一种斑马鱼幼鱼开口饲料及其制备方法和饲养方法与流程

本发明涉及水产动物饲料及其制作方法，尤其涉及斑马鱼幼鱼开口饲料及其制备方法和饲养方法。

背景技术：

斑马鱼是国际上常用的模式生物，目前国际上通用的使斑马鱼幼鱼开口的食物为草履虫(westerfield，m.，thezebrafishbook：aguideforthelaboratoryuseofzebrafish(brachydaniorerio).1995：universityoforegonpress.)。草履虫的饲养需要占用一定的空间，同时饲养草履虫的溶液中容易引入杂菌污染，从而导致斑马鱼幼鱼死亡；重要的是，饲养的草履虫需要达到一定的浓度才能满足幼鱼开口需求，每1升的草履虫繁殖缸平均只能供养20条左右的幼鱼，而且斑马鱼幼鱼从开口到能吃整颗孵化的丰年虾这个时间跨度相对较长，也增加了维持草履虫系统的难度。

目前国际上最新的饲养斑马鱼幼鱼开口的食物为轮虫(lawrence，c.，e.sanders，ande.henry，methodsforculturingsaltwaterrotifers(brachionusplicatilis)forrearinglarvalzebrafish.zebrafish，2012.9(3)：p.140-6；nakayama，h.，etal.，driedrotifersheet：anovellivefeedforrearingfirst-feedinglarvae.2018.15(3)：p.291-294)。饲养轮虫需要大型设备，占用空间较大，并需要专人维护，而且每1升的轮虫繁殖缸也只能饲养20条左右的幼鱼，但是比草履虫组的幼鱼成活率要高。

技术实现要素：

为解决上述技术问题，本发明提供一种高效的斑马鱼幼鱼开口饲料及其制备方法和饲养方法，可以显著提高斑马鱼幼鱼的开口率和成活率。

为了达到上述目的，本发明一方面提供了一种斑马鱼幼鱼开口饲料的制备方法，包括以下步骤：

1)、孵化丰年虾的虾卵；

2)、吸取孵化的丰年虾幼虫，粉碎后通过80-120目的过滤网除去小于过滤网网孔的碎屑，得到斑马鱼幼鱼开口饲料。

在一些实施例中，粉碎方式为研磨、超声破碎或搅碎。

在一些实施例中，步骤2)包括：使用研磨棒沿着一个方向充分研磨所述丰年虾幼虫，在80-120目的过滤网上用水冲洗研磨后的丰年虾幼虫，除去小于过滤网网孔的碎屑，得到斑马鱼幼鱼开口饲料。

在一些实施例中，所述虾卵的孵化时间为36-48小时。

在一些实施例中，所述过滤网的目数为90-110目，优选为100目。

另一方面，本发明提供了一种利用上述制备方法制备的斑马鱼幼鱼开口饲料。

在一些实施例中，斑马鱼幼鱼开口饲料的尺寸为40-340微米。

在一些实施例中，斑马鱼幼鱼开口饲料的尺寸为60-240微米。

又一方面，本发明还提供了一种利用所述斑马鱼幼鱼开口饲料的斑马鱼幼鱼饲养方法，包括：

在繁殖缸中放入斑马鱼幼鱼，加入胚胎培养基(embryomedium)；

将所述斑马鱼幼鱼开口饲料放入所述繁殖缸，并每天吹打沉到所述繁殖缸底部的所述斑马鱼幼鱼开口饲料3次以上，优选为4-6次。

在一些实施例中，所述胚胎培养基包括4-6mmnacl、0.1-0.2mmkcl、0.2-0.4mmcacl2、0.2-0.4mmmg2so4和0.05-0.2ppm亚甲基蓝。

在一些实施例中，所述繁殖缸中斑马鱼幼鱼的饲养密度为每升培养基20-200条，优选为每升培养基50-120条。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的饲料是由孵化的丰年虾加工而来得到的，孵化的丰年虾是成年斑马鱼养殖过程中常用的食物，获取简单。本发明与使用草履虫和轮虫开口相比，具有操作简单、不易杂菌污染、不占额外空间、幼鱼开口率和成活率高、生长快等优点。与使用草履虫和轮虫相比，本发明可以在1升繁殖缸中饲养更多的幼鱼。本发明可以使斑马鱼幼鱼在第9天开口，开口率在90％以上，同期，草履虫饲养组为0，并且本发明的饲料的尺寸大小范围为40-340微米，可以有效增加幼鱼的摄食量。

附图说明

图1为本发明实施例中孵化的丰年虾；

图2为本发明实施例中加工过后的丰年虾；

图3为本发明实施例中加工过后的丰年虾碎虾尺寸的正态分布图；

图4为本发明实施例中四种饲养方式的幼鱼体长随时间变化图；

图5a-5c为本发明实施例中9天龄幼鱼呑下完整丰年虾过程图；

图6为本发明实施例中四种饲养方式的幼鱼软骨染色结果。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。

除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

实施例1

在该实施例中，利用孵化的丰年虾幼虫制备斑马鱼幼鱼开口饲料，并利用该饲料对斑马鱼幼鱼进行饲养，主要包括以下步骤：

1)、用塑料吸管吸取0.5ml孵化的丰年虾置于100目的捞网上，图1为孵化的丰年虾整体；

2)、使用研磨棒沿着一个方向研磨丰年虾，把丰年虾全部研磨碎后，用小水流缓慢冲洗研磨过的丰年虾，直至将丰年虾碎片冲洗干净，图2为加工过后的丰年虾；

图3为加工过后的丰年虾碎虾尺寸的正态分布图，图中y轴每个方柱代表20微米，即1-17方柱代表20-340微米；

3)、取2升的繁殖缸，横截面积为200平方厘米，放入100条左右的斑马鱼幼鱼，加入1升胚胎培养基(embryomedium)，将冲洗过的丰年虾碎片转移至繁殖缸内，该胚胎培养基包括：5mmnacl、0.17mmkcl、0.33mmcacl2、0.33mmmg2so4和10^-5wt.％亚甲基蓝。

由于丰年虾碎虾会沉在繁殖缸底部，每天吹打碎虾3次以上，例如4-6次。

图4为四种饲养方式的幼鱼体长随时间变化图，可以看出，本发明可以显著提高斑马鱼幼鱼成长速度。

图5a-5c为9天龄斑马鱼幼鱼开口成功后呑下整颗完整丰年虾的全过程。

图6为四种饲养方式的9天龄幼鱼软骨染色结果，图中1、2、3、4分别表示不喂食组、饲料组、草履虫组、本发明饲料组。统计结果显示本发明饲料组的9天龄幼鱼下颌骨大小显著性大于其他三组。

斑马鱼幼鱼在开口期间的生长速度不能保持完全一致，按照实施例1中的方法加工孵化的丰年虾后，由于本发明中的丰年虾碎片大小不一，尺寸分布范围较宽，各种尺寸的斑马鱼幼鱼均可以捕捉到合适大小的丰年虾碎片。

相比较于使用草履虫和饲料使斑马鱼幼鱼开口，本发明避免了不必要的杂菌污染，而且使用本发明来饲养斑马鱼幼鱼可以使用更高的饲养密度，1升embryomedium饲养100条斑马鱼幼鱼时，幼鱼生活状态良好；并且本发明饲养组的体长数据显著性优于草履虫组和饲料组，下颌骨染色的结果进一步证实了本发明饲养组可以在第9天开口吞下整颗丰年虾，并且开口率在90％以上，同期草履虫组和饲料组基本为零。

在另外的一些实施例中，还可以通过其它粉碎方式制备本发明的斑马鱼幼鱼开口饲料，例如超声破碎或搅碎等，同样可以达到与实施例1类似的技术效果。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，包括研磨但不限于研磨的方法得到碎虾的方式；凡本行业的普通技术人员均可按以上所述而顺畅地实施本发明；但是，凡熟悉本专业的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变等，均仍属于本发明的技术方案的保护范围之内。

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