合物烷基化 式中X、R3和R4的定义如上面E)中所述，F)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自氯、溴和碘R4选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2或RCO，其中R＝C1-C5烷基的情况下，可使式VII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R4的定义如上面F)中所述，G)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自烷氧基、烷基、烷硫基、氰基、氟烷基、卤素、RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基，R4选自氯、溴和碘的情况下，可使式VIII的化合物卤化 式中R1、R2、X和R3的定义如上面G)中所述，或者H)在R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自氯、溴和碘；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基的情况下，可使式IX的化合物卤化 式中R1、R2、R3和R4的定义如上面H)中所述。
7.一种含有作为活性成分的按照权利要求1的化合物和药理上可接受的载体的药物制剂。
8.用于治疗作用的按照权利要求1的化合物。
9.如权利要求8定义的化合物，用作预防和治疗神经变性疾病的药剂。
10.按照权利要求1的化合物用于制造预防和治疗神经变性疾病药物的用途。
11.预防和治疗神经变性的方法，包括对需要这种治疗的宿主施用足量的按照权利要求1的化合物。
12.通式II的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
13.通式III的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，PG是保护基，如烷基、苄基(Bn)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基(SEM)、甲氧甲基(MOM)或2-甲氧基乙氧甲基(MEM)。
14.通式IV的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6选自烷基、Bn、SEM、MEM、MOM和2，2，2-三氯乙基。
15.通式V的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基，R6和PG选自烷基、Bn、SEM、MEM和MOM。
16.通式VI的化合物 式中X选自烷硫基、芳硫基、芳氧基、卤素和氰基；R3和R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1，R5选自烷基、芳基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
17.通式VII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R4选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基。
18.通式VIII的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；X选自烷硫基、卤素和氰基；R3选自RSO2和RCO，其中R＝C1-C5烷基。
19.通式IX的化合物 式中R1和R2可以相同或不同，且可选自H和烷基；R3、R4可以相同或不同，且可选自卤素、甲基、氟烷基、氰基和Z-R5，其中Z选自CHn、NHm、O、S、SO2和CO，其中n＝1或2，m＝0或1；R5选自烷基和氟烷基；或者R3和R4合在一起形成一个饱和或不饱和环系Y-V-Z，其中Y和Z彼此无关，其定义与上述Z的定义相同，V选自C1-C3亚烷基或亚链烯基、-N＝、-N＝N-和 ，其中R7＝H或烷基。
全文摘要
本发明涉及通式(I)的新的3-羟基氨茴酸(3-HANA)衍生物，式中R
文档编号C07C315/04GK1121344SQ9419179
公开日1996年4月24日 申请日期1994年2月22日 优先权日1993年2月26日
发明者S·K·M·比约克, K·B·戈汉马, M·T·林德堡, P·J·卢思曼, K·M·I·佩森, R·许瓦兹 申请人:阿斯特拉公司, 马利兰州大学
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